close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY19066

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2015.04.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 31/424 (2006.01)
A 61K 31/4523 (2006.01)
(2006.01)
A 61P 31/06
ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ
СОЕДИНЕНИЯ ОКСАЗОЛА
(21) Номер заявки: a 20080575
(22) 2006.10.04
(31) 2005-292461 (32) 2005.10.05 (33) JP
(85) 2008.05.05
(86) PCT/JP2006/320239, 2006.10.04
(87) WO 2007/043542, 2007.04.19
(43) 2008.10.30
(71) Заявитель: ОЦУКА ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (JP)
(72) Авторы: МАЦУМОТО, Макото; ХАСИДЗУМЭ, Хироюки; ТОМИСИГЭ, Тацуо; КАВАСАКИ, Масанори;
СИНОКАВА, Ёсихико (JP)
BY 19066 C1 2015.04.30
BY (11) 19066
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: ОЦУКА ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (JP)
(56) EP 1555267 A1, 2005.
JP 2004-149527 A, 2004.
WO 2005/042542 A1.
DAUTZENBERG B. et al. Méd. Mal. Infect. - 1991. - V. 21. - Is. 2. - Р. 115-120.
DAUTZENBERG B. Infection. - 1997. V. 25. - No. 1. - Р. 63-66.
KZ 13761 A, 2003.
(57)
1. Фармацевтическая композиция, обладающая противотуберкулезной активностью,
содержащая:
(I) по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, включающей (R)-2метил-6-нитро-2-{4-[4-(4-трифторметоксифенокси)пиперидин-1-ил]феноксиметил}-2,3-дигидроимидазо[2,1-b]оксазол и его фармакологически приемлемые соли, и
(II) одно или более первичное противотуберкулезное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей рифампицин, рифабутин, рифапентин, изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин и их соли.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II включает по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, включающей
рифампицин, изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин и их соли.
3. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соль и
(ii) по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из группы, включающей изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин и их соли.
4. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соль и
(ii) пиразинамид или его соль.
5. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соль,
(ii) пиразинамид или его соль и
BY 19066 C1 2015.04.30
(iii) этамбутол или его соль.
6. Фармацевтическая композиция по п. 4, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II дополнительно содержит хинолоновое антибактериальное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей гатифлоксацин, моксифлоксацин, их соли и их
гидраты.
7. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что лекарственное
средство II содержит пиразинамид или его соль в качестве первичного противотуберкулезного средства и дополнительно содержит хинолоновое антибактериальное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей гатифлоксацин, моксифлоксацин, их
соли и их гидраты.
8. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-7 для приготовления противотуберкулезного лекарственного средства для дозированного приема с интервалом 48 ч или более.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции.
Известно, что соединения 2,3-дигидро-6-нитроимидазо[2,1-b]оксазола, представленные следующей общей формулой 1, их оптически активные формы и их фармакологически приемлемые соли (далее в данном документе их просто именуют соединениями
оксазола (I)) обладают превосходным бактерицидным эффектом против кислотоустойчивых бактерий (Mycobacterium tuberculosis, устойчивых ко многим лекарственным средствам Mycobacterium tuberculosis и атипичных кислотоустойчивых бактерий) [JP-A-2004149527 и WO2005-042542].
R1
N
(1)
O2N
,
N
O
(CH2)nR2
где R1 представляет атом водорода или C1-6-алкильную группу,
n представляет целое число из 0-6,
R представляет любую группу из следующих общих формул A-G.
Группа, представленная общей формулой A, представляет собой:
O
N
R3 ,
(A)
где R3 представляет любую группу из следующих (1)-(6).
(1) феноксигруппа (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы, состоящей из
атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в фенильном кольце);
(2) фенил C1-6-алкокси группа (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы,
состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной группы и
необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в фенильном кольце);
(3) -NR4R5 - группа, где R4 представляет атом водорода или C1-6-алкильную группу, и
R5 представляет фенильную группу (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы,
состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной группы и
необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в фенильном кольце);
2
BY 19066 C1 2015.04.30
(4) фенил C1-6-алкильная группа (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы,
состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной группы и
необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в фенильном кольце);
(5) фенокси C1-6 алкильная группа (по меньшей мере, одна группа, выбранная из группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6 алкильной группы и необязательно галогензамещенной C1-6 алкокси группы, может быть замещена в
фенильном кольце) и
(6) бензофурил C1-6-алкильная группа (по меньшей мере одна группа, выбранная из
группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной
группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в
бензофурановом кольце);
группа, представленная общей формулой B, представляет собой:
N
N
COOCH2CH
CH
R6 ,
(B)
где R6 представляет фенильную группу (по меньшей мере одна группа, выбранная из
группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной
группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть замещена в
фенильном кольце);
группа, представленная общей формулой C, представляет собой:
O
N
N
R7 ,
(C)
где R7 представляет фенил C2-10-алкенильную группу (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6алкильной группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть
замещена в фенильном кольце) или бифенил C1-6-алкильную группу (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6-алкильной группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси групппы, может быть замещена в фенильном кольце);
группа, представленная общей формулой D, представляет собой:
N
N
N
R8 ,
(D)
O
S
где R представляет фенил C1-6-алкильную группу (по меньшей мере одна группа, выбранная из группы, состоящей из атома галогена, необязательно галогензамещенной C1-6алкильной группы и необязательно галогензамещенной C1-6-алкокси группы, может быть
замещена в фенильном кольце);
группа, представленная общей формулой E, представляет собой:
8
N
N
R8
,
O
где R8 такой, как описано выше;
группа, представленная общей формулой F, представляет собой:
3
(E)
BY 19066 C1 2015.04.30
O
R8 ,
N
(F)
N
8
где R такой, как описано выше;
группа, представленная общей формулой G, представляет собой:
N
N
N
C
H
R6 ,
(G)
где R6 такой, как описано выше.
Среди кислотоустойчивых бактерий Mycobacterium tuberculosis человека широко известна, и приблизительно одна треть человечества инфицирована ею. В дополнение Mycobacterium africanum, Mycobacterium bovis и Mycobacterium microti известны как члены
группы туберкулезной палочки, наряду с Mycobacterium tuberculosis, и как микобактерии
сильно патогенны для людей.
Лечение такого туберкулеза проводят с использованием лекарственных средств, классифицированных как первичное противотуберкулезное лекарственное средство, то есть
трех лекарственных средств, включающих антибактериальное лекарственное средство семейства рифамицина (например, рифампицин, рифабутин, рифапентин и т.д.), изониазида
и гидрохлорида этамбутола (или стрептомицин), или четырех лекарственных средств,
включающих указанные плюс пиразинамид.
Однако для лечения туберкулеза требуется очень продолжительный период приема
лекарственных средств, что приводит к плохому соблюдению режима приема, результатом чего является неудавшееся лечение в значительном числе случаев. При мультилекарственной резистентности болезнетворной Mycobacterium tuberculosis и туберкулезе,
вызванном Mycobacterium tuberculosis с мультилекарственной резистентностью, применяют вторичные противотуберкулезные лекарственные средства, включающие канамицин, энвиомицин, капреомицин, парааминосалициловую кислоту, циклосерин,
тиоацетазон; хинолоновые антибактериальные лекарственные средства, включающие офлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, гатифлоксацин, спарфлоксацин и т.д., благодаря их эффективности in vitro, и макролидные антибактериальные лекарственные
средства, включающие кларитромицин и азитромицин и т.д. Они, однако, имеют сильные
побочные эффекты и низкую результативность.
Более того, для первичных противотуберкулезных лекарственных средств описаны
следующие побочные эффекты: гепатопатия, полный синдром, лекарственная аллергия,
несовместимость с другими лекарственными средствами из-за ферментативной индукции,
связанной с P450, для рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных
средств; периферическая невропатия, проявление тяжелой гепатопатии при сопутствующем применении рифампицина с изониазидом; ухудшение зрения из-за расстройства зрительного нерва при приеме гидрохлорида этамбутола; ухудшенная слуховая способность
из-за расстройства 8-го церебрального нерва стрептомицином; гепатопатия, приступ подагры, связанный с повышенным уровнем мочевой кислоты, и рвота и т.д. для пиразинамида [A Clinician's Guide To Tuberculosis, Michael D. Iseman 2000 by Lippincott Williams &
Wilkins, напечатано в USA, ISBN Q-7817-1749-3; Kekkaku 2-е издание (1992), Humiyuki
Kose и Takahide Izumi, Igakushoin; Kekkaku Vol. 74: 77-82 (1999)].
В действительности, есть сообщение о том, что случаи, где стандартная химиотерапия
не может быть проведена из-за указанных побочных эффектов, составляют 70 % случаев
прерванного лечения (около 23 %, 52 случая) от общего числа случаев (228 исследованных стационарных случаев в целом) [Kekkaku Vol. 74: 77-82 (1999)].
4
BY 19066 C1 2015.04.30
В частности, известно, что наиболее часто развивается побочный эффект гепатотоксичности, который является распространенным для рифамицина и родственного антибактериального лекарственного средства, изониазида и пиразинамида, из пяти описанных
выше лекарственных средств, совместно на первой линии. С другой стороны, Mycobacterium tuberculosis, которая обнаруживает резистентность к противотуберкулезным лекарственным средствам и приобретает мультилекарственную резистентность, становится более
распространенной, делая лечение более трудным.
Согласно исследованию WHO (1996-1999), заявлено, что среди Mycobacterium tuberculosis, изолированных в мировой практике, относительная доля бактерий, которые показали
резистентность к какому-либо из существующих противотуберкулезных лекарственных
средств, достигает 19 % и доля тех, которые показали мультилекарственную резистентность, составляет 5,1 %. Число носителей, которые заражены такими Mycobacterium tuberculosis с мультилекарственной резистентностью, предположительно достигло 60 миллионов в мире, и дальнейшее распространение Mycobacterium tuberculosis с мультилекарственной резистентностью в будущем вызывает беспокойство [April 2001, как приложение к
журналу Tuberculosis, the "Scientific Blueprint for TB drug development"].
Кроме того, сообщается, что масса случаев смерти больных СПИД вызвана туберкулезом и что число людей, зараженных одновременно туберкулезом и ВИЧ, достигло
10,7 миллионов в 1997 году [Global Alliance for TB drug development]. К тому же предполагается, что смешанная инфекция приводит к более высокому риску начала туберкулеза,
по меньшей мере 30-кратному, чем в иных случаях.
Дополнительно, бактерии, известные как патогенные для людей, включают Mycobacterium avium и Mycobacterium intracellulare, которые вызывают в последнее время распространение болезни MAC (болезнь, вызываемая комплексом Mycobacterium, aviumintracellulare), и другие атипические кислотоустойчивые бактерии, такие как Mycobacterium kansasii, Mycobacterium marinum, Mycobacterium simiae, Mycobacterium scrofulaceum,
Mycobacterium szulgai, Mycobacterium xenopi, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium
haemophilum, Mycobacterium ulcerans, Mycobacterium shimoidei, Mycobacterium fortuitum,
Mycobacterium chelonae, Mycobacterium smegmatis и Mycobacterium aurum.
В настоящее время уменьшен недостаток подающих надежды терапевтических
средств против указанных вызываемых атипическими кислотоустойчивыми бактериями
болезней, и в данном случае первичные противотуберкулезные лекарственные средства,
такие как рифамицин и родственные антибактериальные лекарственные средства, изониазид, этамбутол, стрептомицин и пиразинамид, и общепринятые терапевтические средства
против микроорганизмов, включая хинолоновые антибактериальные лекарственные средства или антибиотики, применяют в комбинации.
При лечении болезни, вызываемой кислотоустойчивыми бактериями, однако, требуется более длительное применение лекарственных средств по сравнению с инфекционными
болезнями, вызываемыми общераспространенными бактериями, и были сообщения о случаях затруднения излечения и смерти. В связи с этим задачей данного изобретения является разработка лекарственных средств, которые имели бы более высокую эффективность.
В результате широкого исследования для решения указанной задачи обнаружено, что
эта задача может быть достигнута применением одного или нескольких лекарственных
средств, выбранных из первичных противотуберкулезных лекарственных средств, вторичных противотуберкулезных лекарственных средств, хинолоновых антибактериальных
лекарственных средств, макролидных антибактериальных лекарственных средств, сульфаниламидных лекарственных средств и анти-ВИЧ лекарственных средств, в комбинации
по меньшей мере с одним, выбранным из группы, состоящей из соединений оксазола (I),
описанных выше. К тому же измерение антибактериальной активности соединений оксазола (I) против Mycobacterium tuberculosis показало, что они проявляют более выраженный сильный антибактериальный эффект за более короткое время, и эффект сохраняется в
5
BY 19066 C1 2015.04.30
течение продолжительного периода. Следовательно, найдено, что клиническая терапия на
основе периодического введения может быть осуществлена на практике.
Данное изобретение совершено на основе полученных данных.
Изобретение предпочтительно относится к фармацевтической композиции, обладающей противотуберкулезной активностью, и ее применению для приготовления противотуберкулезного лекарственного средства для дозированного приема, при этом:
фармацевтическая композиция, обладающая противотуберкулезной активностью, содержит:
(I) по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, включающей (R)-2метил-6-нитро-2-{4-[4-(4-трифторметоксифенокси)пиперидин-1-ил]феноксиметил}-2,3-дигидроимидазо[2,1-b]оксазол и его фармакологически приемлемые соли, и
(II) одно или более первичное противотуберкулезное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей рифампицин, рифабутин, рифапентин, изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин и их соли.
Преимущество имеет фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) включает по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, включающей рифампицин, изониазид, этамбутол, пиразинамид,
стрептомицин и их соли.
Преимущество имеет также фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соли,
(ii) по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, включающей изониазид,
этамбутол, пиразинамид, стрептомицин и их соли.
Преимущество имеет также фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соль,
(ii) пиразинамид или его соль.
Преимущество имеет также фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) содержит в комбинации
(i) рифампицин или его соль,
(ii) пиразинамид или его соль и
(iii) этамбутол или его соль.
Преимущество имеет также фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) дополнительно содержит хинолоновое антибактериальное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей
гатифлоксацин, моксифлоксацин, их соли и их гидраты.
Преимущество имеет также фармацевтическая композиция, в которой первичное противотуберкулезное лекарственное средство (II) дополнительно содержит пиразинамид или
его соль в качестве первичного противотуберкулезного средства и также содержит хинолоновое антибактериальное лекарственное средство, выбранное из группы, включающей
гатифлоксацин, моксифлоксацин, их соли и их гидраты.
Изобретение относится также к применению любой из перечисленных выше фармацевтических композиций для приготовления противотуберкулезного лекарственного
средства для дозированного приема с интервалом 48 ч или более.
Сущность изобретения поясняется с помощью следующих диаграмм.
На фиг. 1 дана диаграмма, на которой представлены результаты эксперимента in vivo
для комбинированного эффекта соединений оксазола (I) с другими лекарственными средствами.
На фиг. 2 дана диаграмма, на которой представлены результаты эксперимента in vivo
для комбинированного эффекта соединений оксазола (I) с другими лекарственными средствами.
6
BY 19066 C1 2015.04.30
На фиг. 3 дана диаграмма, на которой представлен эффект соединений оксазола (I) на
внутриклеточные паразитические туберкулезные микобактерии.
Соединения оксазола (I), используемые в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, представляют собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из
группы, включающей (R)-2-метил-6-нитро-2-{4-[4-(4-трифторметоксифенокси)пиперидин-1-ил] феноксиметил}-2,3-дигидроимидазо[2,1-b]оксазол и его фармакологически приемлемые соли.
Оптически активные формы соединений оксазола включают формы R и S .
Фармакологически приемлемые соли включают, например, соли неорганических кислот, такие как сульфат, нитрат, гипохлорит, фосфат и гидробромид, соли сульфоновых
кислот, такие как п-толуолсульфонат, метансульфонат и этансульфонат, и соли органических кислот, такие как оксалат, малеат, фумарат, малат, тартрат, цитрат, сукцинат и бензоат.
К наиболее предпочтительным соединениям оксазола (I) относится по меньшей мере
одно, выбранное из группы, состоящей из соединений A-R, соединений Q-R, их оптически
активных форм и их фармакологически приемлемых солей.
Указанные соединения оксазола, их оптически активные формы и их фармакологически приемлемые соли (I), способ их производства, дозы их применения и т.д. раскрыты в
JP-A-2004-149527 и WO2005-042542, содержание которых приобщено к сему ссылкой как
часть описания.
Первичные противотуберкулезные лекарственные средства (II), которые могут быть
объединены с соединениями оксазола (I) в фармацевтической композиции по данному
изобретению, включают, например, лекарственные средства (II), выбранные из следующих соображений. Одно или несколько лекарственных средств (II) могут быть использованы в комбинации. Предпочтительно, чтобы одно или несколько лекарственных средств
(II) для использования в комбинации были выбраны из противотуберкулезных лекарственных средств следующей группы (1).
(1) Первичные противотуберкулезные лекарственные средства.
Первичные противотуберкулезные лекарственные средства включают, например, рифамицин и родственные антибактериальные лекарственные средства (рифампицин, рифабутин, рифапентин и т.д.), изониазид, этамбутол, стрептомицин, пиразинамин и т.д. Такие
первичные противотуберкулезные лекарственные средства могут быть в форме солей, таких как метансульфонат натрия и гидрохлорид. Конкретные примеры включают, например, метансульфонат натрия изониазида, гидрохлорид этамбутола, сульфат
стрептомицина и т.п.
2) Хинолоновые антибактериальные лекарственные средства, которые дополнительно
могут включать первичные противотуберкулезные лекарственные средства (II), могут
быть выбраны из следующих соображений.
Хинолоновые антибактериальные лекарственные средства включают, например, гатифлоксацин, моксифлоксацин, грепафлоксацин, надифлоксацин, налидиксовую кислоту,
пипемидовую кислоту, пиромидовую кислоту, эноксацин, норфлоксацин, офлоксацин, тосуфлоксацин, ципрофлоксацин, ломефлоксацин, спарфлоксацин, флероксацин, левофлоксацин, прулифлоксацин, пазуфлоксацин, линезолид и т.д. Такие хинолоновые
антибактериальные лекарственные средства могут быть в форме солей, таких как тозилат,
гидрохлорид и мезилат, и гидратов. Конкретные примеры включают, например, тозилат
тосуфлоксацина, гидрохлорид ципрофлоксацина, гидрохлорид ломефлоксацина, мезилат
пазуфлоксацина, гидрат гатифлоксацина, тригидрат пипемидовой кислоты и т.д.
Фармацевтические композиции по данному изобретению, содержащие соединения оксазола (I), объединенные с указанными лекарственными средствами (II), включают предпочтительно следующее:
(1) фармацевтические композиции, содержащие соединения оксазола (I), в сочетании
по меньшей мере с одним средством, выбранным из группы, состоящей из первичных
7
BY 19066 C1 2015.04.30
противотуберкулезных лекарственных средств (предпочтительно рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно по меньшей мере
одного, выбранного из группы, состоящей из рифампицина, рифабутина и рифапентина, и
более предпочтительно рифампицина), по меньшей мере одного, выбранного из группы,
состоящей из изониазида, этамбутола, стрептомицина, пиразинамида и их солей);
(2) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I) по
меньшей мере с одним первичным противотуберкулезным лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно по меньшей мере одного, выбранного из группы,
состоящей из рифампицина, рифабутина и рифапентина, и более предпочтительно рифампицина), изониазида, метансульфоната натрия изониазида, гидрохлорида этамбутола,
стрептомицина и пиразинамида;
(3) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I), (i)
рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно
по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из рифампицина, рифабутина
и рифапентина, и более предпочтительно рифампицина) с (ii) по меньшей мере одним
первичным противотуберкулезным лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из изониазида, гидрохлорида этамбутола, стрептомицина и пиразинамида;
(4) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединения оксазола (I), (i)
рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно
по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из рифампицина, рифабутина
и рифапентина, и более предпочтительно рифампицина) с (ii) пиразинамидом;
(5) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I) с
по меньшей мере одним первичным противотуберкулезным лекарственным средством,
выбранным из группы, состоящей из (i) рифамицина и родственных антибактериальных
лекарственных средств (предпочтительно по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из рифампицина, рифабутина и рифапентина, и более предпочтительно
рифампицина), (ii) пиразинамида и (iii) изониазида, метансульфоната натрия изониазида,
гидрохлорида этамбутола и стрептомицина;
(6) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I) по
меньшей мере с одним хинолоновым антибактериальным лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из гидрата гатифлоксацина, моксифлоксацина и грепафлоксацина;
(7) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I),
(A) по меньшей мере одного хинолонового антибактериального лекарственного средства,
выбранного из группы, состоящей из гидрата гатифлоксацина и моксифлоксацина, и (B)
по меньшей мере одного первичного противотуберкулезного терапевтического средства,
выбранного из группы, состоящей из рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно по меньшей мере одного, выбранного из группы,
состоящей из рифампицина, рифабутина и рифапентина, и более предпочтительно рифампицина), изониазида, метансульфоната натрия изониазида, гидрохлорида этамбутола,
стрептомицина и пиразинамида;
(8) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I),
(A) по меньшей мере одного хинолонового антибактериального лекарственного средства,
выбранного из группы, состоящей из гидрата гатифлоксацина и моксифлоксацина, (B-i)
рифамицина и родственных антибактериальных лекарственных средств (предпочтительно
по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из рифампицина, рифабутина
и рифапентина, и более предпочтительно рифампицина) и (B-ii) по меньшей мере одного
первичного противотуберкулезного терапевтического средства, выбранного из группы,
состоящей из изониазида, гидрохлорида этамбутола, стрептомицина и пиразинамида;
8
BY 19066 C1 2015.04.30
(9) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I),
(A) моксифлоксацина, (B-i) рифампицина и (B-ii) пиразинамида;
(10) фармацевтические композиции, содержащие сочетание соединений оксазола (I) с
по меньшей мере одним хинолоновым антибактериальным лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из гидрата гатифлоксацина и моксифлоксацина.
Указанные соединения оксазола (I) и указанные лекарственные средства (II) могут
быть введены перорально или парентерально.
При этом, когда используют фармацевтическую композицию, содержащую сочетание
соединений оксазола (I) по данному изобретению и лекарственных средств (II), описанных
выше, период введения соединений оксазола (I) по данному изобретению и лекарственных
средств (II), описанных выше, не ограничен, поэтому соединения оксазола (I) по данному
изобретению или их фармацевтические композиции и лекарственные средства (II), описанные выше, или их фармацевтические композиции могут быть введены субъекту как
сопутствующие или с разницей во времени. При введении соединений оксазола (I) и лекарственных средств (II), хотя они могут быть введены как сопутствующие, лекарственные средства (II) могут быть введены раньше с последующим введением соединений
оксазола (I), или соединения оксазола (I) могут быть введены раньше с последующим введением лекарственных средств (II). При введении с разницей во времени разница во времени изменяется в зависимости от активных ингредиентов, составов и способов введения.
При введении лекарственных средств (II) раньше, например, способ включает введение
соединений оксазола (I) в пределах от 1 мин до 3 дней, предпочтительно в пределах от
10 мин до 1 дня, более предпочтительно в пределах от 15 мин до 1 ч после введения лекарственных средств (II).
Доза лекарственных средств (II), описанных выше, может соответствовать дозе, применяемой клинически, и может быть соответственно выбрана в зависимости от субъекта,
которому она должна быть введена, пути введения, болезни, сочетания и т.д.
Форма введения фармацевтических композиций по данному изобретению, используемых в комбинации, конкретно не ограничена, если только соединения оксазола (I) по данному изобретению вводят с лекарственными средствами (II), описанными выше. Такие
формы введения включают, например, (1) введение отдельных, полученных составлением
по рецептуре препаратов соединений оксазола (I) и лекарственных средств (II), описанных
выше, одновременно, (2) одновременное введение одним и тем же путем введения двух
раздельно полученных составлением по рецептуре препаратов соединений оксазола (I) и
лекарственных средств (II), описанных выше, (3) введение с разницей во времени одним и
тем же путем введения двух полученных составлением по рецептуре препаратов соединений оксазола (I) и лекарственных средств (II), описанных выше, раздельно (например,
введение в порядке: соединения оксазола (I), одно или несколько лекарственных средств
(II), описанных выше, или в обратном порядке), (4) одновременное введение разными путями введения двух раздельно полученных составлением по рецептуре препаратов соединений оксазола (I) и лекарственных средств (II), описанных выше, (5) введение с разницей
во времени разными путями введения одного или нескольких раздельно полученных составлением по рецептуре препаратов соединений оксазола (I) и лекарственных средств
(II), описанных выше, (например, введение в порядке: соединения оксазола (I), одно или
несколько лекарственных средств (II), описанных выше, или в обратном порядке).
Более того, когда используют фармацевтическую композицию из единственного соединения оксазола (I) или фармацевтическую композицию, содержащую сочетание соединения оксазола (I) с лекарственными средствами для сопутствующего применения,
введение осуществляют, например, периодически с перерывами, установленными для того, чтобы облегчить и устранить побочные эффекты имеющихся лекарственных средств
для сопутствующего применения, используемых в комбинации. При введении периодически, хотя продолжительность перерыва по данному изобретению будет изменяться соот9
BY 19066 C1 2015.04.30
ветственно различным ситуациям и будет определяться при необходимости решением лечащего врача, соединения оксазола (I) желательно вводить с регулярными перерывами.
Поэтому в варианте осуществления данного изобретения соединения оксазола (I) вводят с перерывами около 48 ч или более (предпочтительно около 72 ч или более, более
предпочтительно около 7 дней или более).
Кроме того, в варианте осуществления данного изобретения соединения оксазола (I)
вводят не более чем 5 раз, предпочтительно не более чем 3 раза, предпочтительно не более чем 2 раза, более предпочтительно один раз в неделю. Схема применения противотуберкулезного лекарственного средства, включающего фармацевтическую композицию по
изобретению, 3 раза в неделю включает такую 7-дневную процедуру, когда упомянутое
лекарственное средство применяют непрерывно в течение 3 дней от начала введения с перерывом в течение следующих 4 дней. Схема применения лекарственного средства 2 раза
в неделю включает такую 7-дневную процедуру, когда лекарственное средство применяют непрерывно в течение 2 дней от начала введения с перерывом в течение следующих
5 дней. Кроме того, схема применения лекарственного средства 5 раз в неделю включает
такую процедуру, когда лекарственное средство применяют непрерывно в течение 3 дней
в неделю с перерывом в течение следующих 2 дней.
Какие-либо соединения оксазола (I), которые являются компонентами данного изобретения, лекарственные средства (II) и/или лекарственные средства на основе фармацевтической композиции по данному изобретению, содержащей сочетание соединений
оксазола (I) с лекарственными средствами (II), имеют низкую токсичность, и соединения
оксазола (I) и/или лекарственные средства (II) могут быть смешаны с фармакологически
приемлемыми носителями согласно известным способам и введены безопасно как фармацевтические композиции, например таблетки (включая покрытые сахаром и покрытые
пленкой таблетки), порошки, гранулы, капсулы (включая мягкие капсулы), растворы, препараты для инъекций, суппозитории, лекарственные средства с замедленным высвобождением, вводимые перорально или парентерально (например, местно, ректально,
внутривенно и т.д.). Препараты для инъекций могут быть введены внутривенно, внутримышечно, подкожно или внутрь органа, или непосредственно на место поражения. Фармакологически приемлемые носители, которые могут быть использованы при
производстве лекарственных средств для сопутствующего применения по данному изобретению, включают наполнители, дезинтегрирующие вещества, связующие вещества,
улучшающие скольжение, смазки, пленкообразующие агенты, окрашивающие агенты,
суспендирующие агенты, подслащиватели или поверхностно-активные вещества, которые
используют, как нужно, чтобы получить общераспространенные формы фармацевтических препаратов согласно известным методам. Формы фармацевтических препаратов
включают, например, порошки, таблетки, пилюли, капсулы и т.д.
Наполнители включают, например, лактозу, безводную лактозу, сукрозу, сахарозу,
D-маннит, D-сорбит, ксилит, эритрит, декстрин, кристаллическую целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, кукурузный крахмал, картофельный крахмал, безводный гидрофосфат кальция и т.д.
Дезинтегрирующие вещества включают, например, натриевую соль карбоксиметилкрахмала, кармеллозу, кальциевую соль кармеллозы, натриевую соль кармеллозы, натриевую соль кроскармеллозы, кросповидон, гидроксипропилцеллюлозу с низкой степенью
замещения, частично предварительно клейстеризованный крахмал и т.д.
Связующие включают, например, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, предварительно клейстеризованный крахмал, сироп,
крахмальный сироп и т.д.
Вещества, улучшающие скольжение, включают, например, легкую безводную кремниевую кислоту, синтетический силикат алюминия, водный диоксид кремния, стеарат
кальция, метасиликат, алюминат магния, тальк и т.д.
10
BY 19066 C1 2015.04.30
Смазки включают, например, стеарат магния, стеарат кальция, силикат магния, оксид
магния, тальк, гидрогенизированное масло, жирнокислотный сложный эфир сукрозы,
стеарилфумарат натрия и т.д.
Пленкообразующие агенты включают, например, гидроксипропилметилцеллюлозу,
поливиниловый спирт, полисорбат, макроголь, тальк и т.д.
Окрашивающие агенты включают, например, желтый сесквиоксид железа, бурый оксид железа, сесквиоксид железа, оксид титана, пищевой голубой № 1, пищевой красный
№ 2, пищевой красный № 3, пищевой желтый № 4 и т.д.
Суспендирующие агенты включают, например, полисорбат, полиэтиленгликоль, камедь акации, глицерин, желатин и т.д.
Подслащивающие агенты включают, например, аспартам, сахарин, натриевую соль
сахарина, крахмальный сироп, фруктозу и т.д.
Поверхностно-активные вещества включают, например, лаурат натрия, полисорбат,
полиоксиэтилированное гидрогенизированное касторовое масло и т.д.
Капсулы получают упаковкой в твердые, включая желатиновые капсулы, капсулы из
гидроксипропилметилцеллюлозы и капсулы из поливинилового спирта, а также в желатиновые мягкие капсулы согласно известным методам. Фармацевтические материалы включают традиционные различные органические и неорганические несущие вещества,
например наполнители, смазки, связующие и дезинтегрирующие вещества в твердых препаратах или диспергаторы, солюбилизаторы, суспендирующие агенты, агенты для изотоничности, буферные агенты и агенты для обезболивания в жидких препаратах. Кроме
того, добавки, включая общераспространные консерванты, антиоксиданты, окрашивающие агенты, подсластители, адсорбенты, смачивающие агенты, могут быть использованы
в соответствующем количестве при необходимости.
В данном изобретении используемое отношение соединений оксазола (I) и лекарственных средств (II), описанных выше, может быть обычно около 0,01-100 частей по массе
последнего на 1 часть по массе предыдущего, предпочтительно около 0,1-60 частей по
массе, более предпочтительно около 1-60 частей по массе.
Кроме того, в случае, когда лекарственные средства (II), описанные выше, содержат в
комбинации (i) рифампицина с (ii) по меньшей мере одним противотуберкулезным лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из изониазида, гидрохлорида
этамбутола, стрептомицина и пиразинамида, используемое отношение рифампицина (i) и
противотуберкулезного лекарственного средства (ii) может быть около 0,1-10 частей по
массе последнего на 1 часть по массе предшествующего, предпочтительно около
0,3-2,5 части по массе.
Кроме того, в случае, когда лекарственные средства (II), описанные выше, содержат в
комбинации (i) рифампицин, (ii) пиразинамид и (iii) по меньшей мере одно противотуберкулезное лекарственное средство, выбранное из группы, состоящей из изониазида, этамбутола и стрептомицина, используемое отношение (i) рифампицина и (ii) пиразинамида
может быть обычно около 1-10 частей по массе последнего на 1 часть по массе предшествующего, предпочтительно около 1,5-4 части по массе, и используемое отношение рифампицина (i) и противотуберкулезных лекарственных средств (iii) может быть обычно
около 0,1-10 частей по массе последнего на 1 часть по массе предшествующего, предпочтительно около 0,1-5 частей по массе, более предпочтительно около 0,3-3 частей по массе.
Объединенное отношение соединений оксазола (I) к лекарственным средствам (II) в
противотуберкулезных терапевтических средствах по данному изобретению может быть
соответственно выбрано в зависимости от субъекта, которому их собираются вводить, пути введения, болезни и т.д. Например, хотя общее отношение соединений оксазола (I) и
лекарственных средств (II) в противотуберкулезных терапевтических средствах по данному изобретению варьируется в зависимости от формы препаратов, обычно оно находится
в пределах около 0,01-99,99 % по массе, предпочтительно около 0,1-99,9 % по массе, бо11
BY 19066 C1 2015.04.30
лее предпочтительно около 1-30 % по массе на основе всего препарата. Остальную часть
составляют фармакологически приемлемые носители, описанные выше.
Дополнительно, в случаях когда соединения оксазола (I) и лекарственного средства
(II) готовят в виде отдельных форм, их содержимое может быть подобным.
Хотя доза противотуберкулезных терапевтических средств на основе фармацевтической композиции по данному изобретению будет изменяться в зависимости от типа соединений оксазола (I), возраста, массы тела, симптома, дозированной формы, способа
введения, периода введения и т.д., обычно, например, от около 0,01 до около 1000 мг/кг,
предпочтительно от около 0,01 до около 100 мг/кг, более предпочтительно от около 0,1 до
около 100 мг/кг, особенно от около 0,1 до около 50 мг/кг, наиболее предпочтительно от
около 1,5 до около 30 мг/кг в сутки на пациента (взрослый, масса около 60 кг), как соединения оксазола (I) и лекарственного средства (II) вводят внутривенно от одного до нескольких раз в разделенных количествах в сутки. Доза, конечно, будет изменяться в
зависимости от различных состояний, которые описаны выше, количество, менее чем указанная доза, может быть достаточным, или может потребоваться количество, превышающее предел. Для лекарственных средств (II) возможно установить любое количество в
пределах, где побочные эффекты не являются проблематичными. Хотя суточная доза в
отношении лекарственных средств (II) будет изменяться в зависимости от симптомов,
возраста субъекта, которому ее назначают, пола, массы, различий в чувствительности, периода введения, перерыва, свойств фармацевтических препаратов, типа дозирования, типа
активных ингредиентов и т.д., ее вводят как количество лекарственного средства обычно в
пределах, но без ограничения указанными, около 0,001-2000 мг/кг массы млекопитающего, например, перорально, предпочтительно около 0,01-500 мг/кг, более предпочтительно
около 0,1-100 мг/кг, 1-4 раза в день в дробных количествах.
Поэтому данное изобретение относится также к применению любой из перечисленных
выше фармацевтических композиций для приготовления противотуберкулезного лекарственного средства для дозированного приема с интервалом 48 ч или более.
Дозированные формы лекарственного средства, содержащие соединения оксазола (I) в
качестве активных ингредиентов и лекарственного средства (II), носители, используемые
в них, относительная доля каждого ингредиента, перерыв между введениями могут быть
использованы подобно тому, как описано выше.
Предпочтительные лекарственные средства (II) включают, например, первичные противотуберкулезные лекарственные средства и хинолоновые антибактериальные лекарственные средства, описанные выше. Здесь предпочтительные первичные противотуберкулезные лекарственные средства включают по меньшей мере одно, выбранное из
группы, состоящей из изониазида, метансульфоната натрия изониазида, пиразинамида,
рифампицина, стрептомицина, сульфата стрептомицина, этамбутола и гидрохлорида
этамбутола, более предпочтительно по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из рифампицина, пиразинамида, изониазида, этамбутола и стрептомицина. Предпочтительные хинолоновые антибактериальные лекарственные средства включают по
меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из гидрата гатифлоксацина и моксифлоксацина.
В данном изобретении сочетание соединений оксазола (I) с лекарственными средствами (II), которые являются противотуберкулезными лекарственными средствами, используемыми как сопутствующие, имеющие отличающийся механизм действия, привносит
эффекты, показанные ниже, по сравнению с эффектами в случае, когда соединения оксазола (I) или противотуберкулезные лекарственные средства для сопутствующего применения вводят поодиночке.
1. Пероральное введение возможно, и доза может быть уменьшена.
2. Более короткий период лечения может быть установлен, то есть становится возможной краткосрочная химиотерапия.
12
BY 19066 C1 2015.04.30
3. Побочные эффекты могут быть уменьшены.
4. Продолжительный терапевтический эффект может быть достигнут.
5. Синергические эффекты могут быть достигнуты.
6. Противотуберкулезные лекарственные средства (II) для сопутствующего применения, которые должны быть использованы в комбинации с соединениями оксазола (I), могут быть выбраны в соответствии с симптомами у пациентов (слабые, тяжелые или
другие).
7. Это является активным против Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis с мультилекарственной резистентностью и против атипических кислотоустойчивых
бактерий.
8. Эффективность проявляется против латентного заражения Mycobacterium tuberculosis (latent Mycobacterium tuberculosis).
Такие превосходные эффекты могут быть достигнуты. Кроме того, путем применения
лекарственного средства на основе фармацевтической композиции из отдельных соединений оксазола (I) или средства, содержащего сочетание соединений оксазола (I) с лекарственными средствами для сопутствующего применения, возможно, например, вводить
описанные выше лекарственные средства для сопутствующего применения периодически,
устанавливая продолжительность перерыва по меньшей мере около 48 ч, для того чтобы
облегчить или устранить побочные эффекты имеющихся противотуберкулезных лекарственных средств, используемых в комбинации.
Следующие примеры иллюстрируют более ясно данное изобретение в деталях.
Пример 1.
Эксперимент in vitro по поводу объединенного эффекта соединения оксазола (I) и другого агента.
Синергический эффект соединения оксазола (I) и известного противотуберкулезного
лекарственного средства, рифампицина (RFP) или этамбутола (EB), на клинический изолят туберкулезной палочки был исследован. Специально готовили каждую агаровую пластинку 7H11, содержащую соединение A-R при конечной концентрации 0,1-0,0002 мкг/мл
(серии 2-кратных разбавлений), каждую агаровую пластинку такого же агара, содержащую рифампицин при конечной концентрации 1,56-0,0015 мкг/мл, и каждую агаровую
пластинку, содержащую оба лекарственных средств при каждом наборе концентраций.
Суспензию туберкулезной палочки готовили при около 106 КОЕ/мл (для клинических
изолятов туберкулезной палочки, TBT-9 и TBT-14). Ее аликвотные пробы около 10 мкл
инокулировали на соответствующие пластинки с помощью многоточечного инокулятора.
Пластинки инкубировали при 37 °С в течение 2 недель, чтобы определить минимальные
ингибирующие концентрации (MIC) для клеточного роста. Подобное испытание проводили, используя этамбутол в концентрациях 12,5-0,024 мкг/мл, и MIC определяли для каждого набора концентраций. Из этих результатов рассчитывали индекс FIC ((MIC для
сочетания соединения (A-R) плюс RFP или EB)/(MIC одного соединения (A-R))+(MIC для
сочетания RFP или EB плюс соединение (A-R))/(MIC только RFP или EB)) для каждого
набора концентраций по меньшей мере с MIC. Результаты показаны в табл. 1.
Когда соединение (A-R) и рифампицин или этамбутол объединяли друг с другом, индекс FIC был 0,375 в обоих случаях, как результат, сильный синергический эффект был
продемонстрирован в комбинации обоих агентов.
Таблица 1
Минимальная ингибирующая концентрация (MIC) против туберкулезной палочки
индекс FIC
соединение (A-R)
RFP
Соединение (A-R)+RFP
0,375
0,006 (0,024)
0,05 (0,39)
индекс FIC
соединение (A-R)
EB
Соединение (A-R)+EB
0,375
0,003 (0,012)
0,2 (1,56)
Единица измерения: мкг/мл.
13
BY 19066 C1 2015.04.30
Числовые величины в табл. 1: MIC в комбинации (MIC в одном).
Индекс FIC: Синергический эффект; <0,5.
Пример 2-1.
Эксперименты in vivo по поводу объединенного эффекта соединения оксазола (I) и
других агентов.
Терапевтический эффект в комбинациях различных агентов.
Туберкулезную палочку, штамм Kurono, с 455 КОЕ инокулировали через трахею мышам ICR и давали им возможность жить в течение 4 недель, чтобы получить экспериментальную мышиную модель хронического туберкулеза. Сочетание 2,5 мг/кг соединения
(A-R) (на фиг. 1 показано как O) с 5 мг/кг рифампицина (на фиг. 1 показано как R) и
100 мг/кг пиразинамида (на фиг. 1 показано как Z) давали этой модели. Дозирование проводили раз в сутки в течение 56 дней и результаты сравнивали с результатами традиционного режима, используемого для лечения туберкулеза. Традиционным режимом было
дозирование рифампицина, изониазида (на фиг. 1 показано как H), этамбутола (на фиг. 1
показано как E) и пиразинамида 5, 10, 100 и 100 мг/кг соответственно, раз в сутки в течение 56 дней указанным модельным мышам. Чтобы подтвердить снижение количества
жизнеспособных клеток легочной туберкулезной палочки со временем, мышей подвергали эвтаназии кровопусканием из полой нижней вены под анестезией на следующий день
после дозирования в течение 28 дней (4 W) и 56 дней (8 W) и легкие полностью извлекали
в асептических условиях. Извлеченное легкое в 2 мл стерилизованной воды гомогенно
измельчали стеклянным гомогенизатором и постепенно разбавляли. Затем 0,1 мл каждого
разбавленного образца намазывали на среду агаровой пластинки 7H11 и инкубировали до
появления колоний, чтобы подсчитать количество жизнеспособных клеток в легком после
лечения.
Как показано на фиг. 1, тройной терапией, содержащей соединение (A-R) (на фиг. 1
показано как ORZ), подтверждено проявление более сильного эффекта, несмотря на меньшее число объединенных лекарственных средств, чем при известном режиме учетверенной
терапии (на фиг. 1 показано как RHEZ). Кроме того, так как количество жизнеспособных клеток туберкулезной палочки снижалось на ранней стадии, химиотерапия, как можно предположить, должна быть эффективной при более коротком времени ее проведения, чем при
применении традиционных противотуберкулезных лекарственных средств.
Пример 2-2.
Эксперименты in vivo по поводу объединенного эффекта соединения оксазола (I) и
других агентов.
Терапевтический эффект при комбинациях нескольких агентов (2).
Туберкулезную палочку, штамм H37Rv с 2750 КОЕ, инокулировали мышам ICR и давали им возможность жить в течение 4 недель, чтобы приготовить экспериментальную
мышиную модель хронического туберкулеза. Три лекарственных сочетания ORZ, "OREZ"
и ORZM, выбранные из 2,5 мг/кг соединения (A-R) (на фиг. 2 показано как O), 10 мг/кг
рифампицина (на фиг. 2 показано как R), 150 мг/кг пиразинамида (на фиг. 2 показано как
Z), 100 мг/кг этамбутола (на фиг. 2 показано как E) и 100 мг/кг моксифлоксацина (на
фиг. 2 показано как M) давали этой модели. Дозирование проводили раз в сутки в течение
56 дней и результаты сравнивали с результатами традиционного режима, используемого
для лечения туберкулеза. Традиционным режимом было дозирование рифампицина, изониазида (на фиг. 1 показано как H), этамбутола и пиразинамида 10, 25, 100 и 150 мг/кг соответственно, раз в сутки в течение 56 дней указанным модельным мышам. Чтобы
подтвердить снижение количества жизнеспособных клеток легочной туберкулезной палочки со временем, мышей подвергали эвтаназии кровопусканием из полой нижней вены
под анестезией на следующий день после дозирования в течение 56 дней (8 W) и легкие
полностью извлекали в асептических условиях. Извлеченное легкое в 2 мл стерилизованной воды гомогенно измельчали стеклянным гомогенизатором и постепенно разбавляли.
14
BY 19066 C1 2015.04.30
Затем 0,1 мл каждого разбавленного образца намазывали на среду агаровой пластинки
7H11 и инкубировали до появления колоний, чтобы подсчитать количество жизнеспособных клеток в легком после лечения.
Как показано на фиг. 2, все комбинированные группы, содержащие соединение (A-R)
(на фиг. 2 показано как ORZ, OREZ и ORZM) подтвердили проявление более сильного
эффекта, несмотря на меньшее число объединенных лекарственных средств, чем при известном режиме учетверенной терапии (на фиг. 1 показано как RHEZ). Кроме того, так как
количество жизнеспособных клеток туберкулезной палочки снижалось на ранней стадии,
химиотерапия, как можно предположить, должна быть эффективной при более коротком
времени ее проведения, чем при применении традиционных противотуберкулезных лекарственных средств.
Пример 3.
Оценка воздействия соединения оксазола (I) на внутриклеточную паразитическую туберкулезную палочку.
Оценку воздействия соединения оксазола (I) на внутриклеточную паразитическую туберкулезную палочку проводили далее.
3-1. Инфекция туберкулезной палочки в THP-1.
Суспензию клеток THP-1 с плотностью клеток, доведенной до 106 клеток/0,9 мл среды
RPMI1640-10 % FBS (сокращенно называемой здесь далее как среда RPMI1640), добавляли в каждую лунку 24-луночного планшета для культивирования клеток. Раствор форбол
12-миристат 13-ацетата (PMA) (0,1 мл) добавляли в лунку, содержащую добавленные
клетки, до конечной концентрации 100 нг/мл. Планшет инкубировали при 37 °С в течение
48 ч в атмосфере с 5 % CO2, чтобы дифференцировать клетки THP-1 в клетки, подобные
макрофагам. Дифференцированные клетки THP-й промывали один раз средой RPMI1640,
чтобы удалить раствор PMA. После замены среды в каждой лунке 0,9 мл свежей среды
RPMI1640 0,1 мл приготовленной микробной суспензии (M. tuberculosis H37Rv) добавляли в каждую лунку. Планшет инкубировали при 37 °С в течение 4 ч в атмосфере с 5 %
CO2, чтобы заразить клетки бактериями. Каждую лунку промывали дважды средой
RPMI1640 для удаления неинфицированных бактерий, остающихся в среде RPMI1640.
Далее, среду RPMI1640, содержащую стрептомицин (здесь далее обозначена как SM) в
количестве 20 мкг/мл добавляли и инкубировали в течение 20 ч для того, чтобы удалить
остающиеся внешние бактерии. После инкубации каждую лунку планшета промывали
дважды средой RPMI1640, чтобы удалить SM. После удаления промывочной среды из каждой лунки ее замещали свежей средой RPMI1640 в количестве 0,99 мл, этот момент времени принимали за время 0 ч. Для подсчета количества внутриклеточных жизнеспособных микроорганизмов перед добавлением испытуемого соединения намеченную лунку
на планшете промывали три раза физиологическим раствором с фосфатным буфером
(PBS). После удаления конечного промывочного раствора PBS в каждую лунку добавляли
0,5 мл 0,1 % раствора SDS и давали возможность отстаиваться при комнатной температуре в течение 10 мин или более, чтобы разрушить клетки. После нейтрализации SDS добавлением в каждую лунку 0,5 мл среды RPMI1640 и перемешиванием клеточный лизат
собирали в пробирки для испытания. Готовили серии 10-кратных разбавлений дистиллированной водой собранного клеточного лизата и 0,1 мл каждого разбавленного раствора
намазывали на агаровую пластинку 7H11, чтобы приготовить 3 пластинки, которые намазывали собранным клеточным лизатом с бактериями, имеющим серии различных разбавлений. Намазанные пластинки герметизировали виниловой лентой, чтобы избежать
высыхания, и затем инкубировали при 37 °С в течение 2-3 недель. Число появившихся колоний подсчитывали, чтобы рассчитать количество внутриклеточных жизнеспособных
бактерий на время 0 ч, согласно принятому критерию.
3-2. Добавление испытуемого вещества.
15
BY 19066 C1 2015.04.30
Разбавленный раствор испытуемого вещества добавляли в количестве 0,01 мл в каждую лунку 24-луночного планшета, содержащего инфицированные клетки. Планшет, пополненный испытуемым веществом, инкубировали при 37 °С в атмосфере с 5 % CO2 и
после воздействия в течение 2 или 4 ч добавлением испытуемого вещества каждую лунку
промывали три раза средой RPMI1640 для удаления испытуемого вещества. После удаления испытуемого вещества 1 мл свежей среды RPMI1640 добавляли в каждую лунку и
продолжали инкубирование.
3-3. Извлечение, разбавление и нанесение на агаровую пластинку 7H11 внутриклеточных бактерий.
Внутриклеточные бактерии собирали с планшетов, инкубированных в течение 3 суток
(72 ч) после добавления испытуемого вещества, путем следующих процедур.
А именно, каждую лунку в планшете промывали три раза PBS. После удаления конечного промывочного раствора PBS в каждую лунку добавляли 0,5 мл 0,1 % раствора SDS и
оставляли при комнатной температуре на 10 мин или более, чтобы разрушить клетки. Раствор SDS нейтрализовали добавлением в каждую лунку 0,5 мл среды RPMI1640 и клеточный лизат, общий объем 1 мл, собирали в пробирки для испытания. Готовили серии 10кратных разбавлений собранного клеточного лизата, используя дистиллированную воду.
0,1 мл каждого разбавленного раствора намазывали на агаровую пластинку 7H11, чтобы
приготовить 3 пластинки, которые намазывали собранным клеточным лизатом с бактериями, имеющим серии различных разбавлений. Намазанные пластинки герметизировали
виниловой лентой, чтобы избежать высыхания, и затем инкубировали при 37 °С в течение
2-3 недель, чтобы подсчитать число появившихся колоний.
Log уменьшение численности бактерий в сравнении с подсчитанными количествами
бактерий на время 0 ч перед добавлением испытуемого вещества показано на основе экспериментальных результатов (фиг. 3). Как результат, в группе с добавлением соединения
(A-R) подтверждается более сильный эффект против внутриклеточной паразитической
туберкулезной палочки, чем в группе с добавлением других противотуберкулезных лекарственных средств. Хотя RFP показал наиболее сильный эффект в традиционных лекарственных средствах, соединение (A-R), как было обнаружено, проявляет эквивалентный
эффект максимальной концентрации 3 мкг/мл RFP даже при самой низкой испытуемой
дозе соединения (A-R) 0,1 мкг/мл в концентрации, используемой в исследовании. В дополнение, сильный эффект подтверждается даже при краткосрочном воздействии в течение 2 ч, и этот результат говорит о том, что соединение (A-R) имеет сильный
антибиотический постэффект (PAE) против туберкулезной палочки. Следовательно, возможно, что соединение (A-R) может быть лекарственным средством, имеющим достаточный эффект даже при периодическом введении в клинической области.
Пример 4.
Оценка лекарственного взаимодействия между соединением оксазола (I) и другими
лекарственными средствами.
Так как существует много случаев в метаболизме, когда родственное лекарственное
взаимодействие затрагивает фермент цитохром P450 (CYP), выявление молекулярных
разновидностей CYP, вовлекаемых в метаболизм противотуберкулезного лекарственного
соединения оксазола (I), является существенным для безопасного применения описанного
выше лекарственного средства. В дополнение, так как существует возможность возникновения лекарственного взаимодействия при условии, что обычно применяют составную
комбинацию противотуберкулезных лекарственных средств, ингибирующее действие соединения оксазола (I) против каждого фермента CYP является важным для исследования.
Различные ферменты CYP подтверждены в печеночном микросомальном ферменте, и лекарственный метаболизм с участием печеночного микросомального фермента и ингибирующее действие лекарственного средства против каждого фермента CYP могут быть
испытаны in vitro. Поэтому метаболизм in vitro соединения оксазола (I) с участием пече16
BY 19066 C1 2015.04.30
ночного микросомального фермента человека и различных животных (мышей, крыс, собак, кроликов и обезьян) и in vitro ингибиторующее действие соединения оксазола (I) против каждого фермента CYP с использованием печеночного микросомального фермента
человека были исследованы.
4-1. Метаболизм in vitro соединения оксазола (I).
Исследования in vitro метаболизма соединения оксазола (I) (соединение (A-R)) проводили с использованием печеночного микросомального фермента человека и различных
животных (мыши, крысы, собаки, кролика и обезьяны). Микросому человека получали из
Attached Primate Research Institute, HAB Discussion Group (Chiba, Japan). Реакционную
композицию (0,5 мл) составляли из 100 мМ фосфатного буфера (рН 7,4), 100 мкМ соединения (A-R), 2,5 мМ β-NADPH, 2,5 мМ β-NADH и белка микросомы 1 мг/мл и реакцию
проводили при 37 °С в течение 2 ч. Реакцию прекращали добавлением органического растворителя (ацетонитрила или этилацетата) и образовавшиеся метаболиты экстрагировали.
Экстрагированные метаболиты выявляли с использованием жидкостной хроматографии
высокого разрешения и жидкостно-хроматографической электрораспылительной ионизационной тандемной масс-спектроскопии, чтобы подтвердить количество полученного.
Как результат, метаболизм in vitro соединения (A-R) с использованием печеночного
микросомального фермента человека и различных животных (мыши, крысы, собаки, кролика и обезьяны) почти не подтвердил никаких генерированных метаболитов. Следовательно, соединение (A-R) не может быть метаболизировано под действием фермента CYP.
4-2. Воздействие соединения оксазола (I) на ферментативную активность каждой молекулярной разновидности цитохрома P450 (CYP).
Ингибирующее действие соединения оксазола(I) (соединение (A-R): 1-100 мкМ) на
каждую молекулярную разновидность CYP в печеночной микросоме человека оценивали
путем измерения этоксирезорфуриновой деэтилирующей активности (CYP1A1/2), кумариновой гидроксилирующей активности (CYP2A6), 7-бензилоксирезофуриновой дебензилирующей активности (CYP2B6), толбутамидной гидроксилирующей активности
(CYP2C8/9), S-мефенитоиновой гидроксилирующей активности (CYP2C19), буфарололовой гидроксилирующей активности (CYP2D6), хлорозоксазоновой гидроксилирующей
активности (CYP2E1), тестостероновой 6β-гидроксилирующей активности (CYP3A4) и
нифедипиновой окислительной активности (CYP3A4).
Основной реакционной композицией (0,5 мл) была состоящая из 0,2-1 мг/мл белка
микросомы, 100 мМ фосфатного буфера (рН 7,4), 0,1 мМ EDTA, образующей NADPH
системы (2,5 мМ β-NADP, 25 мМ глюкоза-6-фосфата, 2 единиц дегидрогеназы глюкоза-6фосфата и 10 мМ хлорида магния) с субстратом и ингибитором или без них, и реакцию
проводили при 37 °С в течение 10-60 мин. Каждый используемый субстрат и его концентрация были следующие: 7-этоксирезофурин (0,5 мкМ), кумарин (2 мкМ), 7-бензилоксирезофурин (1,5 мкМ), толбутамид (400 мкМ), S-мефенитоин (100 мкМ), буфаралол
(2,0 мкМ), хлорзоксазон (100 мкМ), тестостерон (10,0 мкМ) и нифедипин (50 мк).
7,8-бензофлавон (1A1), фурафиллин (1A2), орфенадрин (2B6), кверцитин (2C8), сульфафеназол (2C9), транилципромин (2C19), хинидин (2D6), диэтилдитиокарбамин (2A6 и
2E1) и кетоканазол (3A4) использовали в качестве специфических ингибиторов для каждой активности CYP.
Образовавшиеся продукты после метаболической ответной реакции измеряли с применением жидкостной хроматографии высокого разрешения после экстракции.
Результаты этих экспериментов показали, что соединение (A-R) не проявляет ингибирующего действия и стимулирующего действия на активность каждого фермента CYP
(CYP1 A/2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8/9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 и CYP3A4) вплоть
до 100 мкМ (табл. 2). Табл. 2 показывает влияние соединения оксазола (I) на ферментативную активность отдельных молекулярных разновидностей цитохрома P450 (CYP).
17
BY 19066 C1 2015.04.30
Таблица 2
Влияние соединения (A-R) на метаболическую активность CYP1A1/2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8/9, CYP2C19 CYP2D6, CYP2E1 и
CYP3А4
в печеночной микросоме человека
CYP
Реакция фермента
Соединение (A-R) или
ингибитор
Относительная активность (%) для контрольной активности
3
BY 19066 C1 2015.04.30
18
100
1000
98,6
этоксирезорфуриновая деэтисоединение (A-R)
CYP1A1/2
99,8
101,4
98,4
102,5
32,3
лирующая активность
фурафиллин 7,8-бензофлавон
3,8
кумариновая
соединение (A-R)
103,3
102,4
103,1
97,8
100,8
CYP2A6
гидроксилирующая активность
диэтилдитиокарбамин
38,2
CYP2B6
7-бензилоксирезофуриновая
соединение (A-R)
110,6
108,9
118,3
112,8
122,3
72,0
дебензилирующая активность
орфенадрин
118,8
106,8
111,4
107,2
107,8
108,5
толбутамидная
соединение (A-R)
CYP2C8/9
25,5
гидроксилирующая активность сульфафеназол кверцитин
30,6
S-мефенитоиновая гидроксисоединение (A-R)
115,6
109,0
113,3
106,5
107,6
CYP2C19
лирующая активность
транилципромин
16,6
буфарололовая
соединение (A-R)
102,2
102,4
99,1
103,3
97,8
CYP2D6
гидроксилирующая активность
хинидин
0,0
хлорозоксазоновая гидроксисоединение (A-R)
107,8
110,3
110,8
112,4
112,5
CYP2E1
лирующая активность
диэтилдитиокарбамин
55,0
110,8
110,7
117,7
117,7
115,6
соединение (A-R)
тестостероновая 6βCYP3A4
0,5
кетоканазол
гидроксилирующая активность
нифедипиновая окислительная
соединение (A-R)
100,4
102,8
101,3
99,9
100,3
CYP3A4
активность
кетоканазол
3,4
Отдельный субстрат и концентрация: 7-этоксирезорфурин (0,5 мкМ), кумарин (2 мкМ), 7-бензилоксирезофурин (1,5 мкМ), толбутамид
(400 мкМ), S-мефенитоин (100 мкМ), буфаролол (20 мкМ), хлорозоксазон (100 мкМ), тестостерон (100 мкМ) и нифедипин (50 мкМ).
Особенности контроля для CYP1A1/2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8/9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 и CYP3A4 (тестостероновая
6β-гидроксилирующая активность) и CYP3A4 (нифедипиновая окислительная активность) были 9,094, 142,3, 1,595, 32,75, 7,331, 14,43,
81,49, 840,9 и 1127 пмоль/мин/мг.
Анализы реакции фермента и метаболитов проводили с n = 2. Все данные представлены средними величинами.
18
1
Концентрация (мкМ)
10
30
BY 19066 C1 2015.04.30
Принимая во внимание приведенные выше данные, когда соединение оксазола (I) и
другое лекарственное средство, которое метаболизируется главным образом CYP, применяют в комбинации при концентрации соединения оксазола при клиническом применении, при которой можно ожидать проявление эффекта, существует небольшая
возможность ингибировать метаболическую активность объединенного лекарственного
средства (II) воздействием соединения оксазола (I) и увеличить уровень содержания в
крови объединенного лекарственного средства (II), то есть способствовать лекарственному взаимодействию.
Пример 5.
Эксперименты in vivo по поводу периодического введения.
Экспериментальную мышиную модель туберкулеза подготавливали и лечили введением раз в сутки соединения (A-R), одного или в комбинации с другими традиционными
лекарственными средствами. Поддерживая индекс терапевтического эффекта эквивалентным такому эффекту, соединение (A-R), одно или в комбинации с другими традиционными противотуберкулезными лекарственными средствами, вводили, например, три раза в
неделю, дважды в неделю или один раз в неделю для того, чтобы достичь такого же эффекта, как выше. Было подтверждено, что эквивалентный эффект проявляется и соединение (A-R) пригодно для применения для периодического введения in vivo.
Фиг. 1
Фиг. 2
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Фиг. 3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
951 Кб
Теги
by19066, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа