close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14810

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 5/07
(2010.01)
СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ
КУЛЬТУР КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ РАЗВИТИЯ
ТОКСИЧЕСКОГО ОТЕКА ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ
В СИНТЕТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
В ПРИСУТСТВИИ ИОНОВ МАРГАНЦА
(21) Номер заявки: a 20090931
(22) 2009.06.25
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт
физиологии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
BY 14810 C1 2011.10.30
BY (11) 14810
(13) C1
(19)
(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Ученые записки УО ВГАВМ. - 2006. - Т. 42. Вып. 2, ч. 2. - С. 179-181.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. - Вып. 2. С. 192-200.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Морфология. - 2005. - Т. 128. - № 5. - С. 33-36.
BY 8876 C1, 2007.
RU 94030310 A1, 1996.
RU 2002111335 A1, 2003.
RU 2034026 C1, 1995.
US 2008/0103101 A1.
WO 2007/130575 A2.
US 2009/0023210 A1.
(57)
Способ защиты первичных или перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в синтетической питательной среде в присутствии ионов марганца, при котором культуру клеток вносят в синтетическую
питательную среду, содержащую биологически активную субстанцию, в качестве которой
используют стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл, и инкубируют при температуре 37 °С в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, и позволяет защищать указанные
культуры от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца, за счет того,
что в качестве биологически активной субстанции используют стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл.
Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца.
Задачей заявляемого способа является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца.
BY 14810 C1 2011.10.30
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в синтетической питательной среде в присутствии ионов марганца, при котором
культуру клеток вносят в синтетическую питательную среду, содержащую биологически
активную субстанцию, в качестве которой используют стрептокиназу в концентрации 202000 МЕ/мл, и инкубируют при температуре 37 °C в атмосфере с 5 %-ным содержанием
CO2 и 90 %-ной влажностью.
Стрептокиназа, протеин молекулярной массой 47-55 кДа, синтезируется β-гемолитическими стрептококками серологических групп A, C и G и является одним из наиболее
эффективных активаторов Pg человека и отдельных видов животных, однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности [1]. Роль SK остается неясной. В настоящее время установлено, что SK обладает супероксидконвергирующей
способностью. Связь супероксид-конвергирующей способности SK с ее Pg-активаторной
функцией представляется весьма вероятной, учитывая полное подавление последней перехватчиками супероксидного радикала [1].
Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет защищать первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца.
Пример 1
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью
2,0-3,0 × 104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в течение 24 часов в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого
марганца 10-4 M и стрептокиназы 200 МЕ/мл в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и
90 %-ной влажностью при температуре 37 °C. В качестве контроля используют культуры, которые культивируют в такой же синтетической питательной среде в присутствии
10-4M MnCl2.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 M MnCl2 70 % клеток
погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток
увеличен на 25 % (контроль).
При внесении в питательную среду совместно с 10-4 M MnCl2 стрептокиназы
(200 МЕ/мл) гибели клеток не отмечается, объем клеток увеличен только на 7 % (опыт).
Пример 2
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому
и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0 × 104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла
и культивируют их в течение 24 часов в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого марганца 10-4 M и стрептокиназы. В качестве контроля используют
культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4M MnCl2.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 M MnCl2 75 % клеток
погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток
увеличен на 28 % (контроль).
При внесении в питательную среду стрептокиназы (2000 МЕ/мл) погибает 14 % клеток, объем клеток увеличен на 8 % (опыт).
2
BY 14810 C1 2011.10.30
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет защитить первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Данный способ может найти широкое
применение в экспериментальной биологии и медицине.
Источники информации:
1. Никандров, В.Н. Регуляторные белки: функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия / В.Н.Никандров, Н.С.Пыжова // Весцi НАН Беларусi.
Сер. мед.-бiял. навук. - 2003. - № 3. - С. 75-89.
2. Жук О.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном
и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина / О.Н.Жук,
В.Н.Калюнов, Е.Н.Гулецкая // Весцi АН БССР. Сер. бiял. навук. - 1986. - № 1. - С. 56-60.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
71 Кб
Теги
by14810, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа