close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

новые производные миндальной кислоты и их применение в качестве ингибиторов тромбина

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 300 521
(13)
C2
(51) МПК
C07D 205/04 (2006.01)
A61K 31/397 (2006.01)
A61P 7/02 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2003115420/04, 30.11.2001
(72) Автор(ы):
ИНГХАРДТ Торд (SE),
ЙОХАНССОН Андерс (SE),
СВЕНССОН Арне (SE)
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
30.11.2001
(73) Патентообладатель(и):
АстраЗенека АБ (SE)
R U
(30) Конвенционный приоритет:
01.12.2000 SE 0004458-6
19.03.2001 SE 0100965-3
(43) Дата публикации за вки: 20.02.2005
2 3 0 0 5 2 1
(45) Опубликовано: 10.06.2007 Бюл. № 16
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: WO 97/46577 A1, 11.12.1997. WO
97/02284 A1, 23.01.1997. WO 99/29664 A1,
17.06.1999. WO 96/25426 A1, 22.08.1996. WO
00/42059 A1, 20.07.2000. RU 2163596 C2,
27.02.2001.
(86) За вка PCT:
SE 01/02657 (30.11.2001)
C 2
C 2
(85) Дата перевода за вки PCT на национальную фазу:
01.07.2003
R U
2 3 0 0 5 2 1
(87) Публикаци PCT:
WO 02/44145 (06.06.2002)
Адрес дл переписки:
191036, Санкт-Петербург, а/ 24, "НЕВИНПАТ",
пат.пов. А.В.Поликарпову
(54) НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ МИНДАЛЬНОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ
ИНГИБИТОРОВ ТРОМБИНА
(57) Реферат:
Изобретение относитс к новым соединени м,
выбранным из
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-AzePab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab,
или их фармацевтически приемлемым сол м.
Соединени ингибируют тромбин и могут быть
использованы в фармацевтической композиции дл лечени состо ни , в котором требуетс ингибирование тромбина. 5 н. и 11 з.п. ф-лы.
Страница: 1
RU
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 300 521
(13)
C2
(51) Int. Cl.
C07D 205/04 (2006.01)
A61K 31/397 (2006.01)
A61P 7/02 (2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2003115420/04, 30.11.2001
(72) Inventor(s):
INGKhARDT Tord (SE),
JOKhANSSON Anders (SE),
SVENSSON Arne (SE)
(24) Effective date for property rights: 30.11.2001
(73) Proprietor(s):
AstraZeneka AB (SE)
(43) Application published: 20.02.2005
R U
(30) Priority:
01.12.2000 SE 0004458-6
19.03.2001 SE 0100965-3
(45) Date of publication: 10.06.2007 Bull. 16
2 3 0 0 5 2 1
(85) Commencement of national phase: 01.07.2003
(86) PCT application:
SE 01/02657 (30.11.2001)
(87) PCT publication:
WO 02/44145 (06.06.2002)
(57) Abstract:
FIELD: organic chemistry, medicine, pharmacy.
SUBSTANCE:
invention
relates
to
novel
compounds chosen from the following substances:
Ph-(3-Cl)-(5-OCHF2)-(R)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph-(3-Cl)-(5-OCHF2)-(R)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH),
and Ph-(3-Cl)-(5-OCHF2)-(R)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab or
their pharmaceutically acceptable salts. Proposed
compounds inhibit thrombin and can be used in
pharmaceutical composition for treatment state
wherein thrombin inhibition is required.
EFFECT: valuable medicinal properties of
compounds.
16 cl, 49 ex
R U
2 3 0 0 5 2 1
(54) NOVEL DERIVATIVES OF MANDELIC ACID AND THEIR USING AS THROMBIN INHIBITORS
Страница: 2
EN
C 2
C 2
Mail address:
191036, Sankt-Peterburg, a/ja 24, "NEVINPAT",
pat.pov. A.V.Polikarpovu
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Область изобретени Данное изобретение относитс к новым фармацевтически полезным соединени м, в
частности к соединени м, которые представл ют собой конкурентные ингибиторы
трипсиноподобных сериновых протеаз, в частности тромбина, или соединени м, которые
метаболизируютс до таких конкурентных ингибиторов, к их применению в качестве
лекарств, содержащим их фармацевтическим композици м и получению их путем синтеза.
Предпосылки изобретени Свертывание крови представл ет собой ключевой процесс, вовлеченный как в гемостаз
(т.е. предотвращение потери крови из поврежденного сосуда), так и в тромбоз (т.е.
образование сгустка крови в кровеносном сосуде, иногда привод щее к закупорке сосуда).
Свертывание вл етс результатом комплексной группы ферментативных реакций.
Одним из конечных этапов в этой группе реакций вл етс превращение профермента
протромбина в активный фермент тромбин.
Известно, что тромбин играет центральную роль в свертывании. Он активирует
тромбоциты, привод к агрегации тромбоцитов, превращает фибриноген в мономеры
фибрина, которые спонтанно полимеризуютс в полимеры фибрина, и активирует фактор
XIII, который, в свою очередь, сшивает эти полимеры с образованием нерастворимого
фибрина. Кроме того, тромбин активирует фактор V и фактор VIII, привод к образованию
тромбина из протромбина по механизму "положительной обратной св зи".
Следует ожидать, что, ингибиру агрегацию тромбоцитов и образование и сшивку
фибрина, эффективные ингибиторы тромбина про в т антитромботическую активность.
Кроме того, следует ожидать, что антитромботическа активность усиливаетс путем
эффективного ингибировани механизма положительной обратной св зи.
Уровень техники
Более ранн разработка низкомолекул рных ингибиторов тромбина была описана
Claesson в Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.
Blombдck et al. (в J.Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) сообщали об
ингибиторах тромбина на основе аминокислотной последовательности, расположенной
вокруг сайта расщеплени А? цепи фибриногена. Относительно обсуждавшихс аминокислотных последовательностей, указанные авторы предположили, что трипептидна последовательность Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, далее на нее ссылаютс как на
последовательность Р3-Р2-Р1) будет наиболее эффективным ингибитором.
Ингибиторы тромбина на основе дипептидильных производных
с ?,? -аминоалкилгуанидином в положении Р1 известны из патента США №4346078 и
международной за вки на патент WO 93/11152. Сообщалось также о подобных,
родственных по структуре дипептидильных производных. Например, международна за вка на патент WO 94/29336 раскрывает соединени , например, с
аминометилбензамидинами, циклическими аминоалкиламидинами и циклическими
аминоалкилгуанидинами в положении Р1 (международна за вка на патент WO 97/23499
раскрывает пролекарства некоторых из этих соединений); за вка на европейский патент
0648780 раскрывает соединени , например, с циклическими аминоалкилгуанидинами в
положении Р1.
Ингибиторы тромбина на основе пептидильных производных, также имеющие в качестве
составной части циклические аминоалкилгуанидины (например, или 3-, или 4-аминометил1-амидинопиперидин) в положении Р1, известны из за вок на европейский патент 0468231,
0559046 и 0641779.
Ингибиторы тромбина на основе трипептидильных производных с аргининовым
альдегидом в положении Р1 были впервые раскрыты в за вке на европейский патент
0185390.
Позднее сообщалось о пептидильных производных на основе аргининового альдегида,
модифицированных по положению РЗ. Например, международна за вка на патент WO
93/18060 раскрывает оксикислоты, за вка на европейский патент 0526877 дезаминокислоты и за вка на европейский патент 0542525 - O-метилминдальные кислоты в
Страница: 3
DE
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
положении Р3.
Также известны ингибиторы сериновых протеаз (например, тромбина) на основе
электрофильных кетонов в положении Р1. Например, за вка на европейский патент
0195212 раскрывает пептидил-?-кетоэфиры и амиды, за вка на европейский патент
0362002 раскрывает кетоны фторалкиламидов, за вка на европейский патент 0364344
раскрывает ?,?,?-трикетосоединени и за вка на европейский патент 0530167
раскрывает ?-алкоксикетоновые производные аргинина в положении Р1.
Другие, отличные по структуре ингибиторы трипсиноподобных сериновых протеаз на
основе бороновокислых по С-концу производных аргинина и их изотиоурониевых аналогов
известны из за вки на европейский патент 0293881.
Позднее ингибиторы тромбина на основе пептидильных производных были описаны в
за вке на европейский патент 0669317 и международных за вках на патент WO 95/35309,
WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO
96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 00/35869 и WO
00/42059.
В частности, в WO 97/02284 и WO 00/42059 описываютс ингибиторы тромбина с
замещенными миндальными кислотами по положению Р3.
Тем не менее остаетс необходимость в эффективных ингибиторах трипсиноподобных
сериновых протеаз, таких как тромбин. Существует также потребность в соединени х,
которые имеют удобный фармакокинетический профиль и селективны в ингибировании
тромбина по сравнению с другими сериновыми протеазами, в частности теми, которые
вовлечены в гемостаз. Следует ожидать, что соединени , которые про вл ют активность
конкурентного ингибитора в отношении тромбина, особенно полезны в качестве
антикоагул нтов и, следовательно, в терапевтическом лечении тромбоза и родственных
расстройств.
Описание изобретени Согласно данному изобретению предложено соединение формулы I
30
35
40
где R a представл ет собой -ОН или -СН2OH;
R 1 представл ет собой по меньшей мере один возможный галогенозаместитель;
R 2 представл ет собой один или два C1-3алкоксизаместител , причем алкильные части
этих заместителей сами замещены одним или более чем одним фторозаместителем (то
есть R 2 представл ет собой одну или две фторалкокси(С1-3)группы);
Y представл ет собой -СН2- или -(СН2)2- и
R 3 представл ет собой структурный фрагмент формулы I(1) или I(2)
45
50
где R 4 представл ет собой Н или один или более чем один фторозаместитель и
один или двое из X1, X2, Х3 и Х4 представл ют собой -N-, а остальные представл ют
собой -СН-,
Страница: 4
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
или его фармацевтически приемлемое производное.
Термин «фармацевтически приемлемые производные» включает фармацевтически
приемлемые соли (например, соли, полученные присоединением кислоты).
Сокращени приведены в конце данного описани изобретени . Волнистые линии на
св з х во фрагментах формул I(1) и I(2) означают положени присоединени данных
фрагментов.
Галогеногруппы, которыми может быть представлен R 1, включают в себ фторо, хлоро,
бромо и йодо. Во избежание неопределенности, говор о том, что R 1 представл ет собой
по меньшей мере одну возможную галогеногруппу, имеетс в виду, что R 1 может либо не
присутствовать (и таким образом быть замененным на Н, при этом соблюдены правила
валентности), либо он может представл ть собой один или более чем один атом галогена.
Когда R 3 представл ет собой структурный фрагмент формулы I(1), в котором R 4
представл ет собой один или более чем один фторозаместитель, предпочтительные
соединени формулы I включают такие соединени , в которых R 4 представл ет собой
единичный фторозаместитель в положении 2 или 3 либо два фторозаместител или в
положени х 2 и 5, или, более предпочтительно, в положени х 2 и 6 (где положени заместителей определ ютс относительно точки присоединени структурного фрагмента
формулы I(1) к остальной части молекулы (то есть к группе -NHCH2-)).
Когда R 3 представл ет собой структурный фрагмент формулы I(2), то предпочтительные
соединени формулы I включают в себ такие соединени , в которых либо
(а) один из X1, X2, Х3 и Х4 представл ет собой -N-, а остальные представл ют собой -СН, либо
(б) оба X1 и Х3 или оба Х2 и Х4 представл ют собой -N-, а другие двое (как подходит)
представл ют собой -СН-.
Предпочтительные соединени формулы I включают в себ те, в которых
R 1 представл ет собой единичный фторо-, хлоро- или бромозаместитель;
R 2 представл ет собой С1-2алкокси, замещенный одним или более чем одним
фторозаместителем, как, например, -OCHF2, -OCF3, -ОСН2CF3, -OCH2CHF2, -OCH2CH2F
или -OCH(CH2F)2;
R 3 представл ет собой структурный фрагмент формулы I(1);
R 4 представл ет собой Н.
Более предпочтительные соединени формулы I включают в себ такие соединени , в
которых
R a представл ет собой ОН;
R 1 представл ет собой единичный хлорозаместитель;
R 2 представл ет собой -OCF2, предпочтительно -OCH2CHF2 или, более
предпочтительно, -OCHF2 либо -OCH2CH2F.
Предпочтительные точки замещени R 1 и R 2 на соответствующей фенильной группе
соединени формулы I включают оба мета-положени относительно точки присоединени этой фенильной группы к остальной части молекулы (то есть по положению 3 и/или 5
(предпочтительно 3,5-замещение) относительно углеродного атома, несущего группу ?или ? -оксикислоты).
Соединени формулы I, которые можно упом нуть, включают такие соединени , в
которых
R 2 представл ет собой один или два С1-2алкоксизаместител , алкильные части которых
сами замещены одним или более чем одним фторозаместителем, или
R 2 представл ет собой один или два С3алкоксизаместител , алкильные части которых
сами замещены одним или более чем одним фторозаместителем.
Соединени формулы I могут быть получены в соответствии с методиками, хорошо
известными специалистам в данной области техники, например, как описано ниже.
Согласно еще одному аспекту данного изобретени предложен способ получени Страница: 5
RU 2 300 521 C2
соединений формулы I, при котором
(1) осуществл ют сочетание соединени формулы II
5
10
где R a, R 1 и R 2 такие, как определено выше, с соединением формулы III
15
20
где Y и R 3 такие, как определено выше, например, в присутствии агента сочетани (например, оксалилхлорида в DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, РуВОР или TBTU),
соответствующего основани (например, пиридина, DMAP, TEA, 2,4,6-коллидина или
DIPEA) и подход щего органического растворител (например, дихлорметана,
ацетонитрила, EtOAc или DMF);
(2) осуществл ют сочетание соединени формулы IV
25
30
где R a, R 1, R 2 и Y такие, как определено выше, с соединением формулы V
35
40
45
50
где R 3 такой, как определено выше, например, в услови х, которые описаны выше в
способе (1);
(3) дл соединений формулы I, в которых не присутствует R 1, восстанавливают
соответствующее соединение формулы Ia, как оно определено выше, в котором R 5
представл ет собой OR 6, где R 5 и R 6 такие, как определено выше, например, путем
гидрировани в присутствии подход щего катализатора (например, металлического
катализатора на носителе, такого как Pd/C (например, 10% (мас./мас.) Pd/C)) и
соответствующего растворител (например, низшего (например C1-6) алкилового спирта,
такого как этанол), и, возможно, в присутствии подход щей кислоты (например, уксусной
кислоты), и/или как описано в Synth. Comm. (1998) 4351, или
(4) осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы XVIA или
XVIB, как оно определено ниже, с подход щим источником аммиака (например, ацетатом
аммони или газообразным аммиаком) в услови х, известных специалистам в данной
области техники, например, путем взаимодействи этилимидоатного промежуточного
соединени (образованного в результате взаимодействи соединени формулы XVIA или
XVIB с HCl(г) в этаноле) с газообразным аммиаком в этаноле или в услови х, описанных
в Tetrahedron Lett. 40, 7067 (1999), причем раскрытие этого документа включено сюда
посредством ссылки (например, дл получени соединений формулы I, в которых R 3
представл ет собой структурный фрагмент формулы I(2), в котором X 2 или X 4
Страница: 6
RU 2 300 521 C2
5
представл ет собой N, осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы XVIB с ацетатом аммони (например, с 1-30 эквивалентами ацетата аммони ) в
присутствии N-ацетилцистеина (например, 1-30 эквивалентов N-ацетилцистеина) и
соответствующего растворител (например, низшего алкилового (C1-6) спирта, такого как
метанол)).
Соединени формулы II доступны благодар использованию известных и/или
стандартных методик.
Например, соединени формулы II, в которых R 3 представл ет собой ОН, могут быть
получены в результате взаимодействи альдегида формулы VI
10
15
где R 1 и R 2 такие, как определено выше, с
(а) соединением формулы VII
20
25
30
где R" представл ет собой Н или (СН3)3Si, например, при комнатной или повышенной
температуре (например, ниже 100°С) в присутствии подход щего органического
растворител (например, хлороформа или метиленхлорида) и, при необходимости, в
присутствии подход щего основани (например, TEA) и/или подход щей каталитической
системы (например, хлорида бензиламмони или иодида цинка либо с использованием
хирального катализатора, например, как описано в Chem. Rev., (1999) 99, 3649) с
последующим гидролизом в услови х, которые хорошо известны специалистам в данной
области техники (например, как описано ниже);
(б) NaCN или KCN, например, в присутствии NaHSO3 и воды с последующим
гидролизом;
(в) хлороформом, например, при повышенной температуре (например, выше комнатной
температуры, но ниже 100°С) в присутствии подход щего органического растворител (например, хлороформа) и при необходимости в присутствии подход щей каталитической
системы (например, хлорида бензиламмони ) с последующим гидролизом;
(г) соединением формулы VIII
35
40
где М представл ет собой Mg или Li, с последующим окислительным расщеплением
(например, озонолизом или расщеплением, катализируемым осмием либо рутением) в
услови х, которые хорошо известны специалистам в данной области техники, или
(д) трис(метилтио)метаном в услови х, которые хорошо известны специалистам в
данной области техники, с последующим гидролизом в присутствии, например, HgO и HBF4.
Соединени формулы II, в которых R a представл ет собой -СН2ОН, могут быть получены
путем восстановлени соединени формулы IX
45
50
где R представл ет собой С1-6алкил или C1-3алкилфенил и R 1 и R 2 такие, как
Страница: 7
RU 2 300 521 C2
5
определено выше, например, при комнатной или более низкой температуре в присутствии
подход щего восстановител (например, борогидрида натри ) и соответствующего
органического растворител (например, метанола, этанола, THF или их смесей) с
последующим гидролизом полученного промежуточного соединени сложного эфира
троповой кислоты формулы IXA
10
15
20
где R, R 1 и R 2 такие, как определено выше, в услови х, хорошо известных специалистам
в данной области техники, например, как описано ниже. Специалисту пон тно, что стадии
восстановлени и гидролиза могут быть выполнены в одной емкости, например, как
описано ниже.
Соединени формулы II, в которых R a представл ет собой -ОН, альтернативно могут
быть получены путем окислени соединени формулы IXB
25
30
35
40
45
50
или его производного, которое возможно защищено по вторичной гидроксильной группе,
где R 1 и R 2 такие, как определено выше, в присутствии подход щего окислител (например, комбинации подход щего свободнорадикального окислител (такого как
TEMPO) и соответствующей гипохлоритной соли (такой как гипохлорит натри )) в
услови х, известных специалистам в данной области техники, например при температуре
между -10°С и комнатной температурой в присутствии подход щего растворител (например, воды, ацетона или их смеси), соответствующей соли (например, галогенида
щелочного металла, такого как бромид кали ) и подход щего основани (например,
карбоната щелочного металла или гидрокарбоната, такого как гидрокарбонат натри ).
Энантиомерные формы соединени формулы II, в котором R a представл ет собой -ОН
(то есть те соединени , которые имеют разные конфигурации заместителей вокруг атома С
в ?-положении относительно группы CO2H), могут быть разделены с помощью стадии
образовани энантиоспецифичных производных. Это можно осуществить, например,
ферментативным способом. Такие ферментативные способы включают в себ , например,
трансэтерификацию ?-ОН-группы при температуре между комнатной и температурой
дефлегмации (например, между 45 и 65°С) в присутствии подход щего фермента
(например, Липазы PS Amano), соответствующего сложного эфира (например,
винилацетата) и подход щего растворител (например, метил-трет-бутилового эфира).
Изомер, производное которого образуетс , затем может быть отделен от не вступившего в
реакцию изомера с помощью традиционных методик разделени (например,
хроматографии).
Группы, добавленные к соединени м формулы II на такой стадии образовани производных, могут быть удалены либо до проведени любых дальнейших реакций, либо
на любой более поздней стадии в синтезе соединений формулы I. Дополнительные группы
могут быть удалены с использованием традиционных методик (например, дл сложных
Страница: 8
RU 2 300 521 C2
5
эфиров ?-ОН-группы - гидролизом в услови х, известных специалистам в данной области
техники (например, при температуре между комнатной и температурой дефлегмации в
присутствии подход щего основани (например, NaOH) и соответствующего растворител (например, МеОН, воды или их смесей))).
Энантиомерные формы соединени формулы II, в котором R а представл ет
собой -СН2ОН, могут быть разделены с помощью методик хиральной хроматографии
(например, хиральной ВЭЖХ).
Соединени формулы III могут быть получены в результате проведени сочетани соединени формулы X
10
15
20
25
где Y такой, как определено выше, с соединением формулы V, как оно определено
выше, например, в услови х, аналогичных описанным здесь дл получени соединений
формулы I.
Соединени формулы IV могут быть получены в результате проведени сочетани соединени формулы II, как оно определено выше, с соединением формулы X, как оно
определено выше, например, в услови х, аналогичных описанным здесь дл получени соединений формулы I.
Соединени формулы VI доступны с помощью использовани известных и/или
стандартных методик. Например, они могут быть получены следующим путем:
(1) металлировани (где металлом может быть, например, щелочной металл, такой как
Li, или предпочтительно двухвалентный металл, такой как Mg) соединени формулы XI
30
35
где Hal представл ет собой атом галогена, выбранный из Cl, Br и I, и R 1 и R 2 такие,
как определено выше, с последующим взаимодействием с подход щим источником
формильной группы (например, N,N-диметилформамидом), например, в услови х,
описанных ниже;
(2) восстановлени соединени формулы XII
40
45
где R 1 и R 2 такие, как определено выше, в присутствии подход щего восстановител (например, DIBAL-H), или
(3) окислени соединени формулы XIII
50
Страница: 9
RU 2 300 521 C2
5
10
где R 1 и R 2 такие, как определено выше, в присутствии подход щего окислител (например, MnO2, пиридинийхлорохромата, комбинации DMSO и оксалилхлорида или
SO3-пиридинового комплекса в DMSO).
Соединени формулы IX могут быть получены из соответствующего фенилацетата
(который, например, может быть получен из соответствующего ацетофенона, как описано в
J. Am. Chem. Soc. 98, 6750 (1976), или из соответствующего бензилцианида с помощью
стандартных гидролитических процедур) с применением традиционных методик, например
по аналогии с методиками, описанными в J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), и/или как
описанно ниже.
Соединени формулы IX могут быть получены в результате дигидроксилировани соответствующего соединени формулы XIIIA
15
20
25
30
35
40
45
50
где R 1 и R 2 такие, как определено выше, в присутствии подход щего
дигидроксилирующего агента (например, реагента или смеси реагентов, которые дают
OsO4, как например AD-mix-? или, в особенности, AD-mix-? ), например в услови х,
известных специалистам в данной области техники, например при температуре
между -10°С и комнатной в присутствии соответствующего растворител (например, воды,
трет-бутанола или их смеси). Если примен ют такие асимметричные окислители как ADmix-? или AD-mix-? , этот способ можно использовать дл получени соединений формулы
IXB, имеющих определенные конфигурации (то есть R или S) групп вокруг атомов С, к
которым присоединены первичные и вторичные гидроксильные группы.
Соединени формулы XIIIA могут быть получены в результате взаимодействи соответствующего соединени формулы XI, как оно определено выше, с подход щим
источником винил-аниона (например, трибутил(винил)олова) в услови х, известных
специалистам в данной области техники, например при температуре между комнатной и
температурой дефлегмации (например, 50°С) в присутствии соответствующего
растворител (например, толуола), подход щего агента сочетани (например,
координационного комплекса на основе паллади (0), такого как
тетракис(трифенилфосфин)палладий(0)) и, возможно, в присутствии соответствующего
катализатора (например, 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола).
Соединени формул V, VII, VIII, X, XI, XII и XIII либо имеютс в продаже, хорошо
известны из литературы, либо могут быть получены по аналогии с описанными здесь
способами или с помощью традиционных процедур синтеза согласно стандартным
методикам из легкодоступных исходных материалов с использованием соответствующих
реагентов и условий реакций. Соединени формул Ia, XVIA и XVIB могут быть получены
способами, описанными ниже.
Заместители на фенильном кольце в соединени х формул I, II, III, IV, V, VI, IX,
IXA, IXB, XI, XII, XIII и XIIIA могут быть введены и/или взаимопревращены с
использованием методик, хорошо известных специалистам в данной области техники,
путем стандартных взаимопревращений функциональных групп согласно стандартным
методикам из легко доступных исходных материалов с использованием соответствующих
реагентов и условий реакций.
Например, соединени формул I, II, IV, VI, IXA, XI, XII и XIII могут быть получены
из соответствующих соединений формул XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG и XIVH
соответственно
Страница: 10
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
где R a, R, R 1, R 3, Y и Hal (как целесообразно) такие, как определено выше, например:
(а) в результате осуществлени взаимодействи соответствующего фторированного
галогеноалкана (например, фторированного хлоралкана), например, при комнатной или
более высокой температуре (например, при температуре дефлегмации) в присутствии
подход щего основани (например, трет-бутилата, КОН или NaOH, например, в водном
растворе) и соответствующего органического растворител (например, THF, хлороформа
или изопропанола) или
(б) в результате осуществлени взаимодействи соединени формулы XIVJ
где R x представл ет собой С1-4алкил, С1-4перфторалкил или фенил (возможно
замещенный метилом, нитро или галогено) и R y представл ет собой СН2CF3, CH2CHF2,
CH2CH2F или CH(CH2F)2, например, в присутствии подход щего основани (например, K2СО3) и соответствующего растворител (например, DMF),
например, в обоих случа х, как описано ниже.
Специалисту пон тно, что такие превращени с функциональными группами также могут
быть осуществлены на более ранней стадии в полной схеме синтеза соединений формул II,
IV, VI, IXA, XI, XII и XIII (то есть на соответствующих предшественниках соединений
формул XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG и XIVH соответственно).
Соединени формул XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG, XIVH и XIVJ или имеютс в продаже, известны из литературы, или могут быть получены или по аналогии с
описанными здесь способами либо с помощью традиционных процедур синтеза согласно
стандартным методикам из легко доступных исходных материалов с использованием
соответствующих реагентов и условий реакций. Например, соединени формул XIVA, XIVB,
XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG и XIVH могут быть получены в результате сн ти защиты с
Страница: 11
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
соответствующих защищенных фенолов (где защитной группой может быть, например,
метил, аллил, бензил или трет-бутил) в стандартных услови х. Кроме того, соединени формулы XIVD, в которых R 1 вл етс единичным хлорозаместителем, могут быть
получены из ди- или тригалогенозамещенного бензола (например, из 1-Br-, 3-Cl-, 5-Fбензола путем замещени атома фтора метоксигруппой (например, путем взаимодействи с NaOMe в смеси 1-метил-2-пирролидинон/метанол при повышенной температуре), замены
бромогруппы формильной группой (например, как описано выше дл получени соединений формулы VI) и затем деметилировани (например, с использованием PhSH в
1-метил-2-пирролидиноне в присутствии К2СО3)).
Кроме того, соединени формулы I, в которых R 1 отсутствует, могут быть получены из
соответствующих соединений формулы I (или с использованием их соответствующих
предшественников), в которых R 1 представл ет собой галогено (такой как хлоро),
например, путем гидрировани в услови х, известных специалистам в данной области
техники.
Соединени формулы I могут быть выделены из своих реакционных смесей с
использованием традиционных методик.
Согласно насто щему изобретению фармацевтически приемлемые производные
соединений формулы I также включают «защищенные» производные соединений формулы
I и/или соединени , которые действуют как пролекарства.
Соединени , которые могут действовать как пролекарства соединений формулы I,
которые можно упом нуть, включают соединени формулы Ia
25
30
где R 3a представл ет собой структурный фрагмент формулы I(3) или I(4)
35
40
45
50
где R 5 представл ет собой OR 6 или C(O)OR 7;
R 6 представл ет собой Н, C1-10алкил, C1-3алкиларил или C1-3алкилоксиарил (причем
алкильные части двух последних групп возможно прерваны одним или более чем одним
атомом кислорода и арильные части двух последних групп возможно замещены одним или
более чем одним заместителем, выбранным из галогено, фенила, метила или метокси,
причем последние три группы также возможно замещены одним или более чем одним
галогенозаместителем);
R 7 представл ет собой C1-10алкил (причем последн группа возможно прервана одним
или более чем одним атомом кислорода) или C1-3алкиларил либо C1-3алкилоксиарил
(причем алкильные части двух последних групп возможно прерваны одним или более чем
одним атомом кислорода и арильные части двух последних групп возможно замещены
одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, фенила, метила или
метокси, причем последние три группы также возможно замещены одним или более чем
одним галогенозаместителем), и
R a, R 1, R 2, Y, R 4, X1, Х2, Х3 и Х4 такие, как определено выше,
Страница: 12
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
и их фармацевтически приемлемые производные.
Термин «фармацевтически приемлемые производные» соединений формулы Ia
включает в себ фармацевтически приемлемые соли (например, соли, полученные
присоединением кислоты).
Волнистые линии на св з х во фрагментах формул I(3) и I(4) означают положени присоединени данных фрагментов.
Алкилоксиарильные группы, которыми могут вл тьс R 6 и R 7, включают в себ алкильную и арильную группу, соединенные через атом кислорода. Алкиларильные и
алкилоксиарильные группы присоединены к оставшейс части молекулы через алкильную
часть этих групп, причем эти алкильные части (если имеетс достаточное количество
углеродных атомов, то есть три) могут иметь разветвленную цепь. Арильные части
алкиларильных и алкилоксиарильных групп, которыми R 6 и R 7 могут вл тьс или могут
быть замещены, включают карбоциклические и гетероциклические ароматические группы,
такие как фенил, нафтил, пиридинил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, индолил,
бензофуранил и тому подобное.
Алкильные группы, которыми могут вл тьс R 6 и R 7, могут быть с пр мой цепью или,
если имеетс достаточное количество (то есть минимум три) углеродных атомов, они
могут быть с разветвленной цепью и/или циклическими. Кроме того, если имеетс достаточное количество (то есть минимум четыре) углеродных атомов, то такие алкильные
группы также могут быть частично циклическими/ациклическими. Такие алкильные группы
также могут быть насыщенными или, если имеетс достаточное количество (то есть
минимум два) углеродных атомов, быть ненасыщенными.
Галогеногруппы, которыми R 6 и R 7 могут быть замещены, включают в себ фторо,
хлоро, бромо и иодо.
Когда R 5 представл ет собой C(O)OR 7, предпочтительные группы R 7 включают
(а) линейный, разветвленный или циклический С3-6алкил, например С4-6вциклоалкил;
(б) С1-2алкиларильные группы, такие как бензил, возможно замещенные, как указано
выше.
Предпочтительные соединени формулы Ia включают в себ те, в которых R 5
представл ет собой OR 6.
Когда R 5 представл ет собой OR 6, предпочтительные группы R 6 включают
(а) Н;
(б) незамещенный линейный, разветвленный или циклический С3-8алкил
(например, C1-6), такой как линейный С1-3алкил (например, этил или, в особенности,
метил), разветвленный С3-8алкил (например, изо-пропил, изо-бутил или 4-гептил) или
циклический С4-7алкил (то есть С4-7циклоалкил, например циклобутил или циклогексил);
(в) C1-3алкилоксифенил (например, С2алкилоксифенил), причем фенильна группа
возможно замещена одним или более чем одним заместителем, как указано выше
(например, трифторметилом);
(г) С1-2алкиларил (например, метиларил), где арильна группа представл ет собой
фенил, пиридинил, оксазолил или изоксазолил, причем последние три группы возможно
замещены одним или более чем одним заместителем, как указано выше (например,
метокси, метилом, бромо и/или хлоро).
Предпочтительные соединени формулы Ia включают те, в которых R 5 представл ет
собой OR 6, a R 6 представл ет собой линейный, разветвленный (как подходит) или
циклический (как подходит) С1-6алкил (например, C1-4), такой как метил, этил, н-пропил,
изо-пропил или циклобутил.
Соединени формулы Ia можно получить с помощью одного или более из следующих
способов:
(а) осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы II, как оно
определено выше, с соединением формулы XV
Страница: 13
RU 2 300 521 C2
5
где Y и R 3a такие, как определено выше, например, в услови х, подобных услови м,
описанным выше дл синтеза соединений формулы I;
(б) осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы IV, как оно
определено выше, с соединением формулы XVI
10
где R 3a такой, как определено выше, например, в услови х, подобных услови м,
описанным выше дл синтеза соединений формулы I;
(в) дл соединений формулы Ia, в которых R 5 представл ет собой ОН, осуществл ют
взаимодействие соответствующего соединени формулы XVIA или XVIB
15
20
25
30
35
где R a, R 1, R 2, R 4, Y, X1, Х2, Х3 и Х4 такие, как определено выше, с гидроксиламином,
например, в услови х, известных специалистам в данной области техники;
(г) дл соединений формулы Ia, в которых R 5 представл ет собой OR 6, осуществл ют
взаимодействие защищенного производного соответствующего соединени формулы I,
которое представл ет собой, например, соединение формулы XVII
40
45
где R 3b представл ет собой структурный фрагмент формулы I(5) или I(6)
50
Страница: 14
RU 2 300 521 C2
где R b представл ет собой, например, -СН2СН2-Si(СН3)3 или бензил, либо его
таутомер, и R a, R 1, R 2, Y, R 4, X1, Х2, Х3 и Х4 такие, как определено выше, с соединением
формулы XVIII
5
10
15
где R 6 такой, как определено выше, или его полученной присоединением кислоты солью,
например, при температуре между комнатной и температурой дефлегмации в присутствии
соответствующего органического растворител (например, THF, СН3CN, DMF или DMSO) с
последующим удалением группы -C(O)OR b в услови х, известных специалистам в данной
области техники (например, путем осуществлени взаимодействи с QF или TFA
(например, как описано ниже));
(д) дл соединений формулы Ia, в которых R 5 представл ет собой ОН, осуществл ют
взаимодействие соединени формулы XVII, как оно определено выше, в котором R b
представл ет собой бензил, с гидроксиламином или его полученной присоединением
кислоты солью, например, в услови х, которые известны специалистам в данной области
техники;
(е) дл соединений формулы Ia, в которых R 5 представл ет собой COOR 7,
осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы I, как оно
определено выше, с соединением формулы XIX
20
25
30
35
где L 1 представл ет собой подход щую уход щую группу, такую как галогено или
нитрофенил (например, 4-нитрофенил), и R 7 такой, как определено выше, например, при
приблизительно комнатной температуре в присутствии подход щего основани (например,
NaOH, например, в водном растворе) и соответствующего органического растворител (например, метиленхлорида) или
(ж) дл соединений формулы Ia, в которых R 5 представл ет собой ОСН3 или ОСН2СН3,
осуществл ют взаимодействие соответствующего соединени формулы Ia, в котором R 5
представл ет собой ОН, с диметилсульфатом или диэтилсульфатом соответственно,
например, в присутствии подход щего основани (например, гидроксида щелочного
металла, такого как КОН (например, в водном растворе при концентрации, например, 50
мас.%)) и соответствующего катализатора (например, галогенида четвертичного аммони ,
такого как бензилтриметиламмонийхлорид (например, в растворе СН2Cl2 или THF при
концентрации, например, 10 мас.%)).
Волнистые линии на св з х во фрагментах формул I(5) и I(6) означают положени св зывани данных фрагментов.
Соединени формул XVIA и XVIB могут быть получены путем взаимодействи соответствующего соединени формулы II, как оно определено выше, с соединением
формулы XIXA или XIXB
40
45
50
где R 4, Y, X1, X2, Х3 и Х4 такие, как они определены выше, например, в услови х,
подобных услови м, описанным выше дл синтеза соединений формулы I.
Соединени формул XVIA и XVIB альтернативно могут быть получены путем
взаимодействи соответствующего соединени формулы IV, как оно определено выше, с
Страница: 15
RU 2 300 521 C2
соединением формулы XIXC или XIXD
5
10
15
где R 4, X1, X2, Х3 и Х4 такие, как они определены выше, например, в услови х, подобных
услови м, описанным выше дл синтеза соединений формулы I.
Соединени формулы XVII могут быть получены путем взаимодействи соответствующего соединени формулы II, как оно определено выше, с соединением
формулы XX
20
25
30
35
40
45
50
где Y и R 3b такие, как они определены выше, например, в услови х, подобных
услови м, описанным выше дл синтеза соединений формулы I.
Альтернативно, соединени формулы XVII могут быть получены путем взаимодействи соответствующего соединени формулы I с соединением, соответствующим соединению
формулы XIX, в котором вместо R 7 наличествует группа R b, где R b така , как она
определена выше, например, в услови х, описанных выше касательно получени соединений формулы Ia.
Соединени формул XV и XX могут быть получены путем взаимодействи соответствующего соединени формулы X, как оно определено выше, соответственно с
соединением формулы XVI, как оно определено выше, или с соединением формулы XXI
где R 3b такой, как он определен выше, например, в услови х, подобных услови м,
описанным выше дл синтеза соединений формулы I.
Соединени формулы XVI, XVIII, XIX, XIXA, XIXB, XIXC, XIXD и XXI либо имеютс в
продаже, хорошо известны из литературы, либо могут быть получены или по аналогии со
способами, описанными выше, или с помощью традиционных методик синтеза согласно
стандартным методикам из легко доступных исходных материалов с использованием
соответствующих реагентов и условий реакций. Например, соединени формул XIXA и
XIXB могут быть получены путем взаимодействи соответствующего соединени формулы
XIXC или XIXD (как целесообразно) с соединением формулы X, например, в услови х,
аналогичных описанным выше.
Соединени формул I и Ia, которые определены выше, и производные их обоих далее
здесь упоминаютс как «соединени по изобретению».
Таким образом, предпочтительные соединени по изобретению включают в себ соединени из примеров, описанных ниже. В этом отношении соединени по изобретению,
которые могут быть упом нуты, включают в себ следующие:
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu);
Страница: 16
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(СОО-циклопентил);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОСН2-3-(5-Ме-изоксазол));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОСН2-3-пиридин);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-изо-Bu);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-циклогексил);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-4-гептил);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-ОСН2CF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl, 5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab;
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-((2-амидино)-5-пиридинил);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-((2-метоксиамидино)-5-пиридинил);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-((5-амидино)-2-пиримидинил);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-((5-метоксиамидино)-2-пиримидинил);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,5-диF)и
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(OMe).
Соединени по изобретению могут про вл ть таутомерию. Все их таутомерные формы и
смеси включены в объем данного изобретени . Конкретные таутомерные формы, которые
Страница: 17
RU 2 300 521 C2
5
10
15
могут быть упом нуты, включают в себ формы, св занные с положением двойной св зи в
амидиновой функциональной группе в соединении формулы Ia и с положением
заместител R 5.
Кроме того, соединени по изобретению содержат один или более чем один
асимметрический углеродный атом и поэтому могут про вл ть оптическую и/или
диастереоизомерию. Диастереоизомеры могут быть разделены с использованием
общеприн тых методик, например хроматографии. Многие стереоизомеры могут быть
выделены разделением рацемической или другой смеси данных соединений с
использованием общеприн тых, например ВЭЖХ, методик. Альтернативно, желаемые
оптические изомеры могут быть получены путем взаимодействи подход щих оптически
активных исходных материалов в услови х, которые не привод т к рацемизации либо
эпимеризации, или посредством получени производных, например, с гомохиральной
кислотой с последующим разделением диастереомерных производных общеприн тыми
способами (например, ВЭЖХ, хроматографией на диоксиде кремни ). Все стереоизомеры
включены в объем данного изобретени .
Соединени по изобретению, в которых фрагмент
20
находитс в S-конфигурации, вл ютс предпочтительными.
Предпочтительные соединени по изобретению включают в себ таковые, в которых
структурный фрагмент
25
30
35
40
45
50
находитс в R-конфигурации, когда R а представл ет собой -ОН, или находитс в Sконфигурации, когда R a представл ет собой -СН2OH.
Волнистые линии на св з х в приведенных выше двух фрагментах означают положени св зывани данных фрагментов.
Соединени по изобретению, которые могут быть упом нуты, включают в себ Ph(3Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab (где в этом случае Aze означает азетидин-2карбоксилат (то есть в (R)- и/или в (S)-конформаци х)) равно как и эквивалентные
соединени , в которых вместо водородного атома в амидиновой части в Pab присутствует
группа -OR 6 (как определено выше), в которой R 6 представл ет собой С1-3алкил (то есть
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-AzePab(OEt), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr) или Ph(3-Cl)(5-OCHF2)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr)). Кроме того, соединени по изобретению, которые могут
быть упом нуты, включают в себ таковые, которые не вл ютс конкретными
соединени ми, идентифицированными в предыдущем предложении.
Специалистам в данной области техники очевидно, что в описанных выше и ниже
способах функциональным группам промежуточных соединений может потребоватьс защита с помощью защитных групп.
Функциональные группы, которые желательно защитить, включают в себ гидрокси-,
аминогруппы и группы карбоновой кислоты. Подход щие защитные группы дл гидрокси
включают в себ возможно замещенные и/или ненасыщенные алкильные группы
Страница: 18
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(например, метил, аллил, бензил или трет-бутил), триалкилсилильные или
диарилалкилсилильные группы (например, трет-бутилдиметилсилил, третбутилдифенилсилил или триметилсилил) и тетрагидропиранил. Подход щие защитные
группы дл карбоновой кислоты включают в себ С1-6алкиловый или бензиловый эфиры.
Подход щие защитные группы дл амино и амидино включают в себ третбутилоксикарбонил, бензилоксикарбонил или 2-триметилсилилэтоксикарбонил (Теос).
Амидинные азоты также могут быть защищены гидрокси- или алкоксигруппами и могут быть
либо одно, либо двузащищенными.
Защита и сн тие защиты с функциональных групп могут происходить до или после
сочетани либо до или после любой другой реакции на вышеупом нутых схемах.
Защитные группы могут быть удалены в соответствии с методиками, которые хорошо
известны специалистам в данной области техники и как они описаны ниже.
Специалистам в данной области техники очевидно, что дл того чтобы получить
соединени по изобретению альтернативным и в некоторых случа х более удобным
способом, конкретные стадии способов, упом нутые выше, могут быть выполнены в
различном пор дке и/или конкретные реакции могут быть выполнены на другой стадии
общего способа (то есть в соответствии с конкретной реакцией могут быть добавлены
заместители к различным промежуточным соединени м и/или выполнены химические
превращени различных промежуточных соединений, упом нутых выше). Это может
отрицать или делать необходимой потребность в защитных группах.
Тип примен емой химии будет диктовать необходимость и тип защитных групп, равно
как и последовательность выполнени синтеза.
Использование защитных групп основательно описано в "Protective Groups in Organic
Chemistry", edited by J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973), и "Protective Groups in
Organic Synthesis", 3 nd edition, T.W.Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-lnterscience (1999).
Защищенные производные соединений по изобретению могут быть химически
превращены в соединени по изобретению с использованием стандартных методик сн ти защиты (например, гидрированием). Специалисту также сно, что некоторые соединени формулы Ia также могут быть упом нуты как вл ющиес «защищенными производными»
соединений формулы I.
Медицинское и фармацевтическое применение
Соединени по изобретению могут обладать фармакологической активностью как
таковые. Соединени по изобретению, которые могут обладать такой активностью,
включают в себ соединени формулы I, но не ограничиваютс ими.
Однако другие соединени по изобретению (включа соединени формулы Ia) могут не
обладать такой активностью, но могут быть введены парентерально или перорально и
после этого могут метаболизироватьс в организме с образованием соединений, которые
вл ютс фармакологически активными (включа соответствующие соединени формулы I,
но не ограничива сь ими). Такие соединени (также включающие в себ соединени ,
которые могут обладать некоторой фармакологической активностью, но эта активность
существенно ниже, чем такова у «активных» соединений, до которых они
метаболизируютс ) могут поэтому быть описаны как «пролекарства» активных соединений.
Таким образом, соединени по изобретению вл ютс полезными, поскольку они
обладают фармакологической активностью и/или метаболизируютс в организме после
перорального или парентерального введени с образованием соединений, которые
обладают фармакологической активностью. Поэтому соединени по изобретению показаны
в качестве фармацевтических средств.
Таким образом, согласно еще одному аспекту данного изобретени предложены
соединени по изобретению дл применени в качестве фармацевтических средств.
В частности, соединени по изобретению вл ютс сильными ингибиторами тромбина
или сами по себе, и/или (например, в случае пролекарств) метаболизируютс после
введени с образованием сильных ингибиторов тромбина, например, как может быть
продемонстрировано в тестах, описанных ниже.
Страница: 19
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
В пон тие «пролекарство ингибитора тромбина» авторы включают соединени , которые
образуют ингибитор тромбина в экспериментально обнаруживаемом количестве и в
пределах предварительно определенного времени (например, приблизительно 1 часа)
после перорального или парентерального введени (смотри, например, приведенный ниже
Тест Е) или, альтернативно, после инкубировани в присутствии микросом печени
(смотри, например, приведенный ниже Тест G).
Таким образом, ожидаетс , что соединени по изобретению будут полезными при таких
состо ни х, где требуетс ингибирование тромбина, и/или состо ни х, где показана
антикоагул нтна терапи , включа следующие далее.
Лечение и/или профилактика тромбоза и гиперкоагул ции в крови и/или ткан х
животных, включа человека
Известно, что гиперкоагул ци может приводить к тромбоэмболическим заболевани м.
Состо ни , св занные с гиперкоагул цией и тромбоэмболическими заболевани ми,
которые могут быть упом нуты, включают в себ наследственную или приобретенную
резистентность к активированному белку С, такую как мутаци фактора V (фактора V
Лейдена), и наследственные или приобретенные дефициты антитромбина III, белка С,
белка S, гепаринового кофактора II. Другие состо ни , которые, как известно, св заны
с гиперкоагул цией и тромбоэмболическим заболеванием, включают в себ циркулирующие антитела против фосфолипидов (волчаночный антикоагул нт),
гомоцистеинемию, вызванную гепарином тромбоцитопению и нарушени фибринолиза, а
также коагул ционные синдромы (например, диссеминированное внутрисосудистое
свертывание крови, ДВС-синдром (DIC)) и сосудистое повреждение в целом (например, в
результате хирургического вмешательства).
Лечение состо ний, при которых существует нежелательный избыток тромбина без
симптомов гиперкоагул ции, например при нейродегенеративных заболевани х, таких как
болезнь Альцгеймера
Конкретные болезненные состо ни , которые могут быть упом нуты, включают в себ терапевтическое и/или профилактическое лечение венозного тромбоза (например,
тромбоза глубоких вен) и эмболии легких, артериального тромбоза (например, при
инфаркте миокарда, нестабильной стенокардии, вызванном тромбозом ударе и тромбозе
периферических артерий), и системной эмболии, обычно из предсерди во врем фибрилл ции предсердий (например, неклапанной фибрилл ции предсердий) или из
левого желудочка после трансмурального инфаркта миокарда, или вызванной застойной
сердечной недостаточностью, профилактику повторной окклюзии (т.е. тромбоза) после
тромболиза, чрескожную внутрипросветную ангиопластику (РТА) и операции коронарного
шунтировани , предотвращение повторного тромбоза после микрохирургической операции
и сосудистой хирургической операции в общем.
Дополнительные показани включают в себ терапевтическое и/или профилактическое
лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывани крови, вызванного
бактери ми, множественной травмой, интоксикацией или любым другим механизмом;
лечение антикоагул нтами, когда кровь контактирует с чужеродными поверхност ми в
организме, такими как сосудистые трансплантаты, сосудистые стенты, сосудистые
катетеры, механические и биологические искусственные клапаны или любое другое
медицинское устройство, и лечение антигоагул нтами, когда кровь контактирует с
медицинскими устройствами вне организма, как, например, во врем сердечно-сосудистой
хирургической операции с использованием аппарата искусственного кровообращени или
при гемодиализе, терапевтическое и/или профилактическое лечение идиопатического и
респираторного дистресс-синдрома взрослых, фиброза легких после лечени излучением
или химиотерапии, септического шока, септицемии, воспалительных реакций, которые
включают в себ отек, острый или хронический атеросклероз, как, например, ишемическа болезнь сердца и образование атеросклеротических бл шек, заболевание артерий
головного мозга, церебральный инфаркт, церебральный тромбоз, церебральна эмболи ,
заболевание периферических артерий, ишемию, стенокардию (включа нестабильную
Страница: 20
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
стенокардию), реперфузионное повреждение, рестеноз после внутрипросветной
ангиопластики (РТА) и хирургическую операцию коронарного шунтировани .
Соединени по данному изобретению, которые ингибируют трипсин и/или тромбин,
также могут быть полезны в лечении панкреатита.
Таким образом, соединени по изобретению показаны как дл терапевтического, так
и/или дл профилактического лечени этих состо ний.
В соответствии с еще одним аспектом насто щего изобретени предложен способ
лечени состо ни , при котором требуетс ингибирование тромбина, при котором
субъекту, страдающему от такого состо ни или подверженного ему, ввод т
терапевтически эффективное количество соединени по данному изобретению.
Соединени по данному изобретению обычно будут вводить перорально, внутривенно,
подкожно, трансбуккально, ректально, через кожу, назально, в трахею, в бронхи, любым
другим парентеральным путем или посредством ингал ции, в форме фармацевтических
препаратов, содержащих соединение по изобретению в виде или свободного основани ,
или фармацевтически приемлемой нетоксичной соли присоединени органической или
неорганической кислоты в фармацевтически приемлемой лекарственной форме.
Предпочтительными способами введени соединений по изобретению вл ютс пероральные. Предпочтительные фармацевтические препараты включают в себ фармацевтические композиции с измененным высвобождением, содержащие соединени по изобретению. Термин фармацевтическа композици «с измененным высвобождением»
хорошо пон тен специалисту как включающий в себ любую композицию, дл которой
начало и/или скорость высвобождени лекарственного средства (то есть соединени по
изобретению) измен ют посредством галеновых процедур, и таким образом включает в
себ определение, предусмотренное в Фармакопее США (USP XXII) на страницах xIiii и
xIiv введени /вводной части, при этом релевантное описание этого документа введено
сюда посредством ссылки.
Таким образом, подход щие препараты с измененным высвобождением могут быть
приготовлены специалистом согласно стандартным методикам фармации (смотри,
например, Pharmaceutisch Weekblad Scientific Edition, 6, 57 (1984); Medical
Applications of Controlled Release, Vol II, eds. Langer and Wise (1984) Bocaration,
Florida, на страницах 1-34; Industrial Aspects of Pharmaceuticats, ed. Sandel,
Swedish Pharmaceutical Press (1993) на страницах 93-104; страницы 191-211
"Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design", ed. M. E. Aulton (1988)
(Churchill Livingstone)).
Таким образом, предпочтительные препараты с измененным высвобождением включают
в себ таковые, в которых соответствующее соединение по изобретению заключено в
полимерной матрице. В этом отношении авторы предпочитают, чтобы препараты,
включающие в себ соединени по изобретению, были предложены дл перорального
введени в форме так называемой "набухающей" системы с измененным высвобождением
или системы с измененным высвобождением «с гелеобразующей матрицей», в которых
соединение по изобретению предложено вместе с полимером, который набухает в водной
среде (то есть с «гидрофильным гелеобразующим компонентом»).
В частности, авторы предпочитают, чтобы соединени по изобретению были
приготовлены совместно в композиции с гелеобразующей матрицей, содержащей иотакаррагинан и один или более чем один нейтральный гелеобразующий полимер.
Иота-каррагинан предпочтительно представлен в таком предпочтительном препарате на
уровне более чем 15% по массе. Предпочтительные типы иота-каррагинана включают в
себ иота-каррагинан "фармацевтический" (имеетс у FMC Biopolymer), в зкость которого
составл ет не менее 5 сантипуаз (сП), предпочтительно в интервале 5-10 сП (дл 1,5%ного раствора, нагретого до 82°С, после чего в зкость измер ют при 75°С с помощью
вискозиметра Brookfield LV, оснащенного №1 осью, двигающейс со скоростью 30 об/мин),
и иота-каррагинан "технический" (имеетс у Fluka Biochemica), в зкость которого
предпочтительно составл ет не менее 14 мПа?с дл 0,3%-ного водного раствора,
Страница: 21
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
нагретого до 20°С, после чего в зкость измер ют с помощью вискозиметра с падающим
шариком, тип Haake, используемого вместе с термостатом Lauda C3 и Hakke Messсистемой III, и с использованием покрытых золотом шариков из нержавеющей стали с
плотностью 7,8 г/см 3.
Нейтральный гелеобразующий полимер может быть единичным или представл ть собой
смесь более чем одного нейтрального разрушаемого полимера, имеющего
гелеобразующие свойства и обладающего значительной рН-независимой растворимостью.
Уровень нейтрального гелеобразующего полимера в препарате предпочтительно
составл ет более 10%, но предпочтительно более 20% по массе.
Подход щие нейтральные гелеобразующие полимеры включают в себ полиэтиленоксид (РЕО), производные и члены РЕО-семейства (например,
полиэтиленгликоль (ПЭГ), предпочтительно существующий в природе в твердом состо нии,
с подход щей молекул рной массой или в зкостью). Если РЕО используетс как
единичный нейтральный гелеобразующий полимер, то он предпочтительно имеет ММ
(молекул рную массу) ?4 миллиона (4М), соответству интервалу в зкости водного
раствора 1650-5500 мПа?с (или 1650-5500 сП; измеренной дл 1%-ного водного раствора
при 25°С с использованием вискозиметра Brookfield RVF с осью №2 при 2 об/мин). Другие
примеры подход щих РЕО включают в себ РЕО с ММ приблизительно 5 миллионов (5М),
соответствующей интервалу в зкости водного раствора 5500-7500 мПа?с, или РЕО с ММ
приблизительно 8 миллионов (8М), соответствующей интервалу в зкости водного раствора
10000-15000 мПа?с. Этот интервал охватывает значение в зкости дл типичного раствора
(в сП), измеренное при 25°С, гарантированное дл этого полимера в Фармакопее США
24/NF (Национальном формул ре) 19, 2000 edition, pp.2285-2286. Если в качестве
единичного нейтрального гелеобразующего полимера используетс ПЭГ, то он
предпочтительно имеет высокую молекул рную массу, например ММ приблизительно
20000, что соответствует интервалу в зкости 2700-3500 мПа?с (или 2700-3500 сП),
измеренной с использованием 50%-ного водного раствора (мас./мас.) при 20°С при
использовании капилл рного вискозиметра (Ubbelohde или эквивалентного). [Ссылка:
European Pharmacopoeia 3 rd Ed., 2000, Supplement, pp.908-909.]
Другие подход щие гелеобразующие полимеры включают в себ производные
целллюлозы, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС) или
гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), с подход щими высокими значени ми в зкостей (например,
«НРМС 10000 сП», «НРМС 15000 сП», «НЕС, тип НН» или «НЕС, тип Н»). Если такие
гидроксипропилметилцеллюлозные полимеры, как «НРМС 10000 сП» и «НРМС 15000 сП»,
используютс в качестве единичного нейтрального полимера, они имеют соответственно
значени кажущейс в зкости 7500-14000 мПа?с (или 7500-14000 сП) и 11250-21000 мПа?с
(или 11250-21000 сП) при измерении при 20°С с использованием 2%-ного (мас./мас.)
водного раствора, рассчитанные относительно сухого вещества, с использованием
капилл рного вискозиметра (Ubbelohde или эквивалентного). Один из типов
гидроксиэтилцеллюлозного полимера, например «Natrosol 250 Pharma, тип НН», от
Hercules Incorporated (Aqualon), демонстрирует типично в зкость по Brookfield
приблизительно в 20000 мПа?с при использовании прибора Brookfield Synchro-Lectric
Model LVF в услови х 1%-ной концентрации раствора, с осью №4, скоростью оси 30
об/мин, с фактором 200, 25°С (смотри Natrosol Physical and Chemical Properties
booklet, 33.007-E6 (1993), p.21).
Конкретные препараты, которые могут быть упом нуты, включают в себ такие
препараты, в которых соединение по изобретению приготовлено совместно с иотакаррагинаном и НРМС (10000 сП) в соотношении 50:50 (мас.%) или совместно с иотакаррагинаном и РЕО 4М в соотношении 50:50 (мас.%).
Предпочтительные дополнительные эксципиенты в таких препаратах включают в себ смазывающие вещества, такие как стеарилфумарат натри .
В зависимости от расстройства и пациента, которому требуетс лечение, и способа
Страница: 22
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
введени данные композиции могут быть введены в различных дозах.
Кроме того, соединени по изобретению могут быть комбинированы и/или совместно
введены с антитромботическим(и) агентом(ами) с другим механизмом действи , таким как
один или более чем один из следующего: с антитромбоцитарными агентами ацетилсалициловой кислотой, тиклопидином и клопидогрелем; ингибиторами рецепторов
и/или синтетазы тромбоксана; антагонистами рецепторов фибриногена; миметиками
простациклина; ингибиторами фосфодиэстеразы; антагонистами ADP(аденозиндифосфат)рецепторов (Р2T) и ингибиторами карбоксипептидазы U (CPU).
Соединени по изобретению могут быть дополнительно комбинированы и/или совместно
введены с тромболитическими агентами, такими как один или более чем один тканевый
активатор плазминогена (природный, рекомбинантный или измененный), стрептокиназа,
урокиназа, проурокиназа, анизоилированный плазминоген-стрептокиназный активаторный
комплекс (APSAC), активаторы плазминогена слюнных желез животных и им подобные, в
лечении тромботических заболеваний, в частности инфаркта миокарда.
Таким образом, согласно еще одному аспекту данного изобретени предложен
фармацевтический препарат, содержащий соединение по изобретению в смеси с
фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.
Подход щие суточные дозы соединений по изобретению дл терапевтического лечени людей составл ют приблизительно 0,001-100 мг/кг массы тела при пероральном введении
и 0,001-50 мг/кг массы тела при парентеральном введении.
Во избежание сомнени термин «лечение», как он использован здесь, включает в себ терапевтическое и/или профилактическое лечение.
Соединени по данному изобретению имеют преимущество перед известными из уровн техники соединени ми в том, что они могут быть более эффективными, менее токсичными,
быть с более продолжительным действием, иметь более широкий интервал по активности,
быть более сильнодействующими, оказывать меньше побочных действий, более легко
абсорбироватьс и/или иметь лучший фармакокинетический профиль (например, более
высокую пероральную биодоступность и/или более низкий клиренс), и/или иметь другие
полезные фармакологические, физические или химические свойства. Соединени по
изобретению могут иметь дополнительное преимущество перед известными из уровн техники соединени ми в том, что их можно вводить реже.
Биологические тесты
Могут быть использованы следующие процедуры анализа.
Тест А
Определение времени свертывани плазмы крови после добавлени тромбина
(тромбинового времени) (ТТ)
Раствор ингибитора (25 мкл) инкубируют с плазмой (25 мкл) в течение 3 минут. Затем
добавл ют тромбин человека (Т 6769, Sigma Chem. Co или Hematologic Technologies) в
буферном растворе, рН 7,4 (25 мкл, 4,0 NIH (Национальный институт здравоохранени )
единицы/мл), и измер ют врем свертывани на автоматическом приборе (КС 10, Amelung).
Тромбиновое врем (ТТ) выражают в абсолютных значени х (секундах), равно как и в
виде отношени ТТ без ингибитора (ТТ0) к ТТ с ингибитором (ТТi). Стро т кривые
зависимости последних отношений (интервал 1-0) от концентрации ингибитора (в logпреобразовании), и они соответствуют сигмоидальным кривым доза-ответ согласно
уравнению
у=а/[1+(х/IC50) S],
где а = максимальный интервал, то есть 1; s = наклон кривой доза-ответ и IC50 =
концентраци ингибитора, котора удваивает врем свертывани . Вычислени выполн ют
на персональном компьютере (ПК) с использованием программного обеспечени GraFit
Version 3, задава уравнение равным сначала 0, определ ем конечное значение = 1
(Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, Лондон,
Соединенное Королевство Великобритании и Северной Ирландии).
Тест В
Страница: 23
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Определение ингибировани тромбина с помощью хромогенного автоматизированного
анализа
Эффективность ингибитора тромбина измер ют методом с использованием
хромогенного субстрата на автоматизированном процессоре дл микропланшетов Plato
3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Швейцари ), использу 96-луночные
титрационные микропланшеты половинного объема (Costar, Cambridge, MA, США; № по
каталогу 3690). Исходные растворы тестируемого вещества в DMSO (72 мкл), 0,1-1
ммоль/л, последовательно развод т DMSO как 1:3 (24+48 мкл) дл получени дес ти
различных концентраций, которые анализируют в качестве образцов дл анализа. 2 мкл
тестируемого образца разбавл ют 124 мкл буфера дл анализа, 12 мкл раствора
хромогенного субстрата (S-2366, Chromogenix, Mцlndal, Швеци ) в буфере дл анализа и
в конце добавл ют 12 мкл раствора ?-тромбина (?-тромбина человека, Sigma Chemical Co.
или Hematologic Technologies) в буфере дл анализа, и образцы перемешивают. Конечные
анализируемые концентрации составл ют: тестируемое вещество 0,00068-13,3 мкмоль/л,
S-2366 0,30 ммоль/л, ?-тромбин 0,020 единиц NIH/мл. Дл вычислени процента
ингибировани дл тестируемых образцов используют линейное увеличение поглощени в
течение 40 минут инкубации при 37°С в сравнении с контрольными пробами без
ингибитора. Автоматически регистрируемую величину IC50, соответствующую концентрации
ингибитора, вызывающей 50%-ное ингибирование активности тромбина, рассчитывают из
кривой зависимости логарифма концентрации от % ингибировани .
Тест С
Определение константы ингибировани Кi дл тромбина человека
Определени Кi производ т, примен метод с использованием хромогенного субстрата,
при 37°С на центрифужном анализаторе Cobas Bio (Roche, Basel, Швейцари ). Остаточную
ферментативную активность после инкубации ?-тромбина человека с тестируемым
соединением, вз тым в различных концентраци х, определ ют при трех различных
концентраци х субстрата и измер ют как изменение оптической плотности при 405 нм.
Растворы тестируемого соединени (100 мкл; обычно в буфере или физиологическом
растворе, содержащем BSA 10 г/л) смешивают с 200 мкл ?-тромбина человека (Sigma
Chemical Co) в буфере дл анализа (0,05 моль/л Трис-HCl, рН 7,4, с ионной силой 0,15,
доведенной с помощью NaCl), содержащем BSA (10 г/л), и анализируют как образцы на
Cobas Bio. К 320 мкл субстрата S-2238 (Chromogenix AB, Mцlndal, Швеци ) в буфере дл анализа добавл ют 60 мкл образца вместе с 20 мкл воды и регистрируют изменение
плотности (?А/мин). Конечные концентрации S-2238 составл ют 16, 24 и 50 мкмоль/л, а
тромбина 0,125 единиц NIH/мл.
Скорость реакции в стационарном состо нии используют дл построени графиков
Диксона, то есть диаграмм, показывающих изменение 1/(?А/мин) от концентрации
ингибитора. Дл обратимых конкурентных ингибиторов экспериментальные точки дл различных концентраций субстрата обычно образуют пр мые линии, которые пересекаютс при х=-Кi.
Тест D
Определение частичного активированного тромбопластинового времени (АРТТ)
АРТТ определ ют в объединенных образцах нормальной цитратной плазмы человека с
помощью реагента РТТ Automated 5, производимого Stago. Ингибиторы добавл ют к
плазме (10 мкл раствора ингибитора к 90 мкл плазмы), инкубируют с АРТТ-реагентом в
течение 3 минут с последующим добавлением 100 мкл раствора хлорида кальци (0,025 М)
и определ ют АРТТ, использу анализатор свертывани КС10 (Amelung) в соответствии с
инструкци ми производител реагента.
Врем свертывани выражают в абсолютных значени х (секундах), равно как и в виде
отношени АРТТ без ингибитора (АРТТ0) к АРТТ с ингибитором (APTTi). Стро т кривые
зависимости последних отношений (интервал 1-0) от концентрации ингибитора (в logпреобразовании), и они соответствуют сигмоидальным кривым доза-ответ согласно
уравнению
Страница: 24
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
у=а/[1+(х/IC50) s],
где а = максимальный интервал, то есть 1; s = наклон кривой доза-ответ и IC50 =
концентраци ингибитора, котора удваивает врем свертывани . Вычислени выполн ют
на ПК с использованием программного обеспечени GraFit Version 3, задава уравнение
равным сначала 0, определ ем конечное значение = 1 (Erithacus Software, Robin
Leatherbarrow, Imperial College of Science, Лондон, Соединенное Королевство
Великобритании и Северной Ирландии).
IC50APTT определ ют как концентрацию ингибитора в плазме человека, котора удваивала частичное активированное тромбопластиновое врем .
Тест Е
Определение тромбинового времени ex vivo
Ингибирование тромбина после перорального или парентерального введени соединений по изобретению, растворенных в смеси этанол/Солютол К (SolutolK)/вода (5:5:
90) исследуют на наход щихс в сознании крысах, которым за один или два дн до
эксперимента ввод т катетер дл вз ти оббразцов крови из сонной артерии. В день
эксперимента в фиксированное врем после введени соединени отбирают образцы
крови в пластиковые пробирки, содержащие 1 часть раствора цитрата натри (0,13 моль
на 1 л) и 9 частей крови. Пробирки центрифугируют дл получени плазмы, обедненной
тромбоцитами.
Образцы плазмы в объеме 50 мкл осаждают 100 мкл охлажденного ацетонитрила.
Образцы центрифугируют в течение 10 минут при 4000 об/мин. 75 мкл супернатанта
разбавл ют 75 мкл 0,2%-ной муравьиной кислоты. Получающиес растворы в объеме 10
мкл анализируют с помощью LC-MS/MS и, использу калибровочные кривые, определ ют
концентрации ингибитора тромбина.
Тест F
Определение плазменного клиренса у крысы
Плазменный клиренс оценивают на самцах крыс линии Sprague Dawley. Соединение
раствор ют в воде и ввод т в виде подкожной болюсной инъекции в дозе 4 мкмоль/кг.
Собирают образцы крови через повтор ющиес интервалы вплоть до 5 часов после
введени лекарственного средства. Образцы крови центрифугируют, плазму отдел ют от
клеток крови и перенос т в пробирки, содержащие цитрат (в конечной концентрации 10%).
Образцы плазмы в объеме 50 мкл осаждают 100 мкл охлажденного ацетонитрила. Образцы
центрифугируют в течение 10 минут при 4000 об/мин. 75 мкл супернатанта разбавл ют 75
мкл 0,2%-ной муравьиной кислоты. Получающиес растворы в объеме 10 мкл анализируют
с помощью LC-MS/MS и, использу калибровочные кривые, определ ют концентрации
ингибитора тромбина. Площадь под кривой «концентраци плазмы - врем » оценивают с
использованием log/линейной формулы трапеций и экстраполируют к бесконечному
времени. Затем определ ют плазменный клиренс (CL) соединени как
CL = доза/AUC (площадь под кривой).
Значени выражают в мл/мин/кг.
Тест G
Определение стабильности in vitro
Микросомы печени получают из образцов печени крыс линии Sprague-Dawley и людей
согласно внутренним SOP (стандартным рабочим процедурам). Соединени инкубируют
при 37°С при общей концентрации микросомального белка, равной 3 мг/мл, в 0,05 моль/л
Трис-буфере при рН 7,4 в присутствии кофакторов NADH (2,5 ммоль/л) и NADPH (0,8
ммоль/л). Начальна концентраци соединени составл ет 5 или 10 мкмоль/л. Отбирают
образцы дл анализа вплоть до 60 минут после начала инкубации. Ферментативную
активность в отобранном образце немедленно останавливают добавлением 20%-ной
муристиновой кислоты в объеме, соответствующем 3,3% от общего объема образца.
Концентрацию соединени , остающуюс в образце через 60 мин (FINAL CONC),
определ ют с помощью LCMS, использу образец, собранный в нулевой момент времени,
в качестве эталонного образца (START CONC).% разрушенного ингибитора тромбина
Страница: 25
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
вычисл ют как
100%Ч{[START CONC]-[FINAL CONC]}/[START CONC].
Тест Н
Модель артериального тромбоза
Индуцируют повреждение сосуда путем аппликации хлорида железа (FeCl3) местно на
сонную артерию. Крыс анестезируют с помощью внутрибрюшинной инъекции
пентобарбитала натри (80 мг/кг; Apoteksbolaget; Umeе, Швеци ) с последующей
непрерывной инфузией (12 мг/кг/ч) в продолжение эксперимента. Температуру тела крысы
поддерживают равной 38°С в продолжение эксперимента с помощью внешнего обогрева.
Эксперимент начинают с 5-минутного контрольного периода. Спуст п ть минут
внутривенно ввод т человеческий 125I-фибриноген (80 кБк; IM53; Amersham
International, Buckinghamshire, Соединенное Королевство Великобритании и Северной
Ирландии) и используют в качестве маркера дл последующего включени фибрин(оген)а в
тромб. Проксимальный конец сегмента сонной артерии размещают в пластиковой трубке (6
мм; Silastic®, Dow Corning, MI, США), открытой вдоль, содержащей пропитанную FeCl3 (2
мкл; 55 мас.%; Merck, Дармштадт, Германи ) фильтровальную бумагу (диаметр 3 мм; 1F;
Munktell, Grycksbo, Швеци ). Левую сонную артерию подвергают действию FeCl3 в течение
10 минут и затем удал ют из пластиковой трубки и пропитывают физиологическим
раствором. Спуст п тьдес т минут удал ют сонную артерию и промывают в
физиологическом растворе. Также отбирают эталонные образцы крови дл определени 125I-активности крови, через 10 минут после инъекции 125I-фибриногена и в
конце эксперимента. 125I-Активность в эталонных образцах крови и сегменте сосуда
измер ют в гамма-счетчике (1282 Compugamma; LKB Wallac Oy, Турку, Финл нди ) в день
выполнени эксперимента. Размер тромба определ ют как количество 125I-активности,
включенной в сегмент сосуда, по отношению к 125I-активности в крови (имп/мин/мг).
Общие экспериментальные методики
ТСХ выполн ли на силикагеле. Анализ с помощью хиральной ВЭЖХ выполн ли с
использованием колонки Chiralcel OD размером 46 мм х 250 мм с предколонкой размером 5
см. Температуру колонки поддерживали при 35°С. Использовали скорость потока 1,0
мл/мин. Использовали УФ-детектор Gilson 115 при 228 нм. Подвижна фаза состо ла из
гексанов, этанола и трифторуксусной кислоты, и дл каждого соединени даны
соответствующие соотношени . Как правило, продукт раствор ли в минимальном
количестве этанола и его разбавл ли подвижной фазой.
LC-MS/MS осуществл ли с использованием прибора HP-1100, оборудованного CTC-PALинжектором и колонкой ThermoQuest, Hypersil BDS-С18, 5 мкм, 4Ч100 мм. Использовали
MS-детектор API-3000 (Sciex). Скорость потока составл ла 1,2 мл/мин, и подвижна фаза
(градиент) состо ли из 10-90%-ного ацетонитрила с 90-10%-ным 4 мМ водным ацетатом
аммони , каждый из которых содержал 0,2%-ную муравьиную кислоту.
1
H ЯМР-спектры записывали с использованием тетраметилсилана в качестве
внутреннего стандарта. 13С ЯМР-спектры записывали с использованием номенклатурных
дейтерированных растворителей в качестве внутреннего стандарта.
Пример 1
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu)
(1) 3-Хлор-5-метоксибензальдегид
3,5-Дихлоранизол (74,0 г; 419 ммоль) в THF (200 мл) по капл м добавл ли к
металлическому магнию (14,2 г; 585 ммоль; предварительно промытому 0,5 н. HCl) в THF
(100 мл) при 25°С. После этого добавлени по капл м добавл ли 1,2-дибромэтан (3,9 г;
20,8 ммоль). Получающуюс темно-коричневую смесь нагревали с обратным
холодильником в течение 3 ч. Смесь охлаждали до 0°С и добавл ли N,Nдиметилформамид (60 мл) в виде одной порции. Смесь распредел ли с помощью
диэтилового эфира (3Ч400 мл) и 6 н. HCl (500 мл). Объединенные органические экстракты
промывали сол ным раствором (300 мл), сушили (Na2SO4), фильтровали и
Страница: 26
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
концентрировали в вакууме с получением масла. Посредством флэш-хроматографии (2x)
на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1) получили указанное в подзаголовке
соединение (38,9 г; 54%) в виде желтого масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.90 (s, 1H), 7.53 (s, 1Н), 7.38 (s, 1H,), 7.15 (s, 1H), 3.87(s, 3H).
(2) 3-Хлор-5-гидроксибензальдегид
Раствор 3-хлор-5-метоксибензальдегида (22,8 г; 134 ммоль; смотри стадию (1) выше) в
CH2Cl2 (250 мл) охлаждали до 0°С. По капл м в продолжение 15 мин добавл ли трибромид
бора (15,8 мл; 167 ммоль). После перемешивани реакционной смеси в течение 2 ч
медленно добавл ли H2O (50 мл). Затем раствор экстрагировали Et2O (2Ч100 мл).
Органические слои объедин ли, сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в
вакууме. Посредством флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием смесью
Нех/EtOAc (4:1) получили указанное в подзаголовке соединение (5,2 г; 25%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.85 (s, 1H), 7.35 (s, 1Н), 7.20 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 3.68 (s, 1H).
(3) 3-Хлор-5-дифторметоксибензальдегид
Раствор 3-хлор-5-гидроксибензальдегида (7,5 г; 48 ммоль; смотри стадию (2) выше) в
2-пропаноле (250 мл) и 30%-ном КОН (100 мл) нагревали до температуры дефлегмации.
Реакционную смесь при перемешивании в течение 2 ч барботировали CHCIF2.
Реакционную смесь охлаждали, подкисл ли 1 н. HCl и экстрагировали EtOAc (2Ч100 мл).
Органические экстракты промывали сол ным раствором (100 мл), сушили (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали в вакууме. Посредством флэш-хроматографии на
силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1) получили указанное в подзаголовке
соединение (4,6 г; 46%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.95 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (s, 1Н), 6.60
(t, JH-F=71.1 Гц, 1Н).
(4) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN
Раствор 3-хлор-5-дифторметоксибензальдегида (4,6 г; 22,3 ммоль; смотри стадию (3)
выше) в CH2Cl2 (200 мл) охлаждали до 0°С. Добавл ли Znl2 (1,8 г; 5,6 ммоль) и
триметилсилилцианид (2,8 г; 27,9 ммоль), реакционную смесь оставл ли нагреватьс до
комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Данную смесь частично
концентрировали в вакууме, получа указанное в подзаголовке соединение в виде
жидкости, которую использовали непосредственно на приведенной ниже стадии (5) без
дальнейшей очистки или определени характеристик.
(5) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2-(R,S)CH(OTMS)CN (6,82 г; предположительно 22,3 ммоль; смотри
стадию (4) выше) по капл м добавл ли к смеси HCl/EtOH (500 мл). Реакционную смесь
перемешивали 15 ч, затем частично концентрировали в вакууме, получа указанное в
подзаголовке соединение в виде жидкости, которую использовали на приведенной ниже
стадии (6) без дальнейшей очистки или определени характеристик.
(6) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt (6,24 г; предположительно 22,3 ммоль; смотри
стадию (5) выше) раствор ли в THF (250 мл), добавл ли 0,5 М H2SO4 (400 мл) и
реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 65 ч, охлаждали и затем частично
концентрировали в вакууме дл удалени большей части THF. Затем реакционную смесь
экстрагировали Et2O (3Ч100 мл), сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в
вакууме с получением указанного в подзаголовке соединени в виде твердого вещества,
которое использовали на стадии (7) без дальнейшей очистки или определени характеристик.
(7) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,25 г; предположительно 22,3 ммоль;
смотри стадию (6) выше) в 2-пропаноле (175 мл) и 20%-ном КОН (350 мл) перемешивали
при комнатной температуре 15 ч. Реакционную смесь затем частично концентрировали в
вакууме дл удалени большей части 2-пропанола. Оставшуюс смесь подкисл ли 1
Страница: 27
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
М H2SO4, экстрагировали Et2O (3Ч100 мл), сушили (Na2SO4) и концентрировали в вакууме
с получением твердого вещества. Посредством флэш-хроматографии на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (6:3:1) получили
аммониевую соль указанного в подзаголовке соединени . Эту аммониевую соль затем
раствор ли в смеси EtOAc (75 мл) и Н2О (75 мл) и подкисл ли 2 н. HCl. Органический
слой отдел ли и промывали сол ным раствором (50 мл), сушили (Na2SO4) и
концентрировали в вакууме с получением указанного в подзаголовке соединени (3,2 г;
57% со стадий от (4)-(7)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.38 (s, 1Н), 7.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.89 (t, JH-F=71.1 Гц,
1H), 5.16 (s, 1H).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH (б)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,2 г; 12,7 ммоль; смотри стадию (7)
выше) и Липазы PS "Amano" (~2,0 г) в винилацетате (125 мл) и МТВЕ (125 мл) нагревали
с обратным холодильником в течение 48 ч. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали
через Целит® и осадок на фильтре промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали в
вакууме и подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием смесью
CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (6:3:1), получа аммониевую соль указанных в
подзаголовке соединений (а) и (б). Соединение (а) в виде соли раствор ли в Н2О,
подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали сол ным
раствором, сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с получениме
указанного в подзаголовке соединени (а) (1,2 г; 37%).
Дл указанного в подзаголовке соединени (а)
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.38 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.89 (t, JH-F=71.1 Гц,
1Н), 5.17 (s, 1Н).
(9) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (1,1 г; 4,4 ммоль; смотри стадию (8)
выше) и H-Aze-Pab(Teoc) (смотри международную патентную за вку WO 00/42059; 2,6 г;
5,7 ммоль) в DMF (50 мл) при 0°С добавл ли РуВОР (2,8 г; 5,3 ммоль) и коллидин (1,3 г;
10,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при
комнатной температуре в течение дополнительных 15 ч. Реакционную смесь
концентрировали в вакууме и подвергали флэш-хроматографии на силикагеле (3х) с
элюированием сначала смесью CHCl3/EtOH (9:1), затем EtOAc/EtOH (20:1) и
окончательно с элюированием смесью СН2Cl2/СН3ОН (95:5) с получением указанного в
подзаголовке соединени (1,0 г; 37%) в виде твердого вещества белого цвета.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; смесь ротамеров) ? 7.79-7.85 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 7.15-7.48
(m, 5Н), 6.89 и 6.91 (t, jH-F=71.1 Гц, 1H), 5.12 и 5.20 (s, 1H), 4.75-4.85 (m, 1H), 3.974.55 (m, 6H), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.15 (m, 2H), 0.09 (s, 9H).
MS (m/z) 611 (M+1) +.
(10) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 г; 0,08 ммоль; смотри стадию
(9) выше) раствор ли в 3 мл ацетонитрила и добавл ли 0,062 г (0,5 ммоль) гидрохлорида
O-циклобутилгидроксиламина. Смесь нагревали при 70°С в течение 4,5 ч. Растворитель
выпаривали и остаток распредел ли между водой и этилацетатом. Водную фазу
экстрагировали еще два раза этилацетатом и объединенную органическую фазу
промывали водой, сол ным раствором, сушили (Na2SO4), фильтровали и упаривали.
Выход 0,054 г (95%).
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD): ? 8.66-8.50 (m, 1Н), 7.45 (d, 2H), 7.29 (m, 3Н), 7.15 (m,
2H), 6.88 (t, 1H основной ротамер), 6.85 (t, 1H второстепенный ротамер), 5.18 (s, 1H
основной ротамер), 5.12 (s, 1H второстепенный ротамер), 5.16 (m, 1H второстепенный
ротамер), 4.78 (m, 1H основной ротамер), 4.70 (m, 1H), 4.50-4.30 (m, 3Н), 4.19-3.93
(m, 3Н), 2.71-2.44 (m, 1H), 2.34-2.11 (m, 5H), 1.78 (m, 1H), 1.62 (m, 1H), 0.96 (m,
2H), 0.01 (s, 9H).
Страница: 28
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(11) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu, Teoc) (0,054 г; 0,08 ммоль;
смотри стадию (10) выше) раствор ли в 0,5 мл CH2Cl2 и 3 мл TFA. Реакцию оставл ли
протекать в течение 60 минут. TFA выпаривали и остаток очищали, использу препаративную ВЭЖХ. Интересующие фракции объедин ли и сушили вымораживанием
(2х), получа 23 мг (54%) указанного в заголовке соединени .
MS (m/z) 536 (M-1) -; 538 (M+1) +.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD): ? 7.56 (d, 2H), 7.33 (m, 3Н), 7.15 (m, 2H), 6.89 (t, 1H
основной ротамер), 6.86 (t, 1H второстепенный ротамер), 5.18 (s, 1H основной ротамер,
и m, 1H второстепенный ротамер), 5.11 (s, 1H второстепенный ротамер), 4.77 (m, 1H
основной ротамер), 4.58 (m, 1H), 4.42 (m, 2H), 4.34 (m, 1H основной ротамер), 4.15
(m, 1H основной ротамер), 4.06 (m, 1H второстепенный ротамер), 3.97 (m, 1H
второстепенный ротамер), 2.66 (m, 1H второстепенный ротамер), 2.52 (m, 1H основной
ротамер), 2.33-2.25 (m, 3Н), 2.01-2.20 (m, 2H), 1.75 (m, 1H), 1.59 (m, 1H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.4, 172.3, 171.9, 171.4, 152.3.
Пример 2
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,148 г; 0,24 ммоль; смотри пример
1(9) выше) раствор ли в 9 мл ацетонитрила и добавл ли 0,101 г (1,45 ммоль)
гидрохлорида гидроксиламина. Смесь нагревали при 70°С в течение 2,5 ч, фильтруют
через Целит® и упаривают. Неочищенный продукт (0,145 г; 75%-ной чистоты)
непосредственно использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc) (0,145 г; 0,23 ммоль; смотри
стадию (1) выше) раствор ли в 0,5 мл CH2Cl2 и 9 мл TFA. Реакции позвол ли протекать в
течение 60 минут. Выпаривали TFA и остаток очищали с использованием препаративной
ВЭЖХ. Интересующие фракции собирали и сушили вымораживанием (2х), получа 72 мг
(выход за две стадии 62%) указанного в заголовке соединени .
MS (m/z) 482 (М-1) -; 484 (М+1) +.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD): ? 7.58 (d, 2Н), 7.33 (m, 3H), 7.15 (m, 2H), 6.89 (t, 1H
основной ротамер), 6.86 (t, 1H второстепенный ротамер), 5.18 (s, 1H основной ротамер,
и m, 1H второстепенный ротамер), 5.12 (s, 1H второстепенный ротамер), 4.77 (m, 1H
основной ротамер), 4.42 (m, 2H), 4.34 (m, 1H основной ротамер), 4.14 (m, 1H основной
ротамер), 4.06 (m, 1H второстепенный ротамер), 3.95 (m, 1H второстепенный ротамер),
2.66 (m, 1H второстепенный ротамер), 2.50 (m, 1H основной ротамер), 2.27 (m, 1H
основной ротамер), 2.14 (m, 1H второстепенный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.4, 172.3, 172.0, 171.4, 152.3, 152.1.
Пример 3
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,045 г; 0,074 ммоль; смотри пример
1(9) выше) раствор ли в 3 мл TFA и позвол ли протекать реакции в течение 1 ч.
Выпаривали TFA и остаток сушили вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил с
получением 0,043 г (100%) указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.8-7.75 (m, 2H), 7.55-7.5 (m, 2H), 7.35 (m,
1H, основной ротамер), 7.31 (m, 1H, второстепенный ротамер), 7.19 (m, 1Н, основной
ротамер), 7.15 (m, 1H), 7.12 (m, 1H, второстепенный ротамер), 6.89 (t, 1H, основной
ротамер), 6.87 (t, 1H, второстепенный ротамер), 5.22 (m, 1H, второстепенный ротамер),
5.20 (s, 1H, основной ротамер), 5.13 (s, 1H, второстепенный ротамер), 4.80 (m, 1H,
основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 2H), 4.37 (m, 1H, основной ротамер), 4.19 (m, 1H,
Страница: 29
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
основной ротамер), 4.07 (m, 1H, второстепенный ротамер), 3.98 (m, 1H, второстепенный
ротамер), 2.70 (m, 1H, второстепенный ротамер), 2.55 (m, 1H, основной ротамер), 2.29
(m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, второстепенный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD): (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.6, 172.5, 172.0, 171.7, 167.0.
MS (m/z) 465 (M-1) -; 467 (M+1) +.
Пример 4
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-Pab(COO-циклопентил)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)(OH)C(O)-Aze-Pab Ч TFA (74 мг; 0,13 ммоль; смотри
пример 3 выше) и циклопентилхлорформиата (44 мг; 0,30 ммоль) в метиленхлориде (5 мл)
добавл ли водный NaOH (0,5 мл; 2 М; 1 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной
температуре и реакцию контролировали с помощью ВЭЖХ. Через 2,5 часа добавл ли воду
и отдел ли жидкие фазы. Водную фазу дважды экстрагировали метиленхлоридом.
Объединенные органические фазы сушили (MgSO4) и очищали на силикагеле (сначала
метиленхлорид, затем EtOAc). После удалени растворителей в вакууме твердый остаток
раствор ли в смеси вода/ацетонитрил и сушили вымораживанием с получением указанного
в заголовке соединени в виде твердого вещества белого цвета. Выход 33 мг (44%).
MS (m/z) 579 (M+1) +.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD): ? 7.79 (d, 2H), 7.43-7.30 (т, 5Н), 7.20-7.11 (т, 2H),
6.90 (t, 1H, основной ротамер), 6.87 (t, 1H, второстепенный ротамер), 5.19 (dd, 1H,
второстепенный ротамер), 5.18 (s, 1H, основной ротамер), 5.13 (m, 1H), 5.11 (s, 1H,
второстепенный ротамер), 4.78 (dd, 1H, основной ротамер), 4.45 (m, 2Н), 4.35 (m, 1H,
основной ротамер), 4.16 (s, 1H, основной ротамер), 4.06 (s, 1H, второстепенный
ротамер), 3.97 (s, 1H, второстепенный ротамер), 2.68 (m, 1H, второстепенный ротамер),
2.52 (s, 1H, основной ротамер), 2.28 (s, 1H, основной ротамер), 2.16 (s, 1H,
второстепенный ротамер), 1.90 (m, 2H), 1.77 (m, 4H), 1.61 (m, 2H).
13
С ЯМР (карбонильные и/или амидинные протоны; 100 МГц): ? 173.6, 173.1, 172.6,
170.3, 165.6.
Пример 5
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной выше в
примере 4, начина с Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab Ч TFA (73 мг; 0,13 ммоль;
смотри пример 3 выше) и бензилхлорформиата (35 мг; 0,21 ммоль). Необходима
дополнительна очистка с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (0,1 М ацетат
аммони /MeCN (40:60)). Соответствующие фракции концентрировали в вакууме и
экстрагировали EtOAc. Выход 24 мг (32%).
MS (m/z) 602 (M+1) +.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD): ? 7.80 (d, 2H), 7.43-7.25 (m, 8Н), 7.20-7.10 (m, 2H),
6.90 (t, 1H, основной ротамер), 6.88 (t, 1H, второстепенный ротамер), 5.18 (dd, 1H,
второстепенный ротамер), 5.18 (s, 2H), 5.17 (s, 1H, ротамер), 5.11 (s, 1H, ротамер),
4.78 (dd, 1H, основной ротамер), 4.45 (m, 2H), 4.34 (m, 1H, основной ротамер), 4.15
(s, 1H, основной ротамер), 4.06 (s, 1H, второстепенный ротамер), 3.97 (s, 1H,
второстепенный ротамер), 2.66 (m, 1H, второстепенный ротамер), 2.51 (s, 1H, основной
ротамер), 2.27 (s, 1H, основной ротамер), 2.15 (s, 1H, второстепенный ротамер).
13
С ЯМР (карбонильные и/или амидинные протоны; 100 МГц): ? 173.6, 173.1, 172.6,
170.5, 164.9.
Пример 6
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab Ч TFA
(1) 2-Нитро-5-трифторметоксибензойна кислота
К раствору 3-трифторметоксибензойной кислоты (49,0 г; 0,24 моль) в серной кислоте
(500 мл) при температуре менее 0°С (бан лед-МеОН) добавл ли раствор нитрата кали (31,3 г; 0,31 моль) в серной кислоте (200 мл) в продолжение 20 минут. Получающийс Страница: 30
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч, затем нагревали до комнатной температуры
и перемешивали в течение 18 часов. Реакционную смесь выливали на лед и получающийс кислотный раствор экстрагировали EtOAc (5х). Объединенные органические экстракты
промывали Н2О (1х), сол ным раствором (2х), Н2О (1х) и сол ным раствором (1х), сушили
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного
указанного в подзаголовке соединени (65,7 г) в виде твердого вещества с примесью
НОАс. Неочищенное указанное в подзаголовке соединение раствор ли в EtOAc и толуоле и
концентрировали в вакууме с получением свободного от НОАс твердого вещества (58,4 г;
97%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 10.10 (br s, 1H), 8.02 (d, 1H, J=8 Гц), 7.69 (d, 1H, J=2
Гц), 7.54 (dd, 1Н, J=2 Гц, J=8 Гц).
(2) 2-Амино-5-трифторметоксибензойна кислота
К раствору 2-нитро-5-трифторметоксибензойной кислоты (56,8 г; 0,23 моль; смотри
стадию (1) выше) в EtOH (1000 мл) добавл ли 10%-ный Pd/C (5,7 г). Через получающийс раствор пропускали струю Н2 в течение 5 ч, фильтровали через Целит® и концентрировали
в вакууме с получением неочищенного указанного в подзаголовке соединени (49,7 г;
98%) в виде твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без
дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.66 (m, 1H), 7.17 (d, 1H, J=8 Гц), 6.77 (d, 1Н, J=8 Гц).
(3) 2-Амино-3-хлор-5-трифторметоксибензойна кислота
К раствору 2-амино-5-трифторметоксибензойной кислоты (49,0 г; 0,22 моль; смотри
стадию (2) выше) в НОАс (1200 мл) медленно добавл ли сульфурилхлорид (41,8 г; 0,31
моль). Наблюдали выделение газа. Получающуюс гетерогенную смесь перемешивали при
комнатной температуре в течение 1 ч. Добавл ли дополнительное количество НОАс (300
мл), чтобы способствовать перемешиванию, с последующим добавлением
сульфурилхлорида порци ми по 5 мл до тех пор, пока исходный материал не был
израсходован (по данным ТСХ-анализа). Реакционную смесь концентрировали в вакууме с
получением твердых веществ, которые дл удалени НОАс промывали на роторном
испарителе EtOAc (2х) с последующим промыванием Et2O (1x). Получающиес твердые
вещества далее сушили с получением HCl-соли неочищенного указанного в подзаголовке
соединени (60,5 г; 94%), которую использовали на следующей стадии без дальнейшей
очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.72 (s, 1Н), 7.44 (s, 1H), 7.22 (s, взаимозамен емые).
(4) 3-Хлор-5-трифторметоксибензойна кислота
К раствору 2-амино-3-хлор-5-трифторметоксибензойной кислоты (60,5 г;
предположительно 0,22 моль; смотри стадию (3) выше) в 1,4-диоксане (1000 мл)
добавл ли 6 н. HCl (750 мл). Некоторое количество органических веществ в виде масла
выпало из раствора. Диоксановый раствор охлаждали до температуры менее 0°С (бан лед-МеОН). Через капельную воронку добавл ли раствор нитрита натри (18,2 г; 0,26
моль) в Н2O (250 мл) в продолжение 15 минут. Получающийс раствор перемешивали в
течение 45 мин. Через капельную воронку медленно добавл ли фосфорноватистую
кислоту (221,5 мл 50 мас.%-ной в Н2О; 291,2 г; 2,20 моль). Раствор перемешивали при 0°С
в течение 1,5 часа, затем нагревали до комнатной температуры (наблюдали выделение
газа) и перемешивали в течение 18 часов. Неочищенный раствор переносили в
делительную воронку и экстрагировали Et2O (4x). Объединенные органические экстракты
экстрагировали водным NaHCO3 (3х). Основный водный слой осторожно подкисл ли 6 н.
HCl и экстрагировали CH2Cl2 (3х). СН2Cl2-Экстракты сушили (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в подзаголовке
соединени (26,5 г; 46% исход из 3-трифторметоксибензойной кислоты) в виде твердого
вещества, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.98 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.58 (s, 1H).
(5) 3-Хлор-5-трифторметоксибензиловый спирт
Страница: 31
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксибензойной кислоты (22,5 г; 93,5 ммоль; смотри
стадию (4) выше) в безводном THF (1200 мл) в атмосфере N2 при комнатной температуре
добавл ли раствор комплекса BH3?THF (140 мл 1 М в THF; 140,3 ммоль). Раствор
кип тили с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры
и перемешивали в течение 18 часов, осторожно гасили Н2O и концентрировали в вакууме
дл удалени как можно большего количества THF. Остаток разбавл ли EtOAc и
органическую фазу промывали сол ным раствором (3х), сушили (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в подзаголовке
соединени (21,2 г; 100%) в виде масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 7.33 (s, 1H), 7.17 (s, 1Н), 7.14 (s, 1H), 4.72 (s, 2H),
2.05 (br s, 1H).
(6) 3-Хлор-5-трифторметоксибензальдегид
Раствор DMSO (16,1 г; 205,9 ммоль) в безводном CH2Cl2 (300 мл) охлаждали до -78°С.
Медленно с помощью шприца добавл ли оксалилхлорид (13,1 г; 103,0 ммоль) (наблюдали
выделение газа). Получающийс раствор перемешивали при -78°С в течение 15 минут.
Через капельную воронку добавл ли раствор 3-хлор-5-трифторметоксибензилового спирта
(21,2 г; 93,6 ммоль; смотри стадию (5) выше) в CH2Cl2 (200 мл) в продолжение периода
времени 15 минут. Непрозрачный раствор перемешивали при -78°С в течение 40 минут и
через капельную воронку добавл ли DIPEA (60,5 г; 468,0 ммоль) в продолжение 10 минут.
Получающийс гомогенный раствор перемешивали при -78°С в течение 1,5 часа, затем
нагревали до комнатной температуры и перемешивали 18 часов. Неочищенный раствор
концентрировали в вакууме, остаток разбавл ли EtOAc и промывали Н2O (1х), 2 н. HCl
(1х), сол ным раствором (1х), водным NaHCO3 (1x) и сол ным раствором (1х).
Органическую фазу сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с
получением неочищенного указанного в подзаголовке соединени (19,9 г; 95%), которое
использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 10.00 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.51 (s, 1H).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксибензальдегида (19,9 г; 88,6 ммоль; смотри стадию
(6) выше) в СН2Cl2 (600 мл) при 0°С добавл ли Znl2 (1,4 г; 4,4 ммоль) и
триметилсилилцианид (9,7 г; 97,5 ммоль). После перемешивани при 0°С в течение 1,5
часа и при комнатной температуре в течение 2 часов ТСХ-анализ показал наличие только
исходного материала. Порци ми добавл ли Znl2 до тех пор, пока реакци не завершилась
(в сумме добавили более 30,0 г Znl2). После перемешивани при комнатной температуре в
течение 18 часов реакцию гасили водой и отдел ли органическую фазу. Органическую
фазу сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением
неочищенного указанного в подзаголовке соединени (27,7 г; 96%) в виде жидкости,
которую использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 7.43 (s, 1H), 7.28 (s, 1Н), 7.25 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 0.38 (s, 9H).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Суспензию Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OTMS)CN (27,7 г; 85,6 ммоль;
смотри стадию (7) выше) в концентрированной HCl (300 мл) кип тили с обратным
холодильником в течение 3 часов. Получающуюс коричневую гетерогенную смесь
охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали Et2O (2x). Первоначальные
органические экстракты экстрагировали 2 н. NaOH (2х), затем основный слой подкисл ли
2 н. HCl и экстрагировали Et2O. Et2O-экстракты сушили (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в подзаголовке
соединени (4,9 г; 21%). ТСХ-анализ первоначальных органических экстрактов все еще
показывал наличие в них указанного в подзаголовке соединени , поэтому процедуру
основной экстракции/подкислени повтор ли с использованием 6 н. NaOH с получением
дополнительного количества неочищенного указанного в подзаголовке соединени (2,8 г;
12%). ТСХ-анализ первоначальных органических экстрактов все еще показывал наличие в
Страница: 32
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
них указанного в подзаголовке соединени , поэтому органические экстракты сушили
(Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением натриевой соли указанного в
подзаголовке соединени (18,3 г) в виде масла. Данную соль затем перераствор ли в Et2O
и органическую фазу подкисл ли 2 н. HCl и промывали сол ным раствором.
Получающуюс органическую фазу сушили (Na2SO4), обрабатывали активированным
углем, фильтровали через Целит® и концентрировали в вакууме с получением
неочищенного указанного в подзаголовке соединени (14,3 г; 62%) в виде твердого
вещества, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.53 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 5.23 (s, 1H).
(9) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(О)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)СН(ОАс)С(О)OH (б)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7,7 г; 28,5 ммоль; смотри стадию (8)
выше) и Липазы PS "Amano" (3,8 г) в МТВЕ (100 мл) и винилацетате (50 мл) перемешивали
при температуре 60°С в течение 26 ч. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали через
Целит® и осадок на фильтре промывали EtOAc. Объединенные органические фазы
концентрировали в вакууме. Посредством флэш-хроматографии на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (6:3:1) получили смесь
аммониевых солей указанного в подзаголовке соединени (а) и указанного в подзаголовке
соединени (б) (6,7 г) и чистый образец аммониевой соли указанного в подзаголовке
соединени (а) (1,2 г) с энантиомерным избытком (е.е.) менее 95%. Соответствующие
фракции раствор ли в Et2O и промывали 2 н. HCl (1х) и сол ным раствором (1х), сушили
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали с получением соответствующих карбоновых
кислот (6,7 г и 1,1 г соответственно). Затем эти фракции по отдельности повторно
переводили в услови дл проведени разделени и повторно очищали, как необходимо,
посредством хроматографии на силикагеле с элюированием смесью
CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (6:3:1, или 75:20:5, или 145:45:10), как
необходимо. Очищенное указанное в подзаголовке соединение (а) подкисл ли водной HCl
или водной лимонной кислотой перед дальнейшим использованием. Аммониевую соль
указанного в подзаголовке соединени (б) использовали без определени характеристик.
Дл указанного в подзаголовке соединени (а)
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.53 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 5.23 (s, 1H).
13
35
40
45
50
С ЯМР (75 МГц; CD3OD): ? 174.9, 150.9, 145.4, 136.3, 126.8, 122.0, 120.6, 118.9, 72.9,
MS (m/z) 269 (M-1) -.
(10) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,73 г 2,70 ммоль; смотри стадию (9)
выше) в DMF (40 мл) в атмосфере азота охлаждали до 0°С. К данному раствору добавл ли
H-Aze-Pab(Teoc) (1,46 г; 3,24 ммоль), коллидин (0,82 г; 6,75 ммоль) и РуВОР (1,83 г;
3,51 ммоль). Раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч, нагревали до комнатной
температуры и перемешивали 18 ч, гасили водой и концентрировали в вакууме. Остаток
разбавл ли EtOAc и промывали Н2O (1х), водным NaHCO3 (1х), водной лимонной
кислотой (1х) и сол ным раствором (1х), сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали
в вакууме с получением неочищенного указанного в подзаголовке соединени .
Посредством флэш-хроматографии на силикагеле (2х) с элюированием смесью
EtOAc/МеОН (30:1), затем CH2Cl2/MeOH (93:7) получили указанное в подзаголовке
соединение (0,73 г; 43%) в виде дробимой пены.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров): ? 7.78-7.82 (d, 2H, J=8 Гц),
7.25-7.54 (m, 5Н), 5.25 и 5.16 (s, 1H), 5.22 и 4.79 (m, 1H), 3.92-4.58 (m, 6H), 2.202.76 (m, 2H), 1.04-1.13 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
MS (m/z) 629 (M+1) +.
(11) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Трифторуксусную кислоту (1,0 мл) добавл ли к перемешиваемому охлаждаемому на
бане лед/вода раствору Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(Teoc) (101 мг; 160
мкмоль; смотри стадию (10) выше) в метиленхлориде (10 мл). Охлаждающую баню удал ли
Страница: 33
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
через 1 час. Через 1,5 часа выдерживани при комнатной температуре добавл ли
ацетонитрил (30 мл) и растворители осторожно удал ли при пониженном давлении.
Остаток раствор ли в воде и сушили вымораживанием с получением 90 мг (92%)
указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
MS (m/z) 483 (M-1) -; 485 (M+1) +.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) (сложный спектр вследствие наличи диастереомеров/ротамеров): ? 7.70-7.80 (m, 2H), 7.45-7.58 (m, 3Н), 7.24-7.38 (m,
2H), 5.26 (s, 1H), 5.17 (m, 1H, второстепенный ротамер), 4.82 (m, 1H, основной
ротамер), 4.35-4.6 (m, 3Н), 4.22 (m, 1H, основной ротамер), 3.92-4.12 (m, 2H,
второстепенный ротамер), 2.70 (m, 1H, второстепенный ротамер), 2.55 (m, 1H, основной
ротамер), 2.30 (m, 1H, основной ротамер), 2.16 (m, 1H, второстепенный ротамер).
13
С ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры): ?
173.7, 173.4, 173.0, 172.8, 168.1.
Пример 7
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОМе)
HATU (71 мг; 0,19 ммоль) добавл ли к перемешиваемому охлаждаемому на бане
лед/вода раствору Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)ОН (39 мг; 0,14 ммоль; смотри пример
6(9) выше) в DMF (3 мл). Через 30 минут добавл ли раствор H-Aze-Pab(OMe)Ч2HCl (69 мг;
0,21 ммоль; смотри международную патентную за вку WO 00/42059) и 2,4,6-коллидина
(0,080 мл; 0,58 ммоль) в DMF (1,5 мл). Реакционную смесь оставл ли сто ть в течение
ночи, позвол температуре медленно подн тьс до температуры окружающей среды.
Растворители удал ли в вакууме и неочищенный продукт очищали, использу обращеннофазовую ВЭЖХ (ацетонитрил/0,1 М водн. ацетат аммони ), что позвол ло получить, после
сушки вымораживаем соответствующих фракций, указанное в заголовке соединение (61 мг;
97%) в виде бесцветного твердого вещества.
MS (m/z) 513 (M-1) -; 515 (M+1) +.
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.97 (bt, 1H), 7.53 (d, 2H), 7.27 (t, 1H), 7.22 (d,
2Н), 7.19 (t, 1H), 7.11 (t, 2H), 6.77 (s, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.9 (bs, 3H), 4.81 (m,
2H), 4.40 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.58 (m, 1H), 2.37 (m, 1H).
13
С ЯМР (125 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 171.8, 169.9,
156.8.
Пример 8
Параллельный синтез алкоксиамидинов
Этот синтез проводили в 96-луночном блоке Роббинса (Robbins block). В лунки,
содержащие соответствующее количество О-замещенного гидроксиламина
(конкретизировано ниже; все перечисленное имеетс в продаже или получено с
использованием хорошо известных из литературы методик), добавл ли раствор Ph(3-Cl)(5OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(Теос) (10 мг; 17 мкмоль; смотри пример 6(10) выше) в
ацетонитриле (1,0 мл). Блок герметично закрывали и реакционную смесь вращали в
течение ночи в сушильном шкафу при 60°С. После охлаждени и фильтровани твердые
вещества промывали ацетонитрилом (3Ч0,3 мл). Объединенные жидкие фракции
концентрировали в вакуумной центрифуге. Остаток распредел ли между водой (0,4 мл) и
этилацетатом (0,4 мл). По окончании жидкостно-жидкостной экстракции все фильтровали
через колонку Hydromatrix?. После трехкратного промывани этилацетатом объединенные
фильтраты концентрировали в вакуумной центрифуге. Сн тие защиты осуществл ли путем
добавлени метиленхлорида (0,1 мл) и трифторуксусной кислоты (0,3 мл). После
перемешивани при комнатной температуре в течение 3 часов удал ли растворители в
вакууме. Остаток распредел ли между водным насыщенным гидрокарбонатом натри (0,5
мл) и этилацетатом (0,5 мл). После экстракции, фильтровани через Hydromatrix? и
концентрировани (смотри ниже) остаток раствор ли в смеси изопропанол/вода (7:3) (1
мл). Отбирали приблизительно 2% этого раствора и разбавл ли смесью изопропанол/вода
(7:3) (1 мл) дл LC-MS-анализа. После удалени растворителей в вакууме твердый
Страница: 34
RU 2 300 521 C2
5
10
остаток переносили в 96-луночный планшет, использу ацетонитрил и этилацетат дл растворени соединени . Растворители выпаривали в вакуумной центрифуге, что
позвол ло получить следующие указанные в заголовке соединени :
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОСН2-3-(5-Ме-изоксазол))
(из 3-[(аминоокси)метил]-5-метилизоксазола Ч HCl (18 мг; 0,11 ммоль)), выход 3,64
мг (35%), MS (m/z) 596 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОСН2-3-пиридин)
(из 3-[(аминоокси)метил]пиридина Ч 2HCl (19 мг; 96 мкмоль), выход 5,14 мг (50%), MS
(m/z) 592 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Bu)
(из O-изобутилгидроксиламина Ч HCl (17 мг; 140 мкмоль), выход 4,4 мг (45%), MS
15
(m/z) 557 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
(из O-этилгидроксиламина Ч HCl (14 мг; 140 мкмоль), выход 4,04 мг (42%), MS (m/z)
529 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn)
(из O-бензилгидроксиламина Ч HCl (17 мг; 110 мкмоль), выход 3,22 мг (29%), MS
20
(m/z) 591 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-циклогексил)
(из O-циклогексилгидроксиламина Ч HCl (15 мг; 99 мкмоль), выход 2,9 мг (26%), MS
25
30
35
40
45
50
(m/z) 583 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-цикло-Bu)
(из O-циклобутилгидроксиламина Ч HCl (17 мг; 140 мкмоль), выход 3,3 мг (30%), MS
(m/z) 555 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3))
(из O-[2-[3-(трифторметил)фенокси]этил]гидроксиламина Ч HCl (24 мг; 93 мкмоль),
выход 6,52 мг (46%), MS (m/z) 689 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))
(из O-(4-хлорбензил)гидроксиламина Ч HCl (16 мг; 82 мкмоль), выход
3,47 мг (29%), MS (m/z) 625 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))
(из O-(3-метоксибензил)гидроксиламина Ч HCl (18 мг; 94 мкмоль), выход
4,33 мг (36%), MS (m/z) 621 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br))
(из O-(2-бромбензил)гидроксиламина Ч HCl (23 мг; 96 мкмоль), выход
3,87 мг (30%), MS (m/z) 671 (М+1) +;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(OBn(4-Ме))
(из O-(4-метилбензил)гидроксиламина Ч HCl (14 мг; 81 мкмоль), выход
2,91 мг (25%), MS (m/z) 605 (М+1) + и
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(O-4-гептил)
(из O-(4-гептил)гидроксиламина Ч HCl (15 мг; 89 мкмоль), выход 17 мг (100%), MS
(m/z) 599 (М+1) +.
Пример 9
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-PabЧHOAc
(1) 3-Хлор-5-метоксибензойна кислота
Магниевую стружку (Fluka purum дл реакций Гринь ра) предварительно обрабатывали
следующим образом. Стружку помещали в воронку из пористого стекла и выливали на нее
0,1 М сол ную кислоту. Стружку перемешивали с помощью стекл нной палочки в течение
нескольких секунд и затем кислоту вымывали 3 порци ми воды. Окончательно стружку
промывали 2 порци ми ацетона и помещали в бутылку. Тетрагидрофуран (100 мл; 99,95%)
сушили путем добавлени RedAI (1 г, 70 мас.% в толуоле). Предварительно обработанную
Страница: 35
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
магниевую стружку (5 г, 200 ммоль) помещали в круглодонную колбу и 3 раза продували
азотом. Дихлоранизол (26 г, 146 ммоль) раствор ли в THF (100 мл, высушенного с
помощью RedAI) и добавл ли дибромэтан (1,8 г; 10 ммоль). Реакционную смесь продували
азотом и затем кип тили с обратным холодильником в течение 2 часов. Нагревание
прерывали и порци ми в продолжение 2 минут добавл ли сухой лед (10 г). Когда весь
сухой лед раствор лс , реакционную смесь выливали на лед, содержащий сол ную
кислоту (400 мл, 2 М). Экстрактивна обработка (диэтиловый эфир, 300 мл) позволила
получить 11,2 г (60,2 ммоль; выход 41%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (500 МГц; ацетон-d6): ? 7.57 (m, 1Н), 7.49 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 3.91 (s, 3H).
(2) 3-Хлор-5-гидроксибензойна кислота
Оксид алюмини (1,65 г; 60 ммоль) и иод (21 г; 82 ммоль) кип тили с обратным
холодильником в толуоле (200 мл) в течение 2 часов. Затем добавл ли 3-хлор-5метоксибензойную кислоту (11,2 г; 60,2 ммоль; смотри стадию (1) выше), растворенную в
толуоле (50 мл), вместе с тетрабутиламмонийиодидом (1,5 г; 4 ммоль), и данную смесь
кип тили с обратным холодильником в течение еще 2 часов. После охлаждени до
температуры окружающей среды экстрактивна обработка позволила получить 8,7 г (50
ммоль; выход 83%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (300 МГц; ацетон-d6): ? 9.27 (s, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.11 (m, 1H).
(3) 3-Хлор-5-дифторметоксибензойна кислота
3-Хлор-5-гидроксибензойную кислоту (6,4 г; 37,2 ммоль; смотри стадию (2) выше),
растворенную в хлороформе (200 мл), переносили в трехгорлую круглодонную колбу
вместимостью 500 мл, оборудованную холодильником с сухоледным охлаждением и
трубкой дл ввода газа. Добавл ли гидроксид натри (100 мл, 5 М) и с энергичным
перемешиванием. Порци ми через трубку дл ввода газа добавл ли хлордифторметан
(Фреон 22; 25 г, 290 ммоль) при температуре окружающей среды. Через 2 часа реакци завершилась. Экстрактивна обработка позволила получить 6,2 г (28 ммоль; выход 75%)
указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (500 МГц; ацетон-d6): ? 7.87 (m, 1Н), 7.74 (m, 1H), 7.54 (m, 1H), 7.19 (t,
1H, JH-F=73 Гц).
(4) 3-Хлор-5-дифторметокси-N-метокси-N-метилбензамид
3-Хлор-5-дифторметоксибензойную кислоту (1,8 г; 8 ммоль; смотри стадию (3) выше) и
оксалилхлорид (1,5 г; 11,8 ммоль) раствор ли в метиленхлориде (50 мл). Добавл ли DMF
(2 капли) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в
течение 30 минут. Затем добавл ли N,O-диметилгидроксиламин (1 г, 10,2 ммоль) и
триэтиламин (3 г, 30 ммоль) и после перемешивани в течение еще 10 минут при
температуре окружающей среды реакционную смесь концентрировали при пониженном
давлении. Остаток переводили в эфир (100 мл) и воду (50 мл). После разделени органическую фазу промывали сол ным раствором, высушивали над сульфатом натри ,
фильтровали и концентрировали. Этот остаток хроматографировали на диоксиде кремни (гексан/этилацетат (2:1)) с получением 2 г (7,5 ммоль; 93%) указанного в подзаголовке
соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.54 (m, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.53 (t, 1H, JH-F=73
Гц).
(5) 3-Хлор-5-дифторметоксиацетофенон
3-Хлор-5-дифторметокси-N-метокси-N-метилбензамид (2 г; 7,5 ммоль; смотри стадию (4)
выше) раствор ли в эфире (100 мл) и охлаждали в токе азота до -70°С. К перемешиваемой
реакционной смеси по капл м с помощью шприца добавл ли метиллитий (7 мл, 11 ммоль;
1,6 М в эфире) в течение 1 минуты. Баню из сухого льда удал ли и смесь оставл ли дл достижени температуры окружающей среды перед тем, как погасить реакцию раствором
хлорида аммони (50 мл, 5%-ный NH4Cl в воде). Органическую фазу промывали сол ным
раствором, высушивали над сульфатом натри , фильтровали и концентрировали при
пониженном давлении. Остаток хроматографировали на диоксиде кремни Страница: 36
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(гексан/этилацетат (2:1)) с получением 1,5 г (6,8 ммоль; выход 90%) указанного в
подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (600 МГц; CDCl3): ? 7.77 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 6.56 (t, 1H, JH-F=73
Гц), 2.60 (s, 3Н).
(6) 3-Хлор-5-дифторметоксифенилуксусной кислоты метиловый эфир
3-Хлор-5-дифторметоксиацетофенон (1,5 г; 6,8 ммоль; смотри стадию (5) выше)
раствор ли в метиленхлориде (200 мл). Добавл ли нитрат талли (III) Ч 3МеОН на
монтмориллоните К-10 (6 г, 10 ммоль (приблизительно 0,6 ммоль/г); смотри J. Am. Chem.
Soc., 98, 6750 (1976)) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в
течение 20 часов. Смесь фильтровали и фильтрат промывали бикарбонатом натри (100
мл; 0,5 М), высушивали над сульфатом натри , фильтровали и концентрировали при
пониженном давлении. Остаток хроматографировали на диоксиде кремни (гексан/этилацетат (2:1)) с получением 1 г (4 ммоль; выход 56%) указанного в
подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (500 МГц; CDCl3): ? 7.14 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 6.96 (m, 1H), 6.50 (t, 1Н, JH-F=73
Гц), 3.72 (s, 3Н), 3.60 (s, 1H).
(7) ?-Формил(3-хлор-5-дифторметоксифенил)уксусной кислоты метиловый эфир
3-Хлор-5-дифторметоксифенилуксусной кислоты метиловый эфир (1 г, 4 ммоль; смотри
стадию (6) выше) и метилформиат (1 г, 16 ммоль) раствор ли в эфире (100 мл) и
охлаждали в лед ной бане (приблизительно 2°С). Затем добавл ли мелко нарезанный
натрий (180 мг; 7,8 ммоль) и метанол (1 мл) и смесь оставл ли перемешиватьс в
лед ной бане в течение ночи. Осторожно добавл ли воду (100 мл) и раздел ли фазы.
Содержащую воду фазу подкисл ли сол ной кислотой (2 М) до рН 1 и экстрагировали
эфиром (2Ч100 мл). Экстракт высушивали над сульфатом натри , фильтровали и
концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на диоксиде
кремни (гексан/этилацетат (1:1)) с получением 400 мг (1,4 ммоль; выход 36%)
указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц): ? 12.10 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.11 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.94
(m, 1H), 6.51 (t, 1H, JH-F=73 Гц), 3.83 (s, 3Н).
(8) 3-Хлор-5-дифторметокситропна кислота
?-Формил(3-хлор-5-дифторметоксифенил)уксусной кислоты метиловый эфир (400 мг, 1,4
ммоль; смотри стадию (7) выше) раствор ли в смеси THF/метанол (50 мл, 9:1). Добавл ли
борогидрид натри и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение
30 минут. Добавл ли воду (100 мл) и смесь концентрировали до образовани водной
суспензии, которую переводили в этилацетат и воду. Фазы раздел ли и органическую фазу
промывали хлоридом натри (15%-ным в воде), высушивали над сульфатом натри ,
фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток раствор ли в
метаноле (30 мл) и подвергали гидролизу с помощью гидроксида натри (1 мл, 10 М) при
температуре окружающей среды в течение 10 минут. Экстрактивна обработка дала 180 мг
(0,68 ммоль; выход 48%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (500 МГц; CDCl3): ? 7.18 (m, 1Н), 7.10 (m, 1H), 7.00 (m, 1H), 6.50 (t, 1H, JH-F=73
Гц), 4.11 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.84 (m, 1H).
(9) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-PabЧHOAc
3-Хлор-5-дифторметокситропную кислоту (180 мг; 0,7 ммоль; смотри стадию (8) выше),
H-Aze-Pab(Teoc)ЧHCl (450 мг, 1 ммоль) и РуВОР (530 мг, 1 ммоль) раствор ли в DMF (10
мл), после чего добавл ли DIPEA (550 мг; 3,9 ммоль). Смесь перемешивали при
температуре окружающей среды в течение 1 ч перед тем, как разбавить сол ным
раствором (20 мл, 15%-ный NaCl) и экстрагировать этилацетатом (40 мл). Экстракт
высушивали над сульфатом натри , фильтровали и упаривали досуха. Остаток раствор ли
в метиленхлориде (5 мл) и добавл ли трифторуксусную кислоту (5 мл). После 1 ч
выдерживани при температуре окружающей среды смесь диастереомеров упаривали
досуха и остаток хроматографировали на обращенно-фазовой колонке (ацетонитрил/вода
Страница: 37
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(30:70), буфер: 0,1 М ацетат аммони ). Сушка вымораживанием дала 36 мг (0,067 ммоль;
выход 10,4%) указанного в заголовке соединени .
MS (ES) 481 (M+1) +.
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.77 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.13 (m, 2H),
6.87 (t, 1H, JH-F=73 Гц), 4.76 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.37 (m, 1H), 4.03 (m, 2H), 3.82
(m, 1H), 3.72 (m, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 1.92 (3, 1,5Н).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.3, 171.9,
167.2.
Пример 10
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 3-Хлор-5-трифторметоксибензилмезилат
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксибензилового спирта (6,1 г; 26,9 ммоль; смотри
пример 6(5) выше) в CH2Cl2 (250 мл) при 0°С в атмосфере азота добавл ли DIPEA (4,2 г;
32,3 ммоль) и метансульфонилхлорид (3,4 г; 29,6 ммоль). Раствор перемешивали при 0°С
в течение 1,5 часа и гасили с помощью Н2О. Органические слои отдел ли и
промывали H2O (1x), 1 н. HCl (1х), Н2О (1х) и водным NaHCO3 (1x) и затем высушивали
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo с получением указанного в
подзаголовке соединение (8,2 г; 99%) в виде масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 7.37 (s, 1H), 7.28 (s, 1Н), 7.18 (s, 1H), 5.23 (s, 2Н), 3.07 (s, 3H).
(2) 3-Хлор-5-трифторметоксибензилцианид
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксибензилмезилата (8,2 г; 26,8 ммоль; смотри стадию
(1) выше) в DMSO (50 мл) добавл ли цианид натри (2,6 г; 53,6 ммоль). Получающийс гетерогенный раствор нагревали до 50°С и обрабатывали ультразвуком в течение 1 часа.
Реакционную смесь охлаждали и распредел ли межд?? Et2O и Н2О. Органическую фазу
промывали Н2O (2х) и сол ным раствором (2х). Объединенные водные фазы
экстрагировали Et2O (1x). Объединенные органические фазы высушивали (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали при слабом нагревании и частичном вакууме, что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (6,3 г; 100%) в виде
красноватого летучего масла, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей
очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.32 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 3,78 (s, 2H).
(3) 3-Хлор-5-трифторметоксифенилуксусна кислота
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксибензилцианида (6,3 г; 26,7 ммоль; смотри стадию
(2) выше) в 2-пропаноле (100 мл) добавл ли воду (200 мл) и гидроксид натри (7,5 г;
133,5 ммоль). Раствор кип тили с обратным холодильником в течение 18 ч, охлаждали до
комнатной температуры и удал ли 2-пропанол in vacuo. Водную фазу промывали СН2Cl2
(2х) и промывки отбрасывали. Основную водную фазу подкисл ли 2 н. HCl и
экстрагировали СН2Cl2 (3х). СН2Cl2-Экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позвол ло получить указанное в подзаголовке соединение
(5,2 г; 76%) в виде масла, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей
очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 7.25 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.68 (s, 2H).
(4) Этил-3-хлор-5-трифторметоксифенилацетат
К раствору 3-хлор-5-трифторметоксифенилуксусной кислоты (5,2 г; 20,4 ммоль; смотри
стадию (3) выше) в EtOH (600 мл) добавл ли серную кислоту (несколько капель). Раствор
кип тили с обратным холодильником в течение 18 ч, охлаждали до комнатной
температуры, нейтрализовали твердым NaHCO3 и удал ли EtOH in vacuo. Остаток
разбавл ли EtOAc, затем промывали H2O (1x), водным NaHCO3 (1x) и сол ным раствором
(1x). Органические фазы высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo,
что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (5,5 г; 96%) в виде масла,
которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.24 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.13-4.22 (q,
Страница: 38
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
J=8 Гц, 2H), 3.63 (s, 2H), 1.24-1.32 (t, J=8 Гц, 3Н).
(5) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CHO)C(O)OEt
К раствору этил-3-хлор-5-трифторметоксифенилацетата (4,5 г; 15,9 ммоль; смотри
стадию (4) выше) в безводном THF (400 мл) в атмосфере азота при температуре
менее 0°С (в бане лед-МеОН) добавл ли этилат натри (4,5 г; 63,6 ммоль). Охлажденный
раствор перемешивали в течение 40 минут и добавл ли этилформиат (8,1 г; 111,3 ммоль).
Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, нагревали до комнатной температуры
и перемешивали в течение 2 часов. Затем THF удал ли in vacuo. Остаток разбавл ли Et2O
и экстрагировали Н2O (1x) и 0,5 М NaOH (3х). Водные экстракты подкисл ли 2 н. HCl и
экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты высушивали
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить неочищенное
указанное в подзаголовке соединение (3,9 г). Флэш-хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1) позволила получить указанное в подзаголовке
соединение (3,0 г; 61%) в виде масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3; смесь изомеров): ? 12.30 и 12.25 (s, 1H), 7.39 и 7.34 (s,
1H), 7.21 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 4.27-4.37 (q, J=8 Гц, 2Н), 1.28-1.38 (t, J=8 Гц, 3H).
(6) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OEt
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CHO)C(O)OEt (3,0 г; 9,66 ммоль; смотри стадию
(5) выше) в МеОН (200 мл) при -10°С (в бане лед-МеОН) порци ми в течение 5 мин
добавл ли борогидрид натри (0,7 г; 19,32 ммоль). Раствор перемешивали при -10°С в
течение 45 минут и добавл ли дополнительное количество борогидрида натри (0,4 г).
Еще через 15 минут реакцию гасили водным хлоридом аммони , смесь делали
слабокислой с помощью 2 н. HCl и МеОН удал ли in vacuo. Остаток разбавл ли EtOAc и
промывали H2O (1x), водным NaHCO3 (1x) и сол ным раствором (1х). Органические фазы
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позвол ло получить
неочищенное указанное в подзаголовке соединение. Флэш-хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью Нех/EtOAc (5:1) позволила получить указанное в подзаголовке
соединение (2,0 г; 66%) в виде масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3): ? 7.26 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.16-4.28 (m,
2Н), 4.04-4.15 (m, 1H), 3.76-3.94 (m, 2H), 2.33 (t, J=6 Гц, 1H), 1.18-1.30 (t, J=8 Гц, 3Н).
(7) Ph(3-Cl)-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OH
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OEt (2,0 г; 6,24 ммоль; смотри стадию
(6) выше) в THF (50 мл) и Н2О (25 мл) добавл ли гидроксид лити моногидрат (0,5 г;
12,48 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и THF
удал ли in vacuo. Остаток разбавл ли H2O, затем промывали CHCl3 (2х) и промывки
отбрасывали. Основный водный слой подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали CHCl3 (4х).
CHCl3-Экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что
позволило получить неочищенное указанное в подзаголовке соединение (1,5 г) в виде
масла. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием смесью
CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (градиент от 7,0:2,5:0,5 до 6:3:1) позволила
получить аммониевую соль указанного в подзаголовке соединени (1,1 г). Аммониевую
соль распредел ли между 1 н. HCl и CHCl3. Органические фазы высушивали (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в
подзаголовке соединение (также известное как 3-хлор-5-трифторметокситропна кислота)
в виде масла (1,1 г; 62%).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD): ? 7.41 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 4.03 (m, 1Н),
3.75-3.87 (m, 2H).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (а) и Ph(3-Cl)(5-OCF3)(R)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (б)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OH (0,65 г; 2,28 ммоль; смотри стадию
(7) выше) в DMF (40 мл) при температуре ниже 0°С (в бане лед-МеОН) добавл ли H-AzePab(Teoc) (0,90 г; 2,39 ммоль), коллидин (0,71 г; 5,70 ммоль) и РуВОР (1,31 г; 2,51
Страница: 39
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
ммоль). Получающийс раствор перемешивали при температуре ниже 0°С в течение 1 ч,
нагревали до комнатной температуры и перемешивали 1 ч. Затем DMF удал ли in vacuo.
Остаток разбавл ли EtOAc и промывали разбавленной водной HCl (1х), сол ным
раствором (1х), водным NaHCO3 (1x) и сол ным раствором (1х). Органические слои
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить
неочищенное указанное в подзаголовке соединение (2,1 г) в виде смеси диастереомеров.
Флэш-хроматографи (3х) на силикагеле с элюированием сначала смесью EtOAc/МеОН
(95:5), затем CH2Cl2/MeOH (97:3) и окончательно СН2Cl2/МеОН (95:5) позволила получить
указанные в подзаголовке соединени - диастереомер (а) (0,51 г; 35%) и диастереомер
(б) (0,45 г; 31%) в виде дробимой пены.
Дл указанного в подзаголовке соединени диастереомера (а)
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.79-7.85 (d, J=8 Гц, 2Н),
7,22-7.49 (m, 5Н), 5.17-4.77 (m, 1H), 4.53-4.18 (m, 4Н), 3.58-4.11 (m, 5H), 2.47-2.73
(m, 1H), 2.11-2.34 (m, 1H), 1.08-1.12 (m, 2H), 0.07 (s, 9H).
MS (m/z) 643 (M+1) +.
(9) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (78 мг; 0,121 ммоль; смотри стадию
(8) выше - диастереомер (а)) раствор ли в 5 мл трифторуксусной кислоты. Через 10
минут реакци завершилась, и растворитель выпаривали. Остаток высушивали
вымораживанием из воды и ацетонитрила с получением желаемого продукта. Выход 70 мг
(94%).
MS (m/z) 483 (M-1) -; 485 (М+1) +
1
H-ЯМР (400 МГц, D2O) ротамеры (1:1): ? 8.83 (bt, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.72 (d, 1H),
7.54 (d, 1H), 7.43 (d, 2H), 7.35 (m, 1Н, ротамер), 7.28 (m, 1H, ротамер), 7.20 (m,
1H, ротамер), 7.05 (m, 1H, ротамер), 5.22 (m, 1H, ротамер), 4.83 (m, 1H, ротамер),
4.57 (m, 2H, ротамер), 4.38 (m, 2H, ротамер), 4.3-3.7 (m, 5H), 2.77 (m, 1H, ротамер),
2.55 (m, 1H, ротамер), 2.27 (m, 1H).
13
С-ЯМР (100 МГц; D2O) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.9, 172.2, 172.0, 171.8, 166.9.
Пример 11
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(3)СН(СН2OH)С(O)-Aze-Pab(ОМе)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)СН(СН2OH)С(O)-Aze-Pab(Оме, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)СН(СН2OH)С(O)-Aze-Pab(Теос) (100 мг; 0,155 ммоль; смотри пример
10(8) выше) раствор ли в 12 мл тетрагидрофурана. Добавл ли О-метилгидроксиламина
гидрохлорид (44 мг; 0,53 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 50°С в течение ночи.
Реакционную смесь упаривали и остаток очищали препаративной ВЭЖХ (СН3CN/0,1 М
NH4OAC (70:30)). Подход щие фракции упаривали, остаток раствор ли в небольшом
количестве ацетонитрила и воды и высушивали вымораживанием. Сушку вымораживанием
повтор ли снова. Выход 80 мг (76%) чистого материала.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.5-7.4 (m, 3Н), 7.35-7.2 (m, 4H), 5.15 (m,
1H, минорный ротамер), 4.74 (m, 1H, основной ротамер), 4.5-4.25 (m, 3Н), 4.2-3.95 (m,
4H), 3.91 (b, 3Н), 3.9-3.6 (m, 2H), 2.63 (m, 1H, минорный ротамер), 2.50 (m, 1H,
основной ротамер), 2.3-2.1 (m, 1H), 0.95 (m, 2H), 0.02 (s, 9Н, основной ротамер),
0.01 (s, 9H, минорный ротамер).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (80 мг; 0,12 ммоль; смотри
стадию (1) выше) раствор ли в 1 мл метиленхлорида и охлаждали на лед ной бане.
Добавл ли 3 мл трифторуксусной кислоты и реакционный сосуд выдерживали в лед ной
бане в течение двух часов. Смесь упаривали, раствор ли в этилацетате и промывали три
раза NaHCO3 (водн.), затем водой и сол ным раствором. Органическую фазу высушивали
(Na2SO4), фильтровали и упаривали. Остаток высушивали вымораживанием из небольшого
количества ацетонитрила и воды. Выход 60 мг (95%) чистого указанного в заголовке
Страница: 40
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
продукта.
MS (m/z) 528 (М-1) -; 531 (М+1) +.
1
H-ЯМР (500 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.65-7.55 (m, 3H, ротамеры), 7.45 (m, 1Н,
основной ротамер), 7.4-7.2 (m, 4Н), 5.15 (m, 1H, минорный ротамер), 4.74 (m, 1H,
основной ротамер), 4.5-4.3 (m, 3H), 4.05-3.95 (m, 2H), 3.85 (m, 1H, основной
ротамер), 3.82 (s, 3H, основной ротамер), 3.81 (s, 3H, минорный ротамер), 3.73 (m,
1H, основной ротамер), 3.67 (m, 1H, минорный ротамер), 3.62 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.63 (m, 1H, минорный ротамер), 2.50 (m, 1H, основной ротамер), 2.24 (m,
1H, основной ротамер), 2.16 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (125 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
174.0, 173.2, 172.7, 172.6, 155.1.
Пример 12
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,40 г; 0,65 ммоль; смотри пример
1(9) выше) раствор ли в 20 мл ацетонитрила и добавл ли 0,50 г (6,0 ммоль) Oметилгидроксиламина гидрохлорида. Смесь нагревали при 70°С в течение 2 ч.
Растворитель выпаривали и остаток распредел ли между водой и этилацетатом. Водную
фазу еще дважды экстрагировали этилацетатом, объединенную органическую фазу
промывали водой, сол ным раствором, высушивали (Na2SO4), фильтровали и упаривали.
Выход 0,41 г (91%).
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.83 (bt, 1H), 7.57 (bs, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.30 (d,
2H), 7.20 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.87 (m,
1H), 4.47 (m, 2H), 4.4-4.2 (b, 1H), 4.17-4.1 (m, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.67 (m, 1H),
2.68 (m, 1H), 2.42 (m, 1H), 0.97 (m, 2H), 0.01 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (0,40 г; 0,62 ммоль; смотри
стадию (1) выше) раствор ли в 5 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 30
минут. TFA выпаривали и остаток распредел ли между этилацетатом и NaHCO3 (водн.).
Водную фазу еще дважды экстрагировали этилацетатом, объединенную органическую
фазу промывали водой, сол ным раствором, высушивали (Na2SO4), фильтровали и
упаривали. Продукт высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил. Никакой
очистки не требовалось. Выход 0,28 г (85%).
1
H-ЯМР (600 МГц; CDCl3): ? 7.89 (bt, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.28 (d, 2H), 7.18 (m, 1Н),
7.13 (m, 1H), 6.99 (m, 1H), 6.51 (t, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.87 (m, 1H), 4.80 (bs, 2H),
4.48 (dd, 1H), 4.43 (dd, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.68 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.40 (m, 1H).
13
С-ЯМР (125 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.9, 170.8, 152.7, 152.6.
MS (m/z) 495 (M-1) -, 497 (M+1) +.
Пример 13
Ph(3-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧHOAc
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (13 мг; 0,026 ммоль; смотри пример 12
выше) раствор ли в абсолютном этаноле (5 мл) и добавл ли 30 мг 10%-ного Pd/C. В конце
добавл ли уксусную кислоту (5 мкл) и смесь гидрировали при атмосферном давлении в
течение 20 ч. Смесь фильтровали через Целит®, упаривали и очищали с помощью
обращенно-фазовой ВЭЖХ (0,1 М водный ацетат аммони /MeCN). Соответствующие
фракции высушивали вымораживанием, что позволило получить указанное в заголовке
соединение в виде твердого вещества белого цвета (8,5 мг, 66%).
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD, ротамеры): ? 7.73-7.78 (m, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.19-7.43
(m, 3H), 7.06-7.13 (m, 1H), 6.83 (t, 1H, JH-F=74 Гц, основной ротамер), 6.81 (t, 1H,
основной ротамер), 5.20 (s, 1H, основной ротамер), 5.19 (m, 1H, минорный ротамер),
5.15 (s, 1H, минорный ротамер), 4.78 (m, 1H, основной ротамер), 4.4-4.6 (несколько
Страница: 41
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
пиков, 2H), 4.35 (m, 1H, основной ротамер), 4.08 (m, 1H), 3.99 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.30 (m,
1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер), 1.89 (s, 3H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
173.7, 172.9, 168.3.
MS (m/z) 433 (M+1) +; 431 (M-1) -.
Пример 14
Ph(3-OCF3)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA (34 мг; 0,057 ммоль; из примера 6)
раствор ли в 5 мл этанола и добавл ли 20 мг 10%-ного Pd/C. Смесь гидрировали при
атмосферном давлении в течение ночи. Смесь фильтровали через Целит®, упаривали и
высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.55 (m, 2H), 7.5-7.2 (m,
4H), 5.24 (s, 1H, основной ротамер), 5.23 (m, 1H, минорный ротамер), 5.18 (s, 1H,
минорный ротамер), 4.77 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.36 (m, 1H,
основной ротамер), 4.08 (m, 1H), 3.99 (m, 1H, минорный ротамер), 2.70 (m, 1H,
минорный ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.30 (m, 1H, основной ротамер),
2.15 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
174.1, 173.9, 173.5, 172.9, 168.2.
19
F-ЯМР (282 МГц; CD3OD): -59.8 и -59.9 (3F, минорный и основной ротамер
соответственно), -77.4 (3F) показывает, что это соль TFA.
MS (m/z) 451.3 (M+1) +.
Пример 15
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 3-Хлор-5-трифторэтоксибензальдегид
К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору 3-хлор-5-гидроксибензальдегида
(2,0 г; 12,8 ммоль; смотри пример 1(2) выше) и карбоната кали (2,3 г; 16,6 ммоль) в
DMF (35 мл) в атмосфере азота добавл ли 2,2,2-трифторэтил-п-толуолсульфонат (4,2 г;
16,6 ммоль) при комнатной температуре. Смесь нагревали до 110°С в течение 7 ч и
затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь
охлаждали до 0°С, выливали в охлажденную во льду 2 н. HCl (100 мл) и экстрагировали
EtOAc (2Ч75 мл). Объединенные органические экстракты промывали 0,5 н. HCl (2Ч50 мл),
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Коричневое масло
хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (6:1), что
позвол ло получить указанное в подзаголовке соединение (1,9 г; 61%) в виде желтого
масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.44 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.28 (s, 1H),
4.42 (q, J=8 Гц, 2H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору 3-хлор-5-трифторэтоксибензальдегида (5,2 г; 21,7 ммоль; смотри стадию
(1) выше) и иодида цинка (1,7 г; 5,4 ммоль) в CH2Cl2 (200 мл) в атмосфере азота по
капл м с помощью шприца при 0°С добавл ли триметилсилилцианид (4,3 г; 43,3 ммоль).
Смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч, затем разбавл ли Н2О (150 мл).
Органический слой отдел ли, высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (6,9 г; 95%) в виде
желтого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.27 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 5.44 (s, 1H), 4.38 (q, J=8
Гц, 2H), 0.30 (s, 9H).
(3) Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Концентрированную сол ную кислоту (170 мл) добавл ли к Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)Страница: 42
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(R,S)CH(OTMS)CN (6,9 г; 20,4 ммоль; смотри стадию (2) выше) и перемешивали при 100°С
в течение 1 ч. После охлаждени до комнатной температуры реакционную смесь далее
охлаждали до 0°С и медленно подщелачивали 3 н. NaOH (300 мл). Эту смесь промывали
Et2O (2Ч100 мл) и водный слой подкисл ли 2 н. HCl (50 мл). Затем водный слой
экстрагировали EtOAc (2Ч100 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали
in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (5,3 г; 92%) в
виде бледно-желтого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.18 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.13 (s, 1H),
4.58 (q, J=8 Гц, 2H).
(4) Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-ОСН2CF3)-(S)CH(OAc)C(O)OH
(б)
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7,06 г; 24,8 ммоль; смотри стадию
(3) выше) и Липазы PS "Amano" (4,30 г) в винилацетате (250 мл) и МТВЕ (250 мл)
нагревали при 70°С в атмосфере азота в течение 40 ч. Реакционную смесь охлаждали до
комнатной температуры, фермент удал ли посредством фильтровани с промыванием
EtOAc и фильтрат концентрировали in vacuo. Хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/MeOH/Et3N (92:6:2) позвол ла получить указанную в
подзаголовке триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (а) (3,02 г) в
виде желтого масла. Соль указанного в подзаголовке соединени (а) раствор ли в Н2O
(150 мл), подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc (2Ч75 мл). Объединенные
органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo
с получением указанного в подзаголовке соединени (а) (2,18 г) в виде беловатого
твердого вещества. В дополнение к этому после проведени упом нутой выше колоночной
хроматографии получали триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (б)
(4,73 г).
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (а)
Т.пл. 98-103°С.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.18 (s, 1H), 7.07 (s, 1Н), 7.02 (s, 1H), 5.13 (s, 1H),
4.58 (q, J=8 Гц, 2H).
13
C ЯМР (75 МГц; CD3OD) ? 175.4, 159.6, 144.6, 136.2, 125.0 (q, J=277 Гц), 121.8,
115.9, 113.1, 73.3, 67.0 (q, J=35 Гц).
ВЭЖХ-анализ: 98,6%, >99% е.е., колонка Chiralcel OD (подвижна фаза Нех/EtOH/TFA
(97:3:0,5)).
[?] 25D = -81.5°(с=1.0, МеОН).
APCl-MS: (M-1)=283 m/z.
(5)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-ОСН2CF3)-(R)СН(ОН)С(O)ОН (0,50 г; 1,8 ммоль; смотри стадию
(4) выше (соединение (а))) в DMF (20 мл) в атмосфере азота добавл ли H-AzePab(Teoc)ЧHCl (1,03 г; 2,3 ммоль), РуВОР (1,01 г; 1,9 ммоль) и DIPEA (0,57 г; 4,4
ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при
комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием сначала смесью CHCl3/EtOH (10:1)
и затем EtOAc/EtOH (10:1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(0,55 г; 48%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 90-95°С.
Rf=0,42 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
Н ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.78-7.81 (m, 2H), 7.38-7.41
(m, 2H), 7.12-7.16 (m, 1H), 7.00-7.06 (m, 2H), 5.09-5.22 и 4.75-4.79 (m, 2Н), 3.944.61 (m, 8Н), 2.09-2.75 (m, 2H), 1.04-1.11 (m, 2H), 0.70 (s, 9H).
APCl-MS: (M+1)=643 m/z.
(6) Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Страница: 43
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,066 г; 0,103 ммоль; смотри
стадию (5) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 30
мин. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил
с получением 0,060 г (94%) указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.6-7.5 (m, 2H), 7.2-7.0 (m,
3Н), 5.21 (m, 1H, минорный ротамер), 5.17 (s, 1H, основной ротамер), 5.11 (s, 1H,
минорный ротамер), 4.81 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 4H), 4.37 (m, 1H,
основной ротамер), 4.16 (m, 1H, основной ротамер), 4.06 (m, 1H, минорный ротамер),
3.99 (m, 1H, минорный ротамер), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной
ротамер), 2.29 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.2, 171.8, 171.7, 167.0.
MS (m/z) 499.3 (M+1) +.
Пример 16
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-Cl)(5-ОСН2CF3)-(R)СН(ОН)С(O)ОН (0,48 г; 1,7 ммоль; смотри пример
15(4) выше (соединение (а))) в DMF (20 мл) в атмосфере азота добавл ли H-AzePab(OMe)Ч2HCl (0,74 г; 2,2 ммоль), РуВОР (0,97 г; 1,9 ммоль) и DIPEA (0,55 г; 4,2
ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при
комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH
(10:1) и второй раз EtOAc/EtOH (10:1), что позволило получить указанное в заголовке
соединение (0,62 г; 69%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 75-80°С.
Rf=0,43 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.57-7.60 (m, 2H), 7.32-7.36
(m, 2H), 7.13-7.17 (m, 1H), 7.00-7.06 (m, 2H), 5.09-5.19 и 4.74-4.80 (m, 2H), 3.934.62 (m, 6H), 3.81 (s, 3H), 2.10-2.73 (m, 2H).
APCl-MS: (M+1)=529 m/z.
Пример 17
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 2,2-Дифторэтиловый эфир метансульфокислоты
К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору 2,2-дифторэтанола (1,52 г; 18,5
ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) в атмосфере азота добавл ли триэтиламин (5,61 г; 55,5 ммоль)
и метансульфонилхлорид (2,54 г; 22,2 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в
течение 1,5 ч, разбавл ли CH2Cl2 (50 мл) и промывали 2 н. HCl (50 мл). Водный слой
экстрагировали CH2Cl2 (30 мл), объединенные органические экстракты промывали сол ным
раствором (30 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (2,52 г; 85%) в виде желтого
масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 6.02 (tt, J=3 Гц, J=55 Гц, 1H), 4.39 (dt, J=3 Гц, J=13
Гц, 2Н), 3.13 (s, 3Н).
(2) 3-Хлор-5-дифторэтоксибензальдегид
К раствору 3-хлор-5-гидроксибензальдегида (1,50 г; 9,6 ммоль; смотри пример 1(2)
выше) и карбоната кали (1,72 г; 12,5 ммоль) в DMF (10 мл) в атмосфере азота по
капл м добавл ли раствор 2,2-дифторэтилового эфира метансульфокислоты (2,0 г; 12,5
ммоль; смотри стадию (1) выше) в DMF (10 мл) при комнатной температуре. Смесь
нагревали до 100°С в течение 6 ч, затем перемешивали в течение ночи при комнатной
температуре. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, выливали в охлажденную во льду 2 н.
HCl (100 мл) и экстрагировали EtOAc (2Ч75 мл). Объединенные органические экстракты
промывали 0,5 н. HCl (2Ч50 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo. Коричневое масло хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью
Страница: 44
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Нех/EtOAc (5:1), что позвол ло получить указанное в подзаголовке соединение (1,35 г;
64%) в виде желтого масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.92 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (s, 1 Н),
6.12 (tt, J=3 Гц, J=55 Гц, 1Н), 4.26 (dt, J=3 Гц, J=15 Гц, 2Н).
(3) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору 3-хлор-5-дифторэтоксибензальдегида (1,35 г; 6,1 ммоль; смотри стадию (2)
выше) и иодида цинка (0,48 г; 1,5 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) в атмосфере азота по капл м
при 0°С добавл ли триметилсилилцианид (1,21 г; 12,2 ммоль). Смесь перемешивали
при 0°С в течение 3 ч, затем разбавл ли Н2O (50 мл). Органический слой отдел ли,
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить
указанное в подзаголовке соединение (1,85 г; 95%) в виде коричневого масла, которое
использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.13 (s, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.10 (tt, J=3 Гц, J=55 Гц,
1H), 5.43 (s, 1H), 4.20 (dt, J=3 Гц, J=15 Гц, 2H), 0.28 (s. 9H).
(4) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Концентрированную сол ную кислоту (60 мл) добавл ли к Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF3)(R,S)CH(OTMS)CN (1,85 г; 5,8 ммоль; смотри стадию (3) выше) и перемешивали при 100°С
в течение 1 ч. После охлаждени до комнатной температуры реакционную смесь далее
охлаждали до 0°С, медленно подщелачивали 3 н. NaOH (~180 мл) и промывали Et2O (2Ч75
мл). Водный слой подкисл ли 2 н. HCl (20 мл) и экстрагировали EtOAc (2Ч75 мл).
Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(1,50 г; 97%) в виде бледно-желтого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.15 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.19 (tt, J=4
Гц, J=55 Гц, 1 Н), 5.12 (s, 1 Н), 4.25 (dt, J=4 Гц, J=17 Гц, 2H).
(5) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)(R)СН(OH)C(О)OH (б)
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,90 г; 14,6 ммоль; смотри стадию
(4) выше) и Липазы PS "Amano" (2,50 г) в винилацетате (140 мл) и МТВЕ (140 мл)
нагревали при 70°С в атмосфере азота в течение 40 ч. Реакционную смесь охлаждали до
комнатной температуры, фермент удал ли посредством фильтровани с промыванием
EtOAc и фильтрат концентрировали in vacuo. Хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/MeOH/Et2N (92:6:2) позволила получить триэтиламинную
соль указанного в подзаголовке соединени (а) в виде желтого масла. В дополнение к
этому получали триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (б) (1,47 г),
эту соль раствор ли в Н2О (100 мл), подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc (2Ч75
мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo с получением указанного в подзаголовке соединени (б) (1,00
г) в виде беловатого твердого вещества.
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (б)
Т.пл. 103-106°С.
Rf=0,39 (CHCl3/MeOH/Et2N (90:8:2)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.13 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.17 (tt, J=4
Гц, J=55 Гц, 1H), 5.12 (s, 1 Н), 4.24 (dt, J=4 Гц, J=8 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (75 МГц; CD3OD) ? 175.5, 160.3, 144.5, 136.1, 121.3, 115.7, 115.3 (t, J=
240 Гц), 112.9, 73.4, 68.6 (t, J=29 Гц).
ВЭЖХ-анализ: 96,2%, >95,0% е.е., колонка ChiralPak AD (подвижна фаза
Нех/EtOH/TFA (95:5:0,5)).
[?] 25D = -84.0°(с=0.85, МеОН).
APCl-MS: (M-1)=265 m/z.
(6)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Страница: 45
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,35 г; 1,3 ммоль; смотри стадию
(5) выше (соединение (б))) в DMF (18 мл) в атмосфере азота добавл ли H-AzePab(Teoc)ЧHCl (0,76 г; 1,7 ммоль), РуВОР (0,75 г; 1,4 ммоль) и DIPEA (0,43 г; 3,3
ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при
комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь концентрировали in vacuo и остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием сначала смесью CHCl3/EtOH (10:1)
и затем EtOAc/EtOH (10:1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(0,69 г; 84%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 108-118°С.
Rf=0,48 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.78-7.81 (m, 2H), 7.40-7.43
(m, 2H), 7.09-7.12 (m, 1H), 6.96-7.02 (m, 2H), 6.16 (t, J=57 Гц, 1Н), 5,09-5.20 и
4.75-4.80 (m, 2H), 3.95-4.55 (m, 8H), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.04-1.11 (m, 2H), 0.07 (s, 9H).
APCl-MS: (M+1)=625 m/z.
(7) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,086 г; 0,138 ммоль; смотри
стадию (6) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 1 ч.
TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил с
получением 0,080 г (98%) указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (300 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.6-7.5 (m, 2H), 7.15-6.95
(m, 3Н), 6.35-5.95 (m, 1H), 5.20 (m, 1H, минорный ротамер), 5.14 (s, 1H, основной
ротамер), 5.10 (s, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.0 (m,
6H), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.53 (m, 1H, основной ротамер), 2.29 (m, 1H,
основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
174.0, 173.8, 173.4, 172.9, 168.2.
MS (m/z) 481.2 (M+1) +.
Пример 18
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,30 г; 1,7 ммоль; смотри пример
17(5) выше (соединение (б))) в DMF (15 мл) в атмосфере азота добавл ли H-AzePab(OMe)Ч2HCl (0,49 г; 1,5 ммоль), РуВОР (0,65 г; 1,2 ммоль) и DIPEA (0,36 г; 2,8
ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при
комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь концентрировали in vacuo, остаток трижды
хроматографировали на силикагеле с элюированием сначала смесью CHCl3/EtOH (10:1),
затем EtOAc/EtOH (10:1) и окончательно CHCl3/МеОН (20:1), что позволило получить
указанное в заголовке соединение (0,47 г; 81%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 65-75°С.
Rf=0,37 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.58-7.60 (m, 2H), 7.32-7.35
(m, 2H), 7.09-7.12 (m, 1H), 6.96-7.02 (m, 2H), 6.16 (t, J=55 Гц, 1Н), 5.08-5.18 и
4.74-4.80 (m, 2H), 3.96-4.50 (m, 6H), 3.80 (s, 3H), 2.10-2.75 (m, 2H).
APCl-MS: (M+1)=511 m/z.
Пример 19
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1)Ph(3-Cl)(5-TMSO)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору 3-хлор-5-гидроксибензальдегида (9,8 г; 62,6 ммоль; смотри пример 1(2)
выше) и Znl2 (5,0 г; 15,7 ммоль) в безводном CH2Cl2 (500 мл) при 0°С добавл ли
триметилсилилцианид (13,7 г; 138 ммоль). Реакционную смесь оставл ли нагреватьс до
комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавл ли воду (250 мл) и
раздел ли слои. Водный слой экстрагировали CH2Cl2 (2Ч300 мл). Объединенные
Страница: 46
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo,
что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (16,9 г; 83%) в виде
желтого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
Rf=0,42 (Нех/EtOAc (3:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.06 (s, 1H), 6.86 (s, 2H), 5.40 (s, 1H), 0.30 (s, 9Н), 0.24 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Раствор Ph(3-Cl)(5-OTMS)-(R,S)CH(OTMS)CN (22,6 г; 68,8 ммоль; смотри стадию (1)
выше) в концентрированной HCl (200 мл) кип тили с обратным холодильником в
атмосфере азота в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и медленно
подщелачивали 2 н. NaOH. Смесь промывали Et2O (3Ч100 мл) дл удалени органических
примесей. Водный слой подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc (3Ч200 мл).
Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(9,3 г; 67%) в виде коричневого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
Rf=0,23 (CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (6:3:1)).
1
Н ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.05 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.03 (s, 1H).
(3) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
К раствору Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (9,3 г; 46,0 ммоль; смотри стадию (2)
выше) в абсолютном EtOH (200 мл) добавл ли концентрированную серную кислоту (0,25
мл) и реакционную смесь кип тили с обратным холодильником в атмосфере азота в
течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавл ли твердый NaHCO3 (0,2
г). Реакционную смесь концентрировали in vacuo и распредел ли между насыщенным
NaHCO3 (100 мл) и Et2O (3Ч50 мл). Объединенные органические экстракты высушивали
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo с получением указанного в
подзаголовке соединени (6,9 г; 65%) в виде желтого масла, которое использовали без
дальнейшей очистки.
Rf=0,62 (CHCl3/МеОН/концентрированный NH4ОН (6:3:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 6.99 (s, 1H), 6.81 (s, 2H), 5.07 (s, 1H), 4.16-4.32 (m,
2H), 1.23 (t, J=7 Гц, 3H).
(4) Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
К раствору Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,1 г; 26,8 ммоль; смотри стадию (3)
выше) в DMF (100 мл) в герметично закрытой колбе в атмосфере азота при 0°С добавл ли
карбонат цези (13,1 г; 40,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение
15 минут с последующим добавлением иодида кали (0,5 г; 2,7 ммоль). Реакционную смесь
охлаждали до -78°С и сосуд барботировали хлорфторметаном (18,4 г; 268 ммоль). Затем
герметично закрытую колбу оставл ли нагреватьс до комнатной температуры и
перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, осторожно
вентилировали, чтобы удалить любой избыток хлорфторметана и распредел ли
между Н2O (20 мл) и Et2O (3Ч50 мл). Объединенные органические фазы промывали
сол ным раствором (2Ч50 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (градиент
от 9:1 до 3:1) позволила получить указанное в подзаголовке соединение (2,4 г; 35%) в
виде светло-желтого масла. Примечание: данное соединение слабо различимо в УФ на
ТСХ. Его можно сделать видимым с помощью окрашивани ТСХ-пластины
бромкрезоловым зеленым.
Rf=0,46 (Нех/EtOAc (2:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.21 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.70 (d, JH-F=54 Гц,
2Н), 5.12 (d, J=5 Гц, 1H), 3.80-4.35 (m, 2Н), 3.50 (d, J=5 Гц, 1H), 1.26 (t, J=7 Гц, 3H).
(5) Ph(3-Cl(5-ОСН2F)-(R,S)СН(OH)С(O)OH
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (1,8 г; 6,8 ммоль; смотри стадию
(4) выше) в смеси H2О/THF (30 мл, 1:2) при 0°С в атмосфере азота добавл ли гидроксид
Страница: 47
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
лити моногидрат (0,40 г; 10,3 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч.
Реакционную смесь концентрировали in vacuo и распредел ли между Н2О (5 мл) и Et2O
(2Ч20 мл). Водный слой осторожно подкисл ли 0,2 н. HCl при 0°С и экстрагировали EtOAc
(3Ч30 мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(1,4 г; 87%) в виде бесцветного масла, которое отвердевало при сто нии до твердого
вещества белого цвета.
Rf=0,43 (CHCl3/MeOH/Et3N (6:2:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.24 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.78 (d, JH-F=54 Гц,
2Н), 5.13 (s, 1H).
(6) Ph(3-Cl(5-ОСН2F)-(R)СН(OH)С(О)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-ОСН2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (б)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,2 г; 13,9 ммоль; смотри стадию (5)
выше) и Липазы PS "Атапо" (1,9 г) в винилацетате (150 мл) и МТВЕ (150 мл) нагревали
при 70°С в атмосфере азота в течение 3 сут. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали
через Целит® и осадок на фильтре промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали in vacuo
и подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием смесью
CHCl3/МеОН/Et3N (15:1:0,5), что позволило получить триэтиламинную соль указанного в
подзаголовке соединени (а) (0,50 г; 21%), которую использовали без нейтрализации. В
дополнение к этому получали триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (б) (0,46 г; 20%).
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (а)
Rf=0,19 (CHCl3/МеОН/Et3N (15:1:0,5)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.26 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 5.74 (d, JH-F=54 Гц,
2Н), 4.81 (s, 1H), 3.17 (q, J=7 Гц, 6Н), 1.28 (t, J=7 Гц, 9Н).
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (б)
Rf=0,33 (CHCl3/МеОН/Et3N(15:1:0,5)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.28 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.76 (d, JH-F=54 Гц,
2Н), 5.75 (s, 1H), 3.17 (q, J=7 Гц, 6Н), 2.16 (s, 3Н), 1.28 (t, J=7 Гц, 9Н).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору триэтиламинной соли Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 г; 1,50
ммоль; смотри стадию (6) выше) и HAze-Pab(Teoc)?HCl (0,87 г; 1,90 ммоль) в безводном
DMF (15 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли РуВОР (0,85 г; 2,60 ммоль) и DIPEA
(0,48 г; 3,70 ммоль). Реакционную смесь оставл ли нагреватьс до комнатной
температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали in
vacuo и дважды подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием
первоначально смесью CHCl3/EtOH (9:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:1), что позволило
получить указанное в подзаголовке соединение (0,23 г; 26%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 88-92°С.
Rf=0,61 (CHCl3/EtOH (9:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.81 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.407.42 (m, 2H), 7.06-7.23 (m, 3Н), 5.76 (d, JH-F=51 Гц, 2Н), 5.10-5.16 и 4.77-4.83 (m, 2H),
3.80-4.49 (m, 6H), 2.30-2.53 (m, 2H), 1.08 (t, J=7 Гц, 2H), 0.08 (s, 9H).
APCl-MS: (M+1)=593 m/z.
(8) Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 г; 0,086 ммоль; смотри стадию
(7) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 20 мин. TFA
выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил. Чистота
продукта составл ла 95% с 5% дефторметилированного материала. Попытки очистить его
с помощью препаративной ОФЖХ (СН3CN/0,1 М NH4OAc) не увенчались успехом, и
материал, частично в виде ацетата, раствор ли в 5 мл TFA, упаривали и высушивали
вымораживанием с получением 26 мг (51%) указанного в заголовке соединени в виде его
TFA-соли. Чистота 95%.
Страница: 48
RU 2 300 521 C2
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H-ЯМР (600 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.6-7.5 (m, 2H), 7.21 (s,
1H, основной ротамер), 7.17 (s, 1H, минорный ротамер), 7.13 (s, 1H, основной
ротамер), 7.09 (s, 1H, минорный ротамер), 7.07 (m, 1H, основной ротамер), 7.04 (m,
1H, минорный ротамер), 5.73 (d, 2H), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.16 (s, 1H,
основной ротамер), 5.09 (s, 1H, минорный ротамер), 4.78 (m, 1H, минорный ротамер),
4.56 (d, 1H, основной ротамер), 4.50 (d, 1H, минорный ротамер), 4.46 (d, 1H, минорный
ротамер), 4.45 (d, 1H, основной ротамер), 4.35 (m, 1H, основной ротамер), 4.14 (m,
1H, основной ротамер), 4.05 (m, 1H, минорный ротамер), 3.97 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.68 (m, 1H, минорный ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.28 (m,
1H, основной ротамер), 2.19 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (150 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
173.9, 173.3, 172.9, 168.2.
ESI-MS+: (M+1)=449 (m/z).
Пример 20
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору триэтиламинной соли Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,60 г; 1,80
ммоль; смотри пример 19(6) выше) и HAze-Pab(OMe)?2HCl (0,79 г; 2,30 ммоль) в DMF (15
мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли РуВОР (1,04 г; 1,90 ммоль) и DIPEA (0,58 г;
4,50 ммоль). Реакционную смесь оставл ли нагреватьс до комнатной температуры и
перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали in vacuo и трижды
подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием сначала смесью
CHCl3/EtOH (9:1) и затем дважды EtOAc/EtOH (20:1), что позволило получить указанное в
заголовке соединение (0,22 г; 26%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 66-70°С.
Rf=0,45 (CHCl3/EtOH (9:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.59 (d, J=8 Гц, 2H), 7.32 (d,
J=7 Гц, 2H), 7.06-7.23 (m, 3H), 5.75 (s, JH-F=54 Гц, 1H), 5.10-5.16 и 4.78-4.84 (m, 2H),
4.11-4.45 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 2.10-2.75 (m, 2H).
13
С-ЯМР (150 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
173.0, 170.8, 170.7, 152.5.
APCl-MS: (M+1)=479 m/z.
Пример 21
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) (2-Монофторэтил)метансульфонат
К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору 2-фторэтанола (5,0 г; 78,0 ммоль)
в СН2Cl2 (90 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли триэтиламин (23,7 г; 234 ммоль) и
метансульфонилхлорид (10,7 г; 93,7 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5
ч, разбавл ли СН2Cl2 (100 мл) и промывали 2 н. HCl (100 мл). Водный слой
экстрагировали CH2Cl2 (50 мл), объединенные органические экстракты промывали сол ным
раствором (75 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (9,7 г; 88%) в виде желтого
масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 4.76 (t, J=4 Гц, 1Н), 4.64 (t, J=4 Гц, 1Н), 4.52 (t, J=4
Гц, 1Н), 4.43 (t, J=4 Гц, 1Н), 3.09 (s, 3Н).
(2) 3-Хлор-5-монофторэтоксибензальдегид
К раствору 3-хлор-5-гидроксибензальдегида (8,2 г; 52,5 ммоль; смотри пример 1(2)
выше) и карбоната кали (9,4 г; 68,2 ммоль) в DMF (10 мл) в атмосфере азота по капл м
добавл ли раствор (2-монофторэтил)метансульфоната (9,7 г; 68,2 ммоль; смотри стадию
(1) выше) в DMF (120 мл) при комнатной температуре. Смесь нагревали до 100°С в
течение 5 ч, затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре.
Реакционную смесь охлаждали до 0°С, выливали в охлажденную во льду 2 н. HCl и
экстрагировали EtOAc. Объединенные органические экстракты промывали сол ным
Страница: 49
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
раствором, высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Коричневое
масло хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1), что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (7,6 г; 71%) в виде желтого
масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.92 (s, 1Н), 7.48 (s, 1Н), 7.32 (s, 1Н), 7.21 (s, 1Н),
4.87 (t, J=4 Гц, 1Н), 4.71 (t, J=3 Гц, 1Н), 4.33 (t, J=3 Гц, 1Н), 4.24 (t, J=3 Гц, 1Н).
(3) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору 3-хлор-5-монофторэтоксибензальдегида (7,6 г; 37,5 ммоль; смотри стадию
(2) выше) и иодида цинка (3,0 г; 9,38 ммоль) в CH2Cl2 (310 мл) по капл м добавл ли
триметилсилилцианид (7,4 г; 75,0 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали
при 0°С в течение 3 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь
разбавл ли Н2О (300 мл), органический слой отдел ли, высушивали (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в
подзаголовке соединение (10,6 г; 94%) в виде коричневого масла, которое использовали
без дальнейшей очистки или определени характеристик.
(4) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Концентрированную сол ную кислоту (100 мл) добавл ли к Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)(R,S)CH(OTMS)CN (10,6 г; 5,8 ммоль; смотри стадию (3) выше), и раствор перемешивали
при 100°С в течение 3 ч. После охлаждени до комнатной температуры реакционную смесь
далее охлаждали до 0°С, медленно подщелачивали 3 н. NaOH (~300 мл) и промывали Et2O
(3Ч200 мл). Водный слой подкисл ли 2 н. HCl (80 мл) и экстрагировали EtOAc (3Ч300 мл)
Объединенные EtOAc-экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали
in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (8,6 г; 98%) в
виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое использовали без дальнейшей
очистки.
Rf=0,28 (CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (90:8:2)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.09 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.11 (s, 1H),
4.77-4.81 (m, 1H), 4.62-4.65 (m, 1H), 4.25-4.28 (m, 1H), 4.15-4.18 (m, 1H).
(5) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)(R)CH(OH)C(O)OH (б)
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (8,6 г; 34,5 ммоль; смотри стадию
(4) выше) и Липазы PS "Amano" (4,0 г) в винилацетате (250 мл) и МТВЕ (250 мл)
нагревали при 70°С в атмосфере азота в течени?? 3 сут. Реакционную смесь охлаждали до
комнатной температуры и фермент удал ли посредством фильтровани через Целит®.
Осадок на фильтре промывали EtOAc и фильтрат концентрировали in vacuo.
Хроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/MeOH/Et3N (90:8:2)
позволила получить триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (а) в
виде желтого масла. В дополнение к этому получали триэтиламинную соль указанного в
подзаголовке соединени (б) (4,0 г). Соль указанного в подзаголовке соединени (б)
раствор ли в H2O (250 мл), подкисл ли 2 н. HCl и экстрагировали EtOAc (3Ч200 мл).
Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo с получением указанного в подзаголовке соединени (б) (2,8 г;
32%) в виде желтого масла.
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (б):
Rf=0,28 (CHCl3/МеОН/концентрированный NH4OH (90:8:2)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.09 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.11 (s, 1H),
4.77-4.81 (m, 1H), 4.62-4.65 (m, 1H), 4.25-4.28 (m, 1H), 4.15-4.18 (m, 1H).
(6) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (940 мг; 3,78 ммоль; смотри стадию
(5) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(Teoc)?HCl (2,21
г; 4,91 ммоль), РуВОР (2,16 г; 4,15 ммоль) и DIPEA (1,22 г; 9,45 ммоль). Реакционную
смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение
Страница: 50
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
4 ч. Смесь концентрировали in vacuo и остаток дважды хроматографировали на силикагеле
с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH (15:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:
1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (450 мг; 20%) в виде
дробимой белой пены.
Т.пл. 80-88°С.
Rf=0,60 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; СО3CD; сложна смесь ротамеров) ? 7.79 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.42 (d,
J=8 Гц, 2Н), 7.05-7.08 (m, 1H), 6.93-6.99 (m, 2H), 5.08-5.13 (m, 1H), 4.75-4.80 (m,
2H), 4.60-4.68 (m, 1H), 3.95-4.55 (m, 8H), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
APCl-MS: (M+1)=607 m/z.
(7) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,357 г; 0,589 ммоль; смотри
стадию (6) выше) раствор ли в 10 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 40
мин. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил
с получением 0,33 г (93%) указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (600 МГц; CD3OD, ротамеры): ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.54 (d, 2H), 7.08 (s, 1H,
основной ротамер), 7.04 (s, 1H, минорный ротамер), 6.99 (s, 1H, основной ротамер),
6.95 (s, 1H), 6.92 (s, 1H, минорный ротамер), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.14
(s, 1H, основной ротамер), 5.08 (s, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m, 1H, основной
ротамер), 4.73 (m, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.6-4.4 (m, 2Н), 4.35 (m, 1H, основной
ротамер), 4.21 (дублет мультиплетов, 2Н), 4.12 (m, 1H, основной ротамер), 4.06 (m,
1H, минорный ротамер), 3.99 (m, 1H, минорный ротамер), 2.69 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.53 (m, 1H, основной ротамер), 2.29 (m, 1H, основной ротамер), 2.14 (m,
1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (150 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.8, 172.1,
167.4.
ESI-MS+: (M+1)=463 (m/z).
Пример 22
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (818 мг; 3,29 ммоль; смотри пример
21(5) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(OMe)?2HCI
(1,43 г; 4,27 ммоль), РуВОР (1,89 г; 3,68 ммоль) и DIPEA (1,06 г; 8,23 ммоль).
Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной
температуре в течение ночи. Смесь концентрировали in vacuo, и остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH
(15:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:1), что позволило получить указанное в заголовке
соединение (880 мг; 54%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 65-72°С.
Rf=0,60 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; СО3CD; сложна смесь ротамеров) ? 7.58-7.60 (d, J=8 Гц, 2Н),
7.34 (d, J=7 Гц, 2Н), 7.05-7.08 (m, 2H), 6.95-6.99 (m, 1H), 5.08-5.13 (m, 1H), 4.774.82 (m, 1H), 4.60-4.68 (m, 1H), 3.99-4.51 (m, 7H), 3.82 (s, 3H), 2.10-2.75 (m, 2H).
13
С-ЯМР (150 МГц; CD3CD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173.3, 170.8,
152.5.
APCI-MS: (M+1)=493 m/z.
Пример 23
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 1,3-Дифторизопропилметансульфонат
К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору 1,3-дифтор-2-пропанола (7,0 г;
72,8 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли триэтиламин (22,1 г;
219 ммоль) и метансульфонилхлорид (10,0 г; 87,4 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в
течение 3 ч. Смесь промывали 2 н. HCl (150 мл) и слои раздел ли. Водный слой
Страница: 51
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
экстрагировали CH2Cl2 (200 мл), объединенные органические экстракты промывали
сол ным раствором (100 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (11,5 г; 91%) в
виде желтого масла, которое используют без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 4.97-5.08 (m, 1H), 4.75-4.77 (m, 2H), 4.59-4.61 (m, 2H),
3.12 (s, 3H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO
К раствору 3-хлор-5-гидроксибензальдегида (8,0 г; 50,7 ммоль; смотри пример 1(2)
выше) и карбоната кали (9,1 г; 66,0 ммоль) в DMF (75 мл) в атмосфере азота по капл м
добавл ли раствор 1,3-дифторизопропилметансульфоната (11,5 г; 66,0 ммоль; смотри
стадию (1) выше) в DMF (75 мл) при комнатной температуре. Смесь нагревали до 110°С в
течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, выливали в охлажденную во льду 2 н.
HCl (200 мл) и экстрагировали EtOAc (3Ч250 мл). Объединенные органические экстракты
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Коричневое масло
хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1), что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (4,4 г; 37%) в виде желтого
масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.92 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.26 (s, 1H),
4.70-4.89 (m, 3Н), 4.63-4.68 (m, 2H).
(3) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OTMS)CN
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO (4,4 г; 18,7 ммоль; смотри стадию (2) выше) и
иодида цинка (1,5 г; 4,67 ммоль) в CH2Cl2 (200 мл) при 0°С в атмосфере азота по капл м
добавл ли триметилсилилцианид (3,7 г; 37,3 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в
течение 3 ч и при комнатной температуре в течение ночи, затем разбавл ли Н2O (200 мл).
Органический слой отдел ли, высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (5,5 г; 87%) в виде
коричневого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.12 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 5.42 (s, 1H), 4.70-4.80 (m,
3Н), 4.59-4.64 (m, 2H), 0.26 (s, 9H).
(4)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Концентрированную сол ную кислоту (50 мл) добавл ли к Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)(R,S)CH(OTMS)CN (5,5 г; 16,3 ммоль; смотри стадию (3) выше), и раствор перемешивали
при 100°С в течение 1,5 ч. После охлаждени до комнатной температуры реакционную
смесь далее охлаждали до 0°С, медленно подщелачивали 3 н. NaOH (~200 мл) и
промывали Et2O (3Ч200 мл). Водный слой подкисл ли 2 н. HCl (75 мл) и экстрагировали
EtOAc (3Ч200 мл). Объединенные EtOAc-экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(4,6 г; 100%) в виде коричневого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.14 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.12 (s, 1H),
4.70-4.90 (m, 3Н), 4.52-4.67 (m, 2H).
(5) Ph(3-Cl)(5-ОСН(СН2F)2)-(S)СН(ОАс)С(O)OH (а) и Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)(R)CH(OH)C(O)OH (б)
Раствор Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (4,6 г; 16,4 ммоль; смотри стадию
(4) выше) и Липазы PS "Amano" (3,0 г) в винилацетате (150 мл) и МТВЕ (150 мл)
нагревали при 70°С в атмосфере азота в течение 2,5 сут. Реакционную смесь охлаждали
до комнатной температуры, фермент удал ли посредством фильтровани через Целит®.
Осадок на фильтре промывали EtOAc и фильтрат концентрировали in vacuo.
Хроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/MeOH/Et3N (90:8:2)
позволила получить триэтиламинную соль указанного в подзаголовке соединени (а) в
виде желтого масла. В дополнение к этому получали триэтиламинную соль указанного в
подзаголовке соединени (б) (2,2 г), эту соль раствор ли в H2O (100 мл), подкисл ли 2 н.
HCl и экстрагировали EtOAc (3Ч200 мл). Объединенные органические экстракты
Страница: 52
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo с получением указанного
в подзаголовке соединени (б) (1,4 г; 29%) в виде желтого масла.
Данные дл указанного в подзаголовке соединени (б)
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.14 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.12 (s, 1H),
4.70-4.90 (m, 3Н), 4.52-4.67 (m, 2H).
(6)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH (824 мг; 2,94 ммоль; смотри
стадию (5) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAzePab(Teoc)?HCl (1,71 г; 3,81 ммоль), РуВОР (1,68 г; 3,23 ммоль) и DIPEA (949 мг; 7,34
ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной
температуре в течение ночи. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH
(15:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:1), что позволило получить указанное в
подзаголовке соединение (720 мг; 38%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 78-84°С.
Rf=0,62 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3CD; сложна смесь ротамеров) ? 7.79 (d, J=8 Гц, 2H), 7.42 (d,
J=8 Гц, 2H), 7.00-7.12 (m, 3Н), 5.08-5.20 (m, 1H), 3.97-4.80 (m, 12H), 2.10-2.75 (m,
2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
APCI-MS: (M+1)=639 m/z.
(7) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,129 г; 0,202 ммоль; смотри
стадию (6) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 20
мин. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил,
что дает 0,123 г (100%) указанного в заголовке соединени в виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3CD) ротамеры: ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.2-7.0 (m,
3Н), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.15 (s, 1H, основной ротамер), 5.08 (s, 1H,
минорный ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер, частично закрытый пиком CD3OH),
4.75-4.4 (m, 7H), 4.38 (m, 1H, основной ротамер), 4.15 (m, 1H, основной ротамер), 4.13.9 (m, 2H, 2 сигнала от минорного ротамера), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.53
(m, 1H, основной ротамер), 2.30 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный
ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.9, 172.6, 172.2, 171.7, 167.1.
ESI-MS+: (M+1)=495 (m/z).
Пример 24
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH (513 мг; 1,83 ммоль; смотри
пример 23(5) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAzePab(OMe)?2HCl (797 мг; 2,38 ммоль), РуВОР (1,04 г; 2,01 ммоль) и DIPEA (591 мг; 4,57
ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной
температуре в течение ночи. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды
хроматографировали на силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH
(15:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:1), что позволило получить указанное в заголовке
соединение (370 мг; 39%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 58-63°С.
Rf=0,66 (CHCl3/EtOH (10:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.58-7.60 (d, J=8 Гц, 2H),
7.34 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.00-7.12 (m, 3Н), 5.08-5.20 (m, 1H), 4.65-4.82 (m, 3Н), 4.284.65 (m, 5H), 3.92-4.18 (m, 2H), 3.82 (s, 3Н), 2.10-2.75 (m, 2H).
13
С-ЯМР (150 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173.2, 170.8,
Страница: 53
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
152.5.
APCI-MS: (M+1)=525 m/z.
Пример 25
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 1-Бром-3-фтор-5-бензилоксибензол
Гидрид натри (60%-ную дисперсию в масле; 24,0 г, 0,48 моль) добавл ли порци ми к
перемешиваемому раствору безводного бензилового спирта (64,5 г; 0,60 моль) в THF (1,0
л). После перемешивани смеси в течение 1 ч по капл м добавл ли раствор 1-бром-3,5дифторбензола (76,8 г; 0,40 моль) в THF (100 мл) в продолжение периода времени 1 ч.
Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 сут. Добавл ли
воду (400 мл) и THF удал ли in vacuo. Водный слой экстрагировали гексаном (3Ч150 мл).
Объединенные органические экстракты промывали 2 н. NaOH (2Ч100 мл), затем
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позвол ло получить
указанное в подзаголовке соединение (110,7 г; 98%) в виде светло-желтого масла,
которое использовали без дальнейшей очистки.
Rf=0,47 (Hex).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.36-7.41 (m, 5H), 6.94 (bs, 1H), 6.87 (d, JH-F=8 Гц, 1H), 6.63
(d, JH-F=10 Гц, 1H), 5.03 (s, 2H).
(2) 3-Бром-5-фторфенол
К раствору 1-бром-3-фтор-5-бензилоксибензола (110,0 г; 0,39 моль; смотри стадию (1)
выше) и N,N-диметланилина (474,0 г; 3,92 моль) в безводном CH2Cl2 (1,0 л) при 0°С
добавл ли хлорид алюмини (156,0 г; 1,17 моль). Через 10 мин лед ную баню удал ли и
перемешивание продолжали в течение 2 ч. Реакцию гасили путем осторожного добавлени 3 н. HCl (600 мл). Слои раздел ли и водный слой экстрагировали CH2Cl2 (2Ч150 мл).
Объединенные органические экстракты промывали 2 н. HCl (250 мл) и H2O (3Ч250 мл). К
органическому слою добавл ли 15%-ный КОН (500 мл) и слои раздел ли. Органический
слой еще раз экстрагировали 2 н. HCl (2Ч70 мл). Объединенные водные слои промывали
CH2Cl2 (3Ч100 мл) и затем подкисл ли 4 н. HCl. Затем водный слой экстрагировали Et2O
(3Ч125 мл), объединенные Et2O-экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(69,0 г; 92%) в виде коричневого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
Т.пл. 33-35°С.
Rf=0,25 (CHCl3).
1
H ЯМР (300 МГц; DMSO-d6) ? 10.38 (s, 1H), 6.90 (dd, JH-F=11 Гц, J=2 Гц, 1Н), 6.81 (s,
1Н), 6.59 (dt, JH-F=11 Гц, J=2 Гц, 1Н).
APCI-MS: (M-1)=189 m/z.
(3) 1-Бром-3-фтор-5-дифторметоксибензол
Смесь 3-бром-5-фторфенола (6,1 г; 31,0 ммоль; смотри стадию (2) выше) и
хлордифторметана (13,0 г; 150,0 ммоль) в изо-PrOH (100 мл) и 30%-ном КОН (80 мл)
нагревали в герметично закрытой колбе в течение 18 ч при 80-85°С. Реакционную смесь
охлаждали до комнатной температуры и слои раздел ли. Органический слой
концентрировали in vacuo, что позволило получить бесцветное масло. Водный слой
экстрагировали Et2O (3Ч30 мл). Неочищенное масло и объединенные органические
экстракты промывали 2 н. NaOH (3Ч30 мл) и Н2O (3Ч30 мл). Органическую фазу затем
высушивали (Na2SO4), фильтровали через небольшую набивку из силикагел и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(6,1 г; 79%) в виде бесцветного масла, которое используют без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.11-7.14 (m, 2H), 6.84 (dt, J=9 Гц, J=2 Гц, 1Н), 6.50 (t, JH-F=72
Гц, 1Н).
(4) 1-Фтор-3-дифторметокси-5-винилбензол
Три(бутил)винилстаннан (7,0 г; 22,2 ммоль) добавл ли к суспензии 1-бром-3-фтор-5дифторметоксибензола (4,9 г; 20,2 ммоль; смотри стадию (3) выше),
Страница: 54
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
дихлорбис(трифенилфосфин)паллади (II) (1,42 г; 2,02 ммоль) и безводного хлорида лити (0,90 г; 20,2 ммоль) в THF (40 мл) в атмосфере азота при 65°С и смесь перемешивали в
течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавл ли 1 н. NaOH (90 мл).
Бифазную смесь энергично перемешивали в течение 1 часа, затем слои раздел ли.
Водный слой экстрагировали Et2O (3Ч70 мл). Объединенные органические слои промывали
2 н. NaOH (2Ч40 мл) и Н2О (40 мл), затем высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием гексаном
позволила получить указанное в подзаголовке соединение (2,2 г; 57%) в виде
бесцветного масла.
Rf=0,47 (Hex).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 6.93-6.99 (m, 2H), 6.73-6.78 (m, 1H), 6.67 (dd, J=18 Гц,
J=11 Гц, 1H), 6.51 (t, JH-F=73 Гц, 1H), 5.77 (d,J=18 Гц, 1H), 5.36 (d, J=11 Гц, 1Н).
(5) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)СН2OH
2-Метил-2-пропанол (140 мл), Н2О (140 мл) и AD-mix-? (39,2 г) объедин ли вместе и
охлаждали до 0°С. 1-Фтор-3-дифторметокси-5-винилбензол (5,0 г; 26,4 ммоль; смотри
стадию (4) выше) немедленно раствор ли в небольшом количестве 2-метил-2-пропанола и
гетерогенную смесь энергично перемешивали при 0°С до тех пор, пока ТСХ не показывала
отсутствие исходного материала. Реакцию гасили при 0°С путем добавлени сульфита
натри (42,0 г) и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение
60 мин. Реакционную смесь экстрагировали Et2O (3Ч120 мл). Объединенные органические
экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэшхроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/EtOAc (3:2) позволила
получить указанное в подзаголовке соединение (5,8 г; 98%) в виде бесцветного масла.
Rf=0,41 (CHCl3/EtOAc (3:2)).
1
H ЯМР (300 МГц; COCl3) ? 6.96-6.99 (m, 2H), 6.77-6.82 (m, 1H), 6.51 (t, JH-F=73 Гц, 1H),
4.79-4.85 (m, 1H), 3.76-3.84 (m, 1H), 3.58-3.66 (m, 1H), 2.66 (d, J=3 Гц, 1H),2.00 (t, J=6 Гц, 1H).
ВЭЖХ-анализ: 89,2%, >99% е.е., колонка ChiralPak AD (подвижна фаза Нех/EtOH (95:
5)).
(6) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS
Раствор Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH (5,5 г; 24,7 ммоль; смотри стадию (5)
выше), 4-(диметиламино)пиридина (121 мг; 1,0 ммоль) и триэтиламина (3,0 г; 29,6
ммоль) в безводном CH2Cl2 (100 мл) охлаждали до 0°С. По капл м добавл ли 1,0 М
раствор трет-бутилдиметилсилилхлорида в СН2Cl2 (26,0 мл; 26,0 ммоль), реакционную
смесь оставл ли нагреватьс до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи.
Добавл ли насыщенный раствор хлорида аммони (60 мл) и слои раздел ли. Органический
слой промывали насыщенным раствором хлорида аммони (60 мл) и Н2O (2Ч35 мл),
затем высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэшхроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/Нех (3:1) позволила
получить указанное в подзаголовке соединение (7,9 г; 85%) в виде желтого масла.
Rf=0,47 (CHCl3/Hex (3:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 6.95-6.98 (m, 2H), 6.76-6.79 (m, 1H), 6.51 (t, JH-F=73 Гц, 1H),
4.71-4.74 (m, 1H), 3.75-3.80 (m, 1H), 3.48-3.54 (m, 1H), 2.99 (bs, 1H), 0.91 (s, 9Н),
0.05 (s, 3H), 0.00 (s, 3Н).
(7) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS
К раствору Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS (7,9 г; 0,51 ммоль; смотри стадию
(6) выше) и DIPEA (4,9 г; 48,1 ммоль) в безводном CH2Cl2 (50 мл) при 0°С в атмосфере
азота по капл м добавл ли 2-метоксиэтоксиметилхлорид (6,6 г; 48,1 ммоль). Смесь
перемешивали в течение 24 ч. Добавл ли насыщенный раствор хлорида аммони (70 мл) и
слои раздел ли.
Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида аммони (70 мл) и Н2O
(3Ч60 мл), затем высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что
позволило получить указанное в подзаголовке соединение (8,8 г; 99%) в виде желтого
Страница: 55
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
Rf=0,41 (CHCl3/EtOAc(4:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.20 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6,50 (t, JH-F=73 Гц, 1H),
4.79-4.81 (m, 1H), 4.66-4.68 (m, 2Н), 3.47-3.82 (m, 6H), 3.36 (s, 3Н), 0.85 (s, 9H),
0.01 (s, 3Н), 0.00 (s, 3H).
(8) Ph(3-F)(5-OCHF2)(R)CH(OMEM)CH2OH
К раствору Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (9,3 г; 21,9 ммоль; смотри стадию
(7) выше) в THF (60 мл) при комнатной температуре добавл ли 1,0 М раствор
тетрабутиламмонийфторида в THF (70,0 мл; 70,0 ммоль) и смесь перемешивали в течение
ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали in vacuo. Остаток желтого
цвета раствор ли в Et2O (100 мл) и гексане (100 мл) и последовательно промывали
насыщенным раствором хлорида аммони (2Ч150 мл) и Н2O (3Ч70 мл). Органический слой
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на
силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (1:1) позволила получить указанное в
подзаголовке соединение (4,2 г; 62%) в виде желтого масла.
Rf=0,42 (Нех/EtOAc(1:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 6.91-6.95 (m, 2H), 6.75-6.81 (m, 1H), 6.51 (t, JH-F=73 Гц, 1H),
4.80-4.82 (m, 1H), 4.70-4.74 (m, 2H), 3.88-3.93 (m, 1H), 3.67-3.71 (m, 3Н), 3.53-3.56
(m, 2H), 3.39 (s, 3Н), 2.96-2.99 (m, 1H).
(9) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Раствор Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)СН(ОМЕМ)СН2OH (4,2 г; 13,4 ммоль; смотри стадию (8)
выше) в ацетоне (100 мл) добавл ли к водному 5%-ному раствору NaHCO3 (35 мл). Эту
перемешиваемую на магнитной мешалке гетерогенную смесь охлаждали до 0°С и
добавл ли бромид кали (159 мг; 1,3 ммоль) и 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси,
свободный радикал (2,2 г; 14,1 ммоль). Затем по капл м в продолжение периода времени
20 мин добавл ли гипохлорит натри (5,25%-ный; 30 мл) при энергичном перемешивании
смеси и поддержании температуры 0°С. Через 1 ч добавл ли дополнительное количество
гипохлорита натри (30 мл) и 5%-ный раствор NaHCO3 (35 мл), перемешивание
продолжали при 0°С в течение 2 ч. Ацетон удал ли in vacuo. Водный слой промывали Et2O
(4Ч40 мл). Водный слой подкисл ли до рН 3,5 10%-ной лимонной кислотой и
экстрагировали EtOAc (4Ч50 мл). Затем объединенные EtOAc-экстракты последовательно
промывали H2O (4Ч30 мл) и сол ным раствором (60 мл), высушивали (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в
подзаголовке соединение (4,3 г; 98%) в виде бесцветного масла, которое использовали
без дальнейшей очистки.
Rf=0,74 (CHCl3/МеОН/Et3N (8,0:1,5:0,5)).
1
H ЯМР (300 МГц; ацетон-d6) ? 7.16-7.18 (m, 2Н), 7.16 (t, JH-F=89 Гц, 1Н), 7.00-7.03 (m,
1Н), 5.30 (s, 1H), 4.88 (d, J=7 Гц, 1Н), 4.80 (d, J=7 Гц, 1Н), 3.54-3.75 (m, 2H),
3.46-3.49 (m, 2H), 3.28 (s, 3Н).
(10)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,1 г; 3,4 ммоль; смотри стадию (9)
выше) в DMF (20 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(Teoc)?HCl (2,0 г;
4,4 ммоль), РуВОР (1,9 г; 3,7 ммоль) и DIPEA (1,1 г; 8,4 ммоль). Реакционную смесь
перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи.
Смесь концентрировали in vacuo и остаток дважды хроматографировали на силикагеле с
элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH (15:1) и второй раз EtOAc/EtOH (20:
1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (1,3 г; 56%) в виде
дробимой белой пены.
Rf=0,65 (CHCl3/EtOH (15:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.80-7.84 (m, 2H), 7.40-7.46
(m, 2H), 6.95-7.16 (m, 3Н), 6.92 и 6.88 (t, JH-F=73 Гц, 1H), 5.28 и 5.08 (s, 1H), 5.18-5.22
и 4.70-4.78 (m, 1H), 4.50-4.75 (m, 1H), 4.30-4.49 (m, 2H), 4.21-4.26 (m, 1H), 3.97Страница: 56
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
4.08 (m, 1H), 3.35-3.72 (m, 6H), 3.30 (s, 3Н), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
(11) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Смесь Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (590 мг; 0,87 ммоль; смотри
стадию (10) выше) и четырехбромистого углерода (287 мг; 0,87 ммоль) в 2-пропаноле (20
мл) кип тили с обратным холодильником в течение 1,5 ч. Затем данную смесь
концентрировали in vacuo, распредел ли между Н2О (50 мл) и EtOAc (3Ч50 мл). Водный
слой экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (2Ч10 мл). Объединенные
органические экстракты промывали сол ным раствором (30 мл), затем высушивали
(Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1) позволила получить указанное в подзаголовке
соединение (60 мг; 12%) в виде дробимой белой пены. Rf=0,46 (CHCl3/EtOH (15:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.74 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.357.37 (m, 2Н), 6.97-7.07 (m, 2H), 6.80-6.84 (m, 1H), 6.82 и 6.80 (t, JH-F=73 Гц, 1H), 5.10 и
5.06 (s, 1H), 4.68-4.70 (m, 1H), 3.97-4.60 (m, 6H), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.11 (m,
2H), 0.08 (s, 9Н).
APCI-MS: (M+1)=595 m/z.
(12) Ph(3-F)(5-OCHF2)(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,053 г; 0,089 ммоль; смотри стадию
(11) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 80 мин при
охлаждении в лед ной бане. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из
смеси вода/ацетонитрил с получением 0,042 г (80%) указанного в заголовке соединени в
виде его TFA-соли.
1
H-ЯМР (300 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.7-7.6 (m, 2H), 7.5-7.4 (m, 2H), 7.1-6.6 (m,
4H), 5.2-5.0 (m, 1H плюс минорный ротамер 1H), приблизительно 4.8 (основной ротамер
предыдущего сигнала, перекрытый сигналом от CD3ОН), 4.6-4.3 (m, 2H), 4.26 (m, 1H,
основной ротамер), 4.10 (m, 1H, основной ротамер), 3.96 (m, 1H, минорный ротамер),
3.89 (m, 1H, минорный ротамер), 2.60 (m, 1H, минорный ротамер), 2.44 (m, 1H, основной
ротамер), 2.19 (m, 1H, основной ротамер), 2.05 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.8, 172.0,
167.0.
ESI-MS+: (M+1)=451 (m/z).
Пример 26
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(1) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 г; 3,1 ммоль; смотри пример
25(9) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(OMe)?2HCl
(1,4 г; 4,1 ммоль), РуВОР (1,8 г; 3,4 ммоль) и DIPEA (1,0 г; 7,8 ммоль). Реакционную
смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение
ночи. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды хроматографировали на
силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH (15:1) и второй раз
EtOAc, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (1,5 г; 79%) в виде
дробимой белой пены.
Rf=0,24 (EtOAc).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.58-7.62 (m, 2H), 7.32-7.38
(m, 2H), 7.03-7.16 (m, 3Н), 6.92 и 6.88 (d, JH-F=73 Гц, 1Н), 5.27 и 5.08 (s, 1Н), 5.22-5.15
и 4.75-4.80 (m, 1H), 4.38-4.65 (m, 5Н), 3.92-4.27 (m, 1H), 3.82 (s, 3Н), 3.43-3.68
(m, 4H), 3.29 (s, 3Н), 2.28-2.85 (m, 2H).
(2)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Смесь Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (828 мг; 2,33 ммоль; смотри
стадию (1) выше) и четырехбромистого углерода (525 мг; 2,33 ммоль) в 2-пропаноле (20
мл) кип тили с обратным холодильником в течение 8 ч и затем перемешивали при
комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали in vacuo и остаток
Страница: 57
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
распредел ли между H2O (70 мл) и EtOAc (50 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc
(2Ч25 мл). Затем объединенные органические экстракты промывали сол ным раствором
(35 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэшхроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1) позволила
получить указанное в заголовке соединение (520 мг; 74%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 73-81°С.
Rf=0,43 (CHCl3/EtOH(15:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.59 (d, J=8 Гц, 2H), 7.327.37 (m, 2H), 7.05-7.14 (m, 2H), 6.87-6.92 (m, 1H), 6.90 и 6.86 (t, JH-F= 73 Гц, 1H), 5.13-5.18
и 4.75-4.85 (m, 2H), 4.15-4.45 (m, 4H), 3.81 (s, 3Н), 2.10-2.75 (m, 2H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.0, 171.4,
153.9.
APCI-MS: (M+1)=481 m/z.
Пример 27
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 1,3-Дибром-5-бензилоксибензол
Гидрид натри (9,9 г; 0,414 моль, 95%-ный, безводный) добавл ли порци ми к
перемешиваемому раствору бензилового спирта (41,0 г; 0,394 моль) в THF (1,0 л) при
комнатной температуре в атмосфере азота и перемешивали в течение 1 ч. К этому
раствору по капл м добавл ли 1,3-дибром-5-фторбензол (100,0 г; 0,394 моль). После
перемешивани в течение ночи смесь распредел ли между Н2O (600 мл) и EtOAc (4Ч600
мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием гексанами
позволила получить указанное в подзаголовке соединение (101,3 г; 75%) в виде желтого
масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.30-7.48 (m, 5H), 7.18 (s, 1H), 7.06 (s, 2H), 4.99 (s, 2H).
(2) 3,5-Дибромфенол
Хлорид алюмини (11,7 г; 87,6 ммоль) добавл ли порци ми к раствору 1,3-дибром-5бензилоксибензола (10,0 г; 29,2 ммоль; смотри стадию (1) выше) и N,N-диметиланилина
(35,4 г; 292 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота.
Через 30 мин смесь распредел ли между 1 н. HCl (300 мл) и EtOAc (5Ч150 мл).
Объединенные органические экстракты промывали насыщенным NaHCOз (150 мл) и затем
сол ным раствором (150 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in
vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (9:1)
позволила получить указанное в подзаголовке соединение (6,1 г; 82%) в виде твердого
вещества белого цвета.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.21 (s, 1Н), 6.97 (s, 2H), 5.88 (bs, 1 Н).
(3) 1,3-Дибром-5-монофторметоксибензол
В тарированную, герметично закрытую, наход щуюс под давлением круглодонную
колбу вместимостью 350 мл, содержащую суспензию 3,5-дибромфенола (10,0 г; 39,7
ммоль; смотри стадию (2) выше) и Cs2СО3 (20,7 г; 63,5 ммоль) в DMF (150 мл), при -78°С
добавл ли хлорфторметан посредством барботировани в течение 5 мин через мембрану.
Мембрану замен ли на тефлоновую пробку, колбу затем герметично закрывали и
оставл ли нагреватьс до комнатной температуры, затем колбу взвешивали и определ ли,
что в ней содержитс 9,0 г (131 ммоль) хлорфторметана. Данный раствор нагревали на
масл ной бане, установленной на 70°С, в течение ночи. Колбу охлаждали до комнатной
температуры, осторожно сбрасывали давление и содержимое разбавл ли водой (100 мл).
Затем водный слой экстрагировали Et2O (3Ч100 мл), объединенные органические экстракты
высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на
силикагеле с элюированием гексанами позволила получить указанное в подзаголовке
соединение (7,9 г; 71%) в виде твердого вещества белого цвета.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.40 (s, 1H), 7.18 (s, 2H), 5.67 (d, JH-F=53 Гц, 2Н).
Страница: 58
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(4) 1-Бром-3-монофторметокси-5-винилбензол
Три(бутил)винилолово (10,0 г; 31,4 ммоль) по капл м добавл ли к раствору 1,3-дибром5-монофторметоксибензола (8,5 г; 29,9 ммоль; смотри стадию (3) выше),
тетракис(трифенилфосфин)паллади (0) (690 мг; 0,599 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4метилфенола (на кончике шпател ) в толуоле (100 мл) в атмосфере азота. Смесь
перемешивали при 70°С в течение 8 ч. Смесь охлаждали до 0°С и добавл ли 1 н. NaOH
(70 мл). Через 1 ч смесь затем экстрагировали с помощью СН2Cl2 (3Ч300 мл),
объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием гексанами
позволила получить указанное в подзаголовке соединение (4,3 г; 57%) в виде
бесцветного масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.30 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.60 (dd. J=6
Гц, J=11 Гц, 1H), 5.74 (d, J=16 Гц, 1H), 5.67 (d, JH-F=53 Гц, 2H), 5.32 (d, J=8 Гц, 1H).
(5) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH
2-Метил-2-пропанол (100 мл), Н2О (100 мл) и AD-mix-? (27,5 г) объедин ли вместе и
охлаждали до 0°С. Немедленно добавл ли 1-бром-3-монофторметокси-5-винилбензол (4,3
г; 17,3 ммоль; смотри стадию (4) выше), и данную гетерогенную смесь энергично
перемешивали при 0°С до подтверждени с помощью ТСХ отсутстви исходного
материала. Реакцию гасили при 0°С добавлением насыщенного сульфита натри (200 мл),
затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 60 мин.
Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (3Ч150 мл). Объединенные органические
экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило
получить указанное в подзаголовке соединение (4,9 г; 100%) в виде бесцветного масла,
которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.30 (s, 1Н), 7.15 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.70 (d, JH-F=53 Гц,
2Н), 4.62-4.70 (m, 1H), 3.52-3.70 (m, 2H).
ВЭЖХ-анализ: 92,1%; 96,9% е.е., колонка ChiralPak AD (подвижна фаза Нех/EtOH(95:
5)).
(6) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS
К раствору Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 г; 18,6 ммоль; смотри стадию (5)
выше), 4-(диметиламино)пиридина (453 мг; 3,71 ммоль) и DIPEA (8,9 г; 93,0 ммоль) в
безводном CH2Cl2 (200 мл) по капл м добавл ли 1,0 М раствор третбутилдиметилсилилхлорида в CH2Cl2 (22,3 мл; 22,3 ммоль). Реакционную смесь
перемешивали 10 ч при комнатной температуре. К смеси добавл ли DIPEA (8,9 г; 93,0
ммоль) и 2-метоксиэтоксиметилхлорид (13,9 г; 111 ммоль) по капл м. Через 16 ч
добавл ли дополнительное количество 2-метоксиэтоксиметилхлорида (2,2 г) и
реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Смесь разбавл ли Н2O (100 мл) и
слои раздел ли. Затем водный слой экстрагировали CH2Cl2 (3Ч200 мл), объединенные
органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo.
Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (5:1) позволила
получить указанное в подзаголовке соединение (4,8 г; 55%) в виде бесцветного масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.29 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.74 (d, JH-F=53 Гц,
2H), 4.84 (d, J=7 Гц, 1H), 4.70-4.74 (m, 2H), 3.50-3.91 (m, 6H), 3.42 (s, 3Н), 0,90
(s, 9H), 0.05 (s, 3Н), 0.01 (s, 3H).
(7) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH
К раствору Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (4,7 г; 10,1 ммоль; смотри
стадию (6) выше) в THF (100 мл) добавл ли 1,0 М раствор тетрабутиламмонийфторида в
THF (13,1 мл; 13,1 ммоль) при комнатной температуре и смесь перемешивали 1 ч. Затем
смесь распредел ли между Н2O (100 мл) и EtOAc (3Ч100 мл), объединенные органические
экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило
получить указанное в подзаголовке соединение (3,3 г; 92%) в виде бесцветного масла,
которое использовали без дальнейшей очистки.
Страница: 59
RU 2 300 521 C2
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.22 (s, 1Н), 7.14 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.71 (d, JH-F=53 Гц,
2Н), 4.80-4.82 (m, 1H), 4.58-4.66 (m, 2H), 3.71-3.77 (m, 1H), 3.39-3.65 (m, 5Н), 3.27 (s, 3H).
(8)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Раствор Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH (2,1 г; 6,0 ммоль; смотри стадию (7)
выше) в ацетоне (40 мл) добавл ли к водному 5%-ному раствору NaHCO3 (15 мл). Эту
перемешиваемую с помощью магнитной мешалки гетерогенную смесь охлаждали до 0°С,
к ней добавл ли бромид кали (70 мг; 0,60 ммоль) и 2,2,6,6-тетраметил-1пиперидинилокси, свободный радикал (976 мг; 5,8 ммоль). Затем по капл м добавл ли
гипохлорит натри (5,25%-ный; 15 мл) в течение периода 10 мин при энергичном
перемешивании смеси и поддержании температуры 0°С. Через 1 ч добавл ли
дополнительное количество гипохлорита натри (10 мл) и раствора NaHCO3 (20 мл) и
перемешивание продолжали при 0°С в течение дополнительных 4 ч. Ацетон удал ли на
роторном испарителе. Водный слой разбавл ли 10%-ным раствором NaHCO3 (30 мл) и
промывали Et2O (3Ч20 мл). Водный слой подкисл ли до рН 3,5 10%-ной лимонной кислотой
и экстрагировали EtOAc (3Ч40 мл). Затем объединенные EtOAc-экстракты промывали Н2O
(3Ч50 мл) и сол ным раствором (50 мл), высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение
(1,7 г; 78%) в виде бесцветного масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.38 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.76 (d, JH-F=53 Гц,
2H), 5.21 (s, 1H), 4.83 (d, J=7 Гц, 1H), 4.75 (d, J=7 Гц, 1H), 3.62-3.78 (m, 2H),
3.48-3.52 (m, 2H), 3.32 (s, 3H).
(9) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 г; 2,72 ммоль; смотри стадию
(8) выше) в DMF (20 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(Teoc)?HCl (1,6 г;
3,5 ммоль), РуВОР (1,6 г; 3,0 ммоль) и DIPEA (880 мг; 6,81 ммоль). Реакционную смесь
перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи.
Смесь концентрировали in vacuo и остаток дважды хроматографировали на силикагеле с
элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH (15:1), а во второй раз смесью
EtOAc/EtOH (20:1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (1,2 г;
62%) в виде дробимой белой пены.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, сложна смесь ротамеров) ? 7.80-7.84 (m, 2H), 7.40-7.46
(m, 2H), 7.13-7.32 (m, 3Н), 5.84-5.87 (m, 1H), 5.67-5.69 (m, 1H), 5.25 и 5.07 (s,
1H), 5.18-5.23 и 4.80-4.88 (m, 1H), 3.97-4.79 (m, 8H), 3.60-3.71 (m, 2H), 3.40-3.53
(m, 2H), 3.32 (s, 3Н), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9Н).
(10) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Смесь Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (347 мг; 0,478 ммоль; смотри
стадию (9) выше) и четырехбромистого углерода (159 мг; 0,478 ммоль) в 2-пропаноле (10
мл) кип тили с обратным холодильником в течение 1,5 ч. Смесь концентрировали in
vacuo, затем распредел ли с помощью Н2O (20 мл) и EtOAc (3Ч30 мл). Объединенные
органические слои высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэшхроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1) позволила
получить указанное в подзаголовке соединение (59 мг; 19%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 81-87°С.
Rf=0,58 (CHCl3/EtOH (9:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, сложна смесь ротамеров) ? 7.84 (d, J=8 Гц, 2H), 7.407.48 (m, 2H), 7.18-7.30 (m, 3Н), 5.80 (d, JH-F=53 Гц, 2H), 5.21 и 5.15 (s, 1H), 5.18-5.24 и
4.80-4.88 (m. 1H), 3.98-4.54 (m, 6H), 2.10-2.70 (m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
APCI-MS: (M+1)=637 m/z.
(11) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,073 г; 0,11 ммоль; смотри стадию
(10) выше) раствор ли в 5 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 90 мин,
одновременно охлажда на лед ной бане. TFA выпаривали и остаток очищали
Страница: 60
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
препаративной ВЭЖХ с использованием СН3CN/0,1 М NH4OAc (30:70). Подход щие
фракции упаривали и высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил с
получением 49 мг (77%) указанного в заголовке соединени в виде его ацетатной соли.
1
H-ЯМР (300 МГц; CD3OD; ротамеры) ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.54 (m, 2H), 7.37 (s, 1H,
основной ротамер), 7.33 (s, 1H, минорный ротамер), 7.25-7.1 (m, 2H), 5.75 (d, 2H),
5.22 (m, 1H, минорный ротамер), 5.18 (s, 1H, основной ротамер), 5.11 (s, 1H, минорный
ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 2H), 4.37 (m, 1H, основной
ротамер), 4.16 (m, 1H, основной ротамер), 4.1-3.9 (m, 2H, два сигнала от минорного
ротамера), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.30 (m,
1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер), 1.89 (s, 3Н).
ESI-MS+: (М+1)=493/495 (m/z).
Пример 28
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
(1) 1,3-Дибром-5-дифторметоксибензол
В тарированную, герметично закрытую, наход щуюс под давлением круглодонную
колбу вместимостью 350 мл, содержащую раствор 3,5-дибромфенола (10,0 г; 39,7 ммоль;
смотри пример 27(2) выше) в 2-пропаноле (100 мл) и 30%-ном КОН (80 мл), при -78°С
добавл ли хлордифторметан посредством барботировани в течение 15 мин через
мембрану. Мембрану мен ли на тефлоновую пробку, затем колбу герметично закрывали и
оставл ли нагреватьс до комнатной температуры, тогда колбу взвешивали и определ ли,
что в ней содержитс 12,0 г (138 ммоль) хлордифторметана. Данный раствор кип тили с
обратным холодильником в течение ночи на масл ной бане, установленной на 80°С.
Колбу охлаждали до комнатной температуры, осторожно сбрасывали давление и
содержимое разбавл ли Н2O (200 мл). Водный слой экстрагировали CHCl3 (2Ч150 мл),
затем объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и
концентрировали in vacuo. Остаток очищали дистилл цией с использованием трубки с
шаровым расширением (Kugelrohr) при 80°С и 26,7 Па (0,2 мм рт.ст.), что позволило
получить указанное в подзаголовке соединение (9,6 г; 80%) в виде прозрачной жидкости.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.55 (s, 1H), 7.26 (s, 2H), 6.52 (t, JH-F=68 Гц, 1Н).
(2) 1-Бром-3-дифторметокси-5-винилбензол
Три(бутил)винилолово (10,5 г; 33,1 ммоль) по капл м добавл ли к раствору 1,3-дибром5-дифторметоксибензола (9,1 г; 30,1 ммоль; смотри стадию (1) выше),
тетракис(трифенилфосфин)паллади (0) (700 мг; 0,60 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4метилфенола (на кончике шпател ) в толуоле (125 мл) в атмосфере азота. Смесь
перемешивали при 50°С в течение ночи. Смесь охлаждали до 0°С и добавл ли 1 н. NaOH
(70 мл). Через 1 ч смесь затем экстрагировали CH2Cl2 (3Ч300 мл), объединенные
органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo.
Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием гексанами позволила получить
указанное в подзаголовке соединение (5,1 г; 68%) в виде бесцветного масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.53 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.60 (dd, J=6
Гц, J=11 Гц, 1H), 6.57 (t, JH-F=68 Гц, 1H), 5.77 (d, J=11 Гц, 1H), 5.36 (d, J=8 Гц, 1Н).
(3) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH
2-Метил-2-пропанол (150 мл), H2O (150 мл) и AD-mix-? (27,8 г) объедин ли вместе и
охлаждали до 0°С. Немедленно добавл ли 1-бром-3-дифторметокси-5-винилбензол (4,6 г;
18,6 ммоль; смотри стадию (2) выше), и данную гетерогенную взвесь энергично
перемешивали при 0°С до подтверждени с помощью ТСХ отсутстви исходного
материала, затем раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в
течение ночи. Реакцию гасили при 0°С добавлением насыщенного сульфита натри (300
мл) и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 60 мин.
Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (3Ч200 мл). Объединенные органические
экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo, что позволило
получить указанное в подзаголовке соединение (5,0 г; 95%) в виде бесцветного масла,
Страница: 61
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.43 (s, 1Н), 7.23 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.86 (t, JH-F=75 Гц,
1H), 4.64-4.67 (m, 1H), 3.54-3.59 (m, 2H).
ВЭЖХ-анализ: 88,6%; 96,3% е.е., колонка ChiralPak AD (подвижна фаза Нех/EtOH (95:
5)).
(4) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS
К раствору Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 г; 17,3 ммоль; смотри стадию (3)
выше), 4-(диметиламино)пиридина (420 мг; 3,5 ммоль) и DIPEA (11,2 г; 86,3 ммоль) в
безводном CH2Cl2 (250 мл) по капл м добавл ли 1,0 М раствор третбутилдиметилсилилхлорида в CH2Cl2 (20,7 мл; 20,7 ммоль). Реакционную смесь
перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К смеси по капл м добавл ли
DIPEA (11,2 г; 86,3 ммоль) и 2-метоксиэтоксиметилхлорид (12,9 г; 104 ммоль). Через 3
сут. добавл ли дополнительное количество 2-метоксиэтоксиметилхлорида (3,3 г) и
реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Смесь разбавл ли водой (250 мл) и
слои раздел ли. Водный слой экстрагировали CH2Cl2 (2Ч250 мл), затем объединенные
органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo.
Флэш-хроматографи на силикагеле с элюированием смесью Нех/EtOAc (4:1) позволила
получить указанное в подзаголовке соединение (4,3 г; 51%) в виде бесцветного масла.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.40 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.58 (t, JH-F=75 Гц, 1H),
4.84 (d, J=7 Гц, 1H), 4.70-4.74 (m, 2H), 3.50-3.91 (m, 6H), 3.42 (s, 3Н), 0,90 (s,
9H), 0.12 (s, 3Н), 0.05 (s, 3H).
(5) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)СН(OMEM)СН2ОН
К раствору Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (3,3 г; 6,9 ммоль; смотри стадию
(4) выше) в THF (60 мл) добавл ли 1,0 М раствор тетрабутиламмонийфторида в THF (9,0
мл; 9,0 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение
45 мин, затем смесь распредел ли между водой (150 мл) и EtOAc (2Ч120 мл).
Объединенные органические фазы высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали
in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (2,5 г; 98%) в
виде желтого масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.35 (s, 1Н), 7.21 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.83 (t, JH-F=73 Гц,
1H), 4.73 (d, J=7 Гц, 1H), 4.59-4.68 (m, 2H), 3.40-3.80 (m, 6H), 3.26 (s, 3H).
(6) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Раствор Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH (3,0 г; 8,1 ммоль; смотри стадию (5)
выше) в ацетоне (60 мл) добавл ли к водному 5%-ному раствору NaHCO3 (25 мл). Эту
перемешиваемую с помощью магнитной мешалки гетерогенную смесь охлаждали до 0°С,
затем добавл ли бромид кали (100 мг; 0,81 ммоль) и 2,2,6,6-тетраметил-1пиперидинилокси, свободный радикал (1,3 г; 8,5 ммоль). Затем по капл м добавл ли
гипохлорит натри (5,25%-ный; 19 мл) в течение периода 10 мин при энергичном
перемешивании смеси и поддержании температуры 0°С. Через 1 ч добавл ли
дополнительное количество гипохлорита натри (17 мл) и раствора NaHCO3 (34 мл),
перемешивание продолжали при 0°С в течение дополнительных 4 ч. Ацетон удал ли на
роторном испарителе. Водный слой разбавл ли 10%-ным раствором NaHCO3 (30 мл) и
промывали Et2O (3Ч20 мл). Водный слой подкисл ли до рН 3,5 10%-ной лимонной кислотой
и экстрагировали EtOAc (3Ч40 мл). Объединенные EtOAc-слои промывали Н2O (3Ч50 мл)
и сол ным раствором (50 мл) и затем сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали
in vacuo, что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (2,1 г; 66%) в
виде бесцветного масла, которое использовали без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.51 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.88 (t, JH-F=73 Гц,
1H), 5.21 (s, 1H), 4.84 (d, J=7 Гц, 1H), 4.76 (d, J=7 Гц, 1Н), 3.62-3.80 (m, 2H),
3.48-3.52 (m, 2H), 3.32 (s, 3H).
(7) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
К раствору Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 г; 2,62 ммоль; смотри стадию
Страница: 62
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(6) выше) в DMF (50 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(Teoc)?HCl (1,5 г;
3,38 ммоль), РуВОР (1,5 г; 2,9 ммоль) и DIPEA (840 мг; 6,50 ммоль). Реакционную смесь
перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи.
Смесь концентрировали in vacuo и остаток хроматографировали на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1), что позволило получить указанное в
подзаголовке соединение (1,1 г; 59%) в виде дробимой белой пены.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, сложна смесь ротамеров) ? 7.79-7.83 (m, 2H), 7.26-7.52
(m, 5Н), 6.94 и 6.91 (t, JH-F=73 Гц, 1Н), 5.27 и 5.07 (s, 1H), 5.20-5.23 и 4.80-4.88 (m,
1H), 4.01-4.79 (m, 8Н), 3.60-3.71 (m, 2H), 3.40-3.53 (m, 2H), 3.32 (s, 3Н), 2.10-2.75
(m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
(8) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Смесь Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (369 мг; 0,496 ммоль; смотри
стадию (7) выше) и четырехбромистого углерода (165 мг; 0,496 ммоль) в 2-пропаноле (10
мл) кип тили с обратным холодильником в течение 12 ч. Смесь концентрировали in vacuo,
затем распредел ли с помощью H2O (15 мл) и EtOAc (5Ч20 мл). Объединенные
органические фазы высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэшхроматографи на силикагеле с элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1) позвол ла
получить указанное в подзаголовке соединение (134 мг; 41%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл.92-98°С.
Rf=0,37 (CHCl3/EtOH (9:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, сложна смесь ротамеров) ? 7.80-7.86 (m, 2H), 7.40-7.48
(m, 2H), 7.10-7.33 (m, 3Н), 6.92 и 6.88 (t, JH-F=73 Гц, 1H), 5.18 и 5.11 (s, 1H), 5.18-5.24
и 4.76-4.80 (m, 1H), 3.98-4.54 (m, 6H), 2.10-2.70 (m, 2H), 1.05-1.11 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
APCI-MS: (M+1)=655 m/z.
(9) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-PabЧTFA
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,081 г; 0,124 ммоль; смотри стадию
(8) выше) раствор ли в 5 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в течение 80 мин с
одновременным охлаждением на лед ной бане. TFA выпаривали и остаток очищали
препаративной ВЭЖХ с использованием СН3CN/0,1 М NH4OAc (30:70). Подход щие
фракции упаривали и высушивали вымораживанием из смеси вода/ацетонитрил с
получением 59 мг (83%) указанного в заголовке соединени в виде его ацетатной соли.
1
H-ЯМР (300 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.8-7.7 (m, 2H), 7.6-7.4 (m, 3Н), 7.3-7.2
(m, 2H), 6.89 (t, 1H, основной ротамер), 6.87 (t, 1H, минорный ротамер), 5.23 (m, 1H,
минорный ротамер), 5.21 (s, 1H, основной ротамер), 5.13 (s, 1H, минорный ротамер),
4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 2H), 4.38 (m, 1Н, основной ротамер), 4.20
(m, 1H, основной ротамер), 4.1-3.9 (m, 2H, два сигнала от минорного ротамера), 2.70
(m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной ротамер), 2.29 (m, 1H, основной
ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер), 1.89 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (75 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.0, 171.7,
167.0.
MS (m/z) 511/513 (M+1) +.
Пример 29
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(1) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
К раствору Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (957 мг; 2,48 ммоль; смотри пример
28(6) выше) в DMF (30 мл) в атмосфере азота при 0°С добавл ли HAze-Pab(OMe)?2HCl
(1,1 г; 3,2 ммоль), РуВОР (1,4 г; 2,7 ммоль) и DIPEA (804 мг; 6,2 ммоль). Реакционную
смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем при комнатной температуре в течение
ночи. Смесь концентрировали in vacuo, остаток дважды подвергали хроматографии на
силикагеле с элюированием первоначально смесью CHCl3/EtOH (9:1) и во второй раз
EtOAc/EtOH (15:1), что позволило получить указанное в подзаголовке соединение (1,1 г;
72%) в виде дробимой белой пены.
Страница: 63
RU 2 300 521 C2
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, сложна смесь ротамеров) ? 7.59-7.65 (m, 2H), 7.20-7.55
(m, 5H), 6.95 и 6.91 (t, JH-F=73 Гц, 1H), 5.27 и 5.07 (s, 1H), 5.18-5.23 и 4.75-4.84 (m,
1H), 3.87-4.89 (m, 6H), 3.84 (s, 3Н), 3.60-3.71 (m, 2H), 3.40-3.53 (m, 2H), 3.32 (s,
3Н), 2.10-2.75 (m, 2H).
(2) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Смесь Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (1,1 г; 1,8 ммоль; смотри
стадию (1) выше) и четырехбромистого углерода (583 мг; 1,8 ммоль) в 2-пропаноле (30
мл) кип тили с обратным холодильником в течение 2,5 сут. В продолжение этого времени
дл полного завершени реакции добавл ли дополнительное количество
четырехбромистого углерода (5 порций по 50 мг с интервалами дл дополнительных 0,90
ммоль). Смесь концентрировали in vacuo, затем распредел ли с помощью Н2О (50 мл) и
EtOAc (5Ч25 мл). Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4),
фильтровали и концентрировали in vacuo. Флэш-хроматографи на силикагеле с
элюированием смесью CHCl3/EtOH (15:1) позволила получить указанное в заголовке
соединение (460 мг; 50%) в виде дробимой белой пены.
Т.пл. 71-75°С.
Rf=0,63 (CHCl3/EtOH (9:1)).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD; сложна смесь ротамеров) ? 7.59 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.207.54 (m, 5Н), 6.90 и 6.87 (t, JH-F=73 Гц, 1Н), 5.18 и 5.11 (s, 1H), 4.76-4.80 (m, 1H), 3.984.54 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 2.10-2.70 (m, 2H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.5, 172.1, 171.6, 154.1.
APCI-MS: (M+1)=542 m/z.
Пример 30
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (смотри за вку на международный патент WO 97/02284, 92 мг; 0,197
ммоль) раствор ли в 10 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и оставл ли взаимодействовать в
течение 10 мин. Растворитель выпаривали, остаток смешивали с Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)(R)CH(OH)C(O)OH (50 мг; 0,188 ммоль; смотри пример 17(5) выше), РуВОР (109 мг; 0,209
ммоль) и окончательно с диизопропилэтиламином (96 мг; 0,75 ммоль) в 2 мл DMF. Смесь
перемешивали в течение 2 ч, затем выливали в 50 мл воды и трижды экстрагировали
EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Неочищенный продукт подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с
элюированием смесью EtOAc/МеОН (9:1). Выход 100 мг (87%).
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.85-7.75 (m, 2H), 7.45-7.25 (m, 7H),
7.11 (m, 1H, основной ротамер), 7.08 (m, 1H, минорный ротамер), 7.05-6.9 (m, 2H),
6.13 (bt, 1H), 5.25-5.05 (m, 3H), 4.77 (m, 1H, частично невидим за сигналом от CD3ОН), 4.53.9 (m, 7H), 2.64 (m, 1H, минорный ротамер), 2.47 (m, 1H, основной ротамер), 2.25 (m,
1H, основной ротамер), 2.13 (m, 1H, минорный ротамер).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Гидроксиламина гидрохлорид (65 мг; 0,94 ммоль) и триэтиламин (0,319 г; 3,16 ммоль)
смешивали в 8 мл THF и обрабатывали ультразвуком в течение 1 ч при 40°С. Добавл ли
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 мг; 0,156 ммоль; смотри стадию (1)
выше) с дополнительными 8 мл THF. Смесь перемешивали при 40°С в течение 4,5 суток.
Растворитель выпаривали и неочищенный продукт очищали препаративной ОФЖХ в смеси
СН3CN/0,1 М NH4OAC (40:60). Выход 30 мг (38%). Чистота 99%.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.6-7.55 (m, 2H), 7.35-7.3 (m, 2H),
7.12 (m, 1Н, основной ротамер), 7.09 (m, 1H, минорный ротамер), 7.05-6.9 (m, 2H),
6.15 (триплет мультиплетов, 1H), 5.15 (m, 1H, минорный ротамер), 5.13 (s, 1H,
основной ротамер), 5.08 (s, 1H, минорный ротамер), 4.77 (m, 1H, основной ротамер),
4.5-4.2 (m, 5H), 4.08 (m, 1H, основной ротамер), 3.97 (m, 1H, минорный ротамер), 2.66
Страница: 64
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(m, 1H, минорный ротамер), 2.50 (m, 1H, основной ротамер), 2.27 (m, 1H, основной
ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер),
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 172.8, 172.2, 171.4, 159.1, 158.9, 154.2.
APCI-MS: (M+1)=497/499 m/z.
Пример 31
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (130 мг; 0,279 ммоль) раствор ли в 15 мл EtOAc, насыщенного HCl (г),
и оставл ли взаимодействовать в течение 10 мин. Растворитель выпаривали и остаток
смешивали с Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)СН(ОН)С(O)ОН (63 мг; 0,188 ммоль; смотри пример
21(5) выше) в 3 мл DMF, РуВОР (147 мг; 0,279 ммоль) и окончательно с
диизопропилэтиламином (134 мг; 1,03 ммоль). Смесь перемешивали в течение 130 мин и
затем выливали в 75 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт подвергали флэш-хроматографии на силикагеле в смеси EtOAc/МеОН (95:5).
Выход 119 мг (79%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 8.06 (bt, 1H), 7.67 (d, 2H), 7.45-7.25 (m, 5H), 7.18 (d,
2H), 6.89 (m, 1H), 6.84 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.84 (s, 1H), 4.79 (m,
1H), 4.66 (дублет мультиплетов, 2H), 4.4-4.3 (m, 2H), 4.10 (дублет мультиплетов, 2H),
4.02 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.28 (m, 1H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Гидроксиламина гидрохлорид (80 мг; 1,16 ммоль) и триэтиламин (0,392 г; 3,87 ммоль)
смешивали в 9 мл THF и обрабатывали ультразвуком в течение 1 ч при 40°С. Добавл ли
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 мг; 0,156 ммоль; смотри стадию (1)
выше) с дополнительными 9 мл THF. Смесь перемешивали при 40°С в течение 48 ч и 3
суток при комнатной температуре. Растворитель выпаривали и неочищенный продукт
очищали препаративной ОФЖХ в смеси СН3CN/0,1 М NH4OAc (30:70). Выход 72 мг (78%).
Чистота 100%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.6-7.55 (m, 2H), 7.35-7.25 (m, 4H),
7.07 (m, 1H, основной ротамер), 7.04 (m, 1H, минорный ротамер), 7.0-6.9 (m, 2H), 5.12
(m, 1H, минорный ротамер), 5.08 (s, 1H, минорный ротамер), 5.04 (s, 1H), 4.78 (m, 1H,
основной ротамер), 4.68 (дублет мультиплетов, 2H), 4.5-4.25 (m, 3Н), 4.20 (дублет
мультиплетов, 2H), 4.06 (m, 1H, основной ротамер), 3.97 (m, 1H, минорный ротамер),
2.65 (m, 1H, минорный ротамер), 2.48 (m, 1H, основной ротамер), 2.27 (m, 1H, основной
ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 172.3, 171.5, 159.8, 154.3.
APCI-MS: (M+1)=479/481 m/z.
Пример 32
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab
(1) Boc-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Z) (смотри за вку на международный патент WO 97/02284; 15,0 г; 0,0321
моль) раствор ли в 150 мл этанола и добавл ли 200 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной
влажности). Смесь перемешивали и гидрировали при атмосферном давлении в течение 2
ч, фильтровали через Hyflo и концентрировали. Продукт использовали без дальнейшей
очистки. 10 г этого продукта (0,029 моль) раствор ли в 300 мл THF. Добавл ли Теос-nнитрофенилкарбонат (10 г; 0,035 моль). В продолжение 3 мин добавл ли раствор
карбоната кали (5,2 г; 0,038 моль) в 50 мл воды, получающийс раствор перемешивали в
течение 3 суток, концентрировали, и остаток трижды экстрагировали EtOAc. Объединенный
органический слой промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт подвергали флэш- хроматографии на силикагеле с использованием смеси
Страница: 65
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
метиленхлорид/ацетон (4:1). Выход 9,8 г (69%).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Teoc) (107 мг; 0,218 ммоль; смотри стадию (1) выше) раствор ли в 10 мл
EtOAc, насыщенного HCl (г), и оставл ли взаимодействовать в течение 10 мин.
Растворитель выпаривали, остаток смешивали с Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (50
мг; 0,198 ммоль; смотри пример 1(8) выше) в 3 мл DMF, РуВОР (115 мг; 0,218 ммоль) и
окончательно с диизопропилэтиламином (104 мг; 0,80 ммоль). Смесь перемешивали в
течение 2 ч, затем выливали в 75 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт подвергали флэш-хроматографии на силикагеле в смеси EtOAc/МеОН (95:5).
Выход 89 мг (72%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.54 (bt, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.12 (m, 1H), 7.08 (d, 2Н),
7.02 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 6.50 (t, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.35-4.15 (m,
3Н), 3.59 (m, 1H), 2.94 (m, 1H), 2.1-1.7 (m, 4H), 1.06 (m, 2H), 0.04 (s, 9H).
(3) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-PabЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc) (85 мг; 0,136 ммоль; смотри стадию
(2) выше) раствор ли в 1 мл метиленхлорида и охлаждали на лед ной бане. Добавл ли
TFA (4 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 90 мин. TFA выпаривали и
остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила. Выход 72 мг (92%). Чистота
94%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.85-7.7 (m, 2H), 7.58 (d, 2H,
основной ротамер), 7.47 (d, 2H, минорный ротамер), 7.35 (m, 1H, основной ротамер),
7.27 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-7.1 (m, 2H), 6.88 (t, 1H), 5.38 (s, 1H, основной
ротамер), 5.22 (s, 1H, минорный ротамер), 4.58 (d, 1H), 4.5-4.2 (m, 2H), 3.8-3.5 (m,
1H), 3.35 (m, 1H), 2.2-1.8 (m, 4H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173.6, 171.1,
167.0.
APCI-MS: (M+1)=481/483 m/z.
Пример 33
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
(1) 4-Азидометил-N-метоксибензамидин
4-Азидометилбензнитрил (17,3 г; 0,109 моль; Nishiyama et al.; Chem. Lett. (1982)
1477) раствор ли в 500 мл толуола и 200 мл абсолютного этанола. Раствор охлаждали
до -10°С и через него барботировали HCl (г) до насыщени . Смесь выдерживали в
холодильнике в течение 2 суток, в продолжение которых испар лась больша часть
растворителей. Добавл ли диэтиловый эфир и осуществл ли декантирование. Продукт
перераствор ли в растворе O-метилгидроксиламина (10,5 г; 0,125 моль) и триэтиламина
(56 мл) в 200 мл метанола. Смесь оставл ли сто ть в течение 3 суток, после чего
метанол выпаривали с добавлением EtOAc. Органическую фазу промывали водой,
разбавл ли НОАс и водным бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и снова
разбавл ли EtOAc до суммарного объема в 500 мл. Образец в объеме 25 мл упаривали
досуха. Остаток составл л 932 мг. Суммарный выход 18,6 г (83%).
(2) 4-Аминометил-N-метоксибензамидин
К раствору 4-азидометил-N-метоксибензамидина (11,3 г; 0,055 моль; смотри стадию (1)
выше) в 200 мл этанола добавл ли 200 мг PtO2. Смесь гидрировали при посто нном
барботировании водородом в течение 4 ч и потом фильтровали через Целит® и
упаривали. Выход 7,34 г (74%).
(3) Boc-Pro-Pab(OMe)
К суспензии Вос-Pro-ОН (9,7 г; 0,045 моль), 4-аминометил-N-метоксибензамидина (7,33
г; 0,041 моль; смотри стадию (2) выше) и диметиламинопиридина (7,8 г; 0,064 моль) в
300 мл ацетонитрила добавл ли EDC, основание (11,7 мл; 0,068 моль). Смесь
перемешивали в течение 18 ч, концентрировали и распредел ли между водой и EtOAc.
Органический слой промывали водой, водным бикарбонатом натри , высушивали
Страница: 66
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
(Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт подвергали флэш-хроматографии на
силикагеле в EtOAc. Выход 9,73 г (63%).
(4) Н-Pro-Pab(OMe)Ч2HCl
Boc-Pro-Pab(OMe) (9,7 г; 0,026 моль; смотри стадию (3) выше) раствор ли в 250 мл
EtOAc. Этот охлажденный во льду раствор насыщали HCl (г) посредством барботировани в течение 5 мин. Продукт немедленно выпадал в осадок, и добавл ли 125 мл абсолютного
этанола. Смесь обрабатывали ультразвуком до тех пор, пока больша часть материала не
переходила в твердое состо ние. Добавл ли диэтиловый эфир (200 мл) и суспензию
фильтровали. Несколько комков, которые не переходили в твердое состо ние, снова
обрабатывали абсолютным этанолом и диэтиловым эфиром. Твердое вещество
высушивали. Выход 7,57 г (86%).
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD) ? 7.74 (d, 2Н), 7.58 (d, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.38 (m, 1H),
3.98 (s, 3Н), 3.45-3.3 (m, 2H), 2.50 (m, 1H), 2.15-2.0 (m, 3H).
(5) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (50 мг; 0,198 ммоль; смотри пример 1(8) выше), HPro-Pab(OMe) (76 мг; 0,218 ммоль; смотри стадию (4) выше) и РуВОР (115 мг; 0,218
ммоль) раствор ли в 2 мл DMF. Добавл ли диизопропилэтиламин (104 мг; 0,80 ммоль) и
смесь перемешивали в течение 2,5 ч. Смесь выливали в 50 мл воды, трижды
экстрагировали EtOAc, объединенную органическую фазу промывали сол ным раствором,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Остаток подвергали флэш-хроматографии на
силикагеле в смеси EtOAc/МеОН (95:5). Выход 37 мг (36%). Чистота 98%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.60 (d, 2H, основной ротамер), 7.57
(d, 2H, минорный ротамер), 7.4-7.1 (m, 5H), 6.89 (t, 1H, основной ротамер), 6.87 (t,
1H, минорный ротамер), 5.35 (s, 1H, основной ротамер), 5.21 (s, 1H, минорный
ротамер), 4.72 (m, 1H, минорный ротамер), 4.5-4.35 (m, 1H и 2H, основной ротамер),
4.3-4.25 (m, 2H, минорный ротамер), 3.814 (s, 3Н, основной ротамер), 3.807 (s, 3Н,
минорный ротамер), 3.75-3.5 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 2.2-1.8 (m, 4H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 173.3, 173.2, 171.3, 171.0, 153.9, 152.4.
APCI-MS: (M+1)=511/513 m/z.
Пример 34
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-((2-амидино)-5пиридинил)
35
40
45
50
(1) 6-Цианоникотинова кислота
К раствору N-оксида никотиновой кислоты (51 г; 0,37 моль) в 1,2 л DMF добавл ли
NaCN (54 г; 1,1 моль) с последующим добавлением триэтиламина (255 мл; 1,83 моль) и
TMSCl (185 мл). Реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 10 ч,
фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток раствор ли в 100 мл 2 н. HCl и
экстрагировали метиленхлоридом. Органические слои объедин ли, концентрировали и
перекристаллизовывали из воды с получением 12 г (22%) продукта.
(2) 5-(Гидроксиметил)пиридин-2-карбонитрил
К раствору 6-цианоникотиновой кислоты (12 г; 0,081 моль; смотри стадию (1) выше) в
THF при 0°С добавл ли Et3N (12,4 мл; 0,0892 моль) с последующим добавлением
этилхлорформиата (8,53 мл; 0,0892 моль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15
Страница: 67
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
мин и добавл ли NaBH4 (6,14 г; 0,162 моль). Затем смесь перемешивали при КТ в
течение ночи, гасили водой и экстрагировали метиленхлоридом. Органический слой
концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением 4 г (20%) спирта.
(3) 5-(Азидометил)пиридин-2-карбонитрил
5-(Гидроксиметил)пиридин-2-карбонитрил (4 г; 0,03 моль; смотри стадию (2) выше)
раствор ли в 25 мл метиленхлорида и охлаждали в лед ной бане. По капл м добавл ли
мезилхлорид (2,32 мл; 0,0300 моль) и затем триэтиламин (4,6 мл; 0,033 моль).
Реакционную смесь перемешивали и после смешивани неочищенный мезилат
обрабатывали NaN3 (7,35 г; 0,113 моль) в 20 мл DMF. Реакционную смесь перемешивали
при 40°С в течение 2 ч, разбавл ли водой и экстрагировали этилацетатом. Органический
слой концентрировали с получением 3,95 г (83%) неочищенного азида.
(4) 5-(трет-Бутоксикарбониламинометил)пиридин-2-карбонитрил
К раствору 5-(азидометил)пиридин-2-карбонитрила (3,95 г; 0,0248 моль; смотри стадию
(3) выше) в 30 мл THF и 10 мл воды добавл ли трифенилфосфин (7,8 г; 0,0298 моль) и
полученную смесь перемешивали в течение 24 ч. Затем добавл ли триэтиламин (3,8 мл;
0,027 моль) с последующим добавлением Вос-ангидрида (5,4 г; 0,025 моль) с
перемешиванием в течение 2 ч. Реакционную смесь распредел ли между водой и
этилацетатом. Органический слой концентрировали и очищали колоночной
хроматографией с получением 2,1 г (36%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 8.6 (s, 1H), 8.0 (d, 1Н), 8.9 (d, 1H), 4.1 (m, 2H), 1.4 (s, 9H).
(5) 5-(Аминометил)пиридин-2-карбонитрил Ч 2HCl
5-(трет-Бутоксикарбониламинометил)пиридин-2-карбонитрил (0,200 г; 0,86 ммоль;
смотри стадию (4) выше) раствор ли в 10 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и перемешивали
в течение 30 мин. Растворитель выпаривали и получали 0,175 г (99%) указанного в
подзаголовке соединени в виде его дигидрохлоридной соли.
1
H ЯМР (500 МГц; D2O) ? 8.79 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 4.38 (s, 2H).
(6) Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)
К смеси 5-(аминометил)пиридин-2-карбонитрила Ч 2HCl (0,175 г; 0,85 ммоль; смотри
стадию (5) выше), Boc-Aze-OH (0,201 г; 1,00 ммоль) и TBTU (0,321 г; 1,00 ммоль) в 5
мл DMF добавл ли диметиламинопиридин (0,367 г; 3,00 ммоль). Смесь перемешивали в
течение ночи и потом выливали в воду и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
органическую фазу промывали водным бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Неочищенный продукт, начинающий кристаллизоватьс , использовали как
таковой на следующей стадии. Выход 0,23 г (73%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 8.66 (s, 1H), 8.2-7.8 (уширенный, 1H), 7.79 (d, 1H),
7.67 (d, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.65-4.5 (m, 2H), 3.94 (m, 1H), 3.81 (m, 1H), 2.6-2.35
(m, 2H), 1.8 (уширенный, 1H), 1.45 (s, 9H).
(7) H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)Ч2HCl
Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,23 г; 0,73 ммоль; смотри стадию (6) выше) раствор ли
в 10 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и перемешивали в течение 30 мин. Растворитель
выпаривали и получали 0,21 г (100%) указанного в подзаголовке соединени в виде его
дигидрохлоридной соли.
1
H ЯМР (500 МГц; D2O) ? 8.64 (s, 1H), 8.0-7.9 (m, 2H), 5.19 (m, 1H), 4.65-4.55 (m,
2H), 4.20 (m, 1H), 4.03 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.64 (m, 1H).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)
К смеси H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)Ч2HCl (0,206 г; 0,713 ммоль; смотри стадию (7)
выше), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,180 г; 0,713 ммоль; смотри пример 1(8)
выше) и РуВОР (0,408 г; 0,784 ммоль) в 5 мл DMF добавл ли диметиламинопиридин (0,367
г; 3,00 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи, потом выливали в воду и трижды
экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали водным
бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт
подвергали флэш-хроматографии на силикагеле в EtOAc с получением чистого продукта.
Страница: 68
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
Выход 0,197 г (61%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 8.63 (m, 1Н), 8.22 (bt, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.67 (m, 1H),
7.21 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 6.56 (t, 1H), 4.97 (bd, 1H), 4.92 (m, 1H),
4.6-4.5 (m, 2H), 4.40 (bd, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.46 (m,
1H), 1.92 (s, 1H).
APCI-MS: (M+1)=451/453 m/z.
(9) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)-С(O)-Aze-NH-СН2-((2-амидино)-5-пиридинил)ЧHOAc
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,200 г; 0,444 ммоль;
смотри стадию (8) выше), ацетат аммони (1,00 г; 0,0130 моль) и N-ацетилцистеин (2,0
г; 0,0122 моль) в 10 мл метанола нагревали при 50°С в течение 2 суток. Препаративна ОФЖХ в смеси СН3CN/0,1 М NH4OAc (30:70) и повторное пропускание соответствующих
фракций в смеси СН3CN/0,1 М NH4OAc (5:95-40:60) позволили получить 60 мг (26%)
чистого указанного в заголовке соединени в виде его ацетатной соли после высушивани вымораживанием из воды и ацетонитрила. Чистота 100%.
1
H ЯМР (500 МГц; D2O, смесь ротамеров) ? 8.68 (s, 1H, основной ротамер), 8.62 (s,
1H, минорный ротамер), 8.05-7.9 (m, 2H), 7.33 (m, 1H, ротамер), 7.27 (m, 1H,
ротамер), 7.22 (m, 1H, ротамер), 7.17 (m, 1H, ротамер), 7.01 (m, 1H, ротамер), 6.84
(t, 1H), 5.32 (s, 1H, основной ротамер), 5.20 (m, 1H, минорный ротамер), 5.13 (s, 1H,
минорный ротамер), 4.88 (m, 1H, основной ротамер), 4.65-4.55 (m, 2H, основной
ротамер), 4.45-4.35 (m, 1H, ротамер плюс 1H, минорный ротамер), 4.31 (d, 1H, минорный
ротамер), 4.2-4.05 (m, 1H плюс 1H, ротамер), 2.80 (m, 1H, минорный ротамер), 2.61 (m,
1H, основной ротамер), 2.33 (m, 1H, основной ротамер), 2.24 (m, 1H, минорный
ротамер), 1.93 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (100 МГц; D2O) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь ротамеров) ?
181.6, 173.3, 172.7, 172.6, 172.3, 162.6, 162.3.
APCI-MS: (M+1)=468/470 m/z.
Пример 35
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-((2-метоксиамидино)-5-пиридинил)
30
35
40
45
50
(1) Вос-NH-СН2-[(2-(амино(гидроксилимино)метил))-5-пиридинил]
5-(трет-Бутоксикарбониламинометил)пиридин-2-карбонитрил (1,00 г; 4,29 ммоль; смотри
пример 34(4) выше) раствор ли в 10 мл этанола и добавл ли гидроксиламина гидрохлорид
(0,894 г; 0,0129 моль) и триэтиламин (1,30 г; 0,0129 моль). Смесь перемешивали при
комнатной температуре в течение 6 суток. Смесь распредел ли между водой и
метиленхлоридом. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом, объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 0,96 г
(84%).
1
H ЯМР (400 МГц; ацетон-d6) ? 9.01 (bs, 1Н), 8.50 (bs, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.70 (m,
1H), 6.58 (уширенный, 1H), 5.70 (уширенный, 2Н), 4.31 (d, 2H), 1.41 (s, 1H).
(2) Вос-Aze-NH-СН2-(2-(амидино)-5-пиридинил)ЧНОАс
Эту реакцию осуществл ли согласно способу, описанному в Judkins et al., Synth.
Comm. (1998) 4351. Суспензию Вос-NH-СН2-[(2-(амино(гидроксилимино)метил))-5пиридинила] (0,910 г; 3,42 ммоль; смотри стадию (1) выше), уксусного ангидрида (0,35
мл; 3,7 ммоль) и 0,35 г 10%-ного Pd/C (50%-ной влажности) в 100 мл уксусной кислоты
гидрировали под давлением 490 кПа (5 атм) в течение 5 ч. Смесь фильтровали через
Страница: 69
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Целит и концентрировали. Остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила
с получением 0,97 г (92%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 8.74 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 4.38 (s, 2H),
1.92 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
(3) Вос-NH-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)
К суспензии Вос-NH-СН2-(2-(амидино)-5-пиридинила)ЧНОАс (0,96 г; 3,1 ммоль; смотри
стадию (2) выше) в 75 мл THF добавл ли раствор карбоната кали (1,07 г; 7,7 ммоль) и
Теос-п-нитрофенилкарбоната (1,14 г; 4,02 ммоль) в 15 мл воды. Смесь перемешивали в
течение ночи. Добавл ли избыток глицина и карбоната кали и реакцию продолжали в
течение 2 ч. THF выпаривали и остаток трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт можно
было использовать без дальнейшей очистки.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 9.31 (уширенный, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.41 (d, 1H), 8.35
(уширенный, 1H), 7.74 (d, 1H), 4.97 (уширенный, 1H), 4.39 (m, 2H), 4.26 (m, 2H), 1.46
(s, 9Н), 1.14 (m, 2H), 0.07 (s, 9H).
(4) Н2N-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)Ч2HCl
Вос-NH-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил-5-пиридинил) (0,23 г; 0,58
ммоль; смотри стадию (3) выше) раствор ли в 25 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и
перемешивали в течение 30 мин. Растворитель выпаривали и продукт использовали без
дальнейшей очистки. Выход 0,21 г (98%).
1
H ЯМР (500 МГц; D2O) ? 8.89 (s, 1H), 8.25 (s, 2H), 4.55 (m, 2H), 4.42 (s, 2H),
1.20 (m, 2H), 0.09 (s, 9H).
(5) Вос-Aze-HN-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)
К раствору Н2N-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинила)Ч2HCl
(0,21 г; 0,57 ммоль; смотри стадию (4) выше), Boc-Aze-OH (0,127 г; 0,631 ммоль) и
TBTU (233 мг; 0,726 ммоль) в 5 мл DMF добавл ли диметиламинопиридин (269 мг; 2,20
ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи, выливали в 100 мл воды и трижды
экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали водным
бикарбонатом натри и водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт
подвергали флэш- хроматографии на силикагеле в EtOAc с получением 170 мг (56%)
желаемого продукта.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 9.33 (уширенный, 1Н), 8.54 (s, 1H), 8.41 (d, 1Н), 8.36
(уширенный, 1H), 7.75 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.26 (m, 2H), 3.93 (m,
1H), 3.80 (m, 1H), 2.6-2.4 (m, 2H), 1.42 (s, 9Н), 1.14 (m, 2H), 0.07 (s, 9Н).
(6) Н-Aze-NH-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)Ч2HCl
Вос-Aze-NH-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил) (170 мг;
0,356 ммоль; смотри стадию (5) выше) раствор ли в 25 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и
перемешивали в течение 30 мин. Растворитель выпаривали и продукт использовали без
дальнейшей очистки. Выход 160 мг (100%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 9.00 (m, 1H), 8.84 (m, 1H), 8.23 (d, 2H), 8.10 (m, 1H),
5.09 (m, 1H), 4.7-4.6 (m, 2H), 4.51 (m, 2H), 4.14 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 2.86 (m,
1H), 2.58 (m, 1H), 1.22 (m, 2H), 0.11 (s, 9H).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-(2(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)
К раствору Н-Aze-NH-СН2-(2-(амино(триметилсилилэтилимино)метил)-5пиридинила)Ч2HCl (160 мг; 0,462 ммоль; смотри стадию (6) выше), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)(R)CH(OH)C(O)OH (131 мг; 0,462 ммоль; смотри пример 1(8) выше) и РуВОР (263 мг; 0,505
ммоль) в 5 мл DMF добавл ли диизопропилэтиламин (0,30 мл; 1,71 ммоль). Смесь
перемешивали в течение ночи, выливали в 100 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc.
Объединенную органическую фазу промывали водным бикарбонатом натри и водой,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт подвергали флэшхроматографии на силикагеле в смеси EtOAc/МеОН (95:5) с получением 148 мг (52%)
Страница: 70
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
желаемого продукта.
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(метоксиамино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил)
Суспензию Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(метоксиамино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинила) (148 мг; 0,242 ммоль; смотри стадию (7)
выше) и O-метилгидроксиламина (202 мг; 2,42 ммоль) в 10 мл ацетонитрила нагревали при
70°С в течение 3 ч. Смесь распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой дважды
экстрагировали EtOAc и объединенную органическую фазу промывали водой, высушивали
(Na2SO4) и упаривали. Неочищенный материал подвергали флэш-хроматографии на
силикагеле в смеси EtOAc/МеОН (95:5) с получением 44 мг (28%) чистого материала.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 8.55 (m, 1H), 8.05 (bt, 1Н), 7.70 (m, 1H), 7.58 (s, 1Н),
7.56 (d, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.50 (t, 1H), 4.92 (s, 1H),
4.89 (m, 1H), 4.55-4.45 (m, 2Н), 4.38 (уширенный, 1H), 4.2-4.1 (m, 3H), 4.00 (s, 3Н),
3.73 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.44 (m, 1H), 0.97 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
(9) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-((2-метоксиамидино)-5-пиридинил)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-(2-(метоксиамино(триметилсилилэтилимино)метил)-5-пиридинил) (44 мг; 0,069 ммоль; смотри стадию (8) выше)
раствор ют в 2 мл TFA и оставл ют взаимодействовать в течение 1 ч. TFA выпаривают и
остаток распредел ют между EtOAc и водным бикарбонатом натри . Водный слой
экстрагируют EtOAc и объединенную органическую фазу промывают водой, высушивают
(Na2SO4) и упаривают. Выход 30 мг (88%). Чистота >95%.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 8.44 (m, 1H), 8.03 (bt, 1H), 7.91 (m, 1H), 7.60 (m, 1H),
7.19 (m, 1H), 7.13 (m, 1H), 7.00 (m, 1H), 6.52 (t, 1H), 5.6-5.45 (уширенный, 2H),
4.90 (s, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.55-4.4 (m, 2H), 4.27 (уширенный, 1Н), 4.12 (m, 1H),
3.92 (s, 3H), 2.68 (m, 1H), 2.41 (m, 1H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173.0, 170.9,
152.6.
APCI-MS: (M+1)=498/500 m/z.
Пример 36
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-((5-амидино)-2-пиримидинил)
35
40
45
50
(1) 2-Амино-2-иминоэтилкарбамат?АсОН
N-Boc-аминоацетонитрил (40,2 г; 257,4 ммоль) и N-ацетилцистеин (42,0 г; 257,4
ммоль) раствор ли в метаноле (300 мл) при 60°С и в течение 18 ч пропускали аммиак.
Растворитель удал ли in vacuo. После ионообменной хроматографии (Амберлит IRA-400
(АсОН)) и перекристаллизации из ацетона получали 28,4 г (53%) указанного в
подзаголовке соединени в виде твердого вещества белого цвета.
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 4.41 (t, J=4.9 Гц, 1 Н), 4.01 (s, 2H), 2.91 (d, J=5.0
Гц, 2H), 2.01 (s, 3Н), 1.46 (s, 9H).
(2) 1,3-Бис(диметиламино)-2-цианотриметинперхлорат
Раствор 3-диметиламиноакрилонитрила (25,0 г; 260,0 ммоль) в хлороформе (75 мл) по
капл м добавл ли к раствору (хлорметилен)диметиламмонийхлорида (50,0 г; 390,1 ммоль)
в хлороформе (175 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали дополнительно 2 ч при
0°С, затем оставл ли нагреватьс до комнатной температуры в течение ночи, потом
нагревали в течение 8 ч при температуре дефлегмации. Растворитель удал ли in vacuo.
Страница: 71
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Остаток добавл ли к смеси перхлората натри (110 мг; 0,898 ммоль) в воде (150 мл) и
этаноле (300 мл). Смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение 15 мин, затем
охлаждали и оставл ли сто ть в течение ночи в холодильнике. Осадок собирали и
перекристаллизовывали из этанола с получением 23,8 г (52%) указанного в подзаголовке
соединени в виде бесцветных игольчатых кристаллов.
Т.пл. 140-141°С.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 8.24 (s, 2H), 3.59 (s, 6H), 3.51 (s, 6H).
(3) Вос-NH-СН2-(5-циано)-2-пиримидин
Смесь трет-бутил-2-амино-2-иминоэтилкарбамата?АсОН (5,0 г; 23,8 ммоль; смотри
стадию (1) выше) и 1,3-бис(диметиламино)-2-цианотриметинперхлората (6,0 г; 23,8 ммоль;
смотри стадию (2) выше) в пиридине (300 мл) перемешивали в атмосфере азота при 7075°С в течение 16 ч и затем нагревали при температуре дефлегмации в течение 6 ч.
Смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удал ли in vacuo. Остаток
экстрагировали гор чей смесью (1:1) этилацетата и хлороформа, фильтровали через
небольшую набивку диоксида кремни и концентрировали с получением неочищенного
продукта. Флэш-хроматографи на диоксиде кремни с элюированием хлороформом дала
4,0 г (71%) указанного в подзаголовке соединени в виде бесцветного масла, которое
при сто нии перешло в твердое состо ние.
Т.пл. 86-87°С.
Rf=0,77 (диоксид кремни , этилацетат/хлороформ (3:2)).
1
H ЯМР (300 МГц; DMSO-d6) ? 9.25 (s, 2H), 7.39 (bt, 1H), 4.39 (d, J=6 Гц, 2Н), 1.38 (s, 9H).
13
С ЯМР (750 МГц; DMSO-d6) ? 170.4, 160.3, 155.8, 115.2, 106.9, 80.0, 46.3, 28.1.
APCl-MS: (M+1)=235 m/z.
(4) Вос-Aze-NH-СН2-((5-циано)-2-пиримидинил)
Вос-NH-СН2-(5-циано)-2-пиримидин (1,14 г; 4,87 ммоль; смотри стадию (3) выше)
раствор ли в 50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), оставили взаимодействовать в течение 1
ч и концентрировали. Остаток раствор ли в 20 мл DMF и охлаждали в лед ной бане.
Добавл ли диизопропилэтиламин (3,5 мл; 0,020 моль), Boc-Aze-OH (1,08 г; 5,37 ммоль) и
HATU (2,80 г; 5,38 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной
температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали и продукт очищали препаративной
ОФЖХ с использованием СН3CN/0,1 М NH4OAc (40:60). Ацетонитрил выпаривали и водный
слой трижды экстрагировали EtOAc. Объединенный органический слой высушивали
(MgSO4) и упаривали. Выход 1,12 г (72%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 8.95 (s, 2H), 4.82 (d, 2H), 4.74 (m, 1H), 3.95 (m, 1H),
3.84 (m, 1H), 2.6-2.4 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
(5) Вос-Aze-NH-СН2-((5-амидино)-2-пиримидинил)ЧНОАс
Раствор Вос-Aze-NH-СН2-((5-циано)-2-пиримидинила) (0,83 г; 2,6 ммоль; смотри
стадию (4) выше), N-ацетилцистеина (0,43 г; 2,6 ммоль) и ацетата аммони (0,60 г; 7,8
ммоль) в 10 мл метанола нагревали при 60°С в атмосфере азота в течение 2 суток.
Растворитель выпаривали и неочищенный материал очищали препаративной ОФЖХ с
использованием градиента СН3CN/0,1 М NH4OAc (от 5:95 до 100:0). Интересующие
фракции высушивали вымораживанием с получением 1,0 г (93%) желаемого материала.
1
H ЯМР (300 МГц; D2O; сигналы, перекрываемые сигналом от HDO) ? 9.17 (s, 2Н),
4.1-3.9 (m, 2H), 2.60 (m, 1Н), 2.29 (m, 1H), 1.93 (s, 3Н), 1.44 (s, 9H).
(6) Вос-Aze-NH-СН2-[(5-(амино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил]
К суспензии Вос-Aze-NH-СН2-((5-амидино)-2-пиримидинила)ЧНОАс (0,95 г; 2,41 ммоль;
смотри стадию (5) выше) в 50 мл THF добавл ли раствор Теос-п-нитрофенилкарбоната
(0,85 г; 3,0 ммоль) и карбоната кали (1,0 г; 7,2 ммоль) в 10 мл воды. Смесь
перемешивали в течение 24 ч, концентрировали и распредел ли между водой и
метиленхлоридом. Органический слой дважды промывали насыщенным водным
бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт
подвергали флэш-хроматографии на силикагеле в смеси гептан/EtOAc (1:1). Выход 1,04 г
Страница: 72
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
(90%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 9.16 (s, 2H), 4.80 (d, 2H), 4.73 (m, 1H), 4.26 (m, 2H),
4.0-3.8 (m, 2H), 2.6-2.4 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.12 (m, 2H), 0.07 (s, 9H).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5(амино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил]
Вос-Aze-NH-СН2-[(5-(амино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил] (0,209 г;
0,437 ммоль; смотри стадию (6) выше) раствор ли в 25 мл EtOAc, насыщенного HCl (г), и
оставл ли взаимодействовать в течение 15 мин. Растворитель выпаривали и остаток
раствор ли в 4 мл DMF. Добавл ли Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,100 г; 0,396
ммоль; смотри пример 1(8) выше), РуВОР (0,231 г; 0,444 ммоль) и диизопропилэтиламин
(0,208 г; 1,61 ммоль) и смесь перемешивали в течение 80 мин. Реакционную смесь
выливали в 100 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенный органический
слой промывали сол ным раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт очищали препаративной ОФЖХ с использованием смеси СН3CN/0,1 М NH4OAc (1:
1). Выход 63 мг (26%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3; смесь ротамеров) ? 9.3 (уширенный, 1H), 9.03 (s, 2H,
минорный ротамер), 9.00 (s, 2H, основной ротамер), 8.25 (m, 1H, основной ротамер),
7.9 (уширенный, 1H), 7.80 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-6.9 (m, 3Н), 6.50 (t, 1H),
5.14 (s, 1H, минорный ротамер), 5.08 (m, 1H, минорный ротамер), 4.94 (s, 1H, основной
ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.7-4.4 (m, 2H), 4.3-3.9 (m, 3H), 3.74 (m,
1H, основной ротамер), 2.7-2.1 (m, 2H), 1.03 (m, 2H), 0.01 (s, 9H).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5-амидино)-2-пиримидинил)ЧTFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5(амино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил] (21 мг; 0,034 ммоль; смотри
стадию (7) выше) раствор ли в 0,5 мл метиленхлорида и охлаждали в лед ной бане.
Добавл ли TFA (2 мл), смесь перемешивали в течение 60 мин и затем концентрировали.
Продукт высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила. Выход 20 мг (100%).
Чистота 100%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD; смесь ротамерных сигналов, перекрываемых сигналом от
HDO) ? 9.08 (s, 2H), 7.4-7.1 (m, 3H), 6.88 (t, 1H, основной ротамер), 6.85 (t, 1H,
минорный ротамер), 5.30 (m, 1H, минорный ротамер), 5.22 (s, 1H, минорный ротамер),
5.20 (s, 1H, основной ротамер), 4.73 (m, 1H, основной ротамер), 4.34 (m, 1H,
ротамер), 4.21 (m, 1H, ротамер), 4.15-3.95 (m, 2H, ротамеры), 2.73 (m, 1H, ротамер),
2.57 (m, 1H, ротамер), 2.45-2.25 (m, 2H, ротамеры).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 173.0, 172.6, 172.1, 171.0, 163.4.
APCl-MS: (M+1)=469/471 m/z.
Пример 37
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-((5-метоксиамидино)-2-пиримидинил)
45
50
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5метоксиамино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил]
Суспензию Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5амино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинила] (40 мг; 0,065 ммоль; смотри
пример 36(7) выше) и O-метилгидроксиламина (33 мг; 0,40 ммоль) в 3 мл ацетонитрила
Страница: 73
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
нагревали при 70°С в течение 3 ч. Смесь распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой
дважды экстрагировали EtOAc, объединенную органическую фазу промывали водой,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 33 мг (79%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3; смесь ротамеров) ? 8.76 (s, 2H, основной ротамер), 8.70
(s, 2H, ротамер), 8.18 (m, 1Н), 7.62 (s, 1H), 7.4-6.9 (m, 4H), 6.50 (bt, 1H), 5.3-4.5
(m, 4H), 4.2-4.05 (m, 3Н), 3.96 (s, 3Н), 3.68 (m, 1H), 2.8-2.2 (m, 2H), 2.1
(уширенный, 1H), 0.96 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-NH-СН2-((5-метоксиамидино)-2-пиримидинил)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-NH-СН2-[(5метоксиамино(триметилсилилэтилимино)метил))-2-пиримидинил] (33 мг; 0,052 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 0,5 мл метиленхлорида и охлаждали в лед ной
бане. Добавл ли TFA (2 мл), смесь перемешивали в течение 2 ч и затем концентрировали.
Продукт высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила. Выход 31 мг(81%). Чистота
100%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD; смесь ротамеров, сигналы перекрываютс сигналом от
HDO) ? 8.96 (s, 2H, ротамер), 8.94 (s, 2H, ротамер), 7.4-7.3 (m, 1H), 7.2-7.1 (m,
2H), 6.88 (t, 1H, ротамер), 6.85 (t, 1H, ротамер), 5.29 (m, 1H, ротамер), 5.24 (s,
1H, ротамер), 5.20 (s, 1H, ротамер), 4.75-4.55 (m, 2H), 4.33 (m, 1H, ротамер), 4.19
(m, 1H, ротамер), 4.15-3.95 (m, 2H, ротамеры), 3.88 (s, 3Н, ротамер), 3.86 (s, 3Н,
ротамер), 2.72 (m, 1H, ротамер), 2.56 (m, 1H, ротамер), 2.45-2.25 (m, 2H, ротамеры).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 172.8, 172.6, 172.1, 171.8, 167.8, 167.7, 155.1, 152.3, 152.1.
APCl-MS: (M+1)=499/501 m/z.
Пример 38
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
30
35
40
45
50
(1) 2-Фтор-4-винилбензнитрил
Раствор 4-бром-2-фторбензнитрила (4,92 г; 0,0246 моль), винилтрибутилолова (0,78 г;
0,246 моль) и тетракистрифенилфосфина (0,67 г; 0,58 ммоль) в 250 мл толуола кип тили
с обратным холодильником в атмосфере азота в течение ночи. Растворитель выпаривали и
остаток подвергали флэш-хроматографии на силикагеле в системе растворителей от смеси
гептан/СН2Cl2 (1:1) до чистого CH2Cl2. Получали бесцветное масло, которое
кристаллизуетс . Выход 3,0 г (82%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.56 (m, 1H), 7.3-7.2 (m, 2H), 6.69 (m, 1H), 5.89 (d,
1H), 5.51 (d, 1H).
(2) 2-Фтор-4-гидроксиметилбензнитрил
Охлажденный раствор (-78°С) 2-фтор-4-винилбензнитрила (1,3 г; 8,8 ммоль; смотри
стадию (1) выше) в 40 мл CH2Cl2 и 5 мл метанола барботировали озоном (50 л/ч; 29 г/м 3)
в течение 30 мин. Дл удалени избытка озона вслед за этим смесь барботировали
аргоном. Добавл ли борогидрид натри (0,67 г; 0,018 моль) и охлаждающую баню убирали.
Смесь перемешивали и реакции позвол ли протекать в течение 1 ч. Смесь упаривали и
добавл ли 2 М HCl. Смесь дважды экстрагировали диэтиловым эфиром и объеди??енную
эфирную фракцию высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт
кристаллизовали. Выход 1,1 г (81%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.59 (m, 1H), 7.3-7.2 (m, 2H), 4.79 (d, 2H), 2.26 (t, 1H).
Страница: 74
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(3) 4-Циано-3-фторбензилметансульфонат
2-Фтор-4-гидроксиметилбензнитрил (1,3 г; 8,6 ммоль; смотри стадию (2) выше)
раствор ли в 50 мл CH2Cl2 и охлаждали в лед ной бане. Добавл ли триэтиламин (0,87 г;
8,6 ммоль) и метансульфонилхлорид (0,99 г; 8,7 ммоль). После перемешивани в течение
1,5 ч реакционную смесь промывали 1 М HCl. Органическую фазу высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Продукт можно было использовать без очистки. Выход бесцветного масла 1,8 г
(92%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.66 (m, 1Н), 7.35-7.3 (m, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.07 (s, 3H).
(4) Азидометил-2-фторбензнитрил
К охлажденному во льду раствору 4-циано-3-фторбензилметансульфоната (1,8 г; 7,9
ммоль; смотри стадию (3) выше) добавл ли азид натри (0,8 г; 0,012 моль). Смесь
перемешивали в течение ночи и затем выливали в 200 мл воды и трижды экстрагировали
диэтиловым эфиром. Объединенную эфирную фазу п ть раз промывали водой,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенное бесцветное масло можно было
использовать без дальнейшей очистки. Выход 1,2 г (87%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.64 (m, 1H), 7.25-7.18 (m, 2H), 4.47 (s, 2H).
(5) 4-Аминометил-2-фторбензнитрил
К суспензии хлорида двухвалентного олова дигидрата (0,45 г; 2,4 ммоль) в 20 мл
ацетонитрила при перемешивании добавл ли тиофенол (1,07 г; 9,7 ммоль) и триэтиламин
(0,726 г; 7,17 ммоль). После этого добавл ли раствор 4-азидометил-2-фторбензнитрила
(0,279 г; 1,58 ммоль; смотри стадию (4) выше) в нескольких миллилитрах ацетонитрила.
Через 1,5 ч азид израсходовалс , и растворитель выпаривали. Остаток раствор ли в
метиленхлориде и трижды промывали 2 М NaOH. Органическую фазу дважды
экстрагировали 1 М HCl. Объединенную кислотную водную фазу промывали
метиленхлоридом и затем подщелачивали 2 М NaOH и трижды экстрагировали
метиленхлоридом. Органическую фазу высушивали (Na2SO4) и упаривали с получением
0,172 г (72%) желаемого указанного в подзаголовке соединени , которое можно было
использовать без очистки.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.58 (m, 1H), 7.3-7.2 (m, 2H), 3.98 (s, 2H), 1.55-1.35
(уширенный, 2Н).
(6) Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
К охлажденному во льду раствору Boc-Aze-OH (0,194 г; 0,96 ммоль) в 5 мл DMF
добавл ли TBTU (0,50 г; 9,6 ммоль). Через 30 мин добавл ли другой раствор, содержащий
4-аминометил-2-фторбензнитрил (0,17 г; 0,81 ммоль; смотри стадию (5) выше) и
диизопропилэтиламин (0,326 г; 2,53 ммоль) в 7 мл DMF. Полученный раствор
перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель выпаривали и
продукт очищали с помощью препаративной ОФЖХ, использу смесь СН3CN/0,1 М NH4OAc
(50:50). Высушивание вымораживанием давало 0,237 г (74%) желаемого указанного в
подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.70 (m, 1H), 7.35-7.25 (m, 2H), 4.65-4.35 (m, 3Н), 4.03.85 (m, 2H), 2.51 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.40 (s, 9H).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 г; 0,354 ммоль; со стадии (6) выше) раствор ют
в 30 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин и
упаривали. Полученный дигидрохлорид и HATU (0,152 г; 0,400 ммоль) раствор ли в 5 мл
DMF. Данный раствор добавл ли к охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)(R)СН(ОН)С(O)ОН (0,101 г; 0,400 ммоль; смотри пример 1(8) выше) в 5 мл DMF.
Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды.
Растворитель выпаривали и продукт очищали с помощью препаративной ОФЖХ в смеси
СН3CN/0,1 М NH4OAc (50:50). Высушивание вымораживанием давало 0,130 г (77%)
желаемого указанного в подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.7-7.6 (m, 1H), 7.35-7.1 (m, 5Н),
Страница: 75
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
6.88 (t, 1H, ротамер), 6.86 (t, 1H, ротамер), 5.25-5.1 (m, 1H плюс минорный ротамер
от следующего протона), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 2H), 4.36 (m, 1H,
основной ротамер), 4.18 (m, 1H, основной ротамер), 4.07 (m, 1H, минорный ротамер),
3.98 (m, 1H, минорный ротамер), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.53 (m, 1H, основной
ротамер), 2.29 (m, 1H, основной ротамер), 2.16 (m, 1H, минорный ротамер).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,130 г; 0,278 ммоль;
смотри стадию (7) выше) раствор ли в 80 мл этанола, насыщенного HCl (г). Смесь
оставл ли взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель
выпаривали и остаток перераствор ли в 100 мл этанола, насыщенного NH3 (г). Реакцию
оставл ли медленно протекать при комнатной температуре в течение двух суток.
Температуру повышали до 50°С и реакцию продолжали в течение следующих 3 суток.
После расходовани исходного материала растворитель выпаривали. Продукт очищали с
помощью препаративной ОФЖХ и высушивание вымораживанием давало 17 мг (13%)
указанного в заголовке соединени в виде его НОАс-соли.
1
H ЯМР (600 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.65-7.6 (m, 1H), 7.4-7.3 (m, 3Н),
7.25-7.1 (m, 2H), 7.15-6.7 (m, 1H), 5.25-5.1 (m, 1H плюс минорный ротамер от
следующего протона), 4.8 (m, 1H, основной ротамер, частично невидимый из-за CD3ОН),
4.6-3.95 (m, 4H), 2.69 (m, 1H, минорный ротамер), 2.56 (m, 1H, основной ротамер),
2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер), 1.90 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 180.6, 173.4, 173.1, 172.9, 164.5, 162.3, 159.8.
APCl-MS: (M+1)=485/487 m/z.
Пример 39
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)
30
35
40
45
50
(1) 2,6-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил
(Метилсульфинил)(метилтио)метан (7,26 г; 0,0584 моль) раствор ли в 100 мл
безводного THF в атмосфере аргона и охлаждали до -78°С. По капл м с перемешиванием
добавл ли бутиллитий в гексане (16 мл; 1,6 М; 0,0256 моль). Смесь перемешивали в
течение 15 мин. Тем временем раствор 3,4,5-трифторбензнитрила (4,0 г; 0,025 ммоль) в
100 мл безводного THF охлаждали до -78°С в атмосфере аргона и упом нутый первым
раствор с помощью канюли в течение периода времени 35 мин добавл ли в последний
раствор. Через 30 мин охлаждающую баню убирали и, когда температура реакционной
смеси достигала комнатной, реакционную смесь выливали в 400 мл воды. THF выпаривали
и оставшийс водный слой трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную
эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 2,0 г (30%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.4-7.25 (m, 2H), 5.01 (s, 1H, диастереомер), 4.91 (s,
1H, диастереомер), 2.88 (s, 3Н, диастереомер), 2.52 (s, 3Н, диастереомер), 2.49 (s,
3Н, диастереомер), 2.34 (s, 3Н, диастереомер), 1.72 (уширенный, 1H).
(2) 2,6-Дифтор-4-формилбензнитрил
2,6-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил (2,17 г; 8,32 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 90 мл THF и добавл ли 3,5 мл концентрированной
серной кислоты. Смесь оставл ли при комнатной температуре на 3 суток и затем выливали
в 450 мл воды. Далее следовала трехкратна экстракци с помощью EtOAc, и
Страница: 76
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
объединенную эфирную фазу дважды промывали водным бикарбонатом натри и сол ным
раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 1,36 г (98%). Положение
формильной группы устанавливали с помощью 13С ЯМР. Сигнал от фторированных
углеродов при 162,7 млн -1 демонстрировал ожидаемый раздвоенный вид с двум посто нными св зи пор дка 260 и 6,3 Гц соответственно, относ щимс к ipso- и метасв занным атомам фтора.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 10.35 (s, 1H), 7.33 (m, 2H).
(3) 2,6-Дифтор-4-гидроксиметилбензнитрил
2,6-Дифтор-4-формилбензнитрил (1,36 г; 8,13 ммоль; смотри стадию (2) выше)
раствор ли в 25 мл метанола и охлаждали в лед ной бане. Порци ми с перемешиванием
добавл ли борогидрид натри (0,307 г; 8,12 ммоль) и реакционную смесь оставл ли на 65
мин. Растворитель выпаривали и остаток распредел ли между диэтиловым эфиром и
водным бикарбонатом натри . Эфирный слой промывали дополнительным количеством
водного бикарбоната натри и сол ным раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Неочищенный продукт быстро кристаллизовалс и мог быть использован без
дальнейшей очистки. Выход 1,24 г (90%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.24 (m, 2H), 4.81 (s, 2H), 2.10 (уширенный, 1Н).
(4) 4-Циано-2,6-дифторбензилметансульфонат
К охлажденному во льду раствору 2,6-дифтор-4-гидроксиметилбензнитрила (1,24 г; 7,32
ммоль; смотри стадию (3) выше) и метансульфонилхлорида (0,93 г; 8,1 ммоль) в 60 мл
метиленхлорида с перемешиванием добавл ли триэтиламин (0,81 г; 8,1 ммоль). Через 3 ч
при 0°С смесь дважды промывали 1 М HCl и один раз водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 1,61 г (89%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.29 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.07 (s, 3Н).
(5) 4-Азидометил-2,6-дифторбензнитрил
Смесь 4-циано-2,6-дифторбензилметансульфоната (1,61 г; 6,51 ммоль; смотри стадию
(4) выше) и азида натри (0,72 г; 0,0111 моль) в 10 мл воды и 20 мл DMF перемешивали
при комнатной температуре в течение ночи. Полученный материал далее выливали в 200
мл воды и трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную эфирную фазу п ть
раз промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Небольшой образец упаривали
дл нужд ЯМР и продукт кристаллизовали. Остаток аккуратно упаривали, но не полностью
досуха. Выход (теоретически 1,26 г) считалс полностью количественным на основании
данных ЯМР и аналитической ВЭЖХ.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.29 (m, 2H), 4.46 (s, 2H).
(6) 4-Аминометил-2,6-дифторбензнитрил
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной в J. Chem.
Res. (M) (1992) 3128. К суспензии 520 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной влажности) в 20 мл
воды добавл ли раствор борогидрида натри (0,834 г; 0,0221 моль) в 20 мл воды. В
результате выдел лс газ. 4-Азидометил-2,6-дифторбензнитрил (1,26 г; 6,49 ммоль;
смотри стадию (5) выше) раствор ли в 50 мл THF и добавл ли к водной смеси в лед ной
бане в течение 15 мин. Смесь перемешивали в течение 4 ч, после чего в нее добавл ли
20 мл 2 М HCl и смесь фильтровали через Целит. Целит промывали дополнительным
количеством воды, объединенную водную фазу промывали EtOAc, затем подщелачивали 2
М NaOH. Далее следовала трехкратна экстракци метиленхлоридом и объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 0,87 г
(80%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.20 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 1.51 (уширенный, 2Н).
(7) 2,6-Дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрил
Раствор 4-аминометил-2,6-дифторбензнитрила (0,876 г; 5,21 ммоль; смотри стадию (6)
выше) раствор ли в 50 мл THF и добавл ли ди-трет-бутилдикарбонат (1,14 г; 5,22 ммоль)
в 10 мл THF. Смесь перемешивали в течение 3,5 ч. THF выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Органический слой трижды промывали 0,5 М HCl и
Страница: 77
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей
очистки. Выход 1,38 г (99%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.21 (m, 2H), 4.95 (уширенный, 1Н), 4.43 (уширенный,
2H), 1.52 (s, 9H).
(8) Вос-Pab(2,6-диF)(OH)
Смесь 2,6-дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрила (1,38 г; 5,16 ммоль;
смотри стадию (7) выше), гидроксиламина гидрохлорида (1,08 г; 0,0155 моль) и
триэтиламина (1,57 г; 0,0155 моль) в 20 мл этанола перемешивали при комнатной
температуре в течение 36 ч. Растворитель выпаривали и остаток распредел ли между
водой и метиленхлоридом. Органический слой промывали водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 1,43 г (92%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.14 (m, 2H), 4.97 (уширенный, 1Н), 4.84 (уширенный,
2H), 4.40 (уширенный, 2H), 1.43 (s, 9H).
(9) Вос-Pab(2,6-диF)ЧНОАс
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной Judkins et
al., Synth. Comm. (1998) 4351. Вос-Pab(2,6-диF)(ОН) (1,32 г; 4,37 ммоль; смотри
стадию (8) выше), уксусный ангидрид (0,477 г; 4,68 ммоль) и 442 мг 10%-ного Pd/C (50%ной влажности) в 100 мл уксусной кислоты гидрировали при 490 кПа (5 атм) в течение
3,5 ч. Смесь фильтровали через Целит, промывали этанолом и упаривали. Остаток
высушивали вымораживанием из ацетонитрила, воды и нескольких капель этанола.
Указанный в подзаголовке продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход
0,149 г (99%).
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD) ? 7.45 (m, 2Н), 4.34 (s, 2H), 1.90 (s, 3Н), 1.40 (s, 9H).
(10) Вос-Pab(2,6-диF)(Teoc)
К раствору Вос-Pab(2,6-диF)ЧНОАс (1,56 г; 5,49 ммоль; смотри стадию (9) выше) в 100
мл THF и 1 мл воды добавл ли 2-(триметилсилил)этил-п-нитрофенилкарбонат (1,67 г; 5,89
ммоль). В течение 5 мин по капл м добавл ли раствор карбоната кали (1,57 г; 0,0114
моль) в 20 мл воды. Смесь перемешивали в течение ночи. THF выпаривали и остаток
распредел ли между водой и метиленхлоридом. Водный слой экстрагировали
метиленхлоридом, объединенную органическую фазу дважды промывали водным
бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на
силикагеле в смеси гептан/EtOAc (2:1) дает 1,71 г (73%) чистого соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; COCl3) ? 7.43 (m, 2H), 4.97 (уширенный, 1Н), 4.41 (уширенный,
2H), 4.24 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H).
(11) Вос-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос)
Вос-Pab(2,6-диF)(Теос) (1,009 г; 2,35 ммоль; смотри стадию (10) выше) раствор ли в
50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 10 мин, упаривали, раствор ли в
18 мл DMF и затем охлаждали в лед ной бане. Добавл ли Boc-Aze-OH (0,450 г; 2,24
ммоль), РуВОР (1,24 г; 2,35 ммоль) и, наконец, диизопропилэтиламин (1,158 г; 8,96
ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем выливали в 350 мл воды и
трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали сол ным
раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в
смеси гептан/EtOAc (1:3) дала 1,097 г (96%) желаемого соединени .
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.46 (m, 2H), 4.65-4.5 (m, 3Н), 4.23 (m, 2H), 3.87 (m,
1H), 3.74 (m, 1H), 2.45-2.3 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H).
(12) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Teoc)
Вос-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (0,256 г; 0,500 ммоль; смотри стадию (11) выше)
раствор ли в 20 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 10 мин, упаривали и
раствор ли в 5 мл DMF. Добавл ли Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,120 г; 0,475
ммоль; смотри пример 1(8) выше), РуВОР (0,263 г; 0,498 ммоль) и, наконец,
диизопропилэтиламин (0,245 г; 1,89 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2
ч, затем выливали в 350 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
Страница: 78
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
органическую фазу промывали сол ным раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Флэш-хроматографи на силикагеле в EtOAc дала 0,184 г (60%) желаемого указанного в
подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.55-7.45 (m, 2H), 7.32 (m, 1H,
основной ротамер), 7.27 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-7.1 (m, 2H), 6.90 (t, 1Н,
основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.15 (s, 1H, основной ротамер),
5.12 (m, 1H, минорный ротамер), 5.06 (s, 1H, минорный ротамер), 4.72 (m, 1H, основной
ротамер), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.30 (m, 1H, основной ротамер), 4.24 (m, 2H), 4.13 (m,
1H, основной ротамер), 4.04 (m, 1H, минорный ротамер), 3.95 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.62 (m, 1H, минорный ротамер), 2.48 (m, 1H, основной ротамер), 2.22 (m,
1H, основной ротамер), 2.10 (m, 1H, минорный ротамер), 1.07 (m, 2H), 0,07 (m, 9H).
(13) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (81 мг; 0,127 ммоль; смотри
стадию (12) выше) раствор ли в 0,5 мл метиленхлорида и охлаждали в лед ной бане.
Добавл ли TFA (3 мл) и реакционную смесь оставл ли на 75 мин. TFA выпаривали и
остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила. Неочищенный продукт
очищали препаративной ОФЖХ в смеси СН3CN/0,1 М NH4OAC (35:65), получа 39 мг
(55%) указанного в заголовке соединени в виде его НОАс-соли, чистота 99%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.5-7.4 (m, 2H), 7.32 (m, 1H, основной
ротамер), 7.28 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-7.1 (m, 3Н), 6.90 (t, 1H, основной
ротамер), 6.86 (t, минорный ротамер), 5.15 (s, 1H, основной ротамер), 5.14 (m, 1H,
минорный ротамер), 5.07 (s, 1H, минорный ротамер), 4.72 (m, 1H, основной ротамер),
4.65-4.45 (m, 2H), 4.30 (m, 1H, основной ротамер), 4.16 (m, 1H, основной ротамер),
4.03 (m, 1H, минорный ротамер), 3.95 (m, 1H, минорный ротамер), 2.63 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.48 (m, 1H, основной ротамер), 2.21 (m, 1H, основной ротамер), 2.07 (m,
1H, минорный ротамер), 1.89 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (75 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 171.9, 171.2, 165.0, 162.8, 160.4.
APCl-MS: (M+1)=503/505 m/z.
Пример 40
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(OMe)
35
40
45
50
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Оме, Теос)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (64 мг; 0,099 ммоль;
смотри пример 39(12) выше) и O-метилгидроксиламина гидрохлорида (50 мг; 0,60 ммоль) в
4 мл ацетонитрила нагревали при 70°С в течение 3 ч. Растворитель выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой дважды экстрагировали EtOAc,
объединенную органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 58 мг (87%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.90 (bt, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.25-6.95 (m, 5H), 6.51 (t,
1H), 4.88 (s, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.6-4.5 (m, 2H), 4.4-3.9 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 3.63
(m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.87 (уширенный, 1H), 0,98 (m, 2H), 0.01 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(ОМе, Теос) (58 мг; 0,086 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 3 мл TFA, охлаждали в лед ной бане и оставл ли
Страница: 79
RU 2 300 521 C2
5
10
взаимодействовать на 2 ч. TFA выпаривали и остаток раствор ли в EtOAc. Органический
слой дважды промывали водным карбонатом натри и водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила с получением
42 мг (92%) указанного в заголовке соединени . Чистота 94%.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.95 (bt, 1H), 7.2-7.1 (m, 4H), 6.99 (m, 1H), 6.52 (t,
1H), 4.88 (s, 1H), 4.85-4.75 (m, ЗН), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.29 (уширенный, 1H), 4.09
(m, 1H), 3.89 (s, ЗН), 3.69 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.85 (уширенный, 1H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.1, 169.8,
151.9.
APCl-MS: (M+1)=533/535 m/z.
Пример 41
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)
15
20
25
30
35
40
45
50
(1) 2,5-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил
(Метилсульфинил)(метилтио)метан (3,16 г; 0,0255 моль) раствор ли в 50 мл безводного
THF в атмосфере аргона и затем охлаждали до -78°С. По капл м с помощью шприца
добавл ли бутиллитий в гексане (16 мл; 1,6 М; 0,0256 моль). Смесь перемешивали в
течение 15 мин. Тем временем раствор 2,4,5-трифторбензнитрила (2,0 г; 0,013 моль) в
50 мл безводного THF охлаждали до -78°С в атмосфере аргона и упом нутый первым
раствор с помощью канюли в течение периода времени 3-5 мин добавл ли в последний
раствор. Через 30 мин охлаждающую баню убирали и, когда температура реакционной
смеси достигала комнатной, реакционную смесь выливали в 200 мл воды. THF выпаривали
и оставшийс водный слой трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную
эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт начинал кристаллизоватьс и мог быть использован в том виде, в каком он есть,
на следующей стадии. Выход 2,8 г (84%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.51-7.44 (m, 2H, основной диастереомер), 7.39 (dd, 1H,
минорный диастереомер), 5.00 (s, 1H, минорный диастереомер), 4.92 (s, 1H, основной
диастереомер), 2.59 (s, ЗН, минорный диастереомер), 2.56 (s, 1H, основной
диастереомер), 2.46 (s, 1H, минорный диастереомер), 2.40 (s, 1H, основной диастереомер).
(2) 2,5-Дифтор-4-формилбензнитрил
2,5-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил (2,8 г; 0,0107 моль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 100 мл THF и добавл ли 6,5 г концентрированной
серной кислоты. Смесь оставл ли при комнатной температуре на 6 суток и затем выливали
в 500 мл воды. Далее следовала трехкратна экстракци диэтиловым эфиром,
объединенную эфирную фазу несколько раз промывали водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Неочищенный продукт подвергали флэш-хроматографии на силикагеле,
использу смесь гептан/EtOAc (8:2). Выход 1,2 г (67%). Положение формильной группы
устанавливали с помощью 13С ЯМР. Углеродные сигналы от фторированных углеродов при
160.1 и 158.4 соответственно вл лись дублетами, а не квартетами, которыми они были
бы, если бы формильна группа находилась в положении 2.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 10.36 (d, 1H), 7.72 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H).
(3) 2,5-Дифтор-4-гидроксиметилбензнитрил
2,5-Дифтор-4-формилбензнитрил (3,60 г; 0,0215 моль; смотри стадию (2) выше)
Страница: 80
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
раствор ли в 50 мл метанола и охлаждали в лед ной бане. Порци ми с перемешиванием
добавл ли борогидрид натри (0,815 г; 0,0215 моль) и реакционную смесь оставл ли на
45 мин. Добавл ли воду (300 мл) и после этого осторожно добавл ли 2 М HCl до
достижени кислого значени рН. Смесь трижды экстрагировали диэтиловым эфиром,
объединенную эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Неочищенный продукт быстро кристаллизовалс и мог быть использован без дальнейшей
очистки. Выход 3,1 г (85%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.45 (dd, 1H), 7.30 (dd, 1H), 4.85 (s, 2H), 2.10 (уширенный, 1H).
(4) 4-Циано-2,5-дифторбензилметансульфонат
К охлажденному во льду раствору 2,5-дифтор-4-гидроксиметилбензнитрила (3,10 г;
0,0183 моль; смотри стадию (3) выше) и метансульфонилхлорида (2,21 г; 0,0192 моль) в
60 мл метиленхлорида с перемешиванием добавл ли триэтиламин (1,95 г; 0,0192 моль).
Через 1,5 ч при 0°С смесь промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт
мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 4,5 г (99%).
1
Н ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.45-7.35 (m, 2H), 5.32 (s, 2H), 3.13 (s, 3H).
(5) 4-Азидометил-2,5-дифторбензнитрил
Смесь 4-циано-2,5-дифторбензилметансульфоната (4,5 г; 0,0182 моль; смотри стадию
(4) выше) и азида натри (2,0 г; 0,031 моль) в 20 мл воды и 40 мл DMF перемешивали
при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее ее выливали в 300 мл воды и трижды
экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную эфирную фазу несколько раз
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Небольшой образец упаривали дл нужд ЯМР и продукт кристаллизовали. Остаток осторожно упаривали, но не полностью
досуха. Выход (теоретически 3,5 г) считалс полностью количественным на основании
данных ЯМР и аналитической ВЭЖХ.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ?.38 (dd, 1H), 7.32 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H).
(6) 4-Аминометил-2,5-дифторбензнитрил
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной в J. Chem.
Res. (M) (1992) 3128. К суспензии 300 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной влажности) в 20 мл
воды добавл ли раствор борогидрида натри (0,779 г; 0,0206 моль) в 20 мл воды. В
результате выдел лс газ. 4-Азидометил-2,5-дифторбензнитрил (1,00 г; 5,15 ммоль; со
стадии (5) выше) раствор ли 60 мл THF и добавл ли к водной смеси в лед ной бане.
Смесь перемешивали в течение 1,5 ч, после чего в нее добавл ли 10 мл 2 М HCl и смесь
фильтровали через Целит. Целит промывали дополнительным количеством воды,
объединенную водную фазу промывали EtOAc, затем подщелачивали 2 М NaOH. Далее
следовала трехкратна экстракци метиленхлоридом, объединенную органическую фазу
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 0,47 г (54%).
1
Н ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.39 (dd, 1H), 7.29 (dd, 1H), 3.99 (s, 2H), 1.45 (уширенный, 2H).
(7) 2,5-Дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрил
Раствор 4-аминометил-2,5-дифторбензнитрила (0,46 г; 2,7 ммоль; смотри стадию (6)
выше) и ди-трет-бутилдикарбоната (0,60 г; 2,7 ммоль) в 10 мл THF перемешивали в
течение ночи. THF выпаривали и остаток распредел ли между водой и EtOAc.
Органический слой промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог
быть использован без дальнейшей очистки. Выход 0,71 г (97%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.35-7.2 (m, 2H), 5.11 (уширенный триплет, 1H), 4.38 (d,
2H), 1.45 (s, 9H).
(8) Вос-Pab(2,5-диF)(ОН)
Смесь 2,5-дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрила (0,70 г; 2,6 ммоль;
смотри стадию (7) выше), гидроксиламина гидрохлорида (0,54 г; 7,8 ммоль) и
триэтиламина (0,79 г; 7,8 ммоль) в 10 мл этанола перемешивали при комнатной
температуре в течение 6 суток. Далее ее распредел ли между водой и метиленхлоридом.
Водный слой экстрагировали метиленхлоридом, объединенную органическую фазу
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог быть использован без
Страница: 81
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
дальнейшей очистки. Выход 0,72 г (92%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.27 (dd, 1H), 7.12 (dd, 1H), 4.29 (s, 2H), 1.47 (s, 9H).
(9) Вос-Pab(2,5-диF)ЧНОАс
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной Judkins et
al., Synth. Comm. (1998) 4351. Вос-Pab(2,5-диF)(ОН) (0,70 г; 2,3 ммоль; смотри стадию
(8) выше), уксусный ангидрид (0,25 г; 2,4 ммоль) и 230 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной
влажности) в 70 мл уксусной кислоты гидрировали при 490 кПа (5 атм) в течение 2,5 ч.
Смесь фильтровали через Целит и упаривали. Остаток высушивали вымораживанием из
ацетонитрила и воды. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки на
следующей стадии. Выход 0,80 г (100%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.49 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 4.33 (s, 2H), 1.91 (s,
3H), 1.46 (s, 9H).
(10) Boc-Pab(2,5-диF)(Teoc)
К суспензии Вос-Pab(2,5-диF)ЧНОАс (0,80 г; 2,3 ммоль; смотри стадию (9) выше) в 50
мл THF добавл ли 2-(триметилсилил)этил-п-нитрофенилкарбонат (0,85 г; 3,0 ммоль). По
капл м добавл ли раствор карбоната кали (0,80 г; 5,8 ммоль) в 10 мл воды. Смесь
перемешивали в течение ночи. Избыток Теос-реагента разрушали, добавл к раствору
глицин (0,100 г) и карбонат кали (0,75 г) и оставл его взаимодействовать в течение
дополнительных 2 ч. THF выпаривали и остаток распредел ли между водой и
метиленхлоридом. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом, объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэшхроматографи на силикагеле в смеси гептан/EtOAc (2:1) дает 0,72 г (72%) чистого
соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 8.00 (dd, 1H), 7.15 (dd, 1H), 4.98 (уширенный, 1Н), 4.36
(bd, 2Н), 4.24 (m, 2H), 1.45 (s, 9Н), 1.12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
(11) Н-Pab(2,5-диF)(Teoc)Ч2HCl
Вос-Pab(2,5-диF)(Теос) (0,38 г; 0,88 ммоль; смотри стадию (10) выше) раствор ли в
50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 30 мин и упаривали.
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.75-7.6 (m, 2H), 4.46 (m, 2H), 4.3 (s, 2H), 1.15 (m,
2H), 0,07 (s, 9H).
(12) Вос-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос)
К перемешиваемому раствору Boc-Aze-OH (0,189 г; 0,94 ммоль), Н-Pab(2,5диF)(Теос)Ч2HCl (0,36 г; 0,89 ммоль; смотри стадию (11) выше) и РуВОР (0,54 г; 1,03
ммоль) в 5 мл DMF добавл ли диизопропилэтиламин (0,49 г; 3,8 ммоль) и смесь оставл ли
взаимодействовать в течение ночи. Полученный продукт выливали в водный бикарбонат
натри и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали
водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в смеси
гептан/EtOAc (3:7) дала достаточно чистое соединение. Выход 0,25 г (48%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.98 (dd, 1H), 7.13 (dd, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.53 (m,
2H), 4.22 (m, 2H), 3.92 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 2.55-2.35 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.11
(m, 2H), 0.06 (s, 9H).
(13) Н-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc)Ч2HCl
Вос-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос) (0,25 г; 0,49 ммоль; смотри стадию (12) выше) раствор ли
в 50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 30 мин и упаривали. Продукт
использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. Выход 0,23 г (97%).
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD) ? 7.59 (dd, 1H), 7.47 (dd, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.54 (m,
2Н), 4.48 (m, 2Н), 4.15 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 1.17 (m,
2H), 0.05 (s, 9H).
(14) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,12 г; 0,47 ммоль; смотри пример
1(8) выше), Н-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос)Ч2HCl (0,23 г; 0,47 ммоль; смотри стадию (13)
выше) и РуВОР (0,27 г; 0,52 ммоль) в 10 мл DMF добавл ли диизопропилэтиламин (0,245 г;
Страница: 82
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
1,90 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Полученный продукт выливали в воду
и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали водой,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в EtOAc дала 100
мг чистой фракции и 30 мг фракции с 90%-ной чистотой. Общий выход 0,13 г (41%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 9.80 (уширенный, 1H), 8.05 (bt, 1H), 7.94 (dd, 1H), 7.20
(m, 1H), 7.2-7.1 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.54 (t, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.91 (m, 1H),
4.51 (m, 2H), 4.28 (уширенный, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 2.69
(m, 1H),2.43 (m, 1H), 1.73 (уширенный, 1H), 1.11 (m, 2H), 1.11 (s, 9H).
(15) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5ди-F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc) (60 мг; 0,093 ммоль; чиста фракци со стадии (14) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли на 1 ч при комнатной
температуре. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из воды и
ацетонитрила, получа 55 мг (96%) указанного в заголовке соединени в виде его TFAсоли, чистота >99%.
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.55-7.3 (m, 3Н), 7.2-7.1 (m, 2H),
6.88 (t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.22 (m, 1H, минорный
ротамер), 5.20 (s, 1H, основной ротамер), 5.13 (s, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m,
1H, основной ротамер), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.36 (m, 1H, основной ротамер), 4.19 (m, 1H,
основной ротамер), 4.07 (m, 1H, минорный ротамер), 3.98 (m, 1H, минорный ротамер),
2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной
ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (75 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 173.0, 172.6, 172.1, 172.0, 162.4.
APCl-MS: (M+1)=503/505 m/z.
Пример 42
Ph(3-Ch(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(ОМе)
30
35
40
45
50
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(OMe, Teoc)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Teoc) (40 мг; 0,062 ммоль;
смотри пример 41(14) выше) и О-метилгидроксиламина гидрохлорида (58 мг; 0,70 ммоль) в
5 мл ацетонитрила нагревали при 70°С в течение 2 ч. Растворитель выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой экстрагировали EtOAc, объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог
быть использован без дальнейшей очистки. Выход 35 мг (84%).
1
H ЯМР (600 МГц; CDCl3) ? 7.99 (bt, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15-7.1 (m,
1H), 7.07 (dd, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.88 (m, 1H), 4.48 (m,
2Н), 4.2-4.1 (m, 3H), 3.95 (s, 3Н), 3.67 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 0,97
(m, 2H), 0.07 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-Pab(2.5-диF(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(OMe, Teoc) (35 мг; 0,052 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в
продолжение 30 мин. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из воды и
ацетонитрила с получением 29 мг (99%) указанного в заголовке соединени . Чистота 97%.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 8.01 (bt, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (m,
Страница: 83
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
1H), 7.09 (dd, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.54 (t, 1H), 5.2-5.0 (m, 2H), 4.95-4.85 (m, 2H),
4.6-4.4 (m, 2H), 4.25 (уширенный, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.71 (m, 1H), 2.69
(m, 1H), 2.43 (m, 1H).
13
С-ЯМР (75 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173,0, 170.9,
152.6.
APCl-MS: (M+1)=533/535 m/z.
Пример 43
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Oet, Теос)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (55 мг; 0,090 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-этилгидроксиламина гидрохлорид (53 мг; 0,54 ммоль) раствор ли в 4 мл
THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали. Остаток
хроматографировали на силикагеле, элюиру смесью метиленхлорид/метанол (95:5), что
позволило получить 55 мг (93%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (bt, 1H), 7.59 (bs, 1H), 7.47 (bd, 1H), 7.29 (bd,
1H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.86 (m,
1H), 4.55-4.4 (m, 2H), 4.25-4.1 (m, 5H), 3.69 (m, 1H), 2.66 (m, 1H), 2.41 (m, 1H),
1.33 (t, 3H), 0.98 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
(55 мг; 0,084 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли 3 мл
TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 160 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющие интерес фракции объедин ли и
высушивали вымораживанием (2х), собира 20 мг (47%) указанного в заголовке
соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.59 (bd, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.32 (bd, 2H),
7.25-7.1 (m, 2H), 6.89 (t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер),
5.18 (s, 1H, основной ротамер), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.11 (s, 1H, минорный
ротамер), 4.77 (m, 1H), 4.5-4.3 (m, 3H), 4.2-3.9 (m, 3H), 2.67 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m,
1H, минорный ротамер), 1.28 (t, 3H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.4, 171.9, 171.4, 153.8, 152.3.
MS (m/z) 509 (М-1) -, 511 (М+1) +.
Пример 44
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (53 мг; 0,087 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-н-пропилгидроксиламина гидрохлорид (58 мг, 0,52 ммоль) раствор ли в 4
мл THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали. Остаток
хроматографировали на силикагеле, элюиру смесью метиленхлорид/метанол (95:5), что
позволило получить 51 мг (88%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (m, 1H), 7.59 (bs, 1H), 7.47 (bd, 2H), 7.28 (bd,
2H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.85 (m,
1H), 4.55-4.4 (m, 2H), 4.2-4.05 (m, 5H), 3.69 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.41 (m, 1H),
1.74 (m, 2H), 1.05-0.95 (m, 5H), 0.03 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr,
Teoc) (51 мг; 0,078 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли
3 мл TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 110 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющую интерес фракцию упаривали и
высушивали вымораживанием, собира 20 мг (47%) указанного в заголовке соединени .
Страница: 84
RU 2 300 521 C2
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H-ЯМР (500 МГц; CD3OD; ротамеры) ? 7.61 (bd, 2H), 7.38 (m, 1H), 7.35 (bd, 2H),
7.22 (m, 1H, основной ротамер), 7.18 (m, 1H), 7.15 (m, 1H, минорный ротамер), 6.92
(t, 1H, основной ротамер), 6.89 (t, 1H, минорный ротамер), 5.20 (s, 1H, основной
ротамер), 5.20 (m, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.5-4.4 (m,
2H, включа минорный ротамер, соответствующий основному при 4.37), 4.37 (m, 1H,
основной ротамер), 4.18 (m, 1H, основной ротамер), 4.09 (m, 1H, минорный ротамер),
3.99 (m, 2H), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной ротамер), 2.30
(m, 1H, основной ротамер), 2.18 (m, 1H, минорный ротамер), 1.73 (m, 2H), 1.01 (t, 3Н).
13
С-ЯМР (125 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
171.4, 153.8, 152.3.
MS (m/z) 523 (М-1) -, 525 (М+1) +.
Пример 45
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 мг; 0,082 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-изо-пропилгидроксиламина гидрохлорид (55 мг; 0,49 ммоль) раствор ли в
4 мл THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали.
Остаток хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью
метиленхлорид/метанол (95:5), что позволило получить 46 мг (84%) указанного в
подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (m, 1H), 7.57 (bs, 1H), 7.48 (bd, 2H), 7.29 (bd,
2H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.87 (m,
1H), 4.55-4.45 (m, 2H), 4.42 (m, 1H), 4.2-4.1 (m, 3H), 3.69 (m, 1H), 2.66 (m, 1H),
2.42 (m, 1H), 1.30 (d, 6H), 0.98 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr,
Teoc) (46 мг; 0,069 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли
3 мл TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 150 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющую интерес фракцию упаривали и
высушивали вымораживанием (2х) с получением 22 мг (58%) указанного в заголовке
соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.59 (d, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.32 (d, 2H),
7.19 (m, 1H, основной ротамер), 7.15 (m, 1H), 7.12 (m, 1H, минорный ротамер), 6.89
(t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.18 (s, 1H, основной
ротамер), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.12 (s, 1H, минорный ротамер), 4.78 (m,
1H, основной ротамер), 4.5-3.9 (m, 5H), 2.67 (m, 1H, минорный ротамер), 2.52 (m, 1H,
основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер),
1.26 (d, 6H).
13
С ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
171.9, 171.4, 153.6.
MS (m/z) 523 (M-1) -, 525 (M+1) +.
Пример 46
Указанные в заголовках соединени из примеров 3, 6, 9, 10, 13-15, 17, 19, 21, 23,
25, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39 и 41 были проверены в соответствии с вышеприведенным
Тестом А и обнаружено, что дл всех из них значени IC50ТТ меньше 3,5 мкМ. Обнаружено,
что соединени из примеров 3, 6, 9, 10, 13,15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 и 39
показывают значени меньше 0,02 мкМ; соединени из примеров 25 и 28 - меньше 0,03
мкМ, соединение из примера 14 - меньше 0,04 мкМ и соединени из примеров 38 и 41 меньше 0,15 мкМ.
Пример 47
Указанные в заголовках соединени из примеров 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27,
28, 32 и 34 проверены в соответствии с вышеприведенным Тестом D и обнаружено, что дл Страница: 85
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
всех из них значение IC50APTT меньше 1 мкМ.
Пример 48
Указанные в заголовках соединени из примеров 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22,
24, 26, 29, 30, 33 и 43-45 проверены в соответствии в вышеприведенным Тестом Е и
обнаружено, что они про вл ют пероральную и/или парентеральную биодоступность у
крысы как соответствующий активный ингибитор (свободный амидин).
Пример 49
Указанные в заголовках соединени из примеров 1, 2, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 22, 24,
26, 29, 33, 37, 40, 43 и 45 проверены в соответствии в вышеприведенным Тестом G и
обнаружено, что они превращаютс в соответствующий активный ингибитор (свободный
амидин) в микросомах печени людей и крыс.
Сокращени Ас = ацетил
АсОН = уксусна кислота
APCl = химическа ионизаци при атмосферном давлении (в отношении MS)
API = ионизаци при атмосферном давлении (в отношении MS)
водн. = водный
AUC = площадь под кривой
Aze = (S)-азетидин-2-карбоксилат (если не определено особо)
AzeOH = азетидин-2-карбонова кислота
Bn = бензил
Вос = трет-бутилоксикарбонил
BSA = бычий сывороточный альбумин
Bu = бутил
Bzl = бензил
Cl = химическа ионизаци (в отношении MS)
сут. = сутки
DCC = дициклогексилкарбодиимид
DIBAL-H = диизобутилалюминийгидрид
DIPEA = диизопропилэтиламин
DMAP = 4-(N,N-диметиламино)пиридин
DMF = диметилформамид
DMSO = диметилсульфоксид
DVT = тромбоз глубоких вен
EDC = 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид
е.е. = энантиомерный избыток
Et = этил
эфир = диэтиловый эфир
EtOAc = этилацетат
EtOH = этанол
Et2O = диэтиловый эфир
ч = час (часы)
HATU = O-(азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурони гексафторфосфат
HBTU = [N,N,N',N'-тетраметил-O-(бензотриазол-1-ил)урони гексафторфосфат]
HCl = сол на кислота, газообразный хлористый водород или соль гидрохлорид (в
зависимости от контекста)
Hex = гексаны
НОАс = уксусна кислота
ВЭЖХ = высокоэффективна жидкостна хроматографи ЖХ = жидкостна хроматографи Me = метил
MEM = метоксиэтоксиметил
МеОН = метанол
Страница: 86
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
мин = минута(ы)
MS = масс-спектроскопи МТВЕ = метил-трет-бутиловый эфир
NADH = никотинамидадениндинуклеотид, восстановленна форма
NADPH = никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленна форма
NIH = Национальный институт здравоохранени (США)
NIHU = единица тромбина Национального института здравоохранени ЯМР = дерный магнитный резонанс
ОАс = ацетат
Pab = п-амидинобензиламино
Н-Pab = п-амидинобензиламин
Ph = фенил
Pr = пропил
Pro = (S)-пролинил
РуВОР = (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфони гексафторфосфат
QF = тетрабутиламмонийфторид
RedAI = натри бис(2-метоксиэтокси)алюминийгидрид
ОФЖХ = обращенно-фазова высокоэффективна жидкостна хроматографи КТ = комнатна температура
SOP = стандартна рабоча процедура(ы)
TBTU = [N,N,N',N'-тетраметил-O-(бензотриазол-1-ил)урони тетрафторборат]
TEA = триэтиламин
Теос = 2-(триметилсилил)этоксикарбонил
TEMPO = 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси, свободный радикал
TFA = трифторуксусна кислота
THF = тетрагидрофуран
ТНР = тетрагидропиранил
ТСХ = тонкослойна хроматографи TMSCl = триметилсилилхлорид
TMSCN = триметилсилилцианид
УФ = ультрафиолет
Z = бензилоксикарбонил
Префиксы н-, втор-, изо- и трет- имеют свои обычные значени : нормальный,
вторичный, изо- и третичный. Префикс с означает цикло.
35
40
45
50
Формула изобретени 1. Соединение, выбранное из
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОН) или
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab, или фармацевтически приемлема соль
любого из этих соединений.
2. Соединение Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) по п.1 или его
фармацевтически приемлема соль.
3. Фармацевтическа композици дл ингибировани тромбина, включающа в себ любое из соединений по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с
??армацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.
4. Фармацевтическа композици по п.3, включающа в себ соединение по п.2 или его
фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом,
разбавителем или носителем.
5. Фармацевтическа композици по п.3 или 4, где адъювант, разбавитель и/или
носитель вызывает измененное высвобождение соединени .
6. Фармацевтическа композици по п.3 или 4, котора подходит дл перорального
введени .
Страница: 87
CL
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
7. Фармацевтическа композици по п.5 или 6, котора находитс в форме системы с
измененным высвобождением с гелеобразующей матрицей, содержащей гидрофильный
гелеобразующий компонент и активный ингредиент.
8. Соединение по п.1 или 2 дл применени в лечении состо ни , при котором
требуетс ингибирование тромбина.
9. Соединение по п.1 или 2 дл применени в лечении состо ни , при котором показана
антикоагул нтна терапи .
10. Соединение по п.1 или 2 дл применени в лечении тромбоза.
11. Соединение по п.1 или 2 дл применени в качестве антикоагул нта.
12. Применение соединени по п.1 или 2 в качестве активного ингредиента дл производства лекарства дл лечени состо ни , при котором требуетс ингибирование
тромбина.
13. Применение соединени по п.1 или 2 в качестве активного ингредиента дл производства лекарства дл лечени состо ни , при котором показана антикоагул нтна терапи .
14. Применение по п.13 или 14, где данным состо нием вл етс тромбоз.
15. Применение по п.13 или 14, где данным состо нием вл етс гиперкоагул ци в
крови и/или ткан х.
16. Применение соединени по п.1 или 2 в качестве активного ингредиента дл производства антикоагул нта.
Приоритет по пунктам и признакам:
01.12.2000 по п.1, кроме второго соединени , п.2, пп.3-16, кроме соединени 2 из п.1;
19.03.2001 по п.1, кроме соединений 1 и 3, пп.3, 5-16, кроме соединений 1 и 3 по
пор дку из п.1.
25
30
35
40
45
50
Страница: 88
?
0,172 г (72%) желаемого указанного в подзаголовке соединени , которое можно было
использовать без очистки.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.58 (m, 1H), 7.3-7.2 (m, 2H), 3.98 (s, 2H), 1.55-1.35
(уширенный, 2Н).
(6) Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
К охлажденному во льду раствору Boc-Aze-OH (0,194 г; 0,96 ммоль) в 5 мл DMF
добавл ли TBTU (0,50 г; 9,6 ммоль). Через 30 мин добавл ли другой раствор, содержащий
4-аминометил-2-фторбензнитрил (0,17 г; 0,81 ммоль; смотри стадию (5) выше) и
диизопропилэтиламин (0,326 г; 2,53 ммоль) в 7 мл DMF. Полученный раствор
перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель выпаривали и
продукт очищали с помощью препаративной ОФЖХ, использу смесь СН3CN/0,1 М NH4OAc
(50:50). Высушивание вымораживанием давало 0,237 г (74%) желаемого указанного в
подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (300 МГц; CD3OD) ? 7.70 (m, 1H), 7.35-7.25 (m, 2H), 4.65-4.35 (m, 3Н), 4.03.85 (m, 2H), 2.51 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.40 (s, 9H).
(7) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 г; 0,354 ммоль; со стадии (6) выше) раствор ют
в 30 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин и
упаривали. Полученный дигидрохлорид и HATU (0,152 г; 0,400 ммоль) раствор ли в 5 мл
DMF. Данный раствор добавл ли к охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)(R)СН(ОН)С(O)ОН (0,101 г; 0,400 ммоль; смотри пример 1(8) выше) в 5 мл DMF.
Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды.
Растворитель выпаривали и продукт очищали с помощью препаративной ОФЖХ в смеси
СН3CN/0,1 М NH4OAc (50:50). Высушивание вымораживанием давало 0,130 г (77%)
желаемого указанного в подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.7-7.6 (m, 1H), 7.35-7.1 (m, 5Н),
Страница: 75
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
6.88 (t, 1H, ротамер), 6.86 (t, 1H, ротамер), 5.25-5.1 (m, 1H плюс минорный ротамер
от следующего протона), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.6-4.4 (m, 2H), 4.36 (m, 1H,
основной ротамер), 4.18 (m, 1H, основной ротамер), 4.07 (m, 1H, минорный ротамер),
3.98 (m, 1H, минорный ротамер), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.53 (m, 1H, основной
ротамер), 2.29 (m, 1H, основной ротамер), 2.16 (m, 1H, минорный ротамер).
(8) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,130 г; 0,278 ммоль;
смотри стадию (7) выше) раствор ли в 80 мл этанола, насыщенного HCl (г). Смесь
оставл ли взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель
выпаривали и остаток перераствор ли в 100 мл этанола, насыщенного NH3 (г). Реакцию
оставл ли медленно протекать при комнатной температуре в течение двух суток.
Температуру повышали до 50°С и реакцию продолжали в течение следующих 3 суток.
После расходовани исходного материала растворитель выпаривали. Продукт очищали с
помощью препаративной ОФЖХ и высушивание вымораживанием давало 17 мг (13%)
указанного в заголовке соединени в виде его НОАс-соли.
1
H ЯМР (600 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.65-7.6 (m, 1H), 7.4-7.3 (m, 3Н),
7.25-7.1 (m, 2H), 7.15-6.7 (m, 1H), 5.25-5.1 (m, 1H плюс минорный ротамер от
следующего протона), 4.8 (m, 1H, основной ротамер, частично невидимый из-за CD3ОН),
4.6-3.95 (m, 4H), 2.69 (m, 1H, минорный ротамер), 2.56 (m, 1H, основной ротамер),
2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер), 1.90 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 180.6, 173.4, 173.1, 172.9, 164.5, 162.3, 159.8.
APCl-MS: (M+1)=485/487 m/z.
Пример 39
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)
30
35
40
45
50
(1) 2,6-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил
(Метилсульфинил)(метилтио)метан (7,26 г; 0,0584 моль) раствор ли в 100 мл
безводного THF в атмосфере аргона и охлаждали до -78°С. По капл м с перемешиванием
добавл ли бутиллитий в гексане (16 мл; 1,6 М; 0,0256 моль). Смесь перемешивали в
течение 15 мин. Тем временем раствор 3,4,5-трифторбензнитрила (4,0 г; 0,025 ммоль) в
100 мл безводного THF охлаждали до -78°С в атмосфере аргона и упом нутый первым
раствор с помощью канюли в течение периода времени 35 мин добавл ли в последний
раствор. Через 30 мин охлаждающую баню убирали и, когда температура реакционной
смеси достигала комнатной, реакционную смесь выливали в 400 мл воды. THF выпаривали
и оставшийс водный слой трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную
эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 2,0 г (30%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.4-7.25 (m, 2H), 5.01 (s, 1H, диастереомер), 4.91 (s,
1H, диастереомер), 2.88 (s, 3Н, диастереомер), 2.52 (s, 3Н, диастереомер), 2.49 (s,
3Н, диастереомер), 2.34 (s, 3Н, диастереомер), 1.72 (уширенный, 1H).
(2) 2,6-Дифтор-4-формилбензнитрил
2,6-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил (2,17 г; 8,32 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 90 мл THF и добавл ли 3,5 мл концентрированной
серной кислоты. Смесь оставл ли при комнатной температуре на 3 суток и затем выливали
в 450 мл воды. Далее следовала трехкратна экстракци с помощью EtOAc, и
Страница: 76
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
объединенную эфирную фазу дважды промывали водным бикарбонатом натри и сол ным
раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 1,36 г (98%). Положение
формильной группы устанавливали с помощью 13С ЯМР. Сигнал от фторированных
углеродов при 162,7 млн -1 демонстрировал ожидаемый раздвоенный вид с двум посто нными св зи пор дка 260 и 6,3 Гц соответственно, относ щимс к ipso- и метасв занным атомам фтора.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 10.35 (s, 1H), 7.33 (m, 2H).
(3) 2,6-Дифтор-4-гидроксиметилбензнитрил
2,6-Дифтор-4-формилбензнитрил (1,36 г; 8,13 ммоль; смотри стадию (2) выше)
раствор ли в 25 мл метанола и охлаждали в лед ной бане. Порци ми с перемешиванием
добавл ли борогидрид натри (0,307 г; 8,12 ммоль) и реакционную смесь оставл ли на 65
мин. Растворитель выпаривали и остаток распредел ли между диэтиловым эфиром и
водным бикарбонатом натри . Эфирный слой промывали дополнительным количеством
водного бикарбоната натри и сол ным раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Неочищенный продукт быстро кристаллизовалс и мог быть использован без
дальнейшей очистки. Выход 1,24 г (90%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.24 (m, 2H), 4.81 (s, 2H), 2.10 (уширенный, 1Н).
(4) 4-Циано-2,6-дифторбензилметансульфонат
К охлажденному во льду раствору 2,6-дифтор-4-гидроксиметилбензнитрила (1,24 г; 7,32
ммоль; смотри стадию (3) выше) и метансульфонилхлорида (0,93 г; 8,1 ммоль) в 60 мл
метиленхлорида с перемешиванием добавл ли триэтиламин (0,81 г; 8,1 ммоль). Через 3 ч
при 0°С смесь дважды промывали 1 М HCl и один раз водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 1,61 г (89%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.29 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.07 (s, 3Н).
(5) 4-Азидометил-2,6-дифторбензнитрил
Смесь 4-циано-2,6-дифторбензилметансульфоната (1,61 г; 6,51 ммоль; смотри стадию
(4) выше) и азида натри (0,72 г; 0,0111 моль) в 10 мл воды и 20 мл DMF перемешивали
при комнатной температуре в течение ночи. Полученный материал далее выливали в 200
мл воды и трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную эфирную фазу п ть
раз промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Небольшой образец упаривали
дл нужд ЯМР и продукт кристаллизовали. Остаток аккуратно упаривали, но не полностью
досуха. Выход (теоретически 1,26 г) считалс полностью количественным на основании
данных ЯМР и аналитической ВЭЖХ.
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.29 (m, 2H), 4.46 (s, 2H).
(6) 4-Аминометил-2,6-дифторбензнитрил
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной в J. Chem.
Res. (M) (1992) 3128. К суспензии 520 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной влажности) в 20 мл
воды добавл ли раствор борогидрида натри (0,834 г; 0,0221 моль) в 20 мл воды. В
результате выдел лс газ. 4-Азидометил-2,6-дифторбензнитрил (1,26 г; 6,49 ммоль;
смотри стадию (5) выше) раствор ли в 50 мл THF и добавл ли к водной смеси в лед ной
бане в течение 15 мин. Смесь перемешивали в течение 4 ч, после чего в нее добавл ли
20 мл 2 М HCl и смесь фильтровали через Целит. Целит промывали дополнительным
количеством воды, объединенную водную фазу промывали EtOAc, затем подщелачивали 2
М NaOH. Далее следовала трехкратна экстракци метиленхлоридом и объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 0,87 г
(80%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.20 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 1.51 (уширенный, 2Н).
(7) 2,6-Дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрил
Раствор 4-аминометил-2,6-дифторбензнитрила (0,876 г; 5,21 ммоль; смотри стадию (6)
выше) раствор ли в 50 мл THF и добавл ли ди-трет-бутилдикарбонат (1,14 г; 5,22 ммоль)
в 10 мл THF. Смесь перемешивали в течение 3,5 ч. THF выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Органический слой трижды промывали 0,5 М HCl и
Страница: 77
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей
очистки. Выход 1,38 г (99%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.21 (m, 2H), 4.95 (уширенный, 1Н), 4.43 (уширенный,
2H), 1.52 (s, 9H).
(8) Вос-Pab(2,6-диF)(OH)
Смесь 2,6-дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрила (1,38 г; 5,16 ммоль;
смотри стадию (7) выше), гидроксиламина гидрохлорида (1,08 г; 0,0155 моль) и
триэтиламина (1,57 г; 0,0155 моль) в 20 мл этанола перемешивали при комнатной
температуре в течение 36 ч. Растворитель выпаривали и остаток распредел ли между
водой и метиленхлоридом. Органический слой промывали водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 1,43 г (92%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.14 (m, 2H), 4.97 (уширенный, 1Н), 4.84 (уширенный,
2H), 4.40 (уширенный, 2H), 1.43 (s, 9H).
(9) Вос-Pab(2,6-диF)ЧНОАс
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной Judkins et
al., Synth. Comm. (1998) 4351. Вос-Pab(2,6-диF)(ОН) (1,32 г; 4,37 ммоль; смотри
стадию (8) выше), уксусный ангидрид (0,477 г; 4,68 ммоль) и 442 мг 10%-ного Pd/C (50%ной влажности) в 100 мл уксусной кислоты гидрировали при 490 кПа (5 атм) в течение
3,5 ч. Смесь фильтровали через Целит, промывали этанолом и упаривали. Остаток
высушивали вымораживанием из ацетонитрила, воды и нескольких капель этанола.
Указанный в подзаголовке продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход
0,149 г (99%).
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD) ? 7.45 (m, 2Н), 4.34 (s, 2H), 1.90 (s, 3Н), 1.40 (s, 9H).
(10) Вос-Pab(2,6-диF)(Teoc)
К раствору Вос-Pab(2,6-диF)ЧНОАс (1,56 г; 5,49 ммоль; смотри стадию (9) выше) в 100
мл THF и 1 мл воды добавл ли 2-(триметилсилил)этил-п-нитрофенилкарбонат (1,67 г; 5,89
ммоль). В течение 5 мин по капл м добавл ли раствор карбоната кали (1,57 г; 0,0114
моль) в 20 мл воды. Смесь перемешивали в течение ночи. THF выпаривали и остаток
распредел ли между водой и метиленхлоридом. Водный слой экстрагировали
метиленхлоридом, объединенную органическую фазу дважды промывали водным
бикарбонатом натри , высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на
силикагеле в смеси гептан/EtOAc (2:1) дает 1,71 г (73%) чистого соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; COCl3) ? 7.43 (m, 2H), 4.97 (уширенный, 1Н), 4.41 (уширенный,
2H), 4.24 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H).
(11) Вос-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос)
Вос-Pab(2,6-диF)(Теос) (1,009 г; 2,35 ммоль; смотри стадию (10) выше) раствор ли в
50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 10 мин, упаривали, раствор ли в
18 мл DMF и затем охлаждали в лед ной бане. Добавл ли Boc-Aze-OH (0,450 г; 2,24
ммоль), РуВОР (1,24 г; 2,35 ммоль) и, наконец, диизопропилэтиламин (1,158 г; 8,96
ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем выливали в 350 мл воды и
трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали сол ным
раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в
смеси гептан/EtOAc (1:3) дала 1,097 г (96%) желаемого соединени .
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.46 (m, 2H), 4.65-4.5 (m, 3Н), 4.23 (m, 2H), 3.87 (m,
1H), 3.74 (m, 1H), 2.45-2.3 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H).
(12) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Teoc)
Вос-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (0,256 г; 0,500 ммоль; смотри стадию (11) выше)
раствор ли в 20 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 10 мин, упаривали и
раствор ли в 5 мл DMF. Добавл ли Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,120 г; 0,475
ммоль; смотри пример 1(8) выше), РуВОР (0,263 г; 0,498 ммоль) и, наконец,
диизопропилэтиламин (0,245 г; 1,89 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2
ч, затем выливали в 350 мл воды и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную
Страница: 78
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
органическую фазу промывали сол ным раствором, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Флэш-хроматографи на силикагеле в EtOAc дала 0,184 г (60%) желаемого указанного в
подзаголовке соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.55-7.45 (m, 2H), 7.32 (m, 1H,
основной ротамер), 7.27 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-7.1 (m, 2H), 6.90 (t, 1Н,
основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.15 (s, 1H, основной ротамер),
5.12 (m, 1H, минорный ротамер), 5.06 (s, 1H, минорный ротамер), 4.72 (m, 1H, основной
ротамер), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.30 (m, 1H, основной ротамер), 4.24 (m, 2H), 4.13 (m,
1H, основной ротамер), 4.04 (m, 1H, минорный ротамер), 3.95 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.62 (m, 1H, минорный ротамер), 2.48 (m, 1H, основной ротамер), 2.22 (m,
1H, основной ротамер), 2.10 (m, 1H, минорный ротамер), 1.07 (m, 2H), 0,07 (m, 9H).
(13) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (81 мг; 0,127 ммоль; смотри
стадию (12) выше) раствор ли в 0,5 мл метиленхлорида и охлаждали в лед ной бане.
Добавл ли TFA (3 мл) и реакционную смесь оставл ли на 75 мин. TFA выпаривали и
остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила. Неочищенный продукт
очищали препаративной ОФЖХ в смеси СН3CN/0,1 М NH4OAC (35:65), получа 39 мг
(55%) указанного в заголовке соединени в виде его НОАс-соли, чистота 99%.
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.5-7.4 (m, 2H), 7.32 (m, 1H, основной
ротамер), 7.28 (m, 1H, минорный ротамер), 7.2-7.1 (m, 3Н), 6.90 (t, 1H, основной
ротамер), 6.86 (t, минорный ротамер), 5.15 (s, 1H, основной ротамер), 5.14 (m, 1H,
минорный ротамер), 5.07 (s, 1H, минорный ротамер), 4.72 (m, 1H, основной ротамер),
4.65-4.45 (m, 2H), 4.30 (m, 1H, основной ротамер), 4.16 (m, 1H, основной ротамер),
4.03 (m, 1H, минорный ротамер), 3.95 (m, 1H, минорный ротамер), 2.63 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.48 (m, 1H, основной ротамер), 2.21 (m, 1H, основной ротамер), 2.07 (m,
1H, минорный ротамер), 1.89 (s, 3Н).
13
С-ЯМР (75 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 171.9, 171.2, 165.0, 162.8, 160.4.
APCl-MS: (M+1)=503/505 m/z.
Пример 40
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(OMe)
35
40
45
50
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Оме, Теос)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Теос) (64 мг; 0,099 ммоль;
смотри пример 39(12) выше) и O-метилгидроксиламина гидрохлорида (50 мг; 0,60 ммоль) в
4 мл ацетонитрила нагревали при 70°С в течение 3 ч. Растворитель выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой дважды экстрагировали EtOAc,
объединенную органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 58 мг (87%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 7.90 (bt, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.25-6.95 (m, 5H), 6.51 (t,
1H), 4.88 (s, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.6-4.5 (m, 2H), 4.4-3.9 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 3.63
(m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.87 (уширенный, 1H), 0,98 (m, 2H), 0.01 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(ОМе, Теос) (58 мг; 0,086 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 3 мл TFA, охлаждали в лед ной бане и оставл ли
Страница: 79
RU 2 300 521 C2
5
10
взаимодействовать на 2 ч. TFA выпаривали и остаток раствор ли в EtOAc. Органический
слой дважды промывали водным карбонатом натри и водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Остаток высушивали вымораживанием из воды и ацетонитрила с получением
42 мг (92%) указанного в заголовке соединени . Чистота 94%.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.95 (bt, 1H), 7.2-7.1 (m, 4H), 6.99 (m, 1H), 6.52 (t,
1H), 4.88 (s, 1H), 4.85-4.75 (m, ЗН), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.29 (уширенный, 1H), 4.09
(m, 1H), 3.89 (s, ЗН), 3.69 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.85 (уширенный, 1H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 172.1, 169.8,
151.9.
APCl-MS: (M+1)=533/535 m/z.
Пример 41
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)
15
20
25
30
35
40
45
50
(1) 2,5-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил
(Метилсульфинил)(метилтио)метан (3,16 г; 0,0255 моль) раствор ли в 50 мл безводного
THF в атмосфере аргона и затем охлаждали до -78°С. По капл м с помощью шприца
добавл ли бутиллитий в гексане (16 мл; 1,6 М; 0,0256 моль). Смесь перемешивали в
течение 15 мин. Тем временем раствор 2,4,5-трифторбензнитрила (2,0 г; 0,013 моль) в
50 мл безводного THF охлаждали до -78°С в атмосфере аргона и упом нутый первым
раствор с помощью канюли в течение периода времени 3-5 мин добавл ли в последний
раствор. Через 30 мин охлаждающую баню убирали и, когда температура реакционной
смеси достигала комнатной, реакционную смесь выливали в 200 мл воды. THF выпаривали
и оставшийс водный слой трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную
эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный
продукт начинал кристаллизоватьс и мог быть использован в том виде, в каком он есть,
на следующей стадии. Выход 2,8 г (84%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.51-7.44 (m, 2H, основной диастереомер), 7.39 (dd, 1H,
минорный диастереомер), 5.00 (s, 1H, минорный диастереомер), 4.92 (s, 1H, основной
диастереомер), 2.59 (s, ЗН, минорный диастереомер), 2.56 (s, 1H, основной
диастереомер), 2.46 (s, 1H, минорный диастереомер), 2.40 (s, 1H, основной диастереомер).
(2) 2,5-Дифтор-4-формилбензнитрил
2,5-Дифтор-4-[(метилсульфинил)(метилтио)метил]бензнитрил (2,8 г; 0,0107 моль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 100 мл THF и добавл ли 6,5 г концентрированной
серной кислоты. Смесь оставл ли при комнатной температуре на 6 суток и затем выливали
в 500 мл воды. Далее следовала трехкратна экстракци диэтиловым эфиром,
объединенную эфирную фазу несколько раз промывали водой, высушивали (Na2SO4) и
упаривали. Неочищенный продукт подвергали флэш-хроматографии на силикагеле,
использу смесь гептан/EtOAc (8:2). Выход 1,2 г (67%). Положение формильной группы
устанавливали с помощью 13С ЯМР. Углеродные сигналы от фторированных углеродов при
160.1 и 158.4 соответственно вл лись дублетами, а не квартетами, которыми они были
бы, если бы формильна группа находилась в положении 2.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 10.36 (d, 1H), 7.72 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H).
(3) 2,5-Дифтор-4-гидроксиметилбензнитрил
2,5-Дифтор-4-формилбензнитрил (3,60 г; 0,0215 моль; смотри стадию (2) выше)
Страница: 80
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
раствор ли в 50 мл метанола и охлаждали в лед ной бане. Порци ми с перемешиванием
добавл ли борогидрид натри (0,815 г; 0,0215 моль) и реакционную смесь оставл ли на
45 мин. Добавл ли воду (300 мл) и после этого осторожно добавл ли 2 М HCl до
достижени кислого значени рН. Смесь трижды экстрагировали диэтиловым эфиром,
объединенную эфирную фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали.
Неочищенный продукт быстро кристаллизовалс и мог быть использован без дальнейшей
очистки. Выход 3,1 г (85%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.45 (dd, 1H), 7.30 (dd, 1H), 4.85 (s, 2H), 2.10 (уширенный, 1H).
(4) 4-Циано-2,5-дифторбензилметансульфонат
К охлажденному во льду раствору 2,5-дифтор-4-гидроксиметилбензнитрила (3,10 г;
0,0183 моль; смотри стадию (3) выше) и метансульфонилхлорида (2,21 г; 0,0192 моль) в
60 мл метиленхлорида с перемешиванием добавл ли триэтиламин (1,95 г; 0,0192 моль).
Через 1,5 ч при 0°С смесь промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт
мог быть использован без дальнейшей очистки. Выход 4,5 г (99%).
1
Н ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.45-7.35 (m, 2H), 5.32 (s, 2H), 3.13 (s, 3H).
(5) 4-Азидометил-2,5-дифторбензнитрил
Смесь 4-циано-2,5-дифторбензилметансульфоната (4,5 г; 0,0182 моль; смотри стадию
(4) выше) и азида натри (2,0 г; 0,031 моль) в 20 мл воды и 40 мл DMF перемешивали
при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее ее выливали в 300 мл воды и трижды
экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенную эфирную фазу несколько раз
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Небольшой образец упаривали дл нужд ЯМР и продукт кристаллизовали. Остаток осторожно упаривали, но не полностью
досуха. Выход (теоретически 3,5 г) считалс полностью количественным на основании
данных ЯМР и аналитической ВЭЖХ.
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ?.38 (dd, 1H), 7.32 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H).
(6) 4-Аминометил-2,5-дифторбензнитрил
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной в J. Chem.
Res. (M) (1992) 3128. К суспензии 300 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной влажности) в 20 мл
воды добавл ли раствор борогидрида натри (0,779 г; 0,0206 моль) в 20 мл воды. В
результате выдел лс газ. 4-Азидометил-2,5-дифторбензнитрил (1,00 г; 5,15 ммоль; со
стадии (5) выше) раствор ли 60 мл THF и добавл ли к водной смеси в лед ной бане.
Смесь перемешивали в течение 1,5 ч, после чего в нее добавл ли 10 мл 2 М HCl и смесь
фильтровали через Целит. Целит промывали дополнительным количеством воды,
объединенную водную фазу промывали EtOAc, затем подщелачивали 2 М NaOH. Далее
следовала трехкратна экстракци метиленхлоридом, объединенную органическую фазу
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Выход 0,47 г (54%).
1
Н ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.39 (dd, 1H), 7.29 (dd, 1H), 3.99 (s, 2H), 1.45 (уширенный, 2H).
(7) 2,5-Дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрил
Раствор 4-аминометил-2,5-дифторбензнитрила (0,46 г; 2,7 ммоль; смотри стадию (6)
выше) и ди-трет-бутилдикарбоната (0,60 г; 2,7 ммоль) в 10 мл THF перемешивали в
течение ночи. THF выпаривали и остаток распредел ли между водой и EtOAc.
Органический слой промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог
быть использован без дальнейшей очистки. Выход 0,71 г (97%).
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 7.35-7.2 (m, 2H), 5.11 (уширенный триплет, 1H), 4.38 (d,
2H), 1.45 (s, 9H).
(8) Вос-Pab(2,5-диF)(ОН)
Смесь 2,5-дифтор-4-трет-бутоксикарбониламинометилбензнитрила (0,70 г; 2,6 ммоль;
смотри стадию (7) выше), гидроксиламина гидрохлорида (0,54 г; 7,8 ммоль) и
триэтиламина (0,79 г; 7,8 ммоль) в 10 мл этанола перемешивали при комнатной
температуре в течение 6 суток. Далее ее распредел ли между водой и метиленхлоридом.
Водный слой экстрагировали метиленхлоридом, объединенную органическую фазу
промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог быть использован без
Страница: 81
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
дальнейшей очистки. Выход 0,72 г (92%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.27 (dd, 1H), 7.12 (dd, 1H), 4.29 (s, 2H), 1.47 (s, 9H).
(9) Вос-Pab(2,5-диF)ЧНОАс
Это взаимодействие осуществл ли в соответствии с методикой, описанной Judkins et
al., Synth. Comm. (1998) 4351. Вос-Pab(2,5-диF)(ОН) (0,70 г; 2,3 ммоль; смотри стадию
(8) выше), уксусный ангидрид (0,25 г; 2,4 ммоль) и 230 мг 10%-ного Pd/C (50%-ной
влажности) в 70 мл уксусной кислоты гидрировали при 490 кПа (5 атм) в течение 2,5 ч.
Смесь фильтровали через Целит и упаривали. Остаток высушивали вымораживанием из
ацетонитрила и воды. Продукт мог быть использован без дальнейшей очистки на
следующей стадии. Выход 0,80 г (100%).
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.49 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 4.33 (s, 2H), 1.91 (s,
3H), 1.46 (s, 9H).
(10) Boc-Pab(2,5-диF)(Teoc)
К суспензии Вос-Pab(2,5-диF)ЧНОАс (0,80 г; 2,3 ммоль; смотри стадию (9) выше) в 50
мл THF добавл ли 2-(триметилсилил)этил-п-нитрофенилкарбонат (0,85 г; 3,0 ммоль). По
капл м добавл ли раствор карбоната кали (0,80 г; 5,8 ммоль) в 10 мл воды. Смесь
перемешивали в течение ночи. Избыток Теос-реагента разрушали, добавл к раствору
глицин (0,100 г) и карбонат кали (0,75 г) и оставл его взаимодействовать в течение
дополнительных 2 ч. THF выпаривали и остаток распредел ли между водой и
метиленхлоридом. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом, объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэшхроматографи на силикагеле в смеси гептан/EtOAc (2:1) дает 0,72 г (72%) чистого
соединени .
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 8.00 (dd, 1H), 7.15 (dd, 1H), 4.98 (уширенный, 1Н), 4.36
(bd, 2Н), 4.24 (m, 2H), 1.45 (s, 9Н), 1.12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
(11) Н-Pab(2,5-диF)(Teoc)Ч2HCl
Вос-Pab(2,5-диF)(Теос) (0,38 г; 0,88 ммоль; смотри стадию (10) выше) раствор ли в
50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 30 мин и упаривали.
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD) ? 7.75-7.6 (m, 2H), 4.46 (m, 2H), 4.3 (s, 2H), 1.15 (m,
2H), 0,07 (s, 9H).
(12) Вос-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос)
К перемешиваемому раствору Boc-Aze-OH (0,189 г; 0,94 ммоль), Н-Pab(2,5диF)(Теос)Ч2HCl (0,36 г; 0,89 ммоль; смотри стадию (11) выше) и РуВОР (0,54 г; 1,03
ммоль) в 5 мл DMF добавл ли диизопропилэтиламин (0,49 г; 3,8 ммоль) и смесь оставл ли
взаимодействовать в течение ночи. Полученный продукт выливали в водный бикарбонат
натри и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали
водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в смеси
гептан/EtOAc (3:7) дала достаточно чистое соединение. Выход 0,25 г (48%).
1
H ЯМР (500 МГц; CDCl3) ? 7.98 (dd, 1H), 7.13 (dd, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.53 (m,
2H), 4.22 (m, 2H), 3.92 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 2.55-2.35 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.11
(m, 2H), 0.06 (s, 9H).
(13) Н-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc)Ч2HCl
Вос-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос) (0,25 г; 0,49 ммоль; смотри стадию (12) выше) раствор ли
в 50 мл EtOAc, насыщенного HCl (г). Смесь оставл ли на 30 мин и упаривали. Продукт
использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. Выход 0,23 г (97%).
1
H ЯМР (400 МГц; CD3OD) ? 7.59 (dd, 1H), 7.47 (dd, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.54 (m,
2Н), 4.48 (m, 2Н), 4.15 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 1.17 (m,
2H), 0.05 (s, 9H).
(14) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc)
К раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,12 г; 0,47 ммоль; смотри пример
1(8) выше), Н-Aze-Pab(2,5-диF)(Теос)Ч2HCl (0,23 г; 0,47 ммоль; смотри стадию (13)
выше) и РуВОР (0,27 г; 0,52 ммоль) в 10 мл DMF добавл ли диизопропилэтиламин (0,245 г;
Страница: 82
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
1,90 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Полученный продукт выливали в воду
и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали водой,
высушивали (Na2SO4) и упаривали. Флэш-хроматографи на силикагеле в EtOAc дала 100
мг чистой фракции и 30 мг фракции с 90%-ной чистотой. Общий выход 0,13 г (41%).
1
H ЯМР (400 МГц; CDCl3) ? 9.80 (уширенный, 1H), 8.05 (bt, 1H), 7.94 (dd, 1H), 7.20
(m, 1H), 7.2-7.1 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.54 (t, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.91 (m, 1H),
4.51 (m, 2H), 4.28 (уширенный, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 2.69
(m, 1H),2.43 (m, 1H), 1.73 (уширенный, 1H), 1.11 (m, 2H), 1.11 (s, 9H).
(15) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5ди-F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(Teoc) (60 мг; 0,093 ммоль; чиста фракци со стадии (14) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли на 1 ч при комнатной
температуре. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из воды и
ацетонитрила, получа 55 мг (96%) указанного в заголовке соединени в виде его TFAсоли, чистота >99%.
1
H ЯМР (500 МГц; CD3OD, смесь ротамеров) ? 7.55-7.3 (m, 3Н), 7.2-7.1 (m, 2H),
6.88 (t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.22 (m, 1H, минорный
ротамер), 5.20 (s, 1H, основной ротамер), 5.13 (s, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m,
1H, основной ротамер), 4.6-4.45 (m, 2H), 4.36 (m, 1H, основной ротамер), 4.19 (m, 1H,
основной ротамер), 4.07 (m, 1H, минорный ротамер), 3.98 (m, 1H, минорный ротамер),
2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной
ротамер), 2.14 (m, 1H, минорный ротамер).
13
С-ЯМР (75 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, смесь
ротамеров) ? 173.0, 172.6, 172.1, 172.0, 162.4.
APCl-MS: (M+1)=503/505 m/z.
Пример 42
Ph(3-Ch(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(ОМе)
30
35
40
45
50
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(OMe, Teoc)
Смесь Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-диF)(Teoc) (40 мг; 0,062 ммоль;
смотри пример 41(14) выше) и О-метилгидроксиламина гидрохлорида (58 мг; 0,70 ммоль) в
5 мл ацетонитрила нагревали при 70°С в течение 2 ч. Растворитель выпаривали и остаток
распредел ли между водой и EtOAc. Водный слой экстрагировали EtOAc, объединенную
органическую фазу промывали водой, высушивали (Na2SO4) и упаривали. Продукт мог
быть использован без дальнейшей очистки. Выход 35 мг (84%).
1
H ЯМР (600 МГц; CDCl3) ? 7.99 (bt, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15-7.1 (m,
1H), 7.07 (dd, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.88 (m, 1H), 4.48 (m,
2Н), 4.2-4.1 (m, 3H), 3.95 (s, 3Н), 3.67 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 0,97
(m, 2H), 0.07 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(OH)С(O)-Aze-Pab(2.5-диF(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-диF)(OMe, Teoc) (35 мг; 0,052 ммоль;
смотри стадию (1) выше) раствор ли в 3 мл TFA и оставл ли взаимодействовать в
продолжение 30 мин. TFA выпаривали и остаток высушивали вымораживанием из воды и
ацетонитрила с получением 29 мг (99%) указанного в заголовке соединени . Чистота 97%.
1
H ЯМР (300 МГц; CDCl3) ? 8.01 (bt, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (m,
Страница: 83
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
1H), 7.09 (dd, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.54 (t, 1H), 5.2-5.0 (m, 2H), 4.95-4.85 (m, 2H),
4.6-4.4 (m, 2H), 4.25 (уширенный, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.71 (m, 1H), 2.69
(m, 1H), 2.43 (m, 1H).
13
С-ЯМР (75 МГц; CDCl3) (карбонильные и/или амидинные углероды) ? 173,0, 170.9,
152.6.
APCl-MS: (M+1)=533/535 m/z.
Пример 43
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Oet, Теос)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (55 мг; 0,090 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-этилгидроксиламина гидрохлорид (53 мг; 0,54 ммоль) раствор ли в 4 мл
THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали. Остаток
хроматографировали на силикагеле, элюиру смесью метиленхлорид/метанол (95:5), что
позволило получить 55 мг (93%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (bt, 1H), 7.59 (bs, 1H), 7.47 (bd, 1H), 7.29 (bd,
1H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.86 (m,
1H), 4.55-4.4 (m, 2H), 4.25-4.1 (m, 5H), 3.69 (m, 1H), 2.66 (m, 1H), 2.41 (m, 1H),
1.33 (t, 3H), 0.98 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
(55 мг; 0,084 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли 3 мл
TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 160 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющие интерес фракции объедин ли и
высушивали вымораживанием (2х), собира 20 мг (47%) указанного в заголовке
соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD) ротамеры: ? 7.59 (bd, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.32 (bd, 2H),
7.25-7.1 (m, 2H), 6.89 (t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер),
5.18 (s, 1H, основной ротамер), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.11 (s, 1H, минорный
ротамер), 4.77 (m, 1H), 4.5-4.3 (m, 3H), 4.2-3.9 (m, 3H), 2.67 (m, 1H, минорный
ротамер), 2.52 (m, 1H, основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m,
1H, минорный ротамер), 1.28 (t, 3H).
13
С-ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
172.4, 171.9, 171.4, 153.8, 152.3.
MS (m/z) 509 (М-1) -, 511 (М+1) +.
Пример 44
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (53 мг; 0,087 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-н-пропилгидроксиламина гидрохлорид (58 мг, 0,52 ммоль) раствор ли в 4
мл THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали. Остаток
хроматографировали на силикагеле, элюиру смесью метиленхлорид/метанол (95:5), что
позволило получить 51 мг (88%) указанного в подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (m, 1H), 7.59 (bs, 1H), 7.47 (bd, 2H), 7.28 (bd,
2H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.85 (m,
1H), 4.55-4.4 (m, 2H), 4.2-4.05 (m, 5H), 3.69 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.41 (m, 1H),
1.74 (m, 2H), 1.05-0.95 (m, 5H), 0.03 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-н-Pr,
Teoc) (51 мг; 0,078 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли
3 мл TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 110 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющую интерес фракцию упаривали и
высушивали вымораживанием, собира 20 мг (47%) указанного в заголовке соединени .
Страница: 84
RU 2 300 521 C2
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H-ЯМР (500 МГц; CD3OD; ротамеры) ? 7.61 (bd, 2H), 7.38 (m, 1H), 7.35 (bd, 2H),
7.22 (m, 1H, основной ротамер), 7.18 (m, 1H), 7.15 (m, 1H, минорный ротамер), 6.92
(t, 1H, основной ротамер), 6.89 (t, 1H, минорный ротамер), 5.20 (s, 1H, основной
ротамер), 5.20 (m, 1H, минорный ротамер), 4.80 (m, 1H, основной ротамер), 4.5-4.4 (m,
2H, включа минорный ротамер, соответствующий основному при 4.37), 4.37 (m, 1H,
основной ротамер), 4.18 (m, 1H, основной ротамер), 4.09 (m, 1H, минорный ротамер),
3.99 (m, 2H), 2.70 (m, 1H, минорный ротамер), 2.54 (m, 1H, основной ротамер), 2.30
(m, 1H, основной ротамер), 2.18 (m, 1H, минорный ротамер), 1.73 (m, 2H), 1.01 (t, 3Н).
13
С-ЯМР (125 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
171.4, 153.8, 152.3.
MS (m/z) 523 (М-1) -, 525 (М+1) +.
Пример 45
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr)
(1) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)С(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 мг; 0,082 ммоль; смотри пример
1(9) выше) и O-изо-пропилгидроксиламина гидрохлорид (55 мг; 0,49 ммоль) раствор ли в
4 мл THF. Смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Растворитель выпаривали.
Остаток хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью
метиленхлорид/метанол (95:5), что позволило получить 46 мг (84%) указанного в
подзаголовке соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CDCl3): ? 7.84 (m, 1H), 7.57 (bs, 1H), 7.48 (bd, 2H), 7.29 (bd,
2H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.53 (t, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.87 (m,
1H), 4.55-4.45 (m, 2H), 4.42 (m, 1H), 4.2-4.1 (m, 3H), 3.69 (m, 1H), 2.66 (m, 1H),
2.42 (m, 1H), 1.30 (d, 6H), 0.98 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
(2) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr)
К охлажденному во льду раствору Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-изо-Pr,
Teoc) (46 мг; 0,069 ммоль; смотри стадию (1) выше) в 0,5 мл метиленхлорида добавл ли
3 мл TFA. Смесь перемешивали (лед на бан ) в течение 150 минут. Материал очищали,
использу препаративную ВЭЖХ. Представл ющую интерес фракцию упаривали и
высушивали вымораживанием (2х) с получением 22 мг (58%) указанного в заголовке
соединени .
1
H-ЯМР (400 МГц; CD3OD; ротамеры): ? 7.59 (d, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.32 (d, 2H),
7.19 (m, 1H, основной ротамер), 7.15 (m, 1H), 7.12 (m, 1H, минорный ротамер), 6.89
(t, 1H, основной ротамер), 6.86 (t, 1H, минорный ротамер), 5.18 (s, 1H, основной
ротамер), 5.18 (m, 1H, минорный ротамер), 5.12 (s, 1H, минорный ротамер), 4.78 (m,
1H, основной ротамер), 4.5-3.9 (m, 5H), 2.67 (m, 1H, минорный ротамер), 2.52 (m, 1H,
основной ротамер), 2.28 (m, 1H, основной ротамер), 2.15 (m, 1H, минорный ротамер),
1.26 (d, 6H).
13
С ЯМР (100 МГц; CD3OD) (карбонильные и/или амидинные углероды, ротамеры) ?
171.9, 171.4, 153.6.
MS (m/z) 523 (M-1) -, 525 (M+1) +.
Пример 46
Указанные в заголовках соединени из примеров 3, 6, 9, 10, 13-15, 17, 19, 21, 23,
25, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39 и 41 были проверены в соответствии с вышеприведенным
Тестом А и обнаружено, что дл всех из них значени IC50ТТ меньше 3,5 мкМ. Обнаружено,
что соединени из примеров 3, 6, 9, 10, 13,15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 и 39
показывают значени меньше 0,02 мкМ; соединени из примеров 25 и 28 - меньше 0,03
мкМ, соединение из примера 14 - меньше 0,04 мкМ и соединени из примеров 38 и 41 меньше 0,15 мкМ.
Пример 47
Указанные в заголовках соединени из примеров 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27,
28, 32 и 34 проверены в соответствии с вышеприведенным Тестом D и обнаружено, что дл Страница: 85
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
всех из них значение IC50APTT меньше 1 мкМ.
Пример 48
Указанные в заголовках соединени из примеров 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22,
24, 26, 29, 30, 33 и 43-45 проверены в соответствии в вышеприведенным Тестом Е и
обнаружено, что они про вл ют пероральную и/или парентеральную биодоступность у
крысы как соответствующий активный ингибитор (свободный амидин).
Пример 49
Указанные в заголовках соединени из примеров 1, 2, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 22, 24,
26, 29, 33, 37, 40, 43 и 45 проверены в соответствии в вышеприведенным Тестом G и
обнаружено, что они превращаютс в соответствующий активный ингибитор (свободный
амидин) в микросомах печени людей и крыс.
Сокращени Ас = ацетил
АсОН = уксусна кислота
APCl = химическа ионизаци при атмосферном давлении (в отношении MS)
API = ионизаци при атмосферном давлении (в отношении MS)
водн. = водный
AUC = площадь под кривой
Aze = (S)-азетидин-2-карбоксилат (если не определено особо)
AzeOH = азетидин-2-карбонова кислота
Bn = бензил
Вос = трет-бутилоксикарбонил
BSA = бычий сывороточный альбумин
Bu = бутил
Bzl = бензил
Cl = химическа ионизаци (в отношении MS)
сут. = сутки
DCC = дициклогексилкарбодиимид
DIBAL-H = диизобутилалюминийгидрид
DIPEA = диизопропилэтиламин
DMAP = 4-(N,N-диметиламино)пиридин
DMF = диметилформамид
DMSO = диметилсульфоксид
DVT = тромбоз глубоких вен
EDC = 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид
е.е. = энантиомерный избыток
Et = этил
эфир = диэтиловый эфир
EtOAc = этилацетат
EtOH = этанол
Et2O = диэтиловый эфир
ч = час (часы)
HATU = O-(азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурони гексафторфосфат
HBTU = [N,N,N',N'-тетраметил-O-(бензотриазол-1-ил)урони гексафторфосфат]
HCl = сол на кислота, газообразный хлористый водород или соль гидрохлорид (в
зависимости от контекста)
Hex = гексаны
НОАс = уксусна кислота
ВЭЖХ = высокоэффективна жидкостна хроматографи ЖХ = жидкостна хроматографи Me = метил
MEM = метоксиэтоксиметил
МеОН = метанол
Страница: 86
RU 2 300 521 C2
5
10
15
20
25
30
мин = минута(ы)
MS = масс-спектроскопи МТВЕ = метил-трет-бутиловый эфир
NADH = никотинамидадениндинуклеотид, восстановленна форма
NADPH = никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленна форма
NIH = Национальный институт здравоохранени (США)
NIHU = единица тромбина Национального института здравоохранени ЯМР = дерный магнитный резонанс
ОАс = ацетат
Pab = п-амидинобензиламино
Н-Pab = п-амидинобензиламин
Ph = фенил
Pr = пропил
Pro = (S)-пролинил
РуВОР = (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфони гексафторфосфат
QF = тетрабутиламмонийфторид
RedAI = натри бис(2-метоксиэтокси)алюминийгидрид
ОФЖХ = обращенно-фазова высокоэффективна жидкостна хроматографи КТ = комнатна температура
SOP = стандартна рабоча процедура(ы)
TBTU = [N,N,N',N'-тетраметил-O-(бензотриазол-1-ил)урони тетрафторборат]
TEA = триэтиламин
Теос = 2-(триметилсилил)этоксикарбонил
TEMPO = 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси, свободный радикал
TFA = трифторуксусна кислота
THF = тетрагидрофуран
ТНР = тетрагидропиранил
ТСХ = тонкослойна хроматографи TMSCl = триметилсилилхлорид
TMSCN = триметилсилилцианид
УФ = ультрафиолет
Z = бензилоксикарбонил
Префиксы н-, втор-, изо- и трет- имеют свои обычные значени : нормальный,
вторичный, изо- и третичный. Префикс с означает цикло.
35
40
45
50
Формула изобретени 1. Соединение, выбранное из
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)СН(ОН)С(O)-Aze-Pab(ОН) или
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab, или фармацевтически приемлема соль
любого из этих соединений.
2. Соединение Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) по п.1 или его
фармацевтически приемлема соль.
3. Фармацевтическа композици дл ингибировани тромбина, включающа в себ любое из соединений по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с
?
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
3
Размер файла
953 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа