close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16744

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 5/07
(2010.01)
СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОТЕКА КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ
ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР
(21) Номер заявки: a 20091123
(22) 2009.07.24
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
BY 16744 C1 2013.02.28
BY (11) 16744
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия, 2008. Т. 54. Вып. 2. - С. 192200.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. Морфология,
2005. - Т. 128. - № 5. - С. 33-36.
НИКАНДРОВ В.Н. и др. Ученые записки учреждения образования "Витебская ордена "Знак Почета" государственная академия ветеринарной медицины". Т. 42. Вып. 2. Ч. 2. - 2006. С. 179-181.
BY 10290 C1, 2008.
(57)
Способ предотвращения отека клеток нервной ткани первичных или перевиваемых
культур при инкубировании в течение 1,5 часов в гипотонической среде, представляющей
собой синтетическую питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl
0,45 %, в атмосфере с 5 %-ным содержанием СО2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют стрептокиназу до
концентрации от 20 до 2000 МЕ/мл.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани.
Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа предотвращения отека клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур, развивающегося при
их содержании в гипотонический питательной среде.
Задачей заявляемого способа является создание способа предотвращения осмотического отека клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур при их содержании
в гипотонический среде.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ предотвращения отека
клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур при инкубировании в течение
1,5 часов в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную
среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl 0,45 % в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С, заключающийся в том,
BY 16744 C1 2013.02.28
что в гипотоническую среду добавляют стрептокиназу до концентрации от 20 до
2000 МЕ/мл.
Стрептокиназа, протеин молекулярной массой 47-55 кДа, синтезируется βгемолитическими стрептококками серологических групп A, C и G и является одним из
наиболее эффективных активаторов плазминогена человека и отдельных видов животных,
однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности. Роль
стрептокиназы остается неясной. В настоящее время установлено, что стрептокиназа обладает супероксидконвергирующей способностью [1].
Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет предотвратить осмотический отек клеток первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, развивающийся при содержании их в гипотонический питательной среде.
Пример 1.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С6) плотностью 2,03,0×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl 0,45 %, в которую добавляют стрептокиназу
200 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же
гипотонической питательной среде.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl), синтетической
питательной среде 50 % клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек).
Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33 % (контроль).
При внесении в гипотоническую (0,45 % NaCl) питательную среду стрептокиназы
(200 МЕ/мл) гибель клеток составляет 7 %, объем сохранившихся клеток увеличен только
на 12 % (опыт).
Пример 2.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому
и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0×104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла и
культивируют их в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl 0,45 %, с добавлением
стрептокиназы 2000 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в гипотонический питательной среде.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде DMEM погибает 47 % клеток, в оставшихся развивается гидратация
(отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23 % (контроль).
При внесении в питательную среду стрептокиназы (2000 МЕ/мл) погибает 11 % клеток, объем клеток увеличен на 12 % (опыт).
Пример 3.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6), выращенную на
синтетической питательной среде DMEM, высевают плотностью 2,0-3,0×104 клеток/см2 на
пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической среде, представляющей
собой синтетическую питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl
0,45 %, в которую добавляют стрептокиназу - 20 МЕ/мл. В качестве контроля используют
культуры, которые выращивают в такой же гипотонической питательной среде.
2
BY 16744 C1 2013.02.28
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде 50 % клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек).
Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33 % (контроль).
При внесении в гипотоническую (0,45 % NaCl) питательную среду стрептокиназы
(20 МЕ/мл) гибель клеток составляет 29 %, объем сохранившихся клеток увеличен только
на 19 % (опыт).
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет предотвратить осмотический отек клеток первичных и перевиваемых культур
клеток нервной ткани, развивающийся при содержании их в гипотонической питательной
среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и
медицине.
Источники информации:
1. Никандров В.Н., Пыжова Н.С. Регуляторные белки: функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия // Весцi НАН Беларусi. Сер. мед.-бiял.
навук. - 2003. - № 3. - С. 75-89.
2. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических
нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора
и гуанетидина // Весцi АН БССР. Сер. бiял. навук. - 1986. - № 1. - С. 56-60.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
72 Кб
Теги
by16744, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа