close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2337095

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 337 095
(13)
C2
(51) МПК
C07D 207/08 (2006.01)
A61K 31/40 (2006.01)
A61P 11/08 (2006.01)
A61P 11/06 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2006101151/04, 10.06.2004
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
10.06.2004
(30) Конвенционный приоритет:
13.06.2003 US 60/478,456
(73) Патентообладатель(и):
ТЕРЕВАНС, ИНК. (US)
(43) Дата публикации за вки: 27.06.2006
R U
(72) Автор(ы):
МАММЕН Матай (US),
ХЬЮЗ Адам (US),
ЦЗИ Ю-Хуа (US),
ЛИ Ли (US),
ЧЖАН Вэйцз нь (US)
(45) Опубликовано: 27.10.2008 Бюл. № 30
2 3 3 7 0 9 5
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: JP 04090559 (RICOH KK, NEOS KK)
21.05.2004. JP 04151168 (RICOH КК, NEOS KK)
25.05.1992. ЕР 0388054 (PFIZER LTD)
19.09.1990. RU 2152385 (САНКИО КОМПАНИ
ЛИМИТЕД) 10.07.2000.
2 3 3 7 0 9 5
R U
(86) За вка PCT:
US 2004/018813 (10.06.2004)
C 2
C 2
(85) Дата перевода за вки PCT на национальную фазу:
13.01.2006
(87) Публикаци PCT:
WO 2005/003090 (13.01.2005)
Адрес дл переписки:
129090, Москва, ул. Б.Спасска , 25, стр.3,
ООО "Юридическа фирма Городисский и
Партнеры", пат.пов. Е.Е.Назиной
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ 1-(АЛКИЛАМИНОАЛКИЛ-ПИРРОЛИДИН/ПИПЕРИДИНИЛ)-2,2-
ДИФЕНИЛАЦЕТАМИДА В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТОВ МУСКАРИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ
(57) Реферат:
Насто ща группа изобретений может найти
применение в медицине и относитс к
биологически
активным
соединени м,
охарактеризованным
формулой
(I),
их
фармацевтически приемлемым сол м, сольватам и
стереоизомерам, фармацевтическим композици м,
содержащим указанные соединени , их способу
получени ,
промежуточным
соединени м,
используемым дл получени соединений
формулы (I), и способам лечени болезненных
состо ний,
опосредованных
мускариновыми
рецепторами
с
использованием
указанных
соединений.
где R 4 представл ет собой водород; R 5 выбран
из С1-6алкила, С3-6циклоалкила и -CH2-R 8; где
алкильна группа необ зательно замещена -ОН
или 1-5 фтор-заместител ми; R 8 выбран
из С3-5циклоалкила или фенила; a, b и с равны 0; d
равно 1; е равно 8 или 9. Технический результат получение
новых
биологически
активных
соединений дл лечени р да заболеваний,
Страница: 1
RU
опосредованных мускариновыми рецепторами. 10
н.п. и 9 з.п. ф-лы, 15 табл.
R U
R U
2 3 3 7 0 9 5
C 2
C 2
2 3 3 7 0 9 5
Страница: 2
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 337 095
(13)
C2
(51) Int. Cl.
C07D 207/08 (2006.01)
A61K 31/40 (2006.01)
A61P 11/08 (2006.01)
A61P 11/06 (2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2006101151/04, 10.06.2004
(24) Effective date for property rights: 10.06.2004
(30) Priority:
13.06.2003 US 60/478,456
(43) Application published: 27.06.2006
(73) Proprietor(s):
TEREVANS, INK. (US)
(45) Date of publication: 27.10.2008 Bull. 30
2 3 3 7 0 9 5
(85) Commencement of national phase: 13.01.2006
(86) PCT application:
US 2004/018813 (10.06.2004)
(87) PCT publication:
WO 2005/003090 (13.01.2005)
(54) DERIVATIVES 1-(ALKYLAMINEALKYL-PYRROLIDINE/PIPERIDINILE)-2,2-DYPHENILACETAMID
R U
2 3 3 7 0 9 5
AS ANTAGONISTS OF MUSCARINE RECEPTORS
(57) Abstract:
FIELD: medicine; pharmacology.
SUBSTANCE: present group of inventions is
referred
to
biologically
active
compounds
characterised
by
the
formula
(I),
their
pharmaceutically acceptable salts, solvates and
stereoisomers, the pharmaceutical compositions
containing
specified
compounds,
method
of
obtaining, the intermediate compounds used for
obtaining of compounds of the formula (I), and
methods of treatment of the painful conditions
mediated by muscarine receptors with use of
specified
compounds
where R 4 represents hydrogen; R 5 is chosen
from C1-6alkyl, C3-6cycloalkyl and -CH2-R 8; where
the alkyle group is unessentially replaced by or
1-5
fluorine-substituents;
R8
is
chosen
from C3-6cycloalkyl or phenyl; a, b and with are 0;
d is 1; e is 8 or 9.
EFFECT: obtaining of new biologically active
compounds for treatment of some diseases.
10 cl, 27 ex, 15 tbl
Страница: 3
C 2
C 2
Mail address:
129090, Moskva, ul. B.Spasskaja, 25, str.3,
OOO "Juridicheskaja firma Gorodisskij i
Partnery", pat.pov. E.E.Nazinoj
EN
R U
(72) Inventor(s):
MAMMEN Mataj (US),
Kh'JuZ Adam (US),
TsZI Ju-Khua (US),
LI Li (US),
ChZhAN Vehjtszjan' (US)
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Область техники
Данное изобретение относитс к соединени м замещенного пирролидина и
родственным соединени м, имеющим активность антагониста мускариновых рецепторов
или антихолинергическую активность. Данное изобретение также относитс к
фармацевтическим композици м, содержащим указанные соединени ; способам
использовани указанных соединений дл лечени клинических состо ний,
опосредованных мускариновыми рецепторами; и способам и промежуточным соединени м,
используемым дл получени вышеуказанных соединений.
Предшествующий уровень техники
Легочные нарушени , такие как хроническа обструктивна болезнь легких (COPD) и
астма, поражают много миллионов людей во всем мире и указанные расстройства
вл ютс основной причиной заболеваемости и смертности.
Антагонисты мускариновых рецепторов, как известно, обеспечивают бронхозащитные
эффекты, и поэтому указанные соединени пригодны дл лечени нарушений дыхани ,
таких как COPD и астма. При использовании дл лечени таких нарушений антагонисты
мускариновых рецепторов, как правило, ввод т путем ингал ции. Однако даже при
введении ингал цией значительное количество антагониста мускариновых рецепторов
зачастую абсорбируетс в системное кровообращение, что приводит к системным
побочным эффектам, таким как ксеростоми (сухость во рту), задержка мочи, мидриаз
(расширение зрачка) и сердечно-сосудистые побочные эффекты.
Кроме того, многие вводимые ингал цией антагонисты мускариновых рецепторов имеют
относительно короткую продолжительность действи , что требует их введени несколько
раз в день. Така схема многократного ежедневного приема лекарственного средства не
только неудобна, но и создает значительный риск неадекватного лечени из-за
несоблюдени пациентом необходимой схемы частого приема лекарственного средства.
В соответствии с этим существует потребность в новых антагонистах мускариновых
рецепторов. В частности, существует потребность в новых антагонистах мускариновых
рецепторов, имеющих высокую эффективность и демонстрирующих ослабление
про влени системных побочных эффектов при введении ингал цией. Кроме того,
существует потребность во вдыхаемых антагонистах мускариновых рецепторов, имеющих
продолжительный период действи , тем самым дела возможным прием дозы
лекарственного средства раз в день или даже один раз в неделю. Ожидаетс , что такие
соединени будут, в частности, эффективными дл лечени легочных нарушений, таких как
COPD и астма, при этом уменьша или ликвидиру про вление побочных действий, таких
как ксеростоми .
Краткое изложение существа изобретени Насто щее изобретение предлагает новые соединени замещенного пирролидина и
родственные соединени , которые имеют активность антагониста мускариновых
рецепторов или антихолинергическую активность. Среди других свойств соединени по
данному изобретению, как было установлено, обладают удивительной и неожиданной
аффинностью св зывани с подтипами hM2 и hM3 мускариновых рецепторов по сравнению
с родственными соединени ми. Кроме того, соединени по данному изобретению, как было
обнаружено, имеют удивительную и неожиданную легочную селективность при введении
ингал цией, тем самым привод к снижению системных побочных эффектов. Кроме того,
соединени по данному изобретению, как было установлено, обладают удивительной и
неожиданной продолжительностью действи бронхозащиты при введении ингал цией.
Соответственно, в одном из составл ющих аспектов, данное изобретение предлагает
соединение формулы I:
50
Страница: 4
DE
RU 2 337 095 C2
5
10
где
каждый R 1 и R 2 независимо выбран
из C1-4алкила, С2-4алкенила, C2-4алкинила, C3-6циклоалкила, циано,
15
галогена, -OR а, -SR а, -S(О)R а, -S(O)2R a и -NR bR c; или две соседние группы R 1 или две
соседние группы R 2 соединены вместе с образованием С3-6алкилена, -(C2-4алкилен)-Оили -О-(C1-4алкилен)-О-;
каждый R 3 независимо выбран из C1-4алкила и фтора;
каждый R 4 независимо выбран из
водорода, C1-6алкила, C2-6алкенила, C2-6алкинила, C3-6циклоалкила, C610
20
25
30
35
арила, C2-9гетероарила, C3-6гетероциклила (гетероциклической
группы), -CH2-R 6 и -CH2CH2-R 7; или обе группы R 4 соединены вместе с атомом азота, с
которым они св заны, с образованием С3-6гетероциклила;
R 5 выбран из C1-6алкила, C2-6алкенила, С2-6алкинила, C3-6циклоалкила и -CH2-R 8, где
кажда алкильна , алкенильна и алкинильна группа необ зательно замещена -OH или 15 фтор-заместител ми;
каждый R 6 независимо выбран из C3-6циклоалкила, C6-10арила, C2-9гетероарила
и C3-6гетероциклила;
каждый R 7 независимо выбран из C3-6циклоалкила, C6арила, C2-9гетероарила, C3-6гетероциклила, -OH, -О(С1-6алкила), -(C3-6циклоалкила), -О(С610
арила), -О(С2-9гетероарила), -S(C1-6алкила), -S(О)(C1-6алкила), -S(О)2(C1-6алкила), -S(C3-6
10
циклоалкила), -S(О)(C3-6циклоалкила), -S(О)2(C3-6циклоалкила), -S(C6-10арила), -S(О)(C6арила), -S(O)2(C6-10арила), -S(C2-9гетероарила), -S(О)(C2-9гетероарила)
10
и -S(O)2(C2-9гетероарила);
каждый R 8 независимо выбран из C3-6циклоалкила, C6-10арила, C2-9гетероарила
и C3-6гетероциклила;
каждый R а независимо выбран из водорода, C1-4алкила, С2-4алкенила, С2-4алкинила и С3циклоалкила;
6
40
45
50
каждый R b и R c независимо выбран из
водорода, C1-4алкила, С2-4алкенила, С2-4алкинила, и С3-6циклоалкила; или R b и R c
соединены вместе с атомом азота, с которым они св заны, образу С3-6гетероциклил;
a означает целое число от 0 до 3;
b означает целое число от 0 до 3;
c означает целое число от 0 до 4;
d равно 1 или 2;
e равно 8 или 9;
где кажда алкильна , алкиленова , алкенильна , алкинильна и циклоалкильна группа
в R 1, R 2, R 3, R 4, R 7, R а, R b и R c необ зательно замещена 1-5 фтор-заместител ми; кажда арильна , циклоалкильна , гетероарильна и гетероциклическа группа
в R 1, R 2, R 4, R 5, R 6, R 7, R 8, R а, R b и R c необ зательно замещена 1-3 заместител ми,
независимо выбранными из C1-4алкила, C2-4алкенила, C2-4алкинила, циано, галогена, -О(С1алкила), -S(C1-4алкила), -S(О)(C1-4алкила), -S(О)2(C1-4алкила), -NH2, -NH(C1-4алкила)
4
и -N(C1-4алкил)2, где кажда алкильна , алкиленова , алкенильна и алкинильна группа
Страница: 5
RU 2 337 095 C2
5
необ зательно замещена 1-5 фтор-заместител ми; и кажда -CH2- группа в -(CH2)енеоб зательно замещена 1 или 2 заместител ми, независимо выбранными
из C1-2алкила, -OH и фтора;
или его фармацевтически приемлемую соль, или его сольват, или его стереоизомер.
В другом из составл ющих аспектов данное изобретение предлагает соединение
формулы II:
10
15
20
25
30
35
40
45
50
где R 5 и e такие, как определено выше; или его фармацевтически приемлемую соль, или
его сольват, или его стереоизомер.
В отдельных и различных вариантах данное изобретение касаетс также соединений
формулы II, где стереохими в 3-положении пирролидинового кольца имеет (R)конфигурацию; и соединений формулы II, где стереохими в 3-положении пирролидинового
кольца имеет (S)-конфигурацию.
В другом из составл ющих аспектов данное изобретение предлагает фармацевтическую
композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически
эффективное количество соединени формулы I, или его фармацевтически приемлемой
соли, или его сольвата, или его стереоизомера. Указанные фармацевтические композиции
могут необ зательно содержать другие терапевтические средства. Соответственно, в
одном варианте, данное изобретение относитс к такой фармацевтической композиции, где
композици дополнительно содержит терапевтически эффективное количество
стероидного противовоспалительного средства, такого как кортикостероид;
агонист ?2-адренергического рецептора; ингибитор фосфодиэстеразы-4; или их
комбинацию.
Соединени по данному изобретению представл ют собой антагонисты мускариновых
рецепторов. Соответственно, в одном из аспектов способа данное изобретение предлагает
способ лечени млекопитающего, имеющего клиническое состо ние, которое облегчаетс лечением антагонистом мускариновых рецепторов, и этот способ включает введение
млекопитающему терапевтически эффективного количества соединени формулы I, или
его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата, или его стереоизомера.
В другом из аспектов способа данное изобретение предлагает способ лечени легочного
нарушени , и этот способ включает введение пациенту, нуждающемус в таком лечении,
терапевтически эффективного количества соединени формулы I, или его
фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата, или его стереоизомера.
В очередном из аспектов способа данное изобретение предлагает способ
бронходилатации у пациента, и этот способ включает введение путем ингал ции пациенту
вызывающего бронходилатацию количества соединени формулы I, или его
фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата, или его стереоизомера.
В следующем из аспектов способа данное изобретение предлагает способ лечени хронической обструктивной болезни легких или астмы, и этот способ включает введение
пациенту, нуждающемс в таком лечении, терапевтически эффективного количества
соединени формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата, или
его стереоизомера.
Так как соединени по данному изобретению обладают активностью антагониста
мускариновых рецепторов, указанные соединени также полезны в качестве
инструментальных средств дл изучени биологических систем или образцов, имеющих
мускариновый рецептор, или дл изучени активности других химических соединений.
Соответственно, в очередном из аспектов способа данное изобретение предлагает способ
Страница: 6
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
применени соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера в качестве инструментального средства дл изучени биологической системы или образца, или дл обнаружени новых химических соединений,
имеющих активность антагониста мускариновых рецепторов.
Данное изобретение относитс также к способам и новым промежуточным соединени м,
используемым дл получени соединений формулы I или их соли, или их сольвата, или их
стеризомера. Соответственно в другом из аспектов способа данное изобретение
предлагает способ получени соединени формулы I, и этот способ включает:
(a) взаимодействие соединени формулы III с соединением формулы IV в присутствии
восстановител ;
(b) взаимодействие соединени формулы V с соединением формулы VI в присутствии
восстановител ;
(c) взаимодействие соединени формулы VII с соединением формулы IV;
или
(d) взаимодействие соединени формулы V с соединением VIII;
и затем
(e) удаление любых защитных групп с получением соединени формулы I или его соли;
где соединени формул I и III-VIII такие, как определены в данном описании.
В одном варианте вышеупом нутый способ дополнительно включает дополнительную
стадию получени фармацевтически приемлемой соли соединени формулы I.
В другом из аспектов способа данное изобретение предлагает способ получени фармацевтически приемлемой соли соединени формулы I, и этот способ включает
контактирование соединени формулы IX:
25
30
35
где R 1-R 5 и a-e такие, как определены выше; и P а представл ет собой неустойчивую к
действию кислоты амино-защитную группу; с фармацевтически приемлемой кислотой,
получа фармацевтически приемлемую соль соединени формулы I.
В других вариантах данное изобретение относитс к другим способам, описанным здесь;
и к продукту, полученному любым из способов, описанных здесь.
В другом из составл ющих аспектов данное изобретение предлагает соединение
формулы X:
40
45
50
где R 1-R 5 и a-e такие, как определены здесь; и P представл ет собой амино-защитную
группу; или его соль, или его сольват, или его стереоизомер; дл использовани в
качестве промежуточного соединени дл получени соединений формулы I.
В другом из составл ющих аспектов данное изобретение предлагает соединение
формулы XI:
где R 5 и e такие, как определены выше; P представл ет собой амино-защитную группу;
Страница: 7
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
и G выбран из -CHO, -CH(OR f)2, -CH2OH и -2-L, где каждый R f представл ет
независимо С1-6алкил или обе группы R f соединены вместе с образованием С2-6алкилена;
и L представл ет собой удал емую группу; или его соль, или его стереоизомер; дл использовани в качестве промежуточного соединени дл получени соединений
формулы I; при условии, что когда L представл ет собой хлор, Р не вл етс этоксикарбонилом (т.е. CH3CH2ОС(О)-).
В дополнительных отдельных и различных аспектах данное изобретение обеспечивает:
соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, или его сольват,
или его стереоизомер дл применени при лечении;
соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, или его сольват,
или его стереоизомер дл применени в качестве лекарственного средства;
соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, или его сольват,
или его стереоизомер дл применени при лечении легочных нарушений, включа хроническую обструктивную болезнь легких и астму;
лекарственное средство, содержащее соединение формулы I или его фармацевтически
приемлемую соль, или его сольват, или его стереоизомер;
применение соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера дл лечени легочных нарушений, включа хроническую
обструктивную болезнь легких и астму;
применение соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера в качестве лекарственного средства дл лечени легочных нарушений, включа хроническую обструктивную болезнь легких и астму;
применение соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера дл изготовлени лекарственного средства; и
применение соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера дл изготовлени лекарственного средства дл лечени легочных нарушений, включа хроническую обструктивную болезнь легких и астму.
Подробное описание изобретени Данное изобретение обеспечивает новые соединени замещенного пирролидина и
родственные соединени формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, или их
сольваты, или их стереоизомеры. Указанные соединени могут содержать один или
несколько хиральных центров и, когда такой хиральный центр или центры присутствуют,
данное изобретение касаетс и рацемических смесей; чистых стереоизомеров (т.е.
индивидуальных энантиомеров или диастереомеров); и стереоизомер-обогащенных смесей
таких изомеров, если не оговорено особо. В тех случа х, когда представлен конкретный
стереоизомер, дл квалифицированных специалистов в данной области техники должно
быть очевидно, что в композици х по данному изобретению могут присутствовать
незначительные количества других стереоизомеров, если не оговорено особо, при
условии, что присутствие в композиции таких других изомеров не устран ет ее
полезности в целом.
Соединени по данному изобретению также содержат несколько основных групп
(например, аминогрупп), и поэтому соединени формулы I могут существовать в виде
свободного основани или в различных солевых формах. Все такие формы выход т в
объем данного изобретени . В объем данного изобретени также включены
фармацевтически приемлемые сольваты соединений формулы I или их соли.
Дополнительно, где это применимо, все цис-транс или E/Z изомеры (геометрические
изомеры), таутомерные формы и топоизомерные формы соединений формулы I вход т в
объем данного изобретени , если не оговорено иначе.
Номенклатура, используема в насто щем описании дл названи соединений по
данному изобретению, нагл дно представлена в нижеприведенных Примерах. Обычно эту
номенклатуру получали, использу коммерчески доступное программное обеспечение
AutoNom software (MDL, San Leandro, California).
Типичные варианты осуществлени изобретени Страница: 8
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Подразумеваетс , что нижеследующие заместители и значени обеспечивают типичные
примеры и варианты различных аспектов данного изобретени . Эти типичные значени предназначены дл более подробного определени таких аспектов и вариантов
осуществлени и не подразумевают исключени других вариантов осуществлени или
ограничени объема данного изобретени . В этом отношении констатаци того, что
конкретное значение или заместитель вл етс предпочтительным, не подразумевает, ни в
каком смысле, исключени других значений или заместителей из данного изобретени ,
если не оговорено конкретно.
В конкретном варианте, R 1 или R 2, когда присутствуют, независимо выбраны
из C1-4алкила, фтора, хлора и -OR а; где кажда алкильна группа необ зательно замещена
1-3 фтор-заместител ми. В другом конкретном варианте, каждый R 1 и R 2 представл ет
собой С1-2алкил или фтор. Типичные группы R 1 и R 2 включают, но не ограничива сь ими,
метил, этил, н-пропил, изопропил, дифторметил, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, фтор,
хлор, метокси, этокси, дифторметокси и трифторметокси.
В конкретном варианте, каждый R 3, когда присутствует, независимо выбран
из С1-2алкила и фтора; где кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3 фторзаместител ми. Когда присутствуют два заместител R 3, они могут находитьс на одном
и том же или различных атомах углерода. Типичные группы R 3 включают, но не
ограничива сь ими, метил, этил, дифторметил, трифторметил и фтор.
В конкретных вариантах, каждый R 4 представл ет собой независимо водород
или С1-4алкил; или каждый R 4 представл ет собой независимо водород или С1-2алкил; или
каждый R 4 представл ет собой водород. Типичные группы R 4 включают, но не
ограничива сь ими, водород, метил и этил.
Альтернативно, в другом конкретном варианте, обе группы R 4 соединены вместе с
атомом азота, с которым они св заны, образу С3-5гетероциклическое кольцо,
необ зательно содержащее один дополнительный гетероатом, выбранный из азота,
кислорода или серы. Типичные гетероциклические кольца включают, но не ограничиваютс ими, пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, пиперазин-1-ил, морфолин-4-ил и тиоморфолин-4ил.
В конкретных вариантах, R 5 представл ет собой С1-5алкил; или R 5 представл ет
собой С1-4алкил; или R 5 представл ет собой С1-3алкил; или R 5 представл ет
собой C1-2алкил; где алкильна группа необ зательно замещена -OH или 1-3 фторзаместител ми. Типичные группы R5 в этом варианте включают, но не ограничиваютс ими, метил, этил, 2-гидроксиэтил, 2,2,2-трифторэтил, н-пропил, изопропил, 1гидроксипроп-2-ил, н-бутил и изобутил. В одном варианте, R 5 представл ет собой метил.
В других конкретных вариантах, R 5 представл ет собой С3-5циклоалкил; или R 5
представл ет собой С3-4циклоалкил; где циклоалкильна группа необ зательно
замещена -OH или 1-3 фтор-заместител ми. Типичные группы R 5 в этом варианте
включают, но не ограничиваютс ими, циклопропил, циклобутил и циклопентил.
В другом конкретном варианте, R 5 представл ет собой -CH2-R 8, где R 8 такой, как
определено здесь. В отдельных аспектах этого варианта, R 5 (т.е. -CH2-R 8) выбран из:
(a) -CH2-(C3-5циклоалкила); или -CH2-(С3-4циклоалкила); где циклоалкильна группа
необ зательно замещена -OH или 1-3 фтор-заместител ми;
(b) -CH2-(фенила), т.е. бензила, где фенильна группа необ зательно замещена 1-3
заместител ми, независимо выбранными из С1-4алкила, циано, фтора,
хлора, -О(С1-4алкила), -S(C1-4алкила) и -S(О)2(C1-4алкила); где кажда алкильна группа
необ зательно замещена 1-3 фтор-заместител ми.
Типичные группы R 5 в этом варианте включают, но не ограничива сь ими,
циклопропилметил, циклобутилметил и циклопентилметил; и бензил, 4-цианобензил, 3метилбензил, 4-метилбензил, 4-трифторметоксибензил, 3-фторбензил и 4-фторбензил.
В конкретном варианте, каждый R 6 представл ет собой независимо фенил; где кажда Страница: 9
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
фенильна группа необ зательно замещена 1-3 заместител ми, независимо выбранными
из С1-4алкила, циано, фтора, хлора, -О(C1-4алкила), -S(C1-4алкила) и -S(O)2(C1-4алкила);
где кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3 фтор-заместител ми.
В конкретном варианте, каждый R 7 независимо выбран из фенила, -OH и -О(C1-2алкила);
где кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3 фтор-заместител ми; и кажда фенильна группа необ зательно замещена 1-3 заместител ми, независимо выбранными
из C1-4алкила, циано, фтора, хлора, -(C1-4алкила), -S(C1-4алкила) и -S(О)2(C1-4алкила); где
кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3 фтор-заместител ми.
В конкретных вариантах, каждый R а независимо выбран из водорода и C1-3алкила; или
водорода и C1-2алкила; где кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3 фторзаместител ми. Типичные группы Rа включают, но не ограничиваютс ими, метил, этил, нпропил, изопропил, дифторметил, трифторметил и 2,2,2-трифторэтил.
В конкретных вариантах, каждый R b и R с независимо выбран из водорода и C1-3алкила;
или водорода и C1-2алкила; где кажда алкильна группа необ зательно замещена 1-3
фтор-заместител ми. Типичные группы R а и R b включают, но не ограничива сь ими,
метил, этил, н-пропил, изопропил, дифторметил, трифторметил и 2,2,2-трифторэтил.
Альтернативно, в другом конкретном варианте, R а и R b соединены вместе с атомом
азота, с которым они св заны, образу С3-5гетероциклическое кольцо, необ зательно
содержащее один дополнительный гетероатом, выбранный из азота, кислорода или серы.
Типичные гетероциклические кольца включают, но не ограничива сь ими, пирролидин-1-ил,
пиперидин-1-ил, пиперазин-1-ил, морфолин-4-ил и тиоморфолин-4-ил.
В конкретных вариантах, a равно 0, 1 или 2; или a равно 0 или 1; или a равно 0.
В конкретных вариантах, b равно 0, 1 или 2; или b равно 0 или 1; или b равно 0.
В конкретных вариантах, c равно 0, 1 или 2; или c равно 0 или 1; или c равно 0.
Когда d равно 1, т.е. когда кольцо, определ емое согласно d, представл ет собой
пирролидиновое кольцо, тогда в одном варианте, стереоцентр в 3-положении
пирролидинового кольца (т.е. углеродный атом, несущий 1-карбамоил-1,1дифенилметильную группу) имеет (S)-стереохимию. В другом варианте этот стереоцентр
имеет (R)-стереохимию.
В одном варианте e равно 8. В другом варианте e равно 9.
Конкретный вариант насто щего изобретени представл ет собой соединени формулы
I, где обе группы R 4 представл ют собой водород, a, b и c равны 0; d равно 1; e равно 8
или 9; и R 5 представл ет собой С1-3алкил; или C1-2алкил; или их фармацевтически
приемлемую соль, или их сольват, или их стереоизомер.
Другим конкретным вариантом насто щего изобретени вл ютс соединени формулы
I, где обе группы R 4 представл ют собой водород, a, b и c равны 0; d равно 1; e равно 8
или 9; и R 5 представл ет собой C3-5циклоалкил; или C3-4циклоалкил; или их
фармацевтически приемлемую соль, или их сольват, или их стереоизомер.
Очередным конкретным вариантом насто щего изобретени вл ютс соединени формулы I, где R 5 представл ет собой метил; и R 1, R 2, R 3, R 4, a, b, c, d и e такие, как
определены здесь; или их фармацевтически приемлемую соль, или их сольват, или их
стереоизомер.
Другие конкретные варианты насто щего изобретени представл ют собой соединени формулы IIa:
50
где R 5 и e такие, как определены в таблице I, или их фармацевтически приемлемую
Страница: 10
RU 2 337 095 C2
соль, или их сольват.
Таблица I
Пример №
R5
e
1
-CH 3
8
-CH(CH3)2
8
2
5
10
3
-CH 2CH2CH3 8
4
-циклопропил
8
5
-циклобутил
8
6
-циклопентил
8
7
-CH2CH3
8
8
-CH2CH2OH
8
9 -CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 8
10
-CH(CH3)CH2OH
8
11 -CH(CH3)CH2OH (S)-изомер 8
15
20
12
-CH2CF3
8
13
-CH2Ph ?
8
14
-CH 3
9
15
-CH(CH3)2
9
16
-CH2CH2CH3
9
17
-циклопропил
9
18
-циклобутил
9
19
-циклопентил
9
20
-CH2CH3
9
21
-CH2CH2OH
9
22 -CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 9
25
23
-CH(CH3)CH2OH
9
24 -CH(CH3)CH2OH (S)-изомер 9
25
-CH2CF3
9
26
-CH2Ph
9
? Ph = фенил.
30
Следующими конкретными вариантами воплощени насто щего изобретени вл ютс соединени формулы IIb:
35
40
где R 5 и e такие, как определены в таблице II, или их фармацевтически приемлема соль или их сольват.
Таблица II
R5
e
27
-CH 3
8
28
-CH(CH3)2
8
29
-CH 2CH2CH3
8
30
-циклопропил
8
Пример №
45
50
31
-циклобутил
8
32
-циклопентил
8
33
-CH2CH3
8
34
-CH2CH2OH
8
35
36
37
38
-CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 8
-CH(CH3)CH2OH
8
-CH(CH3)CH2OH (S)-изомер 8
-CH2CF3
Страница: 11
8
RU 2 337 095 C2
5
39
-CH2Ph ?
8
40
-CH 3
9
41
-CH(CH3)2
9
42
-CH 2CH2СН3
9
43
-циклопропил
9
44
-циклобутил
9
45
-циклопентил
9
46
-CH2CH3
9
47
-CH2CH2OH
9
48
10
-CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 9
49
50
-CH(CH3)СН2ОН
9
-CH(CH3)CH2OH (S)-изомер 9
51
-CH2CF3
9
52
-CH2Ph
9
? Ph = фенил.
15
Следующие конкретные варианты воплощени насто щего изобретени представл ют
собой соединени формулы XII:
20
25
где R 5 и e такие, как определены в таблице III, или их фармацевтически приемлема соль или их сольват.
Таблица III
30
35
Пример №
R5
е
53
-CH 3
8
54
-CH(CH3)2
8
55
-CH 2CH2CH3
8
56
-циклопропил
8
57
-циклобутил
8
58
-циклопентил
8
59
-CH2CH3
8
60
-CH2CH2OH
8
61
-CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 8
62
63
40
45
-CH(CH3)CH2OH
64
-CH2CF3
8
65
-CH2Ph ?
8
66
-CH 3
9
67
-CH(CH3)2
9
68
-CH 2CH2CH3
9
69
-циклопропил
9
70
-циклобутил
9
71
-циклопентил
9
72
-CH2CH3
9
73
-CH2CH2OH
9
74
-CH(CH3)CH2OH (R)-изомер 9
75
50
8
-CH(СН3)СН2OH (S)-изомер 8
76
-CH(CH3)CH2OH
9
-CH(CH3)CH2OH (S)-изомер 9
77
-CH2CF3
9
78
-CH2Ph
9
? Ph = фенил.
Страница: 12
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
В соединени х формул X и XI P представл ет собой амино-защитную группу. В одном
варианте P представл ет собой неустойчивую к действию кислоты амино-защитную группу
(P а). В другом варианте P выбран из бензила, 4-метоксибензила, 2,4-диметоксибензила,
дифенилметила, трифенилметила, метоксикарбонила, этоксикарбонила, третбутоксикарбонила, бензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, 9флуоренилметоксикарбонила, формила, ацетила, триметилсилила и третбутилдиметилсилила. В отдельном варианте P представл ет собой трет-бутоксикарбонил.
В соединени х формулы XI L представл ет собой удал емую группу. В одном варианте
L представл ет собой хлор, бром или иод. В другом варианте L представл ет собой
метансульфонилокси (мезилат) или п-толуолсульфонилокси (тозилат). В отдельном
варианте L представл ет собой п-толуолсульфонилокси.
В одном варианте R f представл ет собой метил или этил. В другом варианте обе
группы R f соединены вместе, образу -(CH2)2- или -(CH2)3-.
Конкретными соединени ми формулы X, представл ющими интерес, вл ютс :
2-[(S)-1-(8-N-бензил-N-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид; и
2-{(S)-1-[8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамид.
Конкретными соединени ми формулы XI, представл ющими интерес, вл ютс :
8-(N-бензил-N-метиламино)октан-1-ол;
8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октан-1-ол; и
8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октиловый эфир толуол-4-сульфокислоты.
Определени При описании соединений, композиций, способов и процессов по данному изобретению
нижеуказанные термины имеют нижеследующие значени , если не оговорено противное.
Термин "алкил" означает одновалентную насыщенную углеводородную группу, котора может быть пр мой (линейной) или разветвленной. Если не определено иначе, такие
алкильные группы обычно содержат от 1 до 10 углеродных атомов. Типичные алкильные
группы включают, в качестве примера, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, вторбутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил и т.п.
Термин "алкилен" означает двухвалентную насыщенную углеводородную группу,
котора может быть пр мой или разветвленной. Если не оговорено иначе, такие
алкиленовые группы обычно содержат от 1 до 10 углеродных атомов. Типичные
алкиленовые группы включают, в качестве примера, метилен, этан-1,2-диил ("этилен"),
пропан-1,2-диил, пропан-1,3-диил, бутан-1,4-диил, пентан-1,5-диил и т.п.
Термин "алкенил" означает одновалентную ненасыщенную углеводородную группу,
котора может быть пр мой или разветвленной и котора имеет, по крайней мере, одну, и
обычно 1, 2 или 3, углерод-углеродных двойных св зей. Если не определено иначе, такие
алкенильные группы обычно содержат от 2 до 10 углеродных атомов. Типичные
алкенильные группы включают, в качестве примера, этенил, н-пропенил, изопропенил, нбут-2-енил, н-гекс-3-енил и т.п.
Термин "алкинил" означает одновалентную ненасыщенную углеводородную группу,
котора может быть пр мой или разветвленной и котора имеет, по крайней мере, одну, и
обычно 1, 2 или 3, углерод-углеродных тройных св зей. Если не оговорено иначе, такие
алкинильные группы обычно содержат от 2 до 10 углеродных атомов. Типичные
алкинильные группы включают, в качестве примера, этинил, н-пропинил, н-бут-2-инил, нгекс-3-инил и т.п.
Термин "арил" означает одновалентный ароматический углеводород, имеющий одно
кольцо (т.е. фенил) или конденсированные кольца (т.е. нафталин). Если не оговорено
иначе, такие арильные группы обычно содержат от 6 до 10 углеродных кольцевых атомов.
Типичные арильные группы включают, в качестве примера, фенил и нафталин-1-ил,
нафталин-2-ил и т.п.
Термин "циклоалкил" означает одновалентную насыщенную карбоциклическую
углеводородную группу. Если не оговорено иначе, такие циклоалкильные группы обычно
Страница: 13
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
содержат от 3 до 10 углеродных атомов. Типичные циклоалкильные группы включают, в
качестве примера, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п.
Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром и иод.
Термин "гетероарил" означает одновалентную ароматическую группу, имеющую одно
кольцо или два конденсированных кольца и содержащую в кольце, по крайней мере, один
гетероатом (обычно от 1 до 3 гетероатомов), выбранный из азота, кислорода или серы.
Если не оговорено иначе, такие гетероарильные группы обычно содержат, суммарно, от 5
до 10 атомов в кольце. Типичные гетероарильные группы включают, в качестве примера,
одновалентные группы пиррола, имидазола, тиазола, оксазола, фурана, тиофена,
триазола, пиразола, изоксазола, изотиазола, пиридина, пиразина, пиридазина,
пиримидина, триазина, индола, бензофурана, бензотиофена, бензимидазола, бензтиазола,
хинолина, изохинолина, хиназолина, хиноксалина и т.п., где точка присоединени находитс на любом доступном атоме углерода или азота кольца.
Термин "гетероциклил" или "гетероциклическа группа" означает одновалентную
насыщенную или ненасыщенную (неароматическую) группу, имеющую одно кольцо или
несколько конденсированных колец и содержащую в кольце, по крайней мере, один
гетероатом (обычно от 1 до 3 гетероатомов), выбранный из азота, кислорода или серы.
Если не оговорено иначе, такие гетероциклические группы обычно содержат, суммарно, от
2 до 9 атомов в кольце. Типичные гетероциклические группы включают, в качестве
примера, одновалентные группы пирролидина, имидазолидина, пиразолидина, пиперидина,
1,4-диоксана, морфолина, тиоморфолина, пиперазина, 3-пирролина и т.п., где точка
присоединени находитс на любом доступном атоме углерода или азота кольца.
Термин "фармацевтически приемлема соль" означает соль, котора приемлема дл введени пациенту, как, например, млекопитающему (например, соли, вл ющиес допустимо безопасными дл данной схемы приема лекарственного средства). Такие соли
можно получить из фармацевтически приемлемых неорганических или органических
оснований и из фармацевтически приемлемых неорганических или органических кислот.
Соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических оснований, включают
соли аммони , кальци , меди, железные (содержащие трехвалентное железо), железистые
(содержащие двухвалентное железо), лити , магни , марганцовые (содержащие
трехвалентный марганец), марганцовистые (содержащие двухвалентный марганец), кали ,
натри , цинка и т.п. Конкретными сол ми, представл ющими интерес, вл ютс соли
аммони , кальци , магни , кали и натри . Соли, полученные из фармацевтически
приемлемых органических оснований, включают соли первичного, вторичного и третичного
аминов, включа замещенные амины, циклические амины, амины природного
происхождени и т.п., такие как соли аргинина, бетаина, кофеина, холина, N,N'дибензилэтилендиамина, диэтиламина, 2-диэтиламиноэтанола, 2-диметиламиноэтанола,
этаноламина, этилендиамина, N-этилморфолина, N-этилпиперидина, глюкамина,
глюкозамина, гистидина, гидрабамина, изопропиламина, лизина, метилглюкамина,
морфолина, пиперазина, пиперадина, полиаминовых смол, прокаина, пуринов, теобромина,
триэтиламина, триметиламина, трипропиламина, трометамина и т.п. Соли, полученные из
фармацевтически приемлемых кислот, включают соли уксусной, аскорбиновой,
бензолсульфоновой, бензойной, камфорсульфоновой, лимонной, этансульфоновой,
edisylic, фумаровой, глюконовой, глюкуроновой, глутаминовой, гиппуровой,
бромистоводородной, хлористоводородной, изэтионовой, молочной, лактобионовой,
малеиновой, блочной, миндальной, метансульфоновой, слизевой, нафталинсульфоновой,
нафталин-1,5-дисульфоновой, нафталин-2,6-дисульфоновой, никотиновой, азотной,
памовой, пантотеновой, фосфорной, нтарной, серной, винной, п-толуолсульфоновой,
ксинафовой и т.п. Конкретными сол ми, представл ющими интерес, вл ютс соли
лимонной, бромистоводородной, хлористоводородной, изэтиновой, малеиновой,
фосфорной, серной и винной кислот.
Термин "его соль" означает соединение, полученное в результате замены водорода
кислоты на катион, такой как катион металла или органический катион и т.п.
Страница: 14
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Предпочтительно, соль представл ет собой фармацевтически приемлемую соль, хот это
не требуетс дл солей промежуточных соединений, которые не предназначаютс дл введени пациенту.
Термин "сольват" означает комплекс или агрегат, образованный одной или несколькими
молекулами растворенного вещества, т.е. соединени формулы I или его фармацевтически
приемлемой соли, и одной или несколькими молекулами растворител . Такие сольваты
обычно представл ют собой кристаллические твердые вещества, имеющие, по существу,
посто нное мол рное соотношение растворенного вещества и растворител . Этот термин
также включает клатраты, включа клатраты с водой. Типичные растворители включают, в
качестве примера, воду, метанол, этанол, изопропанол, уксусную кислоту и т.д. В тех
случа х, когда растворителем вл етс вода, образуемый сольват представл ет собой
гидрат.
Термин "бронхозащита" или "бронхозащитный" означает предотвращение, улучшение,
подавление или облегчение симптомов респираторного заболевани или нарушени . Дл определени продолжительности бронхозащиты используют модель ацетилхолининдуцируемого бронхостеноза у морской свинки, если не оговорено иначе.
Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, достаточное
дл осуществлени лечени при введении пациенту, нуждающемус в таком лечении.
Используемый здесь термин "лечение" означает лечение заболевани или клинического
состо ни (как, например, COPD или астма) у пациента, такого как млекопитающее (в
частности, человека или домашнего животного), которое включает:
(a) предотвращение возникновени заболевани или клинического состо ни , т.е.
профилактическое лечение пациента;
(b) улучшение (уменьшение интенсивности симптомов) заболевани или клинического
состо ни , т.е. ликвидаци или достижение состо ни регрессии заболевани или
клинического состо ни у пациента;
(c) подавление заболевани или клинического состо ни , т.е. замедление или
купирование развити заболевани или клинического состо ни у пациента; или
(d) облегчение симптомов заболевани или клинического состо ни у пациента.
Термин "удал ема группа" означает функциональную группу или атом, который может
быть замещен другой функциональной группой или атомом в реакции замещени , такой как
реакци нуклеофильного замещени . В качестве примера, типичные удал емые группы
включают группы хлора, брома и иода; сложноэфирные группы сульфоновых кислот, такие
как мезилат, тозилат, брозилат, нозилат и т.п.; и ацилоксигруппы, такие как ацетокси,
трифторацетокси и т.п.
Термин "его защищенные производные" означает производное определенного
соединени , в котором одна или несколько функциональных групп соединени защищены
от протекани нежелательных реакций защитной или блокирующей группой.
Функциональные группы, которые могут быть защищены, включают, в качестве примера,
группы карбоновых кислот, аминогруппы, гидроксильные группы, тиольные группы,
карбонильные группы и т.п. Типичные защитные группы дл карбоновых кислот включают
сложные эфиры (такой как п-метоксибензиловый сложный эфир), амиды и гидразиды; дл аминогрупп, карбаматы (такие как трет-бутоксикарбонил) и амиды; дл гидроксильных
групп, простые эфиры и сложные эфиры; дл тиольных групп, простые и сложные
тиоэфиры; дл карбонильных групп, ацетали и кетали; и т.п. Такие защитные группы
вл ютс общеизвестными дл специалистов в данной области техники и они описаны,
например, в T.W. Greene and G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third
Edition, Wiley, New York, 1999, и ссылках, цитируемых там.
Термин "амино-защитна группа" означает защитную группу, подход щую дл предотвращени протекани нежелательных реакций с участием аминогруппы. Типичные
амино-защитные группы включают, но не ограничиваютс ими, бензил, третбутоксикарбонил (ВОС), тритил (Tr), бензилоксикарбонил (Cbz), пметоксибензилоксикарбонил (Moz), 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), формил, ацетил,
Страница: 15
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
триметилсилил (TMS), трет-бутилдиметилсилил (TBS) и т.п. Термин "неустойчива к
кислоте амино-защитна группа" означает амино-защитную группу, которую удал ют
обработкой кислотой, включа , например, минеральную кислоту или органическую кислоту,
такую как карбонова кислота или сульфонова кислота. Типичные неустойчивые к кислоте
амино-защитные группы включают, но не ограничиваютс ими, карбаматы, такие как третбутоксикарбонил (ВОС), п-метоксибензилоксикарбонил (Moz) и т.п.
Термин "карбокси-защитна группа" означает защитную группу, подход щую дл предотвращени протекани нежелательных реакций с участием карбоксигруппы.
Типичные карбокси-защитные группы включают, но, не ограничива сь ими, сложные
эфиры, такие как метиловый, этиловый, трет-бутиловый, бензиловый (Bn), пметоксибензиловый (PMB), 9-флуоренилметиловый (Fm), триметилсилиловый (TMS), третбутилдиметилсилиловый (TBS), дифенилметиловый (бензилгидрил, DPM) и т.п.
Термин "необ зательно замещенный" означает, что конкретна группа или фрагмент,
такой как алкильна группа, фенильна группа и т.п., может быть незамещенной или
замещенной указанными заместител ми.
Общие способы синтеза
Соединени замещенного пирролидина и родственные соединени по данному
изобретению можно получить, исход из легко доступных исходных продуктов, использу нижеследующие общие способы и методики. Несмотр на то, что конкретный вариант
осуществлени насто щего изобретени может быть проиллюстрирован или описан
схемами, представленными ниже, специалистам в данной области техники должно быть
очевидно, что все варианты или аспекты данного изобретени можно осуществить,
использу способы, описанные здесь, или использу другие способы, реагенты и исходные
продукты, известные специалистам в данной области техники. Следует также иметь в
виду, что в тех случа х, когда привод тс типичные или предпочтительные услови способа (т.е. температуры реакций, времена протекани реакций, мольные соотношени реагирующих веществ, растворители, давлени и т.д.), могут быть использованы и другие
услови способа, если не оговорено иначе. Оптимальные услови проведени реакции
могут варьироватьс в зависимости от конкретных используемых реагирующих веществ
или растворителей, однако, такие услови могут быть легко определены специалистом в
данной области, использу обычные методики оптимизации процесса.
Кроме того, как очевидно дл специалистов в данной области техники, дл предотвращени протекани нежелательных реакций с участием некоторых
функциональных групп может быть необходимо или желательно использование обычных
защитных групп. Выбор подход щей защитной группы дл конкретной функциональной
группы, а также подход щих условий дл осуществлени защиты или сн ти защиты с
указанных функциональных групп общеизвестны в данной области техники. При желании,
могут быть использованы защитные группы, отличающиес от тех, которые
проиллюстрированы в способах, описанных здесь. Например, многочисленные защитные
группы и их введение и удаление описаны в T.W. Greene and G.M. Wuts, Protecting Group
in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999 и цитируемых там ссылках.
Соединени формулы I и их соли могут быть получены способом, включающим:
(а) взаимодействие соединени формулы III
45
50
с соединением формулы IV:
Страница: 16
RU 2 337 095 C2
где P 1 представл ет собой амино-защитную группу, в присутствии восстановител ;
(b) взаимодействие соединени формулы V:
5
10
с соединением формулы VI:
15
где P 2 представл ет собой амино-защитную группу, в присутствии восстановител ;
(с) взаимодействие соединени формулы VII:
20
25
30
35
40
45
50
где L 1 представл ет собой удал емую группу, с соединением формулы IV; или
(d) взаимодействие соединени формулы V с соединением формулы VIII;
где L 2 представл ет собой удал емую группу и Р 3 представл ет собой амино-защитную
группу; и затем
(е) удаление защитной группы Р 1, Р 2 или Р 3 с получением соединени формулы I или
его соли; где R 1-5 и а-е такие, как определены здесь.
Необ зательно, фармацевтически приемлемую соль соединени формулы I можно
получить непосредственно на стадии (е) или на отдельной дополнительной стадии из
продукта стадии (е).
В способе (а) Р 1 может представл ть собой любую подход щую амино-защитную группу,
такую как бензильна и т.п. Восстановитель может представл ть собой любой подход щий
восстановитель, включа металлгидридные восстановители, такие как
натрийтриацетоксиборгидрид, натрийцианоборгидрид и т.п. После завершени реакции
амино-защитна группа Р 1 может быть удалена, использу обычные способы и реагенты.
Например, бензильную защитную группу можно удалить гидрогенолизом в присутствии
катализатора, такого как палладий.
В способе (b) Р 2 может представл ть собой любую подход щую амино-защитную группу,
такую как бензил, трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 9флуоренилметоксикарбонил, трет-бутилдиметилсилил и т.п. Восстановителем может быть
любой подход щий восстановитель, включа металлгидридные восстановители, такие как
натрийтриацетоксиборгидрид, натрийцианоборгидрид и т.п. После завершени реакции
амино-защитна группа Р 2 может быть удалена, использу обычные способы и реагенты.
Например, бензильную защитную группу можно удалить гидрогенолизом в присутствии
катализатора, такого как палладий; трет-бутоксикарбонильна группа может быть удалена
обработкой кислотой, такой как хлористоводородна кислота, п-толуолсульфокислота и
Страница: 17
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
т.п.; трет-бутилдиметилсилильна группа может быть удалена обработкой источником
фторидных ионов, таким как триэтиламина тригидрофторид.
В способе (с) L 1 может представл ть собой любую подход щую удал емую группу,
включа , но не огранива сь ими, галоген, такой как хлор, бром или иод, или
сложноэфирную группу сульфокислот, такую как мезилат, тозилат и т.п.; и Р 1, така как
определено здесь.
В способе (d) L 2 может представл ть собой любую подход щую удал емую группу,
включа , но не огранива сь ими, галоген, такой как хлор, бром или иод, или
сложноэфирную группу сульфокислот, такую как мезилат, тозилат и т.п.; и Р 3 может быть
любой подход щей амино-защитной группой, такой как бензил, трет-бутоксикарбонил,
бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, трет-бутилдиметилсилил и т.п.
Восстановителем может быть любой подход щий восстановитель, включа металлгидридные восстановители, такие как натрийтриацетоксиборгидрид,
натрийцианоборгидрид и т.п. После завершени реакции амино-защитна группа Р 2 может
быть удалена, использу обычные способы и реагенты. Например, бензильную защитную
группу можно удалить гидрогенолизом в присутствии катализатора, такого как палладий;
трет-бутоксикарбонильна группа может быть удалена обработкой кислотой, такой как
хлористоводородна кислота, п-толуолсульфокислота и т.п.; трет-бутилдиметилсилильна группа может быть удалена обработкой источником фторидных ионов, таким как
триэтиламина тригидрофторид.
В конкретных вариантах способов (b) и (d) Р 2 и Р 3 представл ют собой третбутоксикарбонильную группу, которую удал ют обработкой фармацевтически приемлемой
кислотой, получа in situ фармацевтически приемлемую соль соединени формулы I.
В качестве дополнительной иллюстрации, получение типичных соединений формулы I
представлено на схеме А (где заместители и переменные, показанные на нижеследующих
схемах, имеют предусмотренные здесь определени , если не оговорено особо).
Схема А
30
35
40
45
50
Страница: 18
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Как показано на Схеме А, соединение формулы 1 сначала подвергают взаимодействию
со спиртом 2, где L 3 представл ет собой подход щую удал емую группу, такую как хлор,
бром, иод, тозил, мезил и т.п., с получением промежуточного соединени 3. Как правило,
эту реакцию провод т путем контактировани 1 с, по крайней мере, одним эквивалентом,
предпочтительно с от около 1,0 до около 1,1 эквивалентами, спирта 2 в инертном
растворителе, таком как ацетонитрил и т.п. Указанную реакцию обычно провод т в
присутствии избытка основани ; предпочтительно, в присутствии от около 2 до около 4
эквивалентов основани , такого как триалкиламин, предпочтительно триэтиламин. Как
правило, указанную реакцию провод т при температуре в диапазоне от около 0°С до около
80°С, предпочтительно от около 40°С до 50°С, в течение от около 1 до 24 часов, или до
практически полного завершени реакции. При желании, полученное промежуточное
соединение 3 очищают обычными способами, таким как хроматографи ,
перекристаллизаци и т.п.
Спирты формулы 2, используемые в этой реакции, вл ютс либо коммерчески
доступными, либо их можно получить из коммерчески доступных исходных продуктов и
Страница: 19
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
реагентов, использу общеизвестные способы. Типичные спирты формулы 2 включают, в
качестве примера, 8-хлор-1-октанол, 9-хлор-1-нонанол, 8-бром-1-октанол, 9-бром-1нонанол, 8-иод-1-октанол, 9-иод-1-нонанол и т.п.
Гидроксильную группу промежуточного соединени 3 затем окисл ют в
соответствующий альдегид, получа промежуточное соединение 4. Эту реакцию обычно
провод т, контактиру 3 с избыточным количеством подход щего окисл ющего агента. Дл этой реакции может быть использован любой окислитель, способный окисл ть
гидроксильную группу в альдегид, включа реагенты хрома (VI), такие как дипиридин
оксид хрома (VI), хлорхромат пиридини , дихромат пиридини и т.п.; активированные
диметилсульфоксидные реагенты, такие как оксалилхлорид/ДМСО, комплекс триоксид
серы-пиридин/ДМСО/триалкиламин и т.п.
Предпочтительно, указанную реакцию провод т, использу избыток комплекса триоксид
серы-пиридин и диметилсульфоксида в присутствии триалкиламина, такого как
триэтиламин, диизопропилэтиламин и т.п. Как правило, эту реакцию провод т путем
контактировани 3 с от около 2,5 до около 3,5 эквивалентами комплекса триоксид серыпиридин и избытком, предпочтительно около 10 эквивалентов, диметилсульфоксида в
присутствии избытка, предпочтительно около 5 эквивалентов, диизопропилэтиламина в
инертном растворителе, таком как дихлорметан. Эту реакцию обычно провод т при
температуре в диапазоне от около -30°С до около 0°С, предпочтительно от около -10°С до
около -20°С, в течение от около 0,25 до около 2 часов, или до практически полного
завершени реакции. Необ зательно, полученное альдегидное промежуточное
соединение 4 затем очищают, использу обычные способы, такие как хроматографи ,
перекристаллизаци и т.п.
Альтернативно, альдегидное промежуточное соединение 4 можно получить сначала
взаимодействием 1 с соединением формулы:
или
30
35
40
45
50
или
где L 4 и L 5 представл ют собой подход щие удал емые группы, такие как хлор, бром,
иод, тозил, мезил и т.п., е вл етс таким, как определено здесь, и каждый R d
представл ет собой, независимо, С1-6алкил или обе группы R d соединены вместе, образу С2-6алкилен. Впоследствии гидролиз ацетал (т.е. использование водной кислоты) или
озонолиз олефина (т.е. использование О3, с последующим разложением озонида
восстановителем, таким как триметилфосфит, диметилсульфид и т.п.) дает альдегид 4.
Затем альдегидное промежуточное соединение 4 св зывают с амином 5, получа соединение формулы 6. Как правило, эту реакцию провод т, контактиру альдегид 4 с
избытком, таким как от около 1,0 до около 1,2 эквивалента, соединени 5 в присутствии
избытка, предпочтительно от около 1,2 до около 1,5 эквивалента, подход щего
восстановител в инертном разбавителе, таком как дихлорметан. Подход щие
восстановители включают, в качестве иллюстрации, натрийтриацетоксиборгидрид,
натрийцианоборгидрид и т.п. Предпочтительно, восстановитель представл ет собой
натрийтриацетоксиборгидрид. Обычно эту реакцию провод т при температуре в диапазоне
от около 0°С до около 30°С в течение от около 6 до около 24 часов, или до практически
полного завершени реакции. Полученное соединение формулы 6, как правило, очищают,
использу обычные способы, такие как хроматографи , перекристаллизаци и т.п.
Удаление бензильной группы из 6, с использованием обычных реагентов и условий
реакции, далее дает 7. Например, гидрогенолиз 6, с использованием катализатора, такого
как палладий на углероде и/или гидроксид паллади , легко удал ет бензильную группу с
Страница: 20
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
получением 7. Обычно эту реакцию провод т, контактиру 6 с водородом при давлении в
диапазоне от около 40 до около 60 фунт/дюйм 2 в присутствии катализатора, такого как
10% палладий на углероде. Эту реакцию обычно провод т в инертном растворителе, таком
как этанол или изопропанол, при температуре окружающей среды в течение от около 12 до
около 120 часов, или до практически полного завершени реакции.
Альтернативно, альдегидное промежуточное соединение 5 может быть подвергнуто
взаимодействию с амином формулы R 5-NH2, где R 5 такой, как определен здесь, с
получением непосредственно соединени 7. Альтернативно, при желании, вместо
бензильной группы на схеме А могут быть использованы другие амино-защитные группы.
Аминовые соединени , подход щие дл использовани в описанных здесь реакци х,
вл ютс либо коммерчески доступными, либо их можно получить из коммерчески
доступных исходных продуктов и реагентов, использу общеизвестные способы. Типичные
амины, подход щие дл использовани , включают, но ими не ограничиваютс , N-метил-Nбензиламин, N-этил-N-бензиламин, метиламин, этиламин, н-пропиламин, изопропиламин,
2-гидроксиэтиламин, DL-2-амино-1-пропанол, (R)-(-)-2-амино-1-пропанол, (S)-(+)-2амино-1-пропанол, 2,2,2-трифторэтиламин, бензиламин, циклопропиламин,
циклобутиламин, циклопентиламин и т.п.
Соединени формулы 1, используемые в описанных здесь реакци х, легко получают
способами, иллюстрируемыми на схеме В.
Схема В
25
30
35
40
45
50
Как проиллюстрировано на Схеме В, дифенилацетонитрил 8 подвергают
взаимодействию с промежуточным соединением 9, где L 6 представл ет собой подход щую
удал емую группу, такую как хлор, бром, иод, тозил, мезил и т.п., и P 4 представл ет собой
амино-защитную группу, такую как бензил, 4-метоксибензил, 4-нитробензил,
Страница: 21
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
этоксикарбонил, фенилкарбонил и т.п., с получением промежуточного соединени 10.
Обычно эту реакцию провод т сначала получа анион соединени 8 контактированием 8 с
избытком, предпочтительно от около 1,4 до около 1,6 эквивалентов, сильного основани ,
такого как трет-бутоксид кали , в инертном разбавителе, таком как тетрагидрофуран,
при температуре в диапазоне от около -10°С до около 10°С в течение от около 0,5 до
около 2,0 часов. Полученный анион затем подвергают взаимодействию in situ с от около
0,95 до около 1,05 эквивалентов 9 при температуре в диапазоне от около 20°С до около
50°С в течение от около 10 до около 48 часов, или до практически полного завершени реакции. Соединени формулы 9, где L 6 представл ет собой сульфонатную
сложноэфирную удал емую группу, легко получают из соответствующего спирта, использу обычные способы и реагенты. Например, (S)-1-бензил-3-пирролидинол легко превращают в
(S)-1-бензил-3-(п-толуолсульфонилокси)пирролидин обработкой около 1,1 эквивалентами
п-толуолсульфонилхлорида и около 1,2 эквивалентами 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана
(DABCO). Другие соединени формулы 9 можно получить аналогичными способами,
использу коммерчески доступные исходные продукты и реагенты.
Затем из соединени 10 снимают защиту, использу обычные способы и реагенты,
получа соединение 11. Например, если Р 4 в соединении 10 представл ет собой
бензильную защитную группу, бензильную группу легко удал ют гидрогенолизом, использу источник водорода, такой как формиат аммони , и катализатор, такой как палладий на
углероде. Предпочтительно, эту реакцию провод т, использу гидрохлоридную или
гидробромидную соль соединени 10 или в присутствии кислоты, такой как
хлористоводородна кислота, бромистоводородна кислота, муравьина кислота, серна кислота, фосфорна кислота, п-толуолсульфокислота, уксусна кислота, щавелева кислота и т.п. Указанную реакцию гидрогенолиза можно также проводить, использу водород и катализатор в присутствии кислоты. См., например, патент США 6005119,
выданный 21 декабр 1999 N. Mori et al.
Затем нитрильную группу соединени 11 гидролизуют в соответствующий амид
(т.е. -С(О)NH2), получа соединение формулы 10. Эту реакцию, как правило, провод т
путем контактировани 11 с водной серной кислотой, предпочтительно 80% серной
кислотой, при температуре в диапазоне от около 70°С до около 100°С, предпочтительно
около 90°С, в течение от около 12 до около 36 часов, или до практически полного
завершени реакции. Как показано на схеме В, гидролиз нитрильной группы в амид может
быть также осуществлен до удалени защитной группы, с получением 13, из которого
затем может быть сн та защита с получением соединени 12.
При желании, нитрильна группа соединени 10 или 11 может быть гидролизована до
соответствующей карбоновой кислоты (т.е. -ООН), использу , например, водный гидроксид
натри , содержащий от около 6 до около 12% пероксида водорода. Затем полученную
карбоновую кислоту можно сочетать с различными аминами (т.е. R eR eNH, где Re такой,
как определен здесь) с получением замещенных амидов, использу общеизвестные
способы и реагенты.
Соединени по данному изобретению можно также получить способом,
проиллюстрированном на схеме С.
Схема С
45
50
Страница: 22
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Как показано на Схеме С, спирт 2, где L 7 представл ет собой подход щую удал емую
группу, такую как хлор, бром, иод, тозил, мезил и т.п., может быть подвергнут
взаимодействию с бензиламином 5 с получением промежуточного соединени 14.
Типично эту реакцию провод т, контактиру спирт 2 с, по крайней мере, одним
эквивалентом, предпочтительно с от около 1,0 до около 1,1 эквивалентами, бензиламина 5
в инертном растворителе, таком как ацетонитрил и т.п. Эту реакцию обычно провод т в
присутствии избытка основани ; предпочтительно, в присутствии от около 2 до около 4
эквивалентов основани , такого как триалкиламин, предпочтительно триэтиламин. Типично
эту реакцию провод т при температуре в диапазоне от около 0°С до около 80°С,
предпочтительно от около 40°С до около 60°С, в течение от около 1 до около 24 часов,
или до практически полного завершени реакции. При желании полученное промежуточное
соединение 14 легко очищают обычными способами, такими как хроматографи ,
перекристаллизаци и т.п.
Затем гидроксильную группу промежуточного соединени 14 окисл ют в
соответствующий альдегид, получа промежуточное соединение 15. Эту реакцию обычно
провод т, подверга контакту 14 с избыточным количеством подход щего окислител . В
этой реакции может быть использован любой окислитель, способный окислить
гидроксильную группу в альдегид, включа реагенты хрома (VI), такие как дипиридиноксид хрома (VI), хлорхромат пиридини , дихромат пиридини и т.п.; и активированные
диметилсульфоксидные реагенты, такие как оксалилхлорид/ДМСО, комплекс триоксид
серы-пиридин/ДМСО/триалкиламин и т.п.
Предпочтительно, эту реакцию провод т, использу избыток комплекса триоксид серыпиридин и диметилсульфоксида в присутствии триалкиламина, такого как триэтиламин,
диизопропилэтиламин и т.п. Типично эту реакцию провод т, контактиру 14 с от около
2,5 до около 3,5 эквивалентами комплекса триоксид серы-пиридин и избытком,
предпочтительно около 10 эквивалентов, диметилсульфоксида в присутствии избытка,
предпочтительно около 5 эквивалентов, диизопропилэтиламина в инертном растворителе,
таком как дихлорметан. Эту реакцию обычно провод т при температуре в диапазоне от
около -30°С до около 0°С, предпочтительно при от около -10°С до около -20°С, в течение
от около 0,25 до около 6 часов, или до практически полного завершени реакции.
Необ зательно затем полученное альдегидное промежуточное соединение 15 очищают,
использу обычные способы, такие как хроматографи , перекристаллизаци и т.п.
Затем альдегидное промежуточное соединение 15 сочетают с 1, получа соединение
формулы 6. Типично эту реакцию провод т, контактиру альдегид 15 с, по крайней мере,
приблизительно одним эквивалентом 1 в присутствии избытка, предпочтительно от около
1,2 до около 1,5 эквивалентов, подход щего восстановител в инертном растворителе,
таком как дихлорметан. Подход щие восстановители включают, в качестве иллюстрации,
натрийтриацетоксиборгидрид, натрийцианоборгидрид и т.п. Предпочтительно,
восстановитель представл ет собой натрийтриацетоксиборгидрид. Обычно эту реакцию
провод т при температуре в диапазоне от около 0°С до около 30°С в течение от около 2
Страница: 23
RU 2 337 095 C2
5
10
15
до около 24 часов, или до практически полного завершени реакции. Полученное
соединение формулы 6, как правило, очищают, использу обычные способы, такие как
хроматографи , перекристаллизаци и т.п. Затем из соединени 6 можно удалить
бензильную группу, получа 7, как обсуждено выше.
Кроме того, дл специалистов в данной области техники должно быть очевидно, что дл получени соединени формулы 7 синтетические стадии, проиллюстрированные на схемах
А, В и С, могут быть выполнены в пор дке, отличном от представленного на указанных
схемах, или использу реагенты, отличающиес от описанных. Например, вместо
окислени гидроксильной группы промежуточного соединени 3 или 14 в альдегид эти
гидроксильные группы могут быть превращены в удал емую группу, такую как хлор, бром,
иод, мезилат или тозилат, использу обычные реагенты и реакционные способы. Затем
полученную удал емую группу легко замещают амином 5 или промежуточным соединением
1, получа соединение 6.
В качестве другого примера, типичные соединени формулы I можно получить, как
проиллюстрировано на схеме D.
Схема D
20
25
30
35
40
45
50
Как показано на Схеме D, чтобы получить соединение 16, бензильную амино-защитную
группу соединени 14 можно удалить и заменить трет-бутоксикарбонильной аминозащитной группой, использу обычные способы и реагенты (т.е. гидрогенолиз, чтобы
удалить бензильную группу, и ди-трет-бутилдикарбонат, чтобы получить третбутоксикарбонильную группу).
Затем гидроксильную группу соединени 16 превращают в удал емую группу, такую как
хлор, бром, иод, мезилат или тозилат, использу обычные реагенты и реакционные
способы, получа соединение формулы 17. Например, гидроксильную группу превращают в
тозилатную удал емую группу реакцией с тозилхлоридом (п-толуолсульфонилхлорид) в
присутствии подход щего основани , включа третичные амины, такие как 1,4диазабицикло[2.2.2]октан. Эту реакцию, как правило, провод т в инертном растворителе,
таком как метил-трет-бутиловый эфир, при температуре в диапазоне от около 0°С до
Страница: 24
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
около 30°С в течение от 0,5 до 6 часов, или до практически полного завершени реакции.
Затем удал емую группу соединени 17 замен ют соединением формулы 1, получа соединение формулы 18. Эту реакцию, как правило, провод т, контактиру 17 с от около
0,95 до около 1,1 мол рными эквивалентами 1 в присутствии третичного амина, такого
как диизопропилэтиламин. Реакцию обычно провод т в инертном растворителе, таком как
ацетонитрил, при температуре в диапазоне от около 25°С до около 100°С в течение от
около 2 до около 12 часов, или до практически полного завершени реакции.
Затем трет-бутоксикарбонильную амино-защитную группу соединени 18 удал ют,
использу обычные реагенты и услови реакции, получа соединение формулы 7 или его
соль. Например, трет-бутоксикарбонильную амино-защитную группу можно легко удалить
обработкой кислотой, такой как хлористоводородна кислота, трифторуксусна кислота, птолуолсульфокислота и т.п.
В одном варианте, соединение формулы 18 подвергают контактированию с
фармацевтически приемлемой кислотой, получа сразу фармацевтически приемлемую
соль соединени 7, без выделени свободного основани . Например, соединение 18
может быть введено в контакт с нафталин-1,5-дисульфокислотой с получением соли
нафталин-1,5-дисульфокислоты соединени 7. Эту реакцию, как правило, провод т,
контактиру 18 с от около 1 до около 3 эквивалентами, как, например, 2 эквивалентами,
нафталин-1,5-дисульфокислоты в инертном растворителе, таком как изопропанол. В одном
варианте, дл получени кристаллической соли нафталин-1,5-дисульфокислоты в качестве
растворител используют изопропанол, содержащий от около 2 до около 10%, по объему,
воды.
Дополнительные детали в отношении конкретных условий реакций и других способов
получени типичных соединений по данному изобретению или промежуточных соединений,
используемых дл их синтеза, описаны в примерах, приведенных ниже.
Фармацевтические композиции
Соединени замещенного пирролидина и родственные соединени по данному
изобретению обычно ввод т пациенту в форме фармацевтической композиции. Такие
фармацевтические композиции могут вводитьс пациенту любым приемлемым путем
введени , включа , но не ограничива сь им, пероральный, ингал ционный, назальный,
местный (включа трансдермальный) и парентеральный способы введени .
Должно быть очевидно, что люба форма соединений по данному изобретению (т.е.
свободное основание, фармацевтически приемлема соль или сольват), котора вл етс подход щей дл конкретного способа введени , может быть использована в
фармацевтических композици х, обсуждаемых здесь.
Соответственно, в одном из составл ющих аспектов, данное изобретение касаетс фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель или
эксципиент и терапевтически эффективное количество соединени формулы I или II, или
его фармацевтически приемлемой соли. Необ зательно, при желании, указанные
фармацевтические композиции могут содержать другие терапевтические и/или
составл ющие композицию (вспомогательные) средства.
Фармацевтические композиции по данному изобретению обычно содержат
терапевтически эффективное количество соединени по данному изобретению или его
фармацевтически приемлемой соли. Обычно, такие фармацевтические композиции могут
содержать от около 0,01 до около 95 мас.% активного средства; включа , от около 0,01
до около 30 мас.%; как, например, от около 0,01 до около 10 мас.% активного средства.
В фармацевтических композици х по данному изобретению может быть использован
любой обычный носитель или эксципиент. Выбор конкретного носител или эксципиента,
или комбинаций носителей или эксципиентов обычно зависит от способа введени ,
который используют дл лечени конкретного пациента, или типа клинического состо ни ,
или болезненного состо ни . В этом отношении получение подход щей фармацевтической
композиции дл конкретного способа введени находитс в пределах квалификации
специалистов в области фармации. Кроме того, компоненты дл таких композиций
Страница: 25
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
коммерчески доступны от, например, Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178. В
качестве дополнительной иллюстрации, обычные способы получени конкретных
фармацевтических композиций изложены в Remington: The Science and Practice of
Pharmacy, 20 th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); and H.C.
Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7 th Edition,
Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Типичные примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически
приемлемых носителей, включают, но ими не ограничива сь, нижеследующие: (1) сахара,
такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и
картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; (4) порошкообразный
трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) эксципиенты, такие как масло какао
и воски дл суппозитори ; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло,
сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло;
(10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит,
маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат;
(13) агар; (14) средства буферизации, такие как гидроксид магни и гидроксид алюмини ;
(15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический физиологический
раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) растворы фосфатного буфера;
(21) сжатые газы-вытеснители, такие как хлорфторуглероды и гидрофторуглероды; и (22)
другие нетоксические совместимые вещества, используемые в фармацевтических
композици х.
Фармацевтические композиции согласно данному изобретению обычно получают
тщательным смешением до гомогенного состо ни или компаундированием соединени по
данному изобретению с фармацевтически приемлемым носителем и одним или
несколькими необ зательными компонентами. Если это необходимо или по желанию,
полученна однородна компаундированна смесь затем может быть подвергнута
формованию или загрузке в таблетки, капсулы, пилюли, фильтрующие (поглотительные)
коробки, картриджи, дозаторы и т.п., использу обычные способы и оборудование.
В одном варианте, фармацевтические композиции по данному изобретению вл ютс подход щими дл введени ингал цией. Подход щие фармацевтические композиции дл ингал ционного введени обычно наход тс в форме аэрозол или порошка. Такие
композиции обычно ввод т, использу общеизвестные устройства дл доставки, такие как
распылитель-ингал тор, ингал тор с отмеренной дозой (MDI), ингал тор сухого порошка
(DPI) или другое устройство доставки подобного типа.
В конкретном варианте данного изобретени фармацевтическую композицию,
содержащую активное средство, ввод т ингал цией, использу распылитель-ингал тор.
Такие распылители-ингал торы обычно создают высокоскоростной поток воздуха, который
вынуждает фармацевтическую композицию, содержащую активное средство, распыл тьс в виде аэрозол , который поступает в дыхательные пути пациента. Соответственно, при
составлении композиции дл использовани в распылителе-ингал торе активное средство,
как правило, раствор ют в подход щем носителе с получением раствора. Альтернативно,
активное средство может быть подвергнуто тонкому измельчению и смешению с
подход щим носителем с образованием суспензии тонкоизмельченных частиц вдыхаемого
размера, где термин "тонкоизмельченный материал" обычно подразумевает наличие около
90% или больше частиц с диаметром меньше чем около 10 мкм. Подход щие
распыл ющие устройства обеспечены коммерчески, например PARI GmbH (Stamberg,
Германи ). Другие распыл ющие устройства раскрыты, например, в патенте США 6123068
и WO 97/12687.
Типична фармацевтическа композици дл использовани в распылителе-ингал торе
включает изотонический водный солевой раствор, содержащий от около 0,05 мкг/мл до
около 10 мг/мл соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или его
сольвата, или его стереоизомера. В одном варианте, рН этой композиции находитс в
Страница: 26
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
диапазоне от около 4 до около 6. В конкретном варианте, указанную композицию
необ зательно подвергают буферизации до рН около 5, использу цитратный буфер.
В другом конкретном варианте данного изобретени фармацевтическую композицию,
содержащую активное средство, ввод т ингал цией, использу ингал тор сухого порошка.
Такие ингал торы сухого порошка обычно содержат активное средство в виде свободнотекучего порошка, который диспергируетс в потоке воздуха во врем вдоха пациента.
Дл получени свободно-текучего порошка активное средство обычно объедин ют в состав
с подход щим эксципиентом, таким как лактоза или крахмал.
Типична фармацевтическа композици дл использовани в ингал торе сухого
порошка содержит лактозу, имеющую размер частиц от около 1 мкм до около 100 мкм, и
тонкоизмельченные частицы соединени формулы I или его фармацевтически приемлемой
соли, или его сольвата, или его стереоизомера.
Така композици сухого порошка может быть приготовлена, например, объединением
лактозы с активным средством и затем сухим смешением компонентов. Альтернативно, при
желании, активное средство можно формулировать без эксципиента. Затем
фармацевтическую композицию обычно загружают в дозатор сухого порошка, или в
картриджи, или капсулы дл ингал ции дл последующего их использовани в устройствах
доставки сухого порошка.
Примеры устройств дл доставки сухого порошка ингал цией включают Diskhaler
(GlaxoSmithKline, Research Triangle Park, NC) (см., например, патент США 5035237);
Diskus (GlaxoSmithKline) (см., например, патент США 6378519; Turbuhaler (AstraZeneca,
Wilmington, DE) (см., например, патент США 4524769); и Rotahaler (GlaxoSmithKline)
(см., например, патент США 4353365). Дополнительные примеры подход щих устройств
DPI описаны в патентах США 5415162, 5239993 и 5715810 и ссылках, цитированных там.
В очередном конкретном варианте данного изобретени фармацевтическую
композицию, содержащую активное средство, ввод т ингал цией, использу ингал тор с
отмеренной дозой. Такие ингал торы с отмеренной дозой обычно поставл ют отмеренное
количество активного средства или его фармацевтически приемлемой соли, использу сжатый газ-вытеснитель. Соответственно, фармацевтические композиции, вводимые с
использованием ингал тора с отмеренной дозой, обычно содержат раствор или суспензию
активного средства в сжиженном газе-вытеснителе. Может быть использован любой
подход щий сжиженный газ-вытеснитель, включа хлорфторуглероды, такой как CCl3F, и
гидрофторалканы (HFA), такие как 1,1,1,2-тетрафторэтан (HFA 134a) и 1,1,1,2,3,3,3гептафтор-н-пропан, (HFA 227). Из-за опасений по воздействию хлорфторуглеродов на
озоновый слой обычно отдаетс предпочтение препаратам, содержащим HFA.
Дополнительные необ зательные компоненты препаратов с HFA включают
сорастворители, такие как этанол или пентан, и поверхностно-активные вещества, такие
как сорбиттриолеат, олеинова кислота, лецитин и глицерин. См., например, патент США
5225183, EP 0717987 A2 и WO 92/22286.
Типична фармацевтическа композици дл использовани в ингал торе с отмеренной
дозой содержит от около 0,01% до около 5 мас.% соединени формулы I, или его
фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата, или его стереоизомера; от около 0%
до около 20 мас.% этанола; и от около 0% до около 5 мас.% поверхностно-активного
вещества; при этом остаток составл ет газ-вытеснитель HFA.
Такие композиции обычно получают, добавл охлажденный или наход щийс под
давлением гидрофторалкан в подход щий контейнер, содержащий активное средство,
этанол (если присутствует) и поверхностно-активное вещество (если присутствует). Дл получени суспензии активное средство подвергают тонкому измельчению и затем
объедин ют с газом-вытеснителем. Затем состав загружают в аэрозольную фильтрующую
(поглотительную) коробку, котора вл етс частью устройства-ингал тора с отмеренной
дозой. Примеры устройств-ингал торов с отмеренной дозой, разработанных специально
дл использовани с газами-вытеснител ми типа HFA, представлены в патентах США
6006745 и 6143277. Альтернативно, композицию в виде суспензии можно получить
Страница: 27
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
распылительной сушкой сло поверхностно-активного вещества на поверхности
тонкоизмельченных частиц активного средства. См., например, WO 99/53901 и WO
00/61108.
В качестве дополнительных примеров способов получени вдыхаемых частиц и
композиций (препаратов) и устройств дл дозировани ингал цией см. патенты США
6268533, 5983956, 5874063 и 6221398, и WO 99/55319 и WO 00/30614.
В другом варианте, фармацевтические композиции по данному изобретению вл ютс подход щими дл перорального введени . Подход щие фармацевтические композиции
дл перорального введени могут быть в форме капсул, таблеток, пилюль, леденцов,
саше, драже, порошков, гранул; или в виде раствора или суспензии в водной или
неводной жидкости; или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле; или в
виде эликсира или сиропа; и т.п.; при этом кажда форма содержит заранее
установленное количество соединени по данному изобретению в качестве активного
компонента.
В случае предназначени дл перорального введени в твердой дозированной форме
(т.е. капсулы, таблетки, пилюли и т.п.), фармацевтические композиции согласно данному
изобретению обычно содержат в качестве активного компонента соединение по данному
изобретению и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, таких как
цитрат натри и вторичный кислый фосфат кальци . Необ зательно или альтернативно,
указанные твердые дозированные формы могут также содержать: (1) наполнители или
разбавители, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниева кислота; (2) св зующие, такие как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин,
поливинилпирролидон, сахароза и/или акаци ; (3) увлажнители, такие как глицерин; (4)
дезинтегрирующие средства, такие как агар-агар, карбонат кальци , картофельный или
маниоковый крахмал, альгинова кислота, некоторые силикаты и/или карбонат натри ; (5)
ингибиторы растворобразовани , такой как парафин; (6) ускорители абсорбции
(всасывани ), такие как соединени четвертичного аммони ; (7) смачивающие вещества,
такие как цетиловый спирт и/или глицеролмоностеарат; (8) абсорбенты, такие как каолин
и/или бентонитова глина; (9) лубриканты, такие как тальк, стеарат кальци , стеарат
магни , твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натри , и/или их смеси; (10)
красители; и (11) средства буферизации.
В фармацевтических композици х согласно данному изобретению могут также
присутствовать средства, способствующие высвобождению, смачивающие средства,
средства дл покрыти , подслащивающие вещества, вкусовые вещества и ароматизаторы
(отдушки), консерванты и антиоксиданты. Примеры фармацевтически приемлемых
антиоксидантов включают: (1) растворимые в воде антиоксиданты, такие как аскорбинова кислота, цистеин гидрохлорид, бисульфат натри , метабисульфат натри , сульфит натри и т.п.; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат,
бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лецитин,
пропилгаллат, альфа-токоферол и т.п.; и (3) металл-хелатирующие средства, такие как
лимонна кислота, этилендиаминтетрауксусна кислота (EDDA), сорбит, винна кислота,
фосфорна кислота и т.п. Средства дл покрыти таблеток, капсул, пилюль и т.п.
включают вещества, используемые дл энтеросолюбильных покрытий, такие как фталат
ацетилцеллюлозы (CAP), поливинилацетатфталат (PAP), фталат
гидроксипропилметилцеллюлозы, сополимеры метакрилова кислота-сложный эфир
метакриловой кислоты, тримеллитат ацетатцеллюлозы (CAT),
карбоксиметилэтилцеллюлозу (CMEC), ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы
(HPMCAS) и т.п.
При желании, фармацевтические композиции согласно данному изобретению могут быть
также составлены в препарат, обеспечивающий пролонгированное или контролируемое
высвобождение активного компонента, использу , в качестве примера,
гидроксипропилметилцеллюлозу в различных пропорци х; или другие полимерные
матрицы, липосомы и/или микросферы.
Страница: 28
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Кроме того, фармацевтические композиции согласно насто щему изобретению могут
необ зательно содержать контрастные средства и могут быть составлены в препарат таким
образом, чтобы высвобождать только активный компонент, или предпочтительно, в
определенной части желудочно-кишечного тракта, необ зательно, прологированным
образом. Примеры таких удерживающих композиций, которые могут быть использованы,
включают полимерные материалы и воски. Активный компонент может также находитьс в
микроинкапсулированной форме, если это целесообразно, с одним или несколькими
вышеописанными эксципиентами.
Подход щие жидкие дозированные формы дл перорального введени включают, в
качестве иллюстрации, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии,
растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Такие жидкие дозированные формы обычно
включают активный компонент и инертный разбавитель, такой как, например, вода, или
другие растворители, солюбилизирующие средства и эмульгаторы, такие как этиловый
спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт,
бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (главным образом,
хлопковое, арахисовое, кукурузное, проростков сем н, оливковое, касторовое и
кунжутное масла), глицерин, фурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры
жирных кислот и сорбита, и их смеси. Суспензии, помимо активного компонента, могут
содержать суспендирующие средства, такие как, например, этоксилированные
изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана,
микрокристаллическа целлюлоза, метагидроксид алюмини , бентонит, агар-агар и
трагакант, и их смеси.
В случае предназначени дл перорального введени фармацевтические композиции по
данному изобретению предпочтительно упаковывают в единичную дозированную форму.
Термин "единична дозированна форма" означает физически дискретную единицу,
подход щую дл дозировани пациенту, т.е. кажда единица содержит заранее
установленное количество активного средства, рассчитанное так, чтобы обеспечить
про вление желательного терапевтического действи , либо в виде одной единицы, либо в
комбинации с одной или несколькими дополнительными единицами. Например, такими
единичными дозированными формами могут быть капсулы, таблетки, пилюли и т.п.
Соединени согласно данному изобретению можно также вводить трансдермально,
использу известные системы и эксципиенты дл трансдермальной доставки. Например,
соединение по данному изобретению может быть смешано с усилител ми проникновени ,
такими как пропиленгликоль, полиэтиленгликольмонолаурат, азациклоалкан-2-оны и т.п.,
и включены в пластырь или другую подобную систему доставки. При желании, в таких
трансдермальных композици х могут быть использованы дополнительные эксципиенты,
включа гелеобразующие средства, эмульгаторы и буферы.
Фармацевтические композиции согласно данному изобретению могут дополнительно
содержать другие терапевтические средства, которые ввод т совместно с соединением
формулы I, или его фармацевтически приемлемой солью, или его сольватом, или его
стереоизомером. Например, фармацевтические композиции согласно данному
изобретению могут дополнительно включать одно или несколько терапевтических средств,
выбранных из агонистов ? 2-адренергических рецепторов, противовоспалительных средств
(например, кортикостероиды и нестероидные противовоспалительные средства (NSAID)),
других антагонистов мускариновых рецепторов (т.е. антихолинергические средства),
антиинфекционых средств (например, антибиотики или противовирусные средства) и
антигистаминов. Другие терапевтические средства могут быть использованы в форме
фармацевтически приемлемых солей или сольватов. Кроме того, если это целесообразно,
другие терапевтические средства могут быть использованы в виде оптически чистых
стереоизомеров.
Типичные агонисты ?2-адренергических рецепторов, которые могут быть использованы в
комбинации с соединени ми по данному изобретению, включают, но не ограничива сь ими,
салметерол, салбутамол, формотерол, салмефамол, фенотерол, тербуталин, албутерол,
Страница: 29
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
изоэтарин, метапротеренол, битолтерол, пирбутерол, левалбутерол и т.п., или их
фармацевтически приемлемые соли. Другие агонисты ?2-адренергических рецепторов,
которые могут быть использованы в комбинации с соединени ми по данному изобретению,
включают, но не ограничиваютс ими, 3-(4-{[6-({(2R)-2-гидрокси-2-[4-гидрокси-3(гидроксиметил)фенил]этил}мино)гексил]окси}утил)бензолсульфонамид и 3-(-3-{[7-({(2R)2-гидрокси-2-[4-гидрокси-3-(гидроксиметил)фенил]этил}мино)гептил]окси}
ропил)бензолсульфонамид и родственные соединени , раскрытые в WO 02/066422,
опубликованной 29 августа 2002; 3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-гидрокси-2-[4-гидрокси-3(гидроксиметил)фенил]этил}мино)гексил]окси}утил)фенил]имидазолидин-2,4-дион и
родственные соединени , раскрытые в WO 02/070490, опубликованной 12 сент бр 2002;
3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(формиламино)-4-гидроксифенил]-2-гидроксиэтил}мино)гексил]окси}
утил)бензолсульфонамид, 3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(формиламино)-4-гидроксифенил]-2гидроксиэтил}мино)гексил]окси}утил)бензолсульфонамид, 3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3(формиламино)-4-гидроксифенил]-2-гидроксиэтил}мино)гексил]окси}
утил)бензолсульфонамид, N-(трет-бутил)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(формиламино)-4гидроксифенил]-2-гидроксиэтил}мино)гексил]окси}бутил)бензолсульфонамид, N-(третбутил)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(формиламино)-4-гидроксифенил]-2-гидроксиэтил}мино)гексил]
окси}утил)бензолсульфонамид, N-(трет-бутил)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(формиламино)-4гидроксифенил]-2-гидроксиэтил}мино)гексил]окси}утил)бензолсульфонамид и родственные
соединени , раскрытые в WO 02/076933, опубликованной 3 окт бр 2002; 4-{(1R)-2-[(6-{2[(2,6-дихлорбензил)окси]этокси}ексил)амино]-1-гидроксиэтил}-2-(гидроксиметил)фенол и
родственные соединени , раскрытые в WO 03/024439, опубликованной 27 марта 2003; N-{2[4-((R)-2-гидрокси-2-фенилэтиламино)фенил]этил}-(R)-2-гидрокси-2-(3-формамидо-4гидроксифенил)этиламин и родственные соединени , раскрытые в патенте США 6576793
B1, выданном 10 июн 2003; N-{2-[4-(3-фенил-4-метоксифенил)аминофенил]этил}-(R)-2гидрокси-2-(8-гидрокси-2(1Н)-хинолинон-5-ил)этиламин и родственные соединени ,
раскрытые в патенте США 6653323 B2, выданном 25 но бр 2003; и их фармацевтически
приемлемые соли. При использовании агонист ?2-адренергического рецептора обычно
присутствует в фармацевтической композиции в терапевтически эффективном количестве.
Типично, агонист ?2-адренергического рецептора может присутствовать в количестве,
достаточном дл получени дозы от около 0,05 мкг до около 500 мкг.
Типичные кортикостероиды, которые могут быть использованы в комбинации с
соединени ми по данному изобретению, включают, но не ограничива сь ими,
метилпреднизолон, преднизолон, дексаметазон, флутиказонпропионат, S-фторметиловый
эфир 6?,9?-дифтор-17?-[(2-фуранилкарбонил)окси]-11? -гидрокси-16?-метил-3оксоандроста-1,4-диен-17?-карботиокислоты, S-(2-оксотетрагидрофуран-3S-ил)овый эфир
6?,9?-дифтор-11?-гидрокси-16?-метил-3-оксо-17?-пропионилоксиандроста-1,4-диен17?-карботиокислоты, сложные эфиры беклометазона (например, 17-пропионатный
сложный эфир или 17,21-дипропионатный сложный эфир), будезонид, флунизолид,
сложные эфиры мометазона (например, фуроатный сложный эфир), триамцинолонацетонид, рофлепонид, циклезонид, бутиксокорт-пропионат, RPR-106541, ST-126 и т.п.,
или их фармацевтически приемлемые соли. При использовании кортикостероид обычно
присутствует в фармацевтической композиции в терапевтически эффективном количестве.
Типично, стероидное противовоспалительное средство может присутствовать в
количестве, достаточном дл получени дозы от около 0,5 мкг до около 500 мкг.
Другие подход щие комбинации включают, например, другие противовоспалительные
средства, например, NSAID (такие как кромогликат натри ; недокромил-натрий;
ингибиторы фосфодиэстеразы (PDE) (например, теофиллин, ингибиторы PDE4 или
смешанные ингибиторы (общие дл ) PDE3/PDE4); антагонисты лейкотриена (например,
монтелейкаст); ингибиторы синтеза лейкотриена; ингибиторы iNOS; ингибиторы протеаз,
такие как ингибиторы триптазы и эластазы; антагонисты бета-2 интегрина и агонисты или
антагонисты аденозинового рецептора (например, агонисты аденозина 2а); антагонисты
цитокинов (например, антагонисты хемокинов, такие как антитело к интерлейкину (?IL
Страница: 30
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
антитело), в частности, терапи антителами ?IL-4, терапи ?IL-13, или их комбинаци );
или ингибиторы синтеза цитокина.
Например, типичные ингибиторы фосфодиэстеразы-4 (PDE4) или смешанные
ингибиторы PDE3/PDE4, которые могут быть использованы в комбинации с соединени ми
по данному изобретению, включают, но ими не ограничива сь, цис-4-циано-4-(3циклопентилокси-4-метоксифенил)циклогексан-1-карбоновую кислоту, 2-карбометокси-4циано-4-(3-циклопропилметокси-4-дифторметоксифенил)циклогексан-1-он; цис-[4-циано-4(3-циклопропилметокси-4-дифторметоксифенил)циклогексан-1-ол]; цис-4-циано-4-[3(циклопентилокси)-4-метоксифенил]циклогексан-1-карбоновую кислоту и т.п., или их
фармацевтически приемлемые соли. Другие типичные ингибиторы PDE4 или смешанные
ингибиторы PDE4/PDE3 включают AWD-12-281 (elbion); NCS-613 (INSERM); D-4418
(Chiroscience and Schering-Plough); CI-1018 или PD-168787 (Pfizer); соединени бензодиоксола, раскрытые в WO 99/16766 (Kyowa Hakko); K-34 (Kyowa Hakko); V-11294A
(Napp); рофлумиласт (Byk-Gulden); соединени фталазинона, раскрытые в WO 99/47505
(Byk-Gulden); пумафентрин (Byk-Gulden, now Altana); арофиллин (Almirall-Prodesfarma);
VM554/UM565 (Vernalis); T-440 (Tanabe Seiyaku); и T2585 (Tanabe Seiyaku).
Типичные мускариновые антагонисты (т.е. антихолинергические средства), которые
могут быть использованы в комбинации с и в дополнение к соединени м по данному
изобретению, включают, но не ограничива сь ими, атропин, атропинсульфат,
атропиноксид, метилатропиннитрат, гоматропина гидробромид, гиосциамина (d, l)
гидробромид, скополамина гидробромид, ипратропийбромид, окситропийбромид,
тиотропийбромид, метантелин, пропантелинбромид, анизотропинметилбромид,
клидинийбромид, копирролат (Robinul), изопропамидиодид, мепензолатбромид,
тридигексэтилхлорид (Pathilone), гексоциклийметилсульфат, циклопентолата гидрохлорид,
тропикамид, тригексифенидила гидрохлорид, пирензепин, телензепин, AF-DX 116 и
метострамин и т.п., или их фармацевтически приемлемую соль; или, дл соединений,
перечисленных в виде соли, их альтернативную фармацевтически приемлемую соль.
Типичные антигистамины (т.е. антагонисты H1-рецепторов), которые могут быть
использованы в комбинации с соединени ми по данному изобретению, включают, но не
ограничива сь ими, этаноламины, такие как карбиноксаминмалеат, клемастинфумарат,
гидрохлорид и дименгидринат дифенилгидрамина; этилендиамины, такие как
пириламинамлеат, трипеленнамина гидрохлорид и трипеленнаминцитрат; алкиламины,
такие как хлорфенирамин и акривастин; пиперазины, такие как гидроксизина гидрохлорид,
гидроксизинпамоат, циклизина гидрохлорид, циклизинлактат, меклизина гидрохлорид и
цетиризина гидрохлорид; пиперидины, такие как астемизол, левокабастин гидрохлорид,
лоратадин или его дезкарбоэтокси-аналог, терфенадин- и фексофенадин-гидрохлорид;
азеластина гидрохлорид; и т.п., или их фармацевтически приемлемую соль; или, дл соединений, перечисленных в виде соли, их альтернативную фармацевтически
приемлемую соль.
Подход щие дозы дл других терапевтических средств, вводимых в комбинации с
соединением по данному изобретению, наход тс в диапазоне от около 0,05 мкг/день до
около 100 мг/день.
Нижеследующие композиции (препараты) иллюстрируют типичные фармацевтические
композиции по данному изобретению:
Пример композиции А
Твердые желатиновые капсулы дл перорального введени получают следующим
образом:
Компоненты
50
Количество
Соединение по изобретению
250 мг
Лактоза (высушенна распылением)
200 мг
Стеарат магни 10 мг
Типичный способ: Компоненты тщательно смешивают и затем загружают в твердую
желатиновую капсулу (460 мг композиции на капсулу).
Страница: 31
RU 2 337 095 C2
Пример композиции В
Твердые желатиновые капсулы дл перорального введени получают следующим
образом:
Компоненты
5
10
15
20
Количество
Соединение по изобретению
20 мг
Крахмал
89 мг
Микрокристаллическа целлюлоза
89 мг
Стеарат магни 2 мг
Типичный способ: Компоненты тщательно смешивают и затем пропускают через сито
U.S., размером № 45 меш, и загружают в твердую желатиновую капсулу (200 мг композиции
на капсулу).
Пример композиции С
Капсулы дл перорального введени получают следующим образом:
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
100 мг
Полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат
50 мг
Порошок крахмала
250 мг
Типичный способ: Компоненты тщательно смешивают и затем загружают в желатиновую
капсулу (300 мг композиции на капсулу).
Пример композиции D
Таблетки дл перорального введени получают следующим образом:
Компоненты
25
30
35
40
45
50
Количество
Соединение по изобретению
10 мг
Крахмал
45 мг
Микрокристаллическа целлюлоза
35 мг
Поливинилпирролидон (10 мас.% в воде)
4 мг
Натрий карбоксиметилкрахмал
4,5 мг
Стеарат магни 0,5 мг
Тальк
1 мг
Типичный способ: Соединение по изобретению, крахмал и целлюлозу пропускают через
сито U.S., размером № 45 меш, и тщательно смешивают. Раствор поливинилпирролидона
смешивают с полученными порошками и эту смесь затем пропускают через сито U.S.,
размером № 14 меш. Полученные таким образом гранулы сушат при 50-60°С и пропускают
через сито U.S., размером № 18 меш. Затем к гранулам добавл ют натрийкарбоксиметилкрахмал, стеарат магни и тальк (предварительно пропущенный через сито
U.S., размером № 60 меш). После смешени смесь подвергают прессованию на
таблетировочной машине, получа таблетку массой 100 мг.
Пример композиции Е
Таблетки дл перорального введени получают следующим образом:
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
250 мг
Микрокристаллическа целлюлоза
400 мг
Диоксид кремни коллоидный
10 мг
Стеаринова кислота
5 мг
Типичный способ: Компоненты тщательно смешивают и затем подвергают прессованию
с получением таблеток (665 мг композиции на таблетку).
Пример композиции F
Таблетки с одной насечкой дл перорального введени получают следующим образом:
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
400 мг
Кукурузный крахмал
50 мг
Натрий кроскармелоза
25 мг
Лактоза
120 мг
Стеарат магни 5 мг
Страница: 32
RU 2 337 095 C2
Типичный способ: Компоненты тщательно смешивают и прессуют с получением таблетки
с одной насечкой (600 мг композиции на таблетку).
Пример композиции G
Суспензию дл перорального введени получают следующим образом:
5
10
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
1,0 г
Фумарова кислота
0,5 г
Хлорид натри 2,0 г
Метилпарабен
0,15 г
Пропилпарабен
0,05 г
Гранулированный сахар
25,5 г
Сорбит (70% раствор)
12,85 г
Veegum k (Vanderbilt Co.)
1,0 г
Ароматизатор
0,035 мл
Красители
0,5 мг
Дистиллированна вода
дост. кол-во до 100 мл
15
Типичный способ: Компоненты смешивают, получа суспензию, содержащую 100 мг
активного компонента на 10 мл суспензии.
Пример композиции H
Сухой порошок дл введени ингал цией получают следующим образом:
20
25
30
35
40
45
50
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
0,2 мг
Лактоза
25 мг
Типичный способ: Соединение по изобретению тонко измельчают и затем смешивают с
лактозой. Эту компаундированную смесь затем загружают в желатиновый картридж дл ингал ции. Содержимое картриджа ввод т, использу порошковый ингал тор.
Пример композиции I
Композицию сухого порошка дл использовани в устройстве-ингал торе сухого порошка
получают следующим образом:
Типичный способ: Получают фармацевтическую композицию, имеющую объемное
отношение компонентов тонкоизмельченного соединени по изобретению к лактозе 1:200.
Композицию упаковывают в аппарат дл ингал ции сухого порошка, способный доставл ть
от около 10 до около 100 мкг соединени по изобретению на дозу.
Пример композиции J
Сухой порошок дл введени ингал цией через ингал тор с отмеренной дозой получают
следующим образом:
Типичный способ: Суспензию, содержащую 5 мас.% соединени по изобретению и 0,1
мас.% лецитина, получают диспергированием 10 г соединени по изобретению в виде
тонкоизмельченных частиц со средним размером меньше чем 10 мкм в растворе,
полученном из 0,2 г лецитина, растворенного в 200 мл деминерализованной воды.
Суспензию сушат распылением и полученный продукт подвергают тонкому измельчению до
частиц, имеющих средний диаметр меньше чем 1,5 мкм. Частицы загружают в картриджи с
наход щимс под давлением 1,1,1,2-тетрафторэтаном.
Пример композиции K
Фармацевтическую композицию дл использовани в ингал торе с отмеренной дозой
получают следующим образом:
Типичный способ: Суспензию, содержащую 5% соединени по изобретению, 0,5%
лецитина и 0,5% трегалозы, получают диспергированием 5 г активного компонента в виде
тонкоизмельченных частиц со средним размером меньше чем 10 мкм в коллоидном
растворе, полученном из 0,5 г трегалозы и 0,5 г лецитина, растворенных в 100 мл
деминерализованной воды. Суспензию сушат распылением и полученный продукт
подвергают тонкому измельчению до частиц, имеющих средний диаметр меньше чем 1,5
мкм. Частицы загружают в фильтрующие [поглотительные] коробки с наход щимс под
давлением 1,1,1,2-тетрафторэтаном.
Страница: 33
RU 2 337 095 C2
5
10
Пример композиции L
Фармацевтическую композицию дл использовани в распылителе-ингал торе получают
следующим образом:
Типичный способ: Водный аэрозольный состав дл использовани в распылителе
получают, раствор 0,1 мг соединени по данному изобретению в 1 мл 0,9% растворе
хлорида натри , подкисленного лимонной кислотой. Смесь перемешивают и обрабатывают
ультразвуком до тех пор, пока активный компонент не растворитс . рН раствора довод т
до значени около 5, медленно добавл NaOH.
Пример композиции M
Инъецируемую композицию получают следующим образом:
Компоненты
Количество
Соединение по изобретению
0,2 г
Раствор натрий-ацетатного буфера (0,4M)
2,0 мл
HCl (0,5н) или NaOH (0,5н.)
д.к. до pH 4
Вода (дистиллированна , стерильна )
д.к. до 20 мл
15
20
25
30
35
40
45
50
Типичный способ: Вышеуказанные компоненты смешивают и рН довод т до 4±0,5,
использу 0,5н. HCl или 0,5н. NaOH.
Полезность
Соединени замещенного пирролидина и родственные соединени по данному
изобретению вл ютс полезными в качестве антагонистов мускариновых рецепторов, и
поэтому указанные соединени используют дл лечени клинических состо ний,
опосредованных мускариновыми рецепторами, т.е. клинических состо ний, интенсивность
симптомов которых уменьшаетс лечением антагонистом мускариновых рецепторов. Такие
клинические состо ни включают, в качестве примера, нарушени функции дыхательных
путей, такие как хроническа обструктивна болезнь легких, астма, пневмосклероз,
аллергический ринит, риноре ; нарушени функции мочеполовой системы, такие как
учащенное мочеиспускание (гиперестези мочевого пузыр ) или гиперрефлекси (гиперактивность) детрузора и их симптомы; нарушени желудочно-кишечного тракта,
такие как синдром раздраженного кишечника, дивертикулез, ахалази , гиперкинез
желудочно-кишечного тракта и диаре ; сердечна аритми , така как синусова брадикарди ; болезнь Паркинсона; расстройства познавательных способностей, такие как
болезнь Альцгеймера; дисменоре ; и т.п.
В одном варианте, соединени по данному изобретению полезны дл лечени нарушений функции (тонуса) гладкой мускулатуры у млекопитающих, включа людей и их
домашних животных (например, собаки, кошки и т.д.). Такие нарушени функции гладкой
мускулатуры включают, в качестве примера, учащенное мочеиспускание, хроническую
обструктивную болезнь легких и синдром раздраженного кишечника.
При использовании дл лечени нарушений функции гладкой мускулатуры и других
состо ний, опосредованных мускариновыми рецепторами, соединени по данному
изобретению обычно ввод т перорально, ректально, парентерально или путем ингал ции в
единичной суточной дозе или в виде множественных доз в течение дн . Количество
активного средства, вводимого на дозу, или суммарное количество активного средства,
вводимого в день, обычно может быть определено лечащим врачом пациента и обычно
зависит от таких факторов, как природа и т жесть состо ни пациентов; состо ние,
подлежащее лечению, возраст и общее состо ние здоровь пациента, толерантность
пациента к активному средству, путь введени и т.п.
Обычно, подход щие дозы дл лечени нарушений функции гладкой мускулатуры и
других нарушений, опосредованных мускариновыми рецепторами, могут измен тьс от
около 0,14 мкг/кг/день до около 7 мг/кг/день активного средства; включа от около
0,15 мкг/кг/день до около 5 мг/кг/день. Дл человека со средней массой тела 70 кг это
составит от около 10 мкг в день до около 500 мг в день активного средства.
В конкретном варианте, соединени по данному изобретению полезны дл лечени нарушений дыхани , таких как COPD или астма, у млекопитающих, включа людей. При
Страница: 34
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
использовании дл лечени нарушений дыхани , соединени по данному изобретению
обычно ввод т ингал цией по схеме приема множественных доз в течение дн ,
однократной суточной дозы или одной дозы в неделю. Обычно, доза дл лечени нарушени дыхани может мен тьс от около 10 мкг/день до около 200 мкг/день.
При использовании дл лечени нарушени дыхани соединени по данному
изобретению необ зательно ввод т в комбинации с другими терапевтическими средствами,
такими как агонист ? 2-адренергического рецептора; кортикостероид, нестероидное
противовоспалительное средство, или их комбинации.
В другом варианте, соединени по данному изобретению используют дл лечени учащенного мочеиспускани . При использовании дл лечени учащенного мочеиспускани соединени по данному изобретению обычно ввод т перорально в единичной суточной
дозе или в виде множественных доз в течение дн ; предпочтительно в единичной суточной
дозе. Предпочтительно, доза дл лечени учащенного мочеиспускани обычно варьирует
от около 1,0 мг/кг до около 500 мг/день.
В очередном варианте соединени по данному изобретению используют дл лечени синдрома раздраженного кишечника. При использовании дл лечени синдрома
раздраженного кишечника соединени по данному изобретению обычно можно вводить
перорально или ректально в единичной суточной дозе или в виде множественных доз в
течение дн . Предпочтительно, доза дл лечени синдрома раздраженного кишечника
обычно варьируетс от около 1,0 мг/день до около 500 мг/день.
Так как соединени по данному изобретению вл ютс антагонистами мускариновых
рецепторов, указанные соединени также полезны в качестве инструментальных средств
дл исследовани или изучени биологических систем или образцов, имеющих
мускариновые рецепторы. Такие биологические системы или образцы могут содержать
мускариновые рецепторы M1, M2, M3, M4 и/или M5. В таких исследовани х, которые могут
выполн тьс либо in vitro, либо in vivo, может быть использована люба биологическа система или образец, имеющий мускариновые рецепторы. Типичные системы или образцы,
подход щие дл таких исследований, включают, но не ограничива сь ими, клетки,
клеточные экстракты, плазменные мембраны, тканевые образцы, млекопитающих (таких
как мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, свиньи и т.д.), и т.п.
В этом варианте биологическую систему или образец, содержащий мускариновый
рецептор, привод т в контакт с антагонизирующим мускариновый рецептор количеством
соединени по данному изобретению. Затем оценивают действие антагониста на
мускариновый рецептор, использу обычные методы и оборудование, такие как анализ
св зывани меченного радиоактивным изотопом лиганда и функциональные анализы.
Такие функциональные анализы включают лиганд-опосредованные изменени во
внутриклеточном циклическом аденозинмонофосфате (цАМФ, cAMP), лигандопосредованные изменени в активности фермента - аденилилциклазы (котора синтезирует cAMP), лиганд-опосредованные изменени во включении гуанозин 5'-О-(тио)трифосфата ([ 35S]GTP) в изолированные мембраны посредством катализируемого
рецептором обмена [ 35S]GTP на GDP, лиганд-опосредованные изменени в содержании
внутриклеточного кальци в виде свободных ионов (измеренного, например, посредством
планшет-ридера (спектрофотометр дл прочтени планшетов) с детектированием по
флуоресцентной метке или FLIPR® от Molecular Devices, Inc.). Соединение по данному
изобретению обычно антагонизирует или уменьшает активацию мускариновых рецепторов
в любом из функциональных анализов, перечисленных выше, или анализах подобной
природы. Антагонизирующее мускариновый рецептор количество соединени по данному
изобретению обычно находитс в диапазоне от 0,1 наномолей до около 100 наномолей.
Кроме того, соединени по данному изобретению могут быть использованы в качестве
инструментальных средств дл обнаружени новых соединений, которые имеют активность
антагонистов мускариновых рецепторов. В этом варианте данные по св зыванию с
мускариновым рецептором (например, определенные согласно анализам in vitro по
вытеснению радиоактивного лиганда) дл испытуемого соединени или группы испытуемых
Страница: 35
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
соединений сравнивают с данными по св зыванию с мускариновым рецептором дл соединени по данному изобретению с целью идентифицировани тех испытуемых
соединений, которые обладают приблизительно равным или превосход щим сродством к
св зыванию с мускариновым рецептором, если оно вообще имеетс . Этот аспект
изобретени включает, в отдельных вариантах, как получение данных сравнени (использу соответствующие анализы), так и анализ данных испытаний с целью
идентифицировани испытуемых соединений, представл ющих интерес.
Среди других свойств, соединени по данному изобретению, как было обнаружено,
вл ютс сильнодействующими ингибиторами активности мускариновых рецепторов M3.
Соответственно, в конкретных вариантах, данное изобретение относитс к соединением
формулы I, имеющим константу ингибировани диссоциации дл подтипа рецептора M3
меньше, чем или равную 100 нМ; или меньше чем или равную 50 нМ; или меньше чем или
равную 10 нМ (определенную согласно испытани м in vitro по вытеснению лиганда,
меченного радиоактивным изотопом).
Дополнительно, соединени по данному изобретению, как было обнаружено, обладают
удивительной и неожиданной продолжительностью бронхозащиты при введении путем
ингал ции. Соответственно, в другом конкретном варианте, данное изобретение относитс к соединени м формулы I, имеющим продолжительность бронхозащиты больше чем около
24 часов, включа от около 24 часов до около 72 часов, при введении ингал цией.
Термин "продолжительность бронхозащиты" означает отрезок времени, на прот жении
которого соединение обеспечивает бронхозащитный эффект на модели ацетилхолининдуцированного бронхостеноза у морской свинки.
Кроме того, соединени по данному изобретению, как было установлено, обладают
удивительной и неожиданной селективностью действи в отношении легких, при введении
путем ингал ции. Соответственно, в другом конкретном варианте, данное изобретение
относитс к соединени м формулы I, имеющим кажущийс показатель селективности по
отношению к легким больше чем 10 как через 1,5 часа, так и через 24 часа после
дозировани путем ингал ции. Термин "кажущийс показатель селективности по
отношению к легким" означает либо (а) отношение ID50 дл средства, подавл ющего
слюноотделение (доза, требуема дл подавлени пилокарипин-индуцированного
слюноотделени на 50%), к бронхозащитной ID50 (доза, требуема дл подавлени ацетилхолин-индуцированного бронхостеноза на 50%); или (b) отношение ID50 дл антидепрессора (доза, требуема дл подавлени метахолин-индуцированного снижени среднего артериального давлени на 50%) к бронхозащитной ID50 (доза, требуема дл подавлени ацетилхолин-индуцированного бронхостеноза на 50%).
Вышеуказанные свойства, а также полезность соединений по данному изобретению,
могут быть продемонстрированы, использу различные испытани in vitro и in vivo,
общеизвестные специалистам в данной области. Например, типичные испытани описаны
более подробно в нижеследующих примерах.
ПРИМЕРЫ
Нижеследующие синтетические и биологические примеры представлены с целью
иллюстрации данного изобретени и их не следует рассматривать как ограничивающие
каким-либо образом объем данного изобретени . В представленных ниже примерах
нижеперечисленные аббревиатуры имеют нижеследующие значени , если не оговорено
особо. Аббревиатуры, которые не приведены ниже, имеют свое общеприн тое значение.
AC
=
ACN
=
ацетонитрил
BSA
=
бычий сывороточный альбумин
BOC
=
cAMP (цАМФ) =
50
аденилилциклаза
трет-бутоксикарбонил
циклический аденозинмонофосфат
CHO
=
ичник китайского хом чка
Cpm
=
число импульсов в минуту
DCM
=
дихлорметан
DIPEA
=
диизопропилэтиламин
DME
=
диметиловый эфир этиленгликол Страница: 36
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
DMF (ДМФА) =
N,N-диметилформамид
DMSO (ДМСО) =
диметилсульфоксид
dPBS
= физиологический раствор, забуференный фосфатом Дульбекко, без CaCl2 и MgCl2
EDC
=
1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодимид гидрохлорид
EDDA
=
этилендиаминтетрауксусна кислота
EtOAc
=
Этилацетат
FBS
=
фетальна тел чь сыворотка
GDP
=
гуанозин 5'-дифосфат
HEPES
=
4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфонова кислота
hM1
=
Подтип 1 человеческих мускариновых рецепторов
hM2
=
Подтип 2 человеческих мускариновых рецепторов
hM3
=
Подтип 3 человеческих мускариновых рецепторов
hM4
=
Подтип 4 человеческих мускариновых рецепторов
hM5
=
Подтип 5 человеческих мускариновых рецепторов
HOAT
=
1-гидрокси-7-азабензотриазол
HPLC
=
высокоэффективна жидкостна хроматографи константа ингибировани диссоциации
Ki
=
MC
=
масс-спектрометри MTBE
=
простой трет-бутилметиловый эфир
[ 3H]NMS
=
l-[N-метил- 3H]скополамин метилхлорид
OIS
=
оксотреморин-индуцируемое слюноотделение
PMB
=
п-метоксибензил
PyBOP
= гексафторфосфатбензотриазол-1-илокситрипирролидинофосфони THF
=
тетрагидрофуран
TLC
=
тонкослойна хроматографи TFA
=
трифторуксусна кислота
Все температуры, сообщаемые в нижеследующих примерах, представлены в градусах
Цельси (°С), если не оговорено особо. Кроме того, если не отмечено особо, реагенты,
исходные продукты и растворители закупали у коммерческих поставщиков (таких фирм, как
Aldrich, Fluka, Sigma и т.п.) и использовали без дополнительной очистки.
Пример А
Получение 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамида
Стади А - Получение (S)-1-бензил-3-(п-толуолсульфонилокси)пирролидина
К перемешиваемому раствору (S)-1-бензил-3-пирролидинола (44,3 г, 0,25 моль) и 1,4диазабицикло[2.2.2]октана (33,7 г, 0,3 моль) в 250 мл простого трет-бутилметилового
эфира в атмосфере азота при 0°С добавл ют порци ми на прот жении 20 мин птолуолсульфонилхлорид (52,4 г, 0,275 моль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в
течение 1 ч. Баню со льдом убирают и смесь перемешивают при температуре окружающей
среды на прот жении ночи (20±5 ч). Добавл ют этилацетат (100 мл), а затем насыщенный
водный раствор бикарбоната натри (250 мл). Полученную смесь перемешивают при
температуре окружающей среды в течение 1 ч. Слои раздел ют и органический слой
промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натри (250 мл); насыщенным
водным раствором хлорида аммони (250 мл); насыщенным водным раствором хлорида
натри (250 мл); и затем сушат над сульфатом натри (80 г). Сульфат натри отфильтровывают и промывают этилацетатом (20 мл) и ра??творитель удал ют в вакууме,
получа 78,2 г указанного в заголовке промежуточного соединени в виде беловатого
твердого вещества (выход 94%; чистота 95% согласно ВЭЖХ).
Стади В - Получение (S)-1-бензил-3-(1-циано-1,1-дифенилметил)пирролидина
К перемешиваемому раствору дифенилацетонитрила (12,18 г, 61,8 ммоль) в безводном
ТГФ (120 мл) при 0°С добавл ют трет-бутоксид кали (10,60 г, 94,6 ммоль) на прот жении
5 мин. Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч. К реакционной смеси
при 0°С добавл ют (S)-1-бензил-3-(п-толуолсульфонилокси)пирролидин (20,48 г, 61,3
ммоль) одной порцией. Холодную баню убирают и реакционную смесь перемешивают в
течение от 5 до 10 мин, и в этот период времени реакционна смесь превращаетс в
коричневый гомогенный раствор. Затем реакционную смесь нагревают при 40°С на
Страница: 37
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
прот жении ночи (20±5 ч). Реакционной смеси ( рко-желта суспензи ) дают возможность
охладитьс до комнатной температуры, прежде чем добавить воду (150 мл). Затем
бульшую часть ТГФ удал ют в вакууме и добавл ют изопропилацетат (200 мл). Слои
раздел ют и органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида
аммони (150 мл); насыщенным водным раствором хлорида натри (150 мл); и затем сушат
над сульфатом натри (50 г). Сульфат натри отфильтровывают и промывают
изопропилацетатом (20 мл) и растворитель удал ют в вакууме, получа 23,88 г
указанного в заголовке промежуточного соединени в виде светло-коричневого масла
(выход >99%, чистота согласно ВЭЖХ 75%, загр зненное, в основном, избытком
дифенилацетонитрила).
Стади С - Получение (S)-3-(1-циано-1,1-дифенилметил)пирролидина
(S)-1-Бензил-3-(1-циано-1,1-дифенилметил)пирролидин раствор ют в изопропилацетате
(приблизительно 1 г/10 мл) и раствор смешивают с равным объемом 1н. водной
хлористоводородной кислоты. Полученные слои раздел ют и водный слой экстрагируют
равным объемом изопропилацетата. Органические слои объедин ют, сушат над сульфатом
натри и фильтруют. Растворитель удал ют в вакууме, получа гидрохлорид (S)-1-бензил3-(1-циано-1,1-дифенилметил)пирролидина в виде светло-желтого пенистого твердого
вещества. (Примечание: Эту гидрохлоридную соль можно также получить во врем обработки стадии В).
К перемешиваемому раствору гидрохлорида (S)-1-бензил-3-(1-циано-1,1дифенилметил)пирролидина (8,55 г, 21,98 ммоль) в метаноле (44 мл) добавл ют палладий
на углероде (1,71 г) и формиат аммони (6,93 г, 109,9 ммоль). Реакционную смесь
нагревают до 50°С при перемешивании в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до
температуры окружающей среды и добавл ют воду (20 мл). Полученную смесь фильтруют
через слой целита, промыва метанолом (20 мл). Фильтрат собирают и бульшую часть
метанола удал ют в вакууме. Остаток смешивают с изопропилацетатом (100 мл) и 10%
водным карбонатом натри (50 мл). Полученные слои раздел ют и водный слой
экстрагируют изопропилацетатом (50 мл). Органические слои объедин ют и сушат над
сульфатом натри (20 г). Сульфат натри отфильтровывают и промывают
изопропилацетатом (20 мл). Растворитель удал ют в вакууме, получа 5,75 г указанного
в заголовке промежуточного соединени в виде светло-желтого масла (выход 99,7%,
чистота согласно ВЭЖХ 71%).
Стади D - Получение 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамида
Колбу объемом 200 мл с магнитной мешалкой и входом дл азота загружают (S)-3-(1циано-1,1-дифенилметил)пирролидином (2,51 г) и 80% H2SO4 (19,2 мл; предварительно
полученна с 16 мл 96% H2SO4 и 3,2 мл H2O). Затем реакционную смесь нагревают при
90°С в течение 24 ч или до тех пор, пока, согласно ВЭЖХ, исходный продукт не будет
израсходован. Реакционной смеси дают возможность охладитьс до комнатной
температуры и затем выливают на лед (приблизительно, 50 мл по объему). К смеси
медленно, при перемешивании на лед ной бане, добавл ют 50% водный раствор
гидроксида натри до тех пор, пока не установитс рН около 12. Дихлорметан (200 мл)
добавл ют и смешивают с водным раствором, и в это врем осаждаетс сульфат натри и
его отфильтровывают. Фильтрат собирают и слои раздел ют. Водный слой экстрагируют
дихлорметаном (100 мл) и органические слои объедин ют и сушат над сульфатом натри (5 г). Сульфат натри отфильтровывают и промывают дихлорметаном (10 мл).
Растворитель удал ют в вакууме, получа неочищенный продукт в виде светло-желтого
пенистого твердого вещества (приблизительно 2,2 г, чистота согласно ВЭЖХ 86%).
Неочищенный продукт раствор ют в этаноле (18 мл) при перемешивании. К этому
раствору добавл ют теплый раствор L-винной кислоты (1,8 г) в этаноле (14 мл) и
полученную смесь перемешивают на прот жении ночи (15±5 ч). Полученный осадок
выдел ют фильтрацией, получа беловатое твердое вещество (приблизительно 3,2 г,
чистота >95% согласно ВЭЖХ). К этому твердому веществу добавл ют метанол (15 мл) и
полученную суспензию перемешивают при 70°С на прот жении ночи (15 ч). Суспензии
Страница: 38
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
дают возможность охладитьс до температуры окружающей среды и после фильтрации
получают белое твердое вещество (~2,6 г, чистота >99% согласно ВЭЖХ). К этому
твердому веществу добавл ют этилацетат (30 мл) и 1н. водный гидроксид натри (25 мл).
Указанную смесь смешивают до тех пор, пока не образуютс два отдельных сло и затем
эти слои раздел ют и водный слой экстрагируют этилацетатом (20 мл). Органические слои
объедин ют и сушат над сульфатом натри (10 г). Сульфат натри удал ют фильтрацией и
растворитель выпаривают в вакууме, получа 1,55 г указанного в заголовке
промежуточного соединени в виде беловатого пенистого твердого вещества (выход 58%;
чистота согласно ВЭЖХ >99%).
Пример 1
Синтез 2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
Стади А - Получение 8-(N-бензил-N-метиламино)октан-1-ола
8-Бром-1-октанол (25 г, 119,6 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавл ют к
перемешиваемому раствору N-бензил-N-метиламина (43,49 г, 358,9 ммоль) и карбоната
кали (49,52 г, 358,9 ммоль) в ацетонитриле (250 мл) при 35°С. Затем реакционную смесь
перемешивают при 35°С в течение 7 ч и затем охлаждают до температуры окружающей
среды. Карбонат кали отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном
давлении. Неочищенный остаток раствор ют в MTBE (400 мл) и органическую фазу
промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат над сульфатом магни .
Добавл ют N-метил-2-пирролидин и смесь концентрируют при пониженном давлении,
удал избыток N-бензил-N-метиламина. Добавл ют MTBE (400 мл) и органическую фазу
промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат над сульфатом магни ,
фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получа указанное в заголовке
промежуточное соединение в виде масла (конверси ~100%).
Данные анализа: МС m/z 250,3 (МН +).
Стади В - Получение 8-(N-бензил-N-метиламино)октанал Диметилсульфоксид (22,71 мл, 320 ммоль) и затем диизопропилэтиламин (55,74 мл, 320
ммоль) добавл ют к перемешиваемому раствору промежуточного соединени со стадии А
(20 г, 80 ммоль) в дихлорметане (200 мл) при -10°С. Реакционную смесь перемешивают
при -10°С в течение 30 мин, затем порци ми добавл ют комплекс триоксид серы-пиридин
(38 г, 240 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение еще 1 ч при -10°С и затем
добавл ют воду (200 мл). Органический слой отдел ют и промывают водой (200 мл),
насыщенным раствором соли (30 мл), сушат над сульфатом магни и затем концентрируют
при пониженном давлении. Толуол (100 мл) добавл ют и удал ют при пониженном
давлении, получа указанное в заголовке промежуточное соединение в виде масла
(конверси ~100%).
Стади С - Получение 2-[(S)-1-(8-N-бензил-N-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
Раствор промежуточного соединени со стадии В (5,95 г, 24 ммоль) и 2,2-дифенил-2(S)-пирролидин-3-илацетамида (7,4 г, 26,4 ммоль) в дихлорметане (250 мл) охлаждают
при 0°С и перемешивают в течение 10 мин. Добавл ют при 0°С, порци ми,
натрийтриацетоксиборгидрид (8,4 г, 36 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при
комнатной температуре в течение 4 ч. Добавл ют дихлорметан и органическую фазу
промывают бикарбонатом натри (2x), насыщенным раствором соли (1x), сушат над
сульфатом магни и концентрируют при пониженном давлении. Неочищенный продукт
очищают флеш хроматографией (элюент DCM/MeOH/NH4OH=90/9/1), получа 9 г
указанного в заголовке промежуточного соединени в виде масла (выход 75%).
Данные анализа: МС m/z 512,8 (МН +).
Стади D - Получение 2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
К перемешиваемому раствору промежуточного соединени со стадии С (9 г, 17,6 ммоль)
в уксусной кислоте (170 мл) в атмосфере азота добавл ют палладий на углероде (10
мас.%, 600 мг) и гидроксид паллади на углероде (20 мас.%, влажный, 600 мг).
Страница: 39
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Реакционную смесь продувают азотом три раза и затем присоедин ют к водородсодержащему баллону и выдерживают в течение 3 дней при комнатной температуре.
Реакционную смесь фильтруют через целит, промыва уксусной кислотой, и растворитель
удал ют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают препаративной ВЭЖХ,
получа 4,02 г указанного в заголовке соединени в виде его соли бис-трифторуксусной
кислоты, котора представл ет собой масло (выход 35%).
Данные анализа: МС m/z 422,2 (МН +).
Альтернативно, указанное в заголовке соединение получают следующим образом:
Стади А - Получение 8-(N-бензил-N-метиламино)октан-1-ола
Из 8-бромоктан-1-ола: В 250-мл колбу загружают N-бензил-N-метиламин (24,3 г, 200
ммоль), карбонат кали (28 г, 200 ммоль), 8-бромоктан-1-ол (14 г, 67 ммоль) и
ацетонитрил (150 мл). Эту реакционную смесь перемешивают при 35-40°С в течение 5 ч.
Затем твердое вещество отфильтровывают и фильтрат подвергают перегонке в высоком
вакууме, удал избыток N-бензил-N-метиламина, с получением масла. Остаток
раствор ют в 150 мл MTBE и промывают 15% раствором хлорида аммони (2x100 мл),
насыщенным раствором соли (100 мл), сушат над 20 г сульфата натри , фильтруют и
подвергают перегонке в вакууме, получа 13,2 г указанного в заголовке промежуточного
соединени в виде масла (выход 79%).
Из 8-хлороктан-1-ола: Двухлитровую колбу загружают бензилметиламином (270 г, 2,23
моль), карбонатом натри (157 г, 1,48 моль), иодидом натри (11,1 г, 0,074 моль), 8хлороктанолом (122 г, 0,74 моль) и ацетонитрилом (1000 мл) и полученную суспензию
перемешивают при 80°С в течение 20-30 ч. Затем реакционную смесь концентрируют до
объема около 500 мл и добавл ют воду (600 мл) и простой трет-бутилметиловый эфир
(1000 мл). Затем MTBE-слой отдел ют и промывают водой (500 мл). MTBE-раствор
концентрируют дистилл цией в вакууме, получа масло и затем масло дополнительно
концентрируют дистилл цией в высоком вакууме, удал избыток бензилметиламина.
Затем к оставшемус маслу добавл ют N-метил-2-пирролидон (300 мл) и этот раствор
концентрируют дистилл цией в высоком вакууме, получа масло. Масло раствор ют в
MTBE (1000 мл) и полученный раствор промывают водой (2x500 мл), насыщенным
раствором соли (500 мл), сушат сульфатом натри (100 г), фильтруют и концентрируют
дистилл цией, получа указанное в заголовке соединение в виде масла (178 г, выход
96%, чистота >95%).
Стади В - Получение 8-(N-бензил-N-метиламино)октан-1-илового эфира
толуолсульфокислоты
В 250-мл колбу загружают промежуточное соединение со стадии А (10 г), DABCO (6,72
г) и MTBE (100 мл). Реакционную смесь охлаждают до <10°С и добавл ют при <15°С
раствор хлорангидрида толуолсульфокислоты (9,2 г) в 60 мл MTBE. Реакционную смесь
перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем добавл ют гептан (40 мл)
и смесь фильтруют. Фильтрат перегон ют в вакууме, получа 16 г указанного в заголовке
промежуточного соединени в виде масла (выход 99%).
Стади С - Получение 2-[(S)-1-(8-N-бензил-N-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
1000-мл колбу с вводом дл азота загружают промежуточным соединением со стадии В
(16 г), 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамидом (10 г), диизопропилэтиламином
(10,3 г) и ацетонитрилом (200 мл). Реакционную смесь перемешивают при 45-50°С в
течение 20 ч и затем добавл ют уксусный ангидрид (2 г) и смесь перемешивают при
комнатной температуре в течение 2 часов. Добавл ют простой трет-бутилметиловый эфир
(300 мл) и воду (400 мл) и MTBE-слой отдел ют и промывают водой (2x150 мл) и затем
1н. HCl (1x150 мл). Водный слой отдел ют и промывают MTBE (3x100 мл) и затем
подщелачивают 27% раствором гидроксида аммони до рН >12. Затем щелочной водный
слой экстрагируют MTBE (2x200 мл) и MTBE-слой промывают водой (200 мл), насыщенным
раствором соли (200 мл), сушат над сульфатом натри (20 г), фильтруют и подвергают
перегонке, получа 16,5 г указанного в заголовке промежуточного соединени в виде
Страница: 40
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
масла (выход 90%). При желании эту реакцию можно проводить в N-метилпирролидоне в
качестве растворител . Кроме того, вместо диизопропилэтиламина можно использовать
карбонат кали или карбонат натри и в реакционную смесь необ зательно может быть
добавлен иодид натри .
Стади D - Получение 2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
250-мл колбу загружают промежуточным соединением со стадии С (24 г), палладием на
углероде (10% палладий на углероде с 50% воды, 5,3 г), изопропанолом (160 мл) и 3М
раствором HCl (30 мл). Реакционную смесь дегазируют азотом и затем подвергают
гидрированию (45-50 фунт/дюйм 2) при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем
смесь фильтруют через слой целита и фильтрат дистиллируют до объема около 50 мл.
Остаток раствор ют в 1н. HCl (100 мл) и промывают дихлорметаном (2x100 мл). Водный
слой довод т до рН >12, добавл гидроксид аммони , и затем экстрагируют, использу MTBE (2x150 мл). Затем MTBE-раствор промывают водой (100 мл), насыщенным
раствором соли (100 мл), сушат над сульфатом натри (30 г), фильтруют и дистиллируют,
получа масло, которое сушат в высоком вакууме, получа 16,5 г указанного в заголовке
соединени (выход 91%).
Альтернативно, указанное в заголовке соединение получают, как следует ниже:
Стади А - Получение 8,8-диметоксиоктанал Колбу, объемом 1 л, загружают циклооктеном (50 г), метанолом (250 мл) и
дихлорметаном (250 мл). Озон барботируют в раствор при -70°С в течение 8 ч. Затем
добавл ют толуолсульфокислоту (3 г) и реакционную смесь перемешивают при -70°С в
течение 6 ч. Затем добавл ют бикарбонат натри (20 г) и реакционную смесь
перемешивают в течение еще 2 ч при -60°С. Наконец, добавл ют диметилсульфит (56 г)
при -60°С и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч.
Образовавшеес твердое вещество отфильтровывают и фильтрат упаривают до масла.
Масло раствор ют в дихлорметане (300 мл) и промывают 1% раствором бикарбоната
натри (2x150 мл). Затем раствор дихлорметана сушат над сульфатом натри (50 г),
фильтруют и подвергают перегонке, получа 60,3 г указанного в заголовке
промежуточного соединени в виде масла (выход 71%).
Стади В - Получение 2-[(S)-1-(8-оксооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
100-мл колбу загружают 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамидом (2,8 г), 8,8диметоксиоктаналем (2,1 г) и дихлорметаном (20 мл) и эту смесь перемешивают при
комнатной температуре в течение 1 ч. Добавл ют натрийтриацетоксиборгидрид (3,18 г) и
реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 14 ч. Затем
добавл ют 5% раствор бикарбоната натри (350 мл) и эту смесь перемешивают в течение
0,5 часов. Слои раздел ют и водный слой экстрагируют дихлорметаном (20 мл).
Объединенный дихлорметановый раствор концентрируют до объема около 20 мл,
фильтруют через слой силикагел (10 г) и промывают 10% метанолом в дихлорметане (100
мл). Раствор продукта концентрируют до масла и масло раствор ют в 50 мл ацетонитрила
и перемешивают с 1% HCl (30 мл) в течение 16 ч. Смесь подщелачивают до
приблизительно рН >12, добавл 28% раствор гидроксида аммони , и затем экстрагируют
MTBE (2x100 мл). MTBE-слой промывают насыщенным раствором соли (100 мл), сушат над
сульфатом натри (10 г), фильтруют и концентрируют в вакууме, получа 3,8 г
указанного в заголовке промежуточного соединени в виде масла (выход 93%).
Стади С - Получение 2-[(S)-1-(8-N-бензил-N-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
100-мл колбу с вводом дл азота загружают промежуточным соединением со стадии В (3
г), N-бензил-N-метиламином (2,1 г) и дихлорметаном (20 мл) и эту смесь перемешивают
при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавл ют натрийтриацетоксиборгидрид (3,18
г) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 14 ч. Затем
реакционную смесь гас т добавлением 50 мл 5% HCl и полученную смесь перемешивают в
течение 0,5 часов. Слои раздел ют и водный слой промывают дихлорметаном (20 мл).
Страница: 41
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Водный слой довод т до рН >13, добавл 50% гидроксид кали , и экстрагируют MTBE
(2x100 мл). Объединенный MTBE-раствор промывают насыщенным раствором соли (100
мл), сушат сульфатом натри (10 г), фильтруют и концентрируют, получа 2,8 г
указанного в заголовке промежуточного соединени в виде масла (выход 75%). Использу методику, описанную в вышеупом нутой стадии D, указанное промежуточное соединение
превращают в указанное в заголовке соединение.
Альтернативно, указанное в заголовке соединение получают в виде соли нафталин-1,5дисульфокислоты, использу нижеследующий способ:
Стади А - Получение 8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октан-1-ола
1-литровую колбу загружают 8-(бензилметиламино)октан-1-олом (49 г, 0,20 моль),
изопропанолом (400 мл), 2н. водной хлористоводородной кислотой (100 мл) и
активированным углем (5 г, DARCO) и полученную смесь перемешивают в течение 30 мин.
Затем смесь фильтруют, удал активированный уголь, и к фильтрату добавл ют палладий
на углероде (5 г, 10% суха масса). Полученную смесь дегазируют три раза азотом и
затем дважды водородом; и затем смесь подвергают гидрированию в аппарате Парра при
давлении водорода 20-30 фунт/дюйм 2 в течение 12-24 часов. Затем смесь фильтруют
через слой целита (20 г) и концентрируют перегонкой до объема около 100 мл. Добавл ют
изопропанол (200 мл) и этот раствор снова концентрируют перегонкой в вакууме до
объема 100 мл. Эту процедуру повтор ют еще два раза, получа раствор, содержащий
гидрохлорид 8-етиламинооктан-1-ола.
1-литровую колбу загружают раствором гидрохлорида 8-етиламинооктанола в
изопропаноле, полученным выше, и триэтиламином (30,3 г, 0,30 моль) и к этой смеси
порци ми добавл ют ди-трет-бутилдикарбонат (48 г, 0,22 моль). Полученную смесь
перемешивают при комнатной температуре в течение 2-5 ч и затем смесь концентрируют
до объема около 300 мл. Добавл ют воду (200 мл) и этилацетат (400 мл) и эту смесь
перемешивают в течение 15 мин. Затем органический слой отдел ют и промывают водой
(300 мл), насыщенным раствором соли (300 мл), сушат над Na2SO4 (50 г), фильтруют и
растворитель удал ют в вакууме, получа указанное в заголовке соединение в виде
светло-желтого масла (40 г, выход 77%, чистота ~95%).
Стади В - Получение 8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октилового эфира
толуол-4-сульфокислоты
В 250-мл колбе раствор продукта со стадии А (5,2 г, 20 ммоль) и DABCO (3,13 г, 2,8
ммоль) в MTBE (30 мл) охлаждают до около 10°С и добавл ют раствор птолуолсульфонилхлорида (4,2 г, 22 ммоль) в MTBE (20 мл), поддержива температуру
реакционной смеси при 20°С или ниже. Затем полученный раствор перемешивают при
комнатной температуре в течение 2 ч. Добавл ют воду (100 мл) и смесь перемешивают в
течение 15 минут. Органический слой отдел ют, промывают водой (100 мл), насыщенным
раствором соли (100 мл) и затем концентрируют дистилл цией, получа указанное в
заголовке соединение в виде масла.
Стади С - Получение 2-{(S)-1-[8-(N-трет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октил]
пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида
В 500-мл колбу добавл ют продукт со стадии В (17,68 г, 43 ммоль), продукт из
Получени 1 (12 г, 43 ммоль), диизопропилэтиламин (16,55 г, 128 ммоль) и ацетонитрил
(100 мл). Полученную смесь перемешивают при температуре 60-65°С в течение 5-7 часов
и затем охлаждают до комнатной температуры. Растворитель выпаривают в вакууме и
добавл ют изопропилацетат (100 мл) дл растворени остатка. Полученный раствор
промывают водой (100 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (100 мл), насыщенным
раствором соли (100 мл), сушат над MgSO4 (5 г) и фильтруют, получа оранжевый раствор.
Слой силикагел (115 г, 280-400 меш) предварительно обрабатывают 400 мл
изопропилацетата, содержащего 1% триэтиламина, а затем 250 мл изопропилацетата (слой
силикагел имеет размеры, диаметр около 6,4 см и высоту около 10,2 см).
Вышеупом нутый фильтрат (около 150 мл, по объему) нагружают на предварительно
обработанный слой силикагел и элюируют изопропилацетатом (400 мл) и затем 20%
Страница: 42
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
изопропанолом в изопропилацетате (1000 мл). Фракции продукта объедин ют и
концентрируют, получа указанное в заголовке соединение в виде масла (17,16 г, выход
77%, чистота 97%).
Стади D - Получение соли нафталин-1,5-дисульфокислоты 2-[(S)-1-(8метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
В 1000-мл колбу добавл ют продукт со стадии С (9,88 г, 19 ммоль), тетрагидрат 1,5нафталиндисульфокислоты (13,69 г, 38 ммоль) и изопропанол, содержащий 3% воды (497
мл). Эту смесь нагревают до 85°С в течение от 3 до 5 часов, затем медленно охлаждают
до комнатной температуры на прот жении 4-часового периода и затем перемешивают при
комнатной температуре в течение от 12 до 24 часов. Полученное твердое вещество
отфильтровывают и промывают изопропанолом, содержащим 3% воды, по объему, (400
мл) и сушат в вакууме в течение от 10 до 15 часов при комнатной температуре, получа указанное в заголовке соединение в виде кристаллического твердого вещества (12,59 г,
выход 95%, чистота ~99%).
При желании, указанную соль можно дополнительно очистить, следу нижеследующему
способу:
В 1-литровую колбу добавл ют соль нафталин-1,5-дисульфокислоты 2-[(S)-1-(8метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида (21,4 г, 30,1 ммоль) и
изопропанол, содержащий 3% воды, по объему, (637 мл). Полученную суспензию
перемешивают при 80°С в течение 2 часов и затем медленно охлаждают до комнатной
температуры и затем перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов.
Полученную кристаллическую соль отфильтровывают, промывают изопропанолом (600 мл)
и затем сушат в вакууме и в атмосфере азота в течение 16 часов при комнатной
температуре, получа указанное в заголовке соединение в виде белого кристаллического
твердого вещества (20,4 г, выход 96%).
Пример 2
Синтез 2-[(S)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
Стади А - Получение 2-[(S)-1-(8-гидроксиоктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
8-Бром-1-октанол (2,51 г, 12 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавл ют к
перемешиваемому раствору 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамида (2,8 г, 10
ммоль) и триэтиламина (4,27 мл, 30 ммоль) в ацетонитриле (90 мл) при 40°С. Реакционную
смесь нагревают при 55°С в течение 16 часов и затем охлаждают до температуры
окружающей среды. Затем растворитель удал ют при пониженном давлении.
Неочищенный остаток раствор ют в этилацетате (100 мл) и органическую фазу промывают
насыщенным водным бикарбонатом натри (50 мл), сушат над сульфатом магни ,
фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищают
флэш-хроматографией (элюент: DCM/MeOH/NH4OH=90/9/1), получа 1,8 г указанного в
заголовке промежуточного соединени в виде масла (выход 44%).
Стади В - Получение 2-[(S)-1-(8-оксооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
Диметилсульфоксид (1,57 мл, 22,1 ммоль), а затем диизопропилэтиламин (3,85 мл, 22,1
ммоль) добавл ют к перемешиваемому раствору промежуточного соединени со стадии А
(1,8 г, 4,4 ммоль) в дихлорметане (44 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивают
при -10°С в течение 15 мин и затем добавл ют комплекс триоксид серы-пиридин (2,1 г,
13,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение еще 2 ч. при -10°С. Добавл ют
воду (50 мл) и DCM (50 мл) и органический слой отдел ют и промывают насыщенным
водным бикарбонатом натри (2x30 мл), насыщенным водным раствором сульфата меди
(II) (2x15 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл). Затем органический слой сушат над
сульфатом магни и концентрируют при пониженном давлении, получа 1,5 г указанного в
заголовке промежуточного соединени в виде масла (выход 84%).
Стади С - Получение 2-[(S)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
Промежуточное соединение со стадии В (40,6 мг, 0,1 ммоль) и изопропиламин (10,2
Страница: 43
RU 2 337 095 C2
5
мкл, 0,12 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (1 мл) перемешивают при комнатной температуре в
течение 1 ч и затем добавл ют натрийтриацетоксиборгидрид (35,1 мг, 1,5 ммоль).
Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч и затем растворитель удал ют при
пониженном давлении. Остаток очищают ВЭЖХ, получа указанное в заголовке
соединение в виде его соли бис-трифторуксусной кислоты.
Данные анализа: МС m/z 450,3 (MH +).
Использу описанные здесь способы и соответствующие исходные продукты, получают
соединени , представленные в таблице IV:
Таблица IV
10
15
Пр.
МС 1
Соединение
3 2-[(S)-1-(8-Проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
450,2
4 2-[(S)-1-(8-Циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
448,3
5 2-[(S)-1-(8-Циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
462,2
6 2-[(S)-1-(8-Циклопентиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
476,3
7 2-[(S)-1-(8-Этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
436,2
8 2-{(S)-1-[8-(2-Гидроксиэтил)аминооктил]-пирролидин-3-ил)-2,2-дифенилацетамид
452,2
9 2-{(S)-1-[8-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид 466,3
10 2-{(S)-1-[8-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
466,3
11 2-{(S)-1-[8-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид 466,2
20
12 2-{(S)-1-[8-(2,2,2-Трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
490,2
13 2-[(S)-1-(8-Бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
498,2
14 2-[(S)-1-(9-Метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
NA Й
27 2-[(R)-1-(8-Метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
422,4
1 Масс-спектрометри : m/Z (MH +).
Й NA - Не имеетс в наличии.
25
Кроме того, использу способы, описанные здесь, и соответствующие исходные
продукты, можно получить соединени , представленные в таблице V.
Таблица V
Пр.
Соединение
15 2-[(S)-1-(9-Изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
16 2-[(S)-1-(9-Проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
30
17 2-[(S)-1-(9-Циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
18 2-[(S)-1-(9-Циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
19 2-[(S)-1-(9-Циклопентил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
20 2-[(S)-1-(9-Этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
21 2-{(S)-1-[9-(2-Гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
22 2-{(S)-1-[9-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
35
23 2-{(S)-1-[9-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
24 2-{(S)-1-[9-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
25 2-{(S)-1-[9-(2,2,2-Трифторэтил)аминононил]пирролидин-3ил)-2,2-дифенилацетамид
26 2-[(S)-1-(9-Бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
28 2-[(R)-1-(8-Изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
40
29 2-[(R)-1-(8-Проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
30 2-[(R)-1-(8-Циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
31 2-[(R)-1-(8-Циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
32 2-[(R)-1-(8-Циклопентиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
33 2-[(R)-1-(8-Этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
34 2-{(R)-1-[8-(2-Гидроксиэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
45
35 2-{(R)-1-[8-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
36 2-{(R)-1-[8-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
37 2-{(R)-1-[8-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
38 2-{(R)-1-[8-(2,2,2-Трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
39 2-[(R)-1-(8-Бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
40 2-[(R)-1-(9-Метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
50
41 2-[(R)-1-(9-Изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
42 2-[(R)-1-(9-Проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
43 2-[(R)-1-(9-Циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
44 2-[(R)-1-(9-Циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
45 2-[(R)-1-(9-Циклопентиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
Страница: 44
RU 2 337 095 C2
46 2-[(R)-1-(9-Этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
47 2-{(R)-1-[9-(2-Гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
48 2-{(R)-1-[9-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
49 2-{(R)-1-[9-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
50 2-{(R)-1-[9-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
5
51 2-{(R)-1-[9-(2,2,2-Трифторэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид
52 2-[(R)-1-(9-Бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
53 2-[1-(8-Метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид
54 2-[1-(8-Изопропиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
55 2-[1-(8-Проп-1-иламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
56 2-[1-(8-Циклопропиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
10
57 2-[1-(8-Циклобутиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
58 2-[1-(8-Циклопентиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
59 2-[1-(8-Этиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
60 2-{1-[8-(2-Гидроксиэтил)аминооктил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
61 2-{1-[8-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
15
62 2-{1-[8-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
63 2-{1-[8-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
64 2-{1-[8-(2,2,2-Трифторэтил)аминооктил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
65 2-[1-(8-Бензиламинооктил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
66 2-[1-(9-Метиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
67 2-[1-(9-Изопропиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
20
68 2-[1-(9-Проп-1-иламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
69 2-[1-(9-Циклопропиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
70 2-[1-(9-Циклобутиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
71 2-[1-(9-Циклопентиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
72 2-[1-(9-Этиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
73 2-{1-[9-(2-Гидроксиэтил)аминононил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
25
74 2-{1-[9-(R)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
75 2-{1-[9-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
76 2-{1-[9-(S)-(1-Гидроксипроп-2-ил)аминононил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
77 2-{1-[9-(2,2,2-Трифторэтил)аминононил]пиперидин-4-ил}-2,2-дифенилацетамид
78 2-[1-(9-Бензиламинононил)пиперидин-4-ил]-2,2-дифенилацетамид
30
35
40
45
50
Сравнительный пример А
Синтез 2-[(S)-1-(8-диметиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
50-мл сухую круглодонную колбу загружают 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3илацетамидом (200 мг, 0,714 ммоль) и хлороформом (20 мл) и затем продувают азотом.
Добавл ют диметиламин (535 мкл, 1,071 ммоль), а затем по капл м добавл ют 1,8дибромоктан (131 мкл, 0,714 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 50°С и
перемешивают в течение примерно 60 часов. Желтую гомогенную смесь охлаждают до
комнатной температуры и экстрагируют 1,0 М водным хлористым водородом, который
затем промывают свежим хлороформом. К кислому водному слою добавл ют этилацетат и
смесь подщелачивают до рН 13 10,0 М водным гидроксидом натри . Щелочной водный
слой затем экстрагируют дополнительным этилацетатом (2x15 мл). Затем объединенные
органические слои промывают насыщенным водным хлоридом натри , сушат над
сульфатом натри , фильтруют и упаривают, получа неочищенный продукт. Неочищенный
продукт (223,0 мг) очищают препаративной ВЭЖХ и лиофилизуют, получа указанное в
заголовке соединение в виде его бис(трифторацетатной) соли, котора представл ет
собой белое гигроскопичное твердое вещество.
Данные анализа: МС m/z 436,4 (C28H41N3O+H) +; выч. 463,3.
Сравнительный пример В
Синтез 2-[(S)-1-(9-диметиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
Использу описанные здесь способы и соответствующие исходные продукты, получают
указанное в заголовке соединение в виде его бис(трифторацетатной) соли, котора представл ет собой белое гигроскопичное твердое вещество.
Данные анализа: МС m/z 450,4 (C29H43N3O+Н) +; выч. 450,3.
Сравнительный пример С
Страница: 45
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Синтез 2-{(S)-1-[8-N-(2-гидроксиэтил)-N-метиламинононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида
Использу описанные здесь способы и соответствующие исходные продукты, получают
указанное в заголовке соединение в виде его бис(трифторацетатной) соли, котора представл ет собой белое гигроскопичное твердое вещество.
Данные анализа: МС m/z 480,2; выч. 480,4.
Сравнительный пример D
Синтез 2-[(S)-1-(8-аминооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
Стади А - Получение 2-[(S)-1-(8-бромоктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
К раствору 2,2-дифенил-2-(S)-пирролидин-3-илацетамида (1,2 г, 0,004 моль) и
диизопропилэтиламина (0,74 мл, 0,004 моль) в смеси 1:1 (об./об.) ацетона и ДМФА (20
мл) добавл ют 1,8-дибромоктан (0,99 мл, 0,005 моль). Смесь нагревают до 40°С в течение
п ти часов и затем концентрируют досуха и разбавл ют дихлорметаном (20 мл).
Полученную смесь промывают насыщенным бикарбонатом натри (2x20 мл), насыщенным
раствором соли (1x20 мл), сушат над сульфатом магни , фильтруют и концентрируют.
Остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюиру смесью 5%
метанол/дихлорметан, получа 315 мг указанного в заголовке промежуточного соединени в виде белого твердого вещества (выход 15%).
Данные анализа: МС m/z 472,5 (MH +); выч. 472,2.
Стади В - Получение 2-[(S)-1-(8-ди-трет-ВОС-аминооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида
К раствору ди-трет-бутилиминодикарбоксилата (61 мг, 0,28 ммоль) в 5 мл ДМФА
при -10°С добавл ют гидрид натри (11 мг, 0,28 ммоль; 60% в минеральном масле).
Раствору дают возможность медленно нагреватьс до комнатной температуры и после
перемешивани в течение 2 часов добавл ют промежуточное соединение со стадии А
(0,095 мг, 0,20 моль) в диметилформамиде (5 мл). Затем реакционной смеси дают
возможность перемешиватьс при комнатной температуре на прот жении ночи и затем
смесь концентрируют в вакууме, разбавл ют 10 мл дихлорметана и эту смесь промывают
насыщенным бикарбонатом натри (2x10 мл), насыщенным раствором соли (1х110 мл),
сушат над сульфатом магни , фильтруют и концентрируют, получа 120 мг указанного в
заголовке промежуточного соединени в виде белого твердого вещества (выход 99%).
Данные анализа: МС m/z 608,8 (MH +); выч. 608,5.
Стади С - Получение 2-[(S)-1-(8-аминооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
К промежуточному соединению со стадии В (120 мг, 0,16 ммоль) добавл ют смесь
трифторуксусной кислоты (0,08 мл) в дихлорметане (0,720 мл) и реакционную смесь
перемешивают при комнатной температуре в течение четырех часов. Затем реакционную
смесь концентрируют досуха в вакууме, разбавл ют дихлорметаном (10 мл) и медленно
добавл ют 1н. гидроксид натри до тех пор, пока рН не достигнет 14. Органический слой
отдел ют и промывают насыщенным бикарбонатом натри (2x10 мл), насыщенным
раствором соли (1x110 мл), сушат над сульфатом магни , фильтруют, концентрируют.
Остаток очищают препаративной ВЭЖХ, получа 27 мг указанного в заголовке соединени в виде его соли бис-трифторуксусной кислоты, котора представл ет собой белое твердое
вещество.
Данные анализа: МС m/z 408,6 (MH +); выч. 408,3.
Испытание 1
Анализ св зывани меченного радиоактивным изотопом лиганда (радиолиганд)
A. Препараты мембран из клеток, экспрессирующих подтипы мускариновых рецепторов
hM1, hM2, hM3 и hM4
Клеточные линии CHO ( ичник китайского хом чка), стабильно экспрессирующие
клонированные подтипы мускариновых рецепторов человека hM1, hM2, hM3 и hM4,
соответственно, культивировали до состо ни , близкого к конфлюентности, в среде,
состо щей из F-12 HAM, дополненной 10% FBS (фетальна тел чь сыворотка) и 250
мкг/мл генетицина. Клетки культивировали в инкубаторе в 5% CO2 при 37°C и извлекали с
Страница: 46
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
помощью 2 мм EDTA в dPBS. Клетки собирали 5-минутным центрифугированием при 650 x
g, и дебрис (осадок клеток) либо хранили в замороженном состо нии при -80°С, либо
сразу получали мембраны. Дл получени мембран дебрис ресуспендировали в буфере
дл лизиса и гомогенезировали с помощью тканевого дезинтегратора Polytron PT-2100
(Kinematica AG; 20 секунд x 2 захода). Неочищенные мембраны центрифугировали при
40000 x g в течение 15 минут при 4°C. Затем осадок мембран ресуспендировали буфером
дл ресуспендировани и снова гомогенизировали с помощью тканевого дезинтегратора
Polytron. Концентрацию белка в суспензии мембран определ ли методом, описанным
Lowry, О. et al., 1951, Journal of Biochemistry: 193, 265. Все мембраны хранили в
замороженном состо нии в аликвотах при -80°C или сразу использовали. Аликвоты
полученных мембран рецепторов hM5 приобретали от Perkin Elmer и хранили при -80°C до
использовани .
B. Метод определени радиолиганд-св зывающей способности подтипов мускариновых
рецепторов hM1, hM2, hM3, hM4 и hM5
Испытани св зывани радиоактивного лиганда осуществл ли в 96-луночных
титрационных микропланшетах с общим объемом пробы 100 мкл. Мембраны CHO,
стабильно экспрессирующие либо мускариновый подтип hM1, hM2, hM3, hM4, либо
мускариновый подтип hM5, разбавл ли в буфере дл анализа до нижеуказанных
концентраций конкретного белка-мишени (мкг/лунку): 10 мкг дл hM1, 10-15 мкг дл hM2,
10-20 мкг дл hM3, 10-20 мкг дл hM4 и 10-12 мкг дл hM5. Мембраны кратковременно (10
секунд) гомогенизировали, использу тканевый дезинтегратор Polytron, до добавлени в
аналитический планшет. Изучение реакций св зывани до насыщени дл определени значений KD радиоактивного лиганда выполн ли, использу L-[N-метил- 3H]
скополаминметилхлорид ([ 3H]-NMS) (TRK666, 84,0 Ки/ммоль, Amersham Pharmacia Biotech,
Buckinghamshire, England) при концентраци х в диапазоне от 0,001 нМ до 20 нМ.
Анализы, св занные с вытеснением радиолиганда, дл определени значений Ki дл испытуемых соединений выполн ли с [ 3H]-NMS при концентрации 1 нМ и одиннадцати
различных концентраци х испытуемых соединений. Испытуемые соединени сначала
раствор ли до концентрации 400 мкМ в буфере дл разбавлени и затем серийно
разбавл ли 5x буфером дл разбавлени до конечных концентраций в диапазоне от 10 пМ
до 100 мкМ. Пор док и объемы добавлени в аналитические планшеты были следующими:
25 мкл меченого лиганда, 25 мкл разбавленного испытуемого соединени и 500 мкл
мембран. Аналитические планшеты инкубировали в течение 60 минут при 37°C. Реакции
св зывани прекращали быстрой фильтрацией через стекловолоконные (GF/B)
фильтровальные планшеты (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA), предварительно
обработанные в 1% BSA. Фильтровальные планшеты промывали три раза буфером дл промывки (10 мм HEPES), чтобы удалить несв занную радиоактивность. Затем планшеты
сушили на воздухе и в каждую лунку добавл ли 50 мкл сцинтилл ционной жидкости
Microscint-20 (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA). Затем планшеты считывали в
сцинтилл ционном счетчике PerkinElmer Topcount (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA).
Данные св зывани анализировали методом нелинейной регрессии с помощью пакета
программного обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA),
использу модель односайтового конкурентного св зывани . Значени Кi дл испытуемых
соединений рассчитывали из наблюдаемых значений IC50 и значени KD радиоактивного
лиганда, использу уравнение Cheng-Prusoff (Cheng Y; Prusoff WH. (1973) Biochemical
Pharmacology, 22(23):3099-108). Значени Кi преобразовывали в значени pKi, чтобы
определить среднее геометрическое и 95% доверительные интервалы. Эти итоговые
статистические данные снова преобразовывали в значени Кi дл представлени результатов испытани .
В этом испытании более низкое значение Кi свидетельствует о том, что испытуемое
соединение имеет более высокую аффинность св зывани с используемым в испытании
рецептором. В этом испытании было установлено, что соединение формулы I имеет
значение Кi приблизительно 0,96 нМ дл подтипа мускаринового рецептора М3.
Страница: 47
RU 2 337 095 C2
5
10
Испытуемые соединени , имеющие в этом испытании более низкое значение Кi, имеют
более высокую аффинность св зывани с мускариновым рецептором. Соединени по
данному изобретению, которые были испытаны в данном анализе, имели значение Кi дл hM2 в диапазоне от около 200 нМ до меньше чем 1 нМ; обычно в диапазоне от около 100
нМ до меньше чем 1 нМ; и значение Кi дл hM3 в диапазоне от около 100 нМ до меньше
чем 1 нМ; обычно в диапазоне от около 50 нМ до меньше чем 1 нМ. Например, соединени примеров 1-11, 14, 26, 27 и 39 имели значение Кi дл hM3 меньше чем 50 нМ. Таким
образом, соединени по данному изобретению, как было установлено в этом испытании,
достаточно убедительно св зываютс с подтипами рецепторов hM2 и hM3 (т.е. обладают
высокой аффинностью к ним).
Дополнительно, аффинность св зывани дл соединений формулы:
15
20
представлена в Таблице VI (где R 5, R х и e такие, как указаны в таблице VI):
Таблица VI
R5
Rх
e
hM2 (нМ)
?
hM3 (нМ)
?
Пр.1
-CH3
-H
8
3,8
x 4,7
x 39
0,96
x 2,6
x 52
Сравн. Пр. А
-CH3
-CH3
8
18
2,5
Сравн. Пр. D
-H
-H
8
150
50
I Соединение
Пр. №.
25
30
35
40
45
50
Пр.14
-CH3
-H
9
1,7
Сравн. Пр. B
-CH3
-CH3
9
120
Пр.8
-CH2CH2OH
-H
8
13
Сравн. Пр. C
-CH2CH2OH
-CH3
8
83
x 70
0,66
x 37
25
х 6,3
5,1
x 14
73
? Изменение аффинности св зывани относительно соединени по изобретени .
Данные в Таблице V нагл дно показывают, что замещение концевой аминогруппы
дополнительной алкильной группой, такой как метильна , значительно уменьшает
аффинность св зывани (лиганда) с подтипами рецептора hM2 и hM3. Кроме того, данные
в таблице V нагл дно показывают, что удаление алкильной группы, такой как метильна ,
из концевой аминогруппы существенно уменьшает аффинность св зывани (лиганда) с
подтипами рецептора hM2 и hM3.
Испытание 2
Анализы функциональной эффективности мускариновых рецепторов
А. Блокада агонист-опосредованного ингибировани аккумул ции цАМФ (cAMP)
В этом испытании определ ли функциональную эффективность испытуемого
соединени , измер способность испытуемого соединени блокировать ингибирование
оксотреморином форсколин-опосредованной аккумул ции cAMP в клетках CHO-K1,
экспрессирующих рецептор hM2.
Анализы cAMP выполн ли в формате радиоиммуноанализа, использу the Flashplate
Adenylyl Cyclase Activation Assay System 125I-cAMP (NEN SMP004B, PerkinElmer Life
Sciences Inc., Boston, MA), в соответствии с инструкци ми производител .
Клетки промывали один раз dPBS и извлекали раствором Трипсин-EDDA (0,05%
трипсин/0,53 мМ EDDA), как описано выше в разделе Получени клеточной культуры и
мембран. Отдельные (отделенные друг от друга) клетки промывали дважды,
центрифугиру при 650 x g в течение п ти минут в 50 мл dPBS. Дебрис затем
ресуспендировали в 10 мл dPBS и клетки подсчитывали с помощью счетчика частиц Coulter
Zl Dual Particle Counter (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Клетки снова
Страница: 48
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
центрифугировали при 650 x g в течение п ти минут и вновь ресуспендировали в буфере
дл стимул ции до концентрации в пробе 1,6x10 6 - 2,8x10 6 клеток/мл.
Испытуемое соединение сначала раствор ли до концентрации 400 мкМ в буфере дл разбавлени (dPBS, дополненный 1 мг/мл BSA (0,1%)) и затем серийно разбавл ли
буфером дл разбавлени до конечных мол рных концентраций в диапазоне от 100 мкМ до
0,1 нМ. Оксотреморин разбавл ли подобным образом.
Дл измерени ингибировани оксотреморином активности аденилилциклазы (AC), 25
мкл форсколина (25 мкМ конечна концентраци разбавлени в dPBS), 25 мкл
разбавленного оксотреморина и 50 мкл клеток добавл ли в лунки дл анализа агониста.
Дл измерени способности испытуемого соединени блокировать оксотреморинингибируемую активность AC, 25 мкл форсколина и оксотреморина (25 мкМ и 5 мкМ
конечные концентрации, соответственно, разбавленные в dPBS), 25 мкл разбавленного
испытуемого соединени и 50 мкл клеток добавл ли в оставшиес лунки дл анализа.
Реакционные смеси инкубировали в течение 10 минут при 37°C и реакции прекращали
добавлением 100 мкл лед ного буфера дл детектировани . Планшеты герметизировали,
инкубировали на прот жении ночи при комнатной температуре и на следующее утро
подсчитывали с помощью сцинтилл ционного счетчика PerkinElmer TopCount (PerkinElmer
Inc., Wellesley, MA). Количество полученного cAMP (пмоль/лунку) рассчитывали, исход из импульсов, наблюдаемых дл образцов и стандартов cAMP, как описано в руководстве
производител дл пользовател . Данные анализировали методом нелинейной регрессии с
помощью пакета программного обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San
Diego, CA), использу нелинейную регрессию, уравнение дл односайтового конкурентного
св зывани . Уравнение Cheng-Prusoff использовали дл количественного определени Ki,
использу EC50 кривой зависимости "концентраци оксотреморина-ответ" и концентрацию
оксотреморина в испытании как KD и [L], соответственно. Значени Ki преобразовывали в
значени pKi, чтобы определить среднее геометрическое и 95% доверительные интервалы.
Эти итоговые статистические данные снова преобразовывали в значени Кi дл представлени результатов испытани .
В этом испытании более низкое значение Ki свидетельствует о том, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность в отношении используемого
в испытании рецептора. Соединение примера 1, как было установлено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады оксотреморин-ингибировани форсколин-опосредованной
аккумул ции cAMP в клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
B. Блокада агонист-опосредованного св зывани GTP[ 35S]
Во втором функциональном анализе определ ли функциональную эффективность
испытуемого соединени , измер способность соединени блокировать оксотреморинстимулируемое св зывание [ 35S]GTP в клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
Во врем использовани замороженные мембраны оттаивали и затем разбавл ли в
буфере дл анализа с конечной концентрацией ткани-мишени 5-10 мкг белка на лунку.
Мембраны кратковременно гомогенизировали, использу тканевый дезинтегратор Polytron
PT-2100 и затем добавл ли в аналитические планшеты.
В каждом эксперименте определ ли значение EC90 (эффективна концентраци дл 90% максимального ответа) дл стимул ции св зывани [ 35S]GTP агонистом,
оксотреморином.
Дл определени способности испытуемого соединени ингибировать оксотреморином
стимулируемое св зывание [ 35S]GTP, в каждую лунку 96-луночных планшетов добавл ли
нижеследующее: 25 мкл буфера дл анализа с [ 35S]GTP (0,4 нМ), 25 мкл оксотреморина
(EC90) и GTP (3 мкМ), 25 мкл разбавленного испытуемого соединени и 25 мкл клеточных
мембран CHO, экспрессирующих рецептор hM2. Затем аналитические планшеты
инкубировали при 37°C в течение 60 минут. Аналитические планшеты фильтровали через
предварительно обработанные 1% BSA фильтры GF/B, использу 96-луночный харвестер
PerkinElmer. Планшеты промывали лед ным буфером дл промывки 3 раза, каждый раз в
Страница: 49
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
течение 3 секунд, и затем сушили на воздухе или в вакууме. В каждую лунку добавл ли
сцинтилл ционную жидкость Microscint-20 (50 мкл), и каждый планшет герметизировали и
подсчитывали радиоактивность с помощью счетчика (topcounter (PerkinElmer)). Данные
анализировали методом нелинейной регрессии с помощью пакета программного
обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA), использу нелинейную регрессию, уравнение дл односайтового конкурентного св зывани .
Уравнение Cheng-Prusoff использовали дл количественного определени Ki, использу значени IC50 кривой зависимости концентраци -ответ дл испытуемого соединени и
концентрацию оксотреморина в испытании как KD и [L], концентраци лиганда,
соответственно.
В этом испытании более низкое значение Ki указывает на то, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность на используемом в
испытании рецепторе. Соединение примера 1, как было установлено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады оксотреморином стимулируемого св зывани [ 35S]GTP в
клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
C. Блокада агонист-опосредованного высвобождени кальци с помощью метода FLIPR
Подтипы мускариновых рецепторов (рецепторы M1, M3 и M5), которые св зываютс с
белками Gq, активируют путь фосфолипазы C (PLC) после св зывани агониста с
рецептором. В результате, активированна PLC гидролизует фосфатил-инозитолдифосфат
(PIP2) в диацилглицерол (DAG) и фосфатидил-1,4,5-трифосфат (IP3), который, в свою
очередь, генерирует высвобождение кальци из внутриклеточных запасов, т.е.
эндоплазматического и саркоплазматического ретикулума. Анализ FLIPR (Molecular
Devices, Sunnyvale, CA) основан на использовании этого увеличени во внутриклеточном
кальции с применением чувствительного к кальцию красител (Fluo-4AM, Molecular
Probes, Eugene, OR), который флуоресцирует, когда св зывает свободный кальций. Это
вление флуоресценции измер ют в реальном масштабе времени с помощью FLIPR,
который детектирует изменение флуоресценции в монослое клеток, клонированных
человеческими рецепторами M1 и M3 и рецепторами M5 шимпанзе. Антагонистическую
эффективность определ ют по способности антагонистов ингибировать агонистопосредованное увеличение во внутриклеточном кальции.
В случае анализа стимул ции (высвобождени ) кальци методом FLIPR, клетки CHO,
стабильно экспрессирующие рецепторы hM1, hM3 и cM5, засевали в 96-луночные FLIPR
планшеты в ночь перед проведением испытани . Выращенные клетки промывали дважды
Cellwash (MTX Labsystems, Inc.) буфером дл PLIPR (10 мм HEPES, pH 7,4, 2 мм хлорида
кальци , 2,5 мм пробенецида в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS) без
кальци и магни ), удал среду дл роста и оставл 50 мкл/лунку буфера дл FLIPR.
Затем клетки инкубировали с 50 мкл/лунку 4 мкМ FLUO-4AM (готовили 2x раствор) в
течение 40 минут при 37°C, 5% диоксида углерода. После периода инкубации с красителем
клетки промывали два раза буфером дл FLIPR, оставл конечный объем 50 мкл/лунку.
Дл определени антагонистической активности сначала устанавливали доза-зависимую
стимул цию высвобождени внутриклеточного кальци дл оксотреморина с тем, чтобы
позже можно было определить антагонистическую активность в отношении стимул ции
оксотреморином при концентрации EC90. Клетки сначала инкубировали с буфером дл разбавлени соединени в течение 20 минут, с последующим введением агониста, эту
операцию выполн ли, использу FLIPR. Значение EC90 дл оксотреморина получали
согласно способу, подробно описанному в нижеследующем разделе измерени и обработки
данных FLIPR, в св зи с формулой ECF=((F/100-F)^1/H)?EC50. Концентрацию оксотреморина
3 x ECF получали в стимул ционных планшетах с тем, чтобы концентрацию оксотреморина
EC90 добавить в каждую лунку планшетов дл анализа подавлени антагонистом
стимул ции высвобождени кальци .
Параметрами, используемыми дл FLIPR, были длительность экспозиции 0,4 секунд,
мощность лазера 0,5 ватт, длина волны возбуждени 480 нм и длина волны излучени 550
нм. Базовую линию определ ли, измер изменение флуоресценции в течение 10 секунд
Страница: 50
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
до добавлени агониста. После стимул ции агонистом PLIPR непрерывно измер л
изменение флуоресценции через каждые 0,5-1 секунд в течение 1,5 минут, чтобы уловить
максимальное изменение во флуоресценции.
Изменение флуоресценции выражали как максимальную флуоресценцию минус базова флуоресценци дл каждой лунки. Необработанные данные анализировали в зависимости
от логарифма концентрации лекарственного средства методом нелинейной регрессии с
помощью пакета программного обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.,
San Diego, CA), использу встроенную модель дл сигмоидальной кривой (зависимости)
доза-ответ. Значени Ki дл антагониста определ ли согласно Prism, использу значение
EC50 дл оксотреморина как KD и EC90 оксотреморина дл концентрации лиганда согласно
уравнению Cheng-Prusoff (Cheng & Prusoff, 1973).
В этом испытании более низкое значение Ki указывает на то, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность в отношении используемого
в испытании рецептора. Соединение формулы I, как было обнаружено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады агонист-опосредованного высвобождени кальци в клетках
CHO, стабильно экспрессирующих рецептор hM3.
Испытание 3
Определение продолжительности бронхозащиты на модели ацетилхолининдуцированного бронхостеноза у морских свинок
Этот анализ in vivo использовали дл оценки бронхозащитных воздействий испытуемых
соединений, про вл ющих антагонистическую активность в отношении мускариновых
рецепторов.
Группы из шести морских свинок, самцов (Duncan-Hartley (HsdPoc:DH) Harlan, Madison,
WI), весом от 250 до 350 г, были индивидуально отождествлены карточками с
обозначением клетки. На прот жении всего исследовани животные имели доступ к пище и
воде, по желанию.
Испытуемое соединение вводили ингал цией на прот жении 10 минут в камере
экспозиционного дозированного распылени лекарственного препарата (R&S Molds, San
Carlos, CA). Камеры дл дозированного распылени были расположены таким образом,
чтобы аэрозоль одновременно поступал в 6 индивидуальных камер из центрального
коллектора. Морских свинок подвергали воздействию аэрозол испытуемого соединени или эксципиента (WFI). Эти аэрозоли генерировали из водных растворов, использу установку дл распылени звездообразной формы LC (Model 22F51, PARI Respiratory
Equipment, Inc. Midlothian, VA), приводимую в действие смесью газов (CO2=5%, О2=21%
и N2=74%) при давлении 22 фунт/дюйм 2. Скорость газового потока через распылитель при
указанном рабочем давлении составл ла приблизительно 3 л/мин. Генерированные
аэрозоли подавали в камеры под давлением выше атмосферного. Во врем подачи
растворов дл аэрозолизации никакого разбавлени воздухом не использовали. Во врем распылени на прот жении 10 минут распыл лось приблизительно 1,8 мл раствора. Эту
величину определ ли гравитометрически, сравнива массы заполненного распылител перед и после распылени .
Бронхозащитные действи испытуемого соединени , вводимого ингал цией, оценивали,
использу плетизмографию всего тела (регистраци изменений объема всего тела) через
1,5; 24, 48 и 72 часа после введени дозы.
За сорок п ть минут до начала оценки дыхательной функции легких каждую морскую
свинку анестизировали внутримышечной инъекцией кетамина (43,75 мг/кг), ксилазина
(3,50 мг/кг) и ацепромазина (1,05 мг/кг). После того как место дл оперативного
вмешательства было выбрито и очищено 70% спиртом, делали 2-3 см срединный разрез
вентральной стороны шеи. Затем ремную вену отдел ли и подвергали канюлированию
полиэтиленовым катетером, заполненным физиологическим раствором (PE-50, Becton
Dickinson, Sparks, MD), дела возможным внутривенные вливани ацетилхолина (Ach)
(Sigma, St. Louis, MO) в физиологическом растворе. Затем высвобождали трахею и
подвергали канюлированию тефлоновой трубкой 14G (#NE-014, Small Parts, Miami Lakes,
Страница: 51
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
FL). При необходимости анестезию поддерживали дополнительными внутримышечными
инъекци ми вышеупом нутой анестезирующей смеси. Глубину анестезии контролировали
и корректировали, если животное реагировало на сдавливание его лапки или если частота
дыхани была больше чем 100 дыханий/минуту.
Сразу после завершени катетеризаций животное помещали в плетизмограф
(#PLY3114, Buxco Electronics, Inc., Sharon, CT) и вставл ли пищеводный зонд дл измерени (внутриплеврального) давлени (PE-160, Becton Dickinson, Sparks, MD), чтобы
измерить давление, движущее легкие (включающее легочную вентил цию) (давление).
Тефлоновую трахеальную трубку присоедин ли к отверстию плетизмографа, чтобы
позволить морской свинке вдыхать воздух из помещени снаружи камеры. Затем камеру
герметизировали. Дл поддержани температуры тела использовали нагревающую лампу,
и чтобы не допустить возникновени коллапса нижних воздухоносных путей и
гипервентил цию легких у животного, легкие морской свинки 3 раза накачивали 4 мл
воздуха, использу калибровочный шприц объемом 10 мл (#5520 Series, Hans Rudolph,
Kansas City, MO).
Как только было установлено, что базовые значени дл раст жимости легких наход тс в диапазоне 0,3-0,9 мл/см вод. ст. и дл сопротивлени дыхательных путей в диапазоне
0,1-0,199 см вод.ст./мл в секунду, начинали оценку дыхательной функции легких.
Компьютерна программа измерени показателей функции легких Buxco включала сбор и
деривацию значений легочных показателей.
Начало этой программы инициировал экспериментальный протокол и сбор данных.
Изменени в объеме за некоторое врем , которые происход т внутри плетизмографа с
каждым дыханием, измер ли посредством датчика давлени Buxco. Интегриру этот сигнал
по времени, оценивали параметры потока (воздуха) дл каждого дыхани . Этот сигнал,
вместе с изменени ми давлени , движущего легкие, которые собирали, использу датчик
давлени Sensym (#TRD4100), соедин ли через предусилитель Buxco (MAX 2270) с
интерфейсом сбора данных (# SFT3400 и SFT3813). Все другие легочные показатели
получали из этих двух исходных данных.
Базовые значени собирали в течение 5 минут и после этого времени морским свинкам
вводили провокационную пробу Ach. Ach (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) (0,1 мг/мл),
инфузировали внутривенно в течение 1 минуты из насоса-шприца (sp210iw. World
Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL) в указанных ниже дозах и в предписанные
времена от начала эксперимента: 1,9 мкг/минута через 5 минут, 3,8 мкг/минута через 10
минут, 7,5 мкг/минута через 15 минут, 15,0 мкг/минута через 20 минут, 30 мкг/минута
через 25 минут и 60 мкг/минута через 30 минут. Если сопротивление дыхательных путей
или раст жимость легких не возвращались к базовым значени м через 3 минуты после
каждой дозы Ach, легкие морской свинки 3 раза накачивали 4 мл воздуха, использу калибровочный шприц объемом 10 мл. Регистрируемые легочные параметры включали
частоту дыхани (дыханий/минуту), раст жимость легких (мл/см вод.ст.) и сопротивление
дыхательных путей (см вод.ст./мл в секунду). После завершени измерений показателей
функции легких на 35 минуте по данному протоколу, морскую свинку извлекали из
плетизмографа и безболезненно умерщвл ли асфиксией диоксидом углерода.
Данные оценивали одним или обоими из нижеследующих способов:
(a) Сопротивление дыхательных путей (RL, см вод.ст./мл в секунду) рассчитывали из
отношени "изменение в давлении" к "изменение в потоке (воздуха)".
Ответ RL на ACh (60 мкг/мин, ингал ци (IH)) вычисл ли дл групп, получавших
наполнитель и испытуемое соединение. Рассчитывали средний ответ на ACh дл животных, обработанных наполнителем, в каждое врем до лечени , и использовали дл вычислени % подавлени ответа на ACh, во врем , соответствующее времени до
лечени , дл каждой дозы испытуемого соединени . Кривые подавлени доза-ответ дл 'RL' были описаны логистическим уравнением с четырьм параметрами, использу программное обеспечение GraphPad Prism, верси 3.00 дл Windows (GraphPad Software,
San Diego, California), чтобы оценить бронхозащитную ID50 (дозу, необходимую дл Страница: 52
RU 2 337 095 C2
5
10
подавлени ответа на бронхоконстриктор ACh (60 мкг/мин) на 50%). Используемое
уравнение было следующим:
Y=Min+(Max-Min)/(1+10 ((LOG ID50-X)?Hillslope)),
где X означает логарифм дозы, Y представл ет собой ответ (% подавлени индуцируемого ACh увеличени в RL). Y начинаетс в Min и приближаетс асимптотически
к Max по сигмоидальной кривой.
(b) Рассчитывают величину PD2, которую определ ют как количество Ach или
гистамина, необходимое дл того, чтобы вызвать удвоение базового сопротивлени дыхательных путей, использу значени сопротивлени дыхательных путей, полученные из
"потока (воздуха)" и "давлени " в диапазоне введени провокационных доз Ach или
гистамина, использу нижеследующее уравнение (которое получено из уравнени ,
используемого дл вычислени значений PC20, описанного в American Thoracic Society.
Guidelines for methacholine and exercise challenge testing - 1999. Am J Respir Crit
Care Med. 2000; 161:309-329):
15
20
25
30
35
40
45
50
где:
C1 = концентраци Ach или гистамина, предшествующа C2;
C2 = концентраци Ach или гистамина, привод ща к, по крайней мере, 2-кратному
увеличению в сопротивлении дыхательных путей (RL);
R0 = базовое значение RL;
R1 = значение RL после C1;
R2 = значение RL после C2.
Эффективную дозу определ ют как дозу, котора ограничивала реакцию бронхостеноза
на Ach при дозе 50 мкг/мл до удвоени базового сопротивлени дыхательных путей
(PD2(50)).
Статистический анализ данных выполн ли, использу двусторонне ограниченный
критерий Стьюдента. P-значение <0,05 считали значимым.
Обычно, в этом испытании испытуемое соединение, имеющее PD2(50) меньше чем около
200 мкг/мл дл ACh-индуцируемого бронхостеноза через 1,5 часа после введени дозы,
вл етс предпочтительным. Соединение формулы I, как было установлено, имеет PD2(50)
меньше чем около 200 мкг/мл дл ACh-индуцируемого бронхостеноза через 1,5 часа после
введени .
Испытание 4
Ингал ционный тест слюноотделени у морских свинок
Морские свинки (Charles River, Wilmington, MA), весом 200-350 г, были подвергнуты
акклиматизации в услови х пребывани внутри собственной колонии в течение, по крайней
мере, 3 дней после прибыти . Испытуемое соединение или эксципиент дозировали
ингал цией (IH) на прот жении периода 10 минут в камере дозированного распылени (препарата) круглой формы (R+S Molds, San Carlos, CA). Испытуемые соединени раствор ли в стерильной воде и доставл ли, использу распылитель, наполненный 5,0 мл
раствора дл дозировани . Морских свинок удерживали в ингал ционной камере в течение
30 минут. На прот жении этого времени морские свинки были ограничены площадью
примерно 100 см 2. Это пространство было достаточным дл того, чтобы животные могли
свободно поворачиватьс , самосто тельно перемещатьс , и предусматривало
возможность чистки, ухода за поверхностью тела. После 20 минут акклиматизации морских
свинок подвергали воздействию аэрозол , генерируемого из распыл ющего агрегата
звездообразной формы LS (Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian,
VA), приводимого в действие воздухом помещени при давлении 22 фунт/дюйм 2. После
завершени распылени состо ние морских свинок оценивали через 1,5; 6, 12, 24, 48 или
72 часа после обработки.
За час до испытани морских свинок подвергали анестезии внутримышечной (IM)
Страница: 53
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
инъекцией смеси кетамина 43,75 мг/кг, ксилазина 3,5 мг/кг и ацепромазина 1,05 мг/кг
при объеме 0,88 мл/кг. Животных размещали брюшной стороной вверх на поверхности с
обогреваемым (37°C) покрытием, наклоненной под углом 20 градусов, с запрокинутой
назад головой. В рот морской свинки помещали 4-слойную марлевую м гкую прокладку,
размером 2x2 дюйма, (тампоны из Nu- марли общего пользовани , Johnson and Johnson,
Arlington, TX). Через п ть минут после этого вводили мускариновый агонист, пилокарпин
(3,0 мг/кг, подкожно) и марлевую м гкую прокладку сразу же отбрасывали и замен ли
новой предварительно взвешенной марлевой м гкой прокладкой. Слюну собирали в
течение 10 минут и по истечении этого времени марлевую прокладку взвешивали и
фиксировали разницу в массе, чтобы определить количество накопленной слюны (в мг).
Рассчитывали среднее количество слюны, собранной у животных, получавших
наполнитель и получавших каждую дозу испытуемого соединени . Считали, что среднее
(значение) дл группы, получавшей наполнитель, вл етс 100% слюноотделением.
Результаты рассчитывали, использу средние результатов (n=3 или больше).
Доверительные интервалы (95%) рассчитывали дл каждой дозы в каждый момент
времени, использу двухсторонний ANOVA (two-way ANOVA). Эта модель представл ет
собой модифицированную версию способа, описанного в Rechter, "Estimation of
anticholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpine-induced
salivation" Ata Pharmacol Toxicol, 1996, 24:243-254.
Рассчитывали среднюю массу слюны у животных, обработанных наполнителем, в
каждый момент времени до лечени , и использовали дл вычислени % подавлени слюноотделени , во врем , соответствующее времени до лечени , дл каждой дозы.
Данные подавлени "доза-ответ" были описаны логистическим уравнением с четырьм параметрами, использу программное обеспечение GraphPad Prism, верси 3.00 дл Windows (GraphPad Software, San Diego, California), чтобы оценить ID50 (дозу, необходимую
дл подавлени пилокарпин-вызываемого слюноотделени на 50%) дл средства,
подавл ющего слюноотделение. Используемое уравнение было следующим:
Y=Min+(Max-Min)/(1+10 ((LOG ID50-X)?Hillslope))
где X означает логарифм дозы, Y представл ет собой ответ (% подавлени слюноотделени ). Y начинаетс в Min и приближаетс асимптотически к Max по
сигмоидальной кривой.
Отношение ID50 дл средства, подавл ющего слюноотделени , к бронхозащитной ID50
использовали дл вычислени показател кажущейс селективности испытуемого
соединени по отношению к легким. Обычно соединени , имеющие показатель кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким больше чем около 5,
вл ютс предпочтительными. В этом испытании соединение формулы I имело показатель
кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким больше чем
около 5.
Испытание 5
Метахолин-индуцируемые депрессорные ответы у наход щихс в сознании морских
свинок
В этих исследовани х использовали здоровых, взрослых морских свинок-самцов линии
Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, IN), весом от 200 до 300 г. Под анестезией
изофлураном (под ее действием) животных снабжали обычными катетерами (PE-50 трубка)
через сонную артерию и ремную вену. Катетеры были выведены наружу, использу подкожный туннель в подлопаточную область. Все хирургические разрезы зашивали
шелковой нитью 4-0 Ethicon и катетеры блокировали гепарином (1000 единиц/мл). По
окончании хирургического вмешательства каждому животному вводили физиологический
раствор (3 мл, подкожно), а также бупренорфин (0,05 мг/кг, внутримышечно). Животным
предоставл ли возможность прийти в себ на электрогрелке до того, как возвратить их в
помещение содержани .
Приблизительно после 18-20 часов после оперативного вмешательства животных
взвешивали и катетер через сонную артерию соедин ли с датчиком дл регистрации
Страница: 54
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
артериального давлени . Артериальное давление и частоту сердечных сокращений
фиксировали, использу систему сбора данных Biopac MP-100. Животным предоставл ли
возможность акклиматизироватьс и стабилизировать свое состо ние в течение 20 минут.
Каждому животному вводили провокационную пробу метилхолина (MCh) (0,3 мг/кг,
внутривенно (в.в.)) через линию ремной вены и ответы сердечно-сосудистой системы
контролировали на прот жении 10 минут. Затем животных помещали в камеру
дозированного распылени (препарата), которую соедин ли с распылителем, содержащим
раствор испытуемого соединени или наполнител . Раствор распыл ли в течение 10
минут, использу газовую смесь из вдыхаемого воздуха и 5% диоксида углерода, со
скоростью потока 3 литра/минуту. Затем животных удал ли из камеры дозированного
распылени (препарата) и возвращали в их соответствующие клетки. Через 1,5 и 24 часа
после дозировани животным вновь вводили провокационную дозу MCh (0,3 мг/кг, в.в.) и
фиксировали гемодинамический ответ. После этого животных подвергали эвтаназии
пентобарбиталом натри (150 мг/кг, в.в.).
MCh вызывает снижение среднего артериального давлени (MAP) и замедление
сердечных сокращений (брадикарди ). Максимальное уменьшение, исход из базового, в
MAP (депрессорные ответы) измер ли дл каждого введени провокационной дозы MCh
(до и после дозировани IH). Изменени в брадикардических симптомах не использовали
дл анализа, поскольку эти ответы не были устойчивыми и воспроизводимыми.
Воздействие лечени на ответы MCh выражали как % ингибировани (среднее+/-ст.ош.ср.)
контрольных депрессорных ответов. Двухсторонний тест ANOVA с соответствующей
обработкой данных использовали дл тестировани вли ни лечени и времени
предварительного лечени . Депрессорные ответы на MCh относительно не измен лись
через 1,5 и 24 часа после дозировани ингал цией наполнител .
Отношение ID50 антидепрессора к бронхозащитной ID50 использовали дл вычислени кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким. Обычно
соединени , имеющие показатель кажущейс селективности испытуемого соединени по
отношению к легким больше чем около 5, вл ютс предпочтительными. В этом испытании
соединение формулы I имело показатель кажущейс селективности испытуемого
соединени по отношению к легким больше чем 5.
Хот насто щее изобретение было описано выше, ссыла сь на его конкретные аспекты
или конкретные варианты воплощени , дл специалистов в данной области, очевидно, что
в него могут быть внесены различные изменени или использованы эквиваленты, не
выход щие за рамки существа и объема изобретени . Кроме того, в степени, разрешенной
соответствующим (действующим) статусом патента и регламетированием пор дка его
выдачи, все публикации, патенты и патентные за вки, цитируемые здесь, вход т в
насто щее описание в полном объеме посредством ссылки в такой же степени, как если бы
каждый документ был индивидуально включен в него посредством ссылки.
Формула изобретени 40
1. Соединение формулы I:
45
50
где R 4 представл ет собой водород;
R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила и -CH2-R 8; где алкильна группа
необ зательно замещена -ОН или 1-5 фтор-заместител ми; R 8 выбран из С3-6циклоалкила
или фенила;
Страница: 55
CL
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
a, b и с равны 0; d равно 1; е равно 8 или 9;
или его фармацевтически приемлема соль, или его сольват, или его стереоизомер.
2. Соединение по п.1, где стереохими в 3-положении пирролидинового кольца
представл ет (S)-конфигурацию.
3. Соединение по п.1, где стереохими в 3-положении пирролидинового кольца
представл ет (R)-конфигурацию.
4. Соединение по п.2 или 3, где R 5 представл ет собой C1-3алкил, где алкильна группа
необ зательно замещена -ОН или 1-3 фтор-заместител ми.
5. Соединение по п.2 или 3, где R 5 представл ет собой метил.
6. Соединение, выбранное из:
2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклопентиламинооктил)пирролидин]-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(2-гидроксиэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(5)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(2,2,2-трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклопентиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(2-гидроксиэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(2,2,2-трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(2-гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(2,2,2-трифторэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
Страница: 56
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
2-[(S)-1-(9-бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид;
2-[(R)-1-(9-изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклопентиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(2-гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(2,2,2-трифторэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
или их фармацевтически приемлемой соли, или их сольвата.
7. Соединение по п.6, выбранное из 2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида, 2-[(R)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
или их фармацевтически приемлемой соли, или их сольвата.
8. Фармацевтическа композици , обладающа антагонистической активностью в
отношении мускариновых рецепторов, содержаща фармацевтически приемлемый
носитель и терапевтически эффективное количество соединени по любому одному из пп.1
или 6.
9. Фармацевтическа композици по п.8, где композици пригодна дл введени ингал цией.
10. Способ лечени млекопитающего, имеющего клиническое состо ние, облегчаемое
лечением антагонистом мускариновых рецепторов, где способ включает введение
млекопитающему терапевтически эффективного количества соединени по любому одному
из пп.1 или 6.
11. Способ лечени легочного нарушени , хронической обструктивной болезни легких
или астмы, где способ включает введение пациенту, нуждающемус в таком лечении,
терапевтически эффективного количества соединени по любому одному из пп.1 или 6.
12. Способ бронходилатации у пациента, где способ включает введение пациенту
продуцирующего бронходилатацию количества соединени по любому одному из пп.1 или
6.
13. Способ получени соединени формулы I:
40
45
или его соли, или его сольвата, или его стереоизомера;
где способ включает:
а) взаимодействие соединени формулы V
50
Страница: 57
RU 2 337 095 C2
5
с соединением формулы VIII:
10
15
20
25
30
где L 2 представл ет собой удал емую группу, предпочтительно хлор, бром, йод,
ацетокси, трифторацетокси, тозил, мезил, брозил, нозил;
?? 3 представл ет собой амино-защитную группу, предпочтительно бензил, третбутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, третбутилдиметилсилил, с получением промежуточного соединени ;
b) удаление защитной группы Р 3 у промежуточного соединени , полученного на стадии
(а), предпочтительно гидрогенолизом в присутствии паллади , если Р 3 представл ет собой
бензил; или обработкой фармацевтически приемлемой кислотой, если Р 3 представл ет
собой трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил; или
триэтиламина тригидрофторидом, если Р 3 представл ет собой трет-бутилдиметилсилил;
c) при необходимости дополнительное взаимодействие продукта стадии (b) с
фармацевтически приемлемой кислотой с получением фармацевтически приемлемой соли
соединени формулы I;
где R 4 представл ет собой водород; R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила
и -CH2-R 8; где алкильна группа необ зательно замещена -ОН или 1-5 фторзаместител ми; R 8 выбран из С3-6циклоалкила или фенила;
а, b и с равны 0; d равно 1; е равно 8 или 9.
14. Способ по п.13, где способ включает стадию получени фармацевтически приемлемой соли соединени формулы I.
15. Способ получени фармацевтически приемлемой соли соединени формулы I:
35
40
или его сольвата, или его стереоизомера;
где способ включает взаимодействие соединени формулы IX:
45
50
где Р a представл ет собой неустойчивую в кислоте амино-защитную группу,
предпочтительно трет-бутоксикарбонил, п-метоксибензилоксикарбонил,
бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил,
Страница: 58
RU 2 337 095 C2
5
с фармацевтически приемлемой кислотой с получением фармацевтически приемлемой
соли соединени формулы I;
где R 4 представл ет собой водород; R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила
и -СН2-R 8; где алкильна группа необ зательно замещена -ОН или 1-5 фторзаместител ми; R 8 выбран из С3-6циклоалкила или фенила;
a, b и с равны 0; d равно 1; е равно 8 или 9.
16. Соединение формулы X:
10
15
где R 4 представл ет собой водород; R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила
и -СН2-R 8; где алкильна группа необ зательно замещена -ОН или 1-5 фтор20
25
заместител ми; R 8 выбран из С3-5циклоалкила или фенила;
a, b и с равны 0; d равно 1; е равно 8 или 9,
и Р представл ет собой бензил, трет-бутоксикарбонил, тритил, бензилоксикарбонил, пметоксибензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, формил, ацетил,
триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил;
или его соль, или его сольват, или его стереоизомер.
17. Соединение по п.16, выбранное из 2-[(S)-1-(8-N-бензил-Nметиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида и 2-{(S)-1-[8-(N-третбутоксикарбонил-N-метиламино)октил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида, или их
соли.
18. Соединение формулы XI:
30
35
40
где R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила и -СН2-R 8; где алкильна группа
необ зательно замещена -ОН или 1-5 фтор-заместител ми; R 8 выбран из С3-6циклоалкила
или фенила; е равно 8 или 9,
Р представл ет собой бензил, трет-бутоксикарбонил, тритил, бензилоксикарбонил, пметоксибензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, формил, ацетил,
триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил;
G представл ет собой -СНО, хлор, бром, йод, ацетокси, трифторацетокси, тозил,
мезил, брозил, нозил;
или его соль, или его стереоизомер.
19. Соединение по п.18, выбранное из 8-(N-бензил-N-метиламино)октан-1-ола, 8-(Nтрет-бутоксикарбонил-N-метиламино)октан-1-ола, 8-(N-трет-бутоксикарбонил-Nметиламино)октилового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты, или их соли.
45
50
Страница: 59
?.
Данные в Таблице V нагл дно показывают, что замещение концевой аминогруппы
дополнительной алкильной группой, такой как метильна , значительно уменьшает
аффинность св зывани (лиганда) с подтипами рецептора hM2 и hM3. Кроме того, данные
в таблице V нагл дно показывают, что удаление алкильной группы, такой как метильна ,
из концевой аминогруппы существенно уменьшает аффинность св зывани (лиганда) с
подтипами рецептора hM2 и hM3.
Испытание 2
Анализы функциональной эффективности мускариновых рецепторов
А. Блокада агонист-опосредованного ингибировани аккумул ции цАМФ (cAMP)
В этом испытании определ ли функциональную эффективность испытуемого
соединени , измер способность испытуемого соединени блокировать ингибирование
оксотреморином форсколин-опосредованной аккумул ции cAMP в клетках CHO-K1,
экспрессирующих рецептор hM2.
Анализы cAMP выполн ли в формате радиоиммуноанализа, использу the Flashplate
Adenylyl Cyclase Activation Assay System 125I-cAMP (NEN SMP004B, PerkinElmer Life
Sciences Inc., Boston, MA), в соответствии с инструкци ми производител .
Клетки промывали один раз dPBS и извлекали раствором Трипсин-EDDA (0,05%
трипсин/0,53 мМ EDDA), как описано выше в разделе Получени клеточной культуры и
мембран. Отдельные (отделенные друг от друга) клетки промывали дважды,
центрифугиру при 650 x g в течение п ти минут в 50 мл dPBS. Дебрис затем
ресуспендировали в 10 мл dPBS и клетки подсчитывали с помощью счетчика частиц Coulter
Zl Dual Particle Counter (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Клетки снова
Страница: 48
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
центрифугировали при 650 x g в течение п ти минут и вновь ресуспендировали в буфере
дл стимул ции до концентрации в пробе 1,6x10 6 - 2,8x10 6 клеток/мл.
Испытуемое соединение сначала раствор ли до концентрации 400 мкМ в буфере дл разбавлени (dPBS, дополненный 1 мг/мл BSA (0,1%)) и затем серийно разбавл ли
буфером дл разбавлени до конечных мол рных концентраций в диапазоне от 100 мкМ до
0,1 нМ. Оксотреморин разбавл ли подобным образом.
Дл измерени ингибировани оксотреморином активности аденилилциклазы (AC), 25
мкл форсколина (25 мкМ конечна концентраци разбавлени в dPBS), 25 мкл
разбавленного оксотреморина и 50 мкл клеток добавл ли в лунки дл анализа агониста.
Дл измерени способности испытуемого соединени блокировать оксотреморинингибируемую активность AC, 25 мкл форсколина и оксотреморина (25 мкМ и 5 мкМ
конечные концентрации, соответственно, разбавленные в dPBS), 25 мкл разбавленного
испытуемого соединени и 50 мкл клеток добавл ли в оставшиес лунки дл анализа.
Реакционные смеси инкубировали в течение 10 минут при 37°C и реакции прекращали
добавлением 100 мкл лед ного буфера дл детектировани . Планшеты герметизировали,
инкубировали на прот жении ночи при комнатной температуре и на следующее утро
подсчитывали с помощью сцинтилл ционного счетчика PerkinElmer TopCount (PerkinElmer
Inc., Wellesley, MA). Количество полученного cAMP (пмоль/лунку) рассчитывали, исход из импульсов, наблюдаемых дл образцов и стандартов cAMP, как описано в руководстве
производител дл пользовател . Данные анализировали методом нелинейной регрессии с
помощью пакета программного обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San
Diego, CA), использу нелинейную регрессию, уравнение дл односайтового конкурентного
св зывани . Уравнение Cheng-Prusoff использовали дл количественного определени Ki,
использу EC50 кривой зависимости "концентраци оксотреморина-ответ" и концентрацию
оксотреморина в испытании как KD и [L], соответственно. Значени Ki преобразовывали в
значени pKi, чтобы определить среднее геометрическое и 95% доверительные интервалы.
Эти итоговые статистические данные снова преобразовывали в значени Кi дл представлени результатов испытани .
В этом испытании более низкое значение Ki свидетельствует о том, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность в отношении используемого
в испытании рецептора. Соединение примера 1, как было установлено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады оксотреморин-ингибировани форсколин-опосредованной
аккумул ции cAMP в клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
B. Блокада агонист-опосредованного св зывани GTP[ 35S]
Во втором функциональном анализе определ ли функциональную эффективность
испытуемого соединени , измер способность соединени блокировать оксотреморинстимулируемое св зывание [ 35S]GTP в клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
Во врем использовани замороженные мембраны оттаивали и затем разбавл ли в
буфере дл анализа с конечной концентрацией ткани-мишени 5-10 мкг белка на лунку.
Мембраны кратковременно гомогенизировали, использу тканевый дезинтегратор Polytron
PT-2100 и затем добавл ли в аналитические планшеты.
В каждом эксперименте определ ли значение EC90 (эффективна концентраци дл 90% максимального ответа) дл стимул ции св зывани [ 35S]GTP агонистом,
оксотреморином.
Дл определени способности испытуемого соединени ингибировать оксотреморином
стимулируемое св зывание [ 35S]GTP, в каждую лунку 96-луночных планшетов добавл ли
нижеследующее: 25 мкл буфера дл анализа с [ 35S]GTP (0,4 нМ), 25 мкл оксотреморина
(EC90) и GTP (3 мкМ), 25 мкл разбавленного испытуемого соединени и 25 мкл клеточных
мембран CHO, экспрессирующих рецептор hM2. Затем аналитические планшеты
инкубировали при 37°C в течение 60 минут. Аналитические планшеты фильтровали через
предварительно обработанные 1% BSA фильтры GF/B, использу 96-луночный харвестер
PerkinElmer. Планшеты промывали лед ным буфером дл промывки 3 раза, каждый раз в
Страница: 49
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
течение 3 секунд, и затем сушили на воздухе или в вакууме. В каждую лунку добавл ли
сцинтилл ционную жидкость Microscint-20 (50 мкл), и каждый планшет герметизировали и
подсчитывали радиоактивность с помощью счетчика (topcounter (PerkinElmer)). Данные
анализировали методом нелинейной регрессии с помощью пакета программного
обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA), использу нелинейную регрессию, уравнение дл односайтового конкурентного св зывани .
Уравнение Cheng-Prusoff использовали дл количественного определени Ki, использу значени IC50 кривой зависимости концентраци -ответ дл испытуемого соединени и
концентрацию оксотреморина в испытании как KD и [L], концентраци лиганда,
соответственно.
В этом испытании более низкое значение Ki указывает на то, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность на используемом в
испытании рецепторе. Соединение примера 1, как было установлено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады оксотреморином стимулируемого св зывани [ 35S]GTP в
клетках CHO-K1, экспрессирующих рецептор hM2.
C. Блокада агонист-опосредованного высвобождени кальци с помощью метода FLIPR
Подтипы мускариновых рецепторов (рецепторы M1, M3 и M5), которые св зываютс с
белками Gq, активируют путь фосфолипазы C (PLC) после св зывани агониста с
рецептором. В результате, активированна PLC гидролизует фосфатил-инозитолдифосфат
(PIP2) в диацилглицерол (DAG) и фосфатидил-1,4,5-трифосфат (IP3), который, в свою
очередь, генерирует высвобождение кальци из внутриклеточных запасов, т.е.
эндоплазматического и саркоплазматического ретикулума. Анализ FLIPR (Molecular
Devices, Sunnyvale, CA) основан на использовании этого увеличени во внутриклеточном
кальции с применением чувствительного к кальцию красител (Fluo-4AM, Molecular
Probes, Eugene, OR), который флуоресцирует, когда св зывает свободный кальций. Это
вление флуоресценции измер ют в реальном масштабе времени с помощью FLIPR,
который детектирует изменение флуоресценции в монослое клеток, клонированных
человеческими рецепторами M1 и M3 и рецепторами M5 шимпанзе. Антагонистическую
эффективность определ ют по способности антагонистов ингибировать агонистопосредованное увеличение во внутриклеточном кальции.
В случае анализа стимул ции (высвобождени ) кальци методом FLIPR, клетки CHO,
стабильно экспрессирующие рецепторы hM1, hM3 и cM5, засевали в 96-луночные FLIPR
планшеты в ночь перед проведением испытани . Выращенные клетки промывали дважды
Cellwash (MTX Labsystems, Inc.) буфером дл PLIPR (10 мм HEPES, pH 7,4, 2 мм хлорида
кальци , 2,5 мм пробенецида в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS) без
кальци и магни ), удал среду дл роста и оставл 50 мкл/лунку буфера дл FLIPR.
Затем клетки инкубировали с 50 мкл/лунку 4 мкМ FLUO-4AM (готовили 2x раствор) в
течение 40 минут при 37°C, 5% диоксида углерода. После периода инкубации с красителем
клетки промывали два раза буфером дл FLIPR, оставл конечный объем 50 мкл/лунку.
Дл определени антагонистической активности сначала устанавливали доза-зависимую
стимул цию высвобождени внутриклеточного кальци дл оксотреморина с тем, чтобы
позже можно было определить антагонистическую активность в отношении стимул ции
оксотреморином при концентрации EC90. Клетки сначала инкубировали с буфером дл разбавлени соединени в течение 20 минут, с последующим введением агониста, эту
операцию выполн ли, использу FLIPR. Значение EC90 дл оксотреморина получали
согласно способу, подробно описанному в нижеследующем разделе измерени и обработки
данных FLIPR, в св зи с формулой ECF=((F/100-F)^1/H)?EC50. Концентрацию оксотреморина
3 x ECF получали в стимул ционных планшетах с тем, чтобы концентрацию оксотреморина
EC90 добавить в каждую лунку планшетов дл анализа подавлени антагонистом
стимул ции высвобождени кальци .
Параметрами, используемыми дл FLIPR, были длительность экспозиции 0,4 секунд,
мощность лазера 0,5 ватт, длина волны возбуждени 480 нм и длина волны излучени 550
нм. Базовую линию определ ли, измер изменение флуоресценции в течение 10 секунд
Страница: 50
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
до добавлени агониста. После стимул ции агонистом PLIPR непрерывно измер л
изменение флуоресценции через каждые 0,5-1 секунд в течение 1,5 минут, чтобы уловить
максимальное изменение во флуоресценции.
Изменение флуоресценции выражали как максимальную флуоресценцию минус базова флуоресценци дл каждой лунки. Необработанные данные анализировали в зависимости
от логарифма концентрации лекарственного средства методом нелинейной регрессии с
помощью пакета программного обеспечени GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.,
San Diego, CA), использу встроенную модель дл сигмоидальной кривой (зависимости)
доза-ответ. Значени Ki дл антагониста определ ли согласно Prism, использу значение
EC50 дл оксотреморина как KD и EC90 оксотреморина дл концентрации лиганда согласно
уравнению Cheng-Prusoff (Cheng & Prusoff, 1973).
В этом испытании более низкое значение Ki указывает на то, что испытуемое
соединение имеет более высокую функциональную активность в отношении используемого
в испытании рецептора. Соединение формулы I, как было обнаружено, имеет значение Ki
меньше чем 5 нМ дл блокады агонист-опосредованного высвобождени кальци в клетках
CHO, стабильно экспрессирующих рецептор hM3.
Испытание 3
Определение продолжительности бронхозащиты на модели ацетилхолининдуцированного бронхостеноза у морских свинок
Этот анализ in vivo использовали дл оценки бронхозащитных воздействий испытуемых
соединений, про вл ющих антагонистическую активность в отношении мускариновых
рецепторов.
Группы из шести морских свинок, самцов (Duncan-Hartley (HsdPoc:DH) Harlan, Madison,
WI), весом от 250 до 350 г, были индивидуально отождествлены карточками с
обозначением клетки. На прот жении всего исследовани животные имели доступ к пище и
воде, по желанию.
Испытуемое соединение вводили ингал цией на прот жении 10 минут в камере
экспозиционного дозированного распылени лекарственного препарата (R&S Molds, San
Carlos, CA). Камеры дл дозированного распылени были расположены таким образом,
чтобы аэрозоль одновременно поступал в 6 индивидуальных камер из центрального
коллектора. Морских свинок подвергали воздействию аэрозол испытуемого соединени или эксципиента (WFI). Эти аэрозоли генерировали из водных растворов, использу установку дл распылени звездообразной формы LC (Model 22F51, PARI Respiratory
Equipment, Inc. Midlothian, VA), приводимую в действие смесью газов (CO2=5%, О2=21%
и N2=74%) при давлении 22 фунт/дюйм 2. Скорость газового потока через распылитель при
указанном рабочем давлении составл ла приблизительно 3 л/мин. Генерированные
аэрозоли подавали в камеры под давлением выше атмосферного. Во врем подачи
растворов дл аэрозолизации никакого разбавлени воздухом не использовали. Во врем распылени на прот жении 10 минут распыл лось приблизительно 1,8 мл раствора. Эту
величину определ ли гравитометрически, сравнива массы заполненного распылител перед и после распылени .
Бронхозащитные действи испытуемого соединени , вводимого ингал цией, оценивали,
использу плетизмографию всего тела (регистраци изменений объема всего тела) через
1,5; 24, 48 и 72 часа после введени дозы.
За сорок п ть минут до начала оценки дыхательной функции легких каждую морскую
свинку анестизировали внутримышечной инъекцией кетамина (43,75 мг/кг), ксилазина
(3,50 мг/кг) и ацепромазина (1,05 мг/кг). После того как место дл оперативного
вмешательства было выбрито и очищено 70% спиртом, делали 2-3 см срединный разрез
вентральной стороны шеи. Затем ремную вену отдел ли и подвергали канюлированию
полиэтиленовым катетером, заполненным физиологическим раствором (PE-50, Becton
Dickinson, Sparks, MD), дела возможным внутривенные вливани ацетилхолина (Ach)
(Sigma, St. Louis, MO) в физиологическом растворе. Затем высвобождали трахею и
подвергали канюлированию тефлоновой трубкой 14G (#NE-014, Small Parts, Miami Lakes,
Страница: 51
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
FL). При необходимости анестезию поддерживали дополнительными внутримышечными
инъекци ми вышеупом нутой анестезирующей смеси. Глубину анестезии контролировали
и корректировали, если животное реагировало на сдавливание его лапки или если частота
дыхани была больше чем 100 дыханий/минуту.
Сразу после завершени катетеризаций животное помещали в плетизмограф
(#PLY3114, Buxco Electronics, Inc., Sharon, CT) и вставл ли пищеводный зонд дл измерени (внутриплеврального) давлени (PE-160, Becton Dickinson, Sparks, MD), чтобы
измерить давление, движущее легкие (включающее легочную вентил цию) (давление).
Тефлоновую трахеальную трубку присоедин ли к отверстию плетизмографа, чтобы
позволить морской свинке вдыхать воздух из помещени снаружи камеры. Затем камеру
герметизировали. Дл поддержани температуры тела использовали нагревающую лампу,
и чтобы не допустить возникновени коллапса нижних воздухоносных путей и
гипервентил цию легких у животного, легкие морской свинки 3 раза накачивали 4 мл
воздуха, использу калибровочный шприц объемом 10 мл (#5520 Series, Hans Rudolph,
Kansas City, MO).
Как только было установлено, что базовые значени дл раст жимости легких наход тс в диапазоне 0,3-0,9 мл/см вод. ст. и дл сопротивлени дыхательных путей в диапазоне
0,1-0,199 см вод.ст./мл в секунду, начинали оценку дыхательной функции легких.
Компьютерна программа измерени показателей функции легких Buxco включала сбор и
деривацию значений легочных показателей.
Начало этой программы инициировал экспериментальный протокол и сбор данных.
Изменени в объеме за некоторое врем , которые происход т внутри плетизмографа с
каждым дыханием, измер ли посредством датчика давлени Buxco. Интегриру этот сигнал
по времени, оценивали параметры потока (воздуха) дл каждого дыхани . Этот сигнал,
вместе с изменени ми давлени , движущего легкие, которые собирали, использу датчик
давлени Sensym (#TRD4100), соедин ли через предусилитель Buxco (MAX 2270) с
интерфейсом сбора данных (# SFT3400 и SFT3813). Все другие легочные показатели
получали из этих двух исходных данных.
Базовые значени собирали в течение 5 минут и после этого времени морским свинкам
вводили провокационную пробу Ach. Ach (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) (0,1 мг/мл),
инфузировали внутривенно в течение 1 минуты из насоса-шприца (sp210iw. World
Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL) в указанных ниже дозах и в предписанные
времена от начала эксперимента: 1,9 мкг/минута через 5 минут, 3,8 мкг/минута через 10
минут, 7,5 мкг/минута через 15 минут, 15,0 мкг/минута через 20 минут, 30 мкг/минута
через 25 минут и 60 мкг/минута через 30 минут. Если сопротивление дыхательных путей
или раст жимость легких не возвращались к базовым значени м через 3 минуты после
каждой дозы Ach, легкие морской свинки 3 раза накачивали 4 мл воздуха, использу калибровочный шприц объемом 10 мл. Регистрируемые легочные параметры включали
частоту дыхани (дыханий/минуту), раст жимость легких (мл/см вод.ст.) и сопротивление
дыхательных путей (см вод.ст./мл в секунду). После завершени измерений показателей
функции легких на 35 минуте по данному протоколу, морскую свинку извлекали из
плетизмографа и безболезненно умерщвл ли асфиксией диоксидом углерода.
Данные оценивали одним или обоими из нижеследующих способов:
(a) Сопротивление дыхательных путей (RL, см вод.ст./мл в секунду) рассчитывали из
отношени "изменение в давлении" к "изменение в потоке (воздуха)".
Ответ RL на ACh (60 мкг/мин, ингал ци (IH)) вычисл ли дл групп, получавших
наполнитель и испытуемое соединение. Рассчитывали средний ответ на ACh дл животных, обработанных наполнителем, в каждое врем до лечени , и использовали дл вычислени % подавлени ответа на ACh, во врем , соответствующее времени до
лечени , дл каждой дозы испытуемого соединени . Кривые подавлени доза-ответ дл 'RL' были описаны логистическим уравнением с четырьм параметрами, использу программное обеспечение GraphPad Prism, верси 3.00 дл Windows (GraphPad Software,
San Diego, California), чтобы оценить бронхозащитную ID50 (дозу, необходимую дл Страница: 52
RU 2 337 095 C2
5
10
подавлени ответа на бронхоконстриктор ACh (60 мкг/мин) на 50%). Используемое
уравнение было следующим:
Y=Min+(Max-Min)/(1+10 ((LOG ID50-X)?Hillslope)),
где X означает логарифм дозы, Y представл ет собой ответ (% подавлени индуцируемого ACh увеличени в RL). Y начинаетс в Min и приближаетс асимптотически
к Max по сигмоидальной кривой.
(b) Рассчитывают величину PD2, которую определ ют как количество Ach или
гистамина, необходимое дл того, чтобы вызвать удвоение базового сопротивлени дыхательных путей, использу значени сопротивлени дыхательных путей, полученные из
"потока (воздуха)" и "давлени " в диапазоне введени провокационных доз Ach или
гистамина, использу нижеследующее уравнение (которое получено из уравнени ,
используемого дл вычислени значений PC20, описанного в American Thoracic Society.
Guidelines for methacholine and exercise challenge testing - 1999. Am J Respir Crit
Care Med. 2000; 161:309-329):
15
20
25
30
35
40
45
50
где:
C1 = концентраци Ach или гистамина, предшествующа C2;
C2 = концентраци Ach или гистамина, привод ща к, по крайней мере, 2-кратному
увеличению в сопротивлении дыхательных путей (RL);
R0 = базовое значение RL;
R1 = значение RL после C1;
R2 = значение RL после C2.
Эффективную дозу определ ют как дозу, котора ограничивала реакцию бронхостеноза
на Ach при дозе 50 мкг/мл до удвоени базового сопротивлени дыхательных путей
(PD2(50)).
Статистический анализ данных выполн ли, использу двусторонне ограниченный
критерий Стьюдента. P-значение <0,05 считали значимым.
Обычно, в этом испытании испытуемое соединение, имеющее PD2(50) меньше чем около
200 мкг/мл дл ACh-индуцируемого бронхостеноза через 1,5 часа после введени дозы,
вл етс предпочтительным. Соединение формулы I, как было установлено, имеет PD2(50)
меньше чем около 200 мкг/мл дл ACh-индуцируемого бронхостеноза через 1,5 часа после
введени .
Испытание 4
Ингал ционный тест слюноотделени у морских свинок
Морские свинки (Charles River, Wilmington, MA), весом 200-350 г, были подвергнуты
акклиматизации в услови х пребывани внутри собственной колонии в течение, по крайней
мере, 3 дней после прибыти . Испытуемое соединение или эксципиент дозировали
ингал цией (IH) на прот жении периода 10 минут в камере дозированного распылени (препарата) круглой формы (R+S Molds, San Carlos, CA). Испытуемые соединени раствор ли в стерильной воде и доставл ли, использу распылитель, наполненный 5,0 мл
раствора дл дозировани . Морских свинок удерживали в ингал ционной камере в течение
30 минут. На прот жении этого времени морские свинки были ограничены площадью
примерно 100 см 2. Это пространство было достаточным дл того, чтобы животные могли
свободно поворачиватьс , самосто тельно перемещатьс , и предусматривало
возможность чистки, ухода за поверхностью тела. После 20 минут акклиматизации морских
свинок подвергали воздействию аэрозол , генерируемого из распыл ющего агрегата
звездообразной формы LS (Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian,
VA), приводимого в действие воздухом помещени при давлении 22 фунт/дюйм 2. После
завершени распылени состо ние морских свинок оценивали через 1,5; 6, 12, 24, 48 или
72 часа после обработки.
За час до испытани морских свинок подвергали анестезии внутримышечной (IM)
Страница: 53
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
инъекцией смеси кетамина 43,75 мг/кг, ксилазина 3,5 мг/кг и ацепромазина 1,05 мг/кг
при объеме 0,88 мл/кг. Животных размещали брюшной стороной вверх на поверхности с
обогреваемым (37°C) покрытием, наклоненной под углом 20 градусов, с запрокинутой
назад головой. В рот морской свинки помещали 4-слойную марлевую м гкую прокладку,
размером 2x2 дюйма, (тампоны из Nu- марли общего пользовани , Johnson and Johnson,
Arlington, TX). Через п ть минут после этого вводили мускариновый агонист, пилокарпин
(3,0 мг/кг, подкожно) и марлевую м гкую прокладку сразу же отбрасывали и замен ли
новой предварительно взвешенной марлевой м гкой прокладкой. Слюну собирали в
течение 10 минут и по истечении этого времени марлевую прокладку взвешивали и
фиксировали разницу в массе, чтобы определить количество накопленной слюны (в мг).
Рассчитывали среднее количество слюны, собранной у животных, получавших
наполнитель и получавших каждую дозу испытуемого соединени . Считали, что среднее
(значение) дл группы, получавшей наполнитель, вл етс 100% слюноотделением.
Результаты рассчитывали, использу средние результатов (n=3 или больше).
Доверительные интервалы (95%) рассчитывали дл каждой дозы в каждый момент
времени, использу двухсторонний ANOVA (two-way ANOVA). Эта модель представл ет
собой модифицированную версию способа, описанного в Rechter, "Estimation of
anticholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpine-induced
salivation" Ata Pharmacol Toxicol, 1996, 24:243-254.
Рассчитывали среднюю массу слюны у животных, обработанных наполнителем, в
каждый момент времени до лечени , и использовали дл вычислени % подавлени слюноотделени , во врем , соответствующее времени до лечени , дл каждой дозы.
Данные подавлени "доза-ответ" были описаны логистическим уравнением с четырьм параметрами, использу программное обеспечение GraphPad Prism, верси 3.00 дл Windows (GraphPad Software, San Diego, California), чтобы оценить ID50 (дозу, необходимую
дл подавлени пилокарпин-вызываемого слюноотделени на 50%) дл средства,
подавл ющего слюноотделение. Используемое уравнение было следующим:
Y=Min+(Max-Min)/(1+10 ((LOG ID50-X)?Hillslope))
где X означает логарифм дозы, Y представл ет собой ответ (% подавлени слюноотделени ). Y начинаетс в Min и приближаетс асимптотически к Max по
сигмоидальной кривой.
Отношение ID50 дл средства, подавл ющего слюноотделени , к бронхозащитной ID50
использовали дл вычислени показател кажущейс селективности испытуемого
соединени по отношению к легким. Обычно соединени , имеющие показатель кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким больше чем около 5,
вл ютс предпочтительными. В этом испытании соединение формулы I имело показатель
кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким больше чем
около 5.
Испытание 5
Метахолин-индуцируемые депрессорные ответы у наход щихс в сознании морских
свинок
В этих исследовани х использовали здоровых, взрослых морских свинок-самцов линии
Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, IN), весом от 200 до 300 г. Под анестезией
изофлураном (под ее действием) животных снабжали обычными катетерами (PE-50 трубка)
через сонную артерию и ремную вену. Катетеры были выведены наружу, использу подкожный туннель в подлопаточную область. Все хирургические разрезы зашивали
шелковой нитью 4-0 Ethicon и катетеры блокировали гепарином (1000 единиц/мл). По
окончании хирургического вмешательства каждому животному вводили физиологический
раствор (3 мл, подкожно), а также бупренорфин (0,05 мг/кг, внутримышечно). Животным
предоставл ли возможность прийти в себ на электрогрелке до того, как возвратить их в
помещение содержани .
Приблизительно после 18-20 часов после оперативного вмешательства животных
взвешивали и катетер через сонную артерию соедин ли с датчиком дл регистрации
Страница: 54
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
артериального давлени . Артериальное давление и частоту сердечных сокращений
фиксировали, использу систему сбора данных Biopac MP-100. Животным предоставл ли
возможность акклиматизироватьс и стабилизировать свое состо ние в течение 20 минут.
Каждому животному вводили провокационную пробу метилхолина (MCh) (0,3 мг/кг,
внутривенно (в.в.)) через линию ремной вены и ответы сердечно-сосудистой системы
контролировали на прот жении 10 минут. Затем животных помещали в камеру
дозированного распылени (препарата), которую соедин ли с распылителем, содержащим
раствор испытуемого соединени или наполнител . Раствор распыл ли в течение 10
минут, использу газовую смесь из вдыхаемого воздуха и 5% диоксида углерода, со
скоростью потока 3 литра/минуту. Затем животных удал ли из камеры дозированного
распылени (препарата) и возвращали в их соответствующие клетки. Через 1,5 и 24 часа
после дозировани животным вновь вводили провокационную дозу MCh (0,3 мг/кг, в.в.) и
фиксировали гемодинамический ответ. После этого животных подвергали эвтаназии
пентобарбиталом натри (150 мг/кг, в.в.).
MCh вызывает снижение среднего артериального давлени (MAP) и замедление
сердечных сокращений (брадикарди ). Максимальное уменьшение, исход из базового, в
MAP (депрессорные ответы) измер ли дл каждого введени провокационной дозы MCh
(до и после дозировани IH). Изменени в брадикардических симптомах не использовали
дл анализа, поскольку эти ответы не были устойчивыми и воспроизводимыми.
Воздействие лечени на ответы MCh выражали как % ингибировани (среднее+/-ст.ош.ср.)
контрольных депрессорных ответов. Двухсторонний тест ANOVA с соответствующей
обработкой данных использовали дл тестировани вли ни лечени и времени
предварительного лечени . Депрессорные ответы на MCh относительно не измен лись
через 1,5 и 24 часа после дозировани ингал цией наполнител .
Отношение ID50 антидепрессора к бронхозащитной ID50 использовали дл вычислени кажущейс селективности испытуемого соединени по отношению к легким. Обычно
соединени , имеющие показатель кажущейс селективности испытуемого соединени по
отношению к легким больше чем около 5, вл ютс предпочтительными. В этом испытании
соединение формулы I имело показатель кажущейс селективности испытуемого
соединени по отношению к легким больше чем 5.
Хот насто щее изобретение было описано выше, ссыла сь на его конкретные аспекты
или конкретные варианты воплощени , дл специалистов в данной области, очевидно, что
в него могут быть внесены различные изменени или использованы эквиваленты, не
выход щие за рамки существа и объема изобретени . Кроме того, в степени, разрешенной
соответствующим (действующим) статусом патента и регламетированием пор дка его
выдачи, все публикации, патенты и патентные за вки, цитируемые здесь, вход т в
насто щее описание в полном объеме посредством ссылки в такой же степени, как если бы
каждый документ был индивидуально включен в него посредством ссылки.
Формула изобретени 40
1. Соединение формулы I:
45
50
где R 4 представл ет собой водород;
R 5 выбран из C1-6алкила, С3-6циклоалкила и -CH2-R 8; где алкильна группа
необ зательно замещена -ОН или 1-5 фтор-заместител ми; R 8 выбран из С3-6циклоалкила
или фенила;
Страница: 55
CL
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
a, b и с равны 0; d равно 1; е равно 8 или 9;
или его фармацевтически приемлема соль, или его сольват, или его стереоизомер.
2. Соединение по п.1, где стереохими в 3-положении пирролидинового кольца
представл ет (S)-конфигурацию.
3. Соединение по п.1, где стереохими в 3-положении пирролидинового кольца
представл ет (R)-конфигурацию.
4. Соединение по п.2 или 3, где R 5 представл ет собой C1-3алкил, где алкильна группа
необ зательно замещена -ОН или 1-3 фтор-заместител ми.
5. Соединение по п.2 или 3, где R 5 представл ет собой метил.
6. Соединение, выбранное из:
2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-циклопентиламинооктил)пирролидин]-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(2-гидроксиэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(5)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[8-(2,2,2-трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(8-бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-изопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-проп-1-иламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклопропиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклобутиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-циклопентиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-этиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(2-гидроксиэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[8-(2,2,2-трифторэтил)аминооктил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(8-бензиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(S)-1-(9-этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(2-гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(S)-1-[9-(2,2,2-трифторэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
Страница: 56
RU 2 337 095 C2
5
10
15
20
25
30
35
2-[(S)-1-(9-бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-метиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамид;
2-[(R)-1-(9-изопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-проп-1-иламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклопропиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклобутиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-циклопентиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-этиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(2-гидроксиэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(R)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2дифенилацетамида;
2-{(R)-1-[9-(2,2,2-трифторэтил)аминононил]пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамида;
2-[(R)-1-(9-бензиламинононил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
2-[1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида;
или их фармацевтически приемлемой соли, или их сольвата.
7. Соединение по п.6, выбранное из 2-[(S)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2дифенилацетамида, 2-[(R)-1-(8-метиламинооктил)пирролидин-3-ил]-2,2-дифенилацетамида
или их фармацевтически приемлемой соли, или их сольвата.
8. Фармацевтическа композици , обладающа антагонистической активностью в
отношении мускариновых рецепторов, содержаща фармацевтически приемлемый
носитель и терапевтически эффективное количество соединени по любому одному из пп.1
или 6.
9. Фармацевтическа композици по п.8, где композици пригодна дл введени ингал цией.
10. Способ лечени млекопитающего, имеющего клиническое состо ние, облегчаемое
лечением антагонистом мускариновых рецепторов, где способ включает введение
млекопитающему терапевтически эффективного количества соединени по любому одному
из пп.1 или 6.
11. Способ лечени легочного нарушени , хронической обструктивной болезни легких
или астмы, где способ включает введение пациенту, нуждающемус в таком лечении,
терапевтически эффективного количества соединени по любому одному из пп.1 или 6.
12. Способ бронходилатации у пациента, где способ включает введение пациенту
продуцирующего бронходилатацию количества соединени по любому одному из пп.1 или
6.
13. Способ получени соединени формулы I:
40
45
или его соли, или его сольвата, или его стереоизомера;
где способ включает:
а) взаимодействие соединени формулы V
50
Страница: 57
RU 2 337 095 C2
5
с соединением формулы VIII:
10
15
20
25
30
где L 2 представл ет собой удал емую группу, предпочтительно хлор, бром, йод,
ацетокси, трифторацетокси, тозил, мезил, брозил, нозил;
?
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
749 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа