close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15455

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
BY 15455 C1 2012.02.28
(54)
BY (11) 15455
(13) C1
(19)
G 01N 30/02
G 01N 33/02
(2006.01)
(2006.01)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАМИНА В СОЕВОМ ПРОДУКТЕ
(21) Номер заявки: a 20100198
(22) 2010.02.10
(43) 2011.10.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены " (BY)
(72) Авторы: Шуляковская Ольга Васильевна; Застенская Ирина Алексеевна;
Белышева Людмила Леонидовна;
Марусич Нина Ивановна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(56) VARELIS P. et al. LC/GC chromatograpyonline.com, FindAnalytichem, Jul. 2, 2008
[http://chromatographyonline.findanalyti
chem.com/lcgc/App+Notes+Food%2f
Beverage/Analysis-of-Melamine-andCyanuric-Acid-in-Food-Mat/Article
Standard/Article/detail/589492?ref=25].
ZOU Y. et al. LC/GC chromatograpyonline.com, FindAnalytichem, Jun.
1,
2009
[http://chromatographyonline.findanalyt
ichem.com/lcgc/Trace-Level-Analysisof-Melamine-in-Milk-Products-/Article
Standard/Article/detail/611922].
JIANG W. et al. LC/GC chromatograpyonline.com, FindAnalytichem, Feb.
1,
2010
[http://chromatographyonline.findanalytichem.
com/lcgc/Articles/The-Analysis-of-Melaminein-Milk-Powder-Using-HILI/ArticleStandard/
Article/detail/655595?ref=25].
LUAN W. et al. LC/GC chromatograpyonline.com, FindAnalytichem, Mar. 2,
2009
AN R. Agilent in pharmaceutical analysis,
Mar. 2009, is.26, [http://www.chem.agilent.
com/ en-US/Newsletters/pharmaanalysis/
issue26/ pages/PN_26_melamine.aspx].
CHANG E. et al. LC/GC chromatograpyonline.com, FindAnalytichem, Jun.
1,
2009
[http://chromatographyonline.findanalytichem.
com/lcgc/Articles/Hydrophilic-InteractionChromatography-HILIC-for-S/ArticleStandard/
Article/detail/611595].
(57)
Способ определения меламина в соевом продукте, заключающийся в том, что экстрагируют меламин из соевого продукта смесью 5 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты
и ацетонитрила, взятых в соотношении 5:2 или 3:4, в течение 10 мин при температуре
50 °С в ультразвуковой бане, осуществляют очистку и концентрирование полученного
экстракта с помощью твердофазной экстракции на картридже Aglient SampliQ SCX,
3 ml/60 mg, меламин элюируют смесью 1,25 %-ного раствора аммиака в метаноле со скоростью 0,5-1,0 см3/мин, определяют содержание меламина в полученном элюате методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии и рассчитывают массовую долю меламина в соевом продукте.
Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к
пищевой промышленности.
BY 15455 C1 2012.02.28
В промышленности меламин используют для получения меламино-формальдегидных
и ионообменных смол, ингибиторов коррозии и т.д.
По токсичности меламин относится к 2-й группе токсичности. В Республике Беларусь
не допускается наличие меламина в соевых продуктах.
Однако в доступной научно-технической и патентной литературе заявителем ближайший аналог заявляемого способа не выявлен.
Задачей заявляемого способа является создание способа определения меламина в соевых продуктах с высокой чувствительностью и точностью.
Поставленная задача решается следующим образом.
Предложен способ определения меламина в соевом продукте, заключающийся в том,
что экстрагируют меламин из соевого продукта смесью 5 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты и ацетонитрила, взятых в соотношении 5:2 или 3:4, в течение 10 мин при
температуре 50 °С в ультразвуковой бане, осуществляют очистку и концентрирование полученного экстракта с помощью твердофазной экстракции на картридже Agilent SampliQ
SCX, 3 ml/60 mg, меламин элюируют смесью 1,25 %-ного раствора аммиака в метаноле со
скоростью 0,5-1,0 см3/мин, определяют содержание меламина в полученном элюате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и рассчитывают массовую долю меламина в соевом продукте.
Указанные нами условия экстракции, очистки и концентрирования позволяют достичь
максимальной чувствительности и извлечения меламина из соевых продуктов.
Пример.
Определение меламина в соевом продукте
1. Экстракция
Навеску исследуемых образцов 2,00 ± 0,01 г растирают в фарфоровой ступке с 2-3 г
кварцевого песка, затем переносят в пробирку для центрифугирования вместимостью
50 см3, промывают ступку 5 см3 5 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) два
раза и добавляют полученный раствор к пробе, затем в пробирку для центрифугирования
добавляют 2 см3 ацетонитрила. Пробирку плотно закрывают, встряхивают и помещают на
10 мин в ультразвуковую баню при температуре 50 °С. Затем пробирку центрифугируют
10 мин со скоростью 4000 об/мин. Отбирают верхний слой в отдельную пробирку, а к
осадку добавляют еще 5,0 см3 5 %-ного раствора ТХУ и 1,5 см3 ацетонитрила, встряхивают, помещают в ультразвуковую баню на 10 мин, затем центрифугируют 10 мин при тех
же условиях. Отбирают верхний слой и присоединяют к первой порции. К осадку в третий
раз прибавляют 5 см3 5 %-ного раствора ТХУ и 1,5 см3 ацетонитрила, встряхивают, помещают в ультразвуковую баню на 10 мин, затем центрифугируют 10 мин при тех же условиях. Отбирают верхний слой и присоединяют к первой и второй порциям.
Объединенный экстракт фильтруют в мерную колбу вместимостью 25 см3 через бумажный фильтр "синяя лента", который необходимо предварительно смочить 1 см3 5 %-ным
раствора ТХУ. Объем доводят до метки 5 % раствором ТХУ.
2. Очистка и концентрирование экстракта
Для проведения твердофазной экстракции отбирают 5 см3 экстракта, полученного по
п. 1, в пробирку вместимостью 10 см3, добавляют 5 см3 дистиллированной воды, раствор
тщательно перемешивают.
Через подготовленный* предварительно картридж пропускают 10 см3 экстракта из
пробирки (п. 2). Затем промывают картридж 5 см3 дистиллированной воды, а затем 5 см3
метанола. Высушивают картридж под вакуумом в течение 1-2 мин, а затем элюируют меламин 5 см3 1,25 %-ного раствора аммиака в метаноле со скоростью элюирования 0,51,0 см3/мин.
Полученный элюат упаривают досуха в этой же пробирке на роторном испарителе при
температуре 50 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы, фильтруют через
мембранный фильтр Millipore с размером пор 0,45 мкм.
* Подготовка картриджа
Устанавливают картридж (Agilent SampliQ SCX; 3 ml/60 mg, кат. № 5982-3236) в установку для твердофазной экстракции, включают насос, с помощью крана и секундомера
2
BY 15455 C1 2012.02.28
устанавливают скорость элюирования метанола 0,5-1,0 см3/мин. Через сорбент пропускают 5 см3 метанола, а затем 6 см3 дистиллированной воды.
3. Приготовление растворов
3.1. Приготовление 1 M раствора NaOH
Взвешивают 4,00 ± 0,01 г NaOH, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3,
добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения щелочи, охлаждают до комнатной температуры и доводят дистиллированной водой до метки.
Раствор хранят в склянке, закрытой притертой полимерной пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 года.
3.2. Приготовление 5,0 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ)
В коническую колбу вместимостью 250 см3 помещают 5,000 ± 0,001 г ТХУ и добавляют (95,000 ± 0,001) г дистиллированной воды, перемешивают. Раствор хранят в склянке
с притертой пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 6 мес.
3.3. Приготовление 1,25 %-ного раствора аммиака в метаноле
В коническую колбу вместимостью 250 см3 помещают 5,000 ± 0,001 г аммиака водного и добавляют 95,000 ± 0,001 г метанола, перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 мес.
3.4. Приготовление подвижной фазы
В плоскодонный стакан вместимостью 1000 см3 помещают 2,343 ± 0,001 г октансульфоната натрия и 1,924 ± 0,001 г лимонной кислоты, растворяют в 850 см3 дистиллированной воды, с помощью 1 M раствора NaOH доводят до pH = 3,0. Полученный раствор
помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доводят объем дистиллированной
водой до метки. К 920 см3 полученного раствора добавляют 80 см3 ацетонитрила. Подвижную фазу фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр. Раствор хранят в
склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 мес.
3.5. Приготовление стандартных растворов меламина
3.5.1. Приготовление основного стандартного раствора меламина концентрацией
500 мкг/см3
Навеску 0,1000 ± 0,0001 г кристаллического меламина вносят в мерную колбу вместимостью 200 см3, добавляют 100 см3 метанола и помещают в ультразвуковую баню на
15 мин при комнатной температуре, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Раствор
стабилен в течение 3 мес.
3.5.2. Приготовление стандартного раствора меламина концентрацией 100 мкг/см3
(раствор A)
Отбирают 10,0 см3 основного стандартного раствора меламина, приготовленного по
п. 3.5.1 и помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, объем доводят до метки подвижной фазой. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике.
Раствор стабилен в течение 7 суток.
3.5.3. Приготовление стандартного раствора меламина концентрацией 10 мкг/см3 (раствор Б)
Отбирают 10,0 см3 стандартного раствора меламина (раствор A), приготовленного по
п. 3.5.2 и помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем доводят до метки подвижной фазой. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике.
Раствор стабилен в течение 7 суток.
3.5.4. Приготовление градуировочных растворов меламина
Градуировочные растворы меламина концентрацией 0,2, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0 мкг/см3 готовят по схеме, представленной в табл. 3. Аликвотные части стандартных растворов А и Б
меламина переносят в мерные колбы и доводят подвижной фазой до метки при 20 ± 2 °С.
3
BY 15455 C1 2012.02.28
Градуировочные растворы хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Растворы стабильны в течение 7 суток.
Таблица 1
Схема приготовления градуировочных растворов меламина
№ градуироОбъем аликвотной части
Концентрация меламина
Объем мерной
вочного
стандартного раствора мелав градуировочном
колбы, см3
раствора
мина, см3
растворе, мкг/см3
1
5,0 (раствор А)
100
5,0
2
2,5 (раствор А)
100
2,5
3
5,0 (раствор Б)
50
1,0
4
5,0 (раствор Б)
100
0,5
5
2,0 (раствор Б)
100
0,2
4. Установление градуировочной характеристики
Полученные по п. 3.5.4 градуировочные растворы меламина хроматографируют,
начиная с самой низкой концентрации.
Условия хроматографирования:
объем вводимой пробы
20 мкл;
скорость подачи подвижной фазы
1,5 см3/мин;
температура термостата колонки
30 °С;
длина волны
240 нм;
ширина оптической щели
16 нм;
ширина пика (Responsetime)
>0,1 мин;
Slit
4 нм.
Каждый градуировочный раствор хроматографируют не менее 2-х раз, принимая за
результат измерения среднее арифметическое параллельных измерений.
5. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика устанавливают зависимость площади пиков
от соответствующей концентрации меламина в градуировочном растворе. Прямая градуировочного графика должна проходить через начало координат и определяться функциональной зависимостью:
Y = bX,
(1)
где Y- площадь пика меламина;
X - концентрация меламина в градуировочном растворе;
b - коэффициент регрессии.
Градуировочный график рассчитывается методом наименьших квадратов.
6. Выполнение измерений
Анализ полученного по п. 2 фильтрата проводят на жидкостном хроматографе. Условия хроматографирования такие же, как и при построении градуировочного графика п. 4.
Определяют площади пиков, используя компьютерную систему обработки сигналов. Проводят анализ двух параллельных проб.
7. Обработка результатов измерений
Расчет содержания меламина X, мг/кг, проводят по формуле:
C × V1 × V3
X=
,
(2)
m × V2
где C - концентрация меламина, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;
m - масса навески г;
V1 - общий объем экстракта, 25 см3;
V2 - объем экстракта, взятого для пропускания через картридж, 5 см3;
V3 - объем подвижной фазы, взятый для растворения сухого остатка пробы после упаривания, 1 см3.
4
BY 15455 C1 2012.02.28
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение
результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до третьего знака после запятой и округляют до второго.
Результаты определения меламина в соевых продуктах представлены в табл. 2.
Таблица 2
Определение содержания меламина в соевом продукте предлагаемым способом
Наимено- Температу- Время Внес. Определяе- Извле- Предел об- Смесь раствора экстрак- экстрак- к-во, мое кол-во, чение, наружения, рителей для
вание
продукта
ции, мин мг/кг
мг/кг
%
мг/кг
экстракции
ции, °С
2 % ТХУ +
5
4,88
97,5
ацет-л 1:6
5 % ТХУ +
40
10
4,94
98,7
ацет-л 5:2
10 % ТХУ +
15
4,94
98,8
ацет-л 3:4
2 % ТХУ +
5
4,91
98,2
ацет-л 1:6
Соевое
5 % ТХУ +
50
10
5
4,97
99,7
0,2
ацет-л 5:2
молоко
10 % ТХУ +
15
4,99
99,8
ацет-л 3:4
2 % ТХУ +
5
4,89
97,8
ацет-л 1:6
5 % ТХУ +
60
10
5,01
100,2
ацет-л 5:2
10 % ТХУ +
15
5,0
100,0
ацет-л 3:4
5
2,93
97,8
40
10
2,96
98,9
15
2,97
99,0
5
2,96
98,5
Тофу (соевый тво50
10
3
3,00
99,9
0,2
рог)
15
2,99
99,7
5
2,95
98,4
60
10
3,03
101,0
15
2,99
99,7
5
0,976
97,6
40
10
0,988
98,8
15
0,984
98,4
5
0,984
98,4
Концентрат сое50
10
1
0,997
99,7
0,2
вого белка
15
0,996
99,6
5
0,985
98,5
60
10
1,0
100,0
15
0,997
99,7
Достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что способ позволяет определять меламин в соевых продуктах с высокой точностью и чувствительностью, предел обнаружения меламина в соевых продуктах - 0,2 мг/кг.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
107 Кб
Теги
by15455, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа