close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2337358

код для вставки
–ќ——»…— јя ‘≈ƒ≈–ј÷»я
RU
(19)
(11)
2 337 358
(13)
C1
(51) ћѕ G01N 33/15
(2006.01)
‘≈ƒ≈–јЋ№Ќјя —Ћ”∆Ѕј
ѕќ »Ќ“≈ЋЋ≈ “”јЋ№Ќќ… —ќЅ—“¬≈ЌЌќ—“»,
ѕј“≈Ќ“јћ » “ќ¬ј–Ќџћ «Ќј јћ
(12)
ќѕ»—јЌ»≈ »«ќЅ–≈“≈Ќ»я ѕј“≈Ќ“”
(21), (22) «а†вка: 2007112306/15, 03.04.2007
(72) јвтор(ы):
‘илинова ≈лена ёрьевна (RU),
иселев —ергей ћихайлович (RU),
—оловьев јндрей »ванович (RU)
(24) ƒата начала отсчета срока действи† патента:
03.04.2007
(45) ќпубликовано: 27.10.2008 Ѕюл. є 30
(54) —ѕќ—ќЅ —ѕ≈ “–ќ‘ќ“ќћ≈“–»„≈— ќ√ќ ќѕ–≈ƒ≈Ћ≈Ќ»я ќЌ÷≈Ќ“–ј÷»»
R U
2 3 3 7 3 5 8
Ћ»ѕќ—ќћјЋ№Ќќ »Ќ јѕ—”Ћ»–ќ¬јЌЌџ’ ‘ј–ћј÷≈¬“»„≈— »’ ѕ–≈ѕј–ј“ќ¬
последующее измерение концентрации вышедшего
в раствор цитостатика, при этом липосомальные
везикулы
разрушают
добавлением
к
липосомальной суспензии, разбавленной 2ћ
раствором хлорида натри† в соотношении 1:1, 3кратного объема хлороформа. ѕосле чего пробы
нагревают до 50-60∞—, центрифугируют при 5000 g
в течение 5 мин, концентрацию вышедшего в
водную
фазу
цитостатика
определ†ют
спектрофотометрически. »зобретение
обеспечивает повышение точности определени†. 2
табл., 4 ил.
—траница: 1
RU
C 1
C 1
2 3 3 7 3 5 8
јдрес дл† переписки:
115446, ћосква, аширское ш., 21,
Ќекоммерческа† организаци† ”чреждение
"ѕ–ќ√–≈——»¬Ќџ≈ ћ≈ƒ»÷»Ќ— »≈
»——Ћ≈ƒќ¬јЌ»я", Ќаучно-исследовательска†
лаборатори†, ≈.ё. ‘илиновой
(57) –еферат:
»зобретение относитс† к области исследовани†
и анализа веществ и может быть использовано дл†
определени†
концентрации
исследуемого
вещества
при
разработке
новых
сложных
лекарственных
форм
фармацевтических
препаратов
с
использованием
спектрофотометрического
метода.
—пособ
определени†
концентрации
липосомально
инкапсулированных фармацевтических препаратов
цитостатиков гидрофильной природы включает
разрушение
липосомальных
везикул
и
R U
(56) —писок документов, цитированных в отчете о
поиске: LUKYANOV AN et al. Tumor-targeted
liposomes: doxorubicin-loaded longcirculating liposomes modified with anticancer antibody. J Control Release. 2004 Nov
5; 100(1):135-44. RU 2112775 C1, 10.06.1998.
RU 2281753 C1, 20.08.2006. RU 2139083 C1,
10.10.1993. RU 2275619 C2, 10.05.2005. EP
0524788 A1, 27.01.1993.
(73) ѕатентообладатель(и):
Ќекоммерческа† организаци† ”чреждение
"ѕ–ќ√–≈——»¬Ќџ≈ ћ≈ƒ»÷»Ќ— »≈
»——Ћ≈ƒќ¬јЌ»я" (RU)
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 337 358
(13)
C1
(51) Int. Cl.
G01N 33/15
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2007112306/15, 03.04.2007
(72) Inventor(s):
Filinova Elena Jur'evna (RU),
Kiselev Sergej Mikhajlovich (RU),
Solov'ev Andrej Ivanovich (RU)
(24) Effective date for property rights: 03.04.2007
(45) Date of publication: 27.10.2008 Bull. 30
(73) Proprietor(s):
Nekommercheskaja organizatsija Uchrezhdenie
"PROGRESSIVNYE MEDITsINSKIE
ISSLEDOVANIJa" (RU)
2 3 3 7 3 5 8
R U
subsequent
measurement
of
cytostatics
concentration
left
in
the
solution,
thus
liposomal vesicles are destructed with addition
of 3-fold volume of chloroformium to the
liposomal suspension diluted with the 2M solution
of sodium chloride in the ratio 1:1. Then heat up
the samples to 50-60∞C, centrifugate at 5000 g
during 5 minutes, concentration of cytostatics
left in a water phase define spectrophotometrically.
EFFECT: increase of determination accuracy of
substances concentration.
2 tbl, 4 ex
—траница: 2
EN
C 1
C 1
LIPOSOMALLY BAGGED PHARMACEUTICAL PREPARATIONS
(57) Abstract:
FIELD: medicine, pharmaceutics.
SUBSTANCE: invention concerns area of research
and analysis of substances and can be used for
determination of concentration of investigated
substance by working out of new complicated
medicinal forms of pharmaceutical preparations
with use of the spectrophotometric method. The
determination
method
of
concentration
of
liposomally
bagged
pharmaceutical
cytostatic
preparations
of
hydrophylic
nature
includes
destruction
of
liposomal
vesicles
and
the
2 3 3 7 3 5 8
(54) METHOD OF SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF CONCENTRATION OF
R U
Mail address:
115446, Moskva, Kashirskoe sh., 21,
Nekommercheskaja organizatsija Uchrezhdenie
"PROGRESSIVNYE MEDITsINSKIE
ISSLEDOVANIJa", Nauchno-issledovatel'skaja
laboratorija, E.Ju. Filinovoj
RU 2 337 358 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
»зобретение относитс† к области исследовани† и анализа различных веществ, в
частности фармацевтических препаратов, и может быть использовано дл† определени†
концентрации исследуемого вещества при разработке новых сложных лекарственных форм
с использованием спектрофотометрического метода.
»звестен способ спектрофотометрического определени† концентраций различных
индикаторов в воде, в соответствии с которым водный раствор очищают от механических
примесей и осветл†ют центрифугированием, полученный раствор раздел†ют на равные
порции по числу определ†емых индикаторов и в каждую порцию добавл†ют
дополнительные реагенты дл† анализа соответствующих индикаторов, а количественное
содержание отдельных индикаторов в исходной пробе определ†ют по результатам
оптических измерений каждой приготовленной порции раствора относительно величины
естественного уровн† фона при длинах волн, характерных дл† исследуемых индикаторов,
при этом анализ провод†т по результатам трех оптических измерений каждой смеси и
измерение концентрации отдельных индикаторов при их совместном присутствии в пробе
воды осуществл†ют интерпол†ционным методом по результатам трех анализов - исходной
пробы без добавки и исходной пробы с двум† добавками, сначала фиксированного
количества исследуемого индикатора, затем фиксированного количества воды [1].
Ќедостатком способа †вл†етс† относительно узка† область применени†.
»звестен также способ, который заключаетс† в дезинтеграции липосомальных везикул
нагреванием до температуры 90-100∞— [3].
Ќедостатком этого способа †вл†етс† относительно низка† точность, поскольку
возникает обратна† интеграци† везикул при остывании смеси. ¬ результате
липосомальные везикулы и мицеллы формируютс† заново и часть препарата попадает
обратно в липосомы, поэтому в водном растворе можно измерить лишь оставшуюс† часть
реальной концентрации препарата.
«аслуживает внимани† способ осаждени† липосом, нагруженных препаратом с помощью
протамин сульфата, с последующим спектрофотометрическим определением
неинкапсулированного вещества в полученном супернатанте [5].
ќднако метод имеет существенные ограничени†, св†занные с возможностью
соосаждени† определ†емого вещества.
Ќаиболее близким по своей сущности к предлагаемому †вл†етс† способ, основанный на
разрушении липидных везикул в водном растворе цитостатиков путем введени† в него
0,05% раствора “ритон-100 и последующем флуориметрического измерени† концентрации
вышедшего в водный раствор препарата [4].
Ќедостатком метода †вл†етс† относительно низка† точность, вызванна† образование
различных мицелл†рных форм определ†емого препарата, что приводит к серьезным
погрешност†м в измерени†х и вызывает трудности в интерпретации получаемых
результатов. роме того, “ритон-100 обладает широким спектром поглощени† и
флуоресценции с несколькими максимумами. —пособ имеет также относительно
ограниченную область применени†, поскольку фармпрепарат должен либо обладать
собственным спектром флуоресценции в видимой области, либо быть окрашенным
флуоресцентным красителем.
“ребуемый технический результат заключаетс† в расширении области применени† и
повышении точности.
“ребуемый технический результат достигаетс† тем, что в способе, основанном на
разрушении липосомальных везикул и последующем измерении концентрации вышедшего
в водный раствор препарата цитостатика, разрушение липидных везикул провод†т путем
введени† трехкратного объема хлороформа с последующим нагревом и
центрифугированием, а измерение концентрации вышедшего в водный раствор препарата
производ†т фотометрическим методом.
роме того, требуемый технический результат достигаетс† тем, что разрушение
липидных везикул провод†т в присутствии 2ћ раствора хлорида натри† в соотношении 1:1.
роме того, требуемый технический результат достигаетс† тем, что нагрев перед
—траница: 3
DE
RU 2 337 358 C1
5
10
15
20
25
центрифугированием провод†т до 50-60∞—.
ќптическую плотность вышедшего в водную фазу препарата определ†ют
фотометрически по поглощению на спектрофотометре.
Ќа графических изображени†х представлены:
Ќа фиг.1 - кривые выживаемости клеточной линии, чувствительной к воздействию
препарат (фиг.1, а - липосомальна† форма 1, фиг.1, б - липосомальна† форма 2);
на фиг.2 - цитотоксичность липосомальных препаратов с доксорубицином Teva в
сравнении с водной формой (гормононезависима† лини† аденокарциномы MDA-MB-435S);
на фиг.3 - цитотоксичность липосомальных препаратов с гексопиранозидами Ћ’—1098аиЋ’—-1110а.
—пособ спектрофотометрического определени† концентрации липосомально
инкапсулированных фармацевтических препаратов осуществл†етс† следующим образом.
ѕри изготовлении липосомальных препаратов дл† загрузки водорастворимых
фармпрепаратов примен†етс† технологи† рЌ-градиента при инкубации на шейкерной
платформе при +45∞— в течение 30 мин с последующим охлаждением до +4∞—. ƒл†
определени† концентрации фармпрепарата, попавшего в липосомы и оставшегос† внутри,
липосомальные везикулы в присутствии 2ћ буферного раствора хлорида натри† в
соотношении 1:1 разрушают (дезинтегрируют) добавлением в суспензию 3-кратного объема
хлороформа, затем пробы нагревают до 50-60∞— с последующим центрифугированием при
5000g в течение 5 мин.
ќптическую плотность вышедшего в водную фазу препарата определ†ют
спектрофотометрически по поглощению на спектрофотометре, использу† в качестве
контрол† водную фазу, полученную после проведени† вышеописанных операций с
липосомами без препарата.
онцентраци† препарата рассчитываетс† по формуле Ѕугера-Ћамберта-Ѕера [6]:
где ј(?) - оптическа† плотность (поглощение), нм;
30
35
l - оптический путь, см;
—м - мол†рна† концентраци† вещества, выраженна† в моль/л;
'≈ - мол†рный коэффициент экстинкции, ћ -1 см -1;
откуда —M=ј?)/'El.
—пособ дает возможность количественного определени† веществ в двух- и
мультикомпонентных системах, то есть, если липосомальный препарат включает не одно, а
смесь действующих веществ. “огда если компоненты препарата не вступают между собой
в химические реакции, оптическа† плотность раствора представл†ет собой сумму
оптических плотностей компонентов и расчет концентраций компонентов ј и ¬ происходит
при решении системы уравнений:
40
ќткуда
45
50
ƒл† некоторых веществ значени† коэффициента экстинкции хорошо известны, и при
измерени†х нужно только точно воспроизвести услови†, в которых они были получены. ƒл†
других веществ необходимо рассчитывать мол†рный коэффициент экстинкции. Ёто можно
сделать, вз†в точную навеску и приготовив раствор вещества с известной
концентрацией —cm. –екомендуетс† сн†ть спектр водного раствора с известной
концентрацией вещества, а затем приступать к измерени†м на длине волны,
соответствующей одному из максимумов поглощени†.
ћол†рный коэффициент экстинкции рассчитываетс† по формуле
'≈=A(?)/—cml
—траница: 4
RU 2 337 358 C1
»ли
где A(?) - оптическа† плотность (поглощение), нм;
5
10
15
20
Mr - молекул†рна† масса вещества, моль;
mв-ва - масса навески сухого вещества, г;
Vp-pa - объем раствора, л.
«акон Ѕугера-Ћамберта-Ѕера [6] не выполн†етс† в случа†х, когда зависимость A(?) от —M
отклон†етс† от линейной. ƒл† того чтобы расчет концентрации фармпрепаратов по
результатам фотометрического измерени† поглощени† был правомерен, должны
соблюдатьс† несколько условий:
а) измер†ющий световой пучок †вл†етс† монохроматическим;
б) молекулы вещества распределены по всему объему равномерно (истинный раствор)
и их количество в невозбужденном состо†нии не мен†етс† в ходе измерени†;
в) молекулы вещества не измен†ют характер взаимодействий между собой и с
молекулами растворител† при определ†емой концентрации;
г) ослабление выход†щего светового пучка происходит только за счет поглощени†
фотонов, люминесценци†, светорассе†ние, отражение и т.д. не оказывают существенного
вли†ни† на регистрируемый выход†щий поток;
д) измер†ющий монохроматический пучок не приводит к фотохимическим превращени†м
молекул вещества (дл† фотодинамических агентов метод имеет ограничени†).
¬ случае отклонений от закона Ѕугера-Ћамберта-Ѕера необходимо строить
градуировочные графики и рассчитывать относительную ошибку абсорбционного анализа.
Ќапример, соотношение между ошибками измерени† оптической плотности (?ј?) и
пропусканием раствора вещества (?“) выражаетс†
25
30
35
40
45
50
ƒл† оценки достоверности полученных данных с применением разработанного нами
метода проводили контрольные измерени† количества инкапсулированного в липосомы
вещества с применение следующих методов.
1. ћетод хроматографического разделени† незагруженной в липосомы фракции
вещества от включенного в липосомы препарата с последующим фотометрическим
определением незагруженной фракции (пример 1).
2. Ѕиологический тест, основанный на оценке цитотоксической активности
инкапсулированного препарата (пример 2).
¬ зависимости от природы инкапсулируемого в липосому вещества (сродства к водной
фазе) патентуемый метод определени† предполагает возможность оценки концентрации
широкого спектра соединений, обладающих различным индексом
гидрофильно/гидрофобного баланса).
1. ƒл† оценки соединений гидрофильной природы достаточным †вл†етс†
количественное фотометрическое определение концентрации препарата в водной фазе,
причем в широком диапазоне поглощени† (220-620 нм).
2. ƒл† оценки соединений гидрофобной природы достаточным †вл†етс† количественное
фотометрическое определение концентрации препарата в органической фазе хлороформа,
в диапазоне поглощени† (330-620 нм).
3. ƒл† оценки соединений амфифильной природы необходимо количественное
фотометрическое определение концентрации препарата в обоих фазах, в диапозоне
поглощени† (330-620 нм).
—ужение диапазона длин волн, в которых можно проводить количественное
определение концентрации вещества, обусловлено тем фактом, что липиды, стерины и
жирные кислоты, вход†щие в состав липосом, также экстрагируютс† в органическую фазу
примен†емого растворител† и поглощают в диапазоне от 260 до 310 нм. Ёто может внести
существенную ошибку в измерени† и затруднить интерпретацию полученных результатов.
¬о всех случа†х необходимо проводить измерение контрольных образцов (липосом без
препарата) по вышеприведенной схеме.
—траница: 5
RU 2 337 358 C1
5
10
15
20
25
ѕример 1. ќпределение содержани† доксорубицина в липосомальных препаратах ——Ћƒоксорубицин и ј“Ћ-25-ƒоксорубицин
ƒл† определени† концентрации загруженного доксорубицина дезинтеграци†
липосомальных препаратов производилась добавлением 3-кратного объема хлороформа
при нагревании до 60∞— с последующим центрифугированием при 5000g в течение 5 мин.
Ёто делали следующим образом: в 1,5 мл пробирки эппендорф разливали по 100 мкл
образцов липосомальной суспензии, разбавленных 1:1 2ћ раствором NaCl и дл† контрол† по 100 мкл раствора доксорубицина известной концентрации в 2ћ растворе NaCl. ƒалее
добавл†ли в пробирки по 300 мкл хлороформа (производитель - ЂЅорис јвогадрої),
нагревали до 60∞— и центрифугировали при 5000 g.
где —M - мол†рна† концентраци† вещества, выраженна† в моль/л,
ј(495) - оптическа† плотность (поглощение) при 495 нм,
'≈ - коэффициент экстинкции доксорубицина, равный 10650 ћ -1 см -1,
l - толщина образца (оптический путь), см.
–езультаты расчетов приведены в табл.1 в графе Ђ онцентраци† цитостатика, µћї.
¬ случае сложных лекарственных форм цитостатиков, одни из которых представл†ют
собой липосомальные препараты, при изучении их цитотоксического и цитостатического
эффекта необходимо учитывать несколько факторов, оказывающих вли†ние на эти
эффекты. ќсновной из них - это концентраци† загруженного агента, котора† должна быть
по возможности максимальной от исходной концентрации препарата в буфере при
получении суспензии. ¬ то же врем† по данным литературы число молекул доксорубицина
в одной липосоме составл†ет 10 3-10 4 и концентраци† препарата в липосомальной
суспензии не может превышать 200 µћ на мл.
“аблица 1
—одержание компонентов препаратов ——Ћ, ——Ћ-ƒоксорубицин Ћэнс и Teva (Ќидерланды), ј“Ћ-25, ј“Ћ-25-ƒоксорубицин Ћэнс и Teva
’арактеристика
—терически стабилизированные
——Ћ "пустые"
30
35
40
45
јнтиген-направленные
——Ћ-Dox
ј“Ћ-ICO-25 "пустые"
ј“Ћ-ICO-25-Dox
—ери†
19.02
13.04
22.12
24.12
22.12
24.12
07.12
онцентраци† цитостатика, µћ
-
-
41
71
-
-
64
22.12
41
—ери†
20.05
22.02
20.05
08.02
02.06
08.02
02.06
онцентраци† цитостатика, µћ
-
147
345
-
-
102
293
Ѕыло определено, что в случае больших величин концентрации происходит спонтанное
вытекание агента из везикул наружу. ѕо нашим данным дл† получени† устойчивого
цитотоксического эффекта in vitro достаточно концентрации инкапсулированного
цитостатика 50-100 µM на мл, однако дл† достижени† хорошего противоопухолевого
эффекта in vivo концентрации должны быть выше.
ѕример 2. ќпределение содержани† индолокарбазол-нуклеозидпроизводных в
липосомальных препаратах с расчетом коэффициента экстинкции.
¬ этом примере требовалось сн†ть спектры и рассчитать коэффициенты экстинкции
нуклеозидпроизводных. ћол†рные коэффициенты экстинкции рассчитывали по формуле
(6)
'E=A(?)Vp-pa/Mr mв-ваl
ƒалее по той же методике, что и в ѕримере 1, проводили измерени† оптической
плотности на длине волны, соответствующей максимуму поглощени†, и рассчитывали
концентрации препаратов. –езультаты измерений иллюстрируютс† данными,
приведенными в “аблице 2.
“аблица 2
50
—одержание компонентов стерически стабилизированных липосомальных препаратов с гидрохлоридами индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с] карбазол
нуклеозид-производных
’арактеристика
√ексопиранозиды
——Ћ-Ћ’—-1098а
—ери†
08.02
22.03
25.05
ѕентопиранозиды
——Ћ-Ћ’—-1110a
25.0 5
22.02
22.03
—траница: 6
20.07
Ћ’—-1041а
20.07
19.02
07.03
Ћ’—-1063а
22.02
22.03
RU 2 337 358 C1
онцентраци†
цитостатика, µћ
257
119
165
—ери†
15.07
19.07
онцентраци†
цитостатика, µћ
74
45
144
128
66
50
19.07
17.06
17.06
14.07
27
95
37
43
32
116
48
99
41
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
ѕример 3. онтрольный эксперимент по проверке концентрации инкапсулированного в
липосомы препарата
Ћипосомальный препарат (200 мкл суспензии) нанос†т на колонку с Sephadex G25 (2
мл), предварительно уравновешенную фосфатно-солевым буфером (рЌ 7.4). Ёлюцию
липосомальной фракции провод†т в объеме 0.3 объема колонки фосфатно-солевым
буфером, при наличие проточного фотометра провод†т дополнительный контроль полноты
элюции по измерению поглощени† на 280 нћ. Ќеинкапсулированную часть вещества
(низкомолекул†рное соединение (меньше 1 кƒа)) элюируют дополнительно 1.5 мл
элюирующего буфера. —обранную фракцию не включенного в липосому вещества
определ†ют фотометрически по формуле (1)
A(?)='ElCн,
где —н - мол†рна† концентраци† вещества, не включенного в липосомы, моль/л (ћ),
откуда —н=ј ?)/'El
јбсолютное количество вещества, не включенного в липосомы, определ†ют по
следующей формуле:
Ќ=—н?Vэ?ћr
√де H - количество вещества, не включенного в липосомы (г)
—н - мол†рна† концентраци† в-ва, не включенного в липосомы, моль/л (ћ),
Vэ - объем элюата, содержащего неинкапсулированное вещество,
Mr - молекул†рна† масса вещества,
оличество вещества, включенного в липосомы, определ†ют по формуле (5)
где ј - количество вещества, включенного в липосомы,
“ - общее количество вещества (г), вз†тое дл† получени† липосом,
- пересчетный коэффициент, равный отношению объему суспензии липосом, вз†тых
дл† исследовани† количественного содержани† инкапсулированного компонента (V1) к
тотальному объему раствора полученных липосом (V2) k=V1/V2,
Ќ - количество вещества, не включенного в липосомы (г),
ƒанный метод контрол† имеет ограничени† и может быть применен дл† соединений
гидрофильной и амфифильной природы.
ѕример 4. онтрольный эксперимент по оценке цитотоксической активности
липосомально инкапсулированного препарата
ћетод тестировани† цитотоксического эффекта фармпрепаратов in vitro - ћ““ позвол†ет
определить концентрацию цитотоксического агента, необходимую дл† того, чтобы половина
клеток в живой культуре погибла (IC50).
ћетод †вл†етс† относительным и основан на данных, полученных при оценке
цитотоксической активности липосомальных форм препаратов с разным уровнем
инкапсул†ции (загрузки). ƒанный контрольный тест †вл†етс† правомочным дл† оценки
точности получаемых количественных результатов с применением патентуемого метода,
поскольку имеетс† четка† зависимость цитотоксического эффекта препарата от его
концентрации. ƒанный метод контрол† может быть применен дл† соединений
гидрофильной, гидрофобной и амфифильной природы.
1. Ћипосомальную фракцию, полученную после инкапсул†ции препарата в липосомы,
очищают от неинкапсулированного вещества согласно методу, описанному в примере є1.
2. —нимают кривые цитотоксичности двух липосомальных фракций препарата,
отличающихс† разной степенью инкапсулировани† последнего, использу† клеточную
линию, чувствительную к воздействию препарата. ƒл† сравнительной количественной
—траница: 7
RU 2 337 358 C1
оценки содержани† препарата в липосомах используют показатель титра липосомального
препарата, при котором гибнет 50% клеточной попул†ции (Ic50) (фиг.1).
¬ычисл†ют коррел†ционный коэффициент K, равный
5
где X1 - титр липосомального препарата 1,
’2 - титр липосомального препарата 2.
“акое же соотношение оценивали с помощью патентуемого нами способа определени†
концентрации инкапсулированного препарата.
10
где —1 - концентраци† инкапсулированного препарата в липосомальной форме 1,
—2 - концентраци† инкапсулированного препарата в липосомальной форме 2.
—равнение полученных коррел†ционных показателей K1 и K2 показало что данные
величины различаютс† менее чем на 7% (таблица 1, фиг.2, 3).
“аким образом, в предложенном способе достигаетс† требуемый технический результат,
заключающийс† в расширении области применени† и повышении точности, поскольку
исключаетс† требование, что фармпрепарат должен либо обладать собственным спектром
флуоресценции в видимой области, либо быть окрашенным флуоресцентным красителем.
ќтсутствие необходимости использовани† “ритон-100 дл† дезинтеграции также повышает
точность измерений.
ѕри этом дл† измерени† концентрации используетс† спектрофотометрическое, а не
флуориметрическое оборудование, например спектрофотометр Ultraspec-1100 (Amersham).
ћетод не требует использовани† дорогосто†щих коррел†ционных спектрофотометров,
поэтому стоимость оборудовани† дл† пользовани† им в 3-5 раз меньше, чем при
использовании спектрофлуориметрического метода.
роме того, расшир†етс† область применени† способа, поскольку реализуетс†
возможность определени† концентраций как гидрофольных, так и амфифильных и
гидрофобных веществ, а также их содержани† в мультикомпонентных системах, когда
действующий компонент фармпрепарата представлен не одним, а двум†-трем†
веществами.
»сточники информации
1. RU 2275619 —2, G01N 21/17, 2006.
2. Goren D, Horowitz AT, Tzemach D, Tarshish M, Zalipsky S, Gabizon A. "Nuclear
delivery of doxorubicin via folate-targeted liposomes with bypass of multidrugresistance efflux pump", Clin Cancer Res. 2000 May; 6(5): 1949-57.
3. Gardner S.C. "Delipidation treatment for large-scale protein purification
processing" Thesis for MS in Chem. Engineering, Virginia Polytechnic Inst., 1996.
4. Lukyanov AN, Elbayoumi “ј, Chakilam AR, Torchilin VP. "Tumor-targeted liposomes:
doxorubicin-loaded long-circulating liposomes modified with anticancer antibody", J.
Control Release. 2004 Nov 5; 100(1): 135-44.
5. V.Torchilin and V.Weissig, "Liposomes 2 nd eds., A Practical Approach" ed. Oxford
Univercity Press, 2003, 384 pp.
6. ƒункан ј., √орди ¬., ƒжонс Ќ., ћатсен ‘., —андорфи ., ¬ест ¬. Ђѕрименение
спектроскопии в химииї. /ѕод ред. ¬.¬еста. - ћ.: »Ћ, 1959, с.659-61.
15
20
25
30
35
40
45
50
‘ормула изобретени†
—пособ определени† концентрации липосомально инкапсулированных
фармацевтических препаратов цитостатиков гидрофильной природы, включающий
разрушение липосомальных везикул и последующее измерение концентрации вышедшего
в раствор цитостатика, отличающийс† тем, что липосомальные везикулы разрушают
добавлением к липосомальной суспензии, разбавленной 2ћ раствором хлорида натри† в
соотношении 1:1, 3-кратного объема хлороформа, после чего пробы нагревают до 5060∞—, центрифугируют при 5000 g в течение 5 мин, концентрацию вышедшего в водную
фазу цитостатика определ†ют спектрофотометрически.
—траница: 8
CL
RU 2 337 358 C1
—траница: 9
DR
RU 2 337 358 C1
—траница: 10
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
218 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа