close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15430

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 15430
(13) C1
(19)
G 01N 33/48
G 01N 33/53
A 61B 10/00
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛИ
ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
(21) Номер заявки: a 20090912
(22) 2009.06.22
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Писаренко Артур Михайлович; Фридман Михаил Валерьевич; Демидчик Юрий Евгеньевич
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(56) RU 2300319 C2, 2007.
SU 1807409 A1, 1993.
BY 2538 C1, 1998.
RU 2146879 C1, 2000.
BY 15430 C1 2012.02.28
(57)
Способ дифференциальной диагностики опухоли щитовидной железы, при котором
осуществляют забор материала опухоли щитовидной железы путем трепан-биопсии, проводят его иммуногистохимическое исследование с использованием моноклональных антител AE1/AE3, Vimentin, Desmin, S-100, CD45RB и Synaptophysin и диагностируют
анапластический рак при выявлении клеток, позитивно реагирующих с AE1/AE3 и в невыраженной степени с Vimentin, или медуллярный рак при выявлении клеток, позитивно
реагирующих с AE1/AE3 и Synaptophysin, или лейомиосаркому при выявлении клеток,
позитивно реагирующих с Vimentin и Desmin, или периферическую опухоль оболочек нервов при выявлении клеток, позитивно реагирующих с Vimentin и S-100, или лимфому
при выявлении клеток, позитивно реагирующих с CD45RB.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть
использовано для дифференциальной диагностики и определения гистогенеза злокачественных новообразований щитовидной железы.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ дифференциальной диагностики фолликулярной аденомы, фолликулярной атипической аденомы, фолликулярного рака и фолликулярного варианта папиллярного рака
щитовидной железы, заключающийся в следующем [1].
Осуществляют взятие материала удаленной в результате хирургической операции
опухоли. Готовят препарат для морфологического анализа. Выявляют фолликулярные и
папиллярные структуры, образуемые опухолевыми клетками. Определяют наличие пролиферации эпителия, клеточной атипии, полиморфизма клеток и ядер, оптически "пустых" ядер, борозд ядер и внутриядерных цитоплазматических включений, наличие и
направления распространения инвазивного роста опухоли, а также наличие фолликулярных структур и пролиферации эпителия. Определяют наличие соединительно-тканной
капсулы, степени выраженности клеточной атипии и полиморфизма клеток и ядер - еди-
BY 15430 C1 2012.02.28
ничные участки или умеренная степень, определяют средние величины внешнего и внутреннего диаметров фолликула, среднюю величину относительной площади сосудов, среднюю величину относительной площади фиброзирования. В зависимости от полученных
данных проводят дифференциальную диагностику фолликулярной аденомы, фолликулярной атипической аденомы, фолликулярного рака и фолликулярного варианта папиллярного рака щитовидной железы.
Предлагаемым способом дифференциальной диагностики опухоли щитовидной железы путем трепан-биопсии проводят ее иммуногистохимическое исследование с использованием моноклональных антител AE1/AE3, Vimentin, Desmin, S-100, CD45RB, Synaptophysin и диагностируют анапластический рак при выявлении клеток, позитивно реагирующих с AE1/AE3 и в невыраженной степени с Vimentin, или медуллярный рак при выявлении клеток, позитивно реагирующих с AE1/AE3 и Synaptophysin, или лейомиосаркому
при выявлении клеток, позитивно реагирующих с Vimentin и Desmin, или периферическую опухоль оболочек нервов при выявлении клеток, позитивно реагирующих с Vimentin
и S-100, или лимфому при выявлении клеток, позитивно реагирующих с CD45RB.
Для дифференциальной диагностики рака щитовидной железы способ иммуногистохимической диагностики по материалам трепан-биопсии не использовался, и, согласно
заявляемому способу, впервые на дооперационном этапе диагностируют различные варианты рака щитовидной железы с помощью специфической реакции антиген-антитело на
материале депарафинированных тканевых срезов.
Предлагаемая нами процедура не представляет существенного риска для пациента и
является малотравматичной. Выполнение ее возможно без обезболивания и с обезболиванием (местная анестезия). К абсолютным противопоказаниям относятся лишь нарушения
свертываемости крови и неадекватное поведение больного.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Биопсия выполняется иглами калибра 14-17G, длиной 10 см, со специальным покрытием для эховизуализации. Обработка операционного поля проводится по правилам асептики и антисептики в операционной либо чистой перевязочной. Используются
антисептики, кроме кислородосодержащих (иодинол), поскольку применение последних
ухудшает качество эхоскопического изображения. Непосредственно перед биопсией выполняется ультразвуковая визуализация патологического очага в щитовидной железе,
определяются его размеры, расположение, эхоструктура, устанавливаются направление и
глубина пункции. Кожа и мягкие ткани прокалываются быстрым движением иглы. Под
визуальным контролем кончик иглы подводится к опухолевому узлу. Затем осуществляется быстрое продвижение в избранный для забора материала участок опухоли. Биоптат получаем из периферической зоны опухолевого образования (забор материала из центра
опухоли более прост, но часто приводит к получению неинформативного материала, поскольку в этой зоне чаще возникает некроз и сопутствующая ему воспалительная реакция).
Забор ткани осуществляется выдвижным стилетом с продольной выемкой и нависающим над ней режущим краем (типа Sonocan). Для получения качественного биоптата мы
использовали автоматический пробоотбортник. Забор образца ткани производится автоматически после нажатия кнопки пускового механизма. Наружу игла извлекается с надвинутой на обтуратор канюлей. Следующим этапом больному проводится ультразвуковое
исследование зоны пункции для контроля возможных осложнений. Полученный фрагмент
ткани с помощью тонкого пинцета помещаем в маркированный флакон с 10 % раствором
формалина и направляем в патоморфологическую лабораторию.
После стандартной проводки и заключения в парафин изготавливаем микропрепараты
толщиной 4 мкм и применяем окраски гематоксилином и эозином. Оцениваем архитектонику и клеточный состав новообразования, а также особенности его роста в щитовидной
железе (например, локализацию по отношению к сосудам, нервным стволикам и т.п.). Поскольку материала трепан-биопсии часто недостаточно для верификации диагноза, нами
2
BY 15430 C1 2012.02.28
предложено применение иммуногистохимического исследования с использованием моноклональных антител: AE1/AE3, Vimentin, Desmin, S-100, CD45RB, Synaptophysin.
В этом случае при помощи реакции антиген-антитело в присутствии окрашивающего
вещества выявляются строгоспецифические белки, наличие и степень экспрессии которых
свидетельствует в пользу определенной гистогенетической принадлежности злокачественной опухоли щитовидной железы (в нижеприведенной таблице обозначено знаком
+). Отсутствие белков в результате проведенной реакции в таблице обозначено знаком -.
Знак -/+ в таблице обозначает невыраженную степень экспрессии специфичного белка. В
диагностическую панель включались коммерческие моноклональные антитела (AE1/AE3,
Vimentin, Desmin, S-100, CD45RB, Synaptophysin), работа с которыми велась по известной
методике [2]. В результате проведена верификация органоспецифичных и прочих злокачественных опухолей и в минимальные сроки после исследования определена адекватная
лечебная тактика.
Таблица для дифференциальной диагностики низкодифференцированных
злокачественных опухолей солидного, веретеноклеточного
и полиморфноклеточного строения
Групповая принадлежность
Панель моноклональных антител
новообразования
AE1/AE3 Vimentin Desmin S-100 CD45RB Synaptophysin
Анапластический и плохо+
-/+
дифференцированный рак
Медуллярный рак
+
+
Лейомиосаркома
+
Периферическая опухоль
+
+
оболочек нервов
Лимфома
+
При необходимости список антител может быть существенно расширен.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
Пациент 73 лет с опухолевидным образованием в проекции щитовидного хряща и
правой боковой области шеи. Доля щитовидной железы находится в едином конгломерате
с окружающими мягкими тканями. Просвет пищевода и гортани свободный. При пункционной биопсии получены клетки злокачественной опухоли. Из-за распространенности
опухолевого процесса произвести эксцизионную биопсию не представляется возможным.
В результате трепанационной биопсии прислан для исследования столбик ткани 0,8x0,1 мм.
После фиксации и заливки в парафин изготовлены микропрепараты на 4 предметных
стеклах, покрытых специальным составом для возможности последующего иммуногистохимического исследования. При окраске стандартным методом (гематоксилин и эозин)
видны разрастания полиморфноклеточной злокачественной опухоли, клетки которой позитивно реагируют с эпителиальными и мезенхимальными маркерами (AE1/AE3 и Vimentin соответственно) и не реагируют с маркером нейроэндокринной дифференцировки
(Synaptophysin). Заключение - анапластический рак. Учитывая крайне неблагоприятный
прогноз данного заболевания, принято решение отказать в проведении специализированной помощи.
Пример 2
Пациентка 67 лет с образованием каменистой плотности в области щитовидного хряща, значительно деформирующим шею. Лимфатические узлы по ходу яремных сосудов и
подчелюстной области не увеличены. По результатам пункционной биопсии получено заключение о низкодифференцированной злокачественной опухоли. В анализах крови
наблюдается повышение уровня кальцитонина. Заподозрен медуллярный рак щитовидной
железы. В материале трепан-биопсии видны солидно-альвеолярные опухолевые комплексы, инфильтрирующие фиброзную ткань. Клеточный состав представлен преимуществен3
BY 15430 C1 2012.02.28
но веретеновидными элементами, положительно реагирующими с маркерами эпителиальной и нейроэндокринной дифференцировки (AE1/AE3 и Synaptophysin соответственно).
Заключение - медуллярный рак щитовидной железы. После проведения наружного облучения опухоль стала подвижной и уменьшилась в размерах, что позволило выполнить радикальное оперативное вмешательство. В операционном материале обнаружен
медуллярный рак, клетки которого положительно реагировали с моноклональными антителами к кальцитонину. Реакция на амилоид отрицательна.
Таким образом, применение заявляемого способа не только значительно экономит
время обследования пациентов (от доставки в лабораторию до получения окончательного
заключения проходит трое суток), но и дает возможность выбора оптимальной лечебной
тактики. При этом совпадения до- и послеоперационного диагнозов отмечены во всех
наблюдениях.
Источники информации:
1. RU 2300319 C2, 2007.
2. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей. Издание 3-е, дополненное и переработанное / Под редакцией С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - РИЦ "Титул", Казань, 2004.; R. V. Lloyd. Endocrine pathology. Springer-Verlag New York Inc., 1990.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
92 Кб
Теги
by15430, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа