close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY16858

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/15 (2006.01)
ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ
ПРОТИВ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО
СИНДРОМА СВИНЕЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: a 20091263
(22) 2009.08.28
(23) 2009.04.23
(43) 2011.04.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Гусев Анатолий Алексеевич; Ястребов Аскалон Сергеевич;
Згировская Алла Александровна;
Финогенов Артем Юрьевич; Лемиш
Артем Петрович (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие
"Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского
Национальной академии наук Беларуси" (BY)
BY 16858 C1 2013.02.28
BY (11) 16858
(13) C1
(19)
(56) САВЕЛЬЕВА Т.А. и др. Ветеринарная
наука - производству. Научные труды.
Вып. 37. - Минск, 2005. - С. 130-136.
ЯСТРЕБОВ А.С. Научно-практическая
конференция "Совершенствование технологии производства свинины на
комплексах и фермах промышленного
типа Минской области". - Минск, 2003. С. 125-128.
НОВИКОВ О.Г. и др. Актуальные
проблемы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы международной
научно-практической
конференции, посвященной 70-летию
со дня образования БелНИИЭВ им.
С.Н.Вышелесского. - Минск, 2000. - С.
164.
ПУНТУС И.А. Ветеринарная наука производству. Научные труды. Вып. 39. Минск, 2007. - С. 233-240.
RU 2236254 C2, 2004.
RU 2232596 C1, 2004.
(57)
1. Вакцина инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней, отличающаяся тем, что содержит культуральную жидкость с Porcine reproductive and
respiratory syndrome virus КМИЭВ-35, инактивированным теотропином в концентрации
0,4-0,5 %, и адъювант Marcol 52, взятые в количестве 40-50 и 60-50 об. % соответственно,
причем Porcine reproductive and respiratory syndrome virus КМИЭВ-35 выращен до титра
6,5-7,0 lg ТЦД50/см3 в культуре клеток MARC-145 на питательной среде Игла, содержащей
2-3 % сыворотки крови крупного рогатого скота.
2. Способ получения вакцины инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней по п. 1, заключающийся в том, что Porcine reproductive and
respiratory syndrome virus КМИЭВ-35 вносят в заражающей дозе 0,3-0,4 ТЦД50 на клетку в
культуру клеток MARC-145, выращиваемых при температуре 37-38 °С на среде Игла с 23 % сыворотки крови крупного рогатого скота, выращивают в течение 5-7 суток до титра
6,5-7,0 lg ТЦД50/см3, культуральную жидкость, содержащую вирус, отделяют, двукратно
замораживают при температуре −26 °С и оттаивают при температуре 37 °С, вирус инактивируют в течение 12-24 часов при температуре 37 °С тетропином, который вносят в куль-
BY 16858 C1 2013.02.28
туральную жидкость до концентрации 0,4-0,5 %, и затем смешивают культуральную жидкость, содержащую инактивированный вирус, с адъювантом Marcol 52 в количестве 40-50
и 60-50 об. % соответственно.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для
профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней.
Известна вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней, содержащая в своем составе аттенуированный вирус репродуктивно-респираторного синдрома
свиней с титром 104,5 ТЦД50/мл, выращенная на культуре клеток MARC-145 [1].
Известна также вакцина сухая культуральная против репродуктивно-респираторного
синдрома свиней, содержащая аттенуированный штамм вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней с титром не менее 106,0-6,5 ТЦД50/мл, выращенная на культуре клеток MARC-145 [2].
Этим вакцинам присущ недостаток, заключающийся в том, что при их применении
возможна длительная персистенция вакцинного вируса в организме свиней, передача его
от вакцинированных животных невакцинированным, прохождение вируса через плаценту
и инфицирование плодов. Кроме того, возможна вероятность обострения латентных инфекций у животных-вирусоносителей и отрицательного влияния на репродуктивную
функцию у свиноматок.
Этот недостаток устранен в вакцине инактивированной против репродуктивнореспираторного синдрома свиней с титром 106,0-6,3 ТЦД50/мл, выращенной первоначально на
первичной культуре клеток альвеолярных макрофагов свиней, а затем на перевиваемой
культуре клеток тестикул свиней. Для производства вакцины использован штамм вируса
репродуктивно-респираторного синдрома свиней, выделенный в Испании [3].
Эта инактивированная вакцина имеет недостаток, заключающийся в том, что для ее
изготовления используется первичная культура клеток альвеолярных макрофагов свиней
и первичная культура клеток тестикул свиней, что связано с тем, что для получения культуры клеток альвеолярных макрофагов свиней требуются клинически здоровые поросята в
возрасте 6-8 недель, свободные от антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней и к возбудителям других инфекционных заболеваний (классической чумы
свиней, болезни Ауески, парвовирусной болезни свиней), что является дорогостоящей и
трудоемкой операцией. Перевиваемая культура клеток тестикул свиней в Республике Беларусь не производится.
Этот недостаток устранен в вакцине инактивированной против репродуктивнореспираторного синдрома свиней (РРСС), содержащей активное вещество в виде суспензии авирулентного и очищенного анигенного материала из штамма "КПР-96" вируса
РРСС, семейства Arteriviridae, рода Arterivirus, полученного в культуре клеток MARC-145
с инфекционной активностью не менее 5,0 lg ТЦД50/мл в количестве 33,0 мас. %, и целевой
добавки - масляного адъюванта марки Montanide ISA-70 в количестве 67,0 мас. % [4].
Эта вакцина обладает недостатком, который заключается в том, что вакцина содержит
штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней европейского генотипа,
который имеет различия в нуклеотидной и аминокислотной последовательности по сравнению с вирусами репродуктивно-респираторного синдрома, выделенным в Республике
Беларусь, что может привести к снижению эффективности вакцины.
Известные способы получения заявляемой вакцины не позволяют ее получить ввиду
того, что в известных способах используются дорогостоящие компоненты, которые не
производятся в Республике Беларусь.
Известен способ получения инактивированной вакцины против репродуктивнореспираторного синдрома свиней, включающий выращивание вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней сначала на первичной культуре клеток альвеолярных
2
BY 16858 C1 2013.02.28
макрофагов, а затем - на перевиваемой культуре клеток тестикул свиней с титром
106,0-6,3 ТЦД50/мл, заражение клеток вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней одновременно со сменой ростовой среды на поддерживающую, культивирование вируса на клетках, инактивацию вируса (β-пропиолактоном, внесение в культуральную
жидкость, содержащую инактивированный вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней, масляного адъюванта [5].
Этот способ получения вакцины обладает недостатком, заключающимся в том, что
получение культуры клеток альвеолярных макрофагов свиней и свиных тестикул является
дорогостоящим и трудоемким.
Известен способ получения инактивированной вакцины против репродуктивнореспираторного синдрома свиней, включающий получение и выращивание вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней "ОБ", выделенного в России от свиноматки с
патологией репродукции, на культуре клеток MARC-145 на питательной среде с сывороткой крови крупного рогатого скота с титром 107,7-8,3 ТЦД50/мл с последующей инактивацией
вируссодержащей жидкости формалином с добавлением адъюванта [6].
Этот способ обладает недостатком, который заключается в том, что штамм "ОБ" вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, выделенный в России, имеет антигенные различия по сравнению со штаммом, выделенным в Беларуси, что не позволяет
получить эффективную вакцину для Беларуси.
Задачей предлагаемого изобретения является конструирование инактивированной
вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней и разработка способа ее
получения с использованием штамма вируса репродуктивно-респираторного синдрома
свиней, выделенного в Беларуси, что позволяет повысить эффективность вакцинации свиней против репродуктивно-респираторного синдрома свиней.
Поставленная задача достигается тем, что вакцина инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней содержит культуральную жидкость с Porcine
reproductive and respiratory syndrome virus КМИЭВ-35, инактивированным теотропином в
концентрации 0,4-0,5 %, и адъювант Marcol 52, взятые в количестве 40-50 и 60-50 об. %
соответственно, причем Porcine reproductive and respiratory syndrome virus КМИЭВ-35 выращен до титра 6,5-7,0 lg ТЦД50/см3 в культуре клеток MARC-145 на питательной среде
Игла, содержащей 2-3 % сыворотки крови крупного рогатого скота.
Кроме того поставленная задача достигается тем, что в способе получения вакцины
инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней по п. 1, заключающемся в том, что Porcine reproductive and respiratory syndrome virus КМИЭВ-35
вносят в заражающей дозе 0,3-0,4 ТЦД50 на клетку в культуру клеток MARC-145, выращиваемых при температуре 37-38 °C на среде Игла с 2-3 % сыворотки крови крупного рогатого скота, выращивают в течение 5-7 суток до титра 6,5-7,0 lg ТЦД50/см3,
культуральную жидкость, содержащую вирус, отделяют, двукратно замораживают при
температуре −26 °C и оттаивают при температуре 37 °C, вирус инактивируют в течение
12-24 часов при температуре 37 °C теотропином, который вносят в культуральную жидкость до концентрации 0,4-0,5 %, и затем смешивают культуральную жидкость, содержащую инактивированный вирус, с адъювантом Marcol 52, в количестве 40-50 и 60-50 об. %
соответственно.
Предлагаемый штамм Porcine reproductive and respiratory syndrome virus рода Arterivirus КМИЭВ-35:
Таксономическая принадлежность. Штамм вируса РРСС "КМИЭВ-35" относится к
семейству Arteriviridae, роду Arterivirus, виду Porcine reproductive and respiratory syndrome
virus.
Морфологические признаки штамма вируса репродуктивно-респираторного синдрома
свиней (РРСС) "КМИЭВ-35". Вирионы диаметром 45-70 нм, их плавучая плотность в сахарозе составляет 1,13-1,17 г/см3, хлористом цезии - 1,17-1,20 г/см3. Вирус репродуциру3
BY 16858 C1 2013.02.28
ется в цитоплазме клетки, чувствителен к хлороформу и эфиру, колебаниям pH ниже 5,0 и
выше 7,0. Снижает свою активность при 37 °C через 3 часа, при 20 °C через 20 часов, при
56° через 6 минут. Инактивируется при 56 °C в течение 45 минут.
Биологические свойства. Штамм вируса РРСС не обладает гемагглютинирующими
свойствами по отношению к эритроцитам крупного рогатого скота, кролика, кур, лошади,
морской свинки, свиньи, крысы и человека. Обладает антигенными свойствами, не чувствителен к антибиотикам.
Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных
макрофагах свиней. Чувствительными к вирусу являются 2 клоновых варианта перевиваемой линии клеток MA-104 - CL-2621 и MARC-145.
Вирулентность. Штамм вируса РРСС "КМИЭВ-35" патогенен для свиней и не патогенен для лабораторных животных (кролика, морской свинки, белой мыши).
Для выделения штамма Porcine reproductive and respiratory syndrome virus рода Arterivirus КМИЭВ-35 первоначально использовали первичную культуру клеток альвеолярных
макрофагов свиней, а затем перевиваемую культуру клеток MARC-145.
До выделения вируса РРСС на культуре клеток осуществляют следующие подготовительные операции: в качестве патологического материала для заражения культуры клеток
альвеолярных макрофагов свиней (АМС) использовали сыворотку крови от слабых и нежизнеспособных новорожденных поросят и патматериал (легкие, портальные лимфоузлы,
тонзилы, транссудат из грудной полости, селезенку) от больных и мертворожденных поросят. Из патматериала готовили 20 %-ную суспензию, которую центрифугировали при
6000 об/мин в течение 30 минут, надосадочную жидкость обрабатывали антибиотиками
(гентамицин из расчета 50-100 мкг/мл, амфотерицин 2,5 мг/мл), выдерживали в течение
60 минут при комнатной температуре, проверяли на стерильность на питательных средах
(МПБ, МПА, МППБ, среда Сабуро) и замораживали при −26 °C.
Для получения первичной культуры клеток альвеолярных макрофагов свиней использовали клинически здоровых поросят в возрасте 6-8 недель, не содержащих антител к вирусу РРСС, из свиноводческих хозяйств, благополучных по инфекционным болезням.
Животных убивали, извлекали легкие, вымывали легочные макрофаги. Количество клеток АМС подсчитывали в камере Горяева и их концентрацию суспензии доводили до 36×106 клеток/мл. Взвесь клеток вносили в пластиковые матрасы объемом 50-200 см3, с ростовой средой, инкубировали в течение 24 часов в CO2-инкубаторе с содержанием
5 % углекислоты при 37 °C. Ростовую среду сливали, монослой клеток промывали средой
Игла, вносили патологический материал (стерильную надосадочную жидкость, полученную путем центрифугирования при 4000 об/мин в течение 30 минут) в объеме 10 % от
объема поддерживающей среды. После инкубирования патматериала в течение 60 минут
при 37 °C его сливали, монослой трижды промывали средой Игла и вносили свежую поддерживающую среду Игла с добавлением 5-10 % фетальной сыворотки крупного рогатого
скота, гентамицина (50 мкг/мл), амфотерицина (2,5 мкг/мл), глютамина (0,3 мг/мл). Инкубирование патологического материала на культуре клеток АМС проводили в CO2инкубаторе в течение 4-5 дней с ежедневной микроскопией монослоя клеток [7].
Пример 1. Способ приготовления вакцины инактивированной против репродуктивнореспираторного синдрома свиней.
Способ получения вакцины инактивированной против репродуктивно-респираторного
синдрома свиней осуществляли следующим образом. Перевиваемую культуру клеток
MARC-145 выращивали в 1,5-литровых матрасах на среде Игла с добавлением к ней глютамина из расчета 0,3 мг/мл, гентамицина (50 мкг/мл), амфотерицина В (2,5 мг/мл), 1015 % сыворотки крови крупного рогатого скота. Перевиваемую культуру клеток MARC145 выращивали в матрасах в течение 2-3 суток в термостате при температуре 37-38 °C до
образования не менее чем 80-90 % сплошного монослоя, затем проводили замену ростовой питательной среды на поддерживающую, состоящую из среды Игла и 2-3 % сыворот4
BY 16858 C1 2013.02.28
ки крови крупного рогатого скота. Для заражения клеток использовали штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней Porcine reproductive and respiratory syndrome virus КМИЭВ-35 с титром 6,5-7,0 lg ТЦД50/см3, при множественности заражения 0,30,4 ТЦД50 на клетку, который культивировали в термостате в течение 5-7 суток при температуре 37-38 °C. Снижение вносимой заражающей дозы вируса менее чем 0,3-0,4 ТЦД50
на клетку ведет к увеличению времени культивирования вируса и к снижению его инфекционной активности, увеличение заражающей дозы вируса более 0,4 ТЦД50 на клетку ведет к перерасходу посевного материала и не приводит к повышению инфекционного титра
вируса.
После появления цитопатогенного действия вируса на культуре клеток MARC-145
(монослой поражен на 80-90 %) матрасы с вирусом снимают с инкубирования в термостате и подвергают двукратному замораживанию при температуре −26 °C и оттаиванию при
температуре 37 °C. Полученную культуральную вируссодержащую жидкость сливают в
общую емкость, проверяют на стерильность на питательных средах и инактивируют
теотропином в конечной концентрации 0,4-0,5 % в течение 12-24 часов в термостате при
температуре 37 °C. В инактивированный вирус вносят адъювант на основе минерального
масла Marcol 52 в концентрации 50-60 % об.
Пример 2. Адаптация вируса РРСС к клеточным культурам.
Штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней КМИЭВ-35, выделенный на первичной культуре клеток альвеолярных макрофагов свиней, с инфекционным
титром 3,5-4,0 lg ТЦД50/см3 адаптировали к перевиваемой культуре клеток MARC-145 путем последовательных пассажей. Для повышения титра вируса проводили 15-20 последовательных пассажей на культуре клеток MARC-145. После проведения 5-7 пассажей титр
вируса возрос с 4,0 до 4,5-5,25 lg ТЦД50/см3. К 15-20-му пассажу титр вируса составлял
6,65-7,25 lg ТЦД50/см3. Дальнейшее проведение пассажей на этой культуре клеток не приводило к повышению инфекционного титра вируса (табл. 1).
Таблица 1
Адаптация вируса РРСС к клеточным культурам
Культура клеток и титр вируса РРСС (lg ТЦД50/см3)
Номера пассажей
АМС
MARC-145
MA-104
PK-15
1
3,8
4,0
2
4,0
4,0
3
н.и.
4,2
5
н.и.
4,5
7
н.и.
5,25
н.и.
н.и.
9
н.и.
5,7
н.и.
н.и.
13
н.и.
6,2
н.и.
н.и.
15
н.и.
6,65
н.и.
н.и.
20
н.и.
7,25
н.и.
н.и.
25
н.и.
7,20
н.и.
н.и.
Примечания:
"-" отсутствие ЦПД вируса,
н.и. - не исследовали.
Из табл. 1 видно, что достаточно высокий титр вируса РРСС (6,65-7,25 lg ТЦД 50/см3)
получен на 15-20 пассажах на культуре клеток MARC-145.
Проведение дальнейших пассажей вируса РРСС на культуре клеток MARC-145 не
приводило к повышению его активности. В культуре клеток MA-104 и PK-15 вирус не репродуцировался.
Пример 3. Влияние множественности заражения вируса РРСС (ТЦД50/клетка) на его
накопление в культуре клеток MARC-145.
5
BY 16858 C1 2013.02.28
Определяли оптимальное количество вируса РРСС, необходимое для заражения культуры клеток MARC-145 с целью его максимального накопления. Изучали влияние множественности заражения вируса при внесении его на клетки и его накопление в них. Для
этой цели определяли количество клеток в суспензии, вносимой в матрасы в камере Горяева по общепринятой методике.
Вирус вносили в 12 матрасов с культурой клеток MARC-145 в количестве 0,2; 0,3; 0,4;
0,5 тканевых цитопатогенных доз на клетку (ТЦД50/клетка) и инкубировали в термостате при
37 °C. В качестве контроля использовали один матрас с незараженной культурой клеток.
Через 72, 96, 120 и 144 часа инкубации вируса при 37 °C по 3 матраса снимали в каждый
из названных сроков. Матрасы с инфицированной культурой клеток дважды замораживали при −26 °C и оттаивали. Отбирали образцы культуральной вирусодержащей жидкости
(по 5,0 см3) и титровали на культуре клеток MARC-145 по общепринятой методике. Титр
вируса высчитывали по Риду и Менчу. Результаты исследования приведены в табл. 2.
Таблица 2
Влияние множественности заражения вируса РРСС (ТЦД50/клетка)
на его накопление в культуре клеток MARC-145
Множественность
Титр вируса, lg ТЦД50/мл, n = 4
заражения вируса
Время инкубирования вируса РРСС, часы
РРСС (ТЦД50/клетка)
72
96
120
144
0,2
1,8 ± 0,5
4,85 ± 0,13
6,8 ± 0,04
6,85 ± 0,12
0,3
2,2 ± 0,9
5,25 ± 0,11
7,25 ± 0,20**
7,25 ± 0,09
0,4
3,2 ± 0,05
5,20 ± 0,07
7,20 ± 0,25*
7,20 ± 0,10
0,5
3,0 ± 0,04
5,0 ± 0,16
7,0 ± 0,03
7,0 ± 0,05
Примечания: * р ≤ 0,05; **р > 0,05.
Из табл. 2 видно, что при множественности заражения 0,3-0,4 ТЦД50/клетка вируса РРСС
его инфекционная активность достигала максимального значения через 120-144 часа после заражения вирусом клеток и составляла 7,2-7,25 lg ТЦД50/мл. Дальнейшее увеличение
множественности заражения вирусом клеток практически не приводило к повышению выхода вируса и не влияло на его накопление в культуре клеток.
Пример 4. Инактивация вируса РРСС теотропином.
Определяли оптимальную концентрацию теотропина, необходимую для инактивации
вируса (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 об. %), и время, необходимое для полной инактивации вируса
(1, 3, 6, 9, 12, 24, 72 часа) в термостате при 37 °C. Результаты исследования приведены в
табл. 3.
Таблица 3
Инактивация вируса РРСС теотропином
Время инактивации вируса, часы
Наименование инактиванта,
№ п/п
концентрация, об. %
1
3
6
9
12
24
72
1
0,1
2
0,2
3
0,3
4
0,4
±
±
+
+
+
5
0,5
+
+
+
+
+
Из табл. 3 видно, что тетропин в 0,4 %-ной концентрации инактивирует вирус РРСС
при 37 °C в термостате в течении 12-24 часов.
Пример 5. Определение сорбционной активности адъювантов для вируса РРСС.
Подбирали адъювант для инактивироанной вакцины РРСС, отрабатывали режим адсорбции вируса на носителях. В качестве адъюванта испытывали алюмокалиевые квасцы,
активированную целлюлозу и эмульсиген на основе минерального масла Marcol 52.
6
BY 16858 C1 2013.02.28
Алюмокалиевые квасцы и целлюлозу испытывали в концентрациях 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 об. %,
эмульсиген на основе минерального масла Marcol 52 - в объеме 50-60 %. Смесь вируса и
адъюванта в названных концентрациях выдерживали 16-18 часов при 4 °C, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 30 минут, отбирали надосадочную жидкость и титровали
ее на культуре клеток MARC-145. По разнице титров вируса в исходном и опытном образцах судили о сорбционной активности испытуемых адъювантов. Результаты исследования приведены в табл. 4.
Таблица 4
Сорбционная активность адъювантов для вируса РРСС
Наименование адъюванта, концен№ п/п
Титр вируса (lg ТЦД50/см3)
трация (об. %)
Алюмокалиевые квасцы
1
0,5
5,25 ± 0,10*
2
1,0
5,0 ± 0,08*
3
2,0
5,2 ± 0,13
4
3,0
5,15 ± 0,09
Целлюлоза активированная
5
0,5
4,85 ± 0,10
6
1,0
5,25 ± 0,05*
7
2,0
5,25 ± 0,19
8
3,0
5,2 ± 0,15
Эмульсиген на основе минерального масла Marcol 52
9
50
5,25 ± 0,05*
10
60
5,25 ± 0,09*
Примечание: * р>0,05.
Из табл. 4 видно, что алюмокалиевые квасцы в концентрации 0,5 об. %, целлюлоза активированная в 1-2 %-ной концентрации, эмульсиген на основе минерального масла Marcol 52 в объеме 50-60 % являются оптимальными для абсорбции вируса РРСС.
Пример 6. Определение антигенной и иммунологической активности вируса РРСС.
Антигенную и иммуногенную активность вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней изучали на 6 кроликах живой массой 2,6-2,8 кг, из них 2 контрольных (не
привитых). Четырем кроликам внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней вводили
вирус в дозах 2×106,0-6,25 и 3×106,0-6,25 ТЦД50/см3. Чрез 14 дней после второй иммунизации отбирали пробы крови, сыворотки крови исследовали в реакции нейтрализации на культуре
клеток MARC-145 с вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Титр кроличьей сыворотки к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней составил 6,06,8 лог2. Вакцину считают иммуногенной, если титр вируснейтрализующих антител у
кролика, иммунизированного внутримышечно, двукратно с интервалом 14 дней в дозах
2×106,0-6,25 и 3×106,0-6,25 ТЦД50/см3, составляет 4,0-5,0 лог2.
Таким образом, заявляемое изобретение позволяет сконструировать иммуногенную
вакцину инактивированную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней,
предназначенную для иммунизации свиноматок, хряков-производителей и ремонтных
свинок против названного заболевания. В способе ее производства используется штамм
вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней КМИЭВ-35, выделенный в Беларуси. Для инактивации вируса используется теотропин, в качестве адъюванта - эмульсиген на основе минерального масла Marcol 52. Подобранные в оптимальных соотношениях
компоненты вакцины инактивированной обеспечивают ее эффективность.
7
BY 16858 C1 2013.02.28
Источники информации:
1. Патент RU 2.192887, МПК 7 A 61K 39/12, C 12N 7/00 // (C 12N 7/00, C 12R 1/93),
2002.
2. ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных", ФГУ ВНИИЗЖ. Диагностика, профилактика и лечение инфекционных болезней свиней. - Владимир, 2007. - С. 24.
3. Патент DE 4432338 A1, МПК C 12N 7/00, A 61K 39/12, A 61K 35/76, C 07H 21 04,
C 12N 7/04, C 12N 15/33 // C 12N 7/06, 1995.
4. Патент RU 2316346, МПК A 61K 39 12, C 12N 7/00, A 61P 31/12, 2006 (прототип).
5. Патент DE 4432338 A1, МПК C 12N 7/00, A 61K 39/12, A 61K 35/76, C 07H 21 04,
C 12N 7/04, C 12N 15/33 // C 12N 7/06, 1995.
6. Орлянкин Б.Г. Непоклонов Е.А. Алипер Т.И. и др. Разработка инактивированной
вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф.,
посвященной 30-летию Всерос. науч.-исслед. и технолог. ин-та биолог. промышленности
8-9 июня 2000. - Щелково, 2000. - С. 89-91 (прототип).
7. Заявка BY a20050917, МПК 7 C 12N 7/00, 2006.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
8
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
129 Кб
Теги
by16858, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа