close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент РФ 2337699

код для вставки
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
RU
(19)
(11)
2 337 699
(13)
C1
(51) МПК
A61K 36/28 (2006.01)
A61K 31/715 (2006.01)
A61P 37/08 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
(21), (22) За вка: 2007109359/15, 14.03.2007
(24) Дата начала отсчета срока действи патента:
14.03.2007
(45) Опубликовано: 10.11.2008 Бюл. № 31
C 1
2 3 3 7 6 9 9
R U
(57) Реферат:
Изобретение относитс к фармацевтической
промышленности,
в
частности
к
средству,
способному подавл ть иммунный ответ, лежащий в
основе иммуноглобулин-Е-зависимых
аллергических заболеваний. Новым в изобретении
вл етс применение
водорастворимых
полисахаридов, полученных из листьев мать-и-
мачехи, в качестве средства, способного подавл ть
иммунный
ответ,
лежащий
в
основе
иммуноглобулин-Е-зависимых аллергических
заболеваний. Водорастворимые полисахариды,
полученные из листьев мать-и-мачехи, эффективно
подавл ют иммунный ответ, лежащий в основе
иммуноглобулин-Е-зависимых аллергических
заболеваний. 3 табл.
(56) (продолжение):
данных [он-лайн] 01.03.2007 [Найдено 2007.12.24.] - найдено из Интернет: URL:
htpp//www.medportal.kz/enc zdor/14.htm. RU 2172634 С2, 27.08.2001.
Страница: 1
RU
C 1
(54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ
2 3 3 7 6 9 9
Адрес дл переписки:
634012, г.Томск, пр. Ленина, 3, ГУ НИИ
фармакологии, патентоведу Н.Л. Малюгиной
(73) Патентообладатель(и):
Государственное учреждение Научноисследовательский институт фармакологии
Томского научного центра Сибирского отделени Российской академии медицинских наук ГУ НИИ
фармакологии ТНЦ СО РАМН (RU),
Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образовани "Сибирский государственный медицинский
университет Федерального агентства по
здравоохранению и социальному развитию"
ГОУВПО СибГМУ (RU),
ООО "Инновационные коммуникации" (RU)
R U
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: Статьи. 12.04.2006. Весна: цветы
и...аллерги . Перечень данных [он-лайн]
[Найдено 2007.12.18.]-найдено из Интернет:
URL: htpp//www.vitapharm.ru/notes/2. Бел ков
К.В. Количественное определение
полисахаридов в листь х мать-и-мачехи
(Tissilago farfara L.). - Фармаци , 1999,
т.48, №1, с.23-24. Подростковый возраст.
Обща часть. Аллерги . Перечень (см. прод.)
(72) Автор(ы):
Гольдберг Евгений Данилович (RU),
Дыгай Александр Михайлович (RU),
Данилец Марина Григорьевна (RU),
Гурьев Артем Михайлович (RU),
Бельска Натали Витальевна (RU),
Белоусов Михаил Валерьевич (RU),
Бельский Юрий Павлович (RU),
Юсубов Мехман Сулейманович (RU),
Трофимова Евгени Сергеевна (RU),
Агафонов Владимир Иванович (RU),
Учасова Евгени Геннадьевна (RU)
RUSSIAN FEDERATION
RU
(19)
(11)
2 337 699
(13)
C1
(51) Int. Cl.
A61K 36/28 (2006.01)
A61K 31/715 (2006.01)
A61P 37/08 (2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2007109359/15, 14.03.2007
(24) Effective date for property rights: 14.03.2007
(45) Date of publication: 10.11.2008 Bull. 31
Mail address:
634012, g.Tomsk, pr. Lenina, 3, GU NII
farmakologii, patentovedu N.L. Maljuginoj
C 1
2 3 3 7 6 9 9
Water-soluble polysaccharides made of coltsfoot
leaves effectively suppress immune response
initiating
immunoglobulin-E-dependent
allergic
diseases.
EFFECT: higher efficiency.
3 tbl
R U
(57) Abstract:
FIELD: medicine; pharmacology.
SUBSTANCE:
application
of
water-soluble
polysaccharides made of coltsfoot leaves as agent
suppressing
immune
response
initiating
immunoglobulin-E-dependent
allergic
diseases.
Страница: 2
EN
C 1
(54) AGENT OF ANTIALLERGIC ACTION
2 3 3 7 6 9 9
(73) Proprietor(s):
Gosudarstvennoe uchrezhdenie Nauchnoissledovatel'skij institut farmakologii
Tomskogo nauchnogo tsentra Sibirskogo
otdelenija Rossijskoj akademii meditsinskikh
nauk GU NII farmakologii TNTs SO RAMN (RU),
Gosudarstvennoe obrazovatel'noe uchrezhdenie
vysshego professional'nogo obrazovanija
"Sibirskij gosudarstvennyj meditsinskij
universitet Federal'nogo agentstva po
zdravookhraneniju i sotsial'nomu razvitiju"
GOUVPO SibGMU (RU),
OOO "Innovatsionnye kommunikatsii" (RU)
R U
(72) Inventor(s):
Gol'dberg Evgenij Danilovich (RU),
Dygaj Aleksandr Mikhajlovich (RU),
Danilets Marina Grigor'evna (RU),
Gur'ev Artem Mikhajlovich (RU),
Bel'skaja Natalija Vital'evna (RU),
Belousov Mikhail Valer'evich (RU),
Bel'skij Jurij Pavlovich (RU),
Jusubov Mekhman Sulejmanovich (RU),
Trofimova Evgenija Sergeevna (RU),
Agafonov Vladimir Ivanovich (RU),
Uchasova Evgenija Gennad'evna (RU)
RU 2 337 699 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Изобретение относитс к медицине, конкретно к клинической иммунологии, и может быть
использовано дл фармакологической коррекции нарушений в иммунной системе,
наблюдающихс при аллергических (иммуноглобулин-Е-зависимых) заболевани х.
В насто щее врем в терапии аллергических состо ний, зависимых от иммуноглобулина
Е (IgE), используют методы клеточной технологии и фармакологической коррекции.
Лекарственные средства, примен емые дл такой коррекции, вл ютс гистаминолитиками и представлены двум группами препаратов: H1-антигистаминные
средства и стабилизаторы мембран тучных клеток [Энциклопеди лекарств, №11, 2004]. В
основе механизма действи H1-антигистаминных средств (например, фенкарол, кларитин,
супрастин, астемизол) лежит блокирование рецепторов к гистамину, в то врем как
стабилизаторы мембран тучных клеток (например, кетотифен, кромогексал, цетиризин)
преп тствуют входу кальци в тучные клетки и, как следствие этого, тормоз т их
дегранул цию. Выбор таких фармакологических мишеней основан на патогенезе данных
заболеваний, представл ющих собой реакции гиперчувствительности немедленного типа.
Выдел ют иммунологическую, патохимическую и патофизиологическую стадии данной
реакции. H1-антигистаминные средства направлены на коррекцию нарушений,
возникающих в патофизиологическую стадию, а стабилизаторы мембран тучных клеток патохимическую.
Фармакологические средства, которые могли бы купировать развитие аллергических
реакций на более ранних этапах, пока не созданы, однако активно исследуют возможность
применени препаратов, содержащих антитела к иммуноглобулину Е. Следует отметить,
что в насто щее врем достаточно широко используют метод иммунотерапии,
направленный на коррекцию нарушений функционировани иммунной системы именно в
ранние этапы патогенеза атопических (IgE-зависимых) заболеваний, суть которого
заключаетс в многократном введении аллергена в возрастающих дозах [Медицинска микробиологи , иммунологи и вирусологи , 1998]. В результате этого повышаетс продукци антител, относ щихс к классам G и М, что позвол ет нам предполагать
развитие Th1-зависимого иммунного ответа. Существенным недостатком данной
иммунотерапии вл етс необходимость точной диагностики аллергена, что возможно
далеко не дл всех пациентов.
Задачей, решаемой данным изобретением, вл етс расширение арсенала средств,
обладающих противоаллергической активностью и действующих на наиболее ранние этапы
формировани Тh2-зависимых аллергических реакций, св занных с выработкой
иммуноглобулинов Е.
Поставленна задача решаетс путем применени водорастворимых полисахаридов,
полученных из листьев мать-и-мачехи, в качестве средства, обладающего
противоаллергической активностью.
Принципиально новым в предлагаемом изобретении вл етс применение
водорастворимых полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи, в качестве
средства, обладающего противоаллергической активностью за счет подавлени Тh2зависимых реакций.
Новое свойство водорастворимых полисахаридов, полученных из листьев мать-имачехи, установлено экспериментально.
Новое свойство полисахаридов вным образом не вытекает дл специалиста из уровн техники и описание его не обнаружено авторами в патентной и научно-медицинской
литературе. В качестве противоаллергического средства водорастворимые полисахариды,
полученные из листьев мать-и-мачехи, можно использовать дл профилактики и лечени IgE-зависимых заболеваний, таких как бронхиальна астма, аллергический бронхит,
аллергический ринит, поллиноз, атопический дерматит, аллергический конъюнктивит,
крапивница.
Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критери м
изобретени , а именно - «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленна применимость».
Страница: 3
DE
RU 2 337 699 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Полисахариды получены по стандартной методике [Методы исследовани углеводов,
1975]. Сырье листь мать-и-мачехи измельчали и просеивали через сита с размером пор 1
и 3 мм, экстрагировали водой при перемешивании в течение 30-180 мин при нагревании на
вод ной бане (температура 80-100°С), при соотношении сырье:экстрагент от 1:10 до 1:
50. После этого сырье с экстрагентом оставл ли на врем от 6 до 36 часов в прохладном
месте дл настаивани . Затем экстрагент отдел ли от сырь фильтрованием, экстракцию
повтор ли вновь в тех же услови х. После фильтрации полученные извлечени объедин ли и упаривали до 1/5 объема. Полисахариды осаждали добавлением к
полученному раствору двукратного количества 96%-ного этанола. Выпавший осадок
центрифугировали, отдел ли от раствора, промывали 96% этиловым спиртом и
высушивали. Выход водорастворимых полисахаридов составл л 0,7 г (7%). Сумма
водорастворимых полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи, представл ла
собой порошок молочно-белого цвета с кремовым оттенком.
Эксперименты проведены на 20 беспородных и 60 линейных мышах (BAlb/с), а также на
12 беспородных крысах. В предварительных экспериментах было вы влено, что
оптимальной суточной дозой полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи,
вл етс 10 мг/кг массы тела.
Противоаллергические свойства изучены на модели анафилактической реакции,
которую вызывали у мышей линии BAlb/с путем двукратной иммунизации овальбумином.
Выбор такой модели не случаен: известно, что мыши данной линии (BAlb/с) в ответ на
антиген развивают преимущественно Th2 тип иммунного ответа [Hsieh C.S. et al., 1995],
а овальбумин с гидроокисью алюмини вл етс стандартным антигеном, вызывающим
Тh2-зависимый иммунный ответ [Oshiba A. et al., 1997].
Животным вводили под кожу бедра овальбумин (100 мкг/мышь) с гидроокисью алюмини (5 мг/мышь, оба «Sigma») в качестве адъюванта в 0,1 мл физиологического раствора
хлорида натри (ФР) с интервалом 2 недели между инъекци ми. Мышам контрольной
группы вводили по 0,1 мл ФР. Вли ние водорастворимых полисахаридов, полученных из
листьев мать-и-мачехи, на протекание анафилактической реакции исследовали с
использованием 40 мышей линии BAlb/с. Водорастворимые полисахариды, выделенные из
листьев мать-и-мачехи, вводили по 10 мг/кг массы тела внутрибрюшинно в 0,2 мл ФР,
контрольной группе также вводили то же количество ФР. Животные опытной группы
получали полисахариды за 5 дней до каждой иммунизации и в течение 4 дней после первой
иммунизации (всего 15 введений). Через 7 дней после второй иммунизации у части
животных (40 мышей BAlb/с) вызывали анафилактический шок, а у другой части (20 мышей
BAlb/с) забирали сыворотку дл определени в ней уровн аллерген-специфических
иммуноглобулинов классов G1 и Е.
Анафилактическа реакци развивалась после инъекции разрешающей дозы
овальбумина, которую вводили внутривенно (по 10 мкг в 0,1 мл ФР в ретроорбитальный
синус). Результаты анафилактической реакции учитывались по следующим критери м:
- легка степень - цианоз, незначительные судороги, угнетенное состо ние;
- средн степень - цианоз, клонические судороги, угнетенное состо ние, рко
выраженные параличи, положение «л гушки»;
- т жела степень - цианоз, клонические судороги, угнетенное состо ние, рко
выраженные параличи, положение «л гушки», летальный исход.
Вли ние полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи, на продукцию IgE- и
IgG1-аллерген-специфических антител в сыворотке иммунизированных овальбумином
мышей линии BAlb/с определ ли методом пассивной кожной анафилаксии (ПКА) с
использованием беспородных крыс и мышей [Хаитов P.M. с соавт., 1999].
Титры IgG1 антител, специфических к овальбумину, определ лись на 20 беспородных
мышах-самцах. Сыворотку крови иммунизированных мышей в различных разведени х
вводили в объеме 30 мкл внутрикожно в область спины. Разрешающую дозу овальбумина
(0,5 мг в 0,2 мл 0,5% раствора синего Эванса в ФР) вводили мышам в ретроорбитальный
синус через 2 часа после внутрикожного введени сыворотки. Интенсивность ПКА
Страница: 4
RU 2 337 699 C1
5
10
15
20
оценивали через 30 мин по площади окрашенных участков кожи, дл чего животных
забивали, отдел ли кожу и на внутренней поверхности кожи замер ли площадь
прокрашенного участка.
Титры IgE антител, специфических к овальбумину, определ ли на 12 беспородных
крысах-самцах. Животным внутрикожно в область живота вводили сыворотку крови
иммунизированных мышей в различных разведени х в объеме 30 мкл. Разрешающую
инъекцию овальбумина делали крысам в хвостовую вену через 24 часа после пассивной
иммунизации (100 мкг овальбумина на 100 г массы тела в 1 мл 0,5% раствора синего
Эванса на ФР). Интенсивность ПКА оценивали через 30 мин по площади окрашенных
участков кожи, аналогично описанной выше.
Статистическую обработку проводили при помощи t-критери Стьюдента. Различи показателей считали достоверными при р<0,05.
Курсовое введение полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи, привело к
снижению т жести анафилактической реакции (табл.1). В контрольной группе животных,
которым вводили внутрибрюшинно физиологический раствор, т жела анафилактическа реакци развивалась у большинства животных - 70% и у половины мышей опытной группы.
Только у трети мышей контрольной группы наблюдалась реакци средней степени т жести,
а в опытной, получавших полисахариды, у половины. Анафилактический шок пережили
40% животных контрольной и 60% мышей опытной групп. Таким образом,
водорастворимые полисахариды, полученные из листьев мать-и-мачехи, способствовали
ослаблению т жести анафилактической реакции и увеличению выживаемости животных от
анафилактического шока.
Таблица 1.
Вли ние курсового введени водорастворимых полисахаридов (ПС), полученных из листьев мать-и-мачехи, на т жесть анафилактической
реакции иммунизированных овальбумином мышей (Х±m)
25
Курсовое введение
Количество животных (%) с разной степенью т жести реакции
легка 30
35
40
средн % летальности
т жела Растворитель (контроль)
0
30
70
60
ПС мать-и-мачехи (опыт)
0
50
50
40
Полисахариды, полученные из листьев мать-и-мачехи, вызывали снижение уровн специфических к овальбумину IgG1 антител в сыворотке крови мышей (табл.2). Площадь
окрашенных участков кожи при введении сыворотки иммунизированных животных была
значительно ниже, чем при введении сыворотки мышей контрольной группы, не
получавшей полисахариды. При использовании максимального количества (разведение
1/4) сыворотки наблюдалось снижение окрашенной площади кожи на 60%, при введении
сыворотки в разведении 1/8 - на 85%, а при введении сыворотки, разведенной 1/16,
площадь окрашенного участка уменьшилась на 90%. Не дали реакцию ПКА в разведении
1/16 20% мышей опытной группы. Таким образом, курсовое введение полисахаридов матьи-мачехи приводило к снижению концентрации антиген-специфических IgG1 антител.
Таблица 2.
Вли ние курсового введени водорастворимых полисахаридов (ПС), полученных из листьев мать-и-мачехи, на титры IgG1 в сыворотке
иммунизированных овальбумином мышей (Х±m)
Реакци ПКА (площадь окрашенного участка, мм 2)
Курсовое введение
разведение сыворотки
45
1/4
1/8
1/16
Растворитель (контроль)
451,2±50,1
165,8±42,2
39,35±10,9
ПС мать-и-мачехи
186,4±66,5*
25,1±5,0*
4,0 ±4,9*
Примечание: * - различи с контролем достоверны, р<0,05.
50
Введение полисахаридов вызывало также снижение уровн IgE антител, специфических
к овальбумину, в сыворотке крови дважды иммунизированных мышей (табл.3). Реакци ПКА, вызываема разведенной 1/4 сывороткой мышей опытной группы, была на 73% ниже,
чем реакци , индуцированна сывороткой животных контрольной группы. Сыворотка
животных, получавших полисахариды, в разведении 1/8 и 1/16 также вызывала более
слабую реакцию, чем сыворотка мышей контрольной группы - на 85% и 76%
соответственно. Следовательно, введение полисахаридов травы мать-и-мачехи приводило
Страница: 5
RU 2 337 699 C1
к уменьшению продукции аллерген-специфических IgE антител.
Таблица 3.
Вли ние курсового введени водорастворимых полисахаридов (ПС), полученных из листьев мать-и-мачехи, на титры IgE в сыворотке
иммунизированных овальбумином мышей (Х±m)
Реакци ПКА (площадь окрашенного участка, мм 2)
Курсовое введение
5
разведение сыворотки
1/4
1/8
1/16
Растворитель (контроль)
1219,4±134,7
743,1±109,6
59,7±12,6
ПС мать-и-мачехи
327,8±201,2*
113,0±91,7*
14,4±11,1*
Примечание: * - различи с контролем достоверны, р<0,05.
10
15
20
25
30
35
Таким образом, полученные экспериментальные данные свидетельствуют, что
полисахариды, полученные из травы мать-и-мачехи, обладают противоаллергическим
действием. По сравнению с имеющимис противоаллергическими средствами
исследованное нами вещество способно ингибировать развитие иммуноглобулин-Езависимых аллергий на самой первой - иммунологической - стадии их развити , вызыва снижение синтеза иммуноглобулинов классов Е и G1, что приводит к торможению развити дальнейших событий, св занных с выработкой и высвобождением биологически активных
веществ, оказывающих повреждающее действие на клетки и ткани.
Литература
1. Медицинска микробиологи , иммунологи и вирусологи (под. ред. А.И.Корот ева).
С.-Петербург: Специальна литература, 1998. С.228.
2. Методы исследовани углеводов (пер. с английского В.А.Несме нова, под. ред.
проф. Харлина). М.: Мир, 1975. С.274.
3. Хаитов P.M., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебрев А.И. Экспериментальное изучение
иммунотропной активности фармакологических препаратов (методические рекомендации).
// Ведомости Фармакологического комитета. 1999. №1. С.31-36.
4. Энциклопеди лекарств. 2004. №11. М.: Изд-во ООО «РЛС-2004». С.1086-1088.
5. Hsieh C.S., Macatonia S.E., O'Garra A., Murphy K.M. Т cell genetic background
determines default Т helper phenotype development in vitro // J. Exp.Med. 1995.
Vol.181. P.713-721.
6. Oshiba A., Hamelrnann E., Haczku A. et al. Modulation of antigen-induced В and Т
cell responses by antigen-specific IgE antibodies // J. Immunol. 1997. Vol.159. P.4056-4063.
Формула изобретени Применение водорастворимых полисахаридов, полученных из листьев мать-и-мачехи, в
качестве средства, способного подавл ть иммунный ответ, лежащий в основе
иммуноглобулин-Е-зависимых аллергических заболеваний.
40
45
50
Страница: 6
CL
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
84 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа