close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16284

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.08.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 21/59 (2006.01)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 1,3-ДИМЕТИЛКСАНТИНА И 1,3,7ТРИМЕТИЛКСАНТИНА В СМЕСИ БЕЗ ИХ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО
РАЗДЕЛЕНИЯ
(21) Номер заявки: a 20100527
(22) 2010.04.08
(43) 2011.12.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский
университет" (BY)
(72) Авторы: Хейдоров Василий Петрович; Чалый Григорий Юрьевич; Титорович Ольга Валерьевна (BY)
(73) Патентообладатель:
Учреждение
образования "Витебский государственный ордена Дружбы народов
медицинский университет" (BY)
BY 16284 C1 2012.08.30
BY (11) 16284
(13) C1
(19)
(56) ХЕЙДЕРОВ В.П. Материалы второго
всесоюзного съезда фармацевтов. Рига, 1974. - С. 154.
ХЕЙДОРОВ В.П. Применение фенолгипохлоритной реакции для фотоэлектроколориметрического
определения соединений группы пурина: Автореф. диссертации. - Москва,
1971. - С. 5-16.
ХЕЙДОРОВ В.П. и др. // Фармация. 1973. - Т. XXII. - № 6. - С. 85-86.
SINGH D.K. et al. // Analytical Biochemistry. - 2006. - V. 348, is. 2. - P. 176-180.
CHERNYSHEVA N.N. et al. // J. Anal.
Chem. - 2001. - V.56. - No. 7. - P. 663-665.
SU 834470, 1981.
(57)
Способ определения 1,3-диметилксантина и 1,3,7-триметилксантина в смеси без их
предварительного разделения, при котором пробу анализируемой смеси растворяют в воде,
отбирают 2 порции приготовленного раствора, в первую порцию добавляют буфер бураHCl с pH = 8,2, обрабатывают сначала гипохлоритом натрия в течение 2 минут при 20 °С,
а затем фенолом при 50-60 °С, определяют оптическую плотность полученного окрашенного раствора фотометрированием при 630 нм, причем в качестве раствора сравнения используют раствор смеси реактивов без определяемых веществ, и по градуировочному
графику определяют содержание 1,3-диметилксантина в анализируемой смеси, во вторую
порцию добавляют буфер бура-HCl с pH = 8,2, обрабатывают сначала гипохлоритом
натрия в течение 70 минут при 23 °С, а затем фенолом при 50-60 °С, определяют оптическую плотность полученного окрашенного раствора фотометрированием при 630 нм, при
этом в качестве раствора сравнения используют раствор смеси реактивов с добавкой 1,3диметилксантина в количестве, определенном при анализе первой порции, и по градуировочному графику определяют содержание 1,3,7-триметилксантина в анализируемой смеси.
Изобретение относится к аналитической химии органических соединений, а именно к
способам определения 1,3-диметилксантина и 1,3,7-триметилксантина при их совместном
присутствии в смеси, и может быть использовано в химико-фармацевтическом анализе
для их количественного определения в лекарственных средствах.
BY 16284 C1 2012.08.30
Кофеин (1,3,7-триметилксантин) и теофиллин (1,3-диметилксантин) имеют очень
близкое химическое строение, являются структурными аналогами, относятся к важным
биологически активным веществам производных пурина, имеют широкий спектр фармакологической активности, входят в состав многих лекарственных средств, в том числе
многокомпонентных.
Для количественного определения 1,3,7-триметилксантина и 1,3-диметилксантина в
литературе описаны различные методы: кислотно-основное титрование, спектральные,
хроматографические и другие. ГФ СССР X рекомендует определять:
1,3,7-триметилксантина (около 0,15 г (точная навеска) предварительно высушенного
при 80 °С до постоянного веса препарата) путем растворения в среде уксусного ангидрида
при нагревании на водяной бане, прибавления бензола, нескольких капель кристаллического фиолетового и титрования 0,1 М раствором хлорной кислоты до получения желтого
окрашивания (параллельно проводят контрольный опыт) [1].
1,3-диметилксантина (около 0,4 г (точная навеска) предварительно высушенного препарата) растворяют в 100 мл кипящей воды (предварительно прокипяченной в течение
5 минут). К охлажденному раствору прибавляют раствор нитрата серебра, раствор фенолового красного и титруют 0,1 М раствором едкого натра до появления фиолетовокрасного окрашивания [1].
По Европейской Фармакопее и по ГФ РБ 1,3,7-триметилксантин (навеску 0,170 г одной пробы) растворяют в неводной среде (уксусный ангидрид), титруют 0,1 М раствором
хлорной кислоты, конец титрования определяют потенциометрически. 1,3-диметилксантин (навеску 0,150 г одной пробы) определяют методом косвенной нейтрализации. К исследуемому раствору добавляют избыток 0,1 М раствора серебра нитрата, выделившуюся
кислоту HNO3 оттитровывают 0,1 М раствором натрия гидроксида [2-3].
Описанные методы применяются для определения 1,3,7-триметилксантина и 1,3диметилксантина в индивидуальном виде (субстанции), однокомпонентных лекарственных формах (таблетках, растворах, инъекционных растворах). В сложных смесях и при
совместном присутствии 1,3,7-триметилксантина и 1,3-диметилксантина эти методы могут быть использованы лишь после кропотливой и сложной предварительной работы по
выполнению многостадийных процедур их разделения и выделения в свободном виде путем экстракции отдельных компонентов, фильтрования экстракта, отгонки растворителя,
отделения остатка, его растворения и последующим определением компонента соответствующим приемлемым методом. К тому же такие процедуры сильно снижают точность и
чувствительность определения ингредиентов и трудоемки.
Известен фотометрический метод количественного определения 1,3-диметилксантина
на основе цветной реакции [4]. Однако таким способом можно определять только 1,3диметилксантин в смесях, 1,3,7-триметилксантин таким способом не дает цветную реакцию и не может быть определен.
Предложен фотометрический способ количественного определения 1,3-диметилксантина на основе цветной реакции [5]. Данный способ [5] также не позволяет определить
1,3,7-триметилксантин в присутствии 1,3-диметилксантина.
Целью настоящего изобретения является разработка простого, доступного в исполнении, высокочувствительного и экономичного способа определения 1,3,7-триметилксантина и 1,3-диметилксантина при их совместном присутствии в смесях без предварительного разделения.
Реализация данной задачи достигается тем, что цветная реакция образования окрашенных продуктов из 1,3,7-триметилксантина и 1,3-диметилксантина происходит в одной
реакционной среде (одинаковый состав реагентов и pH среды), но в разном кинетическом
режиме. Способ обладает высокой селективностью, позволяет определять указанные вещества в смесях, определению 1,3-диметилксантина не мешает присутствие структурного
аналога 1,3,7-триметилксантина в анализируемой пробе, 1,3,7-триметилксантин также
можно определять в анализируемой пробе без отделения 1,3-диметилксантина.
2
BY 16284 C1 2012.08.30
Способ осуществляют таким образом, что определение ведут в двух пробирках, содержащих смесь 20,0-140,0 мкг 1,3-диметилксантина и 20,0-212,2 мкг 1,3,7-триметилксантина, путем добавления в каждую пробирку 1 мл 1 %-ного раствора натрия гипохлорита в
присутствии буферного раствора с pH 8,2 и прибавления после определенного промежутка времени 1 мл 6 %-ного раствора фенола с последующим нагреванием реакционной
смеси в пробирках и фотометрированием полученных растворов.
Описание способа.
Пример 1
Определение 1,3-диметилксантина (ДМКС). Отбирают 1,0 мл приготовленного раствора ДМКС (с содержанием вещества около 60 мкг), помещают в пробирку, добавляют
5,0 мл буферного раствора бура-HCl (pH = 8,2), воды очищенной до 8,0 мл. Затем в пробирку быстро добавляют 1,0 мл 1 %-го раствора гипохлорита натрия, перемешивают и
термостатируют реакционную смесь при температуре 20 °С. Через 2 минуты (за временем
следят по секундомеру) в пробирку быстро приливают 1,0 мл 6 %-ного раствора фенола.
Содержимое пробирки хорошо перемешивают и помещают в водяную баню (t = 55 ± 5 °С)
на 20 мин. Затем пробирку со смесью охлаждают и измеряют оптическую плотность полученного окрашенного раствора при длине волны 630 нм. Раствором сравнения служит
смесь реактивов без определяемых веществ. По величине оптической плотности окрашенного раствора находят содержание ДМКС в исследуемом растворе из градуировочного
графика для ДМКС или по формуле:
D × C ст
Cx = x
,
D ст
где Cx - содержание ДМКС в анализируемой пробе, мкг;
Dx - оптическая плотность анализируемой пробы;
Dст - оптическая плотность стандартного раствора;
Сст - содержание ДМКС (мкг) в пробе стандартного раствора.
Стандартный раствор ДМКС готовят путем растворения 10 мг ДМКС в очищенной
воде в мерной колбе на 50 мл. Определенные объемы стандартного раствора в пределах
0,1-0,7 мл переносят в пробирки, а далее поступают, как описано выше.
Результаты анализа приведены в табл. 1, из которой видно, что определению ДМКС
не мешает присутствие 1,3,7-триметилксантина (ТМКС) в анализируемой пробе с относительной погрешностью 0,62 %.
Таблица 1
Метрологические характеристики определения ДМКС
без добавления и с добавлением ТМКС
Взято
ДМКС,
мкг/10мл
30
-//-//-//-//-//60
-//-//-//-//-//-
Добавлено
ТМКС,
мкг/10мл
-//-//-//-//-//-//-//-//-//-//-
Найдено
ДМКС,
мкг/10мл
30,25
29,75
30,19
29,80
30,12
29,85
60,13
60,27
59,48
59,74
60,17
59,87
Метрологические характеристики
X
S2
S
Sx
ε 0,95
29,99
0,04755
0,2181
0,0890
0,77
59,94
0,09087
0,3014
0,1210
0,53
3
BY 16284 C1 2012.08.30
Продолжение табл. 1
Взято
ДМКС,
мкг/10мл
90
-//-//-//-//-//60
-//-//-//-//-//-
Добавлено
ТМКС,
мкг/10мл
-//-//-//-//-//50
-//100
-//150
-//-
Найдено
ДМКС,
мкг/10мл
89,83
89,53
90,27
89,90
90,25
90,33
60,52
59,73
60,05
59,92
60,32
59,57
Метрологические характеристики
X
S2
S
Sx
ε 0,95
90,02
0,10042
0,3169
0,1294
0,37
60,02
0,1275
0,3571
0,1458
0,62
Примечание:
X - средний результат определения;
S2 - дисперсия (сходимость);
S - стандартное отклонение (воспроизводимость);
Sx - стандартное отклонение среднего результата определения;
ε 0,95 - точность определения.
Пример 2
Определение ТМКС. Отбирают 1,0 мл приготовленного раствора ТМКС (с содержанием вещества около 80 мкг), помещают в пробирку, добавляют 5,0 мл буферного раствора бура-HCl (pH = 8,2), воды очищенной до 8,0 мл. Затем в пробирку быстро добавляют
1,0 мл 1 %-ного раствора гипохлорита натрия, перемешивают и термостатируют реакционную смесь при температуре 23 °С. Через 70 минут (за временем следят по секундомеру)
в пробирку быстро приливают 1,0 мл 6 %-ного раствора фенола. Содержимое пробирки
хорошо перемешивают и помещают в водяную баню (t = 55 ± 5 °С) на 20 мин. Затем пробирку со смесью охлаждают и измеряют оптическую плотность полученного окрашенного
раствора при длине волны 630 нм. Раствором сравнения служит смесь реактивов без определяемых веществ. По величине оптической плотности окрашенного раствора находят содержание ТМКС в исследуемом растворе из градуировочного графика для ТМКС или по
формуле:
D × C ст
,
Cx = x
D ст
где Cx - содержание ТМКС в анализируемой пробе, мкг;
Dx - оптическая плотность анализируемой пробы;
Dст - оптическая плотность стандартного раствора;
Сст - содержание ТМКС (мкг) в пробе стандартного раствора.
Стандартный раствор ТМКС готовят путем растворения 10 мг ТМКС в очищенной воде в мерной колбе на 50 мл. Определенные объемы стандартного раствора в пределах 0,11,0 мл переносят в пробирки, а далее поступают, как описано выше.
Результаты количественного определения ТМКС приведены в табл. 2. Относительная
погрешность анализа находится в пределах 1,66 %.
4
BY 16284 C1 2012.08.30
Таблица 2
Метрологическая оценка количественного определения ТМКС
в отсутствии и в присутствии ДМКС
Взято
Добавлено Найдено
Метрологические характеристики
ТМКС,
ДМКС,
ТМКС,
S2
S
Sx
X
мкг/10 мл мкг/10 мл мкг/10 мл
50
49,45
49,94
0,0965
0,3106
0,1268
-//-//50,18
-//-//50,32
-//-//49,76
-//-//49,90
-//-//50,02
80
80,51
80,06
0,1464
0,3826
0,1562
-//-//79,86
-//-//80,32
-//-//80,17
-//-//79,42
-//-//80,07
150
149,23
149,99
0,4829
0,6949
0,2837
-//-//150,85
-//-//150,09
-//-//149,35
-//-//149,65
-//-//150,74
80
40
80,87
80,01
1,6113
1,2694
0,5182
-//-//79,23
-//80
78,91
-//-//81,08
-//120
81,45
-//-//78,50
ε 0,95
0,66
0,51
0,49
1,66
Примечание:
X - средний результат определения;
S2 - дисперсия (сходимость);
S - стандартное отклонение (воспроизводимость);
Sx - стандартное отклонение среднего результата определения;
ε 0,95 - точность определения.
Пример 3
Проводят анализ лекарственной смеси, состоящей из 0,1 г ТМКС и 0,1 г ДМКС. Для
этого около 20 мг порошка смеси растворяют в мерной колбе емкостью 100 мл в воде и
доводят объем раствора очищенной водой до метки. Полученный раствор используют для
количественного определения ТМКС и ДМКС. Для этого отмеривают из полученного раствора 1,0 мл и определяют ДМКС, а именно переносят в пробирку, добавляют 5,0 мл буферного раствора бура-HCl (pH= 8,2), воды очищенной до 8,0 мл. Затем в пробирку
быстро добавляют 1,0 мл 1 %-ного раствора гипохлорита натрия, перемешивают и термостатируют реакционную смесь при температуре 20 °С. Через 2 минуты (за временем следят по секундомеру) в пробирку быстро приливают 1,0 мл 6 %-ного раствора фенола.
Содержимое пробирки хорошо перемешивают и помещают в водяную баню (t = 55±5 °С)
на 20 мин. Затем пробирку со смесью охлаждают и измеряют оптическую плотность полученного окрашенного раствора при длине волны 630 нм. Раствором сравнения служит
5
BY 16284 C1 2012.08.30
смесь реактивов без определяемых веществ. По величине оптической плотности окрашенного раствора находят содержание ДМКС в исследуемом растворе из градуировочного
графика для ДМКС.
Для определения ТМКС отбирают 1,0 мл приготовленного раствора смеси и помещают
в первую пробирку. Во вторую пробирку приливают стандартный раствор ДМКС с таким
его содержанием, которое только что определили. Далее с обеими пробирками поступают,
как было описано в примере 2 при определении ТМКС, а именно:
в каждую пробирку добавляют по 5,0 мл буферного раствора бура-HCl (pH = 8,2), воды очищенной до 8,0 мл. Затем быстро добавляют по 1,0 мл 1 %-ного раствора гипохлорита натрия, перемешивают и термостатируют реакционную смесь при температуре 23 °С.
Через 70 минут (за временем следят по секундомеру) в пробирки быстро приливают 1,0 мл
6 %-ного раствора фенола. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и помещают в
водяную баню (t = 55 ± 5 °С) на 20 мин. После водяной бани пробирки со смесью охлаждают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора первой пробирки при
длине волны 630 нм. Раствором сравнения служит содержимое второй пробирки. По величине оптической плотности окрашенного раствора находят содержание ТМКС в исследуемом растворе из градуировочного графика для ТМКС или по формуле:
D × C ст
Cx = x
,
D ст
где Cx - содержание ТМКС в анализируемой пробе, мкг;
Dx - оптическая плотность анализируемой пробы;
Dст - оптическая плотность стандартного раствора;
Сст - содержание ТМКС (мкг) в пробе стандартного раствора.
В табл. 3 приведены результаты определения ТМКС и ДМКС в лекарственной смеси
предлагаемым способом и статистическая обработка полученных результатов.
Метрологическая характиристика указывает на хорошую воспроизводимость и точность определения ТМКС и ДМКС предлагаемым способом.
Таблица 3
Метрологическая оценка анализа лекарственной смеси,
состоящей из 100 мг ТМКС и 100 мг ДМКС
Вещество
Взято,
Найдено,
Метрологические характеристики
ε 0,95
мг
мг
S2
S
Sx
X
ДМКС
100
ТМКС
100
100,43
100,65
101,08
99,78
100,86
99,35
97,76
99,55
100,00
102,22
101,31
99,10
100,36
0,4428
0,6654
0,2716
0,70
99,99
2,535
1,592
0,6499
1,67
Примечание:
X - средний результат определения;
S2 - дисперсия (сходимость);
S - стандартное отклонение (воспроизводимость);
Sx - стандартное отклонение среднего результата определения;
ε 0,95 - точность определения.
6
BY 16284 C1 2012.08.30
Положительные эффекты.
Предлагаемый способ имеет высокую чувствительность, открываемый минимум составляет 0,38 и 0,48 мкг/мл для 1,3-диметилксантина и 1,3,7-триметилксантина соответственно.
Способ имеет высокую экономичность в расходовании анализируемого препарата 0,4-4 мкг (в 10 мл анализируемой пробы).
Подчинение основному закону светопоглощения наблюдается в интервале концентраций 20,0-140,0 мкг и 20,0-212,2 мкг для 1,3-диметилксантина и 1,3,7-триметилксантина
соответственно.
Способ позволяет проводить серийные анализы.
Способ основан на цветной реакции и может быть использован в заводских химических
лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях фармацевтического профиля.
Источники информации:
1. Государственная Фармакопея СССР / М-во здравоохранения СССР. 10-е изд. - М.:
Медицина, 1968. - 1080 с.
2. European Pharmacopoeia, 2006.
3. Государственная Фармакопея Республики Беларусь. В 3-х т. Т.3. Контроль качества
фармацевтических субстанций / М-во здравоохранения РБ, УП "Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении"/ Под общ. ред. А.А.Шерякова. - Молодечно, 2009. - 728 с.
4. А.с. СССР 1144038, МПК3 G 01N 21/78. 07.03.85 // Бюл. № 9. Способ определения
1,3-диметилксантина / В.П.Хейдоров, Л.И.Свиридова.
5. Хейдоров В.П. Материалы второго всесоюзного съезда фармацевтов. - Рига, 1974. С. 154.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
7
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
128 Кб
Теги
by16284, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа