close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2337362

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 337 362
(13)
C1
(51) МПК
G01N 33/53
G01N 33/68
(2006.01)
(2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2006143749/15, 12.12.2006
(72) Автор(ы):
Лихванцева Вера Геннадьевна (RU),
Анурова Ольга Александровна (RU),
Верещагина Марина Владимировна (RU)
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
12.12.2006
(45) Опубликовано: 27.10.2008 Бюл. № 30
2 3 3 7 3 6 2
УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ
меланому верифицируют при положительной
реакции S-100 и НМВ-45 с прогнозированием
высокой веро тности метастазировани опухоли
при наличии в ней менее 50 S-100-позитивных
клеток.
Способ
позвол ет
одновременно
верифицировать
увеальную
меланому
и
прогнозировать веро тность ее метастазировани .
1 табл., 1 ил.
R U
2 3 3 7 3 6 2
(54) СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОЙ ВЕРИФИКАЦИИ И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ
Страница: 1
RU
C 1
C 1
Адрес дл переписки:
119021, Москва, ул. Россолимо, 11, НИИГБ
РАМН, Канцел ри , Э.П. Тюриной
(57) Реферат:
Изобретение относитс к области медицины, в
частности к офтальмологии, а именно к
офтальмоонкологии. Способ включает проведение
иммуногистохимического анализа экспрессии белка
S-100 и НМВ-45 в опухолевых клетках с
одновременным подсчетом количества S-100позитивных клеток в поле зрени . Увеальную
R U
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: RU 2244934 С2, 10.09.2004. RU 2197731
С2, 27.01.2003. RU 2193200 С1, 20.11.2002. RU
2192812 С1, 20.11.2002. RU 2005106834 А,
20.08.2006. MOSHARI A., VCLEAN I W. Uveal
melanoma: mean of the longest nucleoli
measured on silver-stained sections. Invest
Ophthalmol Vis Sci., 201 May; 42(6); 1160-3,
найдено в PubMed, PMID:11328722. FOLBERG R
et al. (см. прод.)
(73) Патентообладатель(и):
ГУ Научно-исследовательский институт глазных
болезней РАМН (RU)
(56) (продолжение):
Comparison of direct and microslide pathology measurements of uveal melanomas. Invest Ophthalmol Vis
Sci., 1985 Dec; 26(12); 1788-91 найдено в PubMed, PMID: 4066217.
R U
R U
2 3 3 7 3 6 2
C 1
C 1
2 3 3 7 3 6 2
Страница: 2
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
(11)
2 337 362
(13)
C1
(51) Int. Cl.
G01N 33/53
G01N 33/68
(2006.01)
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2006143749/15, 12.12.2006
(72) Inventor(s):
Likhvantseva Vera Gennad'evna (RU),
Anurova Ol'ga Aleksandrovna (RU),
Vereshchagina Marina Vladimirovna (RU)
(24) Effective date for property rights: 12.12.2006
(45) Date of publication: 27.10.2008 Bull. 30
EFFECT:
possibility
of
verification and prediction of
innidiation.
1 tbl, 1 dwg, 2 ex
R U
2 3 3 7 3 6 2
(57) Abstract:
FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention concerns medicine area,
in particular ophthalmology, namely, -ophthalmooncology. The method includes performance of the
immunohistochemical analysis of an expression of
proteins S-100 and HMB-45 in tumoral cells with
simultaneous calculation of quantity of S-100positive cells in sight. Verify uveal melanoma at
positive
reaction
S-100
and
HMB-45
with
prediction
of
high
probability
of
tumour
innidiation at presence in it less than 50 S-100positive cells.
Страница: 3
EN
uveal
melanoma
probability of its
C 1
C 1
MELANOMA
2 3 3 7 3 6 2
(54) METHOD OF SIMULTANEOUS VERIFICATION AND PREDICTION OF COURSE OF UVEAL
R U
(73) Proprietor(s):
GU Nauchno-issledovatel'skij institut
glaznykh boleznej RAMN (RU)
Mail address:
119021, Moskva, ul. Rossolimo, 11, NIIGB
RAMN, Kantseljarija, Eh.P. Tjurinoj
RU 2 337 362 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Изобретение относитс к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и
предназначено дл одновременной диагностики и прогнозировани метастазировани увеальной меланомы (УМ).
Согласно современным требовани м к диагностике опухолей человека, кажда опухоль
должна быть подтверждена не только на световом или гистологическом уровне, но и на
иммуногистохимическом (ИГХ) уровне. Сегодн в распор жении гистологов имеетс широкий р д тканедифферентационных маркеров, с помощью которых провод т
верификацию опухолей. Под термином «верификаци » подразумевают определение ее
тканевого происхождени или гистогенез.
Дл верификации УМ, как и меланомы кожи используют несколько стандартных
меланомаспецифических маркеров. К ним относ тс : S-100, тирозиназа, меланин-А, НМВ45, MITF [Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - Под
редакцией С.В.Петрова и Н.Т.Райхлина. - Казань. - 2000 г. - Стр.287]. Частота
вы влени этих маркеров в УМ, как и количество позитивных опухолевых клеток к этим
маркерам в опухоли, по данным литературы, колеблетс значительно. Это означает, что
чувствительность различных меланомаспецифических маркеров при верификации
меланом различных локализаций существенно варьирует. Другими словами, по данным
отдельных авторов, могут возникать ситуации, когда эти маркеры не распознают
меланому, при этом реакци с этим маркером будет ложно-отрицательной [Beckenkamp G,
Schafer H, von Domarus D. Immunocytochemical parameters in ocular malignant melanoma.
// Eur J Cancer Clin Oncol, 1988, vol.24, p.41-45; Burnier MN Jr, McLean IW, Gamel
JW. Immunohistochemical evaluation of uveal melanocytic tumors. // Cancer, 1991,
vol.68, p.809-14; Fernando SS, Johnson S, Bate J. Immunohistochemical analysis of
cutaneous malignant melanoma: comparison of S-100 protein, НМВ-45 monoclonal antibody
and NKI-C3 monoclonal antibody. // Pathology, 1994, vol.26, p.16-19. Heegard S,
Jensen OA, Prause JU. Immunohistochemical diagnosis of malignant melanoma of the
conjunctiva and uvea: comparison of the novel antibody against melan-A with S 100
protein and HMB-45. // Melanoma Res, 2000, vol.10, p.350-354].
В св зи с чем, дл уточнени ситуации, а также с целью повышени качества ИГХдиагностики, мы попытались найти наиболее надежные и точные маркеры дл верификации этих опухолей среди других внутриглазных неоплазм. Дл этого мы вз ли из
архива нашего института парафиновые блоки УМ, полученных от 82 пациентов,
прооперированных более 5 лет назад, и провели собственные ИГХ- исследовани . Целью
этих исследований вл лась оценка надежности применени того или иного маркера в
диагностике, или, иными словами, оценка их чувствительности. Это можно было сделать
по анализу количества ложно отрицательных случаев. Дл оценки специфичности
маркеров мы также вз ли и другие внутриглазные опухоли, - лейомиосаркому и лимфому.
Специфичность ИГХ-маркеров, как правило, анализируетс по вы влению ложно
позитивных реакций меланоцитарных маркеров в опухол х немеланоцитарного р да.
Попутно мы проводили ретроспективный анализ результатов ИГХ-исследовани в
коррел ции с клиническими данными по выживаемости пациентов.
Оказалось, что практически все маркеры в подавл ющем большинстве случаев (94,9100%), дают позитивную реакцию с S-100, тирозиназой, меланином-А, HMB-45 и MITF.
Однако чувствительность различных меланомаспецифических маркеров действительно
различаетс . Справедливости ради заметим, что эта разница оказалась намного ниже (см
таблицу), чем описывали упом нутые авторы. Было установлено, что с помощью одного S100 нельз с абсолютной убежденностью утверждать, что S-100-позитивна опухоль меланома. К этому маркеру давали позитивную реакцию и опухоли миогенного р да лейомиосаркомы. То есть, идет речь о том, что этот маркер не вл етс высокоспецифичным, как, например, маркеры меланоцитарного р да тирозиназа, меланинА, HMB-45, MITF. Последние, будучи высоко специфичными маркерами, не давали ложно
позитивных результатов. Следовательно, их присутствие необходимо дл верификации
меланом. Вместе с тем, они давали ложно негативные результаты. Исключение составили
Страница: 4
DE
RU 2 337 362 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
меланин-А и НМВ-45 (таблица). Эти маркеры идеально подходили дл указанных целей.
Как показали собственные исследовани , применение двух маркеров (S-100 и одного из
меланомаспецифических маркеров: НМВ-45) повышает степень надежности ИГХдиагностики. НМВ-45 окрашивает опухолевые клетки всех (100%, см. таблицу) тестируемых
меланом и не окрашивает опухоли другого генеза.
Наш ретроспективный анализ также показал, что существует пр ма тесна св зь между
экспрессией S-100 и выживаемостью пациентов. Этот факт по каким-то причинам не нашел
отражени в литературе или просто не был замечен другими авторами. Оказалось, что чем
меньше в опухоли вы вл етс S-100-позитивных клеток, тем хуже прогноз. Статистический
ретроспективный анализ показал, что критичное количество S-100-позитивных клеток дл прогноза - 50. То есть, говор иными словами, при вы влении в опухоли менее 50 S-100позитивных клеток, веро тность развити метастазов становилась высокой и достигала
82,2%. В качестве доказательства приводим график выживаемости пациентов с двум диаметрально противоположными показател ми в опухоли. Так, согласно этому графику
(чертеж), среди 28 пациентов, с менее 50 S-100-позитивными клетками в опухоли (страта
А), метастазы развились в 9 случа х (32% случаев), а частота их 5-летней выживаемости
составила 68%, соответственно. Среди 29 пациентов с ?50 S-100-позитивных клеток в
опухоли (страта В) метастазирование наступило у 5 человек (17,8% случаев), а
показатель выживаемости достиг 82,2%. Разница в показател х выживаемости достоверна.
Это подтверждено 3 различными тестами контрол качества проведени исследовани .
В св зи с чем, в последующей нашей работе мы стали использовать эти два маркера в
цел х верификации увеальной меланомы, а количественный анализ S-100-позитивных
клеток в опухоли служил нам в качестве маркера дл прогнозировани метастазировани .
Задачей предлагаемого изобретени вл етс разработка такого способа, который
позвол л бы одновременно не только верифицировать увеальную меланому, но и
прогнозировать веро тность развити ее метастазов.
Техническим результатом вл етс решение одновременно двух задач (верификаци опухоли и прогнозирование веро тности ее метастазировани ) с помощью только двух
маркеров (S-100 и НМВ-45) и одноэтапного иммуногистохимического исследовани , что
обеспечивает упрощение способа с позитивным экономическим эффектом.
Технический результат достигаетс за счет использовани двух
тканедифферентационных маркеров S-100 и НМВ-45, отвечающих за принадлежность
опухоли к неоплазмам меланоцитарного р да.
Предлагаемый нами способ прогнозировани осуществл ют следующим образом.
1. После энуклеации глаза с увеальной меланомой готов т парафиновые срезы
толщиной 3-5 микрон по стандарной методике, депарафинируют в ксилоле и регидратируют
в батарее спиртов.
2. Иммуногистохимическое исследование провод т по стандартной методике. Дл открыти антигенных детерминант провод т обработку срезов в цитратном буфере [рН 6,0]
в течение 30 минут при 95°С на вод ной бане.
3. Инкубацию с первичными антителами провод т в течение ночи при 4°С. Дл визуализации реакции антиген-антитело используют стрептавидин-биотиновую тестсистему LSAB+kit [DAKO Corp] согласно инструкции. В качестве хромогена используют
ДАБ+ [DAKO Corp]. В качестве первичных антител используют кроличьи поликлональные
антитела к S-100 (разведение 1:500, DAKO Corp) и НМВ-45 (разведение 1:80, DAKO Corp)
4. Затем срезы докрашивают гематоксилином Майера и заключают в канадский бальзам.
5. Реакцию оценивают с применением светового микроскопа (увеличение Ч400) по
следующим критери м. Отрицательной считали реакцию при отсутствии специфического
окрашивани опухолевых клеток на всей площади опухолевой ткани. Положительную
реакцию расценивали при окрашивании опухолевых клеток. При позитивной реакции
опухолевых клеток с двум маркерами опухоль верифицируют как увеальную меланому.
6. Количественную оценку экспрессии маркера S-100 по срезу определ ют как число
иммунопозитивных клеток в поле зрени микроскопа при увеличении Ч400. В случае, где
Страница: 5
RU 2 337 362 C1
5
10
15
20
25
число S-100-позитивных клеток не достигает 50, определ ют высокий риск развити метастазов. Если число S-100 позитивных клеток в опухоли более или равно 50, то
считают, что риск развити метастазов дл пациента невысок.
Пример 1. Пациент 68 лет. Диагноз: УМ в стадии Т3NoMo на правом глазу. Размеры
опухоли не позвол ли провести органосохранное лечение. Проведена энуклеаци .
Иммуногистохимические исследовани парафинового среза опухоли по указанному
способу вы вили S-100-позитивную и НМВ-45-позитивную опухоль, которую
верифицировали как увеальную меланому. Подсчитали количество S-100-позитивных
клеток на срезе УМ при увеличении Ч400: их оказалось 33. Больной отнесен в группу
высокого риска развити метастазов. Назначены укороченные интервалы между визитами
врача. Незадолго до окончани года наблюдени после энуклеации у больного вы влены
метастазы в печени. Проведена иммунотерапи с целью замедлени скорости
метастазировани .
Пример 2. Пациентка 70 лет. Перенесла энуклеацию левого глаза по поводу УМ в стадии
Т3NoMo размеров. Иммуногистохимически вы вили S-100-позитивную и НМВ-45позитивную опухоль, которую верифицировали как увеальную меланому. Подсчитали
количество S-100-позитивных клеток. На срезе УМ при увеличении Ч400 их оказалось 82.
Пациент отнесен к группе низкого риска развити метастазов. Продолжительное
наблюдение за пациентом в течение 4-х лет показало благопри тное течение заболевание
и отсутствие метастазов.
Таким образом, предложенный способ с высокой степенью веро тности позвол ет
одновременно проводить как верификацию увеальной меланомы, так и оценивать прогноз
ее течени , что позвол ет осуществл ть отбор пациентов в группу риска развити метастазов и обосновывает тактику ведени больных с данной патологией. При этом
использование всего двух маркеров позвол ет сократить продолжительность исследовани и экономические затраты на их проведение.
Тканедифферентационные маркеры Специфичность (%) n=82 Чувствительность (%) n=82
30
35
40
S-100
-
MITF
100
98
Тирозиназа
100
94,2
НМВ-45
100
100
Меланин-А
100
100
Формула изобретени Способ одновременной верификации увеальной меланомы и прогнозировани ее
метастазировани , включающий проведение иммуногистохимического анализа экспрессии
белка S-100 и НМВ-45 с одновременным подсчетом количества S-100-позитивных
опухолевых клеток в поле зрени и верификацию увеальной меланомы при положительной
реакции S-100 и НМВ-45 с прогнозированием высокой веро тности метастазировани опухоли при наличии в ней менее 50 S-100-позитивных клеток.
45
50
Страница: 6
CL
100
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
103 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа