close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2335298

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 335 298
(13)
C2
(51) МПК
A61K 39/12
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2006133328/13, 04.03.2005
(30) Конвенционный приоритет:
17.03.2004 US 60/553,867
(73) Патентообладатель(и):
ФАРМАЦИЯ ЭНД АПДЖОН КОМПАНИ ЛЛС (US)
(43) Дата публикации за вки: 27.03.2008
R U
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
04.03.2005
(72) Автор(ы):
ЭЛЛСВОРТ Майкл Аарон (US),
ТАКЕР Кассиус МакАллистер (US),
ГИВЕНС Морис Дэниэл (US)
(45) Опубликовано: 10.10.2008 Бюл. № 28
2 3 3 5 2 9 8
2 3 3 5 2 9 8
R U
(85) Дата перевода за вки PCT на национальную фазу:
15.09.2006
C 2
C 2
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: FRAY M.D. et al., "The effects of
bovine viral diarrhoea virus on cattle
reproduction in relation to disease control",
Anim Reprod Sci. 2000 Jul 2; 60-61:615-27.
Review. VAN OIRSCHOT J.T. et al.,
"Vaccination of cattle against bovine viral
diarrhoea", Vet Microbiol. 1999 Jan; 64(2-3):
169-83. Review. US 2003104612, 05.06.2003.
(86) За вка PCT:
IB 2005/000610 (04.03.2005)
(87) Публикаци PCT:
WO 2005/089793 (29.09.2005)
Адрес дл переписки:
129010, Москва, ул. Б.Спасска , 25, стр.3,
ООО "Юридическа фирма Городисский и
Партнеры", пат.пов. Е.Е.Назиной, рег. № 517
(54) СПОСОБ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ИНФЕКЦИИ СЕМЕННИКОВ BVDV
(57) Реферат:
Изобретение относитс к области вирусологии и
биотехнологии. Способ предусматривает введение
животному вакцины, выбранной из группы,
состо щей (а) из модифицированной живой
вакцины BVDV типа 1, (b) из модифицированной
живой вакцины BVDV типа 2 и (с) одновременно из
модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и
модифицированной живой вакцины BVDV типа 2.
Изобретение эффективно дл профилактики или
снижени инфекции семенников, вызванной
инфекцией BVDV типа 1 и 2. Изобретение может
быть
использовано
в
ветеринарии
и
животноводстве. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл.
Страница: 1
RU
C 2
C 2
2 3 3 5 2 9 8
2 3 3 5 2 9 8
R U
R U
Страница: 2
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 335 298
(13)
C2
(51) Int. Cl.
A61K 39/12
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2006133328/13, 04.03.2005
(72) Inventor(s):
EhLLSVORT Majkl Aaron (US),
TAKER Kassius MakAllister (US),
GIVENS Moris Dehniehl (US)
(24) Effective date for property rights: 04.03.2005
(30) Priority:
17.03.2004 US 60/553,867
(43) Application published: 27.03.2008
(45) Date of publication: 10.10.2008 Bull. 28
2 3 3 5 2 9 8
(85) Commencement of national phase: 15.09.2006
(86) PCT application:
IB 2005/000610 (04.03.2005)
(87) PCT publication:
WO 2005/089793 (29.09.2005)
(57) Abstract:
FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention concerns virology and
biotechnology area. The way provides introduction
of the vaccine chosen from a group, consisting
(a) from modified live vaccine BVDV of type 1,
(b) from modified live vaccine BVDV of type 2,
and (c) simultaneously from modified live vaccine
BVDV of type 1 and modified live vaccine BVDV of
type 2 to an animal. The invention is effective
for prevention or depression of an infection of
the spermaries caused by infection BVDV of type 1
and 2. The invention can be used in veterinary
science and animal industries.
EFFECT: prevention or depression of an
infection of the spermaries caused by infection BVDV.
20 cl, 1 dwg, 4 tbl, 2 ex
R U
2 3 3 5 2 9 8
(54) METHOD OF BACTERINATION AGAINST INFECTION OF SPERMARIES BVDV
Страница: 3
C 2
C 2
Mail address:
129010, Moskva, ul. B.Spasskaja, 25, str.3,
OOO "Juridicheskaja firma Gorodisskij i
Partnery", pat.pov. E.E.Nazinoj, reg. № 517
EN
R U
(73) Proprietor(s):
FARMATsIJa EhND APDZhON KOMPANI LLS (US)
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Область изобретени Способы по насто щему изобретению относ тс к способам профилактики инфекции
семенников вирусом бычьей вирусной диареи путем иммунизации восприимчивых самцов
животных против инфекции.
Описание предшествующего уровн техники
Вирус бычьей вирусной диареи (BVDV) представл ет собой экономически значимый
патоген крупного рогатого скота и других восприимчивых животных, который может
выдел тьс с семенем хронически и остро инфицированных быков и самцов других
восприимчивых животных. Этот патоген вызывает у восприимчивых животных заболевани желудочно-кишечного тракта, респираторной и репродуктивной систем.
Хот желудочно-кишечные и респираторные заболевани , вызванные
высокопатогенными штаммами BVDV более значимы с клинической точки зрени , тем не
менее репродуктивные потери вследствие BVDV могут быть экономически гораздо более
значимыми с экономической точки зрени . В литературных источниках, описывающих
передачу BVDV, указано, что вирус в семени быков может инфицировать восприимчивых,
осемененных коров, вызыва снижение частоты беременности, раннюю гибель зародыша,
выкидыши и рождение тел т, хронически инфицированных BVDV. 1-3
Хронически инфицированные быки наиболее часто инфицируют восприимчивых,
осемененных коров, так как их сем содержит высокую концентрацию вируса (10 7,6
инфицирующих доз клеточной культуры (50%)/мл) (CCID50/мл). 3 При сравнении
инфицированные семенники остро инфицированных иммунокомпетентных быков выдел ли
более низкие концентрации вируса (5-75 CCID50/мл) в семени, но они также способны
передавать BVDV. 4 В одном из исследований сообщалось, что 25-50 CCID50/мл вируса в
семени инфицировали 5% осемененных нетелей, и последующа горизонтальна передача
BVDV от инфицированных нетелей беременным коровам того же стада приводила к
хронической инфекции их плодов. 5
Две группы исследователей сообщили, что остра инфекци быков после полового
созревани может вызвать хроническую инфекцию BVDV, котора локализуетс в
семенниках. 6,7 Один необычный случай возник у серопозитивного, не имеющего виремии
быка, которого держали на станции искусственного осеменени в Новой Зеландии. Быка
доставили в центр искусственного осеменени после безрезультатных попыток выделени BVDV из крови. Несмотр на присутствие нейтрализующих антител к BVDV бык посто нно
выдел л низкие уровни вируса в сем (2х10 3 CCID50/мл) в течение 11 мес цев, после
чего животное забили. Источник острой инфекции был неизвестен. При вскрытии вирус был
выделен только из семенников быка. 6 Вирус в семени этого быка привел к инфекции и
последующей сероконверсии 1 из 3 осемененных серонегативных нетелей. 8 При второй
искусственно вызванной инфекции BVDV был вы влен с помощью обратной "гнездовой"
полимерной цепной реакции (RT-nPCR) в семени 2 из 3 не имеющих виремии быков после
полового созревани в течение периода до 7 мес, но вирус нельз было выделить
стандартными способами тканевой культуры. Сем , собранное через 5 мес после
первоначального контакта и введенное внутривенно, вызвало инфекцию BVDV у одного
серонегативного теленка. Сем , вз тое в день контакта и через 7 мес после контакта,
не вызвало инфекцию еще у двух других серонегативных тел т. 7
В двух исследовани х было отмечено, что быки с острой инфекцией могут выдел ть
BVDV в сем с приемлемой концентрацией, подвижностью и морфологией сперматозоидов.
4,5 В другом исследовании было обнаружено снижение подвижности, увеличение венечных
дефектов, маленькие головки сперматозоидов и проксимальные капли (было обнаружено у
быков с острой инфекцией). 9
Независимо от неизвестности в отношении деталей передачи при естественном
размножении и воздействи на фертильность быков пон тно, что инфецирование
семенников BVDV у восприимчивых самцов животных вл етс значимой экономической
потерей ввиду репродуктивных потерь вследствие передачи BVDV коровам.
Вирусные инфекции семенников представл ют серьезную проблему дл лечени или
Страница: 4
DE
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
профилактики посредством иммунизации, так как известно, что семенники вл ютс иммунологически изолированными. К удивлению, авторы изобретени показали, что
иммунизаци вл етс эффективным способом борьбы с инфекций семенников BVDV
среди восприимчивых животных.
Ссылки
1. Meyling A., Jensen A.M. Transmission of bovine virus diarrhea virus (BVDV) by
artificial insemination (AI) with semen from a persistently-infected bull. Veterinary
Microbiology 1988;17:97-105.
2. Kirkland P.D., Mackintosh S.G., Moyle A. The outcome of widespread use of semen
from a bull persistently infected with pestivirus. Veterinary Record 1994;135:527-529.
3. McGowan M.R., Kirkland P.D. Early reproductive loss due to bovine pestivirus
infection. British Veterinary Journal 1995;151:263-270.
4. Kirkland P.D., Richards S.G., Rothwell J.T., et al. Replication of bovine viral
diarrhea virus in the bovine reproductive tract and excretion of virus in semen
during acute and chronic infections. Veterinary Record 1991;128:587-590.
5. Kirkland P.D., McGowan M.R., Mackintosh S.G., et al. Insemination of cattle with
semen from a bull transiently infected with pestivirus. Veterinary Record 1997;140:124-127.
6. Voges H., Horner G.W., Rowe S., et al. Persistent bovine pestivirus infection
localized in the testes of an immuno-competent, non-viraemic bull. Veterinary
Microbiology 1998;61:165-175.
7. Givens M.D., Heath A.M., Brock K.V., et al. Detection of bovine viral diarrhea
virus in semen obtained from inoculation of seronegative postpubertal bulls. AJVR
2003;64:428-434.
8. Niskanen R., Alenius S., Belak K., et al. Insemination of susceptible heifers
with semen from a nonviraemic bull with persistent bovine virus diarrhea virus
infection localized in the testes. Reproduction in Domestic Animals 2002;37:171-175.
9. Paton D.J., Goodey R., Brockman S., et al. Evaluation of the quality and
virological status of semen from bulls acutely infected with BVDV. Veterinary Record 1989;124:
63-64.
10. Study Number 393T-60-03-311, Animal Health Veterinary Medicine Research and
Development, Medwest Veterinary Services, Inc., 1443 Highway 77, Oakland, Nebraska.
11. Study Number 3131R-60-02-258, Animal Health Veterinary Medicine Research and
Development, Medwest Veterinary Services, Inc., 1443 Highway 77, Oakland, Nebraska.
Краткое описание чертежей
На чертеже показан процент образцов биопсии ткани семенников, положительных в
отношении BVDV после антигенной стимул ции BVDV типа 2. Надписи: VI = выделение
вируса, PCR = полимеразна цепна реакци , IHC = иммуногистохими , a,b - различи процентных долей с различными подстрочными буквами вл ютс статистически
значимыми (P).
Сущность изобретени Изобретение относитс к способу профилактики или лечени инфекции семенников
BVDV у восприимчивого самца животного, предусматривающему введение животному
эффективного количества вакцины, выбранной из группы, состо щей из инактивированной
вакцины BVDV типа 1, инактивированной вакцины BVDV типа 2, модифицированной живой
вакцины BVDV типа 1 и модифицированной живой вакцины BVDV типа 2.
Изобретение также относитс к вакцине, выбранной из группы, состо щей из
инактивированной вакцины BVDV типа 1, инактивированной вакцины BVDV типа 2,
модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и модифицированной живой вакцины
BVDV типа 2, дл использовани в качестве лекарственного средства дл профилактики
инфекции семенников BVDV у восприимчивого самца животного.
Изобретение, кроме того, относитс к применению вакцины, выбранной из группы,
состо щей из инактивированной вакцины BVDV типа 1, инактивированной вакцины BVDV
типа 2, модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и модифицированной живой
Страница: 5
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
вакцины BVDV типа 2, дл получени лекарственного средства дл профилактики
инфекции семенников BVDV у восприимчивого самца животного.
Изобретение также относитс к способу профилактики инфекции семенников BVDV у
восприимчивого самца животного, предусматривающему идентификацию животного с
повышенным риском инфекции семенников BVDV и введение животному эффективного
количества вакцины, выбранной из группы, состо щей из инактивированной вакцины BVDV
типа 1, инактивированной вакцины BVDV типа 2, модифицированной живой вакцины BVDV
типа 1 и модифицированной живой вакцины BVDV типа 2.
Изобретение также относитс к вакцине, выбранной из группы, состо щей из
инактивированной вакцины BVDV типа 1, инактивированной вакцины BVDV типа 2,
модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и модифицированной живой вакцины
BVDV типа 2, дл применени в качестве лекарственного средства дл профилактики
инфекции семенников BVDV у восприимчивого самца животного с повышенным риском
инфекции семенников BVDV.
Изобретение, кроме того, относитс к применению вакцины, выбранной из группы,
состо щей из инактивированной вакцины BVDV типа 1, инактивированной вакцины BVDV
типа 2, модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и модифицированной живой
вакцины BVDV типа 2, дл получени лекарственного средства дл профилактики
инфекции семенников BVDV у восприимчивого самца животного с повышенным риском
инфекции семенников BVDV.
Изобретение также относитс к изделию, содержащему сосуд или сосуды, включающие
вакцину BVDV, выбранную из группы, состо щей из инактивированной вакцины BVDV типа
1, инактивированной вакцины BVDV типа 2, модифицированной живой вакцины BVDV типа
1 и модифицированной живой вакцины BVDV типа 2, и инструкцию по применению вакцины
BVDV дл профилактики инфекции семенников BVDV у восприимчивого самца животного.
Восприимчивые самцы животных могут включать быков, баранов и хр ков. В
предпочтительном варианте осуществлени животным вл етс бык.
Вакцины и издели могут включать одновременно как модифицированную живую
вакцину BVDV типа 1, так и модифицированную живую вакцину BVDV типа 2.
Вакцины могут быть получены из цитопатогенного и нецитопатогенного вируса.
Необ зательно, вакцины и издели по изобретению могут включать по меньшей мере
один дополнительный антиген, выбранный из группы, состо щей из бычьего вируса герпеса
(BHV-1); вируса парагриппа типа 3 (PIV3); бычьего респираторного синцитиального
вируса (BRSV); Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira
borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira
interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Mycobacterium bovis и Mycobacterium dispar.
В предпочтительном варианте осуществлени вакцины и издели по изобретению могут
включать по меньшей мере один дополнительный антиген, выбранный из группы,
состо щей из бычьего вируса герпеса (BHV-1); вируса парагриппа типа 3 (PIV3) и
бычьего респираторного синцитиального вируса (BRSV).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относитс к способу лечени или профилактики инфекции семенников
вирусами BVDV у восприимчивого самца животного. Способ по насто щему изобретению
эффективен дл профилактики или снижени инфекции семенников, вызванной
инфекцией, BVDV типа 1 и 2.
Определени и сокращени "Вирус бычьей вирусной диареи" ("BVDV") представл ет собой мелкий, однонитевой РНК
вирус (с положительным геномом) семейства Flaviviridae и рода Pestivirus. Были
описаны два биотипа BVDV, цитопатический (СР) и нецитопатический (NC), на основании
присутстви или отсутстви видимого цитопатического эффекта in vitro при
инфицировании монослоев восприимчивых клеток. В большинстве случаев
Страница: 6
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
нецитопатический биотип выделен при вспышках заболевани в поле. На основании
значительных различий вирусной РНК штаммы вируса бычьей вирусной диареи можно
также разделить на 2 отдельных вида (т.е. генотипа), тип 1 и тип 2.
Термин "восприимчивое животное" означает любое животное, которое восприимчиво к
инфекци м BVDV, например крупный рогатый скот, овцы и свиньи.
Термин "восприимчивый самец животного" означает любого самца животного, который
восприимчив к инфекци м BVDV семенников, например самец крупного рогатого скота,
овец и свиней. Некастрированные самцы крупного скота называютс "быками".
Некастрированные самцы овец называютс "баранами". Некастрированные самцы свиней
называютс "хр ками".
Термин "предотвращение" или "контроль" в отношении инфекции семенников означает
снижение или устранение риска инфекции семенников восприимчивого самца животного
вирулентными типами 1 и 2 BVDV; ослабление или уменьшение симптомов инфекции или
ускорение выздоровлени после инфекции. Вакцинаци считаетс терапевтической, если
наблюдаетс снижение вирусной или бактериальной нагрузки, по данным биопсии
семенников или о присутствии вируса в семени.
Термин "инфекци " может означать острую или хроническую инфекцию BVDV.
"Остра " или "транзиторна " инфекци BVDV возникает при контакте
иммунокомпетентного восприимчивого животного с цитопатическим или нецитопатическим
штаммом BVDV. Хот чаще всего встречаетс субклиническа инфекци , тем не менее
могут наблюдатьс такие симптомы как депресси , отсутствие аппетита, эрозии слизистой
и изъ звлени ротовой полости, диаре и смерть. Иммунокомпетентное животное с острой
инфекцией может передать вирус восприимчивому животному, но гораздо менее
эффективно, чем хронически инфицированные животные.
Остра инфекци семенников относитс к острой или транзиторной инфекции
семенников восприимчивого самца животного, возникшей в результате транзиторной
системной инфекции. В некоторых сообщени х указываетс на то, что бык с острой
инфекцией может выдел ть вирус в сем , сохран приемлемую концентрацию,
подвижность и морфологию сперматозоидов. Однако в других сообщени х авторы
наблюдали снижение подвижности сперматозоидов и увеличение количества венечных
дефектов, маленьких головок сперматозоидов и проксимальных капель, сопровождающих
острую инфекцию.
Хроническа инфекци BVDV возникает при инфицировании восприимчивого животного
нецитопатическим штаммом BVDV перед развитием иммунокомпетентности
приблизительно на 125-й день беременности. У животных с хронической инфекцией
развиваетс иммунотолерантность к штамму, которым они были инфицированы, и они
действуют как резервуар патогена и обычно выдел ют большие количества вируса с мочой,
фекали ми, семенем, слюной, слезной жидкостью и носовой слизью в течение всей жизни.
Хроническа инфекци семенников относитс к хронической инфекции семенников
восприимчивого самца животного, вызванной острой или хронической системной
инфекцией.
Вакцины, используемые в изобретении
Вакцина, используема в насто щем изобретении, включает вирус BVDV типа 1 и/или 2
и приемлемый в ветеринарии носитель.
Обычно вирусные вакцины дел т на 2 класса: живые вакцины, содержащие живые
вирусы, которые были подвергнуты обработке или выращивались таким образом, чтобы
сделать их менее патогенными (ослабленными), и вакцины, содержащие убитые
(инактивированные) вирусные частицы. В контексте вируса BVDV, собственно вирус может
быть цитопатическим или нецитопатическим. На основании значительных различий
вирусной РНК штаммы вируса вирусной диареи можно также разделить на 2 отдельных
вида (т.е. генотипа), тип 1 и тип 2. Таким образом, в принципе существуют восемь
основных классов вакцины BVDV, но тем не менее большинство коммерческих вакцин
основаны на цитопатогенных вирусах.
Страница: 7
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Среди вакцин BVDV, которые в насто щее врем имеютс в продаже, имеютс вакцины,
в которых вирус был подвергнут химической инактивации McClurkin, et al., Arch. Virol.
58:119 (1978); Fernelius, et al., Am. J. Vet. Res. 33:1421-1431 (1972); и Kolar, et
al., Am. J. Vet. Res. 33:1415-1420 (1972). В случае этих вакцин дл достижени первичной иммунизации обычно требуетс введение множественных доз и достигаемый
иммунитет имеет короткую продолжительность и не защищает от передачи эмбриону
(Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. 11:615-625 (1995)). Сообщалось, что у
овец применима субъединична вакцина, основанна на очищенном белке Е2 (Bruschke, et
al., Vaccine 15:1940-1945 (1997). К сожалению, оказалось, что эта вакцина вл етс единственной вакциной, защищающей эмбрион от инфекции, и эта защита ограничиваетс одним штаммом гомологичного вируса.
Кроме того, были получены вакцины модифицированного живого вируса (MLV),
использу вирус BVD, который был ослаблен повторным пассажем в коровьих или свиных
клетках (Coggins, et al., Cornell Vet. 51:539 (1961); и Phillips, et al., Am. J. Vet
Res. 36:135 (1975)) или химически вызванными мутаци ми, которые придают вирусу
температурно-чувствительный фенотип (Lobmann, et al., Am. J. Vet. Res. 45:2498 (1984);
и Lobmann, et al., Am. J. Vet. Res. 47:557-561 (1986)). Однократна доза вакцины MLV
оказалась достаточной дл иммунизации, и длительность иммунитета у вакцинированного
крупного рогатого скота может продолжатьс в течение нескольких лет (Coria, et al.,
Can. J. Con. Med. 42:239 (1978)). Кроме того, сообщалось о перекрестной защите у
тел т, вакцинированных вакцинами типа MLV (Martin, et al., In Proceedings of the
Conference Res. Workers' Anim. Dis., 75:183 (1994)). Однако соображени безопасности,
например возможна эмбриональна передача вируса, вызывали большое беспокойство в
отношении применени этих вакцин (Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. 11:
615-625 (1995)).
В предпочтительном варианте осуществлени компонент BVDV типа 1 вл етс модифицированным живым цитопатогенным (штамм cpBVD-1 NADL (National Animal
Disease Center Министерство сельского хоз йства США, Эймс, Айова, ATCC VR-534)). В
другом предпочтительном варианте осуществлени компонент BVDV типа 2 вл етс модифицированным живым цитопатогенным (cpBVD-2, штамм 53637, ATCC № РТА-4859).
Как описано в одновременно поданной за вке на патент США № 60/490834, поданной
29.07.03, оба изол та содержат вставку в области NS2-3. Ослабленный вирус штамма
cpBVDV-1 содержит вставку кодирующей последовательности 3' Bos taurus DnaJ1 тимидина
в нуклеотидном положении 4993 (нумераци последовательности NADL), котора представл ет собой третий нуклеотид кодона, кодирующего глициновый остаток в
положении 1536 аминокислоты. Ослабленный cpBVDV-2 содержит вставку кодирующей
последовательности 3' Bos taurus DnaJ1 в том же геномном сайте. В других
предпочтительных вариантах осуществлени модифицированные живые антигены
вл ютс высушенными, лиофилизированными или витрифицированными.
В одном из вариантов осуществлени композиции вакцины по насто щему изобретению
включают эффективное количество одного или нескольких описанных выше вирусов BVD,
предпочтительно штамм cpBVD-1 NADL вируса (штамм cpBVD-1 NADL вируса - National
Animal Disease Center Министерства Сельского Хоз йства США, Эймс, Айова ATCC VR534), 53637 cpBVD-2 штамм (ATCC № РТА-4859), штамм С-13 IBRV вируса (Cutter
Laboratories), штамм Reisinger вируса PIV3 (Univ. Nebraska), штамм 375 вируса BRSV
(Veterinary Medical Research Institute, Эймс, Айова). Очищенные вакцины BVD можно
использовать непосредственно в композиции вакцины или предпочтительно вирусы BVD
могут быть подвергнуты дальнейшей модификации путем серийных пассажей in vitro.
Обычно вакцина содержит от примерно 1х10 2 до примерно 1х10 10 бл шкообразующих или
TCID50 единиц вируса вместе с приемлемым в ветеренарии носителем и, необ зательно,
вместе с адъювантом в объеме от 0,1 до 5 мл, предпочтительно примерно 2 мл. Точное
количество вируса в композиции вакцины, эффективное дл получени защитного
эффекта, может быть определено ветеринарным врачом. Приемлемые в ветеренарии
Страница: 8
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
носители, подход щие дл использовани в композици х вакцин, могут представл ть собой
любые носители, описанные здесь ниже.
Обычно вакцина содержит от примерно 1х10 2 до примерно 1х10 10 бл шкообразующих
или колониеобразующих единиц вируса с приемлемым в ветеренарии носителем и
адъювантом в объеме от 0,1 до 5 мл, предпочтительно примерно 2 мл. Точное количество
вируса в композиции вакцины, эффективное дл получени защитного эффекта, может
быть определено ветеринарным врачом. Приемлемые в ветеренарии носители,
подход щие дл использовани в композици х вакцин, могут представл ть собой носители,
описанные здесь ниже. Обычным путем введени вл етс внутримышечна или
подкожна инъекци в объеме от примерно 0,1 до примерно 5 мл вакцины. Композиции
вакцин по насто щему изобретению могут также включать дополнительные активные
ингредиенты, такие как другие композиции вакцин против BVDV, например композиции
вакцин, описанные в WO 95/12682, WO 99/55366, Патент США № 6060457, Патент США №
6015795, Патент США № 6001613 и Патент США № 5593873.
Вакцинацию можно осуществить одной прививкой или посредством множественных
прививок. При желании, у привитых животных можно собрать сыворотку и исследовать на
наличие антител к вирусу BVD. В другом варианте осуществлени насто щего изобретени композиции вакцин используют дл лечени инфекций семенников, вызванных BVDV.
Соответственно насто щее изобретение относитс к способам контрол или профилактики
инфекций у животных, вызванных вирусами BVD типов 1 или 2 или сочетанием типа 1 и
типа 2, путем введени животному эффективного количества вируса BVDV по насто щему
изобретению. В другом варианте осуществлени композиции вакцин по насто щему
изобретению эффективны дл улучшени фертильности стада и дл снижени риска
инфекции семенников у восприимчивых самцов животных.
При осуществлении способов по насто щему изобретению композицию вакцин по
насто щему изобретению ввод т крупному рогатому скоту предпочтительно
внутримышечным или подкожным путем, хот также можно использовать другие пути
введени , такие как, например, пероральный, интраназальный пути введени (например,
аэрозолем или другим безыгольным способом введени ), введение в лимфатический узел,
внутрикожный, внутрибрюшинный, ректальный или вагинальный пути введени или
сочетание этих путей. Предпочтительным вл етс внутримышечное введение в область
шеи животного. Могут потребоватьс схемы повторной иммунизации, и можно подобрать
схемы дозировки дл обеспечени оптимальной иммунизации.
Под "иммуногенным" подразумеваетс способность вируса BVD вызвать иммунный
ответ у животного против вирусов BVD типа 1 или типа 2 или против обоих вирусов BVD
типа 1 и типа 2. Иммунный ответ может представл ть собой клеточный иммунный ответ,
опосредованный прежде всего цитотоксическими Т-клетками, или гуморальный иммунный
ответ, опосредованный прежде всего хелперными Т-клетками, что, в свою очередь,
активирует В-клетки, привод к продукции антител.
В соответствии с насто щим изобретением вирусы предпочтительно аттенуируют
серийными пассажами в клеточной культуре перед использованием в иммуногенной
композиции. Способы модификации хорошо известны специалистам в данной области.
Композиции вакцин, используемые в способах по насто щему изобретению, могут также
включать активные ингредиенты, такие как другие иммуногенные композиции против BVDV,
например иммуногенные композиции против BVDV, описанные в одновременно поданной
за вке № 08/107908, WO 95/12682, WO 99/55366, Патент США № 6060457, Патент США №
6015795, Патент США № 6001613 и Патент США № 5593873 08/107908.
Кроме того, объекты по насто щему изобретению можно осуществить введением других
антигенов, а не BVDV типов 1 и/или 2 ("комбинированна вакцина"); такие антигены
включают, но ими не ограничиваютс , Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa,
Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira
interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira bratislava,
Campylobacter fetus Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Страница: 9
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Mycobacterium bovis и Mycobacterium dispar. В нескольких предпочтительных вариантах
осуществлени источником комбинированной вакцины вл етс Bovi-Shield® GOLD TM IBRBVD, Bovi-Shield ® GOLD TM 3, Bovi-Shield ® GOLD TM 5, Bovi-Shield ® GOLD TM IBR-BVD-BRSVLP, Bovi-Shield ® GOLD TM FP 5 L5, Bovi-Shield ® GOLD TM FP 5 VL5 или Preguard ® GOLD FP 10
(Pfizer, Inc.).
Кроме того, иммуногенные композиции и композиции вакцин, используемые в способах
по насто щему изобретению, могут включать один или более приемлемых в ветеринарии
носителей. Используемый здесь термин "приемлемый в ветеринарии носитель" включает
любой и каждый растворитель, дисперсионную среду, покрытие, адъювант,
солюбилизирующий агент, разбавитель, консервант, антибактериальное и
противогрибковое средство, изотонический агент, агент, задерживающий всасывание, и
тому подобные. Разбавители могут включать воду, солевой раствор, декстрозу, этанол,
глицерин и тому подобное. Изотонические агенты могут включать, нар ду с другими,
хлорид натри , декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Стабилизаторы, нар ду с другими,
включают альбумин. Адъюванты включают, но ими не ограничиваютс , нар ду с многими
другими, адъювантную систему RIBI (Ribi Inc.), квасцы, гель гидроксида алюмини ,
холестерин, эмульсии "масло-в-воде", эмульсии "вода-в-масле", такие как, например,
полный и неполный адъюванты Фрейнда, блок-сополимеры (CytRx, Atlanta GA), SAF-M
(Chiron, Emeryville CA), AMPHIGEN® адьювант, сапонин, Quil A, QS-21 (Cambridge
Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham,
AL) или другие фракции сапонина, монофосфорильный липид А, липид-аминовый
адъювант Avridine, термолабильный энтеротоксин из E.coli (рекомбинантный или иной),
холерный токсин или мурамилдипептид. Композици вакцины может, кроме того, включать
один или более других иммуномодул торных агентов, таких как, например, интерлейкины,
интерфероны или другие цитокины. Композиции вакцин, используемые в способах по
насто щему изобретению, могут также включать гентамицин и мертиолат. Хот специалист
в данной области может легко определить количество и концентрацию адъювантов и
добавок, которые можно использовать в контексте насто щего изобретени , насто щее
изобретение относитс к композици м, включающим от примерно 50 мг до примерно 2000
мг адъюванта, предпочтительно примерно от 500 мг до 2 мл дозы композиции вакцин. В
другом предпочтительном варианте осуществлени насто щее изобретение относитс к
композици м вакцин, включающим от примерно 1 мг/мл до примерно 60 мг/мл антибиотика,
более предпочтительнее менее чем примерно 30 мг/мл антибиотика.
Композиции вакцин, используемые в способах по насто щему изобретению, могут быть
получены в разнообразных формах в зависимости от пути введени . Например,
композиции вакцин могут быть получены в форме стерильных водных растворов или
дисперсий, подход щих дл инъекционного введени , или получены в лиофилизированных
формах, использу методики лиофилизации. Лиофилизированные композиции вакцин
обычно хран тс примерно при 4°С и могут быть растворены в стабилизирующем растворе,
например солевом растворе или HEPES, вместе или без адъюванта.
Композиции вакцин по насто щему изобретению можно вводить животным дл индукции
иммунного ответа против вирусов BVD типа 1 или типа 2 или против обоих вирусов BVD
типа 1 и типа 2. Соответственно еще один вариант осуществлени насто щего изобретени относитс к способам стимул ции иммунного ответа против вирусов BVD типа 1 или типа 2
или против сочетани вирусов BVD типа 1 и типа 2 путем введени животному
эффективного количества описанной выше иммуногенной композиции по насто щему
изобретению. Под термином "животное" понимают любое животное, которое восприимчиво
к инфекци м BVDV, такое как бык, овца и свинь .
В соответствии со способами по насто щему изобретению предпочтительна иммуногенна композици дл введени животному включает штамм cpNADL вируса BVDV
и/или штамм cp53637 вируса BVDV. Иммуногенна композици , содержаща вирус BVDV,
предпочтительно живой, модифицированный несколькими пассажами в культуре, вводитс крупному рогатому скоту предпочтительно внутримышечным или подкожным путум, хот Страница: 10
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
также можно использовать другие пути введени такие как, например, пероральный,
интраназальный пути введени , введение в лимфатический узел, внутрикожный,
внутрибрюшинный, ректальный или вагинальный путь введени или сочетание этих путей
введени .
Протоколы иммунизации могут быть оптимизированы, использу процедуры, хорошо
известные в данной области. Животным можно вводить одиночную дозу или,
альтернативно, можно проводить 2 или более прививок с интервалами 2-10 нед. В
зависимости от возраста животного иммуногенную композицию или композицию вакцин
можно вводить повторно. Например, насто щее изобретение предусматривает вакцинацию
здорового крупного рогатого скота до возраста 6 мес и ревакцинацию в возрасте 6 мес.
В еще одном примере насто щее изобретение предусматривает вакцинацию крупного
рогатого скота перед случкой, примерно за 5 недель до случки (или перед введением в
стадо) и, необ зательно, снова примерно за 2 недели до случки или во врем беременности дл защиты эмбриона против инфекции, вызванной BVDV типов 1 и 2.
Однократные дозы композиций по насто щему изобретению можно также вводить
примерно через 3-4 недели после первой дозы. Предусмотрена также ревакцинаци 1 раз в
полгода одной дозой комбинированной вакцины дл профилактики инфекции эмбриона
вирусом BVDV.
Степень и природа иммунных ответов, индуцируемых у крупного рогатого скота, можно
оценить разнообразными методиками. Например, у привитых животных можно вз ть
сыворотки и исследовать на наличие антител, специфичных дл вирусов BVDV, например,
обычным анализом нейтрализации вируса.
Термин "эффективное количество" относитс к количеству комбинированной вакцины,
достаточному дл того, чтобы вызвать иммунный ответ у животного, которому оно
введено. Иммунный ответ может включать, без ограничени , индукцию клеточного и/или
гуморального иммунитета. Количество вакцины, которое вл етс терапевтически
эффективным, может измен тьс в зависимости от конкретного используемого вируса,
состо ни крупного рогатого скота и/или степени инфекции, и его может определить
ветеринарный врач.
Инактивированные (частичные или цельноклеточные) и модифицированные живые
вакцины
Инактивированные или модифицированные живые вакцины, используемые в способе по
насто щему изобретению, могут быть получены, использу разнообразные способы,
которые известны в данной области.
Например, изол ты BVDV могут быть получены непосредственно из маток
инфицированных коров, использу известные методики.
Изол ты BVDV могут быть аттенуированы, использу разнообразие известных способов,
включа , например, серийные пассажи. В дополнение к модифицированным живым
вирусным изол там продукт вакцин, используемый в способах по насто щему
изобретению, может также включать подход щее количество одного или нескольких
обычно используемых адъювантов. Подход щие адъюванты могут включать, но ими не
ограничиваютс , минеральные гели, например гидроксид алюмини ; поверхностноактивные вещества, такие как лизолецитин; гликозиды, например производные сапонина,
такие как Quil A или GPI-0100; плюроновые полиолы; полианионы; неионные блоксополимеры, например Pluronic F-127 (B.A.S.F., USA); пептиды; минеральные масла,
например Montanide ISA-50 (Seppic, Paris, France), карбопол, Amphigen, Amphigen Mark
II (Hydronics, USA), Alhydrogel, масл ные эмульсии, например эмульсию минерального
масла, такого как BayolF/Arlacel A и воду, или эмульсию растительного масла, воду и
эмульгатор, такой как лецитин; квасцы; цитокины быков; холестерин и сочетани адъювантов. В предпочтительном варианте осуществлени сапонин, содержащий
эмульсию масла в воде, подвергаетс обычной микрофлюидизации.
Особенно предпочтительным источником вируса BVDV типа 1 и 2 дл использовани в
способе по насто щему изобретению вл етс лини вакцинных продуктов Bovi-Shield®
Страница: 11
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
GOLD TM (PFIZER INC.), содержаща штамм NADL вируса BVDV (приобретенный в National
Animal Disease Center (NADC), USDA, Эймс, Айова) и штамм 53637 вируса BVDV типа 2
(Univ. Guelph, Guelph, Ont.) (ATCC No. PTA-4859).
Предпочтительно штаммы NADL и 53637 представл ют собой модифицированные
живые штаммы. В соответствии с насто щим изобретением штаммы по насто щему
изобретению могут быть дополнены коммерчески доступными адъювантами,
предпочтительно Quil A-Cholesterol-Amphigen (Hydronics, USA). Предпочтительна доза
иммуногенных композиций и композиций вакцин по насто щему изобретению составл ет
примерно 2,0 мл. В композиции, используемые в способах по насто щему изобретению,
можно включить консерванты. Консерванты, которые могут использоватьс в насто щем
изобретении, включают гентамицин и мертиолат. Можно также добавить носитель,
предпочтительно PBS. Получение модифицированных живых вакцин, такое как
аттенуирование вирулентных штаммов пассажем в культуре, известно в данной области.
Модифицированные живые изол ты BVDV можно также сочетать со следующими
бактери ми и вирусами, включа , но ими не ограничива сь, бычий вирус герпеса (BHV-1);
бычий респираторный синцитиальный вирус (BRSV), вирус парагриппа (PIV3), Leptospira
canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno,
Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Leptospira
borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava, Campylobacter fetus, Mannheimia
(Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida, Mycobacterium bovis и Mycobacterium dispar.
Дозировка и способы введени В соответствии с насто щим изобретением эффективное количество BVDV или
комбинированной вакцины, введенное восприимчивым самцам животных, обеспечивает
эффективный иммунитет против инфекции семенников, вызванной BVDV типа 2. В одном
из вариантов осуществлени вакцина вводитс тел там двум дозами с интервалом
примерно 3-4 недели. Например, первое введение выполн етс , когда возраст животного
составл ет от примерно 1 до примерно 3 мес. Второе введение выполн етс примерно
через 1-4 недели после первого введени комбинированной вакцины.
В другом предпочтительном варианте осуществлени введение выполн етс примерно
за 4-5 недель перед выведением животного или перед доставкой в учреждение
искусственного осеменени . Введение последующих доз вакцины предпочтительно
осуществл етс ежегодно. В другом предпочтительном варианте осуществлени животных,
вакцинированных до возраста примерно 6-мес цев, следует повторно вакцинировать после
6-мес чного возраста. Введение последующих доз вакцины предпочтительно
осуществл етс ежегодно, хот насто щим изобретением также предусматриваетс последующее введение доз вакцины 1 раз в 2 года и 1 раз в полгода.
Эффективное количество вакцины зависит от ингредиентов вакцины и схемы введени .
Обычно, когда в вакцине используетс препарат модифицированного живого BVDV, то
количество вакцины, содержащей от примерно 10 2 до примерно 10 10 TCID50 единиц на
дозу BVDV, предпочтительно от примерно 10 4 до примерно 10 7 TCID50 единиц на дозу
BVDV типов 1 и 2, эффективно дл однократного введени восприимчивым самцам
животных. Предпочтительно вакцина, котора обеспечивает эффективный иммунитет,
содержит примерно 10 4-10 7 TCID50 единиц/дозу BVDV типов 1 и 2, а предпочтительнее
примерно 10 5 TCID50 единиц/дозу при однократном введении восприимчивым животным.
Введение последующих доз вакцины предпочтительно провод т на ежегодной основе.
Животных, вакцинированных до возраста примерно 6 мес, следует ревакцинировать в
возрасте после 6 мес. Введение последующих доз вакцины предпочтительно провод т
ежегодно.
В соответствии с насто щим изобретением при введении предпочтительного продукта
Bovi-Shield® GOLD TM (Pfizer Inc.) продукт ввод т предпочтительно однократно в
количестве от примерно 0,1 до примерно 5,0 мл, предпочтительно от примерно 1,5 мл до
примерно 2,5 мл, предпочти??ельнее примерно 2 мл. Введение последующих доз вакцины
предпочтительно провод т ежегодно. Животных, вакцинированных до возраста примерно 6
Страница: 12
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
мес, следует ревакцинировать после 6-мес чного возраста. Введение последующих доз
вакцины предпочтительно провод т ежегодно.
В соответствии с насто щим изобретением введение может осуществл тьс известными
пут ми, включа пероральный, интраназальный, местный, трансдермальный и
парентеральный (например, внутривенный, внутрибрюшинный, внутрикожный, подкожный
или внутримышечный). Предпочтительным путем введени вл етс внутримышечный или
подкожный путь введени .
Насто щее изобретение также предусматривает однократную первичную дозу с
последующей ежегодной ревакцинацией, котора исключает необходимость введени дополнительных доз тел там перед ежегодной ревакцинацией дл создани и/или
поддержани иммунитета против инфекции.
Вакцины, вводимые в соответствии с насто щим изобретением, могут включать
дополнительные компоненты, такие как адъювант (например, минеральные гели, например
гидроксид алюмини ; поверхностно-активные вещества, такие как холестерин,
лизолецитин; гликозиды, например производные сапонина, такие как Quil A, QS-21 или
GPI-0100; плюроновые полиолы; полианионы; неионные блок-сополимеры, например
Pluronic F-127; пептиды; минеральные масла, например Montanide ISA-50, карбопол,
Amphigen®, Alhydrogel, масл ные эмульсии, например эмульсию минерального масла,
такого как BayolF/Arlacel A и воду, или эмульсию растительного масла, воду и
эмульгатор, такой как лецитин; квасцы; цитокины быка и сочетани адъювантов).
В соответствии с насто щим изобретением введение эффективного количества
вакцины, введенной восприимчивым самцам животных в возрасте приблизительно 3 мес,
обеспечивает эффективный иммунитет против инфекции семенников.
В предпочтительном варианте осуществлени вакцину ввод т внутримышечно. В еще
одном предпочтительном варианте осуществлени вакцину ввод т подкожно. Более того,
предпочтительно, чтобы доза вакцины содержала от примерно 1 мл до примерно 7 мл,
предпочтительно примерно 2 мл, причем чтобы каждый мл содержал от примерно 10 2 до
примерно 10 10 TCID50 единиц на дозу вируса. Комбинированную вакцину желательно
вводить животному дважды; один раз в возрасте от примерно 1 до примерно 3 мес и
другой раз примерно через 3-5 нед. Насто щее изобретение также предусматривает
ежегодную ревакцинацию однократной дозой.
Идентификаци животных с повышенным риском инфекции BVDV
Изобретение, кроме того, относитс к способу профилактики инфекции семенников
BVDV, предусматривающему:
а) идентификацию животного с повышенным риском инфекции семенников BVDV; и
b) введение животному эффективного количества вакцины, выбранной из группы,
состо щей из убитой вакцины BVDV типа 1, убитой вакцины BVDV типа 2,
модифицированной живой вакцины BVDV типа 1, модифицированной живой вакцины BVDV
типа 2.
Дл идентификации животного с повышенным риском инфекции BVDV специалист
узнает, что животное имеет повышенный риск инфекции, если инфекци BVDV по вл етс в ранее неинфицированном стаде или если восприимчивое животное контактирует с
другим восприимчивым животным с инфекцией BVDV. BVDV передаетс от животного к
животному фекально-оральным способом. Вирусна нагрузка, требуема дл возникновени симптомов инфекции, коррелирует с типом и штаммом вируса BVD, и это
коррелируетс со скоростью распространени в стаде. Инфицированных животных можно
идентифицировать по симптомам заболевани . Общие про влени инфекции BVDV могут
включать: массовые выкидыши, бесплодие, неравномерные половые циклы, случаи ранней
гибели плода, высыхание плода в матке, подавление иммунитета, дизентерию,
тромбоцитопению и гипоплазию мозга. Симптомы заболевани обычно предшествуют
лейкопении, и усили исследовани до насто щего времени были сосредоточены на
идентификации этого факта.
Серологически исследовани показали, что высока процентна дол крупного рогатого
Страница: 13
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
скота, инфицированного BVDV, в том числе та часть, котора считаетс хронически
инфицированной (PI), остаетс клинически бессимптомной. Поэтому предпочтительным
способом идентификации инфицированных животных вл етс вы вление присутстви самого вируса, а не отслеживание симптомов. Было разработано несколько различных
способов тестировани дл вы влени вируса BVDV и/или дл вы влени животных,
инфицированных BVDV. Эти способы тестировани включают: обратную "гнездовую"
полимерную цепную реакцию, иммуноферментный анализ (ELISA), стандартные методики
выделени вируса и иммуногистохимию (Haines et al., "Monoclonal Antibody-Based
Immunohistochemical Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Formalin- Fixed,
Paraffin-Embedded Tissues," Vet. Pathol., 29:27-32 (1992)).
Как и PCR, так и методики выделени вируса, благодар присущей им чувствительности,
способны вы вить очень низкие уровни BVDV. Иммуногистохими образцов ткани, таких как
образцы биопсии, полученные выщипом на ухе, вл етс эффективной методикой
вы влени животных с PI. Технологи ELISA также эффективна, хот она менее
чувствительна и хорошо подходит как универсальный диагностический инструмент дл вы влени инфекции BVDV у животных, так как вл етс недорогой, дает результаты в
короткий промежуток времени и дл ее проведени не требуютс высококвалифицированные специалисты и высокоспециализированное лабораторное
оборудование.
Способы ELISA дл вы влени инфекции BVDV описаны в литературе (см. патент США
№ 6174667 и WO 99/15900, Huchzermeier et al. и патентную за вку США 20030143573,
сравнивались с другими способами "Comparison of an Antigen Capture Enzyme-Linked
Assay with Reverse Transcription- Polymerase Chain Reaction и Cell Culture
Immunoperoxidase Tests for the Diagnosis of Ruminant Pestivirus Infections," Vet.
Microbiol., 43:75-84 (1995)).
Насто щее изобретение далее проиллюстрировано, но ими не ограничено, следующими
примерами.
Пример 1
Защита семенников: анализ исследовани Р д вакцин Bovi-Shield® GOLD TM 5, составленных и из BVDV типа 1, и из BVDV типа 2,
был внедрен в скотоводческую промышленность в но бре 2003 г. дл оптимизации уровн защиты плодов, которую обеспечивает вакцинаци против BVDV типа 2. Здесь
представлены результаты предлицензионного исследовани эффективности,
оценивающего эффективность вакцинации Bovi-Shield® GOLD TM 5 в период перед
половым созреванием в профилактике инфекции семенников в услови х активной
антигенной стимул ции с использованием BVDV типа 2 ( 10), в сравнении с плацебо (BoviShield®-PI3-BRSV).
Проводили дополнительную оценку состо ни всех бычков (n=17), включенных в
исследование более широкой антигенной стимул ции с использованием BVDV типа 2, дл определени эффективности вакцинации Bovi-Shield GOLD TM 5® в профилактике инфекции
семенников, вызванной BVDV. Все тел та в первоначальном исследовании представл ли
собой 3-4-мес чных, лишенных молозива тел т (бычков и телочек). На 28-й день после
вакцинации препаративной формой, содержащей минимальные иммунизирующие дозы
(уровни минимальной иммунизирующей дозы устанавливаютс перед лицензированием
вакцины и отражают более низкий объем антигенного вируса, чем тот, который
присутствует в конечном продукте. Определение минимальной иммунизирующей дозы
помогает гарантировать то, что когда продукт будет использоватьс на выпускаемых
уровн х, он будет последовательно стимулировать адекватную защиту против
заболевани ) и BVDV типа 1, и BVDV типа 2, у всех вакцинированных и получавших
плацебо контроль тел т проводили интраназальную антигенную стимул цию штаммом
24515 нецитопатического BVDV типа 2. Штамм 24515 был выделен в Канаде при т желой
вспышке BVD, в результате которой погибло более 40% скота в пораженных стадах. После
антигенной стимул ции у всех 10 контрольных тел т развилось т желое заболевание,
Страница: 14
RU 2 335 298 C2
5
10
15
характеризуемое длительной виремией (9-14 дней), лихорадкой в диапазоне от 105,6F до
107,2F в течение 4-9 дней, дейкопенией (1-9 дней), тромбоцитопенией (<100000 на 1 мкл),
развитием осложнений (в диапазоне 4-9 дней) и высокой смертностью (умерли 7 из 10
(70%) контрольных тел т). Напротив, только у 1 вакцинированного теленка развилась
виреми , у 6 лихорадка продолжалась в течение 1 или 2 дней, у 1 была лейкопени в
течение 1 дн , ни у одного не было тромбоцитопении и ни один не умер. Всего 18 из 20
вакцинированных тел т оставались здоровыми в течение исследовани , и только у 2 тел т
в 1-й день про вл лась депресси . Эти 2 наблюдени не были св заны с предшествующей
или одновременной виремией, лихорадкой, лейкопенией или тромбоцитопенией. 11
Оценки инфекции семенников BVDV начинали приблизительно через 2 нед. после
антигенной стимул ции. Как показано в табл. 1, образцы семенников брали при вскрытии
у 2 плацебо контролей на 41-й день исследовани , а образцы биопсии от каждого из
оставшихс 5 контролей и 10 тел т, вакцинированных Bovi-Shield® GOLD TM 5, брали на
42-й день. Второй образец также получали у 7 тел т, вакцинированных BoviShield® GOLD TM 5, которые еще были доступны, на 56-й день. Все образцы тестировали
на BVDV, использу способы выделени в культуре ткани, амплификации нуклеиновой
кислоты (RT-nPCR) и иммуногистохимического тестировани . У персонала, берущего и
тестирующего образцы семенников, не было информации о включении животного в ту или
иную группу лечени .
20
Таблица 1
Структура исследовани : защита семенников после антигенной стимул ции с использованием BVDV типа 2
Группа лечени 25
30
35
40
45
Кол-во бычков Внутримышечна Интраназальна антигенна вакцинаци стимул ци *
День вз ти образцов ткани
День
Доза
День
Плацебо контроли
7
0
2 мл
28
Доза
5 мл
41,42 ?
Bovi-Shield® GOLD TM 5
10
0
2 мл
28
5 мл
42,56 Й
* Изол т 24515 получили в Univeristy of Guelph, Guelph, Ontario, Canada.
?
У двух из 7 вакцинированных плацебо бычков образцы брали при вскрытии на 41-й
день, а у остальных 5 бычков образцы брали на 42-й день.
ЙУ всех 10 бычков образцы брали на 42-й день, а второй образец получали у 7 тел т
на 56-й день.
Выделение вируса и анализы PCR выполн ли в лаборатории Auburn University Veterinary
Pathobiology and Clinical Sciences Laboratory, а иммуногистохимический анализ - в
University of Nebraska-Linclon Veterinary Diagnostic Center. Данные анализировал
представитель Pfizer Animal Health, Veterinary Medicine and Research, Biometrics,
Technology and Quality, с использованием категориальной процедуры (SAS/STAT Software
Changes and Enhancements through Release 6.12, SAS Institute, Cary, NC, or SAS/STAT
User's Guide Version 8 и SAS Procedures Guide Version 8). Точный критерий Фишера
использовали дл сравнени доли животных в каждой группе лечени , по меньшей мере, с
одним положительным результатом теста на BVDV. При целесообразности рассчитывали
описательные статистические показатели.
Результаты
В табл. 2 и на чертеже суммированы процентные доли вы влени BVDV в образцах
биопсии семенников в группах лечени . Нуклеинова кислота или антиген BVDV были
вы влены в 6 из 7 (85,7%) образцах семенников, вз тых у вакцинированных плацебо и
подвергнутых антигенной стимул ции бычков. Напротив, ни нуклеинова кислота, ни
антиген BVDV не были вы влены ни в одном из образцов ткани семенников (0,0%), вз тых
после антигенной стимул ции у бычков, вакцинированных Bovi-Shield® GOLD TM, т.е.
различие статистически значимо (P).
50
Таблица 2
Обобщение результатов анализа BVDV дл образцов ткани семенников
Группа лечени Кол-во бычков
Кол-во BVDV положительных
VI
PCR
Страница: 15
BVDV положительные
IHC
% положительных бычков
RU 2 335 298 C2
Плацебо контроли
7
5
6
4
6
85,7% а
Bovi-Shield®
10
0
0
0
0
0,0% b
GOLD TM 5
Vl = выделение вируса, PCR = полимеразна цепьева реакци , IHC = иммуногистохими a,b - различие процентов в столбце с различными надстрочными обозначени ми более мелкими буквами вл етс статистически значимым (P)
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Вывод и обсуждение
Результаты исследовани демонстрируют и безопасность, и эффективность вакцинации
бычков Bovi-Shield® GOLD TM 5. Вакцина, составленна с минимальными уровн ми
иммунизирующей дозы BVDV типа 1 и 2, не только не вызывала инфекции семенников, но
также эффективно защищала бычков в период перед половым созреванием против
инфекции семенников после активной антигенной стимул ции BVDV типа 2.
Применение Bovi-Shield® GOLD TM 5 у бычков в период перед половым созреванием
может быть важным компонентом программ борьбы с BVD при работах с телками и
молочными коровами. Своевременна вакцинаци может помочь защитить бычков против
острых инфекций, что было св зано с преход щей и хронической инфекцией семенников и
последующей передачей BVDV в семени восприимчивым коровам. Кроме того, вакцинаци бычков в период перед половым созреванием дл профилактики острой инфекции BVDV в
период после полового созревани может помочь сохранению качества семени, но котора ,
как было показано, поражаетс (сниженна подвижность и морфологические аномалии) в
течение первых 60 дней после острой инфекции BVDV. 9
Хот представленные здесь результаты демонстрируют успешную защиту против
антигенной стимул ции BVDV типа 2, следовало бы ожидать, что аналогичные результаты
наблюдались бы после антигенной стимул ции BVDV типа 1.
Пример 2
Защита семенников против антигенной стимул ции BVDV типа 1: анализ исследовани Исследование было предприн то дл оценки эффективности Bovi-Shield® GOLD TM 5 в
профилактике инфекции семенников в услови х активной антигенной стимул ции с
использованием BVDV типа 1. Организаци исследовани представл ла собой
генерализованную рандомизированную блоковую организацию с односторонней структурой
лечени . Весь лабораторный персонал исследовани не имел информации о лечении.
В исследование были включены 45 интактных бычков м сной породы в период перед
половым созреванием. Возраст тел т составл л от 9 до 15 мес. Все животные были
серонегативными в отношении вируса BVD типа 1 и 2, отрицательными в отношении
выделени вируса BVD в сыворотке и отрицательными по обратной транскрипции полимеразной цепьевой реакции (RT-nPCR) по сыворотке. На 42-й день минимальные
квадратические средние величины массы тела тел т в группе плацебо (n-23) и в
испытуемой группе (n=22) были соответственно 625,7±30,94 фунта и 613,5±35,96 фунта.
Животных вакцинировали или плацебо (Bovi-Shield® IBR-PI3-BRSV), или Bovi-Shield®
GOLD TM 5 (IBR-BVDV1-BVDV2-PI3-BRSV).
Через 28 дней после вакцинации препаративной формой, содержащей минимальные
иммунизирующие дозы, у всех вакцинированных тел т и животных из группы контрол проводили интраназальную антигенную стимул цию штаммом SD-1 нецитопатического
вируса BVDV типа 1, выделенного в университете Auburn. Интраназальную антигенную
стимул цию выполн ли гипервентил цией бычков в течение 30 с посредством размещени пластикового мешка над ноздр ми, и затем закапыва 5 мл вируса, выращенного в среде
МЕМ с сол ми Earle, с добавлением 10% (об./об.) лошадиной сыворотки, бикарбоната
натри (0,75 мг/мл), L-глутамина (0,29 мг/мл) и антибиотиков (100 единиц пенициллина
G, 100 мкг стрептомицина и 0,25 мкг амфотерицина В/мл). Лошадина сыворотка не
содержала вирус BVD по данным выделени вируса и RT-nPCR.
Оценки семенниковой инфекции, вызванной BVDV, выполн ли на 42-й и 93-й дни.
Основна структура исследовани представлена ниже в табл.3.
Таблица 3
Структура исследовани : защита семенников после антигенной стимул ции с использованием BVDV типа 1
Страница: 16
RU 2 335 298 C2
Группа лечени Кол-во бычков Внутримышечна Интраназальна антигенна вакцинаци стимул ци *
День вз ти образцов ткани
День
Доза
День
Плацебо контроли
23
0
2 мл
28
Доза
5 мл
42,93
Bovi-Shield® GOLD TM 5
22
0
2 мл
28
5 мл
42,93
5
10
15
20
25
30
35
40
После антигенной стимул ции сыворотку животных в обеих группах тестировали дл вы влени присутстви вируса. По данным выделени вируса из сыворотки, у 18 тел т в
группе плацебо была виреми на 34-й день, у 9 из этих 18 виреми была также на 35-й
день. У 5 тел т в группе Bovi-Shield® GOLD TM 5 виреми была только на 34-й день. Ни
один из других тестов выделени вируса не был положительным у тел т из любой группы
лечени в любой день исследовани .
Тесты RT-nPCR также использовали дл определени наличи виремии у тел т. В
группе плацебо было 3, 9, 12 и 6 тел т с положительными результатами соответственно
на 34, 35, 36 и 37 дни. В группе Bovi-Shield® GOLD TM 5 был 1, 1, 2 и 1 теленок с
положительными результатами соответственно на 34, 35, 36 и 37 дни. Ни один другой из
сывороточных тестов RT-nPCR не был положительным у тел т из любой группы лечени в
любой день исследовани .
У обеих групп измер ли величины минимальной квадратической средней температуры.
Различие средних величин было статистически значимым (P) только на 36-й день (104,0F
дл группы плацебо и 102,9F дл группы Bovi-Shield® GOLD TM 5).
Результаты защиты семенников
Результаты тестировани , проведенного на образцах биопсии ткани семенников на 93-й
день, показаны в табл. 4. Образцы от 6 из 23 тел т (26,1%) в группе плацебо были
положительными при тестировании RT-nPCR, тогда как все образцы от 22 тел т в группе
Bovi-Shield® GOLD TM 5 были отрицательными. Все образцы биопсии ткани и у группы
плацебо, и у группы Bovi-Shield® GOLD TM 5 были отрицательными в отношении выделени вируса. Образцы биопсии ткани от 5 из 23 тел т (21,7%) в группе плацебо и у 0 из 22
тел т в группе Bovi-Shield® GOLD TM 5 были положительными при IHC тестировании.
Все образцы семени тел т в обеих группах лечени были отрицательными при
тестировании RT-nPCR дл вы влени вируса BVD на 42-й день (табл. 4). На 93-й день,
10 из 23 (43,5 %) тел т в группе плацебо были положительными при тесте RT-nPCR, но
все 22 теленка в группе Bovi-Shield® GOLD TM 5 были отрицательными. Вирус не был
выделен ни из одного образца семени у любой группы лечени на 42-й или 93-й день
(табл. 4).
В группе плацебо 10 из 23 тел т были положительными, по меньшей мере, по одному
тесту. 4 из этих 10 тел т были положительными только по одному тесту (RT-nPCR семени
на 93-день). 1 теленок был положительным по двум тестам (RT-nPCR биопсии семенников
и RT-nPCR семени на 93-й день). 5 тел т были положительными по трем тестам (RT-nPCR
биопсии семенников, RT-nPCR семени и IHC биопсии на 93-й день).
Таблица 4
Обобщение результатов анализа BVDV дл образцов ткани семенников и образцов семени
45
50
Группа
Кол-во
тел т
Кол-во положительных
по BVDV?
VI
PCR
Плацебо
23
0
6
Bovi-Shield
GOLD
22
0
0
Кол-во положительных
по BVDVЙ
Кол-во положительных
по BVDV*
Положительные по
BVDV?
%
положительных
тел т
IHC
VI
PCR
VI
PCR
5
0
0
0
10
10
43,5% а
0
0
0
0
0
0
0% b
VI = выделение вируса, PCR = полимеразна цепьева реакци , IHC = иммуногистохими a,b - различие процентов в столбце с различными надстрочными обозначени ми более мелкими буквами вл етс статистически значимым (P)
?Образцы биопсии ткани семенников на 93-й день
ЙОбразцы семени на 42-й день
* Образцы семени на 93-й день
Дл каждого животного определ ли присутствие/отсутствие вируса BVD или в семени,
или в биопси х семенников в любую точку времени, суммировали по группе лечени и
Страница: 17
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
анализировали, использу точный критерий Фишера, как описано в примере 1.
Вывод
В насто щем исследовании вакцинаци бычков Bovi-Shield® GOLD TM 5 предотвращала
хроническую инфекцию семенников вирусом BVD типа 1 и последующее выделение вируса
в семени. Различие между животными, получавшими плацебо и вакцину, по меньшей мере,
по одному положительному тесту, оцениваемое двухсторонним точным критерием Фишера,
было статистически значимым (Р=0,0002).
Все приведенные выше патенты, патентные за вки и публикации полностью включены
сюда в качестве ссылки в той степени, в которой они не противоречат представленному
здесь описанию.
Насто щее изобретение не ограничиваетс в объеме определенными описанными
вариантами осуществлени , которые предназначены только дл иллюстрации отдельных
аспектов изобретени . Функционально эквивалентные композиции и способы наход тс в
пределах объема изобретени . Действительно, различные модификации изобретени , в
дополнение к показанным и описанным здесь, станут очевидными специалистам в данной
области из предшествующего описани . Такие модификации предназначены дл включени в объем прилагаемой формулы изобретени .
Формула изобретени 1. Способ профилактики или контрол инфекции семенников, вызванной вирусом
бычьей вирусной диареи (BVDV), у восприимчивого самца животного, включающий:
введение животному эффективного количества вакцины, содержащей эффективное
количество антигена, выбранной из группы, состо щей (а) из модифицированной живой
вакцины BVDV типа 1, (b) из модифицированной живой вакцины BVDV типа 2, и (с)
одновременно из модифицированной живой вакцины BVDV типа 1 и модифицированной
живой вакцины BVDV типа 2.
2. Способ по п.1, отличающийс тем, что животное выбрано из группы, состо щей из
быков, баранов и хр ков.
3. Способ по п.2, отличающийс тем, что животное представл ет собой быка.
4. Способ по п.1, отличающийс тем, что вакцина содержит как модифицированную
живую вакцину BVDV типа 1, так и модифицированную живую вакцину BVDV типа 2.
5. Способ по п.4, отличающийс тем, что по меньшей мере одна модифицированна жива вакцина BVDV получена из цитопатического вируса.
6. Способ по п.4, отличающийс тем, что по меньшей мере одна модифицированна жива вакцина BVDV получена из нецитопатического вируса.
7. Способ по п.4, отличающийс тем, что обе модифицированные живые вакцины BVDV
получены из цитопатического вируса.
8. Способ по пп.1-7, отличающийс тем, что вакцина включает по меньшей мере один
дополнительный антиген, выбранный из группы, состо щей из бычьего вируса герпеса
(BHV-1); вируса парагриппа типа 3 (PIV3); бычьего респираторного синцитиального
вируса (BRSV); Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira
borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira
interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Mycobacterium bovis, и Mycobacterium dispar.
9. Способ по п.8, отличающийс тем, что указанные дополнительные антигены включают
бычий вирус герпеса (BHV-1); вирус парагриппа типа 3 (PIV3) и бычий респираторный
синцитиальный вирус (BRSV).
10. Способ по п.1, отличающийс тем, что животное имеет повышенный риск развити инфекции семенников, вызываемой BVDV.
11. Применение эффективного количества антигена, выбранного из группы, состо щей
(а) из модифицированной живой вакцины BVDV типа 1, (b) из модифицированной живой
вакцины BVDV типа 2, и (с) одновременно из модифицированной живой вакцины BVDV
Страница: 18
CL
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
типа 1 и модифицированной живой вакцины BVDV типа 2, дл получени лекарственного
средства дл профилактики или контрол инфекции семенников BVDV у восприимчивого
самца животного.
12. Применение по п.11, отличающеес тем, что животное выбрано из группы,
состо щей из быков, баранов и хр ков.
13. Применение по п.12, отличающеес тем, что животное представл ет собой быка.
14. Применение по п.11, отличающеес тем, что вакцина содержит как
модифицированную живую вакцину BVDV типа 1, так и модифицированную живую вакцину
BVDV типа 2.
15. Применение по п.14, отличающеес тем, что по меньшей мере одна
модифицированна жива вакцина BVDV получена из цитопатического вируса.
16. Применение по п.14, отличающеес тем, что по меньшей мере одна
модифицированна жива вакцина BVDV получена из нецитопатического вируса.
17. Применение по п.14, отличающеес тем, что обе модифицированные живые вакцины
BVDV получены из цитопатического вируса.
18. Применение по пп.11-17, отличающеес тем, что вакцина содержит, по меньшей
мере, один дополнительный антиген, выбранный из группы, состо щей из бычьего вируса
герпеса (BHV-1); вируса парагриппа типа 3 (PIV3); бычьего респираторного
синцитиального вируса (BRSV); Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa,
Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira
interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Mycobacterium bovis, и Mycobacterium dispar.
19. Применение по п.18, отличающеес тем, что указанные дополнительные антигены
включают бычий вирус герпеса (BHV-1); вирус парагриппа типа 3 (PIV3) и бычий
респираторный синцитиальный вирус (BRSV).
20. Применение по п.11, отличающеес тем, что животное имеет повышенный риск
возникновени инфекции семенников, вызываемой BVDV.
30
35
40
45
50
Страница: 19
?ным" подразумеваетс способность вируса BVD вызвать иммунный
ответ у животного против вирусов BVD типа 1 или типа 2 или против обоих вирусов BVD
типа 1 и типа 2. Иммунный ответ может представл ть собой клеточный иммунный ответ,
опосредованный прежде всего цитотоксическими Т-клетками, или гуморальный иммунный
ответ, опосредованный прежде всего хелперными Т-клетками, что, в свою очередь,
активирует В-клетки, привод к продукции антител.
В соответствии с насто щим изобретением вирусы предпочтительно аттенуируют
серийными пассажами в клеточной культуре перед использованием в иммуногенной
композиции. Способы модификации хорошо известны специалистам в данной области.
Композиции вакцин, используемые в способах по насто щему изобретению, могут также
включать активные ингредиенты, такие как другие иммуногенные композиции против BVDV,
например иммуногенные композиции против BVDV, описанные в одновременно поданной
за вке № 08/107908, WO 95/12682, WO 99/55366, Патент США № 6060457, Патент США №
6015795, Патент США № 6001613 и Патент США № 5593873 08/107908.
Кроме того, объекты по насто щему изобретению можно осуществить введением других
антигенов, а не BVDV типов 1 и/или 2 ("комбинированна вакцина"); такие антигены
включают, но ими не ограничиваютс , Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa,
Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira
interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira bratislava,
Campylobacter fetus Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Страница: 9
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Mycobacterium bovis и Mycobacterium dispar. В нескольких предпочтительных вариантах
осуществлени источником комбинированной вакцины вл етс Bovi-Shield® GOLD TM IBRBVD, Bovi-Shield ® GOLD TM 3, Bovi-Shield ® GOLD TM 5, Bovi-Shield ® GOLD TM IBR-BVD-BRSVLP, Bovi-Shield ® GOLD TM FP 5 L5, Bovi-Shield ® GOLD TM FP 5 VL5 или Preguard ® GOLD FP 10
(Pfizer, Inc.).
Кроме того, иммуногенные композиции и композиции вакцин, используемые в способах
по насто щему изобретению, могут включать один или более приемлемых в ветеринарии
носителей. Используемый здесь термин "приемлемый в ветеринарии носитель" включает
любой и каждый растворитель, дисперсионную среду, покрытие, адъювант,
солюбилизирующий агент, разбавитель, консервант, антибактериальное и
противогрибковое средство, изотонический агент, агент, задерживающий всасывание, и
тому подобные. Разбавители могут включать воду, солевой раствор, декстрозу, этанол,
глицерин и тому подобное. Изотонические агенты могут включать, нар ду с другими,
хлорид натри , декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Стабилизаторы, нар ду с другими,
включают альбумин. Адъюванты включают, но ими не ограничиваютс , нар ду с многими
другими, адъювантную систему RIBI (Ribi Inc.), квасцы, гель гидроксида алюмини ,
холестерин, эмульсии "масло-в-воде", эмульсии "вода-в-масле", такие как, например,
полный и неполный адъюванты Фрейнда, блок-сополимеры (CytRx, Atlanta GA), SAF-M
(Chiron, Emeryville CA), AMPHIGEN® адьювант, сапонин, Quil A, QS-21 (Cambridge
Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham,
AL) или другие фракции сапонина, монофосфорильный липид А, липид-аминовый
адъювант Avridine, термолабильный энтеротоксин из E.coli (рекомбинантный или иной),
холерный токсин или мурамилдипептид. Композици вакцины может, кроме того, включать
один или более других иммуномодул торных агентов, таких как, например, интерлейкины,
интерфероны или другие цитокины. Композиции вакцин, используемые в способах по
насто щему изобретению, могут также включать гентамицин и мертиолат. Хот специалист
в данной области может легко определить количество и концентрацию адъювантов и
добавок, которые можно использовать в контексте насто щего изобретени , насто щее
изобретение относитс к композици м, включающим от примерно 50 мг до примерно 2000
мг адъюванта, предпочтительно примерно от 500 мг до 2 мл дозы композиции вакцин. В
другом предпочтительном варианте осуществлени насто щее изобретение относитс к
композици м вакцин, включающим от примерно 1 мг/мл до примерно 60 мг/мл антибиотика,
более предпочтительнее менее чем примерно 30 мг/мл антибиотика.
Композиции вакцин, используемые в способах по насто щему изобретению, могут быть
получены в разнообразных формах в зависимости от пути введени . Например,
композиции вакцин могут быть получены в форме стерильных водных растворов или
дисперсий, подход щих дл инъекционного введени , или получены в лиофилизированных
формах, использу методики лиофилизации. Лиофилизированные композиции вакцин
обычно хран тс примерно при 4°С и могут быть растворены в стабилизирующем растворе,
например солевом растворе или HEPES, вместе или без адъюванта.
Композиции вакцин по насто щему изобретению можно вводить животным дл индукции
иммунного ответа против вирусов BVD типа 1 или типа 2 или против обоих вирусов BVD
типа 1 и типа 2. Соответственно еще один вариант осуществлени насто щего изобретени относитс к способам стимул ции иммунного ответа против вирусов BVD типа 1 или типа 2
или против сочетани вирусов BVD типа 1 и типа 2 путем введени животному
эффективного количества описанной выше иммуногенной композиции по насто щему
изобретению. Под термином "животное" понимают любое животное, которое восприимчиво
к инфекци м BVDV, такое как бык, овца и свинь .
В соответствии со способами по насто щему изобретению предпочтительна иммуногенна композици дл введени животному включает штамм cpNADL вируса BVDV
и/или штамм cp53637 вируса BVDV. Иммуногенна композици , содержаща вирус BVDV,
предпочтительно живой, модифицированный несколькими пассажами в культуре, вводитс крупному рогатому скоту предпочтительно внутримышечным или подкожным путум, хот Страница: 10
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
также можно использовать другие пути введени такие как, например, пероральный,
интраназальный пути введени , введение в лимфатический узел, внутрикожный,
внутрибрюшинный, ректальный или вагинальный путь введени или сочетание этих путей
введени .
Протоколы иммунизации могут быть оптимизированы, использу процедуры, хорошо
известные в данной области. Животным можно вводить одиночную дозу или,
альтернативно, можно проводить 2 или более прививок с интервалами 2-10 нед. В
зависимости от возраста животного иммуногенную композицию или композицию вакцин
можно вводить повторно. Например, насто щее изобретение предусматривает вакцинацию
здорового крупного рогатого скота до возраста 6 мес и ревакцинацию в возрасте 6 мес.
В еще одном примере насто щее изобретение предусматривает вакцинацию крупного
рогатого скота перед случкой, примерно за 5 недель до случки (или перед введением в
стадо) и, необ зательно, снова примерно за 2 недели до случки или во врем беременности дл защиты эмбриона против инфекции, вызванной BVDV типов 1 и 2.
Однократные дозы композиций по насто щему изобретению можно также вводить
примерно через 3-4 недели после первой дозы. Предусмотрена также ревакцинаци 1 раз в
полгода одной дозой комбинированной вакцины дл профилактики инфекции эмбриона
вирусом BVDV.
Степень и природа иммунных ответов, индуцируемых у крупного рогатого скота, можно
оценить разнообразными методиками. Например, у привитых животных можно вз ть
сыворотки и исследовать на наличие антител, специфичных дл вирусов BVDV, например,
обычным анализом нейтрализации вируса.
Термин "эффективное количество" относитс к количеству комбинированной вакцины,
достаточному дл того, чтобы вызвать иммунный ответ у животного, которому оно
введено. Иммунный ответ может включать, без ограничени , индукцию клеточного и/или
гуморального иммунитета. Количество вакцины, которое вл етс терапевтически
эффективным, может измен тьс в зависимости от конкретного используемого вируса,
состо ни крупного рогатого скота и/или степени инфекции, и его может определить
ветеринарный врач.
Инактивированные (частичные или цельноклеточные) и модифицированные живые
вакцины
Инактивированные или модифицированные живые вакцины, используемые в способе по
насто щему изобретению, могут быть получены, использу разнообразные способы,
которые известны в данной области.
Например, изол ты BVDV могут быть получены непосредственно из маток
инфицированных коров, использу известные методики.
Изол ты BVDV могут быть аттенуированы, использу разнообразие известных способов,
включа , например, серийные пассажи. В дополнение к модифицированным живым
вирусным изол там продукт вакцин, используемый в способах по насто щему
изобретению, может также включать подход щее количество одного или нескольких
обычно используемых адъювантов. Подход щие адъюванты могут включать, но ими не
ограничиваютс , минеральные гели, например гидроксид алюмини ; поверхностноактивные вещества, такие как лизолецитин; гликозиды, например производные сапонина,
такие как Quil A или GPI-0100; плюроновые полиолы; полианионы; неионные блоксополимеры, например Pluronic F-127 (B.A.S.F., USA); пептиды; минеральные масла,
например Montanide ISA-50 (Seppic, Paris, France), карбопол, Amphigen, Amphigen Mark
II (Hydronics, USA), Alhydrogel, масл ные эмульсии, например эмульсию минерального
масла, такого как BayolF/Arlacel A и воду, или эмульсию растительного масла, воду и
эмульгатор, такой как лецитин; квасцы; цитокины быков; холестерин и сочетани адъювантов. В предпочтительном варианте осуществлени сапонин, содержащий
эмульсию масла в воде, подвергаетс обычной микрофлюидизации.
Особенно предпочтительным источником вируса BVDV типа 1 и 2 дл использовани в
способе по насто щему изобретению вл етс лини вакцинных продуктов Bovi-Shield®
Страница: 11
RU 2 335 298 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
GOLD TM (PFIZER INC.), содержаща штамм NADL вируса BVDV (приобретенный в National
Animal Disease Center (NADC), USDA, Эймс, Айова) и штамм 53637 вируса BVDV типа 2
(Univ. Guelph, Guelph, Ont.) (ATCC No. PTA-4859).
Предпочтительно штаммы NADL и 53637 представл ют собой модифицированные
живые штаммы. В соответствии с насто щим изобретением штаммы по насто щему
изобретению могут быть дополнены коммерчески доступными адъювантами,
предпочтительно Quil A-Cholesterol-Amphigen (Hydronics, USA). Предпочтительна доза
иммуногенных композиций и композиций вакцин по насто щему изобретению составл ет
примерно 2,0 мл. В композиции, используемые в способах по насто щему изобретению,
можно включить консерванты. Консерванты, которые могут использоватьс в насто щем
изобретении, включают гентамицин и мертиолат. Можно также добавить носитель,
предпочтительно PBS. Получение модифицированных живых вакцин, такое как
аттенуирование вирулентных штаммов пассажем в культуре, известно в данной области.
Модифицированные живые изол ты BVDV можно также сочетать со следующими
бактери ми и вирусами, включа , но ими не ограничива сь, бычий вирус герпеса (BHV-1);
бычий респираторный синцитиальный вирус (BRSV), вирус парагриппа (PIV3), Leptospira
canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno,
Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Leptospira
borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava, Campylobacter fetus, Mannheimia
(Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida, Mycobacterium bovis и Mycobacterium dispar.
Дозировка и способы введени В соответствии с насто щим изобретением эффективное количество BVDV или
комбинированной вакцины, введенное восприимчивым самцам животных, обеспечивает
эффективный иммунитет против инфекции семенников, вызванной BVDV типа 2. В одном
из вариантов осуществлени вакцина вводитс тел там двум дозами с интервалом
примерно 3-4 недели. Например, первое введение выполн етс , когда возраст животного
составл ет от примерно 1 до примерно 3 мес. Второе введение выполн етс примерно
через 1-4 недели после первого введени комбинированной вакцины.
В другом предпочтительном варианте осуществлени введение выполн етс примерно
за 4-5 недель перед выведением животного или перед доставкой в учреждение
искусственного осеменени . Введение последующих доз вакцины предпочтительно
осуществл етс ежегодно. В другом предпочтительном варианте осуществлени животных,
вакцинированных до возраста примерно 6-мес цев, следует повторно вакцинировать после
6-мес чного возраста. Введение последующих доз вакцины предпочтительно
осуществл етс ежегодно, хот насто щим изобретением также предусматриваетс последующее введение доз вакцины 1 раз в 2 года и 1 раз в полгода.
Эффективное количество вакцины зависит от ингредиентов вакцины и схемы введени .
Обычно, когда в вакцине используетс препарат модифицированного живого BVDV, то
количество вакцины, содержащей от примерно 10 2 до примерно 10 10 TCID50 единиц на
дозу BVDV, предпочтительно от примерно 10 4 до примерно 10 7 TCID50 единиц на дозу
BVDV типов 1 и 2, эффективно дл однократного введени восприимчивым самцам
животных. Предпочтительно вакцина, котора обеспечивает эффективный иммунитет,
содержит примерно 10 4-10 7 TCID50 единиц/дозу BVDV типов 1 и 2, а предпочтительнее
примерно 10 5 TCID50 единиц/дозу при однократном введении восприимчивым животным.
Введение последующих доз вакцины предпочтительно провод т на ежегодной основе.
Животных, вакцинированных до возраста примерно 6 мес, следует ревакцинировать в
возрасте после 6 мес. Введение последующих доз вакцины предпочтительно провод т
ежегодно.
В соответствии с насто щим изобретением при введении предпочтительного продукта
Bovi-Shield® GOLD TM (Pfizer Inc.) продукт ввод т предпочтительно однократно в
количестве от примерно 0,1 до примерно 5,0 мл, предпочтительно от примерно 1,5 мл до
примерно 2,5 мл, предпочти?
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
212 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа