close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

штамм а/бак/россия/05 вируса птичьего гриппа, подтип h5n1, предназначенный для разработки средств и методов биологической защиты

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)
RU
(11)
2 300 564
(13)
C1
(51) МПК
C12N 7/00
C12R 1/93
(2006.01)
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2005129200/13, 19.09.2005
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
19.09.2005
(45) Опубликовано: 10.06.2007 Бюл. № 16
(73) Патентообладатель(и):
Вирусологический центр НИИ Микробиологии
Министерства обороны Российской Федерации
(RU)
(54) ШТАММ А/БАК/РОССИЯ/05 ВИРУСА ПТИЧЬЕГО ГРИППА, ПОДТИП H5N1,
микробиологии Министерства обороны Российской
Федерации за №1141. Изобретение может быть
использовано в вирусологических, серологических,
иммунологических и молекул рно-биологических
методах исследовани . 1 табл., 1 ил.
R U
2 3 0 0 5 6 4
(57) Реферат:
Изобретение относитс к области вирусологии.
Предложен штамм вируса птичьего гриппа, подтип
H5N1. Штамм депонирован в Специализированной
коллекции вирусов Вирусологического центра НИИ
Страница: 1
RU
C 1
C 1
ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ
2 3 0 0 5 6 4
Адрес дл переписки:
141306, Московска обл., г. Сергиев Посад-6,
Вирусологический центр НИИ Микробиологии
Министерства обороны Российской Федерации,
начальнику центра
R U
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: CN 1618956, 25.05.2005. RU 2253870 C1,
10.06.2005.
(72) Автор(ы):
Марков Виктор Иванович (RU),
Меркулов Вадим Анатольевич (RU),
Лыков Максим Валерьевич (RU),
Кулиш Владислав Сергеевич (RU),
Степанов Николай Николаевич (RU),
Коконова Мари Сергеевна (RU),
Бережной Анатолий Михайлович (RU),
Мельников Денис Геннадьевич (RU),
Онищенко Геннадий Григорьевич (RU),
Васильев Никифор Трофимович (RU),
Максимов Владимир Алексеевич (RU)
C 1
C 1
2 3 0 0 5 6 4
2 3 0 0 5 6 4
R U
R U
Страница: 2
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
(11)
2 300 564
(13)
C1
(51) Int. Cl.
C12N 7/00
C12R 1/93
(2006.01)
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2005129200/13, 19.09.2005
(24) Effective date for property rights: 19.09.2005
(45) Date of publication: 10.06.2007 Bull. 16
Mail address:
141306, Moskovskaja obl., g. Sergiev Posad-6,
Virusologicheskij tsentr NII Mikrobiologii
Ministerstva oborony Rossijskoj Federatsii,
nachal'niku tsentra
(54) AVIAN INFLUENZA VIRUS STRAIN A/BAK/RUSSIA/O5, SUBTYPE H5NQ DESIGNATED FOR
2 3 0 0 5 6 4
R U
Страница: 3
EN
C 1
C 1
DEVELOPMENT OF AGENTS AND METHODS OF BIOLOGICAL PROTECTION
(57) Abstract:
FIELD: virology.
SUBSTANCE: invention proposes avian influenza
virus strain, subtype H5N1. The strain is
deposited in the Specialized virus collection of
Virology center NII microbiology in Russian
Federation defense Ministry at № 1141. Invention
can
be
used
in
viral,
serodiagnosis,
immunological and molecular-biological methods of
investigation.
EFFECT: valuable properties of strain.
1 tbl
2 3 0 0 5 6 4
(73) Proprietor(s):
Virusologicheskij tsentr NII Mikrobiologii
Ministerstva oborony Rossijskoj Federatsii (RU)
R U
(72) Inventor(s):
Markov Viktor Ivanovich (RU),
Merkulov Vadim Anatol'evich (RU),
Lykov Maksim Valer'evich (RU),
Kulish Vladislav Sergeevich (RU),
Stepanov Nikolaj Nikolaevich (RU),
Kokonova Marija Sergeevna (RU),
Berezhnoj Anatolij Mikhajlovich (RU),
Mel'nikov Denis Gennad'evich (RU),
Onishchenko Gennadij Grigor'evich (RU),
Vasil'ev Nikifor Trofimovich (RU),
Maksimov Vladimir Alekseevich (RU)
RU 2 300 564 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Изобретение относитс к области вирусологии.
Изобретение может быть использовано в вирусологических, серологических,
иммунологических и молекул рно-биологических методах исследовани . В частности, при
конструировании вакцин, разработке ОТ-ПЦР тест-системы дл вы влени РНК вируса
птичьего гриппа, подтип H5N1 (далее - H5N1), диагностикумов дл определени антигена
H5N1 и антител к нему с помощью иммуноферментного анализа, а также разработки
средств и методов биологической защиты в отношении данного возбудител .
Вспышки высокопатогенного гриппа птиц (H5N1) наблюдались среди домашней птицы в
9 странах Азии (Камбодже, Китае, Индонезии, Японии, Лаосе, Южной Корее, Малайзии,
Таиланде и Вьетнаме) в конце 2003 г. и начале 2004 г. За данный период более чем 100
миллионов голов птиц погибли от заболевани или были уничтожены [1-4].
В период с 30 декабр 2003 г. по 17 марта 2004 г. зарегистрировано 12
подтвержденных случаев инфицировани гриппом птиц (H5N1) человека в Таиланде, во
Вьетнаме - 23, общее число летальных исходов составило 24 случа .
Начина с конца июн 2004 г. о новых вспышках гриппа птиц (H5N1) среди домашней
птицы сообщалось странами Азии: Камбоджей, Китаем, Индонезией, Малайзией,
Таиландом и Вьетнамом. В период с августа по окт брь 2004 г. спорадические случаи
инфицировани людей вирусом H5N1 наблюдались в Вьетнаме и Таиланде. В феврале
2005 г. сообщалось об инфицировании человека H5N1 в Камбодже, а в июле 2005 г. - в
Индонезии.
По состо нию на 21 июл 2005 г. всего зафиксировано 109 случаев инфицировани человека гриппом птиц (H5N1) во Вьетнаме (87), Таиланде (17), Камбодже (4) и
Индонезии (1), в 55 случа х заболевание закончилось летальным исходом [1-4].
По данным Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору в июле
2005 г. заболевание птиц "птичьим гриппом" на территории Российской Федерации
установлено в 14 населенных пунктах п ти районов Новосибирской области, а также в
Алтайском крае, Тюменской, Омской и Курганской област х.
На территорию Российской Федерации возбудитель "птичьего гриппа",
предположительно, занесен дикими водоплавающими птицами (утками) из Юго-Восточной
Азии.
Так, в конце июл 2005 года при исследовании патологоанатомического материала от
больных птиц из Новосибирской области специалистами ВЦ НИИМ МО РФ был выделен и
идентифицирован вирус гриппа птиц типа А, подтип H5N1, получивший название штамм
А/Бак/Росси /05.
Возможность распространени эпизоотии H5N1, а также возможность инфицировани данным возбудителем людей обуславливает необходимость разработки средств как
экстренной профилактики и лечени , так и идентификации возбудител и диагностики
вызываемого им заболевани , а также поиска эффективных средств и методов
биологической защиты с использованием выделенного штамма А/Бак/Росси /05.
В практике диагностических исследований дл решени этих задач наиболее часто
примен ют серологические и молекул рно-биологические методы, чувствительность и
специфичность которых во многом определ етс качеством антигенсодержащего
субстрата.
Необходимым элементом при конструировании вакцин, диагностических тест-систем дл идентификации возбудител и диагностики вызываемого им заболевани , а также поиска
эффективных средств и методов биологической защиты в отношении H5N1 вл етс наличие культуры штамма иммунологически полноценного антигена биологически
активного вируса, обладающего выраженными патогенными, иммуногенными и
протективными свойствами. Такого рода исследовани предполагают разработку методики
выделени возбудител из клинического материала, выбор оптимального субстрата
накоплени вируса H5N1, получени культуры штамма и рабочих культур, способа
концентрировани и очистки, а также метода щад щей инактивации. Кроме того,
необходимо провести выбор животных - продуцентов гипериммунных сывороток по
Страница: 4
DE
RU 2 300 564 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
отношению к возбудителю H5N1 и методов получени высокоочищенных препаратов
антител к нему. Дл оценки эффективности имеющихс и разработки новых
неспецифических и специфических медицинских средств защиты необходимо выбрать
наиболее чувствительный вид животного к возбудителю H5N1, воспроизвод щий основные
патогенетические синдромы и симптомы заболевани .
Выделенный штамм А/Бак/Росси /05 вируса H5N1 не имеет аналогов в Российской
Федерации.
Целью насто щего изобретени вл етс получение штамма А/Бак/Росси /05,
предназначенного дл разработки средств экстренной профилактики и лечени вызываемого им заболевани (вакцин, химиопрепаратов и т.д.); приготовлени антигенсодержащего субстрата дл идентификации данного возбудител и диагностики
вызываемого им заболевани в ИФА, а также идентификации РНК вируса H5N1 в ОТ-ПЦР и
оценки эффективности средств и методов биологической защиты в отношении возбудител H5N1.
Сущность изобретени состоит в том, что впервые в Российской Федерации в
результате вирусологических исследований выделен в июле 2005 г. вирус птичьего
гриппа, подтип H5N1, штамм А/Бак/Росси /05 из патологического материала от больных
птиц из Новосибирской области. Штамм А/Бак/Росси /05 обладает биологическими
характеристиками, позвол ющими использовать его при конструировании
иммунобиологических препаратов (диагностических тест-систем, иммуноглобулина,
вакцины) и оценке их эффективности.
Титр антигена в РГА после проведенного пассажа на РКЭ составил 1:80. Эталонную
культуру штамма хран т в виде лиофильно высушенной суспензии аллантоисной жидкости
в 10% растворе сахарозы в дистиллированной воде с 10% желтка куриного йца и
антибиотиками при температуре не выше минус (20±2)°С.
Принадлежность к вирусу птичьего гриппа, подтип H5N1, доказана с помощью ОТ-ПЦР
тест-системы, а также путем секвенировани фрагмента генома выделенного штамма
возбудител .
Пример выполнени Полученный штамм А/Бак/Росси /05 вируса птичьего гриппа обладает нижеописанными
характеристиками.
1. Родословна штамма А/Бак/Росси /05 вируса птичьего гриппа представлена в
соответствии с чертежом.
2. Число пассажей к моменту паспортизации 1.
3. Стандартные услови выращивани in vivo.
Среда культивировани - размножаетс в развивающихс куриных эмбрионах 9-11суточного возраста. Температура культивировани вируса H5N1 (36±1)°С.
4. Биологические свойства штамма
Характеристикой вируса H5N1 вл етс высока репродуктивна способность в
развивающихс куриных эмбрионах. Вызывает гибель РКЭ на первые сутки после
инфицировани .
5. Устойчивость штамма
Хранение в течение 3 недель (срок наблюдени ) лиофилизированной эталонной
культуры штамма А/Бак/Росси /05 при температуре минус (20±2,0)°С не вызывает
снижени титра антигена в РГА. Хранение в течение двух мес цев (срок наблюдени )
жидкой рабочей культуры штамма А/Бак/Росси /05 при температуре минус (20±2)°С также
не вызывает снижение титра антигена в РГА.
6. Контроль контаминации культуры штамма
Грибкова и бактериальна микрофлора в культуре штамма А/Бак/Росси /05 вируса
H5N1 отсутствуют.
7. Способ лиофилизации
Аллантоисна жидкость на 10% растворе сахарозы в дистиллированной воде с 10%
желтка куриного йца.
Страница: 5
RU 2 300 564 C1
8. Характеристика эталонного штамма А/Бак/Росси /05 вируса H5N1 представлена в
таблице.
Таблица - Характеристика эталонного штамма А/Бак/Росси /05 вируса H5N1
5
Наименование
и обозначение
штамма
Место получени штамма
Штамм А/Бак/ Выделен в июле 2005 г. в
Росси /05
Вирусологическом центре
вируса H5N1 НИИ микробиологии МО РФ
из патологоанатомического
материала от больных птиц
из Новосибирской области
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Характеристика штамма
Морфологические
свойства
Культуральные Иммуногенные Патогенные
свойства
свойства
свойства
Вирионы имеют
Размножаетс сферическую форму в РКЭ
диаметром 80-100 нм,
встречаютс нитевидные формы с
диаметром 80 нм.
Поверхность вириона
покрыта шипиками
длиной около 10 нм
н/д
н/д
Услови сохранени Услови Услови получени штамма на предпри тии пассировани маточной культуры
штамма
(первичный
посевной вирус)
Хран т в лиофильно
высушенном состо нии
при температуре минус
(20±2)°С и ниже в
ампулах, запа нных под
вакуумом, в виде
аллантоисной жидкости
на 10% растворе
сахарозы в
дистиллированной воде с
10% желтка куриного
йца
На РКЭ
РКЭ,
инфицированные
эталонным
штаммом на уровне
не более 2, 3-го
пассажа на РКЭ
Примером наилучшего использовани штамма А/Бак/Росси /05 вируса H5N1 может
вл тьс его использование в качестве основы дл конструировани различных
медицинских иммунобиологических препаратов, вакцины, предназначенной дл иммунизации человека (сельскохоз йственных животных), ИФА и ПЦР тест-систем,
предназначенных дл определени антигена вируса H5N1 в сыворотке крови и аспиратах
больных людей и сельскохоз йственных животных, ИФА тест-системы, предназначенной
дл определени антител к вирусу H5N1 в сыворотке крови людей и сельскохоз йственных
животных.
Ампулу с культурой штамма извлекают из холодильника, температура хранени минус
(20±2)°С. РКЭ инфицируют вирусом H5N1 в объеме от 0,1 до 0,2 мл вируссодержащей
суспензии. Продолжительность культивировани составл ет 48 часов при температуре
(32,5±0,5)°С.
После инкубации эмбрионы помещают на 12 часов в холодильник при плюс 4°С. Затем
вскрывают РКЭ и отбирают аллантоисную жидкость. Вирус концентрируют при
использовании системы полиэтиленгликоль-6000-NaCl (7% - 0,3 М) в течение 24 часов при
температуре (4±2)°С и осаждают центрифугированием при 2500 об?мин -1 в течение 20
минут. Осадок ресуспендируют в NTE-буфере и вирус осаждают в линейном градиенте
концентрации сахарозы от 10 до 60%. Центрифугирование провод т в роторе SW 27 в
течение 2,5 часов при 25000 об?мин -1 при температуре (4±2)°С.
Культуру штамма А/Бак/Росси /05 вируса H5N1 извлекают шприцем из
опалесцирующего кольца на границе раздела раствора сахарозы от 10 до 60%-ной
концентрации и диализуют против NTE-буфера в течение 24 часов при температуре
(4±2)°С.
Полученный препарат представл ет собой концентрированный очищенный препарат
вируса H5N1 штамм А/Бак/Росси /05, который может быть использован:
- в качестве основы при разработке вакцин дл человека и сельскохоз йственных
животных;
- в качестве диагностикума в ИФА тест-системах дл определени антигена к вирусу
H5N1 и антител к нему;
- в качестве положительного контрольного образца в ПЦР тест-системе дл вы влени РНК вируса H5N1.
Штамм А/Бак/Росси /05 вируса H5N1 депонирован в Специализированную коллекцию
вирусов Вирусологического центра НИИ микробиологии Вооруженных сил Российской
Федерации за №1141.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Centers for Disease Control and Prevention. Cases of influenza A (H5N1)Thailand, 2004. MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep.- 2004. - Vol.53. - P.100-103.
2. Enserink M., Kaiser J. Avian flu finds new mammal hosts. Science. - 2004.Vol.305. - P.1385.
3. Keawcharoen J., Oraveerakul K., Kuiken T., Fouchier R., Amonsin A., Payungporn
Страница: 6
RU 2 300 564 C1
S., et al. Avian influenza H5N1 in tigers and leopards. Emerg. Infect. Dis. - 2004. Vol.10. - P.2189-2191.
4. Cyranoski D. Bird flu data languish in Chinese journals. Nature. - 2004. - Vol.430. P.955.
5
10
Формула изобретени Штамм вируса птичьего гриппа, подтип H5N1, депонированный в Специализированную
коллекцию вирусов Вирусологического центра НИИ микробиологии Министерства обороны
Российской Федерации за №1141 и предназначенный дл приготовлени на его основе
диагностических тест-систем дл специфического вы влени РНК вируса птичьего гриппа,
подтип H5N1, с помощью полимеразной цепной реакции, определени антигена H5N1,
антител к нему с помощью иммуноферментного анализа и вакцины, а также разработки
средств и методов биологической защиты в отношении данного возбудител .
15
20
25
30
35
40
45
50
Страница: 7
CL
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
162 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа