close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16400

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 5/079
(2010.01)
СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ
КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ
В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ
(21) Номер заявки: a 20091251
(22) 2009.08.20
(43) 2011.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
BY 16400 C1 2012.10.30
BY (11) 16400
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Механизмы
функционирования висцеральных систем. IV Всероссийская конференция с
международным участием. Тезисы докладов. - Санкт-Петербург, 2005. С. 174-175.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. Достижения
медицинской науки Беларуси, 2002.
Вып. VII. - С.49-50.
ЖУК В.М. и др. Весцi Акадэмii навук
БССР. Серыя бiялагiчных навук. 1986. - № 1. - С.56-60.
(57)
Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде, представляющей собой питательную среду DMEM с
2 % NaCl, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую
плазминоген в концентрации 10-7-10-5 М.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани.
Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической
питательной среде.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной или
перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной среде, представляющей собой питательную среду DMEM с 2 % NaCl, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую плазминоген в
концентрации 10-7-10-5 М.
BY 16400 C1 2012.10.30
Плазминоген представляет собой гликопротеин массой 85 кДа. Наиболее известна его
функция в процессе фибринолиза. Плазминоген также обнаружен в нервной ткани, где
показан его синтез клетками микроглии [1]. Введение его в питательную среду позволяет
ускорить формирование зоны роста органотипической культуры нервной ткани [2].
Введение плазминогена (10-7-10-5 М) позволяет защищать первичные и перевиваемые
культуры клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде.
Пример 1.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью (2,03,0)×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM до формирования хорошо развитого монослоя (7 суток),
затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2 % NaCl) и плазминогена в концентрации 10-6 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В качестве контроля
используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2 % NaCl) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток [2].
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием плазминогена 10-6 М и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их
отростков.
Полученные результаты свидетельствуют, что плазминоген способен влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Пример 2.
Первичная культура клеток нервной ткани.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и
ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (3,0-4,0)×104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла и
культивируют их в синтетической питательной среде DMEM до образования хорошо развитого монослоя (7 суток). Затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2 % NaCl) и плазминогена в концентрации 10-6 М с последующей инкубацией в
атмосфере с 5 %-ным содержанием СO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В
качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2 % NaCl) синтетическую питательную среду без добавления
плазминогена.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток [2].
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (22 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
2
BY 16400 C1 2012.10.30
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются "кружева".
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием плазминогена 10-6 М и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их
отростков.
Пример 3.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6) плотностью (2,03,0)×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM до формирования хорошо развитого монослоя (7 суток),
затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2 % NaCl) и плазминогена в концентрации 10-7 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В качестве контроля
используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2 % NaCl) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 48 ч культивирования и учитывают количество клеток [2].
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (18 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 48 ч на месте
равномерного монослоя наблюдаются "кружева". Площадь клеток уменьшается на 44 %.
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием плазминогена 10-7 М и экспозиции в течение 48 ч монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их
отростков, площадь клеток уменьшается на 18 %.
Пример 4.
Первичная культура клеток нервной ткани.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и
ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (3,0-4,0)×104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла и
культивируют их в синтетической питательной среде DMEM до образования хорошо развитого монослоя (7 суток). Затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2 % NaCl) и плазминогена в концентрации 10-5 М с последующей инкубацией в
атмосфере с 5 %-ным содержанием СO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В
качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2 % NaCl) синтетическую питательную среду без добавления
плазминогена.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 48 ч культивирования и учитывают количество клеток [2].
Внесение в синтетическую питательную среду DMEM NaCl (2 %) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (22 %) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся
вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между со3
BY 16400 C1 2012.10.30
бою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 48 ч на месте
равномерного монослоя наблюдаются "кружева". Площадь клеток уменьшается на 40 %.
При внесении в питательную среду DMEM одновременно с хлористым натрием плазминогена 10-5 М и экспозиции в течение 48 ч монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их
отростков, площадь клеток уменьшается на 2 %.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что плазминоген способен влиять на
процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 %) раствором
хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки.
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет защитить первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и
медицине.
Источники информации:
1. Nakajiama K., Tsuzaki K., Nagata K., Takemoto N., Kohsacka S. Production and secretion of plasminogen in cultuted rat brain microglia // FEBS Lett. - 1992. - Vol. 308. - P. 179-182.
2. Патент РБ 8301, МПК7 C 12N 5/06, 2003.
3. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических
нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора
и гуанетидина // Весцi АН БССР. Сер. бiял. навук. - 1986. - № 1. - С. 56-60.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
79 Кб
Теги
by16400, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа