close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15356

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 15356
(13) C1
(19)
G 01N 33/50 (2006.01)
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЯ
АДАПТАЦИОННОГО ПЕРИОДА У ДОНОШЕННОГО
НОВОРОЖДЕННОГО
(21) Номер заявки: a 20091110
(22) 2009.07.21
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Парамонова Нэлла Сергеевна; Гурина Людмила Николаевна
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(56) RU 2128469 C1, 1999.
RU 2225008 C2, 2004.
RU 2257147 C2, 2005.
BY 15356 C1 2012.02.28
(57)
Способ прогнозирования нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного, заключающийся в том, что в сыворотке пуповинной крови определяют спектрофотометрически активность эластазоподобных протеаз с использованием в качестве
субстрата протеаз нитрофенилового эфира N-бутилоксикарбонил-L-аланина и при получении значения более 0,35 мE/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может использоваться для прогнозирования течения адаптационного периода у доношенных новорожденных.
Срыв адаптационного периода проявляется дыхательными расстройствами, угнетением или возбуждением центральной нервной системы, гипербилирубинемией. В доступной
нам литературе отсутствуют сведения о состоянии протеолитической системы у детей в
периоде ранней адаптации и нами не обнаружены способы прогнозирования течения
адаптационного периода у новорожденных.
Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования течения адаптационного периода у младенцев в целях проведения качественной и своевременной диагностики и профилактики нарушений физиологически протекающей адаптации.
Указанная задача решается путем определения в сыворотке пуповинной крови спектрофотометрическим методом активности эластазоподобных протеаз с использованием в
качестве субстрата протеаз нитрофенилового эфира N-бутилоксикарбонил-L-аланина, и
при получении значения более 0,35 мЕ/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного.
Способ осуществляют следующим образом. Из материнского конца пуповины после
ее пересечения забирают 3-5 мл крови. Забранную кровь центрифугируют при
BY 15356 C1 2012.02.28
1500 об./мин. в течение 10 мин при температуре 23 °С. Сыворотка крови может храниться
в течение суток при - 4 °С. При - 20 °С сыворотка крови стабильна в течение 3-х месяцев.
При двукратном и более замораживании и размораживании показатели протеолиза в различных образцах очень варьируют, поэтому такое исследование недопустимо. Затем энзиматическим методом определяют общую протеолитическую активность сыворотки
крови, 90 % которой составляет эластаза [Vesser L., Blout E.R. Biochim. Biophys. Acta. 1972. - No. 268. - P. 257-260]. Данный метод основан на взаимодействии эластазоподобных
протеаз (эластаза нейтрофилов, сериновая протеаза, тиоловая протеаза (катепсин E), сериновые эластазы моноцитов и тромбоцитов, металлопротеаза макрофагов) с субстратом
БАНЭ (нитрофениловый эфир N-бутилоксикарбонил-L-аланина). В результате этой реакции образуется p-нитрофенол, количество которого пропорционально активности эластазоподобных протеаз. В кювету общим объемом 3,0 мл, содержащую 2,85 мл 0,05 M Naфосфатного буфера (pH 6,5) и 0,05 мл исследуемой биологической жидкости (сыворотка
крови), вносят 0,1 мл 0,01 M раствора БАНЭ (начало реакции). Кювету инкубируют при
температуре 25 °С в течение 60 с. После инкубации на протяжении 120 с фиксируют изменение оптической плотности раствора на спектрофотометре "Solar" при длине волны
347 нм. Активность эластазоподобных протеаз выражают в наномолях гидролизованного
БАНЭ за 1 мин на 1,0 мл биологической жидкости и вычисляют по формуле:
дельта A ⋅ 3,0 мл
A=
,
5,5 ⋅103 ⋅ 0,05 мл
где дельта A - прирост p-нитрофенола за 2 мин;
K - коэффициент молярной экстинции БАНЭ 5,5⋅103 М⋅мг;
3,0 мл - объем кюветы;
0,05 мл - объем исследуемой жидкости.
A - активность эластазоподобных протеаз, выражается в мЕ/мкл (нмоль/мин/мл = мЕ/мкл).
При уровне эластазоподобной активности сыворотки крови более 0,35 мЕ/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода новорожденного ребенка, проявляющуюся дыхательными расстройствами, угнетением или возбуждением
центральной нервной системы, гипербилирубинемией.
Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ "STATISTICA 6,0", "Microsoft Excel". Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (Me, 25 %, 75 %). Сравнение
групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни. При помощи метода четырехпольных таблиц рассчитывались основные операционные характеристики теста определения эластазоподобной активности сыворотки крови: чувствительность, специфичность.
Для доказательства заявляемого способа проведено исследование активности протеолитических ферментов в сыворотке пуповинной крови у 69 доношенных младенцев, которые были разделены на 4 группы. Основную группу сформировали из 59 доношенных
детей, у которых имелись различные нарушения адаптационного периода. Группу сравнения составили 10 детей, период адаптации у которых протекал без особенностей. Пуповинная кровь забиралась из материнского конца пуповины после ее пересечения в объеме
3 мл. Активность эластазоподобных протеаз сыворотки крови у доношенных детей основных групп и группы сравнения представлена в таблице.
2
BY 15356 C1 2012.02.28
Значения уровня эластазоподобной активности сыворотки пуповинной крови
(мЕ/мкл) у доношенных новорожденных основных групп и группы сравнения
Эластазоподобная активность Me (25 %75 %)
0,928 (0,752-0,981)
0,431 (0,370-0,588)
Исследуемые группы
p
Признаки дыхательных расстройств (n = 9)
p<0,001
Синдром угнетения или возбуждения нервноp<0,001
рефлекторной возбудимости (n = 36)
Гипербилирубинемия (n = 14)
0,600 (0,512-0,741)
p<0,001
Группа сравнения (n = 10)
0,223 (0,163-0,298)
При уровне эластазоподобной активности сыворотки крови более 0,35 мЕ/мкл диагностическая чувствительность теста составляет 88 %, диагностическая специфичность
- 98 %.
Приводим примеры, подтверждающие возможность осуществления способа.
Пример 1.
Доношенный мальчик от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3350 г, длиной тела 55 см, окружностью головы 35 см,
груди 34 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без
особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была
0,23 мЕ/мкл. Ребенок из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Период
адаптации протекал без особенностей, в возрасте 5 дней жизни с положительной динамикой массы тела ребенок выписан домой.
Пример 2.
Доношенный мальчик от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3500 г, длиной тела 54 см, окружностью головы 35 см,
груди 33 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без
особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была
0,47 мЕ/мкл, спрогнозирован высокий риск нарушений адаптационного периода. Ребенок
из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Через 5 часов после рождения состояние ребенка ухудшилось и расценено как средней степени тяжести: плач болезненный, монотонный. Объективно кожные покровы бледно-розовые, акроцианоз.
Мышечный тонус и рефлексы периода новорожденности снижены. Температура аксилярная и ректальная - нормотермия. Младенец нуждался в дальнейшем лечении и
наблюдении.
Пример 3.
Доношенная девочка от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3200 г, длиной тела 52 см, окружностью головы 34 см,
груди 33 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без
особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была
0,88 мЕ/мкл, спрогнозирован высокий риск нарушений адаптационного периода. Ребенок
из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Через шесть часов после
рождения состояние ребенка ухудшилось: стала постанывать. Объективно: кожные покровы бледно-розового цвета с выраженным пероральным и акроцианозом. Дыхание стонущее, аритмичное, с участием вспомогательной мускулатуры в акте дыхания. Над легкими
равномерно ослабленное дыхание, с единичными крепитирующими хрипами в межлопаточной области. Девочка нуждалась в оказании экстренной медицинской помощи.
Таким образом, заявляемый способ прогнозирования течения адаптационного периода
у доношенных новорожденных позволяет сформировать группы риска среди младенцев
по дыхательным нарушениям, перинатальному поражению центральной нервной системы,
ранней гипербилирубинемии. Такие дети нуждаются в динамическом клиническом, лабо3
BY 15356 C1 2012.02.28
раторном и инструментальном наблюдении для проведения своевременной профилактики
и лечения.
Данный способ может быть применен в работе перинатальных центров различного
уровня для своевременного прогнозирования течения адаптационного периода у доношенных младенцев с целью предупреждения "срыва" периода адаптации, что будет способствовать снижению заболеваемости новорожденных.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
87 Кб
Теги
патент, by15356
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа