close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14819

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 1/14
A 01N 63/00
(2006.01)
(2006.01)
ШТАММ ГРИБА BEAUVERIA BASSIANA БИМ F-369 Д
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ МАЙСКОГО ХРУЩА
(21) Номер заявки: a 20080164
(22) 2008.02.15
(43) 2009.10.30
(71) Заявитель: Республиканское научное
дочернее унитарное предприятие
"Институт защиты растений" (BY)
(72) Авторы: Микульская Наталья Игнатьевна; Прищепа Людмила Ивановна; Герасимович Марина Станиславовна (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научное дочернее унитарное предприятие "Институт защиты растений" (BY)
BY 14819 C1 2011.10.30
BY (11) 14819
(13) C1
(19)
(56) RU 2103873 С1, 1998.
SU 1795980 А3, 1993.
RU 2172588 С1, 2001.
UA 84325 С2, 2008.
RU 2311029 С1, 2007.
МИКУЛЬСКАЯ Н.И. и др. Биология,
систематика и экология грибов в природных экосистемах и агрофитоценозах: Материалы международной научной конференции. - Минск, 2004. С. 169-171.
МЕРЖЕЕВСКА Э. Защита растений
на рубеже XXI века: Материалы научно-практической конференции. - Минск,
2001. - С. 465-466.
ЛАППА Н.В. Актуальные проблемы
биологической защиты растений: Материалы научно-практической конференции. - Минск, 1998. - С. 74-75.
(57)
Штамм гриба Beauveria bassiana БИМ F-369 Д для изготовления препарата против
майского хруща.
Изобретение относится к области защиты растений и представляет собой штамм гриба, поражающий майского хруща.
Штамм Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. 10-06 был получен методом выделения из погибших личинок колорадского жука. Штамм Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. 10-06 обладает инсектицидной активностью по отношению к фитофагам и может быть использован
для производства грибного энтомопатогенного препарата для защиты растений от вредителей.
Штамм Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. 10-06 депонирован в коллекции непатогенных
микроорганизмов Института микробиологии HAH Беларуси за номером БИМ F-369 Д.
Известны различные препараты на основе энтомопатогенного гриба Beauveria
bassiana, используемые для эффективной защиты различных сельскохозяйственных культур от вредителей [1].
Наиболее близок к заявляемому штамм гриба Beauveria bassiana (ATCC 74040), который предназначен для получения энтомопатогенного препарата с целью использования
BY 14819 C1 2011.10.30
его для защиты сельскохозяйственных культур от насекомых-вредителей. Этот штамм достаточно технологичен и обладает патогенной активностью против хлопкового долгоносика, белянки сладкого картофеля и хлопкового слепняка [2].
Однако известный штамм не обладает вирулентностью по отношению к майскому
хрущу Melolontha melolontha L.
Данное изобретение направлено на получение штамма гриба Beauveria bassiana, высокоактивного против личинок майского хруща.
Предлагаемый штамм Beauveria bassiana 10-06 отличается от известного тем, что обладает высокой биологической активностью по отношению к личинкам майского хруща
Melolontha melolontha L. Штамм Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. 10-06 был получен методом выделения из погибших личинок колорадского жука.
Полученный штамм гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. 10-06 имеет следующие
морфологические и физиологические особенности.
Морфолого-культуральные свойства. Морфолого-культуральные признаки изучали на
следующих питательных средах: сусло-агаре, среде Чапека. Описание колоний проводили
на 14-е сутки роста при температуре 26-28 °C. Штамм Beauveria bassiana 10-06 имеет следующие характеристики.
На сусло-агаре штамм образует колонии круглой формы диаметром 54 мм. Край колонии неровный, слегка опушенный. Центр колонии 19 мм, бугристый. Колония белого цвета, лучеобразная. Мицелий воздушный, ватообразный. Спороношение кремовое,
обильное, консистенции мокрого мела, поверхность спороношения плоская, ровная. Обратная сторона колонии желтого цвета с коричневатой серединой.
На среде Чапека штамм образует колонии белого цвета диаметром 34-45 мм. Колонии
круглой формы, четко выражена зональность (состоят из 3 зон). Край колонии нечеткий,
диффузный, лучеобразный, белого цвета, более плотный к центру. Центр колонии (4 мм)
четкий, приподнят в виде бугорка, окружен валиком. Спороношение среднее. Обратная
сторона светло-желтая, центр колонии кирпично-желтый, ярко выражен.
Конидиеносцы собраны в редкие мутовки, иногда расположены вдоль гиф единично
или парами друг против друга. На вершине бутылевидного конидиеносца наблюдается
зигзагообразный вырост. Конидии одноклеточные; шаровидные или короткоовальные 2,03,0 × 1,7-2,0 мкм, в массе пылят.
Физиолого-биохимические свойства. Штамм Beauveria bassiana 10-06 хорошо развивается на пептоне, хорошо усваивает нитраты (NaNO3) и аммоний азот. Усваивает манит,
сорбит, глицерин. Хорошо утилизирует глюкозу, усваивает мальтозу, лактозу, хуже - рамнозу и арабинозу.
Продуктивность штамма Beauveria bassiana 10-06 на среде сусло-агар достаточно высокая и составляет 8,4 млрд. спор/см2.
Оптимальная температура для роста и развития данного штамма - 26-28 °C.
Оценена инсектицидная активность штамма энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana 10-06 по отношению к имаго и личинкам майского хруща Melolontha melolontha L.
Для определения биологической активности штамма готовили стандартную суспензию с
титром 1 × 106 спор/мл. Отмечена высокая восприимчивость взрослых жуков - 66,6 %,
штамм поражает имаго, куколок и личинок фитофага. На личинках, куколках и имаго
Melolontha melolontha L. - мицелий гриба Beauveria bassiana кремовато-белый, плотный.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример 1
Продуктивность штамма гриба Beauveria bassiana 10-06 в зависимости от состава питательной среды при культивировании глубинным способом.
Исследование по подбору оптимального состава питательной среды для культивирования препарата на основе штамма Beauveria bassiana глубинным методом провели по
2
BY 14819 C1 2011.10.30
критерию продуктивности (титр спор/мл). Оценили шесть композиций жидких питательных сред.
№1
Вода - 1 л
Меласса - 80 мл
Кукурузный экстракт - 20 мл
KH2PO4 - 2 г
MgSO4 - 0,5 г
KCl - 2 г
№3
Вода - 1 л
БВК - 20 мл
Кукурузный экстракт - 20 г
KH2PO4 - 2 г
MgSO4 - 0,5 г
KCl - 5 г
№5
Вода - 1 л
Гидролизат дерти - 20 мл
NaNO3 - 9 г
MnSO4 - 0,75 г
KCl - 12 г
KH2PO4 - 2,25 г
№2
Вода - 1 л
Меласса - 80 мл
Гидролизат дерти - 20 мл
KH2PO4 - 2 г
MgSO4 - 0,5 г
KCl - 2 г
№4
Вода - 1 л
Сахароза - 10 г
NaNO3 - 9 г
MnSO4 - 0,75 г
KCl - 12 г
KH2PO4 - 2,25 г
№6
Вода - 1 л
Сахароза - 10 г
(NН4)2SO4 - 1 г
KH2PO4 -0,5 г
Жидкие питательные среды заливали по 100 мл в колбы объемом 750 мл. Колбы со
средой засевали посевным материалом (суспензия спор гриба) в количестве 10 % от объема. Культуру выращивали на качалке IKA HS/KS 260 control при скорости вращения
260 об/мин и температуре - 26 °С в течение 72 часов. Титр спор определяли в камере Горяева.
Таблица 1
Продуктивность штамма Beauveria bassiana 10-06 в зависимости
от состава искусственной питательной среды
Продуктивность штамма Beauveria bassiana 10-06, спор/мл
Питательная среда
1
2
3
4
5
6
8
9
9
8
8
0,31×10
0,37×10
0,26×10
0,25×10
0,28×10
0,002×108
Среди испытанных сред перспективной для культивирования является среда под № 2.
Пример 2
Влияние продолжительности ферментации на продуктивность штамма гриба Beauveria
bassiana 10-06.
Биопрепарат Melobass изготовили с использованием ферментера ПОЗ-22 на питательной
среде: меласса - 80 мл, гидролизат дерти - 20 мл, KH2PO4 - 2 г, MgSO4 - 0,5 г, KCl - 5 г из расчета на 1 л воды. Условия культивирования: интенсивность аэрации - 1 ± 0,5 л/л среды/мин,
скорость вращения мешалки - 260 об/мин, температура - 26 °С, рН - 5,4-5,6, продолжительность - 96 часов. Для определения титра нарабатываемой опытной партии препарата
через 48, 72 и 96 часов ферментации отбирали пробы и определяли титр при помощи камеры Горяева.
3
BY 14819 C1 2011.10.30
Таблица 2
Влияние продолжительности ферментации на продуктивность
гриба Beauveria bassiana
Титр (спор/мл), время
культивирования (ч)
Состав среды
Условия культивирования
48
72
96
Меласса-80 мл, гидинтенсивность аэрации ролизат дерти - 20 мл, 1±0,5 л/л среды/мин, скорость враKH2PO4 - 2 г, MgSO4 - щения мешалки - 260 об/мин, темпе- 0,02×109 0,34×109 0,5×109
0,5 г, KCl - 5 г, вода
ратура - 26 °С, исходное pH - 5,4-5,6,
до общего объема 1 л продолжительность - 96 часов
Титр спор опытной партии биопрепарата составил 0,5 × 109 /г.
Пример 3
Оценка инсектицидной активности штамма Beauveria bassiana 10-06 в отношении личинок майского хруща
Для опыта использовали вегетационные сосуды с почвой. В опытах определяли чувствительность фитофага в зависимости от нагрузки препарата на вес почвы. Норма расхода препарата (титр 0,5 × 109 /г) составила 5 и 10 г на 100 г почвы. Личинок 2-3 возрастов
природной популяции майского хруща помещали в сосуды с зараженной почвой. В контрольном варианте почву не обрабатывали.
Биологическая активность (с поправкой на гибель в контроле) при норме расхода препарата 10 г на 100 г почвы составила 63,7 %.
Пример 4
Определение биологической эффективности образца биопрепарата Melobass в отношении майского хруща Melolontha melolontha L.
Оценку действия препарата в отношении личинок майского хруща провели в питомнике яблони на площади 0,2 га. Почва супесчаная, подстилаемая моренным суглинком.
Численность личинок фитофага определили путем почвенных раскопок. В образцах
присутствовали личинки майского хруща (Melolontha melolontha L.) 2-3 возрастов, численность которых до обработки составила в среднем 4 экз./м2.
Препарат внесли методом полива рабочей суспензии в период высадки подвоев яблони (после полива водой) из расчета 0,5 л/пог. м рядка с титром 1,25 × 108 спор/мл. Контрольный вариант - полив водой.
Биологическую эффективность препарата оценили по проценту выпавших растений
через 130 сутки после высадки подвоев.
Таблица 3
Показатели эффективности образца препарата Melobass в отношении
майского хруща (Melolontha melolontha L.)
Неприжившихся
Средняя выК-во подвоев
Биологическая эфподвоев
сота подвоев
Вариант опыта
яблони в вафективность с учена 130 сутки
рианте, шт.
том контроля, %
экз.
%
роста, см
Штамм гриба Beauveria bassiana 10-06
(титр рабочей сус464
15
3,2
75,6
67,1
пензии 1,25×108
спор/мл)
Контроль (вода)
413
54
13,1
59,6
HCP05
2,66
* препарат внесен в почву в период высадки подвоев (21 мая).
4
BY 14819 C1 2011.10.30
Использование штамма Beauveria bassiana 10-06 (титр рабочей суспензии
1,25 × 108 спор/мл) методом полива рабочей суспензии в период высадки растений позволяет защитить подвои от майских хрущей. Процент выпавших растений на варианте с использованием штамма Beauveria bassiana 10-06 и контрольном составил 3,2 и 13,1 %
соответственно. Биологическая эффективность приема - 75,6 %. В сравнении с контролем
отмечено статистически достоверное увеличение высоты подвоев яблони на 12,6 %.
Источники информации:
1. Король И.Т. Микробиологическая защита растений / И.Т.Король. - Москва: Колос,
1993. - С. 77.
2. Патент RU 2103873, МПК A 01N 63/00, C 12N 1/14 // Бюл. № 4. - 10.02.98.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
100 Кб
Теги
by14819, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа