close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16790

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/48
(2006.01)
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ САХАРНОГО
ДИАБЕТА I ТИПА
(21) Номер заявки: a 20101030
(22) 2010.07.07
(43) 2012.02.28
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Международный государственный
экологический университет имени
А.Д.Сахарова" (BY)
(72) Авторы: Коктыш Ирина Владимировна; Зафранская Марина Михайловна; Бойко Юлия Николаевна
(BY)
BY 16790 C1 2013.02.28
BY (11) 16790
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Международный государственный экологический университет
имени А.Д.Сахарова" (BY)
(56) RU 2285921 C1, 2006.
СПИЦИНА Е.В. и др. Молекулярная
биология. - 2007. - Т. 41. - № 6. - С. 989993.
BY 7890 C1, 2006.
BY 6219 C1, 2004.
BY 9159 C1, 2007.
(57)
Способ выявления риска развития сахарного диабета I типа, отличающийся тем, что
из периферической крови пациента выделяют мононуклеары, регистрируют с помощью
радиометрического пролиферативного теста с тимидином, меченным тритием, пролиферацию мононуклеаров в питательной среде в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета, определяют коэффициент пролиферации k
мононуклеаров по формуле:
k = β1/β2,
где β1 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и
интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин;
β2 - излучение трития в пролиферирующих в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и
интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин,
и выявляют риск развития сахарного диабета I типа при получении k более 1,57.
Изобретение относится к медицине, к разделам эндокринологии, педиатрии, аутоиммунной патологии и клеточной биологии.
Сахарный диабет I типа является результатом длительного деструктивного аутоиммунного процесса в β-клетках поджелудочной железы, и к моменту манифестации болезни отмечается гибель 85-90 % клеток. Использующиеся диагностические технологии
основаны на выявлении гипергликемии на этой стадии, что диктует необходимость пожизненной заместительной инсулинотерапии и исключает профилактику развития заболевания. В настоящее время в донозологической диагностике сахарного диабета I типа не
используются возможности лабораторного исследования функционального состояния
лимфоцитов лиц с предрасположенностью к заболеванию.
Задачей заявляемого способа является раннее выявление риска развития заболевания с
целью назначения своевременного патогенетического лечения.
BY 16790 C1 2013.02.28
Поставленная задача решается следующим образом. Предложен способ выявления
групп риска развития заболевания сахарным диабетом I типа, отличающийся тем, что из
периферической крови выделяют мононуклеары, регистрируют с помощью радиометрического пролиферативного теста с тимидином, меченным тритием, пролиферацию мононуклеаров в питательной среде в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и
интерлейкина-1-бета, определяют коэффициент пролиферации k мононуклеаров по формуле:
k = β1/β2,
где β1 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и
интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин;
β2 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и
интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин,
и выявляют риск развития сахарного диабета I типа при получении k более 1,57.
Пример 1.
Сиблинг Л., 2 года, чей пробанд болеет сахарным диабетом I типа, поступил на консультативный прием к врачу-эндокринологу с целью прогнозирования возможного развития сахарного диабета I типа. Признаков иммунообусловленной патологии не было
установлено. Глюкозотолерантный тест был отрицательным. У больного был осуществлен
забор периферической венозной крови, из которой методом центрифугирования на градиенте плотности в течение 30 мин и последующим отмыванием физиологическим раствором были выделены мононуклеары периферической крови (МПК).
Суспензия МПК была разделена на 2 части и культивировалась в питательной среде:
первая часть, в присутствии аутоантигена (глютаматдекарбоксилазы) и интерлейкина-1бета, а вторая часть - в отсутствие данных стимуляторов.
Клетки засевались в 96-луночный культуральный планшет в концентрации 2×105 клеток/лунку и культивировались в полной культуральной среде (RPMI-1640 с 25 мМ HEPES,
2 мМ L-глютамина, 25 мкг/мл гентамицина, 10 % инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки) в течение 6 суток в присутствии 5 мкг/мл глютаматдекарбоксилазы и 100
МЕ/мл интерлейкина-1-бета в увлажненной атмосфере с 5 % CO2 при 37 °С.
Регистрация пролиферации лимфоцитов в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета осуществлялась на 6-й день культивирования с помощью радиометрического пролиферативного теста. Для этого в течение последних 6 часов
культивирования интактные МПК и МПК, стимулированные глютаматдекарбоксилазой
вместе с интерлейкином-1-бета, культивируют в присутствии тимидина, меченного тритием (37 кБк/лунку), затем клетки собирают на фильтры, регистрируют β-излучение образцов. Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1
Пролиферативная активность МПК в присутствии и в отсутствие
глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета у сиблинга Л.
Активность β-излучения в культуре моно- Активность β-излучения мононуклеаров периферической крови, инду- нуклеаров периферической кроцированная глютаматдекарбоксилазой в
ви, культивируемых в отсутствие
присутствии интерлейкина-1-бета (β1),
стимуляторов (β2), имп/мин
имп/мин
Сиблинг Л.
2149,2
881,3
Согласно полученным данным был подсчитан коэффициент пролиферации по формуле:
k = β1/β2 = 2149,2/881,3 = 2,44.
Таким образом, коэффициент пролиферации k составил более 1,57, что позволяет прогнозировать у данного сиблинга возможное развитие сахарного диабета I типа. В связи с
2
BY 16790 C1 2013.02.28
этим рекомендовано проведение профилактических мероприятий, сопровождаемых мониторингом функционального состояния лимфоцитов.
Пример 2.
Пациент Д., 14 лет, с аутоиммунным тироидитом, поступил на консультативный прием к врачу-эндокринологу с целью прогнозирования возможного развития сахарного диабета I типа. Глюкозотолернатный тест был отрицательным. У больного был осуществлен
забор периферической венозной крови, из которой методом центрифугирования на градиенте плотности в течение 30 мин и последующим отмыванием физиологическим раствором были выделены мононуклеары периферической крови (МПК).
Суспензия МПК была разделена на 2 части и культивировалась в питательной среде:
первая часть - в присутствии аутоантигена (глютаматдекарбоксилазы) и интерлейкина-1бета, а вторая часть - в отсутствие данных стимуляторов.
Клетки засевались в 96-луночный культуральный планшет в концентрации 2×105 клеток/лунку и культивировались в полной культуральной среде (RPMI-1640 с 25 мМ HEPES,
2 мМ L-глютамина, 25 мкг/мл гентамицина, 10 % инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки) в течение 6 суток в присутствии 5 мкг/мл глютаматдекарбоксилазы и 100
МЕ/мл интерлейкина-1-бета в увлажненной атмосфере с 5 % CO2 при 37 °С.
Регистрация пролиферации лимфоцитов в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета осуществлялась на 6-й день культивирования с помощью радиометрического пролиферативного теста. Для этого в течение последних 6 часов
культивирования интактные МПК и МПК, стимулированные глютаматдекарбоксилазой
вместе с интерлейкином-1-бета, культивируют в присутствии тимидина, меченного тритием (37 кБк/лунку), затем клетки собирают на фильтры, регистрируют β-излучение образцов. Результаты представлены в табл. 2.
Таблица 2
Пролиферативная активность МПК в присутствии и в отсутствие
глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета у пациента Д.
Активность β-излучения в культуре моно- Активность β-излучения мононуклеаров периферической крови, инду- нуклеаров периферической кроцированная глютаматдекарбоксилазой в
ви, культивируемых в отсутствие
присутствии интерлейкина-1-бета (β2),
стимуляторов (β1), имп/мин
имп/мин
Пациент Д.
1341,1
937,3
Согласно полученным данным был подсчитан коэффициент пролиферации по формуле:
k = β1/β2 = 1341,1/937,3 = 1,43.
Таким образом, коэффициент пролиферации k составил менее 1,57, что позволяет
установить отсутствие у данного пациента риска развития сахарного диабета 1 типа.
Выводы.
При определении коэффициента пролиферации k более 1,57 можно прогнозировать
возможное развитие сахарного диабета I типа с целью проведения профилактических мероприятий и предотвращения развития заболевания.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
82 Кб
Теги
патент, by16790
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа