close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2336897

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)
RU
(11)
2 336 897
(13)
C1
(51) МПК
A61K 38/00
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2007116244/13, 28.04.2007
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
28.04.2007
(45) Опубликовано: 27.10.2008 Бюл. № 30
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: RU 2139086 C1, 10.10.1999. RU 2123861
C1, 27.12.1998. RU 2133609 C1, 27.07.1999.
(54) СПОСОБ ТЕРАПИИ ТОКСИЧЕСКОГО ШОКА У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ
R U
2 3 3 6 8 9 7
мин до гибели контрольной группы животных,
наход щихс в состо нии токсического шока.
Хелперные
фракции
нейтрофилокинов
предотвращают гибель биопробных животных,
корректируют
гемодинамику
и
активируют
иммунную систему. 4 табл.
Страница: 1
RU
C 1
C 1
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЧУМЕ
(57) Реферат:
Изобретение
относитс к
области
экспериментальной
медицины.
Гомологичные
хелперные
фракции
нейтрофилокинов,
разведенные в изотоническом растворе хлорида
натри в дозе 2ЕД50, ввод т биопробным животным
подкожно в заднюю лапку в объеме 0,2 мл за 30-40
2 3 3 6 8 9 7
Адрес дл переписки:
344002, г.Ростов-на-Дону, ул. М. Горького,
117/40, Ростовский научно-исследовательский
противочумный институт
(73) Патентообладатель(и):
Федеральное государственное учреждение
здравоохранени "Ростовский-на-Дону научноисследовательский противочумный институт"
Федеральной службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей и благополучи человека (RU)
R U
(72) Автор(ы):
Киселева Алла Константиновна (RU),
Васильева Галина Ивановна (RU),
Иванова Инна Александровна (RU),
Беспалова Ирина Александровна (RU),
Дорошенко Елена Петровна (RU)
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 336 897
(13)
C1
(51) Int. Cl.
A61K 38/00
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2007116244/13, 28.04.2007
(24) Effective date for property rights: 28.04.2007
(45) Date of publication: 27.10.2008 Bull. 30
Mail address:
344002, g.Rostov-na-Donu, ul. M. Gor'kogo,
117/40, Rostovskij nauchno-issledovatel'skij
protivochumnyj institut
(54) METHOD OF TOXIC SHOCK SYNDROME THERAPY AT LABORATORY ANIMALS IN
into a hindpaw in volume of 0.2 ml 30-40 minutes
prior to death of control group of the animals
who are in condition of toxic shock syndrome.
EFFECT: prevention of death of biotrial
animals,
normalisation
of
hemodynamic
and
promotion of the immune system.
4 tbl, 2 ex
R U
2 3 3 6 8 9 7
(57) Abstract:
FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention concerns area of
experimental
medicine.
Homologous
helper
fractions of neutrophylokines, dissolved in an
isotonic solution of sodium chloride in a dose 2UN 50
administer to a biotrial animal subcutaneously
Страница: 2
EN
C 1
C 1
CONDITONS OF EXPERIMENTAL PLAGUE
2 3 3 6 8 9 7
(73) Proprietor(s):
Federal'noe gosudarstvennoe uchrezhdenie
zdravookhranenija "Rostovskij-na-Donu nauchnoissledovatel'skij protivochumnyj institut"
Federal'noj sluzhby po nadzoru v sfere
zashchity prav potrebitelej i blagopoluchija
cheloveka (RU)
R U
(72) Inventor(s):
Kiseleva Alla Konstantinovna (RU),
Vasil'eva Galina Ivanovna (RU),
Ivanova Inna Aleksandrovna (RU),
Bespalova Irina Aleksandrovna (RU),
Doroshenko Elena Petrovna (RU)
RU 2 336 897 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Предлагаемое изобретение относитс к медицине, а именно к особо опасным
инфекционным заболевани м, и может быть использовано, в частности, в решении
проблемы коррекции токсического шока при чумной инфекции и интоксикации.
В насто щее врем существует проблема лечени чумной инфекции, основной
причиной которой вл етс иммуносупресси (Дмитровский A.M., Кугач И.В., 1994 г. Опыт лечени чумы во Вьетнаме).
Известен способ регул ции функций иммунокомпетентных клеток с помощью
нейтрофилакинов (см. Васильева Г.И., Козловский В.Н., Киселева А.К. и др. «Роль
нейтрофилакинов в формировании гуморального противочумного иммунитета», журнал
Иммунологи №4, 2003 г., с.219-221), заключающийс в том, что при введении в услови х
in vitro спленоциты интактных мышей отвечают на контакт с дезинтегратом бактериальной
массы Y. pestis EV увеличением синтеза специфических антител, превышающим
спонтанную продукцию иммуноглобулинов в 4 раза, имитиру первичный иммунный ответ,
в то врем как спленоциты иммунизированных животных, следу сценарию развити вторичного иммунного ответа, увеличивают продукцию противочумных антител, в 16 раз
превышающую спонтанную.
Однако очевидна роль нейтрофилокинов в формировании гуморального иммунитета
подтолкнула авторов на исследование воздействи нейтрофилокинов на течение
токсического шока, вызванного чумной инфекцией.
За прототип выбран способ терапии чумы (см. A.M.Дмитровский, И.В.Кугач.
«Клинические аспекты современной чумы», книга «Актуальные вопросы профилактики
чумы и других инфекционных заболеваний», Госкомстат комитет санитарноэпидемиологического надзора РФ, Ставрополь, 1994 г., с.31, 32), заключающийс в том,
что на этапе терапии инфекционно-токсического шока осуществл ют внутривенное
введение глюкокортикоидов в виде короткого ударного курса до стабилизации
гемодинамики, но не более 3-х суток.
Однако
- во-первых, за трехдневный срок лечени гидрокортизоном чаще всего гемодинамику
(кровообращение, давление) восстановить не удаетс ;
- во-вторых, терапи кортикостероидами без учета гормонального фона организма
может вызвать усиление патологии, так как гормональные препараты обладают
иммуносупрессивным (подавл ющим иммунитет) действием, вплоть до апоптоза
(разрушени иммунокомпетентных клеток).
Цель предлагаемого изобретени состо ла в повышении эффективности терапии
токсического шока путем применени новых средств, осуществл ющих коррекцию
гемодинамики и иммунной системы организма.
Поставленна цель достигаетс тем, что в известном способе терапии токсического
шока у лабораторных животных при экспериментальной чуме, включающем использование
препаратов, в качестве последних используют гомологичные хелперные фракции
нейтрофилокинов, разведенные в изотоническом растворе хлорида натри в дозе 2ЕД50,
которые ввод т биопробным животным подкожно в заднюю лапку в объеме 0,2 мл за 30-40
мин до гибели контрольной группы животных, наход щихс в состо нии токсического шока.
Способ осуществл етс следующим образом.
Предварительно готов т гомологичные хелперные фракции нейтрофилокинов от разных
видов животных, а именно белых мышей и морских свинок.
Дл этого из супернатантов (монослой культуры нейтрофилов), стимулированных in
vitro микробными клетками вакцинного штамма чумного микроба Y.pestis EV-76 методом
гельфильтрации на сефадексе Г-75, получают фракции пептидов с различной
молекул рной массой, часть из которых усиливает (хелперное действие) функциональную
активность иммунокомпетентных клеток, а именно:
- повышает киллерную активность макрофагов в отношении чумного микроба;
- усиливает дифференцировку моноцитов в макрофаги;
- увеличивает экспрессию мембранных иммуноглобулинов на поверхности ВСтраница: 3
DE
RU 2 336 897 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
лимфоцитов.
После этого провод т терапию животных, дл этого гомологичные хелперные фракции
нейтрофилокинов, разведенные в изотоническом растворе хлорида натри в дозе 2ЕД50,
ввод т подопытным животным подкожно в заднюю лапку в объеме 0,2 мл. Животные
наход тс в состо нии токсического чумного шока. Через 24 часа производ т
окончательный учет результатов. Контрольна группа животных, не получавша лечени хелперными фракци ми, погибала, а белые мыши и морские свинки, получавшие 2ЕД50
гомологичных хелперных фракций нейтрофилокинов, выживали. При этом хелперные
фракции вводили подопытным животным за 30-40 мин до гибели контрольной группы
животных, наход щихс в состо нии чумного токсического шока.
Способ подтверждаетс следующими примерами.
Пример 1. Терапи чумного эндотоксинового и септического шока на модели белых
мышей.
Дл создани инфекционно-токсической модели белых мышей заражали культурой
вакцинного штамма чумного микроба ЕВ линии НИИЭГ, выращенной в течение 3 суток на
агаре Хоттингера при 37°С. Мышей заражали взвесью культуры в 0,85% изотоническом
растворе хлористого натри внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. В предварительных
экспериментах была вычислена смертельна доза 2ЛД50 липополисахаридного токсина
чумного микроба, полученного по методу Вестфал и дефосфорилированного по
оригинальной методике, разработанной в лаборатории иммунологии Рост. НИПЧИ
(Беспалова И.А. и др., 1995). Дл мышей смертельна доза токсина (2ЛД50) составл ла
870 мкг/мышь.
Терапию проводили по 2-м направлени м.
I. Каждую из моделей пролечивали гидрокортизоном, дл этого двукратные разведени последнего в 0,85% изотоническом растворе хлористого натри вводили зараженным
мышам подкожно в объеме 0,2 мл через 2 часа после заражени .
Дл вычислени 2ЕД50 гидрокортизона по методу Кербера в модификации Ашмарина
И.П., Воробьева А.А. (1962) заражали 4 группы мышей по 6 мышей в группе. Контрольные
группы (также по 6 мышей в группе) были заражены 2ЛД50 культуры без лечени гидрокортизоном или наивысшей испытанной дозой гидрокортизона без заражени культурой. В таблице 1 представлены результаты терапии инфекционно-токсического и
эндотоксинового шока у белых мышей с помощью гидрокортизона.
Вывод: таким образом, при заражении мышей Y.pestis и возникновении инфекционнотоксического шока дл лечени достаточно 65 мкг гидрокортизона, а при эндотоксиновом
шоке - 67 мкг.
Следовательно, дл белых мышей, чувствительных к гидрокортизону, можно подобрать
дозу, защищающую их от инфекционного и эндотоксинового шока.
II. Новую терапию осуществл ли на тех же модел х (инфекционно-токсической и
эндотоксиновой), но с помощью хелперных фракций гомологичных (мышиных)
нейтрофилокинов. Двукратные разведени фракций вводили подкожно в объеме 0,2 мл во
внутреннюю часть бедра задней лапы. Кажда группа состо ла из 6 мышей и
сопровождалась теми же контрол ми, которые были вз ты при лечении гидрокортизоном.
ЕД50 фракций нейтрофилокинов определ ли по методу Кербера в модификации Ашмарина
И.П., Воробьева А.А. (1962).
Результаты коррекции токсического шока хелперными фракци ми нейтрофилокинов на
модели белых мышей представлены в таблице 2, где наблюдаем, что дл коррекции
токсического шока природный препарат, полученный из иммунокомпетентных клеток
животных, дает результат не хуже, чем при использовании гидрокортизона.
Следовательно, гибель мышей от шока можно предотвратить посредством хелперных
фракций нейтрофилокинов, вз тых в количестве 2ЕД50.
Пример 2. Терапи чумного эндотоксинового и септического шока на модели морских
свинок.
Дл создани инфекционно-токсической модели морских свинок заражали культурой
Страница: 4
RU 2 336 897 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
вакцинного штамма чумного микроба ЕВ линии НИИЭГ, выращенной в течение 3 суток на
агаре Хоттингера при 28°С. Свинок заражали взвесью культуры в 0,85% изотоническом
растворе хлористого натри внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Доза заражени составл ла
2ЛД50 (738 млрд.м.кл. на свинку).
Модель эндотоксинового шока на морских свинках воспроизводили с помощью
внутрибрюшинной инъекции 2ЛД50 (смертельной дозы) липополисахаридного токсина
чумного микроба, полученного по методу Вестфал и дефосфорилированного по
оригинальной методике, разработанной в лаборатории иммунологии Рост. НИПЧИ
(Беспалова И.А. и др., 1995). Дл свинок смертельна доза токсина (2ЛД50) составл ла
1500 мкг/свинку.
Терапию так же, как и в первом примере проводили гидрокортизоном, к которому
морские свинки резистентны, и хелперными фракци ми нейтрофилокинов.
Двукратные разведени гидрокортизона в 0,85% изотоническом растворе хлористого
натри вводили зараженным свинкам подкожно в объеме 0,2 мл через 2,5 часа после
заражени . Дл установлени величины ЕД50 гидрокортизона по методу Кербера в
модификации Ашмарина И.П., Воробьева А.А. (1962) заражали 4 группы свинок по 6 свинок
в каждой. Контрольные группы (также состо вшие из 6 животных) были заражены 2ЛД50
культуры без лечени гидрокортизоном или наивысшей испытанной дозой гидрокортизона
без заражени культурой. В таблице 3 представлены результаты терапии гидрокортизоном
инфекционно-токсического и эндотоксинового шока у морских свинок.
Вывод: коррекци гидрокортизоном токсического шока большими дозами (до 30 мг) дает
эффект, близкий к сенсибилизации.
В таблице 4 представлены результаты терапии инфекционно-токсического и
эндотоксинового шока у морских свинок хелперными фракци ми гомологичных
нейтрофилокинов, полученных из нейтрофилов морских свинок. Двукратные разведени фракций вводили подкожно в объеме 0,2 мл во внутреннюю часть бедра задней лапы.
Испытаны 4 доза нейтрофилокинов. Кажда группа состо ла из 6 свинок и сопровождалась
теми же контрол ми, которые были вз ты при лечении гидрокортизоном. ЕД50 фракций
нейтрофилокинов определ ли по методу Кербера в модификации Ашмарина И.П.,
Воробьева А.А. (1962).
Из таблицы видно, что хелперные фракции нейтрофилокинов морских свинок в дозах
ЕД50 от 10-30 мкг белка/мл работают значительно эффективнее, чем дозы стероидных
препаратов, имеющие свои недостатки и снижающие иммунитет животных.
Таким образом, результаты примеров подтверждают, что использованные в качестве
терапевтического препарата при чумном токсическом шоке хелперные фракции
нейтрофилокинов предотвращают гибель биопробных животных, корректиру гемодинамику и активиру иммунную систему последних.
Использование гомологичных фракций нового вида цитокинов, полученных из
нейтрофилов, - нейтрофилокинов, которые обладают хелперным действием в отношении
иммунокомпетентных клеток, как средства терапии чумного токсического шока
подтверждено на модел х животных, чувствительных и резистентных к терапии
кортикостероидными гормонами.
В виду того, что чума вл етс особо опасной высококонтагиозной инфекцией,
совершенствование способов эффективной терапии чумного токсического шока имеет
немаловажное значение дл разработки правильной стратегии лечени больных, имеющих
иммунные расстройства и нарушени в работе иммунной системы.
Таблица 1
Коррекци гидрокортизоном токсического шока у мышей
Y.pestis EV (37°С) (2LD50)
50
ЛПС чумного микроба (2LD50)
Доза гидрокортизона (мкг) Летальность* ЕД50 Доза гидрокортизона (мкг) Летальность* ЕД50 гидрокортизона
Страница: 5
RU 2 336 897 C1
5
0 контроль культуры
6/6*
0 контроль культуры
6/6
62
6/6
65
100
6/6
125
3/6
200
5/6
250
4/6
400
4/6
500
0/6
800
4/6
500
2/6
800
0/6
67
* - в числителе указано количество павших животных, в знаменателе - количество животных в группе.
Таблица 2
Коррекци токсического шока с помощью фракций нейтрофилокинов на модели белых мышей
Y.pestis EV (37°С) (2LD50)
10
15
Доза нейтрофилокинов (мкг)
ЛПС чумного микроба (2LD50)
Летальность* ЕД50 (мкг
белка/мл)
Доза нейтрофилокинов (мкг)
Летальность* ЕД50 (мкг
белка/мл)
0 контроль культуры
6/6*
0 контроль культуры
6/6
2,3
2/6
0,25
6/6
4,5
4/6
0,5
5/6
9
2/6
1
3/6
18
2/6
2
3/6*
18 (контроль нейтрофилокинов без
введени культуры)
0/6
2 (контроль нейтрофилокинов без
введени токсина)
0/6
7,3
1,3
* - в числителе указано количество павших животных, в знаменателе - количество животных в группе.
Таблица 3
20
Коррекци гидрокортизоном токсического шока на модели морских свинок
Y.pestis EV (28°С) (2LD50)
ЛПС чумного микроба (2LD50)
Доза гидрокортизона (мкг) Летальность* ЕД50 (мг) Доза гидрокортизона (мкг) Летальность* ЕД50 (мг)
0 контроль культуры
6/6*
0 контроль культуры
6/6
1
3/6
1,25
4/6
2
1/6
2,5
5/6
4
2/6
5
6/6
8
0/6
10
4/6
8
0/6
10
0/6
25
3,24
15,7
* - в числителе указано количество павших животных, в знаменателе - количество животных в группе.
Таблица 4
30
Коррекци токсического шока с помощью фракций нейтрофилокинов на модели морских свинок
Y.pestis EV (37°С) (2LD50)
Доза нейтрофилокинов (мкг)
35
40
45
ЛПС чумного микроба (2LD50)
Летальность* ЕД50 (мкг
белка/мл)
Доза нейтрофилокинов (мкг)
0 (контроль культуры)
6/6*
0 (контроль культуры)
3,8
5/6
5,1
5/6
7,5
2/6
10,2
5/6
15
5/6
20,5
4/6
30
0/6
41
0/6
30 (контроль нейтрофилокинов без
введени культуры)
0/6
41 (контроль нейтрофилокинов без
введени токсина)
0/6
7,3
6/6
1,3
* - в числителе указано количество павших животных, в знаменателе - количество животных в группе.
Формула изобретени Способ терапии токсического шока у лабораторных животных при экспериментальной
чуме, включающий использование препаратов, отличающийс тем, что в качестве
препарата используют гомологичные хелперные фракции нейтрофилокинов, разведенные
в изотоническом растворе хлорида натри в дозе 2ЕД50, которые ввод т биопробным
животным подкожно в заднюю лапку в объеме 0,2 мл за 30-40 мин до гибели контрольной
группы животных, наход щихс в состо нии токсического шока.
50
Страница: 6
CL
Летальность* ЕД50 (мкг
белка/мл)
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
88 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа