close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY17828

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 17828
(13) C1
(19)
(46) 2013.12.30
(12)
(51) МПК
A 61M 1/38
A 61K 35/18
A 61K 47/30
A 61P 7/08
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
БИОСЕЛЕКТИВНЫЙ СОРБЕНТ И СПОСОБ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО
УДАЛЕНИЯ ИЗ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА АНТИТЕЛ К РЕЗУС-ФАКТОРУ
(21) Номер заявки: a 20110139
(22) 2011.02.04
(23) 2010.09.17
(43) 2012.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Голубович Владимир Петрович; Макаревич Денис Александрович; Федоров Александр Александрович; Козлякова Ольга Владимировна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) ВАЛУЕВА Т.А. и др. Синтетические
полимеры медицинского назначения.
Тезисы докладов VII Всесоюзного
симпозиума. - Минск, 1985. - С. 14.
RU 2360707 C1, 2009.
SU 1748830 A1, 1992.
SU 1777893 A1, 1992.
SU 1708400 A1, 1992.
SU 1479511 A1, 1989.
RU 2325172 C2, 2008.
ШАБЛОВСКИЙ В.О. и др. Вестник
БГУ. - Сер. 2. - 2009. - № 3. - С. 10-15.
(57)
1. Биоселективный сорбент для избирательного удаления из крови человека антител к
резус-фактору общей формулы:
BY 17828 C1 2013.12.30
NH2
C
O
CH2
CH2 CH
CH
n
C
O
m
,
NH
Тень резус-положительного эритроцита
где n - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,
представляющих собой тени резус-положительных эритроцитов, которое имеет значение
от 1 до 70, m - число участков цепи с лигандом, имеющее интервал значений 50-10000.
2. Способ избирательного удаления антител к резус-фактору, при котором проводят
гемосорбцию с использованием биоселективного сорбента по п. 1.
Изобретение относится к области биоорганической химии и медицины и может быть
использовано для избирательного удаления из крови человека антител к резус-фактору, в
том числе из крови сенсибилизированных женщин.
BY 17828 C1 2013.12.30
Резус-конфликт - иммунологическая несовместимость крови матери и плода по резусфактору, в результате чего в организме матери синтезируются антитела к резус-фактору.
Резус-антитела вступают в реакцию с резус-положительными эритроцитами плода, что
ведет к их гемолизу [1].
Известен способ удаления антител к резус-фактору из плазмы крови, который заключается в проведении процедуры плазмафереза. Однако клинический эффект такой процедуры
является непродолжительным (от нескольких дней до 2-3 месяцев), а снижение антител к
резус-фактору - неполным. Метод плазмафереза обладает следующими недостатками: неселективностью - удаляются все компоненты плазмы; ослабление иммунного статуса пациентов из-за сопутствующего удаления антител, не являющихся цитотоксическими в
отношении проводимой терапии; тяжело переносится пациентами и имеется риск осложнений; требует использования плазмозамещающих растворов [2].
Задача изобретения - получение нового биоселективного сорбента для избирательной
сорбции антител к резус-фактору из крови человека с помощью метода гемосорбции. Ранее метод гемосорбции для удаления антител к резус-фактору не применялся. Для решения данной задачи в качестве полимера-матрицы используют полиакриламидный гель, а в
качестве биоселективного лиганда - тени резус-положительных эритроцитов.
Сорбент имеет следующую химическую формулу:
NH2
C
CH2
O
CH2
CH
CH
n
C
O
m ,
NH
Тень резус-положительного эритроцита
где n - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,
которое имеет значение от единицы до 70, m - число участков цепи с лигандом, имеющее
интервал значений 50-10000.
Заявляемый афинный сорбент аналогов не имеет.
Выбор полиакриламидной матрицы обусловлен ее стабильностью, биологической
инертностью, возможностью введения лиганда на стадии полимеризации. Для превращения вводимого лиганда в мономер проводят частичное ацилирование акрилоилхлоридом
аминокислот, входящих в состав белков мембраны эритроцитов. Полученное производное
используют как мономер при сополимеризации акриламида, N,N'-метиленбисакриламида
в присутствии персульфата аммония и N,N,N,N'-тетраметилендиамина в качестве инициаторов полимеризации [3].
Получение заявляемого сорбента приведено в примере 1.
Пример 1.
Тени резус-положительных эритроцитов выделяют в соответствии с методикой Доджа [4].
К раствору, содержащему 0,033 г выделенных теней резус-положительных эритроцитов, объемом 5 мл 2 %-ного раствора бикарбоната натрия по каплям прибавляют 0,008 мл (0,09 ммоль)
акрилоилхлорида и перемешивают реакционную смесь в течение 30 мин, затем фильтруют.
В реакционный сосуд вносят 0,342 г акриламида и 0,036 г N,N'-метиленбисакриламида.
После растворения компонентов к реакционной смеси прибавляют 0,015 г персульфата
аммония и 0,01 мл N,N,N,N'-тетраметилендиамина. Через 1-3 мин образуется прозрачный
гель. Гель оставляют на 30 мин, затем измельчают с использованием шприца с диаметром
выходного отверстия 2 мм. Опалесцирующие гранулы многократно промывают дистиллированной водой (общий объем 0,5 л), а затем 0,9 %-ным раствором NaCl (общий объем 0,3 л).
2
BY 17828 C1 2013.12.30
Концентрация лиганда в набухшем геле составляет 1-2 мг/мл. Отмытый гель хранят в
0,9 %-ном растворе NaCl в холодильнике.
Заявляемый сорбент может быть использован для селективного удаления антител к
резус-фактору из крови человека.
Метод удаления антител с помощью заявляемого сорбента приведен в примере 2.
Сорбционная избирательность заявляемого сорбента подтверждается сорбционными характеристиками, приведенными в примере 3.
Пример 2.
Стендовые исследования по оценке сорбционной возможности заявляемого сорбента
проводят с использованием методики плазмасорбции [5]. Используют плазму крови беременных женщин с диагнозом резус-конфликт с высоким титром антирезусных антител.
Гель, содержащий в качестве лиганда тени резус-положительных эритроцитов (10 мл),
промывают физиологическим раствором NaCl (0,9 %) (общий объем 100 мл). Гель помещают в
массообменную колонку объемом 20 мл. Для создания замкнутого контура используют универсальную систему для гемотрансфузий. Систему подключают к перистальтическому насосу
и пропускают плазму резус-сенсибилизированного пациента через колонку с сорбентом.
Пробы для проведения непрямой реакции Кумбса отбирают до начала эксперимента и
после 20,40,60 мин эксперимента в количестве 1 мл. Для сравнения полученных результатов проводят стендовый эксперимент на образце сорбента без лиганда. Для определения
титра антител к резус-фактору применяют методику проведения непрямой пробы Кумбса [6].
Пример 3.
Для определения титра антител к резус-фактору в пробах плазмы крови используют
стандартные, отмытые резус-положительные эритроциты первой группы от семи доноров;
сыворотку Кумбса.
Одну каплю исследуемой сыворотки и четыре капли эритроцитов инкубируют в течении 45 мин. Затем титруют и добавляют две капли сыворотки Кумбса. Реакцию агглютинации оценивают в течение 5 мин.
Результаты исследований показали, что на полиакриламидной матрице, содержащей в
качестве лиганда тени резус-положительных эритроцитов, адсорбировалось 70 % антител
к резус-фактору, что свидетельствует о высокой сорбционной способности заявляемого
сорбента по отношению к антителам к резус-фактору.
Источники информации:
1. Сухих Г.Т., Ванько Л.В. Иммунология беременности. - М.: РАМН, 2003. - 400 с.
2. Конопляников А.Г. Гемолитическая болезнь плода при резус-сенсибилизации: современные аспекты диагностики, лечения и профилактики // Акуш. и гин. - 2005. - № 6.С.63-68.
3. Талако Т.М., Макаревич Д.А., Рябов А.А., Ровдо И.М., Кирковский В.В., Голубович В.П..
Биоспецифическая сорбция: новые направления в комплексной терапии заболеваний. Актуальные вопросы экстракорпоральной терапии. Мат. научно-пр.конф. - М., 2007. - С. 72.
4. Dodge I.T. // Arch. Biochem. Biophys. - 1963. - Vol. 100. - No. 1. - P. 119-130.
5. Глокнер В.М., Саклер Е. Плазмосорбция через иммобилизированный конканавалин
А и протеин А // 7-й Международный симпозиум по гемосорбции. - 1985. - № 4. - С. 3-7.
6. Луговская С.А. и др. Лабораторная гематология. - М., 2002. - С. 116-125.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
76 Кб
Теги
by17828, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа