close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY19007

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2015.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 5/07
(2010.01)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОРГАННОЙ КУЛЬТУРЫ
ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
(21) Номер заявки: a 20101548
(22) 2010.10.28
(43) 2012.06.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское унитарное предприятие "Институт биохимии биологически активных соединений
Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Автор: Надольник Лилия Ивановна
(BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское унитарное
предприятие "Институт биохимии
биологически активных соединений
Национальной академии наук Беларуси" (BY)
BY 19007 C1 2015.02.28
BY (11) 19007
(13) C1
(19)
(56) НАДОЛЬНИК Л.И. и др. Российский
физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2001. - Т.87. - №3. - С. 375-383.
ЛУГОВОЙ С.В. и др. Проблемы криобиологии. - 2003. - №2. - С. 98-103.
Подготовка культуры клеток щитовидной железы для трансплантации.
Инструкция по применению. - Минск,
2007. - С. 57-68.
ХОРУЖЕНКО А.И. Экспериментальная онкология. - 2002. - Т. 24. - №2. С. 99-104.
ШОСТАК И.Н. и др. Проблемы эндокринологии. - 1992. - Т. 32. - № 5. С. 33-37.
(57)
Способ получения органной культуры щитовидной железы, заключающийся в том,
что осуществляют забор щитовидной железы, измельчают ее на кусочки, помещают кусочки на поверхность сосуда для культивирования, предварительно смоченную средой
199 с солями Хенкса и L-глутамином, содержащей 20 мМ HEPES, 1 % эмбриональной телячьей сыворотки, 10 ед/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина, сосуд с кусочками
щитовидной железы помещают в CO2-инкубатор и осуществляют культивирование при
37 °С и 5 % CO2 в течение 60 мин, затем добавляют в сосуд вышеуказанную среду и продолжают культивирование в течение 24 или 48 ч.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно технологии получения органной культуры щитовидной железы (ЩЖ), которая может использоваться как тестсистема для изучения метаболизма йода в щитовидной железе в условиях in vitro, оценки
эффективности йодсодержащих и тиреопротективных препаратов.
Прототипом данного способа является способ получения органной культуры ЩЖ, заключающийся в культивировании кусочков ЩЖ в среде в закрытых сосудах (пенициллиновые флаконы) во взвешенном состоянии [1].
Недостатками данного метода являются неадекватные условия функционирования тироцитов в закрытых сосудах (низкое содержание кислорода), требующие частой смены
среды (ежедневно на протяжении первых 3 суток культивирования), и неудобства смены
среды (потеря культивируемых кусочков ткани при смене среды).
BY 19007 C1 2015.02.28
Задача изобретения - расширение арсенала способов получения органной культуры
ЩЖ.
Указанная задача достигается путем культивирования кусочков ткани ЩЖ в открытых сосудах (чашки Петри, планшеты) в CO2-инкубаторе, прикрепленных ко дну сосуда.
Способ осуществляют следующим образом. Щитовидные железы крыс (или кусочки
ЩЖ человека, поросенка и др.) забирают в стерильных условиях с использованием стерильных инструментов (ножницы, пинцет), на льду удаляется соединительная ткань, ЩЖ
споласкивают в растворе 70 %-ного этанола и помещают в пенициллиновый флакон с раствором Хенкса. Далее ЩЖ измельчают до размеров 0,5-1 мм2 с помощью глазных ножниц
с длинными браншами, тщательно отмывают раствором Хенкса и помещают на предварительно смоченную средой поверхность сосуда для культивирования (чашку Петри диаметром 4 см - по 4-5 кусочков, 24 луночный планшет - по 2-3 кусочка), используя
автоматическую пипетку с оплавленным стерильным наконечником. Сосуды помещают в
CO2-инкубатор на 60 мин (стандартные условия культивирования: 37 °С, 5 % CO2). За это
время предназначенная для культивирования ткань прикрепляется к поверхности сосуда.
Далее в сосуд для культивирования осторожно добавляют полноценную среду. Культивирование проводят в среде 199 с солями Хенкса, 20 мМ HEPES и L-глутамином, содержащей 1 % эмбриональной телячьей сыворотки, 10 ед/мл пенициллина, 10 мг/мл стрептомицина Л.И. [1]. Через 24 ч производят полную или частичную (50-80 %) смену среды
культивирования. Экспериментальные исследования с применением органной культуры
начинают через 24 или 48 ч.
На фигуре показана полученная органная культура ЩЖ крыс. Нормопластическое
мелко- и среднефолликулярное строение. Фолликулы заполнены бледно окрашенным
коллоидом, в отдельных фолликулах коллоид отсутствует. Тироциты полностью сохраняют структуру ядра и цитоплазмы, что свидетельствует об эффективности предлагаемого
метода. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение в 100 раз.
О высокой функциональной активности тироцитов, культивируемых в органной культуре, свидетельствуют активный синтез и секреция в среду тиреоидных гормонов; результаты представлены в таблице.
Концентрация тироксина (нмоль/л) в среде в течение 48 ч культивирования
без ТТГ и с добавлением ТТГ (5 µед/мл)
6ч
12 ч
24 ч
48 ч
Культивирование без
1,8 ± 0,5
4,3 ± 0,8
8,9 ± 1,2
23,4 ± 3,2
ТТГ
Культивирование в среде
28,4 ± 1,8
44,5 ± 3,1
65,2 ± 2,6
124,8 ± 4,7
в присутствии ТТГ
Таким образом, заявляемый способ приготовления органной культуры щитовидной
железы прост в исполнении, для работы используются доступные реагенты, снижает расход реагентов для культивирования (более редкая смена среды культивирования), позволяет получить функционально активную культуру ЩЖ, которую можно использовать для
исследования метаболизма щитовидной железы и тестирования йодсодержащих и других
препаратов.
Источники информации:
1. Надольник Л.И., Басинский В.А., Мартынчик Д.И., Виноградов В.В. Влияние условий культивирования на функциональную активность тироцитов в органной культуре щитовидной железы новорожденных поросят // Росс, физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 2001. - Т. 87. - № 3. - С. 375-382.
2
BY 19007 C1 2015.02.28
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
464 Кб
Теги
by19007, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа