close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

раствор для коррекции первичных нарушений гемостаза плазмозамещающими растворами нового состава

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 300 385
(13)
C1
(51) МПК
A61K 35/14 (2006.01)
A61K 31/718 (2006.01)
A61P 7/00 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2005140841/15, 27.12.2005
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
27.12.2005
(45) Опубликовано: 10.06.2007 Бюл. № 16
(73) Патентообладатель(и):
Синауридзе Елена Ивановна (RU),
Горбатенко Александр Сергеевич (RU),
Ажигирова Мари Алексеевна (RU),
Дереза Тать на Леонидовна (RU),
Атауллаханов Фазоил Ино тович (RU)
Адрес дл переписки:
127562, Москва, ул. Каргопольска , 12, кв.60,
пат.пов. Е.В.Корниенко, рег. № 609
(54) РАСТВОР ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ПЕРВИЧНЫХ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА
2 3 0 0 3 8 5
R U
(57) Реферат:
Изобретение относитс к фармацевтической
химии и касаетс создани средства дл коррекции
нарушений гемостаза при гемодилюции путем
использовани плазмозамещающих растворов
нового состава. Раствор содержит кристаллоидный
или коллоидный плазмозамещающий раствор и
ингибитор
свертывающей
системы
крови
антитромбин
III.
Предложенный
плазмозамещающий состав позвол ет избежать
осложнений при трансфузи х. 1 з.п. ф-лы, 4 ил.
Страница: 1
RU
C 1
C 1
ПЛАЗМОЗАМЕЩАЮЩИМИ РАСТВОРАМИ НОВОГО СОСТАВА
2 3 0 0 3 8 5
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: RU 2043108 C1, 10.09.1995. RU 2113840
C1, 27.06.1998. RU 2110996 C1, 20.05.1998.
М.Д.Машковский. Лекарственные средства. М.:
Медицина, 1985, т.1, с.400-447, 532-601; т.2
с.112-137, 169-178.
R U
(72) Автор(ы):
Синауридзе Елена Ивановна (RU),
Горбатенко Александр Сергеевич (RU),
Ажигирова Мари Алексеевна (RU),
Дереза Тать на Леонидовна (RU),
Атауллаханов Фазоил Ино тович (RU)
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
(11)
2 300 385
(13)
C1
(51) Int. Cl.
A61K 35/14 (2006.01)
A61K 31/718 (2006.01)
A61P 7/00 (2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2005140841/15, 27.12.2005
(24) Effective date for property rights: 27.12.2005
(45) Date of publication: 10.06.2007 Bull. 16
Mail address:
127562, Moskva, ul. Kargopol'skaja, 12,
kv.60, pat.pov. E.V.Kornienko, reg. № 609
(54) SOLUTION FOR CORRECTION OF PRIMARY HOMEOSTASIS DISORDER WITH PLASMA-
2 3 0 0 3 8 5
R U
(57) Abstract:
FIELD: medicine, hematology, pharmaceutical
chemistry.
SUBSTANCE: invention relates to an agent used
in
correction
of
homeostasis
disorders
in
carrying
out
hemodilution
using
plasmasubstituting solutions of the novel composition.
Proposed
solution
contains
crystalloid
or
colloidal
plasma-substituting
solution
and
inhibitor antithrombin III as inhibitor of the
blood coagulating system. The proposed plasmasubstituting
composition
provides
avoiding
complications in carrying out transfusion.
EFFECT: improved and valuable properties of
solution.
Страница: 2
EN
2 cl, 4 dwg, 3 ex
C 1
C 1
SUBSTITUTING SOLUTIONS OF NOVEL COMPOSITION
2 3 0 0 3 8 5
(73) Proprietor(s):
Sinauridze Elena Ivanovna (RU),
Gorbatenko Aleksandr Sergeevich (RU),
Azhigirova Marija Alekseevna (RU),
Dereza Tat'jana Leonidovna (RU),
Ataullakhanov Fazoil Inojatovich (RU)
R U
(72) Inventor(s):
Sinauridze Elena Ivanovna (RU),
Gorbatenko Aleksandr Sergeevich (RU),
Azhigirova Marija Alekseevna (RU),
Dereza Tat'jana Leonidovna (RU),
Ataullakhanov Fazoil Inojatovich (RU)
RU 2 300 385 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Изобретение относитс к медицине и касаетс способа коррекции нарушений гемостаза
при гемодилюции путем использовани плазмозамещающих растворов нового состава.
В услови х массированной кровопотери необходимо срочное восполнение потер нной
крови. С этой целью используютс различные кристаллоидные и коллоидные
плазмозамещающие растворы, свежезамороженна плазма (СЗП), а также переливани эритроцитов, тромбоцитов, растворов альбумина и т.д.
При этом преследуютс следующие основные цели.
Восполнение объема циркулирующей крови (ОЦК) дл поддержани артериального
давлени , объема сердечного выброса, предупреждени коллапса сосудов, сохранени нормальных реологических характеристик крови и нормальной перфузии органов и тканей.
Поддержание нормального коллоидно-осмотического давлени плазмы и ее кислотнощелочного равновеси .
Поддержание кислородтранспортной функции крови и функций системы свертывани .
Дл достижени первых двух целей обычно переливают различные плазмозамещающие
растворы и растворы альбумина.
Обеспечение кислородтранспортной функции достигаетс переливанием эритроцитов,
модифицированного гемоглобина или кислородперенос щих растворов типа перфторанов,
а поддержание функций системы свертывани - переливанием СЗП, концентратов
тромбоцитов, концентратов факторов протромбинового комплекса или отдельных факторов
свертывани .
Нарушени гемостаза вл ютс частыми осложнени ми объемных трансфузий
плазмозамещающих растворов, которые необходимы не только при массированной
кровопотере в случае обширной травмы, но также при острых инфекци х с развитием
сепсиса, ожогах, плановых операци х с ожидаемой объемной кровопотерей и т.п.
Важнейшей причиной, вызывающей эти нарушени , вл етс гемодилюци , т.е.
разбавление плазмы замещающими растворами коллоидов или кристаллоидов, не
содержащими не только тромбоцитов, но и плазменных компонентов свертывающей,
антисвертывающей и фибринолитической систем.
Прин то считать, что подобное разбавление должно приводить к замедлению
свертывани из-за снижени концентраций участвующих в нем факторов. Однако в
услови х множественной травмы или при р де операций в первый момент возникает
сильна активаци свертывани . Это обусловлено наличием большой раневой
поверхности, на которой присутствует тканевой фактор, активирующий свертывание по
внешнему пути. В результате подобной активации в первые часы после травмы происходит
посто нное потребление факторов и ингибиторов свертывани . Это может привести к
истощению в плазме данных компонентов и развитию диссеминированного
внутрисосудистого свертывани (ДВС), на первой стадии которого происходит тромбоз
сосудов, а затем, в результате полного потреблени факторов свертывани , возникают
опасные не останавливающиес кровотечени .
Таким образом, хот при переливании большого объема плазмозамещающих растворов
чаще наблюдаютс геморрагические осложнени , необходимо выделить случаи
массированной кровопотери при травме (или операци х), когда возможна сильна активаци свертывани и развитие ДВС. Использование больших объемов переливаемых
растворов в этих случа х только усугубл ет проблему, так как на сегодн шний день ни
один из примен емых растворов не содержит компонентов дл компенсации возникающей
в гемостазе нехватки факторов и ингибиторов свертывани .
Большое число работ, как экспериментальных, так и с помощью математического
моделировани системы свертывани крови, показало, что больша часть
предшественников активных факторов свертывани присутствует в плазме в столь
большом избытке, что только 80-90%-ное снижение их содержани может заметным
образом изменить характеристики процесса свертывани (речь идет о таких параметрах
как традиционные тесты по временам свертывани : протромбиновое врем (ПВ) и
частичное активированное тромбопластиновое врем (АЧТВ). С другой стороны, этого
Страница: 3
DE
RU 2 300 385 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
нельз сказать об ингибиторах свертывани , в первую очередь, антитромбине III
(ATIII). Реакци ингибиторов с активными факторами подчин етс уравнению второго
пор дка, т.е. скорость ее пр мо пропорциональна концентрации ингибитора. Расчеты
показывают, что если при сильных изменени х концентрации большинства факторов
свертывани в 10-100 раз порог наступлени свертывани измен етс незначительно, то
он пр мо пропорционально св зан со снижением концентрации ATIII. Замена половины
ОЦК на плазмозамещающий раствор (т.е. снижение концентрации ATIII в 2 раза) вызовет
сильное снижение порога свертывани . В этой ситуации даже незначительна активаци системы приведет к потенциальному свертыванию. Таким образом, первичным
нарушением гемостаза при гемодилюции должно быть ускорение свертывани из-за
снижени концентрации ингибиторов.
Это хорошо известно и из клинических данных, которые показывают, что в ситуации
травмы, ожога, т желого сепсиса часто развиваетс ДВС, первопричиной которого служит
повышенна активаци свертывани в системе.
Как было сказано выше, ни один из плазмозамещающих растворов на сегодн шний день
не содержит компонентов дл коррекции нарушений гемостаза. Примен ема в клинике
тактика предполагает переливание 2U свежезамороженной плазмы на каждые 10U
перелитых трансфузионных коллоидных и кристаллоидных растворов.
Известно использование дл проведени плазмафереза у больных с ДВС-синдромом в
качестве плазмозамещающего раствора реополиглюкина и свежезамороженной плазмы
крови, что оказывает нормализующее воздействие на гемостаз (RU 2110996 С1).
Переливание СЗП очень удобно, т.к. оно восполн ет кровь сразу всеми факторами и
ингибиторами, содержащимис в ней в физиологических концентраци х, что исключает
возможность передозировки. Однако потребность в больших объемах плазмы и все более
возрастающа угроза вирусного заражени СЗП заставл ет искать возможные ее
заменители.
Известно, что трансфузи 5%-ного раствора глюкозы, который предварительно
облучают рентгеновским излучением в дозе 0,2-0,5 Гр/мл и ввод т в организм
новорожденного непосредственно до, после или одновременно с антибактериальными
препаратами оказывает стимулирующее вли ние на показатели антиэндотоксинового
иммунитета при гнойно-септических заболевани х. При этом происходит частична коррекци нарушений гемостаза и кислотно-основного состо ни крови больных с
т желыми формами бактериальных инфекций. Способ позвол ет избежать введени в
организм новорожденного ребенка препаратов крови, что чревато различными
осложнени ми, в том числе внесением инфекций СПИД, гепатита (RU 2144837 С1). Данные
способы имеют ограниченное применение.
Другим примером может быть применение плазмозамещающего средства на основе
декстрана дл длительной коррекции нарушений центральной и периферической
гемодинамики. При этом средство содержит радиационно-модифицированный декстран,
хлорид натри и воду. Подобна модификаци позвол ет уменьшить адгезию тромбоцитов,
что преп тствует запуску патологических реакций внутрисосудистой агрегации
тромбоцитов (RU 2043108 С1). Однако и в этом случае применение сопровождаетс нарушением гематологических показателей.
Задачей насто щего изобретени вл етс создание плазмозамещающих составов,
позвол ющих избежать осложнений при объемных трансфузи х.
Задача решаетс новым составом, содержащим стандартный кристаллоидный или
коллоидный плазмозамещающий раствор и ингибитор свертывающее системы крови
антитромбин III в концентрации от 0,5 до 5 ед/мл.
Сущность изобретени Как было показано выше, дл сохранени функции гемостаза при объемных
переливани х плазмозаменителей критичным, в первую очередь, оказываетс содержание
в плазме ингибиторов свертывани . Таким образом, дл создани плазмозамещающего
раствора, позвол ющего корректировать нарушени гемостаза, возникающие при
Страница: 4
RU 2 300 385 C1
гемодилюции, в насто щем изобретении предлагаетс добавление в обычные
плазмозамещающие растворы (коллоидные или кристаллоидные) выделенного лиофильно
высушенного концентрата антитромбина III при следующем соотношении компонентов:
Антитромбин III
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0,5-5 ед/мл
Плазмозамещающий раствор Остальное
В качестве плазмозамещающих кристаллоидов могут быть использованы растворы,
содержащие хлорид натри . Среди них - 0,9% раствор хлорида натри , растворы,
содержащие дополнительно к хлориду натри хлорид кали , или ацетата натри . Другим
раствором вл етс раствор Рингера, содержащий хлориды натри , кали и кальци ,
гидрокарбонат натри или его модификацию с добавкой лактата.
В качестве коллоидных инфузионных растворов могут быть использованы производные
гидроксиэтилкрахмала (ГЭК), декстрана (полиглюкин, реополиглюкин, реоглюман,
лонгастерил, реомакродекс, неорондекс) или желатины (желатиноль, модежель,
гелофузин).
Предпочтительно использование раствора среднемолекул рного гидроксиэтилкрахмала
со следующими физико-химическими характеристиками: 130+20 кДа, степенью замещени 0,4, отношением С2/С6 более 8, например известного препарата Волювена (Medi.ru,
Конгресс по нефрологии, Baron J.-Е., Новый гидроксиэтилкрахмал: ГЭК 130/0,4, Волювен).
Описание способа получени лиофильно высушенного концентрата антитромбина III
В качестве сырь дл выделени концентрата ATIII использовали плазму донорской
крови после удалени из нее факторов свертывани , т.н. ППУ.
ATIII выдел ли методом аффинной хроматографии. В качестве аффинного сорбента
использовали сорбент "Heparin Sepharose Fast Flow" производства "Amersham
Biosciences", Швеци .
Предварительно проводили стадию вирусной инактивации сырь . В качестве способа
вирусной инактивации использовали либо пастеризацию при +60°С в присутствии
стабилизаторов, либо сольвент-детергентную обработку при комнатной температуре. ППУ
после стадии вирусной инактивации загружали на колонну, заполненную сорбентом.
Фракционирование осуществл ли в ступенчатом градиенте ионной силы, создаваемом
увеличением концентрации хлорида натри в стартовом буфере. Элюат, содержащий ATIII,
подвергали диализу и концентрированию, после чего стерильно разливали и лиофильно
высушивали. В качестве стабилизатора использовали добавки аминокислот. Лиофильно
высушенный препарат ATIII хранили при температуре +4-8°С.
Методы исследовани гемостаза.
Дл оценки статуса системы свертывани в насто щей работе было использовано два
современных in vitro теста: тест генерации тромбина и измерение скорости роста
сгустка в пространстве. В отличие от стандартных тестов измерени времен свертывани (ПВ и АЧТВ), которые провод тс в услови х максимальной активации свертывани по
внешнему или внутреннему пути соответственно и, следовательно, не способны
обнаружить состо ние гиперкоагул ции в исследуемой системе, данные тесты провод тс при гораздо более слабой исходной активации, близкой к существующей в организме. Это
делает их чувствительными как к состо нию гипо-, так и к состо нию гиперкоагул ции в
исследуемых образцах плазмы.
Тест генерации тромбина, также как и стандартные тесты ПВ и АЧТВ, проводитс в
гомогенных (полностью перемешанных) образцах цитратной плазмы. При этом измер етс суммарное количество тромбина, образовавшегос в образце в ответ на стандартную
рекальцификацию и активацию.
Измерение кинетики генерации тромбина в плазме проводили, непрерывно регистриру расщепление медленного флюорогенного субстрата BOC-Ile-Gly-Arg-AMC (где ВОС остаток бутоксикарбонила, а АМС - остаток 7-амино-4-метилкумарина), образующимс в
ходе свертывани тромбином.
В чейки стандартного плоскодонного 96-луночного планшета помещали 200 мкл
цитратной бедной тромбоцитами плазмы (РРР), разбавленной в различных отношени х
Страница: 5
RU 2 300 385 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
исследуемым плазмозамещающим раствором (рН 7,5), содержащим ATIII в концентраци х
от 0,5 до 5 ед/мл, и 2 мкл раствора флюрогенного субстрата исходной концентрации
51,25 мМ. Пробы в планшете прединкубировали 10 мин. При 37°С. Затем во все чейки
одновременно вносили по 3 мкл раствора активатора, разбавленного буфером,
содержащим 20 мМ HEPES, 145 мМ NaCI и дополнительно 866,7 мМ CaCI2 (рН 7,5). В
качестве активатора использовали разбавленный в 8,85 или в 17,7 раза раствор
кроличьего тромбопластина из стандартного теста дл определени протромбинового
времени (фирмы «Ренам», Росси ). Финальное разбавление активатора при постановке
эксперимента составл ло 590 или 1180 раз соответственно.
Момент внесени активатора и перемешивани вл лс началом отсчета времени
реакции. Запись флюоресценции АМС, возникающей при гидролизе субстрата тромбином,
образующимс в ходе свертывани , осуществл ли при 37°С непрерывно на прот жении 4550 минут с помощью флюориметрического ридера Fluoroscan II (LabSystem,
Финл нди ) (?возб.=380 нм; ?испуск.=440 нм). Дл каждого образца плазмы ставили 3
параллельные пробы. Полученные результаты усредн ли. Ошибка параллельных
измерений не превышала 2-5%. Измеренную в условных единицах флюоресценции
концентрацию АМС переводили в абсолютные концентрации, измер в отдельных
калибровочных пробах данной плазмы в присутствии соответствующих концентраций ATIII
величину интенсивности сигнала раствора АМС известной концентрации. Линейность
зависимости величины сигнала от концентрации АМС в исследуемой области была
проверена предварительно. Концентрацию тромбина в каждый момент времени
рассчитывали, дифференциру кривую накоплени АМС.
Обработка результатов осуществл лась с помощью стандартной графической
программы Origin 6.0 (Microcal Software Inc., MA, USA). Так как суммарный сигнал
образующегос АМС св зан не только с амидолитической активностью свободного
тромбина, но также с аналогичной активностью комплекса тромбин-?2-макрогобулин, то с
помощью специально написанной программы производилс учет активности этого
комплекса и вычисл лась активность свободного тромбина в каждый момент времени.
По кривой зависимости концентрации тромбина от времени определ ли суммарное
количество тромбина, образовавшегос за 40 минут (эндогенный тромбиновый потенциал,
ЭТП).
Скорость роста сгустка в пространстве характеризует пространственную динамику
свертывани , которое вл етс процессом, развивающимс не только во времени, но и в
пространстве. В данном методе с помощью измерени светорассе ни определ етс размер сгустка в разные моменты времени после начала свертывани . Активаци свертывани проводитс в системе без перемешивани строго локализованным в
пространстве активатором, в качестве которого использовали либо просто стекл нную
пластинку со шлифованным краем дл контактной активации свертывани по внутреннему
пути, либо полиэтилентерфталатные пленки, покрытые фибробластами, несущими на
поверхности тканевой фактор, активирующий свертывание по внешнему пути. В случае
активации свертывани по внешнему пути в исходную плазму добавл лс ингибитор
трипсина из кукурузы (CTI) в концентрации 200 мкг/мл, который предотвращает
контактную активацию свертывани в системе.
Микрокамеру собирали в 35 мм полистироловой чашке Петри. При активации
свертывани по внешнему пути торец стекл нной пластинки толщиной 1 мм оборачивали
полиэтилентетфталатной пленкой, на которой были выращены фибробласты. После этого
пластинку с пленкой фиксировали на дне чашки 2-сторонним скотчем. Торец стекла
представл л собой боковой край микрокамеры, покрытый активатором. На верхнюю
плоскость стекла таким же образом прикрепл ли выступающую за край стекла
закрашенную с внешней стороны черным полистироловую пластинку, котора формировала верхнюю поверхность микрокамеры. Рекальцифицированную плазму,
свободную от тромбоцитов (финальна концентраци добавленного CaCl2 20 мМ), с
добавкой или без ATIII аккуратно заливали между верхней пластинкой и дном камеры
Страница: 6
RU 2 300 385 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
таким образом, чтобы она пришла в соприкосновение с боковой активирующей
свертывание стенкой. Момент соприкосновени плазмы с активатором принимали за t=0.
Затем чашку герметично закрывали и помещали в термостатируемую при 37°С кювету с
прозрачным дном, через которое плазма в чашке освещалась светом красных
диодов (?max 660 нм). Изображение посто нной области микрокамеры (7.2Ч5.4 мм)
каждые 30 сек фиксировалось видеокамерой OS-75D (Mintron Enterprise, Тайвань),
сопр женной с платой захвата изображений EZ98 (Lifeview Inc., USA), позвол ющей
оцифровку и ввод в пам ть компьютера изображений с видеокамеры.
Серии полученных изображений были затем обработаны. В процессе роста сгусток все
дальше распростран лс от поверхности активатора вглубь плазмы. Размер сгустка в
каждом кадре был определен как рассто ние от активатора до кра сгустка, за который
принимали точку, где величина светорассе ни сгустка составл ла половину
максимальной. Скорость роста сгустка была затем определена как тангенс угла наклона
пр мой зависимости размера сгустка от времени.
Оба использованных метода показали, что при разбавлении плазмы различными
плазмозамещающими растворами в диапазоне до 2.0-2.5 раз происходит усиление
свертывани . При этом добавление антитромбина III в состав разбавл ющего раствора
может скорректировать этот процесс.
Полученные нами оригинальные результаты согласуютс с более ранними попытками
зафиксировать ускорение свертывани при разбавлении плазмы кристаллоидными и
коллоидными растворами с помощью тромбоэластографии. Однако разбавление плазмы
вли ет на различные параметры тромбоэластограммы в противоположных направлени х:
оно приводит к укорочению измер емых времен лаг-периода (ч) и реакции (k), что
говорит об ускорении свертывани , но уменьшает максимальную силу сгустка (Amax),
котора зависит от концентрации фибриногена и тромбоцитов в исследуемой плазме и
уменьшение которой прин то считать ослаблением свертывани . Таким образом, данные
полученные с помощью тромбоэластографии выгл д т не совсем очевидными.
Изобретение может быть также проиллюстрировано следующими примерами.
Пример 1
Получение концентрата АТIII
В качестве сырь использовали плазму после удалени факторов свертывани . Объем
плазмы составил 42 л. Плазму пастеризовали в течение 11 ч при 60°С в присутствии
стабилизатора - 50%-ной сахарозы. После разведени на 25% сырье наносили на колонну
«Vantage S2», заполненную сорбентом «Heparin Sepharose FF». Объем сорбента составл л
1400 мл. Элюцию осуществл ли увеличением концентрации NaCl в Tris-HCl буфере,
содержащем 0.06 М цитрат натри . Полученный элюат ATIII диализовали против 10
объемов диализующей жидкости и концентрировали в 5 раз. После концентрировани к
раствору ATIII добавили 0.1 М глицин в качестве стабилизатора.
Выход по ATIII на стадии хроматографии составил 68% от загрузки.
После стерилизующей фильтрации концентрат ATIII разлили во флаконы из расчета 8
ед. ATIII/флакон и лиофильно высушили.
Пример 2
Усиление свертывани при разбавлении нормальной донорской плазмы
кристаллоидным плазмозамещающим раствором (NaCl 0.9%) и его коррекци при введении
в замещающий раствор концентрата ATIII в различных концентраци х
Кровь донора, вз та на 3.8%-ном цитрате натри в соотношении кровь:цитрат=9:1 (20
мл), была центрифугирована 15 мин при 1500 g. Часть полученной таким образом бедной
тромбоцитами плазмы (РРР) была далее центрифугирована 10 мин при 10000 g дл получени свободной от тромбоцитов плазмы (PFP). Полученна РРР была использована
дл определени эндогенного тромбинового потенциала, а PFP - дл измерени скоростей
роста сгустков в пространстве.
РРР и PFP были использованы либо без предварительного разбавлени , либо были
разбавлены в 1.2; 1.5; 2; 2.5 или 3 раза либо физиологическим раствором (NaCI 0.9%)
Страница: 7
RU 2 300 385 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
дл переливаний, либо тем же раствором, но содержащим добавленный ATIII (в
концентраци х 0.5, 1, 2 или 3 ед/мл). Концентрацию ионов свободного кальци во всех
пробах после рекальцификации выдерживали посто нной. Описанными выше способами
были измерены эндогенный тромбиновый потенциал (ЭТП) и скорость роста сгустка в
пространстве (V) дл каждого из разведений плазм в присутствии различных концентраций
ATIII.
На фиг.1 представлены результаты по измерению ЭТП в сери х разбавлений РРР
раствором NaCI 0.9%-ного, содержащим различные концентрации ATIII. Видно, что в
отсутствие добавленного ингибитора при увеличении степени разведени плазмы
замещающим раствором наблюдаетс существенное увеличение эндогенного
тромбинового потенциала, что говорит об усилении свертывани в данных услови х.
Необходимо отметить, что уже изменение ЭТП на 20% считаетс фактором риска дл возникновени тромбоза. В то же врем , в наших экспериментах при разведении исходной
плазмы в 1.5-2.5 раза ЭТП в различных плазмах увеличиваетс в несколько раз.
Добавление ATIII не отмен ет полностью эффекта усилени свертывани из-за разведени плазмы, но значительно корректирует его, снижа величину ЭТП дл различных
разведений плазмы. Аналогичные выводы можно сделать из фиг.2, где представлены
графики изменени скорости роста сгустка в пространстве при различных разбавлени х
донорской PFP физиологическим раствором дл переливаний в присутствии и отсутствие
ATIII. Активаци свертывани проводилась по внешнему пути (от пленки с фибропластами)
в присутствии CTI (20 мкг/мл).
Пример 3
Коррекци свертывани при введении в коллоидные плазмозамещающие растворы 6%ного гидроксиэтилкрахмала (130/0.4 или 200/0.5) в физиологическом растворе лиофильно
высушенного концентрата ATIII.
РРР и PFP были приготовлены так же, как описано в примере 2. Разбавлени этих плазм
в 1.2; 1.5; 2; 2.5 или 3 раза были сделаны растворами стандартных коллоидных
плазмозамещающих растворов 6%-ного гидроксиэтилкрахмала 130/0,4 («Волювен») или
200/0.5, содержащими различные концентрации добавленного концентрата ATIII (0, 1, 3
или 5 ед/мл). Концентраци ионов свободного кальци после рекальцификации во всех
пробах поддерживалась посто нной. Были измерены ЭТП и скорости роста сгустка в
пространстве дл каждого из разбавлений плазм в присутствии различных концентраций
ATIII.
Полученные результаты представлены на фиг.3 и фиг.4. Так же, как и в случае
разбавлени плазмы простым физиологическим раствором (см. фиг.1 и 2), разбавление
стандартным коллоидным раствором 6% гидроксиэтилкрахмала 200/0.5 (HES 200/0.5)
вызывает повышение ЭТП в област х разведений до 2-2.5 раз, что свидетельствует об
усилении активации свертывани в этих услови х. Добавление концентрата АТIII также
дозозависимо измен ет измер емые показатели.
На фиг.4 представлены результаты, полученные при измерении скоростей роста сгустка
в PFP, разбавленной в разных отношени х растворами 6%-ного HES (130/0.4),
содержащими различные концентрации ATIII. Свертывание активировали по внутреннему
пути (поверхностью стекла). Представленные данные показывают, что добавление АТIII в
плазмозамещающий раствор существенно корректирует усиление скорости роста сгустка,
вызванное разбавлением плазмы.
Формула изобретени 1. Раствор дл коррекции первичных нарушений гемостаза при гемодилюции,
отличающийс тем, что он содержит кристаллоидный или коллоидный плазмозамещающий
раствор и ингибитор свертывающей системы крови антитромбин III при следующем
соотношении компонентов:
Антитромбин III
0,5-5 ед/мл
Плазмозамещающий раствор Остальное
Страница: 8
CL
RU 2 300 385 C1
2. Раствор по п.1, отличающийс тем, что в качестве коллоидного плазмозамещающего
раствора он содержит 6%-ный гидроксиэтилкрахмал 130/0,4 или 200/0,5 в физиологическом
растворе.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Страница: 9
RU 2 300 385 C1
Страница: 10
DR
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
189 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа