close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16449

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.10.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 16449
(13) C1
(19)
C 12N 1/20
A 61K 35/74
A 23C 9/12
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ BIFIDOBACTERIUM
ADOLESCENTIS, УСТОЙЧИВЫЙ К НИЗКИМ ЗНАЧЕНИЯМ pH,
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА
ИЛИ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА
(21) Номер заявки: a 20101241
(22) 2010.08.20
(43) 2012.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт микробиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Сидоренко Анастасия Вячеславовна; Новик Галина Ивановна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт
микробиологии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) SU 863639, 1981.
RU 2261908 C1, 2005.
RU 2260042 C2, 2005.
ЩЕТКО В.А. Бактериоцины Bifidobacterium adolescentis MC-42 и Bifidobacterium bifidum 791: биосинтез и свойства. Автореферат диссертации. Минск, 2007. - С. 3-7, 14-16.
НОВИК Г.И. и др. Микробные биотехнологии: фундаментальные и прикладные аспекты: Сб. научн. трудов.
Т. 1. - Минск, 2007. - С. 305-313.
COLLADO M.C. et al. J Appl Microbiol. 2007. - V. 103. - No. 4. - P. 1147-1157.
BY 16449 C1 2012.10.30
(57)
Штамм бифидобактерий Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д, устойчивый к низким
значениям pH, для получения пробиотического препарата или кисломолочного продукта.
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой
штамм бифидобактерий Bifidobacterium adolescentis, устойчивый к низким значениям pH,
для получения пробиотического препарата или кисломолочного продукта.
Бактерии рода Bifidobacterium являются основой моно- и поликомпонентных пробиотических препаратов и продуктов функционального питания, предназначенных для
лечения и профилактики дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ),
стимуляции иммунной системы, нормализации обмена веществ [1, 2, 3]. Данные многочисленных исследований свидетельствуют, что позитивное действие на организм человека
оказывают жизнеспособные, метаболически активные штаммы Bifidobacterium, а эффективность бифидосодержащих пробиотиков и продуктов питания зависит от содержащегося в них количества жизнеспособных клеток бифидобактерий [1, 3, 4, 5].
Бактерии рода Bifidobacterium в процессе жизнедеятельности образуют органические
кислоты, что приводит к постепенному снижению pH среды и ингибированию развития
самих микроорганизмов. Кроме того, высокая кислотность среды, возникающая в результате накопления в ней конечных продуктов метаболизма (молочной и уксусной кислот),
является причиной быстрой потери жизнеспособности бифидобактерий при хранении. Согласно литературным данным, титр клеток бифидобактерий в течение 1-2 недель хранения
BY 16449 C1 2012.10.30
в питательной среде при +4 °С может снижаться на несколько порядков [1, 2, 5, 6]. Одним
из способов повышения жизнеспособности бифидобактерий в процессе хранения является
коррекция активной кислотности среды до pH 7,0 10 % раствором соды. Однако нейтрализация среды 10 % раствором NaHCO3 - трудоемкий процесс, повышающий вероятность
контаминации культуры. Низкие значения pH ферментированных молочных продуктов основная причина быстрого снижения титра жизнеспособных клеток бифидобактерий,
входящих в их состав, даже при соблюдении условий и сроков хранения [1, 5, 7, 8]. Высокая кислотность желудочного сока (кислотный стресс) является наиболее повреждающим
фактором ЖКТ, приводящим к существенной потере жизнеспособности пробиотических
штаммов Bifidobacterium [1, 4, 9, 10]. Учитывая вышеизложенное, важным свойством
производственных штаммов бифидобактерий является устойчивость к низким значениям
pH (кислотоустойчивость) [1, 4, 10]. Поскольку бифидобактерии, выделенные из природных источников, чувствительны к низким значениям pH, перспективным направлением
является улучшение биотехнологически ценных свойств изолированных и поддерживаемых в коллекциях штаммов путем их целенаправленной селекции по признаку кислотоустойчивости [5, 11].
Известны штаммы бифидобактерий Bifidobacterium bifidum № 1 [12] и Bifidobacterium
bifidum 791 [13], которые используются для производства пробиотических препаратов и
кисломолочных продуктов. Недостатками этих штаммов являются низкая протеолитическая активность, медленное развитие в молоке без ростовых факторов, высокая чувствительность к стрессовым факторам (низкие значения pH, доступ кислорода). Медленное
развитие в молоке затрудняет использование вышеназванных культур в качестве основы
кисломолочных продуктов. Низкая устойчивость к неблагоприятным внешним факторам
приводит к значительной потере жизнеспособности и биологической активности бифидобактерий в процессе хранения пробиотиков и продуктов питания, а также при прохождении через желудочно-кишечный тракт.
Наиболее близким из аналогов заявляемого изобретения является штамм Bifidobacterium adolescentis MC-42 [14] (прототип), используемый при производстве фармакопейного
пробиотического препарата "Бифидин" и ряда кисломолочных продуктов. Штамм
Bifidobacterium adolescentis MC-42 характеризуется высокой антагонистической активностью, устойчивостью к терапевтическим дозам антибиотиков, используемых в медицинской практике, активным ростом и кислотообразованием в молоке и питательных средах.
Недостатками данного штамма являются чувствительность к кислотному стрессу и действию низких значений pH при хранении в сквашенном молоке и питательных средах без
нейтрализации. Низкая кислотоустойчивость Bifidobacterium adolescentis MC-42 снижает
позитивное действие пробиотиков и продуктов питания, созданных на основе этой культуры, а также затрудняет использование штамма при производстве пробиотиков и продуктов питания с длительным сроком хранения.
Целью изобретения является получение нового штамма бифидобактерий Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д, устойчивого к низким значениям pH желудочного сока,
сохраняющего жизнеспособность при хранении в сквашенном молоке и питательных средах без нейтрализации, способного развиваться при низких значениях pH среды культивирования.
Для получения штамма Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д была проведена селекция музейного штамма Bifidobacterium adolescentis MC-42. Селекция проводилась без
использования мутагенных факторов и генно-инженерных методов посредством длительной адаптации штамма к низким значениям pH среды культивирования с последующим
отбором клонов, устойчивых к кислотному стрессу. Для культивирования бифидобактерий использовали среду де Мана [15] с L-цистеин-гидрохлоридом (МРС-Б) (г/л: пептон - 10,0; мясной экстракт - 10,0; дрожжевой экстракт - 5,0; лактоза - 10,0; глюкоза -10,0;
K2HPO4 - 2,0; аммоний лимоннокислый - 2,0; натрий уксуснокислый - 5,0; MgSO4×7H2O - 0,4;
2
BY 16449 C1 2012.10.30
MnSO4×5H2O - 0,08; L-цистеин-HCl - 0,5; твин-80 - 1,0; агар - 1,0). Бактерии выращивали
при температуре 37±1 °С в течение 18-24 ч. Начинали адаптацию культивированием
бифидобактерий при pH 5,5, постепенно снижая значение pH среды культивирования на
0,2-0,3 единицы до pH 4,0 с регулярной проверкой устойчивости бифидобактерий к кислотному стрессу. Кислотный стресс моделировали путем инкубации бифидобактерий в
0,5 % NaCl, pH 2,0, при 37 °С в течение 120-180 мин [9]. Адаптацию проводили в течение
6 месяцев при периодичности пересевов 1-2 раза в неделю (в зависимости от показателей
накопления биомассы и титра клеток).
В результате селекции получен новый кислотоустойчивый штамм бифидобактерий
Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д, сохраняющий исходный титр жизнеспособных
клеток в течение 180 мин инкубации при pH 2,0 в течение 24 суток хранения при +4 °С в
сквашенном молоке и 72 суток хранения в питательной среде без нейтрализации, способный к росту при низких значениях pH среды культивирования. Приобретенные признаки
сохранялись при поддержании штамма на питательной среде МРС-Б (pH 5,0) при длительном (более 24 месяцев) хранении.
Заявляемый штамм депонирован в Белорусской коллекции непатогенных микроорганизмов (Научная коллекция типовых и промышленно-ценных непатогенных микроорганизмов Института микробиологии НАН Беларуси).
Таксономическая принадлежность. Штамм был идентифицирован как Bifidobacterium
adolescentis по совокупности морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков.
Культурально-морфологические признаки. При посеве в полужидкие (0,2 % агара)
среды штамм образует белые колонии в виде гречишных зерен или гвоздиков диаметром
1-3 мм. При глубинном культивировании в жидких питательных средах отмечается рост
по всей толщине столбика среды за исключением зоны аэробиоза (∼0,5 см). Клетки
Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д представляют собой грамположительные прямые палочки с утолщениями на концах, неспорообразующие, неподвижные. Расположение клеток в мазке парное, V- или Y-образное, реже одиночное.
Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Каталазу не образует,
желатин не разжижает, нитраты не восстанавливает. Ферментирует глюкозу, лактозу, галактозу, ксилозу, маннозу, мальтозу, целлобиозу, арабинозу (медленно). Сахарозу, манних, сорбит не утилизирует. Глюкозу ферментирует с образованием молочной и уксусной
кислот, без продукции газа. Пигмент не образует. Оптимальная температура роста 37±1 °С, оптимум pH - 5,0±0,2.
Развитие периодической культуры Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д в среде
МРС-Б характеризуется непродолжительной лаг-фазой (~3 ч) и длительной стадией экспоненциального роста (∼12-15 ч). Максимальный титр клеток (4-8×109 КОЕ/мл), показатели накопления биомассы (ОП600 2,504-2,534) и активной кислотности (pH 4,15±0,15)
регистрируются через 24 часа культивирования. При хранении в питательной среде без
нейтрализации (+4 °С) титр жизнеспособных клеток Bifidobacterium adolescentis БИМ
В-462-Д достоверно не изменяется в течение 5 недель, после чего снижается на порядок.
Для сравнения, титр жизнеспособных клеток штамма-прототипа снижается на два порядка
(с 2-3×109 КОЕ/мл до 1-2×107 КОЕ/мл) в течение 35 суток хранения.
При внесении 5 об. % инокулята штамм сквашивает стерильное обезжиренное молоко
через 10-12 ч культивирования с образованием нежного однородного сгустка без отделения сыворотки. Титр клеток и показатель активной кислотности на момент образования
сгустка составляют 1-3×108 КОЕ/мл и pH 4,0±0,2 соответственно. При хранении в сквашенном молоке (+4 °С) титр жизнеспособных клеток Bifidobacterium adolescentis БИМ
В-462-Д достоверно не изменяется в течение 24 суток, в то время как количество жизнеспособных клеток штамма-прототипа снижается более чем на три порядка (с 2-3×109 КОЕ/мл
до 7-9×104 КОЕ/мл).
3
BY 16449 C1 2012.10.30
Заявляемый штамм характеризуется высоким уровнем продукции внеклеточных протеолитических ферментов - 216,2±6.1 ед/мл. Активность ассоциированной с клеткой
В-галактозидазы варьируется от 0,265±0,021 ед/мл (при выращивании в среде с глюкозой)
до 0,472±0,027 ед/мл (при выращивании в среде с лактозой).
Штамм Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д характеризуется более высокими, по
сравнению со штаммом-прототипом, коэффициентами гидрофобности и способности клеток к аутоагрегации (табл. 1).
Таблица 1
Характеристика гидрофобности и способности
к аутоагрегации клеток бифидобактерий
Штамм
H, %
A, %
0ч
1ч
2ч
3ч
В. adolescentis БИМ В-462-Д
37,7±3,3
0
5,5±0,5 7,4±0,2 14,4±0,9
В. adolescentis MC-42
24,9±3,9
0
3,0±1,0 6,1±0,6 7,6±1,2
Примечание: H (%) - коэффициент гидрофобности поверхности клетки;
A (%) - коэффициент, характеризующий способность клеток к аутоаггрегации.
Молекулярно-биологические признаки. Штамм не содержит экстрахромосомной (плазмидной) ДНК.
Маркерными признаками, отличающими штамм Bifidobacterium adolescentis БИМ
В-462-Д от штамма-прототипа Bifidobacterium adolescentis MC-42, являются:
способность к росту при низких значениях pH питательной среды (оптимум pH
5,0±0,2, для штамма-прототипа - 7,0±0,2);
способность сохранять высокий титр жизнеспособных клеток при хранении (+4 °С) в
сквашенном молоке и питательной среде без нейтрализации в течение 24 и 72 суток соответственно;
устойчивость к кислотному стрессу.
Биотехнологическая характеристика. Технологичность заявляемого штамма обусловлена его способностью расти при низких значениях pH среды культивирования (фигура), в
течение длительного времени сохранять жизнеспособность при хранении в сквашенном
молоке и питательных средах без нейтрализации, высокой устойчивостью к кислотному и
тепловому стрессам (табл. 2).
Таблица 2
Устойчивость бифидобактерий к кислотному и тепловому стрессам
Штамм / титр клеток, КОЕ/мл
В. adolescentis БИМ В-462-Д
В. adolescentis MC-42
pH 2,0
65 °С
0 мин
180 мин
0 мин
15 мин
9
8
9
1,5±1,0×10 6,3±2,3×10 1,5±1,0×10 4,8±3,6×108
1,3±1,0×109 5,7±2,5×105 1,3±1,0×10у 4,4±2,4×106
Как видно из данных, представленных на фигуре, показатели накопления биомассы и
титра жизнеспособных клеток, полученные при культивировании B. adolescentis БИМ
В-462-Д в среде МРС-Б при pH 5,0 были незначительно выше, чем показатели, полученные при выращивании этого штамма при pH 6,8. Исходный штамм B. adolescentis MC-42
характеризовался слабым ростом при pH 5,0. Способность к росту при низких значениях
pH среды культивирования является уникальным свойством заявляемого штамма, не характерным для культур бифидобактерий, выделенных из природных источников.
Стабильность сохранения полезного свойства. Приобретенные признаки сохранялись
при поддержании штамма на питательной среде МРС-Б (pH 5,0) при длительном (более
24 месяцев) хранении.
4
BY 16449 C1 2012.10.30
Заявляемый штамм Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д устойчив к хлорамфениколу, линкомицину, цефалексину, фурадонину, чувствителен к ампициллину, эритромицину, доксициклину (табл. 3).
Таблица 3
Сравнительная характеристика антибиотикоустойчивости бифидобактерий
Антибиотик/ МИК, Ампи- Цефа- Эритро- Хлораммкг/мл
циллин лексин мицин феникол
B. adolescentis БИМ
1,8
2,5
0,5
4,0
В-462-Д
B. adolescentis MC-42
1,5
1,5
1,0
4,5
Линко- Доксимицин циклин
Нитрофуран
2,0
1,2
200
2,0
1,2
200
Штамм B. adolescentis БИМ В-462-Д антагонистически активен в отношении B. cereus
БИМ В-108, B. subtilis БИМ В-25, БИМ В-276, E. coli БИМ В-238, БИМ В-379, P. aeruginosa
БИМ В-153, БИМ В-155, БИМ В-157, Enterobacter sp. БИМ В-246, не ингибирует роста
L. plantarum БИМ В-447 и B. cereus БИМ В-169 (табл. 4).
Таблица 4
Антагонистическая активность бифидобактерий
В.
В.
Тест-культура/ B.
B.
sub- sub- E. coli E. coli
диаметр зоны cereus cereus
tilis
tilis БИМ БИМ
задержки
БИМ БИМ
БИМ БИМ В-238 В-379
роста, мм
В-108 В-169
В-25 В-276
B. adolescentis
БИМ В-462-Д
B. adolescentis
МС-42
P. aeruginosa
БИМ
В-153
P. aeruginosa
БИМ
В-155
P. ae- Entero- L.
rugino- bacter plantasa
sp.
rum
БИМ БИМ БИМ
В-157 В-246 В-447
2
-
3
2
-
3
4
4
5
5
-
2
-
3
2
-
3
4
4
5
5
-
Примечание: ″–″ - отсутствие зоны подавления роста тест-культуры.
Штамм непатогенен, нетоксигенен.
Сведения о консервации штамма.
Лиофилизация. Лиофилизации подвергают физиологически активную культуру
B. adolescentis БИМ В-462-Д. Штамм выращивают в питательной среде МРС-Б при 37 °С в
течение 18-20 ч (до достижения ранней стационарной стадии роста). Клетки осаждают
центрифугированием (10 000 об/мин, 10 мин), отмывают от ростовой среды, ресуспендируют в криозащитной среде (2/3 от исходного объема культуры). В качестве криозащитной
среды используют стерильное обезжиренное молоко (10 об % сухих веществ). Полученную суспензию асептически разливают по 0.2 мл в стерильные ампулы для лиофилизации,
замораживают до -50-55 °С, высушивают из замороженного состояния под вакуумом при
-55 °С в течение 5 ч, после чего дополнительно досушивают под вакуумом при 20 °С в течение 2,5 ч. Количество жизнеспособных клеток в содержимом ампулы составляет 7-9×108
КОЕ. Ампулы с лиофильно-высушенной культурой хранят при +4 °С. Криоконсервация.
Криоконсервации подвергают физиологически активную культуру B. adolescentis БИМ В462-Д. Штамм выращивают в питательной среде МРС-Б при 37 °С в течение 18-20 часов
(до достижения ранней стационарной стадии роста). Клетки осаждают центрифугированием
(10 000 об/мин, 10 мин), отмывают от ростовой среды, ресуспендируют в криозащитной
среде (1/3 от исходного объема культуры). В качестве криозащитной среды используют
стерильную питательную среду МРС-Б. Полученную суспензию асептически разливают
по 1 мл в стерильные криопробирки и замораживают при -70 °С или -196 °С. Титр клеток
в содержимом криопробирки составляет 2-4×109 КОЕ/мл. Криопробирки с замороженной
культурой хранят при -70 °С.
5
BY 16449 C1 2012.10.30
Технологичность и уникальные свойства заявляемого штамма наглядно иллюстрируют следующие примеры.
Пример 1.
Хранение бифидобактерий в питательной среде без нейтрализации.
Бифидобактерии в количестве 5 об. % инокулируют в жидкую среду МРС-Б и выращивают при 37 °С в течение 20-24 ч (до достижения стационарной стадии роста). Показатели
накопления биомассы и титра клеток заявляемого штамма через 24 ч культивирования составляют ОП600 = 2,504-2,534 и 4-8×109 КОЕ/мл, соответственно, штамма-прототипа ОП600 = 2,498-2,513 и 3-6×109 КОЕ/мл. Пробирки с выросшей культурой помещают на
хранение в холодильник (+4 °С). Жизнеспособность бифидобактерий оценивают через
каждые 7-14 суток в течение 10 недель хранения. Титр жизнеспособных клеток Bifidobacterium adolescentis БИМ В-462-Д достоверно не изменяется в течение 5 недель хранения,
после чего снижается на порядок (табл. 5). Титр жизнеспособных клеток штаммапрототипа снижается на два порядка в течение 35 суток хранения, а через 72 суток хранения - на 5 порядков (табл. 5).
Таблица 5
Жизнеспособность бифидобактерий при хранении в питательной среде (+4 °С)
Продолжительность хранения, сутки / титр клеток, КОЕ/мл
0
14
28
35
42
56
72
B. adolescentis БИМ В-462-Д 4-8×109 4-8×109 4-6×109 2-4×109 2-4×109 7-9×108 5-7×108
B. adolescentis MC-42
2-3×109 4-6×108 8-10×107 1-2×107 2-4×106 5-8×105 7-9×104
Штамм
Пример 2.
Сохранность бифидобактерий в сквашенном молоке.
Бифидобактерии в количестве 5 об. % инокулируют в стерильное обезжиренное молоко
без ростовых факторов. Культивируют при 37±1 °С в течение 12-14 часов. Штамм B. adolescentis БИМ В-462-Д сквашивает молоко через 10-12 ч при титре клеток 1-3×108 КОЕ/мл и
pH 4,0±0,2 ед. Штамм-прототип сквашивает стерильное молоко за 12-14 ч культивирования при титре клеток 2-3×108 КОЕ/мл и pH 3,9±0,2 ед. После образования сгустка пробирки со сквашенным молоком достают из термостата, охлаждают и хранят в холодильнике
при +4 °С. Титр жизнеспособных клеток заявляемого штамма в течение 24 суток хранения
достоверно не изменяется, а титр клеток штамма-прототипа снижается на 4 порядка (табл. 6).
Таблица 6
Жизнеспособность бифидобактерий при хранении в сквашенном молоке
Продолжительность хранения, сутки /титр клеток, КОЕ/мл
0
7
12
18
24
8
8
7
B. adolescentis БИМ В-462-Д 1-3×108
1-3×10
1-3×10
7-9×10
1-2×108
B. adolescentis MC-42
2-3×108
5-7×107
6-8×106
5-7×105
7-9×104
Штамм
Данные, приведенные в примерах 1 и 2, свидетельствуют о высокой устойчивости заявляемого штамма к низким значениям pH и его перспективности для использования при
производстве жидких пробиотиков и бифидосодержащих кисломолочных продуктов с
длительным сроком хранения.
Пример 3.
Определение устойчивости бифидобактерий к кислотному стрессу.
1 мл 18-часовой культуры бифидобактерий, выращенной в жидкой среде МРС-Б при
37 °С, осаждают центрифугированием (8 мин, 10 000 об/мин). Клеточный осадок дважды
промывают равным объемом физиологического раствора и ресуспендируют в 10 мл 5 %
NaCl, pH 2,0 (до концентрации клеток ~107-108 КОЕ/мл). Инкубируют при 37 °С в течение
6
BY 16449 C1 2012.10.30
180 мин, после чего определяют количество жизнеспособных клеток бифидобактерий и их
биологические свойства.
Заявляемый штамм бифидобактерий сохранял исходную жизнеспособность и физиологическую активность через 180 мин инкубации при pH 2,0 (табл. 7). Титр жизнеспособных клеток и физиологическая активность штамма-прототипа существенно снижались
(табл. 7)
Таблица 7
Влияние кислотного стресса на жизнеспособность
и физиологическую активность бифидобактерий
Штамм
B. adolescentis БИМ В-462-Д
B. adolescentis МС-42
1. Титр жизнеспособных клеток при инкубации при pH 2.0
0 мин
1,5±1,0×109 КОЕ/мл
1,3± 1,0×109 КОЕ/мл
180 мин
6,3±2,3×108 КОЕ/мл
5,7±2,5×105 КОЕ/мл
2. Рост и кислотообразование в питательных средах после инкубации при pH 2.0
биомасса, ОП600
2,234-2,375
0,848-0,957
9
титр клеток, КОЕ/мл
1-3×10
7-9×107
кислотность, pH
4,15-4,23
4,65-4,92
3. Рост и кислотообразование в молоке после инкубации при pH 2.0
время образования сгустка, ч
11-12
без сгустка
7
титр клеток, КОЕ/мл
9-12×10
3-5×106
кислотность, pH
3,8-4,2
5,7-6,0
4. Антагонистическая активность после инкубации при pH 2.0
E. coli БИМВ-238
-*
E. coli БИМ В-379
3
1
B. subtilis БИМ В-25
3
P. aeruginosa БИМ В-157
5
1
Enterobacter sp. БИМ В-246
5
L. plantarum БИМ В-447
Примечание: -* - отсутствие зоны подавления роста тест-культуры.
Данные, приведенные в примере 3, свидетельствуют о высокой устойчивости заявляемого штамма к кислотному стрессу и его перспективности для использования в качестве
основы пробиотических препаратов, предназначенных для лечения и профилактики
дисбиотических состояний ЖКТ.
Таким образом, заявляемый штамм бифидобактерий по сравнению со штаммомпрототипом имеет следующие преимущества:
способность к развитию при низких значениях pH среды культивирования;
способность сохранять высокий титр жизнеспособных клеток при хранении при +4 °С
в сквашенном молоке и питательной среде без нейтрализации;
устойчивость к кислотному стрессу.
Перечисленные свойства, а также высокая антагонистическая активность и отсутствие
в клетках экстрахромосомной ДНК делают штамм биотехнологически ценным. Заявляемый штамм является перспективным для производства пробиотических препаратов и диетических кисломолочных продуктов.
7
BY 16449 C1 2012.10.30
Источники информации:
1. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.
Том III: Пробиотики и функциональное питание. - М.: ГРАНТЪ, 2001. - 288 с.
2. Arunachalam K.D. Role of bifidobacteria in nutrition, medicine and technology // Nutrition Research. - 1999. - V. 19. - No. 10. - P. 1559-1597.
3. Leahy S.C., Higgins D.G., Fitzgerald G.F., van Sinderen D. Getting better with bifido bacteria // J. Appl. Microbiol. - 2005. - No. 98. - P. 1303-1315.
4. Gibson G.R., Fuller R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed to
ward identifying probiotics and prebiotics for human use // J. Nutr. 2000. - V. 130. - P. 391-395.
5. Chung H.S., Kim Y.B., Chun S.L., Ji G.E. Screening and selection of acid and bile resis
tant bifidobacteria // Int. J. Food Microbiol. - 1999. - No. 47. - P. 25-32.
6. Biavati В., Mattarelli P. The prokaryores. A handbook on the biology of bacteria. Vol. III:
The family Bifidobacteriaceae / eds. M. Dworkin et al. 3-d ed. Singapore: Springer. - 2006. P. 322-382.
7. Roy D. Technological aspects related to the use of bifidobacteria in dairy products // Lait. 2005. - No. 85. - P. 39-56.
8. Shin H.S., Lee J.H., Pestka J.J., Ustunol Z. Viability of bifidobacteria in commercial dairy
products during refrigerated storage // J. Food Prot. - 2000. - V. 63. - P. 3296-3306.
9. Charteris W.P., Kelly P.M., Morelli L., Collins J.K. Development and application of an in
vitro methodology to determine the transit tolerance of potentially probiotic Lactobacillus and
Bifidobacterium species in the upper human gastrointestinal tract // J. Appl. Microbiol. - 1998. No. 84. - P. 759-768.
10. Masco L., Crockaert C., Van Hoorde K., Swings J., Huys J. In vitro assessment of the
gastrointestinal transit tolerance of taxonomic reference strains from human origin and probiotic
product isolates of Bifidobacterium // J. Dairy Sci. - 2007. - V. 90. - No. 8. - P. 3572-3578.
11. Sanchez B., Champomier-Verges M.-C., del Carmen Collado M., Anglade P. et al. Low
pH adaptation and the acid tolerance response of Bifidobacterium longum biotype longum //
Appl. Environ. Microbiol. - 2007. - V. 73. - No. 20. - P. 6450-6459.
12. А.с. SU 1513029, МПК C 12N 1/20, 1989.
13. RU 2092064, МПК A 23C 09/12, 1997.
14. А.с. SU 863639, 1981.
15. deMan J.C., Rogosa M., Sharpe M.E. A medium for the cultivation of lactobacilli //
J. Appl. Bacteriol. - 1960. - V. 23. - P. 130-135.
8
BY 16449 C1 2012.10.30
Динамика развития B. adolescentis БИМ В-462-Д и B. adolescentis МС-42
при глубинном культивировании в среде МРС-Б при pH 6,8 и 5,0
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
9
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
302 Кб
Теги
by16449, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа