close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15815

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.04.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 15815
(13) C1
(19)
C 12N 5/07 (2010.01)
C 12N 5/079 (2010.01)
СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОСМОТИЧЕСКОГО ОТЕКА
КЛЕТОК ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ
НЕРВНОЙ ТКАНИ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ИХ В
ГИПОТОНИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
(21) Номер заявки: a 20091339
(22) 2009.09.17
(43) 2011.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) BY 10290 C1, 2008.
ЖУК В.М. i др. Весцi Акадэмii навук
БССР. Серыя бiялагiчных навук. - 1986. № 1. - С. 56-60.
BY 15815 C1 2012.04.30
(57)
Способ предотвращения развития осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в гипотонической синтетической питательной среде, содержащей 0,45 % NaCl, заключающийся в том, что в указанную
среду добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл и культивируют клетки
в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию перевиваемых и первичных культур клеток нервной ткани.
Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа предотвращения осмотического отека клеток перевиваемых и первичных культур клеток нервной ткани, развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде.
Задачей заявляемого способа является предотвращение развития осмотического отека
клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в
гипотонической питательной среде, содержащей 0,45 % NaCl.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ предотвращения развития осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани
при культивировании их в гипотонической питательной среде, содержащей 0,45 % NaCl,
заключающийся в том, что в указанную среду добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл и культивируют клетки в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и
90 %-ной влажностью при температуре 37 °С.
Фактор роста нервов - протеин молекулярной массой 116-140 кДа - относится к семейству полипептидных биорегуляторов, контролирующих на ауто-, пара- и эндокринном
уровнях выживаемость, дифференцировку, поддержание функциональной активности
BY 15815 C1 2012.04.30
практически всех клеток развивающегося и зрелого организма. Он обладает нейротрофической активностью и обслуживает такие важные функции в нервной ткани, как индукция
выроста нейритов, ориентация растущих нейритов по направлению к источнику фактора
роста нервов и способствование выживанию нервных клеток [1].
Пример 1.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6), выращенную на
синтетической питательной среде DMEM, высевают плотностью 2,0-3,0 × 104 клеток/см2
на пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической питательной среде
(HEPES - 5 мМ, KCl - 5,4 мМ, MgSO4 - 1,2 мМ, NaH2PO4 - 1,2 мМ, CaCl2 - 2 мМ, глюкоза 10 мМ, NaCl - 0,45 г/л) с добавлением фактора роста нервов в конечной концентрации
50 нг/мл питательной среды.
В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же
гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления фактора роста нервов.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При инкубировании исследуемых клеток в контрольной гипотонической питательной
среде наступает гибель 50 % клеток, в оставшихся живых развивается гидратация (отек).
Эти клетки набухают: их объем увеличивается на 33 %.
При внесении в гипотоническую (0,45 г/л NaCl) питательную среду фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды гибель клеток составляет 17 %,
объем сохранившихся клеток увеличен только на 10 % (опыт).
Пример 2.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и
ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0 × 104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла и
культивируют их в гипотонической синтетической питательной среде DMEM (разведенной 1:2 стерильной дистиллированной водой, при этом концентрация NaCl уменьшалась
вдвое и составляла 0,45 %) с добавлением фактора роста нервов в конечной концентрации
100 нг/мл питательной среды.
В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же
гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления фактора роста нервов.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При инкубировании исследуемых клеток в контрольной гипотонической питательной
среде наступает гибель 47 % клеток, в оставшихся живых развивается гидратация (отек).
Эти клетки набухают: их объем увеличивается на 23 %.
При внесении в гипотоническую (0,45 г/л NaCl) питательную среду фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды гибель клеток составляет 13 %,
объем сохранившихся клеток увеличен только на 11 % (опыт).
Источники информации:
1. Калюнов В. Н. Фактор роста нервной ткани. - Минск, 1984. - С. 169-173.
2. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических
нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора
и гуанетидина // Весцi АН БССР: Сер. бiял. навук. - 1986. - № 1. - С. 56-60.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
2
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
67 Кб
Теги
by15815, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа