close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

питательная среда для выделения микобактерий

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)
RU
(11)
2 300 571
(13)
C2
(51) МПК
C12Q 1/04
C12N 1/20
(2006.01)
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2005122742/13, 18.07.2005
(72) Автор(ы):
Мордовской Георгий Георгиевич (RU),
Зуева Марина Николаевна (RU)
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
18.07.2005
(45) Опубликовано: 10.06.2007 Бюл. № 16
Адрес дл переписки:
620078, г.Екатеринбург, а/ 79, И.С. Иваницкой
2 3 0 0 5 7 1
способствует ускорению роста микобактерий с
гомогенным их распределением в питательной
среде. Инактиваци лошадиной сыворотки при
56°С в течение 40 минут снижает ее ингибирующее
действие
на
микобактерии.
Бактерицидный
краситель - малахитовый зеленый обладает
оптимальным
действием
на
сопутствующую
микрофлору, не вызыва задержки роста
микобактерий.
Изобретение
обеспечивает
повышение ростовых свойств питательной среды,
ускор ет рост микобактерий, что способствует их
вы вл емости в максимально короткие сроки. 1
табл.
R U
(57) Реферат:
Изобретение относитс к медицине, а именно к
клинической микробиологии, и может быть
использовано дл ранней диагностики туберкулеза.
Питательна среда дл выделени микобактерий
содержит
калий
фосфорнокислый
однозамещенный,
натрий
фосфорнокислый
двузамещенный, магний сернокислый, натрий
лимоннокислый,
железо
лимоннокислое
аммиачное, аминокислоту, агар-агар, глицерин,
сыворотку
лошадиную
инактивированную,
краситель
малахитовый
зеленый
и
воду
дистиллированную.
Введение ?-аминоуксусной
кислоты
и
натри пировинограднокислого
Страница: 1
RU
C 2
C 2
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ
2 3 0 0 5 7 1
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: ВАСИЛЬЕВ В.Н. Микобактериозы и
микозы легких. Софи , 1971, с.163-165. RU
2086257 C1, 10.08.1997. RU 2042511 C2,
20.12.2004. RU 2102483 C1, 20.01.1988. RU
2059715 C1, 10.05.1986.
R U
(73) Патентообладатель(и):
Мордовской Георгий Георгиевич (RU),
Зуева Марина Николаевна (RU)
(43) Дата публикации за вки: 27.01.2007
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 300 571
(13)
C2
(51) Int. Cl.
C12Q 1/04
C12N 1/20
(2006.01)
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2005122742/13, 18.07.2005
(72) Inventor(s):
Mordovskoj Georgij Georgievich (RU),
Zueva Marina Nikolaevna (RU)
(24) Effective date for property rights: 18.07.2005
(43) Application published: 27.01.2007
(45) Date of publication: 10.06.2007 Bull. 16
Mail address:
620078, g.Ekaterinburg, a/ja 79, I.S. Ivanitskoj
C 2
R U
2 3 0 0 5 7 1
inactivated at 56°C for 40 min decreases its
inhibitory effect on mycobacteria. Bactericidal
dye malachite green possesses the optimal effect
on concomitant microflora but it doesn't delay of
mycobacteria growth. Invention provides enhancing
growth properties of nutrient medium, accelerates
growth of mycobacteria that promotes to they
detection for maximally short time. Invention can
be used in early diagnosis of tuberculosis.
EFFECT: improved and valuable properties of
nutrient medium.
1 tbl, 3 ex
Страница: 2
EN
C 2
(57) Abstract:
FIELD: medicine, clinical microbiology.
SUBSTANCE: invention proposes a nutrient
medium for isolating mycobacteria that contains
sodium dihydrogen phosphate, sodium hydrogen
phosphate, magnesium sulfate, sodium citrate,
iron ammonium citrate, amino acid, agar-agar,
glycerol, horse inactivated serum, dye malachite
green and distilled water. Addition of ?-aminoacetic
acid and sodium pyruvate promotes to accelerating
growth of mycobacteria with their homogenous
distribution in nutrient medium. Horse serum
2 3 0 0 5 7 1
(54) NUTRIENT MEDIUM FOR ISOLATING MYCOBACTERIA
R U
(73) Proprietor(s):
Mordovskoj Georgij Georgievich (RU),
Zueva Marina Nikolaevna (RU)
RU 2 300 571 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Изобретение относитс к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может
быть использовано дл ранней диагностики туберкулеза.
В последнее врем наблюдаетс рост показателей заболеваемости туберкулезом. В
этой св зи значительное внимание удел етс лабораторной диагностике туберкулеза.
В насто щее врем дл выделени (культивировани ) микобактерий и определени их
чувствительности к лекарственным препаратам используетс р д плотных ичных
питательных сред Левенштейна-Иенсена, Финн II [Приказ МЗ РФ от 21.03. 2003 №109 "О
совершенствовании противотуберкулезных меропри тий в Российской Федерации" М.,
стр.266-270], среда Мордовского [Методические указани МЗ РСФСР "Приготовление и
использование новой питательной среды дл выращивани микобактерий туберкулеза",
М. - 1972].
Недостатком плотных питательных сред вл ютс длительные сроки роста
микобактерий при посеве диагностического материала - 2,5-10 недель, а при пересевах
культур и определении лекарственной чувствительности - 12-21 день, что затрудн ет
раннюю бактериологическую диагностику и своевременную коррекцию лечени .
Применение жидких питательных сред позвол ет ускорить вы вление микобактерий, что
важно дл раннего начала лечени больных туберкулезом. Известно использование дл этих целей жидких сред, содержащих комплекс солей и L-аспарагин в качестве источника
азотистого питани : Соттона (Sauton) [B.H.Василев. Микобактериозы и микозы легких.
Софи , 1971 г., стр.156], Школьниковой [Приказ МЗ РФ от 21.03. 2003 №109 "О
совершенствовании противотуберкулезных меропри тий в Российской Федерации". М.,
стр.270-271]. Недостатком этих сред вл етс высока степень проростов посторонней
микрофлоры и использование дорогосто щих ингредиентов.
Наиболее близким решением технической задачи данного назначени к за вл емому
изобретению вл етс среда дл выделени микобактерий туберкулеза Lebek
[B.H.Василев. Микобактериозы и микозы легких. Софи , 1971 г., стр.163], содержаща аспарагин, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, железо лимоннокислое
аммиачное, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый
двузамещенный, глицерин, дистиллированную воду, краситель бромтимоловый синий,
агар-агар и гов жью сыворотку крови. Однако эта среда используетс в основном дл дифференцировки атипичных микобактерий. Вход щий в состав питательной среды
бромтимоловый синий оказывает тормоз щее действие на рост микобактерий туберкулеза,
а под вли нием аспарагина возникает конгломеративный рост колоний микобактерий, что
осложн ет учет результатов исследований.
В основу изобретени поставлена задача повышени ростовых свойств питательной
среды.
Поставленна задача решаетс тем, что в среду, содержащую калий фосфорнокислый
однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий
лимоннокислый, железо лимоннокислое аммиачное, фактор роста, агар-агар, глицерин,
сыворотку животного, бактерицидный краситель и воду, дополнительно ввод т в качестве
ростового фактора натрий пировинограднокислый, в качестве аминокислоты
используют ?-аминоуксусную кислоту, в качестве бактерицидного красител - малахитовый
зеленый, а основным питательным веществом вл етс инактивированна лошадина сыворотка. Введение ?-аминоуксусной кислоты и натри пировинограднокислого
способствует ускорению роста микобактерий с гомогенным их распределением в
питательной среде. Инактиваци лошадиной сыворотки при 56°С в течение 40 минут
снижает ее ингибирующее действие на микобактерии. Бактерицидный краситель
малахитовый зеленый обладает оптимальным действием на сопутствующую микрофлору,
не вызыва задержки роста микобактерии.
Состав питательной среды при следующих соотношени х, г/л:
калий фосфорнокислый однозамещенный
2,0-3,0
натрий фосфорнокислый двузамещенный
1,0-2,0
магний сернокислый
натрий лимоннокислый
Страница: 3
DE
0,25-0,75
1,0-2,0
RU 2 300 571 C2
железо лимоннокислое аммиачное
агар-агар
0,03-0,07
2,0-4,0
сыворотка лошадина инактивированна 150,0-250,0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
малахитовый зеленый
0,04-0,06
глицерин
20,0-40,0
?-аминоуксусна кислота
0,5-1,5
натрий пировинограднокислый
0,1-0,2
вода дистиллированна до 1 л
Среду получают следующим образом.
Пример 1.
1. В 20 мл гор чего глицерина раствор ют 0,04 г малахитового зеленого.
2. 150 мл лошадиной сыворотки инактивируют при 56°С 40 мин и соедин ют с раствором
малахитового зеленого.
3. Готов т солевой раствор, дл чего в 200 мл дистиллированной воды последовательно
раствор ют 2,0 г кали фосфорнокислого однозамещенного, 1,0 г натри фосфорнокислого
двузамещенного, 0,25 г магни сернокислого, 1,0 г натри лимоннокислого, 0,03 г
железа лимоннокислого аммиачного, 0,5 г ?-аминоуксусной кислоты, 0,1 г натри пировинограднокислого.
Полученный раствор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм 1 мин и после охлаждени соедин ют со смесью 2.
4,2 г агар-агара раствор ют в оставшемс количестве дистиллированной воды,
стерилизуют при 1 атм 30 мин, соедин ют со смесью 3, тщательно перемешивают.
Контроль качества среды осуществл ют при посеве тест-штаммов Mycobacterium
tuberculosis H37Rv, B-5 и свежевыделенных культур от больных туберкулезом легких. Учет
результатов провод т визуально по помутнению среды через 2-8 суток инкубации посевов
при температуре 37°С.После 2-8 суток инкубации содержимое пробирок центрифугируют
при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, из осадка делают мазки дл просмотра
в люминесцентном микроскопе.
Пример 2. Отличаетс от примера 1 тем, что дл приготовлени смеси 1 используют 30
мл глицерина и 0,05 г малахитового зеленого, дл приготовлени смеси 2 - 200 мл
лошадиной сыворотки, дл солевого раствора - 2,5 г кали фосфорнокислого
однозамещенного, 1,5 г натри фосфорнокислого двузамещенного, 0,5 г магни сернокислого, 1,5 г натри лимоннокислого, 0,05 г железа лимоннокислого аммиачного,
1,0 г ?-аминоуксусной кислоты, 0,15 г натри пировинограднокислого, дл приготовлени раствора 4 - 3 г агар-агара. Далее среду готов т согласно примеру 1.
Пример 3. Отличаетс от примера 1,2 тем, что дл приготовлени смеси 1 используют
40 мл глицерина и 0,06 г малахитового зеленого, дл приготовлени смеси 2 - 250 мл
лошадиной сыворотки, дл солевого раствора - 3,0 г кали фосфорнокислого
однозамещенного, 2,0 г натри фосфорнокислого двузамещенного, 0,75 г магни сернокислого, 2,0 г натри лимоннокислого, 0,07 г железа лимоннокислого аммиачного,
1,5 г ?-аминоуксусной кислоты, 0,2 г натри пировинограднокислого, дл приготовлени раствора 4 - 4 г агар-агара. Далее среду готов т согласно примерам 1, 2.
После 2-8 суток инкубации содержимое пробирок центрифугируют при 1500 об/мин.
Надосадочную жидкость сливают, из осадка делают мазки дл просмотра в
люминесцентном микроскопе.
Результаты бактериологического контрол предлагаемой и известной сред
представлены в таблице.
Из таблицы видно, что сроки роста микобактерий туберкулеза на предлагаемой
питательной среде сократились по сравнению с прототипом у лабораторного
штамма H37Rv в 1,3-1,6 раза, у штаммов, выделенных от больных, в 1,3-1,7 раза и
составили в среднем 6 суток. Вы вл емость микобактерий туберкулеза из мокроты
больных увеличилась при отрицательных результатах бактериоскопии с 27 до 33%, при
положительной бактериоскопии с 66 до 78%, при сокращении сроков роста по сравнению с
Страница: 4
RU 2 300 571 C2
прототипом на 205 суток.
Таким образом, предлагаема среда обеспечивает рост микобактерий туберкулеза, что
способствует их вы вл емости в максимально короткие сроки.
5
Таблица
Характеристика ростовых свойств питательной среды на основании проведенных исследований (1500 пробирочных опытов)
Исследуемый материал
Рост микроорганизмов на питательных средах
Прототип
Предлагаема среда по составу
Минимальный
10
Средний
Максимальный
Сроки
роста
(сутки)
Количество
колоний, %
Сроки
роста
(сутки)
Количество
колоний, %
Сроки
роста
(сутки)
Количество
колоний, %
Сроки
роста
(сутки)
Количество
колоний, %
8
98
6
98
6
100
5
100
Штаммы, выделенные от
больных
10
95
8
98
7
98
6
100
Мокрота больных при
положительной
бактериоскопии
16
66
14
73
14
78
14
78
Мокрота больных при
отрицательной
бактериоскопии
21
27
16
29
16
32
16
33
Проросты при иследовании
мокроты
6
32
7
4
8
2
8
2
Лабораторный
штамм H37Rv
15
20
25
30
Формула изобретени Питательна среда дл выделени микобактерий, содержаща калий фосфорнокислый
однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий
лимоннокислый, железо лимоннокислое аммиачное, аминокислоту, агар-агар, глицерин,
сыворотку животного, бактерицидный краситель и воду дистиллированную, отличающа с тем, что она дополнительно содержит натрий пировинограднокислый, в качестве
аминокислоты - ?-аминоуксусную кислоту, в качестве бактерицидного красител малахитовый зеленый, в качестве сыворотки - сыворотку лошадиную инактивированную
при следующем соотношении компонентов, г/л:
Калий фосфорнокислый однозамещенный
2,0-3,0
Натрий фосфорнокислый двузамещенный
1,0-2,0
Магний сернокислый
Натрий лимоннокислый
Железо лимоннокислое аммиачное
?-аминоуксусна кислота
35
0,25-0,75
1,0-2,0
0,03-0,07
0,5-1,5
Натрий пировинограднокислый
0,1-0,2
Агар-агар
2,0-4,0
Сыворотка лошадина инактивированна 150,0-250,0
Малахитовый зеленый
0,04-0,06
Глицерин
20,0-40,0
Вода дистиллированна 40
45
50
Страница: 5
CL
До 1 л
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
75 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа