close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16397

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 16397
(13) C1
(19)
C 12N 5/079
(2010.01)
СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ
КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ
В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ
(21) Номер заявки: a 20091124
(22) 2009.07.24
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия. - 2008. Т. 54. Вып. 2. С. 192-200.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. Достижения
медицинской науки Беларуси. Вып. VII,
2002. - С. 49-50.
РОМАНОВСКАЯ А.А. и др. Доклады
Национальной академии наук Беларуси. - 2007. - Т. 51. - № 2. - С. 57-60.
BY 16397 C1 2012.10.30
(57)
Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде, представляющей собой питательную среду DMEM с
2 % NaCl, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую
стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, и позволяет осуществить протекцию указанных культур от развития дегидратации при содержании их в гипертонической
синтетической питательной среде DMEM.
Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной или
перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде,
представляющей собой питательную среду DMEM с 2 % NaCl, заключающийся в том, что
используют гипертоническую питательную среду, содержащую стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл.
BY 16397 C1 2012.10.30
Стрептокиназа - протеин молекулярной массой 47-55 кДа - синтезируется
β-гемолитическими стрептококками серологических групп A, C и G и является одним из
наиболее эффективных активаторов плазминоген человека и отдельных видов животных,
однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности [1]. Роль
стрептокиназы остается неясной. В настоящее время установлено, что стрептокиназа обладает супероксидконвергирующей способностью. Связь супероксидконвергирующей
способности SK с ее плазминогенактиваторной функцией представляется весьма вероятной, учитывая полное подавление последней перехватчиками супероксидного радикала
[1].
Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет осуществить протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития осмотического сжатия (дегидратации) при содержании их в гипертонический питательной среде.
Пример 1.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью (2,03,0)×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого натрия (2 % NaCl) и стрептокиназы 200 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в
такой же синтетической питательной среде, содержащей 2 % NaCl.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием
стрептокиназы (1000 МЕ/мл) и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел,
так и их отростков.
Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Пример 2.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому
и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (2,5-3,0)×104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла
и культивируют их до получения монослоя. В опытные культуры вносят NaCl (2 %) и
стрептокиназу (1000 МЕ/мл). В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 2 % NaCl.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (23 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием
стрептокиназы (1000 МЕ/мл) и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраня2
BY 16397 C1 2012.10.30
ет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел,
так и их отростков.
Пример 3.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью (2,03,0)×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого натрия (2 % NaCl) и стрептокиназы 20 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в
такой же синтетической питательной среде, содержащей 2 % NaCl.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
Внесение в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием стрептокиназы (20 МЕ/мл) при экспозиции в течение 4 суток обеспечивает сохранение монослоя
культуры (имеются лишь единичные свободные зоны), сохранение клетками округлой
формы и контактирующих между собой отростков.
Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Пример 4.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью (2,03,0)×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM с добавлением хлористого натрия (2 % NaCl) и стрептокиназы 2000 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в
такой же синтетической питательной среде, содержащей 2 % NaCl.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток.
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) в хорошо развитой
монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
Внесение в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием стрептокиназы (2000 МЕ/мл) и экспозиция в течение 4 суток монослоя культуры обеспечивают
сохранение первоначальной архитектоники, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков.
Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной
3
BY 16397 C1 2012.10.30
ткани от развития дегидратации при их содержании в гипертонической синтетической питательной среде.
Источники информации:
1. Никандров В.Н., Пыжова Н.С. Регуляторные белки: функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия // Весцi НАН Беларусi Сер. мед.-бiял.
навук. - 2003. - № 3. - С. 75-89.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
76 Кб
Теги
by16397, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа