close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY17355

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.08.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61N 7/00
A 61N 5/067
A 61K 31/409
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОЙ СОНО-ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ
ТЕРАПИИ ОПУХОЛИ САРКОМЫ М-1
У КРЫСЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
(21) Номер заявки: a 20101486
(22) 2010.10.15
(43) 2012.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н.Александрова" (BY)
(72) Авторы: Истомин Юрий Петрович;
Александрова Елена Николаевна;
Чалов Вадим Николаевич; Церковский Дмитрий Александрович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение "Республиканский
научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии
им. Н.Н.Александрова" (BY)
BY 17355 C1 2013.08.30
BY (11) 17355
(13) C1
(19)
(56) Kenyon J.N. et al. Current Drug Therapy. 2009. - No. 4. - Р. 179-193.
СПИЧЕНКОВА И.С. Сочетанная фотодинамическая и рентгенотерапия саркомы М1: Автореф. дис. - Обнинск,
2005. - С. 3-11, 22-23.
СЫРЧИКОВА Е.А. и др. Сибирский
онкологический журнал. - 2008. Приложение № 1. - С. 126-127.
МИХАЙЛОВСКАЯ А.А. и др. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 147. - № 1. - С. 9598.
БУРМИСТРОВА Н.В. Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс",
"Фотодитазин": Автореф. дис. - Обнинск, 2005. - С. 4-7, 10-11, 21.
(57)
Способ комбинированной соно-фотодинамической терапии опухоли саркомы М-1 у
крысы в эксперименте, отличающийся тем, что крысе однократно вводят фотосенсибилизатор на основе хлорина е6 и низкомолекулярного поливинилпирролидона в дозе 2,5
мг/кг массы внутривенно, непосредственно после введения фотосенсибилизатора воздействуют на опухоль ультразвуком с частотой 880 кГц в непрерывном режиме интенсивностью 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин и через 3 ч проводят лазерное облучение опухоли
экспозиционной дозой 50-100 Дж/см2 при длине волны 670 нм, выходной мощности 0,491 Вт,
плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,0-1,5 см.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной онкологии, а
именно к комбинированной соно-фотодинамической терапии перевитой под кожу саркомы M-1 у крысы, и предназначено для высокоэффективного разрушения опухоли.
Способ соно-фотодинамической терапии характеризуется селективным и органощадящим действием, что позволяет использовать его в случаях, когда другие способы неэффективны или противопоказаны, характеризуется высокой эффективностью и практически
не имеет противопоказаний.
BY 17355 C1 2013.08.30
Известен способ сонодинамической терапии с предварительным введением в основание
опухоли пирогенала в дозе 40-1000 мкг/см2 с регистрацией температуры опухоли до достижения стойкой гиперемии опухолевой ткани в течение 12-24 ч с последующим нанесением на опухоль композиции, содержащей 3-10 мг фотосенсибилизатора Фотосенс, геля
"Ультрамикс" и 20-200 мкг пирогенала [1]. Далее проводят воздействие ультразвуком с
интенсивностью 0,2-0,4 Вт/см2, лабильно, непрерывно в течение 5-8 мин. После этого
композицию оставляют на коже на 1-2 ч. Затем проводят сеанс фотодинамической терапии (ФДТ) равномерно по всей площади опухоли, всего на курс 3-5 процедур. Предложенный способ обеспечивает пролонгированное поддержание оптимальной дозы
фотосенсибилизатора (ФС) в опухоли, достаточной для эффективного действия ФДТ.
Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:
накопление ФС в здоровых тканях организма, что приводит к развитию фототоксической реакции кожных покровов при воздействии солнечного света, нарушению функциональной активности органов с высокой метаболической активностью;
длительный период выведения ФС из организма, что приводит к возникновению частых побочных реакций;
риск инфицирования;
сложность использования и значительная продолжительность сроков терапии.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ комбинированной соно- и
фотодинамической терапии с сублингвальным введением фотосенсибилизатора, представляющего собой металлокомплексное производное хлорина, Sonnelux-1 [2]. Работа выполнена на крысах с перевитой экспериментальной опухолью S-180 Sarcoma.
Фотооблучение опухолей крыс, которым сублингвально в течение 2-5 ч вводили Sonnelux1, проводили через 48 ч после введения препарата при длинах волн излучения 660 и 940 нм
(±30 нм). Сонодинамическое воздействие производили с интенсивностью 0,3-1,2 Вт/см2 и
частотой 1,0 мГц. Соно- и фотодинамическое воздействие производили в течение 3 дней.
Осуществляли динамическое наблюдение за животными, оценивали процент торможения
роста опухоли и производили гистологическое исследование опухолей, подвергнутых
воздействиям.
Однако известный, принятый за прототип, способ обладает рядом недостатков, таких
как сложность схемы использования, сублингвальное введение фотосенсибилизаторов
(ФС) и низкая эффективность компонентов в качестве монотерапии.
Задача, на решение которой направлено изобретение, заключается в повышении эффективности комбинированного лечения перевитой под кожу саркомы M-1 у крысы путем
увеличения глубины возникающих некрозов за счет суммирования противоопухолевых
эффектов каждого из компонентов способа лечения.
Поставленная задача решается за счет того, что в предлагаемом способе комбинированного лечения экспериментальной опухоли саркомы M-1 крысе внутривенно однократно вводят фотосенсибилизатор на основе порфиринов [3], содержащий в качестве
основного действующего вещества хлорин е6 и низкомолекулярный медицинский поливинилпирролидон, в дозе 2,5 мг/кг массы тела животного, непосредственно после внутривенного введения фотосенсибилизатора экспериментальную опухоль облучают
ультразвуком в непрерывном режиме с частотой 880 кГц, интенсивностью 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин, через 3 ч проводят дополнительное лазерное облучение опухоли экспозиционной дозой 50-100 Дж/см2 при длине волны 670 нм, мощности излучения на выходе
0,491 Вт, плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна
1,0-1,5 см.
Способ осуществляется следующим образом.
Белой беспородной крысе выполняют перевивку опухоли M-1 (саркома M-1), закупленную в банке опухолевых штаммов ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Опухоль перевивают подкожно, в левую паховую область путем введения 0,5 мл 10 % опухолевой
2
BY 17355 C1 2013.08.30
взвеси в растворе Хенкса. Животное берут в эксперимент через 9-11 дней по достижению
размеров опухоли 1,5-2,0 см в диаметре. Все манипуляции на животном осуществляют
после введения последнего в состояние нейролептоаналгезии (0,25 % раствор дроперидола и 0,005 % раствор фентанила в соотношении 2:1 по 0,3 мл на 100 г массы животного,
внутримышечно).
Все животные (10 белых беспородных крыс, весом 180±20 г, разводки вивария РНПЦ
ОМР им. Н.Н. Александрова) распределены на 2 группы в зависимости от параметров
ультразвукового и фотодинамического облучения опухоли.
Наркотизированную крысу с перевитой опухолью M-1 фиксируют, депилируют шерсть
над опухолью и внутривенно вводят фотосенсибилизатор на основе хлорина е6 и низкомолекулярного поливинилпирролидона в дозе 2,5 мг/кг.
Сеанс ультразвукового облучения (аппарат УЗТ 1.04-0 с излучателем площадью 1,0
2
см ; Россия) проводят непосредственно после введения ФС ультразвуком частотой 880
кГц при интенсивности 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин в непрерывном режиме.
Фотооблучение опухоли осуществляют через 3 ч с использованием лазерного аппарата
"LD-680-2000" (Биоспек) экспозиционной дозой 50-100 Дж/см2 при длине волны 670 нм,
мощности излучения на выходе 0,491 Вт, плотности потока мощности излучения 0,28
Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,0-1,5 см.
В контрольной группе ФС вводят без последующего облучения опухоли ультразвуком,
но с фотодинамическим воздействием в экспозиционных дозах 50 и 100 Дж/см2.
Через 24 ч после облучения наркотизированной крысе проводят витальное окрашивание синьки Эванса. Для этого в хвостовую вену крысы вводят 1 % раствор синьки Эванса
из расчета 1 мл на 100 г. Умерщвление животного осуществляют с помощью общепринятого метода эвтаназии. Опухоль иссекают, фиксируют в 10 % растворе формалина и делают поперечные срезы по наибольшему диаметру новообразования. Срезы регистрируют
цифровой камерой, сопряженной с компьютером. Расчет площади некрозов опухоли проводят с помощью компьютерных программ "Damage of tumor".
Наибольший процент площади некроза опухоли M-1 крысы наблюдается при введении
ФС в дозе 2,5 мг/кг массы тела животного с последующим проведением ультразвукового
облучения с интенсивностью 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин непосредственно после введения
препарата и фотооблучением опухоли в экспозиционных дозах 50 и 100 Дж/см2 при длине
волны лазера 670 нм, мощности излучения на выходе 0,491 Вт, плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,0-1,5 см через 3 ч после введения
Фотолона (фиг. 1, 2).
На фиг. 1 и 2 отмечена зависимость возникновения площадей некрозов экспериментальной опухоли саркомы M-1 от экспозиционной дозы света. При дозе 50 Дж/см2 данный
показатель составляет 94,3 %, при 100 Дж/см2 100 %.
Отличительными признаками от прототипа являются:
внутривенное введение фотосенсибилизатора на основе порфиринов, содержащего в
качестве основного действующего вещества хлорин е6 и поливинилпирролидон низкомолекулярный медицинский, в дозе 2,5 мг/кг;
проведение ультразвукового облучения опухоли с интенсивностью 0,7 Вт/см2, частотой
880 кГц и длительностью сеанса 10 мин;
фотооблучение опухоли в экспозиционных дозах 50 и 100 Дж/см2 при длине волны лазера 670 нм, мощности излучения на выходе 0,491 Вт, плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,5 см.
Техническим результатом является создание эффективной концентрации ФС в опухолевой ткани и существенное повышение эффективности комбинированной терапии при
минимальном риске возникновения побочных реакций. Предлагаемый способ позволяет
направленно воздействовать на опухолевый очаг. Облучение накопившегося в ткани опухоли ФС ультразвуком соответствующих параметров приводит к его активации, вызывая
3
BY 17355 C1 2013.08.30
индуцированную фотохимическую реакцию с образованием синглетного кислорода, обладающего высокой окислительной способностью. Одним из механизмов, обуславливающих
механические, физико-химические и термические нарушения в опухолевой ткани, является эффект кавитации.
Пример 1.
Лабораторной крысе массой 190 г с перевитой опухолью M-1 (1,8 см в диаметре) после
введения в состояние нейролептоаналгезии и фиксации выполнили депиляцию шерсти над
опухолью. В хвостовую вену через тонкий катетер ввели фотосенсибилизатор на основе
хлорина е6 и низкомолекулярного поливинилпирролидона в дозе 2,5 мг/кг. Непосредственно после введения ФС осуществлено облучение экспериментальной опухоли ультразвуком с интенсивностью ультразвука 0,7 Вт/см2, частотой 880 кГц и длительностью
воздействия 10 мин. Через 3 ч проведен сеанс фотодинамической терапии в экспозиционной дозе 50 Дж/см2 при длине волны 670 нм, мощности излучения на выходе 0,491 Вт,
плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,0 см в
течение 3 мин.
Через 24 ч после облучения в хвостовую вену крысы ввели 1 % раствор синьки Эванса
из расчета 1,0 мл на 100 г массы тела животного. Умерщвление осуществили спустя 2 ч,
прибегнув к общепринятому методу эвтаназии (хлороформ). Опухоль иссекли, в течение
2 ч зафиксировали в 10 % растворе формалина и сделали поперечные срезы по наибольшему диаметру новообразования. Срезы зафиксировали цифровой камерой, сопряженной
с компьютером. Расчет площади некрозов опухоли осуществляли с использованием специальной компьютерной программы "Damage of tumor".
Площадь гистотопографического среза опухоли M-1 - 1,12 см2, площадь некроза опухоли - 1,06 см2, процент площади некроза опухоли - 94,3±1,32 % (фиг. 1).
Пример 2.
Лабораторной крысе массой 185 г с перевитой опухолью M-1 (2,1 см в диаметре) после
введения в состояние нейролептоаналгезии и фиксации выполнили депиляцию шерсти над
опухолью. В хвостовую вену через тонкий катетер ввели фотосенсибилизатор на основе
хлорина е6 и низкомолекулярного поливинилпирролидона в дозе 2,5 мг/кг. Непосредственно после введения ФС осуществлено облучение экспериментальной опухоли ультразвуком с интенсивностью ультразвука 0,7 Вт/см2, частотой 880 кГц и длительностью
воздействия 10 мин. Через 3 ч проведен сеанс фотодинамической терапии в экспозиционной дозе 100 Дж/см2 при длине волны 670 нм, мощности излучения на выходе 0,491 Вт,
плотности потока мощности излучения 0,28 Вт/см2 и диаметре светового пятна 1,5 см в
течение 6 мин.
Через 24 часа после облучения в хвостовую вену крысы ввели 1 % раствор синьки
Эванса из расчета 1,0 мл на 100 г массы тела животного. Умерщвление осуществили спустя 2 ч, прибегнув к общепринятому методу эвтаназии (хлороформ). Опухоль иссекли, в
течение 2 ч зафиксировали в 10 % растворе формалина и сделали поперечные срезы по
наибольшему диаметру новообразования. Срезы зафиксировали цифровой камерой, сопряженной с компьютером. Расчет площади некрозов опухоли осуществляли с использованием специальной компьютерной программы "Damage of tumor".
Площадь гистотопографического среза опухоли M-1 - 1,25 см2, площадь некроза опухоли - 1,25 см2, процент площади некроза опухоли - 100 % (фиг. 2).
Таким образом, предлагаемый способ комбинированной соно-фотодинамической терапии опухоли саркомы M-1 у крысы позволяет существенно повысить эффективность лечения за счет значительного увеличения площади и глубины развившихся некрозов.
4
BY 17355 C1 2013.08.30
Источники информации:
1. Патент РФ на изобретение 2300403, МПК A61N5/067, A61N7/02, A61K31/739,
A61K31/409, A61K9/06, A61P35/00, 2006.
2. Julian Norman Kenyon, Richard James Fulle, Thomas Joseph Lewis. Activated cancer
therapy using light and ultrasound - a case series of sonodynamic photodynamic therapy in 115
patients over a 4 year period. - Current Drug Therapy. - 2009. - Nо. 4. - P. 179-193 (прототип).
3. BY 5651, МПК A61K31/409, A61P35/02.
Фиг. 1
Фиг. 2
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
385 Кб
Теги
by17355, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа