close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14797

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 9/50
(2006.01)
СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ
ФИБРИНОГЕНОЛИТИЧЕСКИХ ПРОТЕИНАЗ ИЗ БУЛЬОННОЙ
КУЛЬТУРЫ ПАТОГЕННОГО ШТАММА PSEUDOMONAS
AERUGINOSA
(21) Номер заявки: a 20090423
(22) 2009.03.20
(43) 2010.10.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр эпидемиологии
и микробиологии" (BY)
(72) Авторы: Никандров Виталий Николаевич; Пыжова Нелли Семеновна
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение "Республиканский
научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии" (BY)
BY 14797 C1 2011.10.30
BY (11) 14797
(13) C1
(19)
(56) ПЫЖОВА Н.С. и др. Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки. Международная конференция. Тез. докл. Минск, 2007. - С. 63-65.
JP 11032777 A, 1999.
EP 751991 A1, 1997.
US 6031087 A, 2000.
RU 2182598 C2, 2002.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. Современные
проблемы инфекционной патологии
человека (вирусология, микробиология, иммунология, эпидемиология и
клиника). Материалы II научно-практической конференции. - Минск, 2001. С. 318-338.
(57)
Способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ
из бульонной культуры патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa, отличающийся тем,
что в качестве ингибитора используют раствор Люголя, взятый в разведении 1:20-1:80.
Изобретение относится к биологии и экспериментальной медицине, в частности к ингибированию активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ патогенных
штаммов Pseudomonas aeruginosa как одного из факторов патогенности данного микроорганизма.
Известен способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических
протеиназ патогенных штаммов данного микроорганизма. Он заключается в том, что при
добавлении к бесклеточным супернатантам бульонных культур патогенных (госпитальных) штаммов Pseudomonas aeruginosa соли двухвалентной ртути в концентрации 10-3 М
наблюдается полное ингибированию фибриногенолитической активности [1].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому.
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является ингибирование
фибриногенолитической активности бесклеточных супернатантов бульонных культур
госпитальных штаммов псевдомонад при добавлении к этим супернатантам химического
соединения.
BY 14797 C1 2011.10.30
Однако применяемый для ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных
штаммов псевдомонад хлорид ртути HgCl2 является высокотоксичным соединением, способным вызвать отравления человека вплоть до летального исхода: для смертельного
отравления достаточно уже 0,2 г хлорида ртути [2].
То есть использование хлорида ртути в качестве ингибитора внеклеточных фибриногенолитических протеиназ этого микроорганизма небезопасно для медицинского персонала и пациента.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего ингибировать активность внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад малотоксичным соединением, являющимся фармакопейным препаратом.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ из бульонной культуры патогенного
штамма Pseudomonas aeruginosa. В качестве ингибитора используют раствор Люголя в конечном разведении 1:20-1:80.
Использование раствора Люголя позволяет достичь резкого (на 72-100 %) ингибирования внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад, исключив использование высокотоксичного соединения - хлорида ртути.
Раствор Люголя представляет собой водорастворимую смесь 1 части йода, 2 частей
калия йодида и 17 частей воды, он применяется в медицине главным образом для смазывания слизистой оболочки глотки, гортани, но может назначаться и для приема внутрь [3].
Пример 1.
Используют 2 образца (№ 1, 2) объединенного пула бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов № 12/1гоб1, 74/5гоб4, 26/2гоб1, 23/2гоб2,
74/5гоб3 Pseudomonas aeruginosa, выращенных на питательном бульоне с гидролизатом
кильки в стандартных условиях.
К образцу № 1 добавляют раствор Люголя в конечном разведении 1:20, а к образцу
№ 2 - равный объем изотонического раствора хлорида натрия, образцы перемешивают.
Аликвоты двух образцов наносят на фибриноген-агаровые пластины (концентрация
фибриногена составляла 5 г/л, агар-агара - 10 г/л), приготовленные на 0,05 М трис-буфере
pH 7,4, как описано нами ранее [4].
Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зоны лизиса
визуализируют обработкой фибриноген-агаровых пластин 2 н. трихлоруксусной кислотой.
Протеолитическую активность учитывают по площади зон лизиса фибриногена [4].
Площадь зон (в мм2) расщепления фибриногена в образцах составила (n = 3): в № 1 0; в № 2 - 144 ± 13.
Следовательно, фибриногенолитическая активность внеклеточных протеиназ госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa подавлялась на 100 %.
Пример 2.
Используют 2 образца (№ 1, 2) объединенного пула бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов № 12/1гоб1, 74/5гоб4, 26/2гоб1, 23/2гоб2,
74/5гоб3 Pseudomonas aeruginosa, выращенных на питательном бульоне с гидролизатом
кильки в стандартных условиях.
К образцу № 1 добавляют раствор Люголя в конечном разведении 1:80, а к образцу
№ 2 - равный объем изотонического раствора хлорида натрия, образцы перемешивают.
Аликвоты двух образцов наносят на фибриноген-агаровые пластины (концентрация
фибриногена составляла 5 г/л, агар-агара - 10 г/л), приготовленные на 0,05 М трис-буфере
pH 7,4, как описано нами ранее [4].
Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зоны лизиса
визуализируют обработкой фибриноген-агаровых пластин 2 н. трихлоруксусной кислотой.
Протеолитическую активность учитывают по площади зон лизиса фибриногена [4].
2
BY 14797 C1 2011.10.30
Площадь зон (в мм2) расщепления фибриногена в образцах составила (n = 3): в № 1 41 ± 8; в № 2 - 144 ± 13.
Следовательно, фибриногенолитическая активность внеклеточных протеиназ госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa подавлялась на 72 %.
При дальнейшем разведении раствора Люголя (1:60) его ингибирующая способность
снижается до 50 %.
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет подавлять активность внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад на 72-100 %, использовать доступный и безопасный для
медицинского персонала и пациентов ингибитор, являющийся фармацевтическим препаратом. Данный способ может найти широкое применение при разработке рациональных
путей борьбы в псевдомонадной инфекцией в локальном очаге.
Источники информации:
1. Пыжова Н.С., Никандров В.Н. Протеолитическая активность госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa: действие группоспецифических ингибиторов протеиназ и
фармацевтических препаратов. Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии
и патологии клетки. Международная конференция. Тез. докл. -. Минск, 2007. - С. 63-65.
2. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы. - М.: Госхимиздат,
1955. - С. 464.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Ч. 2. - Минск: Беларусь, 1987. - С. 115.
4. Никандров В.Н., Пыжова Н.С., Шапчиц Н.С. Расщепление белков внутриклеточными протеиназами Corynebacteium diphtheriae: влияние группоспецифических ингибиторов
и перехватчиков активных форм кислорода // Доклады НАН Беларуси. - 2007. - Т. 51. № 3. - С. 92-97.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
75 Кб
Теги
by14797, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа