close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY15932

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.06.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 15932
(13) C1
(19)
C 12N 7/00
C 12R 1/93
(2006.01)
(2006.01)
ШТАММ VIRUS INFECTIOUS LARYNGOTRACHEITIS
AVIAN КМИЭВ-21 - ШТАММ-АНТИГЕН
(21) Номер заявки: a 20091812
(22) 2009.12.17
(43) 2011.08.30
(71) Заявитель: Республиканское научно-исследовательское
дочернее
унитарное предприятие "Институт
экспериментальной ветеринарии
им. С.Н.Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Гусев Анатолий Алексеевич; Насонов Игорь Викторович;
Кныш Надежда Вячеславовна; Костюк Наталья Ивановна; Згировская
Алла Александровна (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского" (BY)
(56) BY а20051332, 2007.
RU 2207372 C1, 2003.
US 2002/0081316 A1.
BAGUST T.J. Avian Pathology. - 1986. V. 15. - No. 3. - P. 581-595.
BY 15932 C1 2012.06.30
(57)
Штамм virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 - штамм-антиген.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к биотехнологии, и
касается штамма, выделенного от цыплят, больных инфекционным ларинготрахеитом, обладающего высокой иммуногенностью и биологической активностью, и может быть использовано в биологической промышленности для изготовления диагностикумов и
вакцин.
Известен штамм "ЦНИИПП". Иммуногенность его составляет 85 %, биологическая
активность - 105,0 ЭИД50/см3 [1].
Известен штамм "ВНИИБП". Иммуногенность его составляет 80 %, биологическая активность - 105,0 ЭИД50/см3 [1, 2].
Недостатком данных штаммов является то, что они не обладают достаточной биологической активностью и иммуногенностью в условиях птицеводческих хозяйств Республики Беларусь. Кроме того, данные штаммы выделены в России от цыплят, больных
инфекционным ларинготрахеитом.
За прототип взят штамм virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-20 - штаммантиген, выделенный в РУП "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского" в 1999 г. Иммуногенность его составляет 95 %, биологическая активность 105,2 ЭИД50/см3 [3].
Данный штамм имеет по сравнению с другими аналогами высокую биологическую активность и иммуногенность. Однако при вакцинации новых кроссов цыплят, которые отличаются быстротой роста и развития, а также большей чувствительностью к воздействию
внешних факторов, данный штамм иногда проявляет реактогенные свойства.
BY 15932 C1 2012.06.30
Задачей предлагаемого изобретения является селекция штамма virus infectious laryngotracheitis avian, обладающего высокой иммуногенностью и биологической активностью,
который может быть использован для конструирования диагностических и профилактических препаратов.
Поставленная задача достигается тем, что в качестве штамма-антигена был селекционирован штамм virus infectious laryngotracheitis avian, обладающий высокой иммуногенностью и биологической активностью по отношению к эпизоотическим штаммам,
циркулирующим в птицеводческих хозяйствах Республики Беларусь.
Штамм virus infectious laryngotracheitis avian депонирован в коллекции микроорганизмов РУП "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского". Коллекционный номер - КМИЭВ-21.
Характеристика штамма virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21.
Таксонометрическая принадлежность.
Возбудителем инфекционного ларинготрахеита птиц является ДНК-содержащий вирус, сферической формы, относящийся к семейству герпесвирус, роду герпесвирус, avian
infectious laryngotracheitis virus (ILT). Herpesvirus galli.
Культурально-морфологические признаки.
Вирусные частицы размером 87-97 нм имеют одну внешнюю оболочку толщиной 10 нм
и значительно различаются по структуре нуклеоида. Количество различных форм вирусных
частиц варьируется не только в ядрах, но и в разных участках одного и того же ядра.
Вирус культивируется на ХАО развивающихся эмбрионов кур, уток, индеек и культурах клеток.
Физико-химические свойства вируса.
Вирус чувствителен к липолитическим агентам, теплу и различным дезинфентантам.
Длительно сохраняется в лиофилизированном состоянии или при хранении при минус 20 минус 60 °С (до 19 месяцев). При плюс 55 °С разрушается в течение 10-15 минут, в 1 %-ном
растворе едкого натра и в 3 %-ном растворе крезола инактивируется в течение 30 секунд.
Химический состав не изучен.
Антигенная структура.
На основании общности антигена данный вирус принадлежит к роду герпесвирусов.
Вирус индуцирует образование на ХАО мелко- и крупноочаговые поражения, легко нейтрализуется иммунными сыворотками.
Антигенная активность.
При экспериментальном заражении серонегативной птицы вызывает образование вируснейтрализующих и преципитирующих антител. Вирус репродуцируется в РКЭ. Защитный титр вируснейтрализующих антител 1,8 lg.
Иммуногенность.
Иммуногенность штамма virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 - штаммаантигена составляет 95 %.
Патогенность.
Непатогенен для цыплят в дозе в 10 раз превышающей иммунизирующую.
Биологическая активность вируса.
Определяется вирусологическим исследованием на РЭК 9-11-дневного возраста. Минимальная биологическая активность 106,0 ЭИД50/см3.
Безвредность.
Штамм вируса непатогенен для кур, индеек, фазанов. Кролики, морские свинки и белые крысы резистентны.
Онкогенные свойства не изучены.
Условия хранения.
При пассировании virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 - штамм-антиген
путем заражения цыплят в течение 24 месяцев сохраняет биологическую активность и
иммуногенность в течение 10 лет.
2
BY 15932 C1 2012.06.30
Вирус virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 в лиофильном состоянии сохраняет биологическую активность в течение 10 лет.
Условия консервации.
Лиофильная сушка в защитной среде с температурой 2-4 °С.
Пример 1.
Выделение штамма virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21.
Штамм выделяли путем посева на ХАО эмбрионов кур и культуру клеток СПЭВ. На
ХАО образовывались фокусные поражения 2 типов: крупноузелковые с непрозрачной белой периферией и некротическим центром и мелкоузелковые - без некроза. Узелковые поражения проявлялись на всей поверхности ХАО, а очаговые только на месте инокуляции
штамма вируса. В клетках СПЭВ формировались цитоплазматические включения и образовывались многоядерные клетки. Внутриклеточные включения обнаруживались через
12 часов и наивысшей концентрации достигали через 30-36 часов после заражения. В инфицированных культурах клеток штамм virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21
вызывал образование бляшек.
Пример 2.
Определение биологической активности штамма virus infectious laryngotracheitis avian
КМИЭВ-21.
Биологическую активность штамма virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 штамма-антигена определяли титрованием каждой серии вируссодержащего материала на
9-дневных эмбрионах кур. Титрование проводили следующим образом: брали 9 ампул вируссодержащего материала, из которых составляли 3 пробы (по 3 ампулы в каждой пробе) и
параллельно их титровали. Содержимое трех ампул растворяли в 6 см3 стерильного физиологического раствора, содержащем 2 мг гентамицина в см3. В ряд стерильных пробирок,
количество которых равняется количеству разведений и соответственно обозначенных, вливали физиологический раствор или раствор Хенкса по 9 см3. Из исходного разведения
(1 : 10) переносили 1 см3 в следующую пробирку, причем пипетка не должна касаться жидкости. Использованную пипетку погружали в дезинфицирующий раствор. Другой, чистой
пипеткой смешивали жидкость и переносили вирус в объеме 1 см3 в следующую пробирку
и.т.д. Вирусом каждого разведения заражали по 4 эмбриона 9-дневного возраста на ХАО по
0,2 см3. Овоскопию зараженных эмбрионов проводили в течение 5 суток. Вскрывали все
эмбрионы (погибшие и живые) и отмечали у них наличие на хориоаллантоисной оболочке
изменения, свойственные вирусу ИЛТ. На основании учета поражений хориоаллантоисной
оболочки живых и погибших эмбрионов вычисляли эмбриональную инфекционную дозу
вируса и количество таких доз в 1 см3 сухого вируссодержащего препарата. Вначале вычисляли процент инфекционности, руководствуясь следующим примером титрования вирулентного вируса инфекционного ларинготрахеита на эмбрионах кур.
Результаты определения вируса в зараженных эмбрионах (по наличию изменений, характерных для вируса ИЛТ на хориоаллантоисной оболочке) отмечены в таблице.
Результаты определения вируса в зараженных эмбрионах
Разведение вируса
Исходный материал
-1
-2
-3
10
10
10
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
+
+
+
+
+
+
+
0
Хориоаллантоисная оболочка с изменениями,
+
+
+
+
+
+
+
0
свойственными вирусу
+
+
+
+
+
0
0
0
ИЛТ
+
+
+
0
0
0
0
0
Примечание:
+ - эмбрион, погибший или выживший, у которого хориоаллантоисная оболочка поражена вирусом ИЛТ;
0 - эмбрион, у которого отсутствует поражение хориоаллантоисной оболочки.
3
BY 15932 C1 2012.06.30
Поражение хориоаллантоисной оболочки установлено у всех эмбрионов в разведениях
10 , 10-2, 10-3, в разведениях 10-4 и 10-5 у трех эмбрионов, а в 10-6 и 10-7 у двух эмбрионов.
Таким образом, минимальная биологическая активность 106,0ЭИД50/см3.
Пример 3.
Изучение иммуногенности virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21.
Иммуногенность virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 - штамма-антигена
изучали путем контрольного заражения 20 ранее вакцинированных данным штаммом и
20 контрольных невакцинированных цыплят 35-дневного возраста. Контрольное заражение проводили через 15 дней после иммунизации путем введения в трахею ранее оттитрованного на цыплятах вирулентного штамма "Богатищевский". Наблюдение за зараженной
птицей вели в течение 10 дней. В опытной группе у одного цыпленка проявились клинические признаки заболевания, в контрольной заболели все 20 цыплят.
Иммуногенность составила 95 %.
Таким образом, данный штамм virus infectious laryngotracheitis avian КМИЭВ-21 штамм-антиген, обладая высокой биологической активностью 106,0 ЭИД50/см3 и высокой
иммуногенной активностью (95 %) может быть использован в биологической промышленности для изготовления диагностикумов и вакцин.
-1
Источники информации:
1. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. - М.: ВНИТИБП, 1998. - С. 680-682.
2. Чурин А.И. Моноклональные антитела к антигенам вируса инфекционного ларинготрахеита птиц: получение и использование. - Покров, 2007. - С. 7-9.
3. Заявка РБ а 20051332, 2007 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
87 Кб
Теги
патент, by15932
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа