close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY17417

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.08.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 17417
(13) C1
(19)
A 61K 39/102 (2006.01)
A 61K 39/10 (2006.01)
A 61K 39/395 (2006.01)
ГИПЕРИММУННАЯ СЫВОРОТКА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ
(21) Номер заявки: a 20101388
(22) 2010.09.27
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебская ордена "Знак Почета"
государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(72) Авторы: Вербицкий Анатолий Анатольевич; Даровских Светлана Викторовна; Корочкин Рудольф Борисович (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебская ордена "Знак Почета"
государственная
академия
ветеринарной медицины" (BY)
(56) RU 2333771 C2, 2008.
RU 2357756 C2, 2009.
RU 2304442 C1, 2007.
RU 94023126 A1, 1997.
BY 6012 C1, 2004.
RU 2191598 C2, 2002.
BY 17417 C1 2013.08.30
(57)
Сыворотка гипериммунная против пневмонии свиней, отличающаяся тем, что содержит антитела к Pasteurella multocida серотипов A, B и D и антитела к Bordetella bronchiseptica, причем указанная сыворотка получена путем иммунизации вола-продуцента
антигенами Pasteurella multocida серотипов A, B и D и антигеном Bordetella bronchiseptica,
взятыми в равных количествах.
Изобретение относится к ветеринарной биологической промышленности, в частности
к гипериммунным сывороткам, и может быть использовано для лечения инфекционных
пневмоний свиней, вызываемых пастереллами и бордетеллами.
Возникновение болезней органов дыхания обусловлено воздействием комплекса факторов, главные из которых представляют собой инфекционные агенты: бактерии, вирусы
и их ассоциации. Одним из таких факторов является ассоциация микроорганизмов Pasteurella multocida серотипов A, B, D и Bordetella bronchiseptica, которые наиболее часто
вызывают развитие пневмоний у свиней с последующей атрофией носовых раковин.
Для лечения свиней, больных этой формой пневмонии, используют многочисленные
антибактериальные препараты. Однако применение антибиотиков имеет большое количество негативных и побочных действий, связанных с их токсическим, иммунодепрессивным
и дисбактериальным действием как для организма животных, так и людей, употребляющих в пищу мясо от этих животных, что обусловливает необходимость использования гипериммунной сыворотки для лечения этих инфекции.
Известна гипериммунная сыворотка против пастереллеза сельскохозяйственных животных, однако она не обеспечивает 100 %-ной иммунологической защиты от бактериальных пневмоний свиней, так как включает в себя антитела только против одного варианта
Pasteurella multocida и не содержит антител против Bordetella bronchiseptica [1].
BY 17417 C1 2013.08.30
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание высокоэффективного биологического препарата для лечения инфекционных пневмоний свиней, вызываемых ассоциацией пастерелл и бордетелл, обеспечивающего 100 %-ный лечебнопрофилактический эффект.
Технический результат достигнут путем включения в состав полиантигена для получения гипериммунной сыворотки микроорганизмов P. multocida серотипов A, B, D и
B. bronchiseptica.
Гипериммунная сыворотка против пневмонии свиней, отличающаяся тем, что содержит
антитела к Pasteurella multocida серотипов A, B и D и антитела Bordetella bronchiseptica,
причем указанная сыворотка получена путем иммунизации вола-продуцента антигенами
Pasteurella multocida серотипов A, B и D и антигеном Bordetella bronchiseptica, взятых в
равных количествах.
Введение предлагаемой сыворотки инициирует развитие пассивного иммунитета в
организме животных. В ответ на введение антигенов происходит образование не только
специфических антител, но и других стимулирующих веществ. Поэтому данный лечебнопрофилактический биопрепарат, кроме специфического лечебного влияния, оказывает и
неспецифическое стимулирующее действие, повышая защитные функции и тонус организма.
Изготовление гипериммунной сыворотки против пневмонии свиней, содержащей антитела к Pasteurella multocida серотипов A, B, D и Bordetella bronchiseptica осуществляется
по общепринятой схеме.
Пример 1.
На начальном этапе изготавливают поливалентный антиген путем выращивания бактериальных культур, проверки их биологических свойств, составления антигена, его инактивации и концентрирования.
Для изготовления антигена штаммы P. multocida серотипов A, B, D и B. bronchiseptica
первоначально культивируют при температуре 37,5 ± 0,5 °С в течение 18-20 ч во флаконах
объемом 100 см3, содержащих 30-50 см3 модифицированной питательной среды.
Проверку выросшей культуры первой генерации на чистоту роста проводят путем
микроскопии окрашенных по Граму мазков, определения ее культуральных свойств на
МПА в чашки Петри и определения ферментативных свойств на коротком цветном ряде.
Проверенные таким образом культуры из флакона засевают каждую в отдельности в
20-литровые баллоны, наполненные не более чем на одну треть объема модифицированной питательной средой. Культивирование культуры второй генерации проводят при температуре 37,5 ± 0,5 °С в течение 20-24 ч. Полученную матровую расплодку проверяют на
чистоту роста макроскопически и путем микроскопии окрашенных по Граму мазков, после чего определяют концентрацию микробных клеток.
Инактивацию полученных культур проводят после смешивания в одной емкости в
равных соотношениях по 25 % P. multocida серотипов A, B, D и 25 % B. bronchiseptica,
0,3 %-ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 %) в течение
14 суток при температуре 36-38 °С.
Для сорбции антигена к инактивированной культуре добавляют 4 %-ный раствор гидроокиси алюминия до конечного содержания 0,4 % основного вещества. Сорбцию поливалентного антигена проводят в течение 3-х суток при 20 °С. После сорбции и отстоя
готовый антиген концентрируют до содержания 8 млрд. микробных клеток в 1 см3 путем
декантации надосадочной прозрачной жидкости. Стерильность, величину pH и безвредность сконструированного антигена проверяют согласно общепринятой методике. Показатель pH должен находиться в пределах от 7,0 до 7,6.
2
BY 17417 C1 2013.08.30
После установления стерильности и безвредности антиген фасуют во флаконы объемом
500 см3 и хранят не более восьми месяцев в темном месте при температуре от +2 до +15 °С,
в течение которых он пригоден для гипериммунизации волов-продуцентов.
Гипериммунизацию волов-продуцентов проводят путем четырехкратного внутрибрюшинного введения антигена в количествах 5, 10, 15 и 20 см3 соответственно с интервал между инъекциями 5 суток.
Отбор, переработку крови, а также консервирование сыворотки производят согласно
общепринятой методике.
Консервированную сыворотку после предварительного выдерживания в седиментаторах при температуре +2 - +15 °С в течение 20-60 суток подвергают очистке путем грубой
и клалирующей фильтрации.
Стерилизующая фильтрация осветленной сыворотки производится с использованием
фильтровальных установок, предварительно собранных стерилизующими картриджами и
стерилизованных текучим паром при температуре +110 °С в течение 1,5 ч. Контроль сыворотки перед фасованием полуфабриката осуществляется путем определения концентрации фенола, кальция, белка, уровня pH.
Расфасовку, укупоривание и этикетировку сыворотки производят в чистые стерильные флаконы объемом 200 см3, укупоренные резиновыми пробками и закатанные металлическими колпачками.
Контроль полученного биопрепарата по внешнему виду, цвету, наличию видимых механических включений, стерильности, безвредности и концентрации водородных ионов
(pH) проводят согласно общепринятых методик.
Для испытания иммунной активности используют белых мышей массой 16-18 г в количестве по 3 головы на каждую разновидность пастерелл и штамм бордетелл. Сыворотку
в количестве 0,2 см3 вводят в разные точки в смеси со стерильным физиологическим раствором в общем объеме 0,5 см3. В контроле используют по три неиммунизированных животных на каждый штамм пастерелл и бордетелл. Через 24 ч каждую группу мышей
заражают 3-5 ЛД50 контрольных штаммов пастерелл и бордетелл. За зараженными животными ведут наблюдение в течение 7 суток с момента гибели контрольных. По результатам
проведенного опыта сыворотку считают активной (иммуногенной) в случае гибели контрольных животных с отсутствием гибели опытных животных.
Пример 2.
По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец.
Для получения полиантигена P. multocida серотипов A, B, D берут по 30 % на каждый
штамм, а содержание B. bronchiseptica составляет 10 %. Инактивируют полиантиген
0,2 %-ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 %) в течение
14 суток при температуре 36-38 °С.
Пример 3.
По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец:
Для получения полиантигена P. multocida серотипов A, B, D берут по 20 % на каждый
штамм, а содержание B. bronchiseptica составляет 40 %. Инактивируют полиантиген
0,1 %-ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 %) в течение
14 суток при температуре 36-38 °С.
Пример 4.
По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец.
Для получения полиантигена P. multocida серотипов A, B, D берут по 15 % на каждый
штамм, а содержание B. bronchiseptica составляет 55 %. Инактивируют полиантиген
3
BY 17417 C1 2013.08.30
0,4 %-ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 %) в течение 10
суток при температуре 36-38 °С.
Сыворотка, приготовленная по примеру 1, обладает 100 %-ной иммунной активностью. Тогда как сыворотка, полученная по примерам 2-4, не обладает достаточной иммунной активностью.
Использование гипериммунной сыворотки против пневмонии свиней с профилактической целью в дозе 1 см3 на 1 кг живой массы и в дозе 2 см3 на 1 кг живой массы с лечебной целью обеспечивает 100 %-ную защиту животных, не вызывая осложнений и
побочных эффектов. При этом применение с аналогичной целью гипериммунной сыворотки против пастереллеза сельскохозяйственных животных обеспечивает защиту свиней
в 78 % случаев. Установлено, что гипериммунная сыворотка против пневмонии свиней
сохраняет свою эффективность на срок не менее 1 года (период наблюдения), при условии
хранения в темном сухом месте при температуре от +2 до +15 °С.
Источники информации:
1. Медведев А.П. Противобактериальные лечебно-профилактические сыворотки: монография. - Витебск: УО ВГАВМ, 2007. - С. 151-160.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
80 Кб
Теги
патент, by17417
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа