close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15379

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 15379
(13) C1
(19)
C 12N 5/071 (2010.01)
C 12N 5/079 (2010.01)
A 61P 43/00 (2006.01)
СПОСОБ ЗАЩИТЫ КУЛЬТИВИРУЕМОЙ ПЕРВИЧНОЙ
ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ
ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ
(21) Номер заявки: a 20091338
(22) 2009.09.17
(43) 2011.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) BY 10290 C1, 2008.
ЖУК В.М. и др. // Весцi Акадэмii
навук БССР. Серыя бiялагiчных навук.
- 1986. - № 1. - С. 56-60.
BY 15379 C1 2012.02.28
(57)
Способ защиты культивируемой первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной среде DMEM с 2 %-ным NaCl
при культивировании в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью
при температуре 37 °С, заключающийся в том, что в питательную среду вносят фактор
роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани.
Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной среде DMEM с 2 %-ным NaCl при культивировании в атмосфере с 5 %-ным
содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С, заключающийся в том,
что в питательную среду вносят фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл.
Фактор роста нервов - протеин молекулярной массой 116-140 кДа - относится к семейству полипептидных биорегуляторов, контролирующих на ауто-, пара- и эндокринном
уровнях выживаемость, дифференцировку, поддержание функциональной активности
практически всех клеток развивающегося и зрелого организма. Он обладает нейротрофической активностью и обслуживает такие важные функции в нервной ткани, как индукция
BY 15379 C1 2012.02.28
выроста нейритов, ориентация растущих нейритов по направлению к источнику фактора
роста нервов и способствование выживанию нервных клеток [1].
Введение фактора роста нервов в концентрации 50-100 нг/мл позволяет защищать
первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от развития осмотического
сжатия (дегидратации) при содержании их в гипертонический питательной среде.
Пример 1
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С6) плотностью 2,03,0 × 104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого натрия (2 % NaCl) и фактора
роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды. В качестве контроля
используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде,
содержащей 2 % NaCl.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
Внесение в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием фактора
роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют
типичную морфологию как самих тел, так и их отростков.
Полученные результаты свидетельствуют, что фактор роста нервов способен влиять
на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором
хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Пример 2
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому
и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0 × 104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла
и культивируют их до получения монослоя. В опытные культуры вносят NaCl (2 %) и
фактор роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды. В качестве
контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 2 % NaCl.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (23 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
Внесение в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием фактора
роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют
типичную морфологию как самих тел, так и их отростков.
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной
ткани от развития дегидратации при их содержании в гипертонической синтетической пи2
BY 15379 C1 2012.02.28
тательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной
биологии и медицине.
Источники информации:
1. Калюнов В.Н. Фактор роста нервной ткани. - Мн., 1984. - С. 169-173.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
68 Кб
Теги
by15379, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа