close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16556

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2012.12.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 31/095 (2006.01)
A 61K 31/198 (2006.01)
A 61P 39/06 (2006.01)
РАДИОПРОТЕКТОРНОЕ СРЕДСТВО
(21) Номер заявки: a 20101403
(22) 2010.09.29
(43) 2012.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт радиобиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Верещако Геннадий Григорьевич; Ходосовская Алина Михайловна; Солдатов Владимир
Сергеевич; Пильченко Наталья Васильевна; Куваева Зоя Ивановна;
Книжников Валерий Алексеевич
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт
радиобиологии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
BY 16556 C1 2012.12.30
BY (11) 16556
(13) C1
(19)
(56) МИРЕЦКИЙ Г.И. и др. Гигиена и санитария. - 1984. - № 7. - С. 83-85.
BY 6617 C1, 2004.
RU 2179020 C2, 2002.
RU 2370159 C1, 2009.
БАРАБОЙ В.А. Успехи современной
биологии. - 2004. - Т. 124. - № 2. - С. 157168.
АБЛЕКОВСКАЯ О.Н. Функциональная
нейроморфология. Фундаментальные и
прикладные исследования. - Минск,
2001. - С. 225-227.
ПЕХОВСКАЯ Т.А. и др. Здоровье и
окружающая среда: Сб. науч. трудов.
Вып. 13. - Минск, 2009. - С. 408-413.
ЕРЕМЕНКО В.Ф. Актуальные проблемы медицины. - Вып. 6: Сб. научн. статей студентов. - Гомель, 2005. - Т. 5 .С. 48-51.
(57)
Радиопротекторное средство для защиты организма от воздействия острого или хронического облучения в дозе до 2,0 Гр, включающее метионин и селенметионин в массовом соотношении 4:1,5; 4:15 или 4:150.
Изобретение относится к радиобиологии и радиационной медицине, в частности к радиопротекторным средствам природного происхождения, а именно к противолучевым
свойствам биологически активных веществ - селенметионина с метионином.
Лекарственная профилактика радиационных поражений многообразна по своему содержанию и в основном направлена на коррекцию первичных звеньев лучевого поражения и
вторичных биохимических и гемопоэтических нарушений в организме, возникающих при
действии преимущественно летальных и сублетальных доз. Наиболее эффективными химическими радиопротекторами являются соединения из класса индолилалкиламинов и
меркаптоалкиламинов, такие как цистеамин, мексамин, 2-МПГ, АЭТ, WR-2721 и др. [1, 2].
Однако химические протекторы, рассчитанные преимущественно на однократное применение в связи с их высокой токсичностью и побочными эффектами в организме, не могут
использоваться для решения задач длительного и безопасного повышения радиорезистентности организма и оказались практически непригодными при облучении в малых дозах и в условиях хронического радиационного воздействия с низкой мощностью дозы, что
BY 16556 C1 2012.12.30
имеет особое значение в связи с радиоэкологической ситуацией в ряде регионов Беларуси
после аварии на ЧАЭС [3].
Известно, что при облучении в малых дозах и в условиях низкоинтенсивного внешнего
или внутреннего облучения организма в целях его защиты, повышении радиорезистентности тканевых систем все большее распространение получило использование биологически
активных веществ различного происхождения (витамины, микроэлементы, субстраты,
зоо- и фитопрепараты).
В основу изобретения положена задача поиска нового эффективного радиопротекторного средства, обладающего выраженным противолучевым действием на биохимические
процессы в организме и не оказывающего побочного действия при остром и хроническом
облучении в дозах до 2,0 Гр.
Сущность изобретения состоит в том, что в качестве нового эффективного радиопротекторного средства для защиты организма от воздействия острого или хронического облучения
в дозе до 2,0 Гр предложена композиция веществ, включающая метионин в дозе 4 мг/кг в
сочетании с селен метионином в дозах 1,5 и/или 15 и/или 150 мкг/кг.
Неорганические соли селена (селенит или селенат натрия Na2SeO3) в промышленности
получают при переработке каменного угля, железных руд и т.п. Они дешевы, но наиболее
токсичны, хуже усваиваются, часто вызывают дискомфорт в желудке. Селенметионин
(аминокислота растительного происхождения) содержит наиболее усвояемую человеком
форму органически связанного селена, который входит в состав глутатионпероксидазы.
Она является важнейшим антиокислительным ферментом антиоксидантной системы, катализируя восстановление перекиси водорода и гидроперекисей липидов, предохраняет
клеточные мембраны от повреждающего действия продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые накапливаются в значительном количестве в тканях организма при
действии радиации [4]. Метионин является незаменимой аминокислотой, которая играет
важную роль в биосинтетическом метилировании, синтезе белков и реакциях, обеспечивающих синтез серосодержащих соединений [5].
В селенметионине, в молекуле которого сера метионина замещена на селен, происходит
сочетание свойств метионина и селена. Протекторные свойства селенметионина с метионином усиливаются в сочетании с метионином за счет атома серы, которая присутствует в
молекуле этой аминокислоты.
Следует учитывать также и нехватку селена в воде и пищевых продуктах, произведенных в Беларуси, а БАДы, содержащие селен, в которых этот элемент находится в неорганической форме или в сложных органических формах, плохо усваивается организмом. В
этом случае заявленная композиция селенметионина с метионином является не только
эффективным радиопротектором, но также и перспективной биологически активной добавкой, с помощью которой можно устранить дефицит селена.
Заявленная композиция метионина и селенметионина в массовом соотношении 4:1,5;
4:15 или 4:150 характеризуется отсутствием побочных и токсических эффектов при используемых концентрациях веществ и направлена на защиту кровеносной системы и организма в целом как при остром, так и при хроническом облучении в дозах до 2,0 Гр.
Ранее форма селенметионина в сочетании с метионином в качестве радиопротектора не
использовалась.
В качестве теста для оценки радиопротекторных свойств заявленной композиции веществ было проведено комплексное изучение ряда морфофункциональных показателей
системы крови крыс-самцов стадного разведения. В крови анализировали количество лейкоцитов, лейкограмму (в мазках крови) общепринятыми клиническими методами [6] с
окраской мазков для подсчета лейкограммы по Романовскому, в сыворотке крови определяли содержание малонового диальдегида (МДА) [7], общую антиокислительную активность (АОА) [8], активность аланин- и аспартатаминотрансфераз (АлАТ и АспАТ
соответственно) с помощью стандартных наборов реактивов Био-Ла-Тест (Ламеха, Чехия).
2
BY 16556 C1 2012.12.30
Конкретная реализация изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Острое облучение животных (исходный возраст крыс составлял 3,5 месяца, масса
331,2±15,1 г) проводили на установке ИГУР-1 (137Cs, мощность дозы 0,9 Гр/мин) в дозе
2,0 Гр. В опытах использовались животные трех групп: 1-ю группу составили крысы, получавшие заявленную композицию веществ в условиях острого облучения в дозе 2,0 Гр;
2-ю группу - крысы, которые подвергались острому облучению в дозе 2,0 Гр без введения
исследуемой композиции веществ; 3-ю группу (контрольную) - животные, получающие
дистиллированную воду. Заявленную композицию веществ, включающую метионин и селенметионин в массовом соотношении 4:1,5; 4:15 или 4:150 животные 1-й группы получали
с питьем на протяжении 3 дней до и 5 дней после радиационного воздействия. В последующем препарат вводился дважды в неделю в течение 1 месяца после облучения. Опыты
ставили на 7, 30 и 60 сутки после облучения. Результаты сведены в табл. 1.
Анализ количества лейкоцитов и лейкоцитарных элементов в крови после острого облучения в дозе 2,0 Гр показывает (табл. 1), что спустя 7 суток после радиационного воздействия сохраняется выраженная лейкопения (40,8 % от контроля, P < 0,05). Заявленная
композиция веществ в значительной мере способствует восстановлению важнейших клеток белой крови (при концентрации селенметионина 150 мкг/кг с метионином 4 мг/кг до
76 % от контрольных значений). Восстановление числа лейкоцитов крови облученных
животных, получавших селенметионин с метионином, происходит преимущественно за
счет количества лимфоцитов и, в меньшей степени, числа нейтрофилов и моноцитов.
Таблица 1
Влияние селенметионина с метионином на количество лейкоцитов
и лейкоцитарных элементов крови крыс после острого облучения в дозе 2,0 Гр
Изучаемые
Серии опытов
Контроль
показатели
2,0 Гр
2,0 Гр + Пр1 2,0 Гр + Пр2 2,0 Гр + Пр3
7-е сутки после облучения
Лейкоциты, 109/л
7,1±0,65
2,9±0,17*
4,2±0,52*
4,8±0,63*
5,4±0,36
Эозинофилы,
109/л
0,10±0,03
0,02±0,01
0,02±0,01
0,02±0,01
0,03±0,02
Моноциты, 109/л
0,07±0,03
0,04±0,02
0,05±0,02
0,07±0,02
0,11±0,2
Нейтрофилы,
109/л
0,96±0,12
0,93±0,07
1,38±0,04*
1,44±0,07*
1,54±0,07*
Лимфоциты, 109/л 5,98±0,11
1,91±0,08* 2,76±0,05*
3.26±0,05*
3,71±0,07*
30-е сутки после облучения
Лейкоциты, 109/л
5,36±0,45
4,88±0,66
5,80±0,99
3,70±0,34
5,04±0,59
Эозинофилы,
109/л
0,01±0,001
0,02±0,01
0,01±0,001
0,01±0,001
0,02±0,01
9
Моноциты, 10 /л
0,10±0,02
0,16±0,01
0,10±0,002
0,13±0,027
0,12±0,02
Нейтрофилы,
109/л
0,55±0,015
1,03±0,01*
0,74±0,01
0,54±0,03
0,79±0,08
Лимфоциты, 109/л 4,69±0,06
3,67±0,08*
4,93±0,14
3,03±0,06*
4,11±0,09*
Примечания:
Пр1 - селенметионин (1,5 мкг/кг) + метионин (4 мг/кг);
Пр2 - селенметионин (15 мкг/кг) + метионин (4 мг/кг);
Пр3 - селенметионин (150 мкг/кг) + метионин (4 мг/кг);
* - достоверность различий от контроля при P < 0,05.
Спустя 30 суток после радиационного воздействия количество лейкоцитов в крови
продолжало оставаться несколько сниженным, тем не менее использование препарата в
большинстве случаев вызывает более быстрое восстановление числа лейкоцитов или даже
их сверхвосстановление в крови, которое происходило, главным образом, за счет повышения числа лимфоцитов и нейтрофилов.
3
BY 16556 C1 2012.12.30
Пример 2.
Хроническое облучение животных (исходный возраст 1,5 месяца, масса 163,6±7,9 г)
проводилось на установке ГАММАРИД (137Cs, мощность дозы 2,67 сГр/сут, суммарная
поглощенная доза 2,0 Гр) в течение 75 суток непрерывно за исключением кратковременных перерывов, необходимых для кормления животных и уборки помещения. В опытах
использовались животные трех групп: 1-ю группу составили крысы, получавшие заявленную композицию в условиях хронического облучения в суммарной дозе 2,0 Гр; 2-ю группу - крысы, которые подвергались хроническому облучению в этой же дозе без введения
исследуемой композиции веществ; 3-ю группу (контрольную) - животные, получающие
дистиллированную воду. Заявленную композицию веществ, включающую метионин и селенметионин в массовом соотношении 4:1,5; 4:15 или 4:150 животные 1-й группы получали
дважды в неделю на протяжении всего периода облучения (75 суток). Опыты ставили на 1,
60 и 90 сутки после прекращения хронического облучения. Определяемые показатели
сравнивались с аналогичными показателями у интактных животных. Результаты сведены
в табл. 2.
Хроническое облучение животных в течение 75 суток также приводит к выраженной
лейкопении (табл. 2). На первые сутки после облучения количество лейкоцитов в крови
снижается до 45,3 % по сравнению с контролем. Применение селенметионина в дозах
1,5 и/или 15 мкг/кг в сочетании с метионином в дозе 4 мг/кг способствует существенному
повышению количества лейкоцитов в крови в основном за счет увеличения числа лимфоцитов. Подобная эффективность селенметионина с метионином сохраняется и на 60 сутки
после длительного (хронического) радиационного воздействия.
Таблица 2
Влияние селенметионина с метионином на количество лейкоцитов и лейкоцитарных
элементов крови крыс после хронического облучения в суммарной дозе 2,0 Гр
Изучаемые
Контроль
2,0 Гр
2,0 Гр + Пр1
2,0 Гр + Пр2
показатели
1-е сутки
9
Лейкоциты, 10 /л
6,4±0,11
2,9±0,28*
5,2±0,08*
4,8±0,63
Эозинофилы, 109/л
0,10±0,03
0,02±0,01
0,02±0,01
0,02±0,01
Моноциты, 109/л
0,06±0,03
0,02±0,02
0,03±0,02
0,03±0,02
9
Нейтрофилы, 10 /л
1,10±0,12
0,90±0,07
1,03±0,04*
0,88±0,07*
Лимфоциты, 109/л
5,27±0,08
1,96±0,08*
4,07±0,05*
4,47±0,05*
60-е сутки
9
Лейкоциты, 10 /л
5,2±0,22
4,2±0,19*
4,6±0,52
5,9±0,36
9
Эозинофилы, 10 /л
0,01±0,001
0,02±0,01
0,01±0,001
0,01±0,001
Моноциты, 109/л
0,04±0,02
0,06±0,01
0,06±0,002
0,05±0,022
9
Нейтрофилы, 10 /л
0,75±0,02
0,76±0,01
0,86±0,03*
1,00±0,03*
9
Лимфоциты, 10 /л
4,40±0,05
3,37±0,07*
3,64±0,12*
4,86±0,06*
Примечания те же, что и в табл. 1. * - P < 0,05.
Как свидетельствуют вышеприведенные экспериментальные данные, заявленная композиция, включающая метионин и селенметионин в массовом соотношении 4:1,5; 4:15 или
4:150 оказывает выраженное нормализующее влияние на восстановление количества лейкоцитов и число лейкоцитарных элементов крови животных, облученных как при остром,
так и при длительном (хроническом) радиационном воздействии в дозе до 2,0 Гр.
Также было выявлено, что заявленная композиция веществ в значительной степени
способствует устранению продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые
накапливаются в облученном организме. Показано, что уровень малонового диальдегида
4
BY 16556 C1 2012.12.30
(МДА) - конечного продукта ПОЛ - существенно снижается в крови облученных животных спустя 7, 30 и 60 суток после радиационного воздействия до уровня контроля или даже ниже его (табл. 3). Очевидно, это связано с активностью глутатионпероксидазы, в
состав которой входит селен.
Хроническое радиационное воздействие вызывает накопление малонового диальдегида в крови после воздействия. На 1 сутки после прекращения облучения оно достигает
163,0 % по сравнению с контролем. Введение селенметионина с метионином животным,
которые подвергались длительному радиационному воздействию, предотвращает накопление малонового диальдегида в крови. Подобная тенденция в накоплении малонового
диальдегида у облученных животных выявляется также и на 60 сутки после хронического
облучения, уровень которого существенно нормализуется после применения исследуемой
композиции веществ.
Полученные результаты (табл. 3) свидетельствует об эффективности устранения продуктов перекисного окисления у облученных животных с помощью селенметионина в сочетании с метионином и высоких радиопротекторных свойствах этого комплекса веществ.
Таблица 3
Влияние селенметионина с метионином на содержание малонового диальдегида
(МДА, нмоль/мл) в сыворотке крови после острого
и хронического облучения в дозе 2,0 Гр
Серии опытов
Время после облучения, сутки
7-е сутки
30-е сутки
60-е сутки
Острое облучение, сутки
Контроль
25,4±1,79
30,2±1,94
15,3±1,74
2,0 Гр
41,4±1,45*
43,5±5,50
31,4±3,80*
2,0 Гр + Пр1
31,5±1,21*
20,2±0,85**
21,6±3,03
2,0 Гр + Пр2
26,4±0,92**
26,1±3,20**
16,1±1,31**
2,0 Гр + Пр3
18,8±1,55**
32,6±2,09
18,4±1,15**
Хроническое облучение, сутки
Серии опытов
1-е сутки
60-е сутки
90-е сутки
Контроль
27,4±1,3
24,2±1,7
21,4±1,6
2,0 Гр
44,5±2,2
34,7±1,7
23,4±1,6
2,0 Гр + Пр1
31,6±3,1**
27,9±1,4
21,1±1,6
2,0 Гр + Пр2
32,3±1,9**
27,4±1,9
21,2±0,9
Примечания те же, что и в табл. 1. * - P < 0,05 по отношению к контролю; ** - P < 0,05
по отношению к облучению
Облучение вызывает также достоверное повышение концентрации малонового диальдегида в ткани печени до 188 % по отношению к интактному контролю (табл. 4). В соответствии с повышением содержания МДА в печени облученных в дозе 2,0 Гр животных,
происходит адекватное снижение антиокислительной активности (на 37,5 %). Введение
заявленной композиции веществ животным, подвергнутым острому облучению в дозе 2,0 Гр,
сопровождается снижением уровня МДА в печени, особенно значительно при максимальной дозе селенметионина (150 мкг/кг). В этом случае содержание МДА в ткани печени
облученных животных снижалось ниже контрольного уровня, что указывает на эффективное действие селенметионина с метионином на систему ПОЛ. Одновременно с понижением
содержания МДА в печени облученных животных, получающих заявленную композицию
веществ, выявлялось повышение показателя АОА, что также подтверждает ее противолучевую активность.
5
BY 16556 C1 2012.12.30
Таблица 4
Влияние селенметионина с метионином на некоторые показатели антиоксидантной
системы крыс в ткани печени крыс-самцов после острого облучения в дозе 2,0 Гр
Время после облучения
7-е сутки
30-е сутки
60-е сутки
Острое облучение
Контроль
МДА, нмоль/г
2,22±0,09
2,87±0,21
3,24±0,18
АОА, усл. ед.
0,80±0,30
1,40±0,30
1,20±0,08
2,0 Гр
МДА, нмоль/г
4,19±0,12*
3,94±0,15*
3,56±0,13
АОА, усл. ед.
0,50±0,02
0,75±0,08
0,80±0,33
2,0 Гр + Пр1
МДА, нмоль/г
2,78±0,09**
3,23±0,20
2,93±0,08**
АОА, усл. ед.
1,03±0,36
1,03±0,30
1,05±0,35
2,0 Гр + Пр2
МДА, нмоль/г
2,80±0,09**
2,83±0,20**
2,75±0,10**
АОА, усл. ед.
1,23±0,08**
1,00±0,09
1,18±0,09
2,0 Гр + Пр3
МДА, нмоль/г
2,18±0,06**
2,75±0,15**
2,64±0,03**
АОА, усл. ед.
1,14±0,08**
0,95±0,35
1,15±0,06
Примечания те же, что и в табл. 1.* - P < 0,05 по отношению к контролю; ** - P < 0,05
по отношению к облучению.
Серии
опытов
Изучаемые
показатели
При хроническом облучении животных в суммарной дозе 2,0 Гр наблюдается умеренное повышение концентрации МДА в ткани печени, которое не носит достоверного характера, в то время как значение показателя АОА изменялось в сторону снижения
значительно (табл. 5). Введение селенметионина с метионином при хроническом радиационном воздействии не оказывает существенного влияния на уровень МДА в исследуемой ткани, но достаточно эффективно в отношении нормализации антиокислительной
активности в ткани печени. Результаты представлены в табл. 5.
Таблица 5
Влияние селенметионина с метионином на некоторою показатели антиоксидантной
системы крыс в ткани печени крыс-самцов после хронического облучения
в суммарной дозе 2,0 Гр
Время после облучения
Изучаемые
показатели
1-е сутки
60-е сутки
МДА, нмоль/г
3,20±0,35
3,58±0,43
АОА, усл. ед.
1,6±0,09
1,26±0,16
2,0 Гр
МДА, нмоль/г
3,79±0,23
3,77±0,13
(суммарно)
АОА, усл. ед.
0,8±0,05
0,66±0,09*
2,0 Гр + Пр1
МДА, нмоль/г
4,17±0,25
4,50±0,18*
АОА, усл. ед.
1,8±0,18**
1,05±0,05**
2,0 Гр + Пр2
МДА, нмоль/г
4,00±0,11
4,32±0,22
АОА, усл. ед.
2,15±0,66
1,08±0,09**
Примечания те же, что и в табл. 1. * - P < 0,05 по отношению к контролю. ** - P < 0.05
по отношению к облучению.
Серии
опытов
Контроль
Влияние селенметионина с метионином в указанных концентрациях оказывает нормализующее влияние на активность трансаминаз (АлАТ и АспАТ) как при остром облучении в дозе 2,0 Гр (табл. 6), так и при хроническом облучении в суммарной дозе 2,0 Гр
(табл. 7).
6
BY 16556 C1 2012.12.30
Таблица 6
Влияние селенметионина с метионином на активность АлАТ и АспАТ
в сыворотке крови крыс при остром облучении в дозе 2,0 Гр
Серии опытов
Контроль
2,0 Гр
2,0 Гр + Пр1 2,0 Гр + Пр2 2,0 Гр + Пр3
7-е сутки
АлАТ
0,59±0,06
0,77±0,08*
0,75±0,13
0,70±0,07
0,73±0,10
АспАТ
0,78±0,07
1,11±0,03*
0,99±0,05
0,90±0,06**
0,93±0,06
30-е сутки
АлАТ
0,68±0,08
0,88±0,12
0,85±0,03
0,83±0,03
0,74±0,05
АспАТ
0,74±0,01
0,98±0,05*
0,84±0,04
0,83±0,21
0,83±0,04
60-е сутки
АлАТ
0,78±0,10
0,81±0,05
0,68±0,02**
0,67±0,02
0,76±0.03
АспАТ
0,65±0,04
0,85±0,04*
0,68±0,05
0,58±0,03**
0,64±0,07
Примечания те же, что и в табл. 1. * - P < 0,05 по отношению к контролю; ** - P < 0,05
по отношению к облучению.
Изучаемые
показатели
Таблица 7
Влияние селенметионина с метионином на активность аминотрансфераз в сыворотке крови крыс, подвергнутых хроническому облучению в суммарной дозе 2,0 Гр
Изучаемые показатели
Серии опытов
Контроль
2,0 Гр
2,0 Гр + Пр1
2,0 Гр + Пр2
1-е сутки
АлАТ
0,58±0,01
0,70±0,022
0,67±0,01
0,63±0,02*
АспАТ
0,31±0,001
0,55±0,006*
0,50±0,03*
0,50±0,03
60 сутки
АлАТ
0,56±0,016
0,60±0,008
0,60±0,012
0,63±0,006
АспАТ
0,28±0,009
0,35±0,0021*
0,33±0,003*
0,35±0,022*
90 сутки
АлАТ
0,45±0,06
0,40±0,011
0,39±0,006
0,44±0,010
АспАТ
0,22±0,019
0,28±0,024
0,21±0,015
0,20±0,015
Примечания те же, что и в табл. 1. * - P < 0,05 по отношению к контролю; ** - P < 0,05 по
отношению к облучению.
Из представленных материалов очевидно, что заявленная композиция веществ, включающая метионин и селенметионин в массовом соотношении 4:1,5; 4:15 или 4:150, как
при остром, так и при хроническом облучении в дозе до 2,0 Гр, обладает высокой радиопротекторной активностью, которая может быть рекомендована для широкого использования с профилактической целью для лиц, работающих в области атомной энергетики, для
населения, проживающего в условиях радиоактивного загрязнения, а также в радиационной медицине.
7
BY 16556 C1 2012.12.30
Источники информации:
1. Владимиров В.Г., Красильников И.И., Арапов О.В. Радиопротекторы: структура и
функция. - Киев: Навукова думка, 1989. - 258 с.
2. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А. Радиобиология человека и животных. - М.: Высшая
школа, 2004. - 549 с.
3. Барабой В.А. Радиобиология. - 1990. - Т. 30. - № 4. - С. 435-440.
4. Барабой В.А. Успехи современ. биол. - 2004. - Т. 124. - № 2. - С. 157-169.
5. Мирецкий Г.И., Даницкая Е.В., Троицкая М.В., Размаев В.П. Гигиена и санитария. 1984. - № 7. - С. 83-85.
6. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред.
В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.
7. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Современные методы в биохимии. - М.: Медицина,
1977. - С. 66.
8. Мартынюк В.Б., Ковальчук М.Ф. Лабораторное дело. - 1991. - № 3. - С. 19-22.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
8
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
127 Кб
Теги
by16556, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа