close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14786

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/42
A 61K 39/39
A 61K 33/38
A 61P 31/12
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ЧУМЫ
ПЛОТОЯДНЫХ
(21) Номер заявки: a 20081428
(22) 2008.11.13
(43) 2010.06.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт
экспериментальной ветеринарии
им. С.Н.Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Красочко Петр Альбинович; Софийская Татьяна Васильевна (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее
унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского" (BY)
BY 14786 C1 2011.10.30
BY (11) 14786
(13) C1
(19)
(56) СОФИЙСКАЯ Т.В. Чума плотоядных
(диагностика, профилактика и терапия): Автореф. дисс. - Минск, 2006. С. 15.
КРАСОЧКО П.А. и др. Ветеринарная
медицина Беларуси. - 2004. - № 6. С. 13-14.
RU 2087148 C1, 1997.
СОФИЙСКАЯ Т.В. и др. Актуальные
проблемы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы международной
научно-практической
конференции. - Минск, 2000. - С. 215216.
RU 2120303 C1, 1998.
RU 2108805 C1, 1998.
RU 2103009 C1, 1998.
RU 94031759 A1, 1996.
RU 2063767 C1, 1996.
BY 9666 C1, 2007.
RU 2154496 C2, 2000.
(57)
Препарат для профилактики или лечения чумы плотоядных, содержащий специфические молозивные иммуноглобулины и протаргол в качестве противовирусных компонентов, тиосульфат натрия в качестве антитоксического компонента, теотропин в качестве
консервирующего компонента и изотонический раствор натрия хлорида, отличающийся
тем, что содержит компоненты при следующем их соотношении, мас. %:
специфические молозивные иммуноглобулины
9,5-10,5
протаргол
0,45-0,55
тиосульфат натрия
4,5-5,5
теотропин
0,15-0,25
изотонический раствор натрия хлорида
остальное.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к профилактике и лечению заболеваний чумой плотоядных.
BY 14786 C1 2011.10.30
Известен препарат для профилактики или лечения чумы плотоядных, содержащий
специфические молозивные иммуноглобулины и протаргол в качестве противовирусных
компонентов, теотропин в качестве консервирующего компонента и изотонический раствор натрия хлорида [1].
Однако этот препарат обладает недостатками, так как отсутствуют рекомендуемые дозировки для разных видов плотоядных. Введение этого препарата животным осложняется
из-за наличия большого количества гетероспецифичных белков, вызывающих анафилактический шок у плотоядных и требующих дополнительного введения антигистаминных
препаратов. Также сыворотка не обладает иммуностимулирующими и дезинтоксикационными свойствами.
Задачей изобретения является конструирование препарата, обладающего иммуностимулирующими, дезинтоксикационными свойствами и высокой противовирусной активностью с повышенным содержанием антител к вирусу чумы плотоядных, вызывающему.
поражения слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей, патологии нервной системы.
Поставленная задача достигается тем, что препарат для профилактики или лечения
чумы плотоядных, содержащий специфические молозивные иммуноглобулины и протаргол в качестве противовирусных компонентов, тиосульфат натрия в качестве антитоксического компонента, теотропин в качестве консервирующего компонента и изотонический
раствор натрия хлорида, содержит компоненты при следующем их соотношении, мас. %:
специфические молозивные иммуноглобулины
9,5-10,5
протаргол
0,45-0,55
тиосульфат натрия
4,5-5,5
теотропин
0,15-0,25
изотонический раствор натрия хлорида
остальное.
Наличие в препарате компонентов в заявленных соотношениях позволяет достичь экзальтации или синергетического эффекта компонентов препарата, что приводит к существенному повышению профилактического и терапевтического эффекта за счет их
суммарного воздействия на репродукцию вируса в чувствительных клетках, недопущения
размножения условно-патогенной микрофлоры на пораженных клетках, активизации иммунной системы, нормализации метаболизма и снятия токсического эффекта продуктов
распада тканей, которые образуются при репродукции вируса. Препарат отличается от
аналогов более выраженным и продолжительным стимулирующим, противовирусным,
антибактериальным действием на организм животных.
Протаргол - препарат серебра, который применяется в медицине для антисептических
и иммуностимулирующих целей и используемый в заявляемом препарате в качестве противовирусного и иммуностимулирующего компонента [2, 3].
Тиосульфат натрия - антитоксическое вещество, воздействующее также иммуностимулирующим эффектом, применяемое в ветеринарии и медицине в качестве антитоксического, антидотного и иммуностимулирующего средства. Механизм стимулирующего
действия натрия тиосульфата на иммуноморфогенез объясняется тем, что он стимулирует
функцию макрофагов и хелперных Т-клеток, усиливает иммуногенность макрофагов и их
взаимосвязь с лимфоцитами [4]. В результате этого укорачивается продолжительность и
повышается эффективность индуктивной фазы иммуногенеза, становится более интенсивной продуктивная стадия иммунного ответа. Кроме того, обладая антитоксическим действием, натрия тиосульфат способен вступать в реакцию и нейтрализовать токсины, тем
самым снизить остаточные реактогенные свойства вводимых препаратов при лечении заболеваний.
2
BY 14786 C1 2011.10.30
Теотропин - препарат нового поколения, полученный как продукт переработки топлива, используемый для дезинфекции животноводческих помещений, а также для инактивации вирусов и бактерий [5].
Молозивные иммуноглобулины - специфические антитела, выделенные из молозива
отелившихся коров, предварительно гипериммунизированных вируссодержащим материалом [6, 7].
Изотонический раствор натрия хлорида - физиологическиая жидкость, широко используемая в медицине и ветеринарии в качестве разбавителей препаратов, для внутривенных инфузий, химических реакций. Нами он использован в качестве разбавителя [8].
Состав заявленных компонентов препарата в указанных соотношениях оказывает одновременное синергетическое воздействие на разные звенья патогенетического процесса в
организме больного животного при чуме плотоядных и значительно сокращает срок болезни за счет улучшения сосудистой трофики тканей организма, улучшения поступления
кислорода, восстановления окислительно-восстановительных реакций и, следовательно,
метаболизма в целом, ускорения выработки защитных антител против вирусного агента.
Изменение количественных соотношений компонентов заявленного препарата неизменно
ведет к ухудшению лечебно-профилактического воздействия его на организм животного.
Уменьшение процентного соотношения компонентов приводит к снижению терапевтического и профилактического эффекта, а увеличение - к токсикозу.
Пример 1.
Отработка способа гипериммунизации коров для получения молозивного иммуноглобулина.
Использование специфических молозивных иммуноглобулинов 1-2 удоя в качестве
источника противовирусных антител в предложенном препарате обусловлено тем, что в
это время в молозиве количественное содержание антител к возбудителям вирусной природы в несколько раз превосходит содержание специфических антител в сыворотке крови
(табл. 1). В отличие от антител сыворотки крови, примененных в прототипе, полученные
молозивные иммуноглобулины обладают высоким физиологическим действием и биодоступностью на организм плотоядных [6]. Для получения гипериммунного молозива и сыворотки нами испытаны следующие схемы гипериммунизации стельных коров:
введение равных доз вируса чумы плотоядных. Вирус вводили внутримышечно в бедро с интервалом 7 дней в дозе 3 мл;
метод возрастающих доз. Животным вводили 3 мл культуральной вируссодержащей
жидкости внутримышечно с интервалом 10 дней вначале, а на второе введение и последующие дозу увеличивали на 2-3 мл;
введение антигена с интервалом 10 дней в возрастающих дозах от 3 до 7 мл подкожно
в области лимфатических лимфоузлов, чередуя правую и левую стороны (предлопаточного, подколенной складки и др.), заключая этап введений внутримышечной инъекцией в
дозе 10 мл.
Результаты сравнительного титра антител сывороток крови и молозивного иммуноглобулина гипериммунизированных животных свидетельствуют о более высокой биологической активности молозивного иммуноглобулина по сравнению с сывороткой крови.
Сравнительные данные титров антител в сыворотке крови и молозиве после различных
схем гипериммунизации приведены в табл. 1.
3
BY 14786 C1 2011.10.30
Таблица 1
Результаты изучения наличия иммуноглобулинов после гипериммунизации коров
Показатель
Иммуноглобулины в молозиве гипериммунизированных коров, г/л
Иммуноглобулины в сыворотке гипериммунизированных коров, г/л
Титры антител к вирусу
чумы плотоядных в молозивном глобулине гипериммунизированных
коров, log2
Титры антител к вирусу
чумы плотоядных в сыворотке крови гипериммунизированных коров, log2
Опытные группы согласно схемам
гипериммунизации
№1
№2
№3
Контрольная
группа
25,6±1,9
28,5±1,6
32,1±2,3
36,0±2,1
22,0±1,41
23,24±3,17
23,45±3,45
23,35±3,21
1,8±0,3
6,25±1,9
8,4±2,0
10,5±1,4
1±0,5
8,0±1,7
9,0±2,1
8,7±1,6
Проведенные серии опытов, предусматривающие получение гипериммунной сыворотки и молозивного иммуноглобулина с титром специфических антител не менее 1 : 512 в
РНГА, показывают, что титры специфических антител в молозивном иммуноглобулине
выше, чем в сыворотке крови, за одинаковый период гипериммунизации продуцентов, и
при очистке их конечное количество значительно больше, следовательно, и получение
молозивного иммуноглобулина будет технологичнее для промышленного выпуска, и препарат на его основе будет иметь более значимый экономический эффект.
Пример 2.
Изучение влияния протаргола на вирус чумы плотоядных и иммунитет животных.
Использование в разработанном препарате протаргола обусловлено тем, что водные
растворы протаргола в 0,3-0,6 %-ной концентрации обладают оптимальным вирулицидным и вирусостатическим действием на вирус чумы плотоядных. Данные разведения задерживают развитие вируса чумы плотоядных на 50 % в течение 96-122 часов.
Концентрации более 0,8 % проявляли токсичность по отношению к культуре клеток в течение 24 часов, а менее 0,3 % позволяли вирусу ЧП проявлять ЦПЭ на третьи сутки (72 ч)
культивирования. В концентрации 0,3-0,5 % он задерживает репродукцию вируса, а в
2,5 %-ной концентрации действует токсически на культуру клеток (табл. 2). Кроме того,
проведенные исследования показывают наличие стимулирующих свойств протаргола на
иммунную систему, содержания Т- и В-лимфоцитов, фагоцитов, бактерицидную активность сыворотки крови [7].
4
BY 14786 C1 2011.10.30
Таблица 2
Вирусостатическое действие протаргола на вирус чумы плотоядных на культуре
клеток Vero
№ п/п Наличие вируса ЧП
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
+
+
+
+
+
+
+
+
-
Концентрация,
масс. %
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0,45
0,5
0,55
0,6
0,65
0,7
0,75
0,8
0,85
0,9
0,95
1,0
-
Протаргол
Время ЦПД
Титр вируса
24
5,0
24
5,0
36
4,0
48
3,5
72
2,5
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Токсическое действие на клетки
Пример 3.
Изучение влияния тиосульфата натрия на уровень антител в молозивном иммуноглобулине.
Тиосульфат натрия использован в препарате как детоксикационный и иммуностимулирующий компонент, позволяющий снизить интоксикацию, вызванную влиянием вируса
на организм, и способствовать активизации иммунной системы [2, 4]. Используемые концентрации протаргола и тиосульфата натрия не снижают титр противовирусных антител в
молозивном иммуноглобулине (табл. 3).
Таблица 3
Результаты влияния компонентов препарата на уровень антител в молозивном иммуноглобулине в зависимости от сроков хранения
Пробы
Титры антител при влиянии теотропина (в 0,2 мас. %)
1-е ис2-е ис3-е ис4-е ис5-е ис6-е
след.
след.
след.
след.
след.
исслед.
Молозивный иммуногло10,5
10,5
10,5
10,4
булин
Гипериммунная сыворотка
8,7
8,7
8,6
8,6
Титры антител при влиянии 0,3 % теотропина
Молозивный иммуногло10,5
10,5
10,5
10,4
булин
Гипериммунная сыворотка
8,7
8,7
8,6
8,5
5
10,4
10,4
8,5
8,5
10,4
10,35
8,5
8,4
BY 14786 C1 2011.10.30
Продолжение таблицы 3
Титры антител при влиянии теотропина (в 0,2 мас. %)
Пробы
1-е ис2-е ис3-е ис4-е ис5-е ис6-е исслед.
след.
след.
след.
след.
след.
Титры антител при влиянии 0,4 % протаргола
Молозивный иммуногло10,5
10,5
10,5
10,5
10,5
10,4
булин
Гипериммунная сыворотка
8,7
8,7
8,7
8,6
8,6
8,5
Титры антител при влиянии 0,5 % протаргола
Молозивный иммуногло10,5
10,5
10,5
10,5
10,5
10,4
булин
Гипериммунная сыворотка
8,7
8,7
8,7
8,6
8,6
8,5
Титры антител при влиянии 0,6 % протаргола
Молозивный иммуногло10,3
10,3
10,2
10,2
10,0
10,0
булин
Гипериммунная сыворотка
8,6
8,7
8,6
8,5
8,4
8,35
Данные, приведенные в табл. 3, свидетельствуют о том, что как протаргол, так и тиосульфат натрия, а также их сочетания не снижают титр антител в молозивном глобулине.
Пример 4.
Приготовление молозивного иммуноглобулина.
Молозиво 1-го и 2-го удоев от клинически здоровых коров 3-й и более лактации подогревают до 40-43 °С, сепарируют для отделения жира, тщательно перемешивают и вносят
один из ферментных препаратов: 10 %-ный раствор пепсина из расчета 15-20 мл на 1 литр
молозива или сычужный фермент - 1,5-2 мл на 1 литр. Процесс створаживания длится до 3
часов. После полного створаживания молозива в течение суток в холодном месте (температура +7… +15 °С) происходит формирование казеинового сгустка и отделение молозивной сыворотки. Молозивную сыворотку отделяют с помощью сифона и лавсанового
фильтра для отделения казеина и оставляют на 24 часа для осветления. В полученную молозивную сыворотку вносят полиэтиленгликоль ПЭГ 115 молекулярной массой 6000 до
10 %-ной концентрации для осаждения иммуноглобулинов [9]. Через 18-24 часа формируется осадок иммуноглобулина, который отделяют от сыворотки центрифугированием при
3-5 тыс. об./мин в течение 15-30 минут или сливом надосадочной жидкости при достаточно плотном осадке. Полученный осадок иммуноглобулинов растворяют до 10 %-ной концентрации изотоническом растворе натрия хлорида [8].
Пример 5.
Приготовление готовой формы заявляемого препарата.
После получения раствора молозивного иммуноглобулина в него добавляют протаргол до 0,5 %-ной концентрации и тиосульфат натрия до 5 %-ной концентрации, и теотропин до 0,2 %-ной концентрации. Полученный молозивный иммуноглобулин для осветления и стерилизации пропускают через фильтрующий и стерилизующий фильтры
Сальникова или Зейтца. Стерильный препарат фасуют в стерильные флаконы объемом
200,0 и 500,0 мл, хранят в темном прохладном месте при температуре +4… +10 °С.
Проведение лабораторных исследований заявляемого препарата на животных показало,
что все серии препарата стерильны, нетоксичны и безвредны для лабораторных животных.
Пример 6.
Исследования по подбору компонентов в препарате и их соотношения и отработке оптимальной терапевтической дозы.
Исследования по отработке совместимости и изучение влияния доз препарата на животных проводили по схемам:
In vitro
1. Изучение влияния каждого компонента препарата на титр антител в растворе молозивного иммуноглобулина.
6
BY 14786 C1 2011.10.30
2. Изучение совместимости компонентов комплексного препарата (растворимость,
осадок, pH, изменение качественных характеристик) в процессе хранения.
In vivo
1. Изучение безвредности и реактогенности.
2. Изучение острой, подострой, хронической и эмбриональной токсичности.
3. Изучение гематологических и биохимических показателей крови опытных животных, напряженности иммунитета.
4. Отработка профилактических и лечебных доз при моделировании инфекции и при
спонтанном заражении.
При изучении различных концентраций тиосульфата натрия на уровень антител против чумы плотоядных в растворе молозивных иммуноглобулинов изучали 1-10 %-ные
концентрации (табл. 4).
Таблица 4
Влияние тиосульфата натрия на титры антител к вирусу чумы плотоядных
Титры антител в РНГА, log2
Концентрация раствора
тиосульфата натрия, %
в сыворотке
в молозивном Ig
1,0
9,4
10,5
2,5
9,4
10,5
5,0
9,4
10,5
10,0
9,4
10,5
Таким образом, данные таблицы показывают, что тиосульфат натрия в различных
концентрациях не оказывает влияния на титр антител к вирусу чумы плотоядных ни в сыворотке крови, ни в молозивном иммуноглобулине.
Для изучения влияния консервации 10 %-ного молозивного иммуноглобулина теотропином и влияния других компонентов нового препарата проводилось изучение уровня антител к вирусу чумы путем постановки РНГА 1 раз в 30 дней в течение 6 месяцев
(табл. 3). Для исследования брали по 5 проб каждой дозы компонентов.
Из таблицы видно, что титры антител к вирусу чумы плотоядных в 10 %-ных растворах молозивного иммуноглобулина, консервированные 0,2-0,3 %-ным теотропином, в течение 6 месяцев изменялись всего на 0,1-0,25 log2, тогда как в ассоциации с сывороткой
титры упали на 0,3 log2.
Оптимальным разведением протаргола, совместимым с молозивным иммуноглобулином и не влияющим на титр защитных антител в нем, стала концентрация 0,5 % раствора.
0,6 %-ный раствор снижал титр антител в иммуноглобулине на 0,25 log2 в течение периода
наблюдения.
В результате изучения влияния компонентов комплексного препарата на уровень противовирусных антител в 10 %-ном молозивном иммуноглобулине к вирусу чумы плотоядных установлено, что для дальнейших исследований могут использоваться: 0,5-5 %-ный
тиосульфат натрия, 0,2 %-ный теотропин, 0,4-0,5 %-ный протаргол.
Следующим этапом стало изучение совместимости отобранных компонентов и конструирование оптимального состава комплексного препарата для лечения и профилактики
чумы плотоядных. Для этого проводили смешивание отобранных компонентов препарата
в различных последовательностях и дозировках, выдерживали в течение 1 месяца, проводя исследования по сохранению свойств с интервалом 7 дней.
В опытах на животных установлено, что препарат не обладает кожно-раздражающим
действием, т.к. индекс равен нулю и эритематозная реакция равна нулю, а измерение толщины кожной складки у опытных и контрольных животных не обнаружило достоверных
отличий и является безвредным и ареактогенным.
По результатам испытаний острой токсичности LD50 составила 27,6 г/кг (30,0 мл на
крысу), что в 100 раз больше лечебной дозы препарата на 1 кг массы тела. Согласно ГОСТ
7
BY 14786 C1 2011.10.30
12.1.007-76 "ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности"
данный препарат относится к 4-й группе опасности.
При изучении подострой и хронической токсичности выявляли избирательное действие препарата на функциональное состояние отдельных органов, тканей, систем.
В результате опыта установлено, что препарат в лечебной дозе 0,3 мл/кг (0,0498 г/кг)
не обладает кумулятивными свойствами, а при дозе 1,66 г на крысу (9,2 г/кг) - в очень
слабой степени. При введении лечебной дозы препарата у животных не отмечалось физиологических отклонений от нормы в течение всего периода наблюдений.
Общее состояние и поведение животных опытных групп не отличалось от контрольных. Крысы были активными, хорошо поедали корм и имели гладкий шерстный покров.
Масса тела подопытных крыс соответствовала возрастным нормам.
Таблица 5
Динамика изменения массы (г) тела крыс при подкожном введении комплексного
препарата
Доза преПосле восстановиПол животных Количество жи- Исходные Через 14
парата
тельного периода
(крыс)
вотных (крыс)
данные, г
суток, г
(мл/кг)
(28 суток), г
самцы
5
194±8,62 257±14,30
233,75±9,70
Контроль
самки
5
185±6,70
198±3,83
190±10,50
самцы
5
196±9,2
182±4,70
201±11,6
9,2 г/кг
самки
5
187±6,9
198±3,83
200±10,98
самцы
5
193±8,5
202±1,90
212±10,90
4,6 г/кг
самки
5
192±8,53
194±8,62
202±11,90
самцы
5
190±7,66
239±9,57
234±14,36
0,0498 г/кг
самки
5
191±9,58
191±8,60
222±12,97
При сравнении относительной массы внутренних органов опытных и контрольных групп,
выведенных из эксперимента в разные сроки наблюдения, установлены некоторые отличия в
зависимости от применяемой дозы. Изменения массы отдельных органов подопытных крыс в
эксперименте по хронической токсичности приведены в нижеследующей табл. 6.
Таблица 6
Весовые коэффициенты органов крыс (%) при парентеральном введении комплексного препарата (14 суток введения)
Пол жиОрганы
Доза
вотных Сердце Легкие Печень Почки Мозг Селезенка Надпочечники
0,39± 0,74±
3,54±
0,68± 0,70± 0,47± 0,03
0,02±
самцы
0,02
0,05
0,07
0,07
0,03
0,002
Контроль
0,38± 0,86±
3,85±
0,70± 0,76±
0,44±
0,03±
самки
0,01
0,06
0,12
0,02
0,06
0,02
0,002
0,31± 0,75±
4,99±
0,89± 0,72±
0,57±
0,03±
самцы
0,01
0,035
0,21
0,12
0,03
0,04
0,002
9,2 г/кг
0,32± 0,78±
4,87±
0,84± 0,76±
0,63±
0,02±
самки
0,01
0,042
0,23
0,04
0,06
0,08
0,001
0,35± 0,74±
4,35±
0,75± 0,70±
0,45±
0,02±
самцы
0,01
0,03
0,15
0,03
0,03
0,05
0,003
4,6 г/кг
0,42± 0,87±
3,98±
0,84± 0,70±
0,62±
0,03±
самки
0,04
0,05
0,09
0,06
0,04
0,05
0,003
0,37± 0,93±
3,98±
0,72± 0,66±
0,47±
0,02±
самцы
0,02
0,09
0,16
0,02
0,05
0,04
0,001
0,0498
г/кг
0,40± 0,81±
3,88±
0,64± 0,80±
0,52±
0,03±
самки
0,03
0,05
0,08
0,02
0,04
0,04
0,003
8
BY 14786 C1 2011.10.30
При визуальном обследовании сердца, печени, почек, поджелудочной железы и селезенки опытных животных, которым вводили дозу 0,0498 г/кг, патологии не обнаружено.
Однако при ежедневном введении максимально допустимой дозы 9,22 г/кг для крысы,
определенной в остром опыте, начиная с 12-го дня введения препарата отмечали угнетение, анорексию, апатичность, иногда понос, полиурию. При патологоанатомическом
осмотре у некоторых особей выявляли увеличение печени, селезенки, редко отек или увеличение почечной лоханки, нефрит, незначительный инфильтрат в области введений препарата, утолщение субэпидермального слоя.
При введении дозы крысам, средней между указанными выше (4,6 г/кг), признаки отклонений физиологического состояния проявлялись в стертой форме, с незначительной
изменчивостью аппетита, послаблением стула, снижением подвижности. Видимых изменений в органах при патологоанатомическом осмотре не обнаружено.
При исследовании морфологической картины крови крыс не выявлено каких-либо существенных отличий гематологических показателей опытных животных в сравнении с
контрольными, все изученные параметры находились в диапазоне физиологических норм
для данного вида животных. Данные по исследованию гематологических показателей
приведены в табл. 7.
Таблица 7
Гематологические показатели крыс при парентеральном введении комплексного
препарата (14 суток введения)
Суточ- Пол
ная до- животза, г/кг ных
ЦветЛейкоцитарная формула крови
Нв., Эр.×
L×
ной СОЭ,
12
9/
г/л ×10 /л ×10 л пока- мм/ч пал., сегм., эоз., лимф.,
мон., %
затель
%
%
%
%
самцы
136,3
±3,90
самки
139,9 6,04± 11,85 0,69± 19,2± 0,4±
± 4,54 0,14 ± 0,96 0,02 4,78 0,19
самцы
132,4
±0,3
6,79± 8,76±
0,16 0,23
самки
136,1
± 0,7
6,74± 9,78± 0,68± 28,1± 0,5±
0,04 0,34 0,01 2,16 0,02
Контроль
6,04± 10,78 0,67± 30,0± 1,6±
0,10 ± 1,19 0,02 3,83 0,38
0,6±
0,02
25,6± 5,8± 65,0±
2,0±0,77
2,87 0,57 3,06
20,0± 3,0± 73,4±
2,68 1,34 4,21
25,6± 0,31± 16,4± 5,4±
2,34 0,1
2,31 0,95
74±
2,8
3,2±
1,53
1,1± 0,3
8,3
17,3± 3,8± 77,5±
0,9± 0,5
1,13 0,76 2,1
136,1 6,63± 11,8± 0,67± 24,1± 0,2± 16,9± 2,7± 82,1± 0,9±
± 4,53 0,21 0,67 0,02
2,7 0,23 6,25 0,12 3,27
0,34
4,25
143,8 6,73± 11,85 0,62± 23,2± 0,4± 18,7± 3,2± 77,4± 0,8±
самки
±4,58 0,21 ± 0,61 0,01 3,45 0,21 3,25 0,19 3,6
0,21
144,4 6,19± 11,29 0,63± 23,8± 1,0± 33,4± 8,5± 59,9± 1,9±
самцы
±3,25 0,13 ± 0,77 0,01 5,74 0,19 2,25 2,05 4,54
0,48
0,498
141,5 6,21± 11,00 0,65± 19,0± 0,6± 19,6± 2,5± 73,1± 2,6±
самки
± 2,01 0,11 ± 0,75 0,02 2,87 0,19 1,41 1,25 3,99
0,85
Из таблицы видно, что результаты крови опытных и контрольных крыс в подостром
опыте почти не имеют принципиальных отличий, т.е. разработанный препарат не оказывает на крыс токсического действия, почти не изменяет картины крови, за исключением
незначительного увеличения числа лимфоцитов и количества гемоглобина, снижения
СОЭ.
самцы
9
BY 14786 C1 2011.10.30
Результаты изучения хронической токсичности препарата позволили сделать заключение об отсутствии негативного влияния эффективной лечебно-профилактической дозы
образца на организм подопытных животных.
Отработку доз препарата проводили на щенках собак 3-месячного возраста. Животные
были неиммунными. На животных исследовали несколько доз препарата, руководствуясь
данными опытов по острой и хронической токсичности.
Первой группе собак вводили дозу 0,0498 г/кг, что соответствовало 3 мл готового препарата на 10 кг массы, второй группе - 0,0830 г/кг (5 мл/10 кг массы), третьей группе 0,116 г/кг (7 мл/10 кг), четвертой группе - 0,166 г/кг (10 мл/10 кг). Пятая группа - контроль. За животными вели наблюдение. В дни отбора крови проводили гематологические
и биохимические исследования на специальных анализаторах, контроль наличия антител в
РНГА.
В период 7-дневного наблюдения щенки первой, второй групп были активными, охотно поедали корм, в физиологических показателях никаких отклонений не установлено.
При введении более высоких доз препарата щенкам групп № 3 и 4 отмечено, что некоторые щенки проявляли беспокойство в течение 30-40 мин и разлизывали кожу в месте инъекции препарата, где имел место незначительный отек тканей. При введении данных доз в
2 точки укола вышеуказанные проявления не установлены. Животные групп № 3 и 4 также были активными, физиологические показатели соответствовали нормам (температура,
дыхание, дефекация).
При проведении PHГA для установления титров антител к вирусу чумы плотоядных у
опытных щенков проводили отбор проб крови перед введением препарата, через три дня
после введения, через 7 дней после ведения. Результаты представлены в табл. 8.
Таблица 8
Средние титры антител к вирусу чумы по группе при определении
доз препарата на животных
Титры специфических антител в РНГА
№ группы
Через 3 дня после Через 7 дней по- Через 14 дней после
До введения
введения
сле введения
введения
1
1,8 log2
7,8 log2
7,4 log2
7,1 log2
2
2 log2
8,2 log2
8 log2
7,7 log2
3
2 log2
8,7 log2
8,2 log2
8,0 log2
4
2 log2
9,2 log2
8,8 log2
8,5 log2
5
2 log2
2 log2
2 log2
2 log2
Анализируя табличные данные, можно сказать, что однократное введение комплексного препарата животным создает достаточный пассивный иммунитет для борьбы с инфекционным агентом. Разница между минимальной (0,0498 г/кг) и максимальной (0,166 г/кг)
опытными дозами в титре антител за исследуемый период составила всего 1,4 log2. По литературным данным известно, что уровень сывороточных антител в крови животных, равный 6 log2, обеспечивает защиту от заражения инфекционным вирусом чумы плотоядных
и является достаточным для лечения заболевания. Минимальная же опытная доза препарата (группа № 1) создает титр антител в крови, равный 7,8 log2, что значительно выше
приведенной в ветеринарной литературе. Принимая во внимание вышеизложенные факты
проведенных испытаний, установлено, что наиболее оптимальными для собак являются
дозы 0,0498 и 0,083 г/кг, что составляет 3 и 5 мл раствора препарата соответственно. Кроме того, установлено, что некоторое снижение титра антител в течение 4 дней потребует
дополнительного введения препарата при лечении больных животных для достижения
максимального терапевтического эффекта и сокращения срока болезни.
10
BY 14786 C1 2011.10.30
При проведении гематологических и биохимических исследований отклонений от физиологических норм не было установлено ни в одной группе.
Ввиду получения эффективного титра антител в крови от наименьших доз препарата
для оптимизации применения препарата и снижения расхода компонентов проводили изучение влияния различных схем введения в профилактических и лечебных целях, используя дозы 0,0498 и 0,083 г/кг.
Профилактическое влияние изучали, используя несколько вариантов введения препарата, с последующим искусственным заражением вирусом чумы плотоядных:
1) однократное введение дозы;
2) двукратное введение дозы с интервалом 2 дня.
Для этого было создано три группы щенков для каждой дозы (П№ 1, П№ 2), подобранных по принципу аналогов, по 5 щенков в группе.
Для лечебной цели использовали предварительное заражение животных с последующим подкожным или внутримышечным введением препарата по следующим схемам после проявления у животных признаков заболевания:
1) однократное введение дозы;
2) двукратное введение дозы с интервалом 2 дня;
3) трехкратное введение с интервалом 3 дня;
4) многократное введение дозы препарата через день до выздоровления.
Для отработки каждой терапевтической схемы применения препарата использовали по
5 щенков в группе (Л№ 1, Л№ 2, Л№ 3, Л№ 4). Заражение щенков собак проводили вирулентным штаммом вируса чумы плотоядных в дозе 6,5 lg ЛД50/мл. Данные полученных
результатов приведены в табл. 9.
В результате проведенных испытаний установлено, что при исследовании профилактического действия препарата по первой схеме в группе П№ 1, где применялась доза
0,0498 г/кг, погибло три щенка, в группе П№ 2 погиб 1 щенок. При использовании дозы
0,083 г/кг в группе, где препарат вводили однократно, погиб 1 щенок, а при двукратной
схеме все щенки выжили.
Таблица 9
Результаты профилактического и лечебного эффекта препарата
при различных схемах применения
Группы
П№ 1
П№ 2
П№ 1
П№ 2
Л№ 1
Л№ 2
Л№ 3
Л№ 4
Л№ 1
Л№ 2
Л№ 3
Л№ 4
Профилактическое действие препарата при дозе 0,0498 г/кг
Всего
Погибло
Выжило
5
3 (60 %)
2 (40 %)
5
1 (25 %)
4 (75 %)
Профилактическое действие препарата при дозе 0,083 г/кг
5
1 (25 %)
4 (75 %)
5
0
5 (100 %)
Терапевтическое действие препарата в дозе 0,0498 г/кг
5
4 (75 %)
1 (25 %)
5
3 (60 %)
2 (40 %)
5
1 (25 %)
4 (75 %)
5
0
5 (100 %)
Терапевтическое действие препарата в дозе 0,083 г/кг
5
4 (75 %)
1 (25 %)
5
2 (40 %)
3 (60 %)
5
0
5 (100 %)
5
0
5 (100 %)
11
BY 14786 C1 2011.10.30
При изучении лечебного влияния комплексного препарата на больных щенках установлено, что наиболее приемлемой является схема, где препарат вводили не менее двух
раз. Доза 0,083 г/кг при трехкратном введении препарата при появлении первых признаков чумы плотоядных гарантирует 100 % выздоровление больных собак. Схема, при которой разработанный препарат вводили через день многократно в дозах 0,0498 и 0,083 г/кг
способствовала выздоровлению всех зараженных щенков группы, т.е. ее эффективность
составляет 100 %. Таким образом, установлено, что данный препарат может применяться
для профилактических целей двукратно в дозе 0,0498 г/кг или однократно в дозе
0,083 г/кг, а для лечебных целей наиболее применима схема трехкратного и более введения препарата в дозе 0,0498 г/кг или двухкратного и более введения при дозе 0,083 г/кг.
После отработки оптимального соотношения компонентов и терапевтической дозы
препарата проведены сравнительные исследования его лечебно-профилактической эффективности по сравнению с прототипом (промышленной гипериммунной сывороткой). Эффективность действия препарата была испытана в сравнении с эффективностью действия
поливалентной гипериммунной сыворотки (производства "Бионит" + "БНТ", г. Владимир),
применяемой согласно наставлению.
Изучение эффективности применения разработанного препарата проводили в два этапа. На первом этапе изучались профилактические свойства препарата на щенках, взрослых
собаках 1,5-5-летнего возраста и беременных самках первого периода щенности (от 2
недель до 1 месяца). На втором этапе изучали лечебные свойства препарата на взрослых
собаках и щенках.
Препарат вводился подкожно (щенкам) и внутримышечно (взрослым животным) в дозе 0,0498-0,083 г/кг, что соответствует 3-5 мл/10 кг готового раствора препарата, один раз
в день с интервалом 48 ч двукратно с целью профилактики чумы плотоядных при отъеме
щенков, перегруппировке, перед перевозками и экспонировании на выставках и соревнованиях. При лечении спонтанно заболевших и подозрительных по заболеванию животных
введение препарата осуществляли до выздоровления. Итоговые данные по изучению профилактического и лечебного эффекта препарата в производственных условиях представлены в нижеследующих табл. 10, 11.
Таблица 10
Результаты производственных испытаний профилактического действия в сравнении
с препаратом "Морбикан"
Препарат
Заявляемый препарат
Препарат "Морбикан"
Кол-во жиНе заболело
Заболело
вотных в
голов
%
голов
%
опыте
Щенки 1,5-2-месячного возраста
Пало
голов
%
50
50
100
0
0
0
0
30
30
100
0
0
0
0
Взрослые собаки 1,5-5-летнего возраста
Заявляемый препа114
114
100
0
0
0
0
рат
Препарат "Морби10
10
100
0
0
0
0
кан"
Беременные самки первого периода щенности (срок от 2 недель до 1 месяца)
Заявляемый препа24
24
100
0
0
0
0
рат
12
BY 14786 C1 2011.10.30
Таблица 11
Результаты производственных испытаний лечебного действия в сравнении
с препаратом "Морбикан"
Кол-во больВыздоровело
Пало
ных животголов
%
голов
%
ных в опыте
Щенки 1,5-2-месячного возраста
Заявляемый препарат
20
14
70
6
30
Препарат "Морбикан"
10
4
40
6
60
Взрослые собаки 1,5-5-летнего возраста
Заявляемый препарат
16
10
62,5
6
37,5
Препарат "Морбикан"
14
6
42,8
8
57,2
Таким образом, заявляемым препаратом обработано 288 собак. Профилактическая
эффективность комплексного препарата для взрослых собак и щенков составила 100 %. В
контрольных группах с использованием сыворотки профилактическая эффективность у
взрослого поголовья и щенков была 100 %. Лечебная эффективность препарата у взрослых собак сотавила 62,5 %, у щенков - 70 %. Лечебная эффективность при терапии препаратом "Морбикан" у взрослых собак и щенков - 42,8 и 40 % соответственно.
Изучение терапевтической эффективности разработанного препарата с наличием специфических молозивных иммуноглобулинов и дополнительных компонентов в сравнительном аспекте дает основание утверждать, что при двукратном применении
предлагаемый вариант значительно превосходит прототип.
Преимуществом препарата является безопасность его применения, не сопровождаемая
появлением анафилаксии или аллергической реакции немедленного типа, оптимальность
терапевтической дозы по сравнению с прототипом, что облегчает процесс лечения плотоядных, возможность длительного применения, оказание комплексного воздействия на
больной организм.
Используемые препараты
Источники информации:
1. Софийская Т.В. Чума плотоядных (диагностика, профилактика и терапия): Автореф.
дис.... канд. ветеринар. наук: 16.00.03; Ин-т эксперим. ветеринарии. - Минск, 2006. - 15 с.
(прототип).
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Аквариум, 1998.- С. 13-15, 237239, 412-417.
3. Серебро (коллоидное серебро, ионы серебра, серебряная вода) и его влияние на организм человека и животных. [Электронный ресурс].-2002. - Режим доступа:
http://www.nazdorovye.ru/medicinal_cilver_water.html.- Дата доступа: 16.01.2006.
4. Софийская Т.В. Иммунологические аспекты чумы плотоядных. XIV Международный Московский конгресс по болезням мелких домашних животных: материалы Междунар. конф. - М., 22-24 апреля 2006 / Редкол.: С.В. Середа и др.- М., 2006. - С. 15-17.
5. Красочко П.А., Иванова И.П., Жих Г.И., Губаревич А.А. Использование теотропина
для инактивации вирусов при конструировании инактивированных вакцин. Ученые записки Учреждения образования "Витебская ордена "Знак Почета" государственная академия
ветеринарной медицины". Т. 40. Ч. 1. - Витебск, 2004. - С. 223-224.
6. Иванов В.Е. Молозивный иммуноглобулин в профилактике и лечении желудочнокишечных болезней новорожденных телят: Автореф. дис... канд. вет. наук. - Витебск,
1986. - 17 с.
13
BY 14786 C1 2011.10.30
7. Софийская Т.В. Новые подходы к химиопрофилактике чумы плотоядных // Сб. науч.
тр. / БелНИИЭВ. - Минск, 2001. Т. 35. Ветеринарная наука - производству. - С. 49-52.
8. Софийская, Т.В. Технология получения молозивного иммуноглобулина против чумы плотоядных // Сб. науч. тр. / БелНИИЭВ.- Минск, 2001. Т. 35. Ветеринарная наука производству. - С. 41-44.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
14
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
206 Кб
Теги
by14786, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа