close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY18147

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2014.04.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 9/16
A 61L 27/18
C 08G 63/89
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
МИКРОЧАСТИЦЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ПОЛИКАПРОЛАКТОН,
И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
(21) Номер заявки: a 20100289
(22) 2008.07.23
(85) 2010.02.26
(86) PCT/NL2008/050506, 2008.07.23
(87) WO 2009/014441, 2009.01.29
(43) 2010.10.30
(71) Заявитель: АКТИС ИП БВ (NL)
(72) Авторы: СУПЕР, Хендерикус; МИЙНЕН, Пауль Виллем; ЦИЙЛСТРА,
Питер Герард; ГРИЙПМА, Дирк
Вибе (NL)
BY 18147 C1 2014.04.30
BY (11) 18147
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: АКТИС ИП БВ
(NL)
(56) IOOSS P. et al. Biomaterials, 2001, v. 22,
p. 2785-2794.
US 2003/0157187 A1.
EP 1754469 A1, 2007.
EP 1872803 A1, 2008.
(57)
1. Способ получения микрочастиц полимера на основе капролактона, включающий
следующие этапы:
а) растворение полимера на основе капролактона в растворителе и смешивание растворенного полимера с жидкостью, содержащей метилцеллюлозу в концентрации от около 1 до около 5 мас. % и имеющей вязкость от около 20 до около 10000 сантипуаз, и
б) формирование микрочастиц полимера на основе капролактона из полученного на
стадии а) раствора.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что растворитель выбирают из соединений, содержащих галоген.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что растворителем является дихлорметан.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что этап б) осуществляют путем испарения
растворителя из жидкости, содержащей диспергированные микрочастицы полимера на
основе капролактона.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что используют метилцеллюлозу с молекулярной массой 63000.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что концентрация метилцеллюлозы в жидкости
составляет от около 1 до около 2,5 мас. %, предпочтительно около 1 мас. %.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что полимер на основе капролактона является линейным гомополимером, сополимером, терполимером или смесью гомо-, со- и терполимеров.
8. Микрочастицы полимера на основе капролактона, полученные способом по любому
из пп. 1-7 и имеющие по меньшей мере следующие характеристики:
а) диаметр от 5 до 200 мкм,
б) однородные плотность, форму и содержание,
в) преимущественно сферическую форму и
г) гладкую поверхность.
BY 18147 C1 2014.04.30
9. Микрочастицы по п. 8, отличающиеся тем, что имеют диаметр от 25 до 75 мкм.
10. Микрочастицы по п. 8, отличающиеся тем, что полимер на основе капролактона
не содержит мономер, выбранный из группы, включающей гликолид, диоксанон, триметиленкарбонат, лактид и их комбинации.
11. Микрочастицы по п. 10, отличающиеся тем, что полимер на основе капролактона
является гомополимером капролактона.
12. Биоразлагаемый инъецируемый гель, содержащий микрочастицы по любому из
пп. 8-11, носитель и при необходимости активный ингредиент.
13. Гель по п. 12, отличающийся тем, что активный ингредиент является анестетиком.
14. Гель, пригодный в качестве имплантата или наполнителя, содержащий микрочастицы по любому из пп. 8-11 и носитель.
15. Косметический гель, содержащий микрочастицы по любому из пп. 8-11 и носитель.
16. Применение геля по любому из пп. 12-15 для приготовления лекарственного средства для лечения дефектов и недостатков кожи, и/или для управления функцией мочевого
пузыря, и/или для управления желудочным рефлюксом, и/или для лечения эректильной
дисфункции, и/или для лечения голосовых связок.
17. Применение геля по п. 15 в косметических целях.
Изобретение касается способа получения микрочастиц, содержащих поли(ε-капролактон) или поликапролактон (PCL), микрочастиц, биоразлагаемого инъецируемого геля и
некоторых вариантов применения этого геля.
С увеличением возраста и/или как следствие некоторых заболеваний мягкие ткани тела, включая мышцы и жир, могут ослабевать и/или уменьшаться, что влияет на внешний
вид и/или снижает их функцию. Например, сфинктеры, которые управляют многими автономными функциями тела, такими как функция мочевого пузыря и желудочный рефлюкс, ослабевают с возрастом или в результате заболевания. Уже были разработаны
некоторые медицинские наполнители, такие как инъецируемый бычий коллаген. Этот
наполнитель имеет некоторые недостатки, связанные, главным образом, с риском аллергии и угрозой заболевания болезнью Кройцфельда-Якоба. В качестве альтернативы инъецируемому бычьему коллагену были разработаны другие наполнители, такие как
имплантаты, содержащие суспензию частиц или эмульсию частиц полимера, содержащего
повторяющиеся единицы молочной кислоты и/или гликолевой кислоты [US 2003/093157
или WO 98/56431].
Однако наполнитель, раскрытый в каждой из этих патентных заявок, имеет некоторые
недостатки: смешиваемость и текучесть (т.е. впрыскиваемость струей) геля, содержащего
такой наполнитель, не являются оптимальными из-за структуры конечного продукта.
Следовательно, по-прежнему существует необходимость в медленно рассасывающемся биоразлагаемом медицинском или косметическом имплантате, который не будет вызывать каких-либо нежелательных реакций в человеческом теле и который будет иметь
лучшие свойства, такие как текучесть, из-за преимущественно сферических микросфер,
которые позволяют избежать агрегации, закупоривания иглы и формирования узелков при
инъекции.
Неожиданным образом авторы изобретения обнаружили, что микросферы, имеющие
лучшие свойства, такие как текучесть, могут быть получены с помощью эффективного и
быстрого способа, в котором используют исходную смесь, имеющую сравнительно высокую вязкость и содержащую растворенный PCL и поверхностно-активное вещество. Каждая из особенностей этого способа подробно описана здесь.
2
BY 18147 C1 2014.04.30
Способ.
В своем первом аспекте изобретение касается способа получения микрочастиц, содержащих поли(ε-капролактон), при этом способ включает следующие этапы:
а1) растворение полимера на основе капролактона в растворителе и смешивание растворенного полимера с жидкостью, содержащей метилцеллюлозу в концентрации от около 1 до около 5 мас. % и имеющей вязкость от около 20 до около 10000 сантипуаз,
б) формирование микрочастиц полимера на основе капролактона из полученного на
этапе а1) раствора.
Во втором аспекте изобретение касается способа получения микрочастиц, содержащих поликапролактон (PCL), при этом способ включает следующие этапы:
а2) растворение полимера на основе капролактона в дихлорметане (DCM) и/или по
существу в чистом Твине,
б) формирование микрочастиц полимера на основе капролактона из полученного на
этапе а2) раствора.
В одной предпочтительной форме осуществления изобретение охватывает способ в
соответствии с обоими аспектами, определенными выше: это способ, в котором на этапе
а) полимер на основе капролактона растворяют в DCM и/или по существу в чистом Твине,
при этом упомянутый растворенный полимер на основе капролактона в последующем
смешивают с жидкостью, содержащей метилцеллюлозу в концентрации от около 1 до
около 5 мас. % и имеющей вязкость от около 20 до около 10000 сантипуаз. В последующем в качестве этапа б) из раствора, полученного на этапе а), формируют микрочастицы
полимера на основе капролактона.
Этапы а)
Первый этап а) способа согласно изобретению включает, или состоит из, или представляет собой этап растворения.
Этап а2)
Первый этап способа согласно изобретению состоит из или представляет собой этап
растворения: полимер на основе капролактона растворяют в дихлорметане (DCM) и/или
по существу в чистом Твине. Соответственно, в зависимости от применения, предполагаемого для геля, содержащего микрочастицы, как определено далее, авторы изобретения
обнаружили, что применение по существу чистого Твина является особенно привлекательным при получении микрочастиц, имеющих величину молекулярной массы от низкой
до средней, и вследствие отсутствия органического растворителя. Величина молекулярной
массы от низкой до средней предпочтительно означает молекулярную массу, которая изменяется в диапазоне от около 1000 до около 50000 Mn (среднечисленная молекулярная
масса), более предпочтительно от около 1000 до около 40000 Mn, более предпочтительно
от около 5000 до около 40000 Mn, более предпочтительно от около 1000 до около 30000 Mn,
более предпочтительно от около 10000 до около 30000 Mn, более предпочтительно от
около 20000 до около 30000 Mn и наиболее предпочтительно от около 1000 до около
30000 Mn. Таким образом, в способе согласно второму варианту выполнения изобретения
предусмотрены три предпочтительных способа. Один с применением DCM, который является подходящим для получения микрочастиц с величиной молекулярной массы от низкой до средней или величиной молекулярной массы от средней до высокой. Величина
молекулярной массы от средней до высокой предпочтительно означает молекулярную
массу, которая изменяется в диапазоне от около 30000 до около 500000 Mn, более предпочтительно от около 40000 до около 150000 Mn, еще более предпочтительно от около
40000 до около 100000 Mn. В другом предпочтительном способе используют по существу
чистый Твин, упомянутый способ является подходящим для получения микрочастиц,
имеющих величину молекулярной массы от низкой до средней. В заключение, в третьем
способе используют сочетание DCM и по существу чистого Твина.
3
BY 18147 C1 2014.04.30
По существу чистый Твин предпочтительно означает по меньшей мере 80 % Твин, или
по меньшей мере 90 % Твин, или около 100 % Твин. Твин представляет собой семейство
поверхностно-активных веществ, являющихся сложными эфирами полиоксиэтиленсорбита. Могут быть использованы Твин 20, 40, 60 или 80. Когда на этапе а2) используют по
существу чистый Твин, этот этап растворения предпочтительно выполняют при температуре около или выше температуры плавления PCL. Температура представляет собой приблизительно температуру плавления PCL. Температура предпочтительно изменяется в
диапазоне от около 50 до около 90 °С или от около 60 до около 90 °С. Более предпочтительно эта температура составляет около 60 или около 80 °С.
Если на этапе а2) был использован DCM, раствор, полученный на этапе а2), в последующем добавляют к жидкости, содержащей поверхностно-активное вещество, с целью
получения жидкости, содержащей микрочастицы. Поверхностно-активное вещество или
тензоактивное вещество представляет собой химическое соединение, которое снижает поверхностное натяжение раствора, предоставляя возможность формироваться мелким
устойчивым частицам. Поверхностно-активное вещество будет стабилизировать микрочастицы в процессе их формирования. Подходящие поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются ими, метилцеллюлозу (MC), поливиниловый спирт (PVA),
полисорбаты, такие как полиоксиэтиленсорбиты или Pluronicsтм, предпочтительно моноолеат полиоксиэтиленсорбита, триолеат полиоксиэтиленсорбита, моностеарат полиоксиэтиленсорбита,
тристеарат
полиоксиэтиленсорбита,
монопальмитат
полиоксиэтиленсорбита или монолаурат полиоксиэтиленсорбита, с моноолеатом полиоксиэтиленсорбита (Tween 80тм), моностеаратом полиоксиэтиленсорбита (Tween 60тм) и монолауратом полиоксиэтиленсорбита (Tween 20тм), являющимися предпочтительными, и
моноолеатом полиоксиэтиленсорбита (Tween 80тм), являющимся еще более предпочтительным. В предпочтительной форме осуществления поверхностно-активное вещество не
является поверхностно-активным веществом с ограниченной биосовместимостью, таким
как поливиниловый спирт (PVA), который описан в EP 1872803 или в US 2003/0157187.
Наиболее предпочтительным поверхностно-активным веществом среди других является
MC из-за его биосовместимости. Таким образом, способ, использующий DCM и в последующем MC в качестве поверхностно-активного вещества, будет, как ожидается, более
эффективным, чем способ, использующий DCM и в последующем PVA в качестве поверхностно-активного вещества: вследствие его биосовместимости нет необходимости в
интенсивном промывании сформированных микрочастиц с целью избавления от поверхностно-активного вещества в конце способа.
Жидкость, предпочтительно жидкость или гелеобразная жидкость, содержащая поверхностно-активное вещество, определяется преимущественно как жидкость, имеющая
вязкость, которая изменяется в диапазоне от около 1 до около 400000 сантипуаз, или от
около 10 до около 100000 сантипуаз, или от около 50 до около 100000 сантипуаз, или от
около 75 до около 50000 сантипуаз, или от около 100 до около 50000 сантипуаз, или от
около 100 до около 1000 сантипуаз, или от около 75 до около 1000 сантипуаз. Наиболее
предпочтительно вязкость составляет от около 75 до около 300000 сантипуаз.
Вязкость предпочтительно измеряется при комнатной температуре или при температуре, при которой растворяется PCL. В предпочтительной форме осуществления добавляют поверхностно-активное вещество, более предпочтительно MC, с концентрацией от
около 0,01 до около 5,0 мас. %, более предпочтительно добавляют MC от около 0,1 до
около 5,0 мас. %, более предпочтительно добавляют MC от около 0,5 до около 2,5 мас. %
и наиболее предпочтительно добавляют около 1,0 мас. % MC. Коммерчески доступны несколько типов MC, имеющих различные среднечисленные молекулярные массы:
Mn = 14000, Mn = 41000, Mn = 63000 или Mn = 88000. Предпочтительно используют MC,
имеющую среднечисленную молекулярную массу Mn = 63000.
4
BY 18147 C1 2014.04.30
В предпочтительной форме осуществления используют предпочтительно около 1,0 мас. %
MC (Mn = 63000). Использование такой высокой концентрации MC является предпочтительным для эффективности способа и для свойств сформированных микрочастиц: вязкость исходного раствора MC является высокой (100-120 сантипуаз). Мы неожиданным
образом обнаружили, что добавление большого объема концентрированного раствора
PCL в DCM к вязкому раствору MC может быть выполнено достаточно быстро (менее чем
за 1 мин) и, как следствие, вязкость полученной смеси также является достаточно высокой. Вязкость полученной смеси является приблизительно такой же, как вязкость раствора
MC. Тщательное перемешивание приводит к формированию микрочастиц, которые являются по существу сферическими, как определено далее. Концентрация PCL в DCM определяется далее. Кроме того, удаление DCM путем испарения может происходить более
быстро (от 1 до 3 ч), чем в традиционных способах экстракции путем испарения, которые
используют значительно меньше MC [Iooss P. et al., (2001), 22: 2785-2794].
Этап а1)
Первый этап способа согласно изобретению включает этап растворения. Этап растворения, присутствующий на этапе а1), предпочтительно выполняют, как описано на этапе
а2). Однако для растворения полимера на основе капролактона могут быть использованы
другие жидкости, растворители или поверхностно-активные вещества. Примеры включают алифатические соединения, ароматические соединения, галогенсодержащие соединения, хлороформ, соединения, не содержащие галогенов, ацетон, THF, этилацетат или
этиллактат толуола и т.д.
В последующем растворенный полимер на основе капролактона смешивают с жидкостью, содержащей поверхностно-активное вещество, при этом упомянутая жидкость имеет вязкость, которая изменяется в диапазоне от около 1 до около 400000 сантипуаз или от
около 10 до около 100000 сантипуаз. Вязкость предпочтительно изменяется в диапазоне
от около 10 до около 300000 сантипуаз или предпочтительно изменяется в диапазоне от
около 15 до около 20000 сантипуаз, более предпочтительно от около 20 до около 10000 сантипуаз, еще более предпочтительно от около 40 до около 5000 сантипуаз, еще более предпочтительно от около 50 до около 2000 сантипуаз, еще более предпочтительно от около 75 до
около 2000 сантипуаз, еще более предпочтительно от около 75 до около 1000 сантипуаз,
еще более предпочтительно от около 100 до около 1000 сантипуаз, еще более предпочтительно от около 75 до около 500 сантипуаз или еще более предпочтительно от около 75 до
около 400 сантипуаз и наиболее предпочтительно от около 75 до около 300 сантипуаз.
Вязкость предпочтительно измеряется при комнатной температуре или при температуре,
при которой растворяют PCL.
Поверхностно-активное вещество, используемое на этапе а1), предпочтительно является таким же, как на этапе а2). Такие поверхностно-активные вещества были определены
ранее. Предпочтительное поверхностно-активное вещество включает MC среди других
вследствие ее биосовместимости. Предпочтительные концентрации и типы MC были
определены ранее. Наиболее предпочтительным является использование около 1,0 мас. %
MC (Mn = 63000). Использование такой высокой концентрации MC приводит к получению вязкого раствора, который является предпочтительным для эффективности способа и
для свойств полученных микрочастиц, как определено далее. Предпочтительно, не желая
быть связанными какой-либо теорией, авторы изобретения предполагают, что важна вязкость жидкости, использованной на этапе а1), и/или раствора, сформированного в конце
этапа а1). Любая или обе эти вязкости предпочтительно являются достаточно высокими
для упрощения этапа б) и позволяют сформировать высокооднородные микрочастицы с
высоким выходом годного, как определено далее. Как показано в примерах, может быть
получен выход годного примерно 60-80 % частиц, имеющих диаметр, изменяющийся в
диапазоне от около 38 до 75 мкм, что является достаточно выгодным. Может быть даже
5
BY 18147 C1 2014.04.30
получен выход годного около 70-80 % частиц, имеющих такой диаметр. Предпочтительные вязкости жидкости и полученного раствора определены здесь.
Этап б)
В последующем из раствора или смеси, полученных на этапе а1) или а2), формируются микрочастицы, содержащие PCL. В зависимости от вида растворителя, использованного на этапах а1) или а2) (DCM или Твин), выполняют различные этапы, как объясняется
ниже.
Если на этапе а1) или а2) был использован DCM, DCM удаляют из микрочастиц, содержащих PCL и взвешенных в вязкой жидкости, путем испарения. Способ удаления путем испарения также известен как испарительный способ удаления, хорошо известен
специалистам и был описан, например, в Journal of Controlled Release [Preparation of biodegradable microspheres and microcapsules, Journal of Controlled Release, (1991), том 17: 1-22].
Вследствие высокой вязкости смеси, как определено здесь, может быть необходимо тщательное перемешивание (около 1000 об/мин, как проиллюстрировано в примерах). Без
необходимости быть связанными какой-либо теорией, мы предполагаем, что в результате
тщательного перемешивания в смесь вводят воздух, что дает возможность образования
пены, что предположительно упрощает способ удаления/испарения. Кроме того, способ
удаления/испарения упрощается за счет того, что удалению/испарению подлежат сравнительно малые количества DCM (т.е. высокое соотношение PCL/DCM, как определено далее). Упомянутый способ имеет продолжительность около 3 ч, в то время как
классические способы удаления/испарения, использующие смесь, имеющую значительно
более низкую вязкость (примеры), будут иметь, как ожидается, значительно большую
продолжительность - более чем 14 ч. В ходе удаления путем испарения значительная
часть или большая часть DCM, содержащегося в микрочастицах, содержащих PCL, удаляется в воду и испаряется на поверхности.
Если после нагревания на этапе а1) или а2) в качестве единственного растворителя
был использован Твин, микрочастицы формируются как результат контролируемых условий охлаждения и перемешивания. Конечная температура в общем случае является комнатной температурой. Смесь может быть нагрета до 80 °С. Перемешивание может
производиться с частотой около 500 об/мин. Контролируемое охлаждение может иметь
продолжительность от 1 до 12 ч.
В конце способа согласно изобретению получают микрочастицы, которые в основном
свободны от DCM и/или по существу чистого Твина. "В основном свободны" предпочтительно означает, что все еще присутствует менее чем 70 мас. % исходного DCM или по
существу чистого Твина, более предпочтительно менее чем 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5, 2, 1,
0,5, 0,3, 0,2 мас. % или даже менее чем 0,1 мас. %. В одной из форм осуществления DCM
и/или Твин не обнаруживаются в сформированных микрочастицах. DCM или Твин могут
быть обнаружены с помощью газовой хроматографии (GC). Микрочастицы содержат или
состоят из полимера на основе капролактона. При необходимости в конце способа микрочастицы могут быть промыты в воде один или несколько раз для избавления от DCM
и/или по существу чистого Твина.
Если в способе согласно изобретению в качестве растворителя комбинируют DCM и
Твин, способ предпочтительно является таким же, как в случае, когда единственным растворителем является DCM.
В контексте изобретения полимер на основе капролактона означает полимер, содержащий поли-ε-капролактон или поликапролактон. PCL является биоразлагаемым, иммунологически неактивным, биосовместимым и биорассасываемым синтетическим полимером. Полимер на основе капролактона для использования в данном изобретении может
быть получен коммерчески или произведен методами, хорошо известными специалистам.
Предпочтительно используют очищенный полимер на основе капролактона, пригодный
для использования в биомедицинских или косметических применениях. Полимеры пред6
BY 18147 C1 2014.04.30
ставляют собой молекулы, состоящие из повторяющихся единиц с низкой молекулярной
массой, называемых мономерами. Способ соединения мономеров с образованием полимеров называется полимеризацией.
В контексте изобретения полимер может иметь все возможные значения, известные
специалистам, такие как линейный полимер, сополимер, блоксополимер, терполимер или
смесь различных типов гомо-, со-, блоксо- или терполимеров.
В еще одном предпочтительном способе на этапе а1) или а2) используют сополимер
ε-капролактона (CL). Предпочтительными сополимерами CL являются сополимеры CL по
меньшей мере с одним соединением, выбранным из группы, состоящей из L-лактидов,
D-лактидов, DL-лактидов, TMC (триметиленкарбоната), PEO (оксида полиэтилена), гликолидов и DO (диоксанона). Когда в способе, в котором в качестве единственного растворителя на этапе а2) используют по существу чистый Твин и используют сополимер CL
(сополимер, блоксополимер), под температурой плавления PCL следует понимать температуру, при которой плавится сополимер CL.
В предпочтительном способе на этапе а1) или а2) используют терполимер на основе
капролактона. Предпочтительными терполимерами на основе капролактона являются сополимеры CL с одним соединением, выбранным из группы, состоящей из L-лактидов,
D-лактидов, DL-лактидов, TMC, PEO, гликолидов и DO. Когда в способе, в котором в качестве единственного растворителя на этапе а2) используют по существу чистый Твин и
используют терполимер на основе капролактона, под температурой плавления PCL следует понимать температуру, при которой плавится терполимер на основе капролактона.
Альтернативно терполимер на основе капролактона представляет собой полимер на
основе капролактона с двумя соединениями, выбранными из группы, состоящей из
L-лактидов, D-лактидов, DL-лактидов, TMC, PEO, гликолидов и DO. В дополнение к вышеуказанному могут быть использованы смеси с гомо-, со-, блоксо-, терполимерами с
компонентами, выбранными из группы, состоящей из L-лактидов, D-лактидов, DLлактидов, мезолактидов, TMC, PEO, гликолидов и DO. Другие сополимеры CL или смеси
могут содержать простые полиэфиры, сложные полиэфиры, поликарбонаты, сополиоксалаты, поли(ортокарбонаты), поли(ацетали), полиангидриды, сополимеры PBT/PEO (PolyActiveтм) и полифосфазины.
В еще одном предпочтительном способе используют гомополимер на основе капролактона. Гомополимер на основе капролактона является выгодным, так как он является
полукристаллическим. Поэтому он имеет устойчивую форму. Кроме того, он является
гидрофобным, следовательно, он может иметь более длительное время рассасывания, когда используется в качестве кожного наполнителя, чем соответствующее время рассасывания не являющегося полукристаллическим биорассасываемого полимера. Более
предпочтительно используют полимер на основе капролактона, который не содержит второго мономера, выбираемого из группы, состоящей из гликолидов, диоксанона, триметилен карбоната и лактидов и их комбинаций.
Кроме того, как еще одну предпочтительную форму осуществления изобретения, полимер на основе капролактона замещают другим полимером. Такой другой полимер может быть полимером на основе L-лактидов, D-лактидов, DL-лактидов, мезолактидов,
TMC, гликолидов или диоксанона.
Свойства полимера, полученных микрочастиц и полученного геля, раскрытые здесь,
широко изменяются в зависимости от предполагаемого применения и, как правило, не являются критическими. Для применений, связанных с инъекцией, микрочастицы полимера
на основе капролактона должны быть пригодными для инъекций посредством имеющего
подходящие размеры шприца.
В предпочтительной форме осуществления полимер на основе капролактона добавляется и будет растворяться в DCM и/или по существу чистом Твине при концентрации, которая составляет до около 10 % DCM (как единственного растворителя или в сочетании с
7
BY 18147 C1 2014.04.30
Твином) до около 30 % DCM (как единственного растворителя или в сочетании с Твином)
или до около 50 % в по существу чистом Твине, когда Твин используют как единственный
растворитель по массе. Более предпочтительно полимер на основе капролактона добавляется и будет растворяться в DCM при концентрации, которая составляет до около 25 %
или до 25 %. Это процентное соотношение зависит, главным образом, от молекулярной
массы используемого PCL.
В более предпочтительной форме осуществления вязкость раствора PCL в DCM может приблизительно изменяться в диапазоне от 5 до 5000 сантипуаз (измеренной при комнатной температуре). Эта вязкость зависит, главным образом, от молекулярной массы
PCL и от использованных концентраций PCL и DCM. Соотношение PCL/DCM (массовое)
может приблизительно изменяться в диапазоне от 10 г PCL в 100 г DCM до 20 г PCL в 100 г
DCM. Это соотношение может рассматриваться как высокое по сравнению с соотношением, ранее использованным в уровне техники.
Использование высокого соотношения PCL/DCM, как определено здесь, является выгодным, так как присутствует настолько мало DCM, насколько это возможно. Следовательно, способ испарения DCM с целью получения микрочастиц согласно изобретению
будет, как ожидается, более быстрым, чем в классических способах, использующих большее количество DCM, чем в данном изобретении.
Размер и распределение частиц вероятно будут подвержены влиянию вида использованного поверхностно-активного вещества (предпочтительным является MC), полимера
на основе капролактона (предпочтительным является гомополимер), соотношения
PCL/растворитель (DCM и/или по существу чистый Твин) (приведены предпочтительные
соотношения) и условий способа.
Микрочастицы.
В еще одном аспекте изобретение касается микрочастиц, которые могут быть получены с помощью способа по первому и/или второму аспекту, как описано в предыдущем
разделе.
Эти микрочастицы не получаются сами по себе с использованием описанного выше
способа до тех пор, пока они не будут иметь требуемые характеристики, как описано ниже. Способ согласно изобретению является одним из предпочтительных способов для получения этих микрочастиц. Предпочтительно микрочастицы согласно изобретению имеют
по меньшей мере одну из следующих характеристик:
i) распределение диаметров, которое изменяется в диапазоне от 5 до 200 мкм, более
предпочтительно от 20 до 150 мкм, еще более предпочтительно от 30 до 90 мкм, еще более предпочтительно от 25 до 75 мкм, еще более предпочтительно от 38 до 75 мкм, еще
более предпочтительно от 25 до 50 мкм;
ii) однородную плотность, форму и содержание (фиг. 1 - пример): сферическую форму
и гладкость поверхности;
iii) главным образом, сферические микросферы.
Однородные характеристики (характеристики 1), 2) и/или 3)) микрочастиц согласно
изобретению являются очень привлекательными, так как они будут придавать оптимальные свойства текучести гелю, полученному из них (как представлено в следующем разделе): мы ожидаем, что не будут наблюдаться агрегация в шприце и закупорка иглы при
инъекции с помощью шприца. Эта однородная характеристика представляет собой усовершенствование по сравнению с известными гелями, используемыми в качестве имплантата. Например, микрочастицы согласно изобретению имеют более привлекательные
свойства, чем микрочастицы, раскрытые в EP 1872803 или в US 2003/0157187, главным
образом, вследствие использования на этапе а1) жидкости, содержащей поверхностноактивное вещество, упомянутая жидкость имеет вязкость, которая изменяется в диапазоне
от около 1 до около 400000 сантипуаз, и/или, главным образом, вследствие использования
в качестве поверхностно-активного вещества MC, более предпочтительно 1 % MC, еще
8
BY 18147 C1 2014.04.30
более предпочтительно 1 % MC (Mn = 63000), и/или, главным образом, вследствие использования более высокого отношения PCL/DCM, как определено здесь, и/или, главным
образом, вследствие способа, которым выполняется удаление путем испарения.
В качестве еще одного примера микрочастицы согласно изобретению имеют более
привлекательные свойства, чем микрочастицы, раскрытые в Iooss P. et al., (2001), 22: 27852794, главным образом, вследствие использования на этапе а1) жидкости, содержащей поверхностно-активное вещество, упомянутая жидкость имеет вязкость, которая изменяется
от около 10 до около 100000 сантипуаз, и/или, главным образом, вследствие использования более высокого отношения PCL/DCM, как определено здесь, и/или, главным образом,
вследствие использования специфического типа и концентрации MC в качестве поверхностно-активного вещества, более предпочтительно вследствие использования 1 % MC,
еще более предпочтительно 1 % MC (Mn = 63000), и/или, главным образом, вследствие
способа, которым выполняется извлечение путем испарения. Однородность микрочастиц
(сферическая форма и гладкость поверхности и любая из характеристик, уже определенных в 1), 2) и 3)) является наряду с другими факторами следствием специфического способа согласно изобретению, главным образом, следствием использования на этапе а1)
жидкости, содержащей поверхностно-активное вещество, упомянутая жидкость имеет
вязкость, которая изменяется в диапазоне от около 1 до около 400000 сантипуаз, и/или,
главным образом, следствием оптимального отношения PCL/DCM, как определено здесь,
и/или, главным образом, следствием используемого поверхностно-активного вещества,
более предпочтительно 1 % MC (Mn = 63000), и/или, главным образом, следствием способа, которым выполняется способ извлечения/испарения.
Предпочтительный диаметр микрочастиц (микросфер) изменяется в диапазоне от
20 до 150 мкм. Диаметр, больший чем 20 мкм, является предпочтительным, так как он минимизирует прямой фагоцитоз макрофагами. Диаметр, меньший чем 150 мкм, является
предпочтительным, так как он будет иметь, как ожидается, лучшие свойства текучести,
когда присутствует в геле. Альтернативным образом предпочтительный диаметр изменяется в диапазоне от 25 до 50 мкм.
Неожиданным образом авторы изобретения обнаружили, что микрочастицы, содержащие PCL с величиной молекулярной массы от сравнительно низкой до средней, как было ранее определено, являются хорошо подходящими для использования в данном
изобретении. Эти микрочастицы, содержащие PCL с величиной молекулярной массы от
низкой до средней, когда присутствуют в геле согласно изобретению, проявляют сравнительно более короткое время рассасывания, чем время для геля, содержащего микрочастицы с PCL с величиной молекулярной массы от средней до высокой, как определено
далее.
Микрочастицы могут храниться в сухом состоянии, высушенные путем сублимации,
лиофилизированные или в виде сыпучего порошка, и консервироваться на протяжении
длительного времени при подходящих условиях. Лиофилизация является выгодной, так
как она упрощает стерилизацию и хранение. Молекулярная масса полимера и физические
свойства (среди которых сферическая форма и гладкость поверхности, смотри по меньшей
мере одну из характеристик, определенных ранее как 1), 2) и/или 3)), присущие микрочастицам, определяют, по меньшей мере частично, их деструкционное поведение in vivo,
когда они находятся в геле и инъецируются in vivo.
Гель.
В еще одном аспекте изобретение относится к биоразлагаемому инъецируемому гелю,
содержащему микрочастицы, как определено в предыдущем разделе, и носитель. Носитель может содержать агент, увеличивающий вязкость, агент, увеличивающий плотность,
и/или агент, увеличивающий тонусную смачиваемость. Агент, увеличивающий вязкость,
может быть выбран из группы, состоящей из натрий-карбоксилметилцеллюлозы (CMC),
поливинилпирролидона (PVP), метилцеллюлозы (MC), гидроксипропилметилцеллюлозы
9
BY 18147 C1 2014.04.30
(HPMC). Однако могут быть использованы другие агенты, увеличивающие вязкость, как
будет ясно специалистам. Предпочтительным в качестве агента, увеличивающего вязкость, является CMC.
Агент, увеличивающий плотность, может быть выбран из группы, состоящей из сорбитола, маннитола и фруктозы. Тем не менее могут быть использованы другие подходящие агенты.
Агент тонусной смачиваемости может быть полисорбатом (Твин 20, 40, 60 или 80).
Также могут быть использованы другие агенты тонусной смачиваемости. Гель, раскрытый
здесь, может включать различные количества агента, увеличивающего вязкость, агента,
увеличивающего плотность, и/или агента, увеличивающего тонусную смачиваемость. В
предпочтительной форме осуществления гель содержит от около 0 до 8 мас. % агента,
увеличивающего вязкость, и/или от около 0 до около 50 мас. % агента, увеличивающего
плотность, и/или от около 0 до около 5,0 мас. % агента тонусной смачиваемости. Более
предпочтительно гель содержит от около 0,1 до 8 мас. % агента, увеличивающего вязкость, и/или от около 0 до около 50 мас. % агента, увеличивающего плотность, и/или от
около 0 до около 5,0 мас. % агента тонусной смачиваемости.
Гель, раскрытый здесь, может включать различные количества микрочастиц и может
типично включать от около 10 до около 50 мас. % микрочастиц, от около 15 до около 50
мас. %, от около 25 до около 45 мас. %, от около 35 до около 45 мас. % микрочастиц. Количество носителя типично выбирается таким, чтобы получить суспензию, имеющую требуемые свойства текучести, т.е. подходящую вязкость. Специалистам известно, что в
зависимости от вида применения, предполагаемого для геля согласно изобретению, может
быть использована игла, имеющая специфические характеристики. Для каждого используемого типа иглы вязкость геля должна быть оптимизирована с целью получения требуемых свойств текучести. В качестве примера, который также является предпочтительной
формой осуществления, при использовании иглы с размером 26-30 и CMC подходящей
является вязкость, изменяющаяся в диапазоне от около 20000 до 200000 сантипуаз. В
предпочтительной форме осуществления носитель является фармацевтически или косметически приемлемым носителем и/или биологически (медицински) приемлемым носителем.
Биоразлагаемый является синонимом биорассасываемого. Требуемая биорассасываемость геля может среди прочего изменяться в зависимости от типа используемого полимера на основе капролактона и предполагаемого использования/применения. В предпочтительной форме осуществления гель согласно изобретению является биорассасываемым в течение 10 или менее чем 10 лет после инъекции, или в течение 5 или менее
чем 5 лет после инъекции, или в течение 2 или менее чем 2 лет после инъекции, или в течение 1 или менее чем 1 года после инъекции.
Полученный гель содержит суспензию из микрочастиц, как определено ранее, и является более предпочтительным, чем другие известные гели: гель согласно изобретению содержит микрочастицы, которые являются по существу сферическими с гладкой
поверхностью (имеющими по меньшей мере одну из характеристик 1), 2) и/или 3), как
определено ранее), и, следовательно, улучшаются свойства текучести геля. Неожиданным
образом авторы изобретения обнаружили, что гель, содержащий микрочастицы, имеющие
величину молекулярной массы от низкой до средней, может быть выгодно использован.
Гель согласно изобретению содержит полимер, который является более стабильным, когда инъецируется in vivo (кинетика деградации является более медленной, чем для других
полимеров). Гель содержит микрочастицы и носитель. Носитель обычно деградирует, растворяется или рассасывается в течение от 3 до 4 месяцев после инъекции. Время рассасывания микрочастиц зависит от исходной молекулярной массы использованного PCL.
Например, микрочастицы, содержащие полимер на основе капролактона, имеющие величину молекулярной массы от низкой до средней, как определено ранее, будут, как ожида10
BY 18147 C1 2014.04.30
ется, иметь время разложения или рассасывания, которое изменяется в диапазоне от около
6 месяцев до 2 лет. В качестве примера, гель, содержащий микрочастицы, содержащие полимер на основе капролактона, имеющий молекулярную массу около 10000 Mn, будет, как
ожидается, иметь время рассасывания от около 6 до 15 или от 12 до 15 месяцев, в зависимости от того, куда он был инъецирован, и от других характеристик микрочастиц. В качестве другого примера, гель, содержащий микрочастицы, содержащие полимер на основе
капролактона, имеющий молекулярную массу около 40000 Mn, будет, как ожидается,
иметь время рассасывания от около 18 до 24 или от 20 до около 24 месяцев, в зависимости
от того, куда он был инъецирован, и от других характеристик микрочастиц. Этот гель может быть использован в нескольких типах применений, как определено ниже. Гель может
храниться в контейнере в форме стерильной суспензии. Предпочтительно контейнер является готовым для использования предварительно наполненным шприцем. Шприц может
быть также представлен как предварительно наполненный шприц, имеющий два отсека,
один из которых содержит сублимационно высушенные микрочастицы, а другой содержит фармацевтически приемлемый носитель. В случае разбавления для немедленного
применения, например с помощью воды или дважды дистиллированной воды, для инъецируемых составов гель (суспензия) может быть впоследствии применен посредством
внутрикожной или подкожной инъекции. Альтернативным образом контейнер может быть
ампулой. Здесь так же, как и для шприца, ампула может содержать гель согласно изобретению, готовый для применения. В качестве альтернативы ампула может содержать в одном отсеке сублимационно высушенные микрочастицы, а в другом отсеке - фармацевтически приемлемый носитель.
Вода, используемая для разбавления геля в шприце или в ампуле для немедленного
применения, предпочтительно является дистиллированной водой, более предпочтительно
дважды дистиллированной водой, еще более предпочтительно стерильной водой. Наиболее предпочтительно используют фосфатный физиологический буферный раствор (PBS).
Носитель может дополнительно содержать компонент, выбранный из группы, состоящей из криопротектора и буферного агента.
Криопротекторный агент является химическим веществом, которое ингибирует или
снижает образование повреждающих кристаллов льда в биологических тканях при охлаждении. Подходящие криопротекторные агенты включают, но не ограничены, сахара и
углеводы, такие как d-маннитол, лактоза, сахароза, фруктоза, сорбитол и декстран, предпочтительным является d-маннитол. Концентрация криопротектора в носителе геля может
изменяться в зависимости от предполагаемого применения, микрочастиц и вида выбранного криопротектора. Гель может типично содержать от около 0 до около 45 мас. % криопротекторного агента или от около 30 до около 40 %.
Буферный агент является химическим соединением или соединениями, которые добавляются к раствору и позволяют этому раствору противостоять изменениям pH в результате разбавления или добавления небольших количеств кислот или оснований.
Эффективные буферные системы используют растворы, которые содержат большие и
приблизительно равные концентрации сопряженных пар кислота-основание (или буферных агентов). Буферный агент, используемый здесь, может быть любым химическим соединением или соединениями, которые являются фармацевтически приемлемыми и
включают, но не ограничиваются ими, соли (соединения кислот и/или оснований) фосфатов и цитратов. Гель может типично содержать от около 0 до около 0,2 мас. % буферного
агента или от около 0,1 до около 0,15 %. Предпочтительным буферным агентом является PBS.
В другой предпочтительной форме осуществления гель, содержащий микрочастицы,
предназначен для использования в качестве лекарственного средства. Сам гель без какоголибо активного ингредиента или предпочтительно без какого-либо лекарственного средства, содержащегося в нем, может сам по себе рассматриваться как лекарственное сред11
BY 18147 C1 2014.04.30
ство. В этом первом случае гель предпочтительно используют как наполнитель или имплантат для наращивания мягкой ткани у млекопитающих в различных лечебных процедурах, включающих лечение дефектов и уродств кожи, управление функцией мочевого
пузыря (лечение недостаточности мочевого сфинктера) и/или управление желудочным
рефлюксом (лечение недостаточности пилорического сфинктера), лечение недостаточности голосовых связок и врожденных дефектов, заполнение десен при лечении зубов. Во
всех этих применениях млекопитающее является преимущественно человеком. Во всех
этих применениях гель типично вводится в область ткани, подлежащую лечению, или
вводится типично путем интрадермальной или субкутанной шприцевой инъекции.
В предпочтительной форме осуществления гель используют как наполнитель и/или
как имплантат. В более предпочтительной форме осуществления гель является кожным
наполнителем. Кожный наполнитель может использоваться для коррекции дефектов кожи, которые формируют угрозу для здоровья субъекта, таких как постхирургические дефекты кожи или дефекты, подобные ожогу. Когда гель используют в качестве
лекарственного средства или в качестве кожного наполнителя, в зависимости от применения, PCL-полимер предпочтительно имеет величину молекулярной массы от низкой до
средней или от средней до высокой, как было ранее определено в шаге а1) или а2) способа
согласно изобретению.
В другой более предпочтительной форме осуществления описанный гель используют
как имплантат или наполнитель для лечения различных недостаточностей сфинктера, таких как недержание мочи (управление функцией мочевого пузыря). Утрата управления
мочевым пузырем может быть следствием стресса, физических движений (кашля, чихания, упражнений) и/или позывом к мочеиспусканию или утечкой больших количеств мочи
в неожиданное время, включая сон. Все виды недержания могут лечиться с использованием геля согласно изобретению независимо от возраста пациента. Способность к регуляции
экскреторной функции зависит от упругости резервуара (мочевого пузыря) и эффективности сфинктера, который имеет две составляющие: 1) непроизвольно сокращающаяся гладкая мышца на шейке мочевого пузыря и 2) произвольно сокращающаяся гладкая мышца
внешнего сфинктера.
Таким образом, гель согласно изобретению может добавляться с целью локализованного сжатия мышцы сфинктера или уретры, снижая, таким образом, размер просвета посредством одной или более инъекций геля, таким образом значительно снижая или
устраняя недержание мочи. В этих случаях гель может вводиться путем инъекции в
уретральную или периуретральную ткань. Таким образом, типичная процедура включает в
себя инъекцию геля с помощью цистоскопа в ткани вокруг шейки мочевого пузыря с созданием увеличенного объема ткани с последующим смыканием уретрального просвета.
Гель придает объем и способствует закрытию уретры для снижения недержания. Инъекция может типично повторяться периодически для оптимальных результатов.
Желудочно-пищеводная рефлюксная болезнь (GERD) состоит в регургитации кислоты
желудочного сока и другого содержимого желудка в пищевод или диафрагму. 70 % случаев рефлюкса возникают при спонтанной релаксации нижнего пищеводного сфинктера или
в результате пролонгированной релаксации после глотания. 30 % возникают на протяжении периодов сжатия нижнего сфинктера. Первичным симптомом является изжога (от 30
до 60 мин после еды). Нетипичные проявления GERD включают астму, хронический кашель, ларингит, фарингит (ангину) и не связанную с сердцем боль в грудной клетке.
GERD является пожизненным заболеванием, которое требует изменений в стиле жизни, а
также медицинского вмешательства.
Таким образом, гель согласно изобретению может быть инъецирован с целью придания объема и локализованного сжатия в нижний пищеводный сфинктер. Таким образом,
типичная процедура включает в себя инъекцию геля с помощью эндоскопа в ткани вокруг
нижнего пищеводного сфинктера, создающую увеличенный объем ткани и последующее
12
BY 18147 C1 2014.04.30
смыкание, нормализирующее давление сфинктера. Гель придает объем и способствует закрытию сфинктера для снижения рефлюкса. Инъекция может повторяться ежегодно для
оптимальных результатов. Гель может инъецироваться с использованием местной анестезии.
Когда гель используют в качестве лекарственного средства для управления функцией
мочевого пузыря и/или желудочным рефлюксом, используемый полимер на основе капролактона предпочтительно имеет величину молекулярной массы от средней до высокой,
как определено ранее на этапах а1) или а2) способа согласно изобретению. Это является
предпочтительным, так как используемый гель будет оставаться в наличии в месте инъекции значительно дольше (меньшая скорость деградации in vivo) и хирургическое вмешательство не должно будет повторяться часто.
В еще одной более предпочтительной форме осуществления гель используют как
наполнитель или как имплантат для лечения эректильной дисфункции (ED), которая может поражать мужчин всех возрастов. Гель согласно изобретению может быть использован для лечения ED. Типичная процедура включает в себя инъекцию геля
непосредственно в глубокую фасцию на протяжении всей длины пещеристого тела.
В еще одной более предпочтительной форме осуществления гель используют как
наполнитель или как имплантат для лечения голосовых связок. Гель согласно изобретению может быть использован для внутрисвязочных инъекций гортанного голосового генератора путем изменения формы этой массы мягких тканей.
Данным изобретением также дополнительно охватывается, что сам гель, когда рассматривается как лекарственное средство, дополнительно содержит активный ингредиент,
который также предпочтительно является лекарственным средством. В используемом
здесь смысле лекарственное средство может быть любой биоактивной композицией, фармацевтическим средством, лекарственным препаратом или соединением, которые хотят
ввести в место инъекции геля. В этом случае лекарственное средство, добавленное к гелю,
может способствовать выполнению функции геля и может содержать анестетик с целью
снижения боли или дискомфорта, связанных с инъекцией геля, или композицию, которая
способствует интеграции PCL или микрочастиц или снижает травмирование места инъекции. В одной из предпочтительных форм осуществления лекарственное средство добавляют к гелю. Примеры анестетиков включают, но не ограничены ими, лидокаин,
ксилокаин, новокаин, бензокаин, прилокаин, рипивакаин и пропофол. Другие лекарственные средства, которые могут быть использованы в геле, раскрытом здесь, включают пептиды, агент тканевой регенерации, антибиотики, стероиды, фибронектин, цитокин,
факторы роста, анальгетики, антисептики, альфа-, бета- или гамма-интерферон, эритропоэтин, глюкагоны, кальцитонин, гепарин, интерлейкин-1, интерлейкин-2, филграстим, комплементарную ДНК (кДНК), ДНК, протеины, гормон роста человека, лютеинизирующий
гормон, натриуретический фактор (атриопептин), Фактор VIII, Фактор IX и фолликулостимулирующий гормон. Лекарственное средство часто добавляют к гелю непосредственно перед инъекцией при активационном смешивании с носителем, как определено ранее.
Типично активный ингредиент или лекарственное средство присутствуют в микросферах,
которые могут быть введены в гель, а упомянутый гель может быть в последующем инъецируем.
Альтернативно в еще одной предпочтительной форме осуществления лекарственное
средство, присутствующее в геле, содержится не для способствования действию геля. В
этом случае гель может рассматриваться как контролируемая система доставки для любого лекарственного средства, известного или которое будет открыто.
В еще одной предпочтительной форме осуществления гель является косметическим
гелем. Косметический гель может быть использован как кожный наполнитель. В этой
предпочтительной форме осуществления гель, имеющий оптимальные характеристики,
получают при выполнении способа согласно изобретению, когда на этапе а1) предпочтительно используют жидкость, содержащую поверхностно-активное вещество, и упомяну13
BY 18147 C1 2014.04.30
тая жидкость имеет вязкость, которая изменяется в диапазоне от около 1 до около 400000 сантипуаз, и/или предпочтительно, когда используют высокое отношение PCL/DCM, как
определено здесь, и/или предпочтительно, когда в качестве поверхностно-активного вещества используют MC, более предпочтительно около 1 % MC, еще более предпочтительно около 1 % MC Mn = 63000, и/или предпочтительно, когда предпочтительно было
выполнено извлечение путем испарения, как определено ранее. В данной предпочтительной форме осуществления полимер на основе капролактона предпочтительно является гомополимером PCL. В данной предпочтительной форме осуществления гель не содержит
какого-либо активного ингредиента или лекарственного средства. Когда гель используют
как косметический гель или как кожный наполнитель, полимер на основе капролактона
предпочтительно имеет величину молекулярной массы от низкой до средней, как определено ранее на этапе а2) способа согласно изобретению. Гель может быть использован в
косметическом лечении шрамов, морщин и потери лицевого жира. Гель согласно данному
изобретению может быть использован для заполнения и разглаживания дефектов мягкой
ткани, таких как оспины или шрамы (такие как ветряная оспа или угревые шрамы), врожденные аномалии (такие как заячья губа) и морщины. Шрамы могут быть любого происхождения: в результате заболевания, постхирургические и ожоговые. Гель может быть
также использован в качестве увеличивающего объем агента для наращивания потерь лицевой ткани или жира у человека. Анатомической областью для эффективного использования геля может быть кожа, предпочтительно кожа лицевой области - эпидермис и/или
подкожный слой. В зависимости от предполагаемого специфического косметического
применения место инъекции может изменяться: места для лечения угревых шрамов и мелких и тонких морщин на лице, более глубокие места для лечения морщин, складок и моделирования профиля лица и более глубокие места для лечения липодистрофии.
Применение геля.
Еще один аспект изобретения относится к применению геля согласно изобретению
для приготовления лекарственного средства для лечения дефектов кожи или недостатков
кожи, или для управления функцией мочевого пузыря, и/или для управления желудочным
рефлюксом, и/или для лечения эректильной дисфункции, и/или для лечения голосовых связок.
Еще одним применением геля согласно изобретению является применение косметического геля согласно изобретению, как было определено ранее, в косметических целях.
Все характеристики этих применений уже были определены в предыдущем разделе,
озаглавленном "Гель".
В этом документе и в его формуле изобретения глагол "содержат" и его сочетания используются в неограничивающем смысле для обозначения того, что элементы, следующие
за этим словом, включаются, а элементы, не упомянутые особым образом, не исключаются. Кроме того, глагол "состоять" может быть заменен выражением "состоять преимущественно из", означающим, что продукт, или композиция, или гель, или микрочастица, как
определено здесь, могут содержать дополнительный компонент (компоненты) кроме компонентов, определенных особым образом, а упомянутый компонент (компоненты) не изменяет особые характеристики изобретения. Кроме того, ссылка на элемент с помощью
неопределенного артикля "a" или "an" не исключает возможность того, что имеется более
чем один элемент, если только контекст не требует явным образом, что должен быть один
и только один из элементов. Таким образом, неопределенный артикль "a" или "an" обычно
означает "по меньшей мере один". Слово "примерно" или "около", когда используется в
сочетании с численным значением (около 10), предпочтительно означает, что величине
может быть придано значение 10 или на 1 % больше или меньше этого значения.
Все патентные и литературные ссылки, цитируемые в данном описании, включены
здесь в качестве ссылки в своем полном объеме.
Следующие примеры представлены исключительно для иллюстративных целей и не
призваны ограничивать объем данного изобретения каким-либо образом.
14
BY 18147 C1 2014.04.30
Описание фигур.
Фиг. 1 - микроскопическая фотография микросфер, приготовленных в примере 2.
Фиг. 2 - микросферы PCL, приготовленные с использованием раствора PCL
(Mn = 10000 г/моль) в DCM и раствора MC (Mn = 63000 г/моль) в воде. [PCL] составляет
20 г/100 г DCM, [MC] составляет 1,1 мас. % (табл. 1). Световое микроскопическое изображение, увеличение 10x.
Фиг. 3 - микросферы PCL, приготовленные с использованием раствора 10 мас. % PCL
в DCM и раствора 1,0 мас. % PVA в воде с тщательным перемешиванием при 1000 об/мин
(Hunter, табл. 4). Световое микроскопическое изображение, увеличение 10x.
Фиг. 4 - микросферы PCL, приготовленные с использованием раствора 10 мас. % PCL
в DCM и раствора 3,0 мас. % PVA в воде с тщательным перемешиванием при 1000 об/мин
(Erneta и Wu, табл. 4). Световое микроскопическое изображение, увеличение 10x.
Фиг. 5 - микросферы PCL, приготовленные с использованием раствора 10 мас. % PCL
в DCM и раствора 0,1 мас. % MC в воде с тщательным перемешиванием при 1000 об/мин
(Iooss, табл. 4). Световое микроскопическое изображение, увеличение 10x.
Примеры
Протокол синтеза микросфер/микрочастиц и суспензии этих частиц в геле, содержащем носитель, которая является готовой для применения, описан ниже.
1. Приготавливаются микросферы с использованием классического метода испарения
растворителя или посредством синтеза без растворителя с целью получения требуемых
свойств.
2. Приготавливается гель с требуемой вязкостью с использованием известных методов
приготовления, после чего микросферы взвешиваются в геле посредством подходящего
перемешивания.
3. Затем стерилизованной гелевой суспензией наполняются шприцы в контролируемой атмосфере.
Для получения суспензии микрочастиц, состоящей из полимеров или смесей, упомянутых ранее, в готовой для применения форме или (сублимационно высушенной) ампульной форме могут быть использованы или скомбинированы следующие примеры.
Пример 1.
От 10 до 20 г PCL с Mn 10000 или Mn 42500 растворяют в DCM (от 10 до 20 мас. %).
Этот раствор диспергируют в 1000 мл воды, содержащей 0,1-5 % MC. Путем интенсивного размешивания (1000 об/мин) и извлечения растворителя, как описано в публикации,
цитируемой в описании, получают микрочастицы со средним диаметром 40 мкм. Полученные микросферы фильтруют, промывают и высушивают. В последующем от 10 до
50 % микросфер распределяют в геле CMC (от 0,1 до 5 %) или MC (от 0,1 до 5 %) путем
умеренного перемешивания и в дальнейшем обрабатывают.
Пример 2.
От 10 до 20 г PCL с Mn 42500 растворяют в DCM (от 10 до 20 мас. %). Этот раствор
диспергируют в 1000 мл воды, содержащей 0,8 % MC. Путем интенсивного размешивания
(1000 об/мин) и извлечения растворителя, как описано в примере 1, получают микрочастицы со средним диаметром 60 мкм. Полученные микросферы фильтруют, промывают и
высушивают. В последующем от 10 до 50 % микросфер распределяют в геле CMC (от 0,1
до 5 %) или MC (от 0,1 до 5 %) путем умеренного перемешивания и в дальнейшем обрабатывают. Микроскопическая фотография микросфер, приготовленных в примере 2, показана на фиг. 1.
Пример 3.
От 40 до 80 г PCL с Mn 10000 растворяют в чистом растворителе Твин 20, 40, 60 или
80 путем нагревания до 70-90 °С и размешивания (600-1000 об/мин), после чего получают
микросферы в результате разделения фаз и управляемого охлаждения до 5 °С в течение
30 мин. Полученные микросферы фильтруют, промывают и высушивают. Среднее рас15
BY 18147 C1 2014.04.30
пределение 45 мкм, выход годного 75 % в пределах требуемого диапазона. В последующем от 10 до 50 % микросфер распределяют в геле CMC (от 0,1 до 5 %) или MC (от 0,1 до
5 %) путем умеренного перемешивания и в дальнейшем обрабатывают.
Дополнительные примеры.
Изобретение касается эффективного способа приготовления биоразлагаемых микросфер. Ключевой особенностью является применение растворов поверхностно-активного
вещества со сравнительно высокими концентрациями и вязкостями. Изобретение ведет к
образованию однородных частиц с гладкими поверхностями в требуемом диапазоне изменения размеров от около 38 до 75 мкм.
А. В одном из способов согласно изобретению, как подробно описано в примере 4, к
тщательно размешанному раствору поверхностно-активного вещества в воде быстро добавляют вязкий раствор полимера. После тщательного размешивания смеси и испарения
растворителя формируются частицы. Предпочтительным является летучий растворитель,
такой как DCM. Это быстрое добавление является возможным вследствие высокой вязкости тщательно размешанного раствора поверхностно-активного вещества в воде. Тщательное размешивание также делает возможным быстрое испарение растворителя перед
тем, как частицы могут быть собраны и подвергнуты дальнейшей обработке. Так как это
является эффективным, это является выгодным и желательным.
Для того чтобы можно было восстановить полимерные микросферы, должен быть
удален практически весь (или по меньшей мере большая часть) растворителя полимера.
Только в этом случае сферические полимерные частицы будут затвердевать (а в случае
кристаллизуемых частиц они будут способны к кристаллизации).
Время, требуемое для испарения и удаления растворителя, может быть определено несколькими способами:
взвесь, которая охладилась в результате испарения растворителя, снова нагрелась до
температуры окружающей среды;
взвесь микросфер PCL становится белой после кристаллизации полимера;
для поверхностно-активных веществ, подобных МС, на поверхности раствора поверхностно-активного вещества при испарении DCM образуется пена. Эта пена исчезает, как
только испаряется практически весь DCM;
микросферы не слипаются после стояния.
Б. В другом способе согласно изобретению, как подробно описано в примере 7, полимер на основе капролактона растворяют после нагревания в сравнительно вязком поверхностно-активном веществе (растворе), таком как Твин. Здесь формируются капли
полимера после распределения расплавленного полимера в растворе поверхностноактивного вещества в результате тщательного перемешивания смеси. После продолженного перемешивания и (контролируемого) охлаждения смеси до комнатной температуры
формируются частицы. Этот способ является очень эффективным, так как не требуется
никаких летучих растворителей.
Характеристики способов:
требуемый диапазон размеров частиц: мы собрали фракции в 38-75 мкм;
эффективный способ: малое время испарения при использовании DCM и высокая продуктивность в требуемом диапазоне размеров;
эффективный способ: частицы преимущественно сферической формы с гладкими поверхностями, что приводит к хорошей инъецируемости частиц.
Из микросфер, приготовленных в соответствии с изобретением, могут быть без труда
сформированы инъецируемые гели путем смешения. Объемы микросфер до 50 % могут
быть однородно размешаны в карбоксиметилцеллюлозных гелях (CMC, растворы Aqulon
от Hercules в воде или в фосфатном буферном физиологическом растворе) путем медленного перемешивания.
16
BY 18147 C1 2014.04.30
Пример 4.
Эксперименты согласно изобретению.
Приготовление микросфер с использованием растворов PCL в DCM и растворов MC в
воде.
Микросферы поли(ε-капролактона) (PCL) были приготовлены путем тщательного
размешивания растворов PCL в дихлорметане (DCM) в растворах метилцеллюлозы (MC) в
воде с последующим испарением DCM.
Различные количества PCL, полученного от Sigma Aldrich, с Mn = 10000 г/моль были
растворены в DCM. 100 г этих растворов были добавлены к 1000 г растворов MC в воде в
2-литровом химическом стакане в течение 2 с с тщательным перемешиванием на
1000 об/мин. Была использована MC, полученная от Colorcon Ltd., с различной величиной
молекулярной массы (Mn = 14000 г/моль, Mn = 41000 г/моль и Mn = 63000 г/моль).
В течение 3 ч тщательного непрерывного перемешивания при комнатной температуре
был испарен практически весь DCM. Перемешивание было прервано, и сформированным
микросферам была дана возможность осесть на дне стакана. Надосадочная жидкость была
удалена, а микросферы промыты водой. С помощью решет из нержавеющей стали микросферы были просеяны во влажном состоянии, и была собрана фракция с диаметрами от 38
до 75 мкм.
Микросферы подверглись вакуумной сушке при комнатной температуре, а продуктивность была определена гравиметрическим методом. Для анализа морфологии полученных микросфер была использована световая микроскопия (увеличение 10х).
Была проведена серия экспериментов, в которых изменялись концентрация раствора
PCL и характеристики раствора MC. Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1
Приготовление микросфер PCL при размешивании растворов PCL
в DCM в растворах MC в воде при тщательном размешивании
Вязкость
PCL, восстанов[PCL]
ПоверхMn MC [MC]
раствора
ленный как части- Форма частиц
(г/100 г
ность ча(г/моль) (мас. %) MC (сантицы 38-75 мкм
PCL
DCM)
стиц PCL
пуаз)
(мас. %)
шерохова10
14000
0,8
13
6,6
неправильная
тая
шерохова10
41000
0,8
56
35,2
неправильная
тая
10
63000
1,1
120
51,6
сферическая
гладкая
20
63000
1,1
120
74,0
сферическая а) гладкая а)
а)
изображение, полученное методом световой микроскопии, представленное на фиг. 2.
Из табл. 1 можно видеть, что при использовании раствора MC сравнительно высокой
вязкости могут быть эффективно получены гладкие сферические частицы. Кроме того,
высокая концентрация раствора PCL приводит к высокому выходу годных частиц PCL
требуемых размеров.
Пример 5.
Эксперименты согласно изобретению.
Приготовление микросфер с использованием растворов PLLA в DCM и растворов MC
в воде.
Микросферы поли(L-лактида) (PLLA) были приготовлены путем размешивания раствора PLLA в дихлорметане (DCM) в растворе метилцеллюлозы (MC) в воде с последующим испарением DCM.
PLLA в количестве 10 г, полученный от Purac Biochem (с собственной вязкостью в
хлороформе 2,3 дл/г), был растворен в 100 г DCM. 100 г этого раствора было добавлено к
1000 г раствора MC в воде в 2-литровом химическом стакане в течение 2 с с тщательным
перемешиванием на 1000 об/мин. MC с Mn = 63000 г/моль была получена от Colorcon Ltd.
17
BY 18147 C1 2014.04.30
В течение 3 ч тщательного непрерывного перемешивания при комнатной температуре
был испарен практически весь DCM. Перемешивание было прервано, и сформированным
микросферам была дана возможность осесть на дне стакана. Надосадочная жидкость была
удалена, а микросферы промыты водой. С помощью решет из нержавеющей стали микросферы были просеяны во влажном состоянии, и была собрана фракция с диаметрами от
38 до 75 мкм.
Микросферы подверглись вакуумной сушке при комнатной температуре, а продуктивность была определена гравиметрическим методом. Для анализа морфологии полученных микросфер была использована световая микроскопия (увеличение 10x).
Таблица 2
Приготовление микросфер PLLA при размешивании раствора PLLA
в DCM в растворе MC в воде при тщательном размешивании
Вязкость PLLA, восстанов[PLLA]
Mn MC [MC]
раствора
ленный как ча- Форма частиц Поверхность
(г/100 г
(г/моль) (мас. %) MC (санти- стицы 38-75 мкм
PLLA
частиц PLLA
DCM)
пуаз)
(мас. %)
10
63000
1,1
120
64,0
сферическая
гладкая
Табл. 2 показывает, что также возможно эффективное приготовление микросфер
PLLA. При использовании раствора MC высокой вязкости может быть получен высокий
выход годных микросфер PLLA с гладкой сферической поверхностью и требуемыми размерами частиц.
Пример 6.
Сравнительные эксперименты.
Приготовление микросфер с использованием растворов сополимера на основе капролактона и CL в DCM и растворов поверхностно-активного вещества в воде.
I. Типичные данные из литературы:
Приготовление микросфер сополимера на основе капролактона и CL было описано в
научной и патентной литературе. Например, в публикациях Hunter [US 2003/0157187 A1],
Erneta и Wu [EP 1872803 A1] и Iooss et al. [Biomaterials 22 (2001) 2785-2794] описано, что
добавление растворов PCL в DCM к растворам поливинилового спирта (PVA) или MC в
воде может приводить к образованию микросфер PCL.
Для предотвращения коагуляции раствора PCL в размешиваемой водной среде используемые условия включают в себя добавление растворов PCL в DCM на протяжении
сравнительно длинных периодов времени и большую продолжительность испарения
DCM, чтобы позволить затвердеть взвешенным частицам PCL. Только в этом случае
сформированные сферические микросферы PCL являются достаточно устойчивыми, чтобы быть собранными. Микросферы PCL приготавливались с использованием различных
экспериментальных установок и различных концентраций сополимеров PCL и CL и поверхностно-активного вещества, скоростей добавления и продолжительностей испарения
растворителя.
Hunter (пример 41 в US 2003/0157187 A1).
PCL: Mn = 25000-45000 г/моль; концентрация PCL в DCM 9,5 мас. % на объем; PVA:
Mn = 12000-18000 г/моль; 2 мл раствора полимера были вылиты в 100 мл водного раствора поверхностно-активного вещества при скорости перемешивания 1000 об/мин; время
добавления раствора полимера 120 мин; частицы были центрифугированы и промыты водой; были получены микросферы с размерами, изменяющимися в диапазоне от 30 до
100 мкм. Частицы были сферическими, но имели грубую или ямочную морфологию.
Erneta и Wu (примеры в EP 1872803 A1).
Полукристаллические сополимеры CL: молярные массы от 5000 до 25000 г/моль; концентрация полимера в DCM от 4 до 7,5 мас. % на объем; PVA: Mn не указано; около 275 г
раствора было вылито в около 1500 мл водного раствора поверхностно-активного вещества при перемешивании со скоростями, близкими к 250 об/мин; время добавления рас18
BY 18147 C1 2014.04.30
твора полимера до 19 мин; время испарения DCM от 14 до 16 ч; доля извлеченных микросфер с размерами от 38 до 75 мкм до 71 %; морфология поверхности не указана.
Iooss (Biomaterials 22 (2001) 2785-2794).
PCL: Mw = 150000; MC: Methocel A15LV с Mn = 14000; концентрация PCL в DCM от
6,7 до 9,1 мас. % на объем; 15 мл раствора вылито в водный раствор MC при перемешивании при 400-600 об/мин в течение 1 ч; DCM удален путем извлечения в большом объеме
(1000 мл) воды; доля извлеченных частиц PCL с размерами, меньшими чем 80 мкм, изменяется от около 1 до 40 %.
Обзор этих данных представлен в табл. 3.
Таблица 3
Обзор литературных данных по микросферам сополимеров PCL и CL,
приготовленных путем смешения растворов полимера в DCM в перемешиваемых
растворах поверхностно-активного вещества в воде
[ПоверхностноВремя добав- Время (ч)
Поверх[Полимер] активное вещФорма чаления раствора испарения
ность чав DCM
во] в воде
стиц
полимера (мин)
DCM
стиц
(мас. %)
9,5
шерохоHunter
PVA, 1,0
120
2
сферическая
мас./об. %
ватая
Erneta,
4-7,5
PVA, 3,0
12-19
14-16
Wu
мас. %
9,1
Iooss
MC, 0,1
60
1
нет
гладкая
мас./об. %
II. Приготовление микросфер с использованием растворов PCL в DCM и растворов
поверхностно-активного вещества в воде. Концентрации полимера и поверхностноактивного вещества такие, как описано в литературе.
PCL (полученный от Sigma Aldrich с Mn = 10000 г/моль) в количестве 80 г был растворен в 800 г DCM. 100 г этого раствора были добавлены к 1000 г растворов поверхностно-активных веществ PVA или MC в воде в 2-литровом химическом стакане в течение 2 с
при тщательном перемешивании при 1000 об/мин. В экспериментах были использованы
PVA с Mn = 9000-10000 г/моль, полученный от Sigma Aldrich, и MC, полученный от Colorcon Ltd., с Mn = 14000 г/моль.
В течение от 3 до 4 ч непрерывного тщательного перемешивания при 1000 об/мин при
комнатной температуре был испарен практически весь DCM. Перемешивание было прервано, а микросферам, которые сформировались, была дана возможность осесть на дно
химического стакана. Надосадочная жидкость была удалена, а микросферы были промыты водой. С помощью решет из нержавеющей стали микросферы были просеяны во влажном состоянии, и была собрана фракция с диаметрами от 38 до 75 мкм.
Микросферы подверглись вакуумной сушке при комнатной температуре, а продуктивность была определена гравиметрическим методом. Для анализа морфологии полученных микросфер была использована световая микроскопия (увеличение 10x).
Сравнительный эксперимент был выполнен, как описано в литературе Erneta и Wu [EP
1872803 A1]. 270 г раствора 7,5 мас. % PCL в DCM было добавлено на протяжении периода в 12 мин к 1500 мл раствора 3,0 мас. % PVA в воде при перемешивании при 240 об/мин.
Перед сбором микросфер DCM была дана возможность испариться при непрерывном перемешивании на протяжении 16 ч.
Результаты сведены в табл. 4.
19
BY 18147 C1 2014.04.30
Таблица 4
Приготовление микросфер PCL при смешении растворов PCL в DCM в растворах
MC в воде при перемешивании. Концентрации полимера и поверхностно-активного
вещества являются типичными концентрациями, используемыми в экспериментах,
описанных в литературе
PCL, восста[ПАВ] Вязкость Скорость
[PCL] в
новленный
Поверхв воде раствора перемеDCM
как частицы Форма частиц ность ча(мас. ПАВ (сан- шивания
(мас. %)
38-75 мкм
стиц
%)
типуаз)
(об/мин)
(мас. %)
PVA,
шероховаHunter
10
13
1000
44,0
неправильнаяа)
1,0
таяа)
Erneta,
PVA,
шерохова10
14
1000
23,2
неправильнаяб)
Wu
3,0
таяб)
Erneta,
PVA,
7,5
14
240
20,0
сферическая
гладкая
Wu
3,0
MC,
шероховаIooss
10
15
1000
1,1
неправильнаяв)
0,1
таяв)
а)
изображение, полученное методом световой микроскопии, представленное на фиг. 3.
б)
изображение, полученное методом световой микроскопии, представленное на фиг. 4.
в)
изображение, полученное методом световой микроскопии, представленное на фиг. 5.
Из табл. 4 следует, что при использовании типичных концентраций полимера и поверхностно-активного вещества, описанных в литературе, невозможно эффективное приготовление частиц с требуемыми характеристиками. При таких низких вязкостях
растворов поверхностно-активного вещества, очевидно, необходимо добавлять раствор
полимера на протяжении более длительных периодов времени, производить перемешивание при относительно низких скоростях и производить испарение DCM на протяжении
более длительных периодов времени с целью эффективного приготовления частиц с требуемыми характеристиками.
III. Приготовление микросфер с использованием растворов PCL в DCM и вязких растворов поверхностно-активного вещества в воде.
Микросферы PCL были приготовлены путем тщательного размешивания растворов
PCL в дихлорметане (DCM) в растворах поверхностно-активного вещества в воде с последующим испарением DCM.
Различные количества PCL, полученного от Sigma Aldrich, с Mn = 10000 г/моль были
растворены в DCM. 100 г этих растворов были добавлены к 1000 г растворов MC в воде в
2-литровом химическом стакане в течение 2 с при тщательном перемешивании при
1000 об/мин. Были использованы PVA с Mn = 9000-10000 г/моль, полученный от Sigma
Aldrich, и MC с Mn = 63000 г/моль, полученный от Colorcon Ltd.
В течение от 3 до 4 ч непрерывного тщательного перемешивания при 1000 об/мин при
комнатной температуре был испарен практически весь DCM. Перемешивание было прервано, а микросферам, которые сформировались, была дана возможность осесть на дно
химического стакана. Надосадочная жидкость была удалена, а микросферы были промыты водой. С помощью решет из нержавеющей стали микросферы были просеяны во влажном состоянии, и была собрана фракция с диаметрами от 38 до 75 мкм.
Микросферы подверглись вакуумной сушке при комнатной температуре, а продуктивность была определена гравиметрическим методом. Для анализа морфологии полученных микросфер была использована световая микроскопия (увеличение 10x).
Была выполнена серия экспериментов, в которых изменялись вид и концентрация раствора поверхностно-активного вещества. Результаты представлены в табл. 5.
20
BY 18147 C1 2014.04.30
Таблица 5
Приготовление микросфер PCL при размешивании растворов PCL в DCM
в вязких растворах поверхностно-активного вещества в воде
при тщательном перемешивании
Вязкость расPCL, вос[ПоверхПоверхтвора поверх- становлен[PCL]
ностноПоверхностноностноный как
Форма частиц
(г/100 г
активное
ность чаактивное
активного ве- частицы 38PCL
DCM)
вещество]
стиц PCL
вещество
щества (санти75 мкм
(мас. %)
пуаз)
(мас. %)
10
PVA
14,7
90
1,1
сферическая гладкая
10
MC
1,1
120
51,6
сферическая гладкая
20
MC
1,1
120
74,0
сферическаяа) гладкаяа)
а)
изображение, полученное методом световой микроскопии, представленное на фиг. 2.
Табл. 5 показывает, что использование более высоких концентраций PVA приводит к
вязким растворам в воде, которые могут быть использованы для приготовления микросфер PCL путем быстрого добавления раствора PCL к тщательно перемешиваемому раствору поверхностно-активного вещества. Получены очень малые частицы, но, несмотря на
то что морфология частиц является адекватной, выход годных частиц в требуемом диапазоне размеров, которые могут быть извлечены, является очень низким. При использовании в качестве поверхностно-активного вещества MC эффективность способа является
значительно лучшей.
Пример 7.
Эксперименты согласно изобретению.
Растворение PCL в смесях Твина при повышенных температурах с последующим образованием частиц после охлаждения.
После нагревания до около 80 °С и непрерывного перемешивания при 500 об/мин в
100 мл смеси Твин 60 и воды 50/50 по массе в 250 мл стеклянном сосуде было растворено
15 г PCL с Mn = 10000 г/моль. Твин 60 получен от Sigma Aldrich. Расплавленные капли
полимера поддерживаются в этом диспергированном состоянии путем перемешивания на
протяжении 2 мин. При сохранении перемешивания жидкая суспензия охлаждается затем
на протяжении суток до комнатной температуры. После затвердевания диспергированных
капель полимера получаются микросферы, которые могут быть извлечены путем декантации.
После промывки водой микросферы PCL были просеяны во влажном состоянии с помощью решет из нержавеющей стали, и была собрана фракция с размерами от 38 до
75 мкм. Микросферы были подвергнуты вакуумной сушке при комнатной температуре, а
выход годного был определен гравиметрическим методом. В общей сложности было собрано 12,1 г микросфер PCL.
Таблица 6
Приготовление микросфер PCL путем охлаждения растворов PCL в смесях
Твина 60 и воды при тщательном перемешивании
Вязкость смеси 50/50 PCL, восстановленный
Форма частиц Поверхность
PCL (г) Твин 60 и воды при как частицы 38-75 мкм
PCL
частиц PCL
(мас. %)
80 °С (сантипуаз)
15
125
80,7
сферическая
гладкая
Из табл. 6 видно, что при использовании сравнительно вязких смесей Теина 60 и воды
микросферы PCL могут быть сформированы из перемешиваемых растворов полимера при
повышенных температурах путем охлаждения.
21
BY 18147 C1 2014.04.30
Фиг. 1
Фиг. 2
Фиг. 3
22
BY 18147 C1 2014.04.30
Фиг. 4
Фиг. 5
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
23
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
2 476 Кб
Теги
by18147, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа