close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)
RU
(11)
2 300 563
(13)
C2
(51) МПК
C12N 5/06
C12N 5/02
(2006.01)
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2005116304/13, 31.05.2005
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
31.05.2005
(43) Дата публикации за вки: 10.12.2006
(45) Опубликовано: 10.06.2007 Бюл. № 16
Адрес дл переписки:
141142, Московска обл., Щелковский р-н, п.
Биокомбинат, 42, кв.3, А.К. Елисееву
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ СУСПЕНЗИОННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК
R U
2 3 0 0 5 6 3
МЛЕКОПИТАЮЩИХ
(57) Реферат:
Изобретение относитс к биотехнологии и
может быть использовано при производстве
питательных
сред
дл суспензионного
культивировани клеток. Питательна среда
содержит натрий хлористый, калий хлористый,
магний сернокислый, натрий фосфорнокислый
двузамещенный,
калий
фосфорнокислый
однозамещенный, кальций хлористый, натрий
двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин,
L-триптофан, L-цистин, пантотенат кальци ,
пиридоксаль
HCl,
тиамин,
мезо-инозит,
никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту,
глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных
белков,
ферментативный
гидролизат
лактальбумина, сыворотку крупного рогатого скота,
амфотерицин, бензилпенициллина натриевую соль,
канамицина сульфат и дистиллированную воду.
Изобретение позвол ет получить качественную и
экономически выгодную питательную среду. 2 табл.
(56) (продолжение):
Под ред. Г.П. ПИНАЕВА. Методы культивировани клеток. Сборник научных трудов. - М.: НАУКА, 1988, с.4757.
Страница: 1
RU
C 2
C 2
(73) Патентообладатель(и):
ОАО "Институт биотехнологий ветеринарной
медицины" (RU)
2 3 0 0 5 6 3
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: SU 1735360 A1, 23.05.1992. Под ред.
Л.П. ДЬЯКОНОВА, В.И. СИТЬКОВА. Животна клетка в культуре. Методы и применение в
биотехнологии. - М.: Спутник, 2000, с.52-55.
RU 2201958 С2, 10.04.2003. ГОЛУБЕВ Д.Б.,
СОМИНИНА А.А., МЕДВЕДЕВА М.Н. Руководство
по применению клеточных культур в
вирусологии. - М.: Медицина, 1976, с.15-21.
RU 2036233 C1, 27.05.1995. (см. прод.)
R U
(72) Автор(ы):
Елисеев Анатолий Константинович (RU),
Мельник Николай Васильевич (RU),
Зенов Николай Иванович (RU),
Михеева Галина Филипповна (RU),
Литенкова Ирина Юрьевна (RU),
Шмаленко Тать на Григорьевна (RU),
Красуткин Сергей Николаевич (RU)
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 300 563
(13)
C2
(51) Int. Cl.
C12N 5/06
C12N 5/02
(2006.01)
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2005116304/13, 31.05.2005
(24) Effective date for property rights: 31.05.2005
(43) Application published: 10.12.2006
(45) Date of publication: 10.06.2007 Bull. 16
Mail address:
141142, Moskovskaja obl., Shchelkovskij r-n,
p. Biokombinat, 42, kv.3, A.K. Eliseevu
thiamine,
meso-inositol,
nicotinamide,
riboflavin, glucose, muscle proteins enzymatic
hydrolyzate,
cattle
serum,
amphotericin,
benzylpenicillin sodium salt, kanamycin sulfate
and distilled water. Invention allows preparing
qualitative and economically profitable nutrient
medium. Invention can be used in preparing
nutrient media for suspension culturing cells.
EFFECT: valuable properties of nutrient medium.
2 tbl
R U
2 3 0 0 5 6 3
(57) Abstract:
FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: invention proposes a nutrient
medium comprising sodium chloride, potassium
chloride, magnesium sulfate, sodium hydrogen
phosphate,
potassium
dihydrogen
phosphate,
calcium
chloride,
sodium
hydrocarbonate,
Larginine,
L-glutamine,
L-tyrosine,
L-triptophan,
L-cystine, calcium pantothenate, pyridoxal . HCl,
Страница: 2
EN
C 2
C 2
(54) NUTRIENT MEDIUM FOR SUSPENSION CULTURING MAMMALIAN CELLS
2 3 0 0 5 6 3
(73) Proprietor(s):
OAO "Institut biotekhnologij veterinarnoj
meditsiny" (RU)
R U
(72) Inventor(s):
Eliseev Anatolij Konstantinovich (RU),
Mel'nik Nikolaj Vasil'evich (RU),
Zenov Nikolaj Ivanovich (RU),
Mikheeva Galina Filippovna (RU),
Litenkova Irina Jur'evna (RU),
Shmalenko Tat'jana Grigor'evna (RU),
Krasutkin Sergej Nikolaevich (RU)
RU 2 300 563 C2
5
10
15
Область техники, к которой относитс изобретение. Область биотехнологии, сфера
питательных сред, суспензионного культивировани клеток почки сирийского хом чка (ВНК
- 21).
Уровень техники. Из литературных данных известны прописи питательных сред дл суспензионного культивировани клеток:
- среда Купера (Методические рекомендации по работе с клеточными культурами и
средами /Под ред.А.А.Сомниной.- Ленинград.- 1975. - стр.38-40),
- специальна среда дл культивировани клеток ВНК-2.1 (Голубев Д.Б., Сомнина А.А.,
Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии.- Л.:
Медицина, 1976. стр.19),
- среда Мак-Ко дл суспензионного культивировани RPMI - 1640 (Животна клетка в
культуре (Методы и применение в биотехнологии / Под ред. проф. Дь конова Л.П., проф.
Ситькова В.И. - М.: Компани Спутник, 2000. стр.53- 55).
В состав перечисленных питательных сред вход т: неорганические соли, аминокислоты,
витамины, углеводы. Из указанных аналогов наиболее близким к за вл емому
изобретению (прототипом) вл етс среда RPMI-1640 (табл.1).
20
25
30
35
40
45
50
Страница: 3
DE
RU 2 300 563 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Страница: 4
RU 2 300 563 C2
5
10
15
20
25
30
В представленной таблице к существенным отличительным признакам патентуемой
питательной среды относ тс те, что среда дополнительно содержит гидролизат
мышечных белков ферментативный сухой и гидролизат лактальбумина ферментативный и
только п ть аминокислот вместо 20 аминокислот в прототипе.
Раскрытие изобретени .
(1) Сведени , раскрывающие сущность изобретени .
(1.1) Сущность изобретени : подобран состав компонентов питательной среды,
включающий: гидролизат мышечных белков ферментативный сухой и гидролизат
лактальбумина ферментативный; аминокислоты - аргинин, глутамин, тирозин, триптофан и
цистин, обеспечивающий накопление клеток, при суспензионном культивировании
перевиваемой линии ВНК-21 до 3,5?10 6 кл./см 3.
(1.2.) Техническим результатом за вл емого изобретени вл етс создание
экономически выгодной питательной среды дл суспензионного культивировани клеток
ВНК-21 в услови х массового биопроизводства при изготовлении культуральных вакцин.
Технический результат достигнут введением в состав питательной среды оптимального
количественного соотношени компонентов, представленных в таблице 2.
35
40
45
50
Страница: 5
RU 2 300 563 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Осуществление изобретени .
Изобретение относитс к композиции в которую вход т ингредиенты в соотношени х
количества граммов на 1 литр дистиллированной воды, указанных в таблице 2.
Способ получени композиции следующий: навески отдельных компонентов берут,
соблюда правила взвешивани дл весов соответствующего класса. Учитыва объем
приготавливаемой смеси, допускаетс взвешивание солей, гидролизатов, глюкозы на весах
Страница: 6
RU 2 300 563 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
3-го класса; навески отдельных аминокислот, витаминов и антибиотиков - на
аналитических весах 2-го класса с соблюдением точности до второго знака после зап той.
Процесс приготовлени питательной среды заключаетс в приготовлении солевой
основы среды, которой вл етс раствор Хенкса, и растворении в нем антибиотиков,
солей, глюкозы, гидролизата мышечных белков ферментативного сухого и гидролизата
лактальбумина ферментативного по 1,25 г/л с конечной концентрацией суммы
гидролизатов в питательной среде, равной 0,25%, п ти аминокислот, сыворотки,
витаминов, бикарбоната натри .
Растворение компонентов питательной среды ведут в дистиллированной воде, имеющей
температуру 35-40°С, при непрерывном перемешивании. В начале раствор ют антибиотики
и навески солей поочередно NaCl, KCl, MgSO4?7H2O, Na2HPO4?12H2O (развести в гор чей
воде), KH2PO4 до полного растворени предыдущей навески, внос т навеску глюкозы 3,6
г/л среды. Дополнительно к механическому перемешиванию осуществл ют перемешивание
сжатым воздухом, т.е. барботированием в течение 10 минут. После растворени навесок
убирают барботирование. В глюкозосолевой раствор осторожно, тонкой струйкой при
механическом перемешивании внос т хлористый кальций (CaCl2) в виде 40%-ного
раствора и вновь барботируют. Из указанного в табл.2 количества гидролизата мышечных
белков ферментативного сухого и гидролизата лактальбумина ферментативного готов т
10%-ный раствор и внос т его в полученный глюкозосолевой раствор, и раствор ют в
течение 10 минут перемешиванием и барботированием.
Отдельно раствор ют аминокислоты. Растворение навесок провод т последовательно
согласно прописи питательной среды в таблице 2. L-цистин и l-тирозин раствор ют
отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды при нагревании до кипени с
добавлением по капл м концентрированной сол ной кислоты (d=1,19) до полного
просветлени раствора. Сначала раствор ют l-цистин, затем l-тирозин. Если при
внесении l-тирозина раствор помутнел, необходимо вновь вносить по капл м
концентрированную HCl, до полного растворени навески. Вместо l-цистина можно
использовать l-цистин HCl и раствор ть l-цистин HCl просто в кип щей воде.
Все витамины, кроме рибофлавина и фолиевой кислоты, последовательно раствор ют в
небольшом количестве дистиллированной воды комнатной температуры. При этом каждую
последующую навеску раствор ют только после полного растворени предыдущей.
Рибофлавин и фолиевую кислоту раствор ют отдельно в небольшом количестве
дистиллированной воды комнатной температуры с добавлением по капл м 20%-ного
раствора NaOH до полного растворени навесок. Сначала раствор ют рибофлавин, затем
фолиевую кислоту, при растворении которой необходимо вновь по капл м вносить 20%ный р-р NaOH до полного просветлени раствора.
В глюкозосолевой раствор внос т растворы аминокислот, витаминов, сыворотку, натрий
двууглекислый и перемешивают. После внесени в среду всех необходимых компонентов
добавл ют дистиллированную воду до необходимого объема, перемешивают, стерилизуют
фильтрацией в реактор дл культивировани клеток.
Формула изобретени Питательна среда дл суспензионного культивировани клеток млекопитающих,
содержаща натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий
фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций
хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, Lцистин, пантотенат кальци , пиридоксаль HCl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид,
рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков,
ферментативный гидролизат лактальбумина, сыворотку крупного рогатого скота,
амфотерицин, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат и
дистиллированную воду, при следующем содержании компонентов, г/л:
Натрий хлористый
0,4
Магний сернокислый
0,2
Страница: 7
CL
8,0
Калий хлористый
RU 2 300 563 C2
Натрий фосфорнокислый
двузамещенный
0,15
Калий фосфорнокислый
5
однозамещенный
0,06
Кальций хлористый
0,14
Натрий двууглекислый
0,042
L-глутамин
0,584
L-тирозин
0,02
L-триптофан
10
15
0,35
L-аргинин
L-цистин
0,015
0,032
Пантотенат кальци 0,0034
Пиридоксаль HCl
0,0034
Тиамин
0,0034
Мезо-инозит
0,0068
Никотинамид
0,0034
Рибофлавин
0,00034
Фолиева кислота
Глюкоза
0,0034
3,6
Ферментативный гидролизат
мышечных белков
1,25
Ферментативный
20
гидролизат лактальбумина
1,25
Сыворотка крупного
рогатого скота
70,0 мл
Амфотерицин
2?10 3 ед
Бензилпеницилина
25
натриева соль
1?10 5 ед
Канамицина сульфат
1?10 5 ед
Дистиллированна вода
30
35
40
45
50
Страница: 8
Остальное
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
378 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа