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[5][_]
Molecule
(253/ 1354)
[6][_]
DMF
(87)
[7][_]
water
(76)
[8][_]
ethyl acetate
(62)
[9][_]
HCl
(58)
[10][_]
acetic acid
(56)
[11][_]
TFA
(53)
[12][_]
methanol
(39)
[13][_]
HOBT
(36)
[14][_]
sodium bicarbonate
(34)
[15][_]
NMM
(33)
[16][_]
chloroform
(33)
[17][_]
Cys
(31)
[18][_]
benzene
(30)
[19][_]
sodium sulfate
(28)
[20][_]
sodium chloride
(27)
[21][_]
methylene chloride
(23)
[22][_]
Leu
(22)
[23][_]
THF
(22)
[24][_]
threonine
(19)
[25][_]
lysine
(18)
[26][_]
arginine
(18)
[27][_]
acetate
(18)
[28][_]
ammonium acetate
(18)
[29][_]
Gly
(17)
[30][_]
Ala
(16)
[31][_]
Gln
(16)
[32][_]
hexane
(16)
[33][_]
Ile
(15)
[34][_]
potassium hydroxide
(14)
[35][_]
azide
(11)
[36][_]
Phe
(11)
[37][_]
Tyr
(10)
[38][_]
ethyl-benzene acetate
(10)
[39][_]
anisol
(10)
[40][_]
OH
(9)
[41][_]
Bzl
(8)
[42][_]
ethanol
(7)
[43][_]
Asp
(7)
[44][_]
TEA
(7)
[45][_]
urea
(7)
[46][_]
PCP
(7)
[47][_]
sodium
(6)
[48][_]
NaOH
(6)
[49][_]
BOC-Ser[Bzl]-OH
(6)
[50][_]
magnesium sulfate
(6)
[51][_]
ammonia
(6)
[52][_]
hydrofluoric acid
(5)
[53][_]
Z-Cl
(5)
[54][_]
OBzl
(5)
[55][_]
ethyl-chloroform
(5)
[56][_]
diethylether
(5)
[57][_]
H-Pro-OBzl
(4)
[58][_]
chloride
(4)
[59][_]
Cys-Cys
(4)
[60][_]
R4-Asp-His-Pro-Leu-Thr-
(3)
[61][_]
serine
(3)
[62][_]
phosphate
(3)
[63][_]
L-proline
(3)
[64][_]
butanol
(3)
[65][_]
BOC-Leu-Pro-OBzl
(3)
[66][_]
ethyl-hexane acetate
(3)
[67][_]
hexane acetate
(3)
[68][_]
ethylether acetate
(3)
[69][_]
BOC-Lys
(3)
[70][_]
dioxan
(3)
[71][_]
2-mercapto-ethanol
(3)
[72][_]
mercapto-ethanol
(3)
[73][_]
nitrogen
(3)
[74][_]
LEU-PRO
(2)
[75][_]
PRO-GLN
(2)
[76][_]
R1-Ser-Ser-Ser-Ser-Lys-
(2)
[77][_]
R2-R3-Asp-Asp-Pro-Arg-Phe-Gln-Asp
(2)
[78][_]
2,4-dinitrophenol
(2)
[79][_]
thiophenol
(2)
[80][_]
histidine
(2)
[81][_]
carbodiimide
(2)
[82][_]
acetamide
(2)
[83][_]
Tos
(2)
[84][_]
triethylamine
(2)
[85][_]
Leu-Pro-OBzl
(2)
[86][_]
H-Pro-OBzl.HCl
(2)
[87][_]
BOC-Thr(Bzl)-Pro-OH
(2)
[88][_]
BOC-Pro-OH
(2)
[89][_]
ethyl-benzene
(2)
[90][_]
hydrazine
(2)
[91][_]
citric acid
(2)
[92][_]
BOC-His(Tos)-OH
(2)
[93][_]
Tris-HCl
(2)
[94][_]
DTNB
(2)
[95][_]
SER-LEU
(1)
[96][_]
PRO-SER
(1)
[97][_]
PRO-SER-ARG
(1)
[98][_]
GLY-PRO
(1)
[99][_]
SER-ASP
(1)
[100][_]
THR-PRO
(1)
[101][_]
ILE-LEU
(1)
[102][_]
SER-SER-SER
(1)
[103][_]
SER-LYS
(1)
[104][_]
ALA-PRO-PRO
(1)
[105][_]
PRO
(1)
[106][_]
ASP-ASP
(1)
[107][_]
PRO-ARG
(1)
[108][_]
PHE-GLN
(1)
[109][_]
ASP-HIS
(1)
[110][_]
PRO-LEU
(1)
[111][_]
H-R
(1)
[112][_]
GLY-GLY-PRO
(1)
[113][_]
R-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro-Ser-Arg-Leu-
(1)
[114][_]
Pro-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr-Pro-Ile-Leu-
(1)
[115][_]
Pro-Gln-OH
(1)
[116][_]
Ala-Pro-Pro-Pro-
(1)
[117][_]
Asp-Asp-Pro-
(1)
[118][_]
Arg-Phe-Gln-Asp-
(1)
[119][_]
H-R5-Gly-Gly-Pro-Lys-
(1)
[120][_]
R1-Ser-Ser-Ser-Ser-Lys-Ala-Pro-Pro-Pro
(1)
[121][_]
H-R5-Gly
(1)
[122][_]
protec
(1)
[123][_]
benzoylacetone
(1)
[124][_]
acetylacetone
(1)
[125][_]
dimedone
(1)
[126][_]
zide
(1)
[127][_]
t-butanol
(1)
[128][_]
cyanomethylalcohol
(1)
[129][_]
benzylalcohol
(1)
[130][_]
p-bromobenzylalcohol
(1)
[131][_]
p-chlorobenzylalcohol
(1)
[132][_]
p-methoxybenzylalcohol
(1)
[133][_]
benzoylmethylalcohol
(1)
[134][_]
p-bromobenzoylmethylalcohol
(1)
[135][_]
phenol
(1)
[136][_]
2,4,6-trichlorophenol
(1)
[137][_]
2,4,5-trichlorophenol
(1)
[138][_]
pentachlorophenol
(1)
[139][_]
p-nitrophenol
(1)
[140][_]
p-cyanophenol
(1)
[141][_]
p-methanesulfonylphenol
(1)
[142][_]
thiocresol
(1)
[143][_]
p-nitrothiophenol
(1)
[144][_]
imidazolide
(1)
[145][_]
N,N'-carbonyl-diimidazole
(1)
[146][_]
isoxazolium
(1)
[147][_]
N-ethyl-N'-3-dimethylaminopropyl-carbodiimide
(1)
[148][_]
trifluoroacetic acid
(1)
[149][_]
propionic acid
(1)
[150][_]
OMe
(1)
[151][_]
OEt
(1)
[152][_]
N-hydroxysuccinimide
(1)
[153][_]
MBzl
(1)
[154][_]
L-aspartic acid
(1)
[155][_]
dicyclohexylamine
(1)
[156][_]
cyclohexylamine
(1)
[157][_]
dimethylformamide
(1)
[158][_]
tetrahydrofuran
(1)
[159][_]
tribenzylamine
(1)
[160][_]
1-hydroxybenzotriazole
(1)
[161][_]
N-ethyl-N'-dimethylaminopropyl-carbodiimide
(1)
[162][_]
ethyl-methanol acetate
(1)
[163][_]
pyridine-acetic acid
(1)
[164][_]
BOC-Leu-OH.H2O
(1)
[165][_]
HOC
(1)
[166][_]
OH.H2O
(1)
[167][_]
BOC-Ile-Leu-Pro-OH
(1)
[168][_]
Pd/C
(1)
[169][_]
BOC-Thr[Bzl]-Pro-OBzl
(1)
[170][_]
BOC-Thr-
(1)
[171][_]
sodium chloride, HCl
(1)
[172][_]
BOC-Thr[Bzl]-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln-OBzl
(1)
[173][_]
BOC-Asp(Bzl)-Thr(Bzl)-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln
(1)
[174][_]
sulfate
(1)
[175][_]
BOC-Ser[Bzl]-Asp[OBzl]-Thr(Bzl)-Pro-Ile-Leu
(1)
[176][_]
Pro-Gln-OBzl
(1)
[177][_]
hexene
(1)
[178][_]
BOC-Gly-Pro-OBzl
(1)
[179][_]
BOC-Gly-OH
(1)
[180][_]
H-Pro-
(1)
[181][_]
OBzl.HCl
(1)
[182][_]
MaOH
(1)
[183][_]
C30H44
(1)
[184][_]
Pro-Gly-Pro-OBzl
(1)
[185][_]
BOC-Arg
(1)
[186][_]
Tos-OH
(1)
[187][_]
BOC-Ser(Bzl)-Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-OBzl
(1)
[188][_]
BOC-Ser[Bzl)-Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-OH
(1)
[189][_]
NaUH
(1)
[190][_]
Ser[Bzl]-Arg[Tos]-Leu-Pro-Gly-Pro-Ser
(1)
[191][_]
-Asp[OBzl]-Thr[Bzl]-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln
(1)
[192][_]
Ser[Bzl]-Pro-OBzl
(1)
[193][_]
BOC-Ser
(1)
[194][_]
BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-OH
(1)
[195][_]
BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-Ser[Bzl]-Pro-OBzl
(1)
[196][_]
magnesium
(1)
[197][_]
BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-Ser[Bzl]-Pro-OH
(1)
[198][_]
-Pro-Ser[Bzl]
(1)
[199][_]
Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Thr[Bzl]
(1)
[200][_]
Pro-Ile-Leu-Pro-Gln-OBzl
(1)
[201][_]
C148H207D36N23S
(1)
[202][_]
BOC-Pro-Pro-OBzl
(1)
[203][_]
BOC-Ala-Pro-OBzl
(1)
[204][_]
BOC-Ala-Pro-OH
(1)
[205][_]
CdOO
(1)
[206][_]
BOC-Ala-Pro-Pro-Pro-OBzl
(1)
[207][_]
CSOO
(1)
[208][_]
-Ala-Pro-Pro-Pro-OBzl
(1)
[209][_]
BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-OMe
(1)
[210][_]
H-Ser[Bzl]-
(1)
[211][_]
OMe.HCl
(1)
[212][_]
BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-NHNH2
(1)
[213][_]
BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Me
(1)
[214][_]
BOC-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-NHNH2
(1)
[215][_]
1'-hydrazine
(1)
[216][_]
acetone
(1)
[217][_]
BOC-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Lys
(1)
[218][_]
Pro-Pro-Pro-OBzl
(1)
[219][_]
1'-acetic acid
(1)
[220][_]
amino acetate
(1)
[221][_]
BOC-Gln-ONP
(1)
[222][_]
Arg(Tos)-Phe-OEt
(1)
[223][_]
H-Phe-OEt.HCl
(1)
[224][_]
BOC-Pro-Arg(Tos)-Phe-OEt
(1)
[225][_]
hydroxide
(1)
[226][_]
C34H48N6S
(1)
[227][_]
BOC-Pro-Arg(Tos)-Phe-OH
(1)
[228][_]
BOC-Asn-
(1)
[229][_]
BOC-Cys(Acm)-Asp(OBzl)-OH
(1)
[230][_]
BOC-Cys(Acm)-OSu
(1)
[231][_]
H-Asp(OBzl)-OH
(1)
[232][_]
BOC-Leu-Thr(Bzl)
(1)
[233][_]
H-Thr[Bzl]-OBzl
(1)
[234][_]
COOH
(1)
[235][_]
BOC-Leu
(1)
[236][_]
BOC-Pro-Leu-Thr(Bzl)-OBzl
(1)
[237][_]
BOC-His-Pro-Leu-Thr(Bzl)-OBzl
(1)
[238][_]
nitric acid
(1)
[239][_]
BOC-His-Pro-Leu-Thr(Bzl)-NHNH2
(1)
[240][_]
BOC-His-Pro-Leu-Thr[Bzl]
(1)
[241][_]
-Asp[OBzl]-OH
(1)
[242][_]
BOC-Asp(OBzl)-His-Pro
(1)
[243][_]
Leu-Thr(Bzl)-Cys(Acm)-Asp(OBzl)-OH
(1)
[244][_]
BOC-Asp[OBzl]-OSu
(1)
[245][_]
BOC-Cys[MBzl]-Gly-Gly-Pro-Lys[z)-Asp(OBzl)
(1)
[246][_]
Pro-Leu-Thr
(1)
[247][_]
-Cys[Acm]-Asp[OBzl]-OH
(1)
[248][_]
thioanisol
(1)
[249][_]
L-methionine
(1)
[250][_]
EDTA
(1)
[251][_]
BOC-Tyr
(1)
[252][_]
Cl2
(1)
[253][_]
-Gly-Gly-Pro-Lys[z]
(1)
[254][_]
Asp(OBzl)-His-Pro-Leu-Thr(Bzl)-Cys(Acm)-Asp[OBzl]-OH
(1)
[255][_]
B9-
(1)
[256][_]
R-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro-Ser-Arg-Leu-Pro-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr-Pro-Ile-Leu-
Pro-Gln-OH
(1)
[257][_]
Pro-Pro-Pro
(1)
[258][_]
H-R5-Gly-Gly
(1)
[259][_]
Physical
(587/ 1280)
[260][_]
0,1 N
(53)
[261][_]
1 N
(48)
[262][_]
pH 7
(22)
[263][_]
5 percent
(21)
[264][_]
100 ml
(21)
[265][_]
300 ml
(19)
[266][_]
Rf2
(17)
[267][_]
30 minutes
(15)
[268][_]
200 ml
(15)
[269][_]
500 ml
(14)
[270][_]
150 ml
(13)
[271][_]
Rf1
(13)
[272][_]
1 h
(13)
[273][_]
0,01 M
(13)
[274][_]
1 litre
(12)
[275][_]
20 ml
(12)
[276][_]
Rf4
(12)
[277][_]
0,1 M
(11)
[278][_]
pH 4,5
(11)
[279][_]
1 h.
(10)
[280][_]
120 cm
(10)
[281][_]
3 h.
(9)
[282][_]
Rf6
(9)
[283][_]
400 ml
(9)
[284][_]
50 ml
(9)
[285][_]
0,2 M
(9)
[286][_]
3,9 mM
(9)
[287][_]
1,95 mM
(9)
[288][_]
10 minutes
(7)
[289][_]
0,3 ml
(7)
[290][_]
24 h
(7)
[291][_]
350 ml
(7)
[292][_]
8 M
(7)
[293][_]
de 0,01 M
(7)
[294][_]
pH 5
(6)
[295][_]
600 ml
(6)
[296][_]
de 2 h
(6)
[297][_]
2 litres
(6)
[298][_]
100 percent
(6)
[299][_]
30 ml
(6)
[300][_]
2 h
(6)
[301][_]
Rf11
(6)
[302][_]
5 ml
(6)
[303][_]
500 g
(5)
[304][_]
0,155 M
(5)
[305][_]
0,1 ml
(5)
[306][_]
pH 6
(5)
[307][_]
80 ml
(5)
[308][_]
pH 4,53
(5)
[309][_]
pH 3
(5)
[310][_]
1,5 litre
(5)
[311][_]
pH 4
(4)
[312][_]
2 ml
(4)
[313][_]
108 mM
(4)
[314][_]
40 ml
(4)
[315][_]
0,15 M
(4)
[316][_]
5 litres
(4)
[317][_]
0,12 M
(4)
[318][_]
156 mM
(4)
[319][_]
60 ml
(4)
[320][_]
29,17 mM
(4)
[321][_]
6 N
(4)
[322][_]
0,5 ml
(4)
[323][_]
0,17 M
(4)
[324][_]
60 mM
(4)
[325][_]
20 minutes
(3)
[326][_]
83 mM
(3)
[327][_]
3 ml
(3)
[328][_]
87,72 mM
(3)
[329][_]
4 h.
(3)
[330][_]
35 mM
(3)
[331][_]
pH 9
(3)
[332][_]
17 cm
(3)
[333][_]
180 ml
(3)
[334][_]
163 mM
(3)
[335][_]
0,8 M
(3)
[336][_]
15 ml
(3)
[337][_]
70 ml
(3)
[338][_]
150 mM
(3)
[339][_]
pH 33
(3)
[340][_]
28,8 mM
(3)
[341][_]
157,5 mM
(3)
[342][_]
138 mM
(3)
[343][_]
26,65 mM
(3)
[344][_]
0,71 ml
(3)
[345][_]
pH 9,5
(3)
[346][_]
1,2 litre
(3)
[347][_]
191 mM
(3)
[348][_]
12,4 ml
(3)
[349][_]
35 ml
(3)
[350][_]
0,36 ml
(3)
[351][_]
6 ml
(3)
[352][_]
1 ml
(2)
[353][_]
50 cm
(2)
[354][_]
1 mg
(2)
[355][_]
pH 7,5
(2)
[356][_]
20 mg
(2)
[357][_]
159,5 mM
(2)
[358][_]
94,2 percent
(2)
[359][_]
28,37 ml
(2)
[360][_]
32,27 g
(2)
[361][_]
25 minutes
(2)
[362][_]
98 g
(2)
[363][_]
Rf3
(2)
[364][_]
83,16 mM
(2)
[365][_]
16 cm
(2)
[366][_]
100 g
(2)
[367][_]
8 ml
(2)
[368][_]
700 ml
(2)
[369][_]
15 cm
(2)
[370][_]
220 ml
(2)
[371][_]
125 mM
(2)
[372][_]
100,77 g
(2)
[373][_]
125,4 mM
(2)
[374][_]
87,0 percent
(2)
[375][_]
1 M
(2)
[376][_]
1 l
(2)
[377][_]
48,52 mM
(2)
[378][_]
220 g
(2)
[379][_]
0,3 M
(2)
[380][_]
58 g
(2)
[381][_]
81 g
(2)
[382][_]
4 g
(2)
[383][_]
180 mg
(2)
[384][_]
0,18 M
(2)
[385][_]
74 g
(2)
[386][_]
27,0 g
(2)
[387][_]
240 ml
(2)
[388][_]
Rf9
(2)
[389][_]
0,9 M
(2)
[390][_]
72 mM
(2)
[391][_]
4,32 N
(2)
[392][_]
216 mM
(2)
[393][_]
10 ml
(2)
[394][_]
35 cm
(2)
[395][_]
14 cm
(2)
[396][_]
90 minutes
(2)
[397][_]
2,67 ml
(2)
[398][_]
3 mM
(2)
[399][_]
0,53 g
(2)
[400][_]
1,04 g
(2)
[401][_]
1 mM
(2)
[402][_]
50 mg
(2)
[403][_]
60 minutes
(2)
[404][_]
175 mM
(2)
[405][_]
900 ml
(2)
[406][_]
800 ml
(2)
[407][_]
250 ml
(2)
[408][_]
1,5 mM
(2)
[409][_]
0,48 ml
(2)
[410][_]
0,26 g
(2)
[411][_]
0,52 g
(2)
[412][_]
0,6 mM
(2)
[413][_]
0,5 mM
(2)
[414][_]
10,2 ml
(2)
[415][_]
9,5 ml
(2)
[416][_]
9 ml
(2)
[417][_]
10,22 mg
(2)
[418][_]
100 mg
(2)
[419][_]
4 ml
(2)
[420][_]
0,48 g
(2)
[421][_]
3 M
(2)
[422][_]
pH 8,6
(2)
[423][_]
34 cm
(2)
[424][_]
92 mg
(2)
[425][_]
3,56 g
(2)
[426][_]
350 g
(1)
[427][_]
30 mg
(1)
[428][_]
60 mg
(1)
[429][_]
pH 8,0
(1)
[430][_]
34 mg
(1)
[431][_]
0,2 mg
(1)
[432][_]
27-35 ml
(1)
[433][_]
3,2 ml
(1)
[434][_]
36 mg
(1)
[435][_]
149,59 g
(1)
[436][_]
0,6 M
(1)
[437][_]
152,28 g
(1)
[438][_]
0,63 M
(1)
[439][_]
120,8 ml
(1)
[440][_]
0,66 M
(1)
[441][_]
192 mM
(1)
[442][_]
56,1 ml
(1)
[443][_]
38,33 g
(1)
[444][_]
21,55 g
(1)
[445][_]
9 N
(1)
[446][_]
90,9 percent
(1)
[447][_]
76,98 g
(1)
[448][_]
145 mM
(1)
[449][_]
60,33 g
(1)
[450][_]
38,41 g
(1)
[451][_]
47,69 g
(1)
[452][_]
14,50 g
(1)
[453][_]
19,76 ml
(1)
[454][_]
56,98 g
(1)
[455][_]
80,0 percent
(1)
[456][_]
32,88 g
(1)
[457][_]
20,94 g
(1)
[458][_]
37,47 g
(1)
[459][_]
57,41 g
(1)
[460][_]
77,1 percent
(1)
[461][_]
52,78 g
(1)
[462][_]
106,29 mM
(1)
[463][_]
43,71 ml
(1)
[464][_]
77,75 percent
(1)
[465][_]
54,77 g
(1)
[466][_]
63 mM
(1)
[467][_]
15,19 ml
(1)
[468][_]
81,3 percent
(1)
[469][_]
1,330 mg
(1)
[470][_]
63,98 g
(1)
[471][_]
87,48 mM
(1)
[472][_]
67,1 g
(1)
[473][_]
29,77 g
(1)
[474][_]
11,85 g
(1)
[475][_]
16,05 ml
(1)
[476][_]
94,8 percent
(1)
[477][_]
73,88 g
(1)
[478][_]
63,97 mM
(1)
[479][_]
24,56 g
(1)
[480][_]
15,22 ml
(1)
[481][_]
2,03 ml
(1)
[482][_]
95,1 percent
(1)
[483][_]
80,95 g
(1)
[484][_]
26,28 g
(1)
[485][_]
47 g
(1)
[486][_]
67 g
(1)
[487][_]
33 cm
(1)
[488][_]
46,16 g
(1)
[489][_]
8,78 g
(1)
[490][_]
54,84 g
(1)
[491][_]
82,76 g
(1)
[492][_]
0,252 mM
(1)
[493][_]
327,6 ml
(1)
[494][_]
58,57 g
(1)
[495][_]
70,8 percent
(1)
[496][_]
36 g
(1)
[497][_]
48,26 g
(1)
[498][_]
20,27 g
(1)
[499][_]
27,45 ml
(1)
[500][_]
20 cm
(1)
[501][_]
45,73 g
(1)
[502][_]
18 g
(1)
[503][_]
11 g
(1)
[504][_]
70,84 g
(1)
[505][_]
82,64 percent
(1)
[506][_]
88,72 g
(1)
[507][_]
120 mM
(1)
[508][_]
59,4 ml
(1)
[509][_]
53 g
(1)
[510][_]
123 mM
(1)
[511][_]
16,88 g
(1)
[512][_]
22,86 ml
(1)
[513][_]
3,66 ml
(1)
[514][_]
0,2 mM
(1)
[515][_]
1 percent
(1)
[516][_]
0,709 mg
(1)
[517][_]
114 mM
(1)
[518][_]
35 minutes
(1)
[519][_]
pH 8
(1)
[520][_]
16,94 g
(1)
[521][_]
107,34 g
(1)
[522][_]
1,818 mg
(1)
[523][_]
105,44 g
(1)
[524][_]
97,43 mM
(1)
[525][_]
125,36 ml
(1)
[526][_]
2 h.
(1)
[527][_]
1 W
(1)
[528][_]
49 ml
(1)
[529][_]
1 g
(1)
[530][_]
49,68 g
(1)
[531][_]
37,32 mM
(1)
[532][_]
130 ml
(1)
[533][_]
45 minutes
(1)
[534][_]
43,72 g
(1)
[535][_]
44,79 mM
(1)
[536][_]
8,58 g
(1)
[537][_]
8,88 ml
(1)
[538][_]
600 g
(1)
[539][_]
78,9 percent
(1)
[540][_]
31,5 g
(1)
[541][_]
17,5 g
(1)
[542][_]
0,13 M
(1)
[543][_]
35,4 g
(1)
[544][_]
24,8 ml
(1)
[545][_]
71,27 g
(1)
[546][_]
170 ml
(1)
[547][_]
46,0 g
(1)
[548][_]
21,1 g
(1)
[549][_]
135,5 mM
(1)
[550][_]
178,15 ml
(1)
[551][_]
65,0 g
(1)
[552][_]
94,5 percent
(1)
[553][_]
61,6 g
(1)
[554][_]
16,2 g
(1)
[555][_]
22 ml
(1)
[556][_]
84,07 g
(1)
[557][_]
80,8 percent
(1)
[558][_]
85,4 mM
(1)
[559][_]
110 ml
(1)
[560][_]
75 g
(1)
[561][_]
0,77 mg
(1)
[562][_]
63,66 g
(1)
[563][_]
260 ml
(1)
[564][_]
40 minutes
(1)
[565][_]
87,6 g
(1)
[566][_]
pH 43
(1)
[567][_]
4,73 g
(1)
[568][_]
27,30 g
(1)
[569][_]
6,41 ml
(1)
[570][_]
79,85 g
(1)
[571][_]
96,2 percent
(1)
[572][_]
1,893 mg
(1)
[573][_]
0,94 Ci
(1)
[574][_]
0,34 mM
(1)
[575][_]
18 cm
(1)
[576][_]
de 10 ml
(1)
[577][_]
de 400 ml
(1)
[578][_]
de 10,5 ml
(1)
[579][_]
135,4 mg
(1)
[580][_]
43,5 g
(1)
[581][_]
24,3 g
(1)
[582][_]
33,0 ml
(1)
[583][_]
48,3 g
(1)
[584][_]
37,8 g
(1)
[585][_]
38,6 ml
(1)
[586][_]
250 g
(1)
[587][_]
75,55 g
(1)
[588][_]
45 ml
(1)
[589][_]
83,8 percent
(1)
[590][_]
47,9 g
(1)
[591][_]
0,16 M
(1)
[592][_]
23 g
(1)
[593][_]
33 ml
(1)
[594][_]
80,08 g
(1)
[595][_]
88,5 percent
(1)
[596][_]
77,84 g
(1)
[597][_]
136 mM
(1)
[598][_]
80 g
(1)
[599][_]
29,8 ml
(1)
[600][_]
90,27 g
(1)
[601][_]
79,0 percent
(1)
[602][_]
23,6 g
(1)
[603][_]
0,5 M
(1)
[604][_]
196,57 g
(1)
[605][_]
340,4 g
(1)
[606][_]
87,5 percent
(1)
[607][_]
191 g
(1)
[608][_]
0,393 M
(1)
[609][_]
183,6 g
(1)
[610][_]
96,0 percent
(1)
[611][_]
146 g
(1)
[612][_]
4,49 N
(1)
[613][_]
202 ml
(1)
[614][_]
48 ml
(1)
[615][_]
0,33 M
(1)
[616][_]
125 ml
(1)
[617][_]
122 g
(1)
[618][_]
0,25 M
(1)
[619][_]
88,4 percent
(1)
[620][_]
+9,6 percent
(1)
[621][_]
98,4 g
(1)
[622][_]
117 mM
(1)
[623][_]
97,44 g
(1)
[624][_]
99 percent
(1)
[625][_]
Rf7
(1)
[626][_]
60,6 g
(1)
[627][_]
11,5 ml
(1)
[628][_]
80 mM
(1)
[629][_]
95,9 percent
(1)
[630][_]
88,51 g
(1)
[631][_]
46,2 mM
(1)
[632][_]
20 g
(1)
[633][_]
360 mM
(1)
[634][_]
55 g
(1)
[635][_]
80,1 percent
(1)
[636][_]
Rf5
(1)
[637][_]
50 minutes
(1)
[638][_]
85,35 g
(1)
[639][_]
270 ml
(1)
[640][_]
4,58 ml
(1)
[641][_]
49,93 g
(1)
[642][_]
33,6 mM
(1)
[643][_]
6,20 ml
(1)
[644][_]
130 g
(1)
[645][_]
43 g
(1)
[646][_]
91,9 percent
(1)
[647][_]
10,978 mg
(1)
[648][_]
21 h
(1)
[649][_]
30 g
(1)
[650][_]
0,17 mM
(1)
[651][_]
1,46 g
(1)
[652][_]
de 7 ml
(1)
[653][_]
990 mg
(1)
[654][_]
850 mg
(1)
[655][_]
650 mg
(1)
[656][_]
117 cm
(1)
[657][_]
10,5 ml
(1)
[658][_]
320 mg
(1)
[659][_]
2,03 g
(1)
[660][_]
15 mM
(1)
[661][_]
55,10 g
(1)
[662][_]
32,31 g
(1)
[663][_]
6,3 g
(1)
[664][_]
44,12 g
(1)
[665][_]
65,1 percent
(1)
[666][_]
101,10 g
(1)
[667][_]
24 mM
(1)
[668][_]
114,14 g
(1)
[669][_]
13,00 g
(1)
[670][_]
3,89 g
(1)
[671][_]
7 g
(1)
[672][_]
3,17 ml
(1)
[673][_]
5,27 ml
(1)
[674][_]
101,2 g
(1)
[675][_]
93,5 percent
(1)
[676][_]
83 g
(1)
[677][_]
36,18 g
(1)
[678][_]
21,28 g
(1)
[679][_]
28,82 ml
(1)
[680][_]
85,52 g
(1)
[681][_]
92,3 percent
(1)
[682][_]
85,0 g
(1)
[683][_]
29,70 g
(1)
[684][_]
18,64 g
(1)
[685][_]
98,25 g
(1)
[686][_]
99,5 percent
(1)
[687][_]
50 mM
(1)
[688][_]
55 ml
(1)
[689][_]
29,22 g
(1)
[690][_]
86,9 percent
(1)
[691][_]
102,01 g
(1)
[692][_]
22,44 mM
(1)
[693][_]
120,7 g
(1)
[694][_]
11,47 ml
(1)
[695][_]
3,84 g
(1)
[696][_]
7,77 g
(1)
[697][_]
19,63 g
(1)
[698][_]
16,02 ml
(1)
[699][_]
5 h.
(1)
[700][_]
5,34 ml
(1)
[701][_]
148,49 g
(1)
[702][_]
94 g
(1)
[703][_]
92,65 percent
(1)
[704][_]
5,422 mg
(1)
[705][_]
450 ml
(1)
[706][_]
104,56 g
(1)
[707][_]
20,5 mM
(1)
[708][_]
125,4 g
(1)
[709][_]
20,25 ml
(1)
[710][_]
3,60 g
(1)
[711][_]
8,62 g
(1)
[712][_]
7,10 g
(1)
[713][_]
8,63 ml
(1)
[714][_]
47,15 mM
(1)
[715][_]
102,37 g
(1)
[716][_]
94,1 percent
(1)
[717][_]
0,529 mg
(1)
[718][_]
77,5 g
(1)
[719][_]
64 g
(1)
[720][_]
18 ml
(1)
[721][_]
51,98 g
(1)
[722][_]
62,9 percent
(1)
[723][_]
15,82 g
(1)
[724][_]
17,47 g
(1)
[725][_]
1,32 ml
(1)
[726][_]
1,94 g
(1)
[727][_]
15,59 g
(1)
[728][_]
91,35 percent
(1)
[729][_]
0,542 mg
(1)
[730][_]
22 h
(1)
[731][_]
5,89 g
(1)
[732][_]
44 cm
(1)
[733][_]
4,08 g
(1)
[734][_]
11,8 ml
(1)
[735][_]
122 cm
(1)
[736][_]
64 ml
(1)
[737][_]
2,6 mg
(1)
[738][_]
91 ml
(1)
[739][_]
56 mg
(1)
[740][_]
95 percent
(1)
[741][_]
51,35 percent
(1)
[742][_]
68,88 g
(1)
[743][_]
28 ml
(1)
[744][_]
49,85 g
(1)
[745][_]
36,5 ml
(1)
[746][_]
99,24 g
(1)
[747][_]
97,9 g
(1)
[748][_]
41,11 g
(1)
[749][_]
25,80 g
(1)
[750][_]
35,0 ml
(1)
[751][_]
111,16 g
(1)
[752][_]
95,4 percent
(1)
[753][_]
106,67 g
(1)
[754][_]
23,64 g
(1)
[755][_]
124,1 g
(1)
[756][_]
210 mM
(1)
[757][_]
35,23 ml
(1)
[758][_]
192,5 mM
(1)
[759][_]
90 g
(1)
[760][_]
25 cm
(1)
[761][_]
52,9 percent
(1)
[762][_]
Rf8
(1)
[763][_]
90 mM
(1)
[764][_]
0,95 M
(1)
[765][_]
91,1 percent
(1)
[766][_]
46,69 g
(1)
[767][_]
93,63 mM
(1)
[768][_]
26,04 ml
(1)
[769][_]
187,29 mM
(1)
[770][_]
52,44 g
(1)
[771][_]
78,03 mM
(1)
[772][_]
54,18 ml
(1)
[773][_]
234,09 mM
(1)
[774][_]
11,55 ml
(1)
[775][_]
85,83 mM
(1)
[776][_]
32,52 ml
(1)
[777][_]
234,03 mM
(1)
[778][_]
52,79 g
(1)
[779][_]
77,7 percent
(1)
[780][_]
52,17 g
(1)
[781][_]
8,11 g
(1)
[782][_]
11,05 g
(1)
[783][_]
30,27 g
(1)
[784][_]
5 cm
(1)
[785][_]
65,05 g
(1)
[786][_]
72,8 percent
(1)
[787][_]
15,92 g
(1)
[788][_]
17,81 g
(1)
[789][_]
98 ml
(1)
[790][_]
4,84 g
(1)
[791][_]
pH 73
(1)
[792][_]
20,79 g
(1)
[793][_]
16,07 g
(1)
[794][_]
83,32 percent
(1)
[795][_]
4,17 g
(1)
[796][_]
17,5 cm
(1)
[797][_]
930 mg
(1)
[798][_]
6,8 ml
(1)
[799][_]
770 mg
(1)
[800][_]
17,4 cm
(1)
[801][_]
9,8 ml
(1)
[802][_]
360 mg
(1)
[803][_]
de 9,3 ml
(1)
[804][_]
230 mg
(1)
[805][_]
92 cm
(1)
[806][_]
5,1 ml
(1)
[807][_]
200,1 mg
(1)
[808][_]
44 g
(1)
[809][_]
3,78 g
(1)
[810][_]
-10oC
(1)
[811][_]
0,25 g
(1)
[812][_]
0,13 mM
(1)
[813][_]
11,59 g
(1)
[814][_]
109,9 percent
(1)
[815][_]
3,51 g
(1)
[816][_]
40 cm
(1)
[817][_]
2,78 g
(1)
[818][_]
120 ml
(1)
[819][_]
12 cm
(1)
[820][_]
12,6 ml
(1)
[821][_]
6,2 ml
(1)
[822][_]
160 mg
(1)
[823][_]
1,5 ml
(1)
[824][_]
270 mg
(1)
[825][_]
1,6 ml
(1)
[826][_]
35 percent de
(1)
[827][_]
8,44 g
(1)
[828][_]
3,97 g
(1)
[829][_]
0,31 g
(1)
[830][_]
0,15 mM
(1)
[831][_]
0,11 ml
(1)
[832][_]
12,03 g
(1)
[833][_]
112,5 percent
(1)
[834][_]
2,42 g
(1)
[835][_]
2,36 g
(1)
[836][_]
4,80 g
(1)
[837][_]
5 M
(1)
[838][_]
12 ml
(1)
[839][_]
0,63 g
(1)
[840][_]
0,05 N
(1)
[841][_]
32 cm
(1)
[842][_]
0,05 M
(1)
[843][_]
9,4 ml
(1)
[844][_]
350 mg
(1)
[845][_]
74 cm
(1)
[846][_]
141,1 mg
(1)
[847][_]
Generic
(32/ 179)
[848][_]
ether
(65)
[849][_]
amino acids
(29)
[850][_]
PEPTIDE
(27)
[851][_]
ester
(10)
[852][_]
salts
(9)
[853][_]
acid
(5)
[854][_]
amine
(3)
[855][_]
benzylester
(3)
[856][_]
hydrazide
(2)
[857][_]
acid anhydride
(2)
[858][_]
p-nitrophenylester
(2)
[859][_]
isoamylnitrile
(2)
[860][_]
diamino acids
(1)
[861][_]
acyl
(1)
[862][_]
alkoxy
(1)
[863][_]
aliphatic
(1)
[864][_]
enamine
(1)
[865][_]
amide
(1)
[866][_]
alkanol
(1)
[867][_]
alkanoyl
(1)
[868][_]
aroyl
(1)
[869][_]
cyanomethylester
(1)
[870][_]
thiophenylester
(1)
[871][_]
p-nitrothiophenylester
(1)
[872][_]
p-methanesulfonylphenylester
(1)
[873][_]
triiodylester
(1)
[874][_]
2,4,5-trichlorophenylester
(1)
[875][_]
pentachlorophenylester
(1)
[876][_]
N-hydroxyphthalimidoester
(1)
[877][_]
methylester
(1)
[878][_]
organic acid
(1)
[879][_]
ethyl-ester
(1)
[880][_]
Gene Or Protein
(41/ 161)
[881][_]
WSCI
(47)
[882][_]
HCG
(40)
[883][_]
Etre
(14)
[884][_]
Fragment C
(8)
[885][_]
CYS
(4)
[886][_]
Asp 1
(4)
[887][_]
Asp 4
(4)
[888][_]
SUGAR PROTEIN
(2)
[889][_]
Hf1
(2)
[890][_]
Af2
(2)
[891][_]
RF1
(2)
[892][_]
ODC
(2)
[893][_]
Asp 2
(2)
[894][_]
THR
(1)
[895][_]
DANS
(1)
[896][_]
Glycoproteins
(1)
[897][_]
CI3
(1)
[898][_]
Est-a
(1)
[899][_]
HCH
(1)
[900][_]
Cou
(1)
[901][_]
TKF
(1)
[902][_]
Acte
(1)
[903][_]
Sul
(1)
[904][_]
RF3
(1)
[905][_]
Pro(2)
(1)
[906][_]
SGO
(1)
[907][_]
RF9
(1)
[908][_]
Git6
(1)
[909][_]
AF1
(1)
[910][_]
Ces3
(1)
[911][_]
TF6
(1)
[912][_]
Cas3
(1)
[913][_]
C3a
(1)
[914][_]
HC1
(1)
[915][_]
CtsO
(1)
[916][_]
C4a
(1)
[917][_]
CLX
(1)
[918][_]
Gys
(1)
[919][_]
T150
(1)
[920][_]
T160
(1)
[921][_]
EtR5
(1)
[922][_]
Substituent
(64/ 135)
[923][_]
BOC
(10)
[924][_]
ethyl
(9)
[925][_]
carboxyl
(8)
[926][_]
mercapto
(8)
[927][_]
benzyloxycarbonyl
(7)
[928][_]
amino
(5)
[929][_]
t-butoxycarbonyl
(5)
[930][_]
alpha-amino
(5)
[931][_]
benzyl
(4)
[932][_]
tosyl
(4)
[933][_]
methyl
(4)
[934][_]
trityl
(3)
[935][_]
hydroxy
(3)
[936][_]
guanidino
(3)
[937][_]
benzoyl
(2)
[938][_]
o-chlorobenzyloxycarbonyl
(2)
[939][_]
t-amyloxycarbonyl
(2)
[940][_]
2-p-diphenyl-isopropoxycarbonyl
(2)
[941][_]
imino
(2)
[942][_]
p-methoxybenzyl
(2)
[943][_]
hydroxyl
(2)
[944][_]
acetamidomethyl
(1)
[945][_]
Formyl
(1)
[946][_]
phthaloyl
(1)
[947][_]
p-toluenesulfonyl
(1)
[948][_]
o-nitrophenylsulFonyl
(1)
[949][_]
2,4-dinitrophenylsulfonyl
(1)
[950][_]
diphenylmethyl
(1)
[951][_]
triphenylmethyl
(1)
[952][_]
o-methoxy
(1)
[953][_]
p-methoxy
(1)
[954][_]
o-bromobenzyloxycarbonyl
(1)
[955][_]
p-bromobenzyloxycarbonyl
(1)
[956][_]
p-nitrobenzyloxycarbonyl
(1)
[957][_]
p-methoxybenzyloxycarbonyl
(1)
[958][_]
p-phenylazobenzyloxycarbonyl
(1)
[959][_]
p-(p'-methoxyphenylazo)-benzyloxycarbonyl
(1)
[960][_]
oxycarbonyl
(1)
[961][_]
cyclopentyloxycarbonyl
(1)
[962][_]
trichloroethyloxycarbonyl
(1)
[963][_]
diisopropylmethoxycarbonyl
(1)
[964][_]
2-phenylisopropoxycarbonyl
(1)
[965][_]
tolyl
(1)
[966][_]
2-tolylisopropoxycarbonyl
(1)
[967][_]
3,4-dimethoxybenzyl
(1)
[968][_]
bis-[p-methoxy-phenyl]-methyl
(1)
[969][_]
trifluoroacetyl
(1)
[970][_]
acetyl
(1)
[971][_]
carbonyl
(1)
[972][_]
ethyloxycarbonyl
(1)
[973][_]
tetrahydropyranyl
(1)
[974][_]
t-butyl
(1)
[975][_]
2,2-trifluoro
(1)
[976][_]
2,2-trifluoro-1-benzyloxycarbonylaminoethyl
(1)
[977][_]
nitro
(1)
[978][_]
2,2,2-trifluoro
(1)
[979][_]
p-nitrobenzyl
(1)
[980][_]
benzylthiomethyl
(1)
[981][_]
ethylcarbamoyl
(1)
[982][_]
2,4-dinitro
(1)
[983][_]
N-hydroxy
(1)
[984][_]
2,6-dichlorobenzyl
(1)
[985][_]
t-amyloxycarbonyl-benzyloxycarbonyl
(1)
[986][_]
C12-2,6-dichlorobenzyl
(1)
[987][_]
Polymer
(3/ 27)
[988][_]
Sephadex
(24)
[989][_]
Carboxymethylcellulose
(2)
[990][_]
Cellulose
(1)
[991][_]
Chemical Role
(5/ 18)
[992][_]
refrigerant
(8)
[993][_]
hormone
(7)
[994][_]
SEX HORMONE
(1)
[995][_]
reagent
(1)
[996][_]
adjuvant
(1)
[997][_]
Company Reg No.
(4/ 4)
[998][_]
du 112e
(1)
[999][_]
Cl960
(1)
[1000][_]
Pf 159
(1)
[1001][_]
Cl-10 H2O
(1)
[1002][_]
Disease
(3/ 3)
[1003][_]
Ectopic Pregnancy
(1)
[1004][_]
Choriocarcinoma
(1)
[1005][_]
Meniere
(1)
[1006][_]
Organism
(3/ 3)
[1007][_]
HUMAN
(1)
[1008][_]
precis
(1)
[1009][_]
DURA
(1)
Export to file:
Export Document and discoveries to Excel
Export Document and discoveries to PDF
Images Mosaic View
Publication
_________________________________________________________________
Number FR2516078A1
Family ID 8046617
Probable Assignee Toyo Jozo Kk
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title NOUVEAU PEPTIDE DU TYPE GONADOTROPINE CHORIONIQUE HUMAINE
EN Title HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN (HCG)C - IS SUGAR PROTEIN AND
SEX HORMONE USEFUL IN DIAGNOSIS OF PREGNANCY ETC.
Abstract
_________________________________________________________________
LA PRESENTE INVENTION CONCERNE UN PEPTIDE DE FORMULE:
PEPTIDE DE FORMULE:
R-SER-LEU-PRO-SER-PRO-SER-ARG-LEU-PRO-GLY-PRO-SER-ASP-THR-PRO-ILE-LEU-
PRO-GLN-OH
OU
R: H OU GROUPE R-SER-SER-SER-SER-LYS-ALA-PRO-PRO-PRO,
R: H OU GROUPE R-R-ASP-ASP-PRO-ARG-PHE-GLN-ASP,
R: H OU GROUPE R-ASP-HIS-PRO-LEU-THR,
R: GROUPE H-R-GLY-GLY-PRO-LYS, ET
R: GROUPE CYS OU TYR, ET
R: GROUPE CYS OU S-ACETAMIDEMETHYL-CYS, OU UN DE SES salts.
QUI EST UTILISE DANS LE DOMAINE MEDICAL.
A peptide of formula R-Ser-Leu-Pro-Ser-Pro-Ser-Arg-Leu-
Pro-Gly-Pro-Ser-Asp-Thr-Pro-Ile-Leu- Pro-Gln-OH (I) or its salts are
new. In the formula R is H or R1-Ser-Ser-Ser-Ser-Lys-
Ala-Pro-Pro-Pro-; R1 is H or R2-3-Asp-Asp-Pro- Arg-Phe-Gln-Asp-; R2 is
H or R4-Asp-His-Pro-Leu-Thr-; R3 is Cys or S-acetamidomethyl-Cys; R4
is H-R5-Gly-Gly-Pro-Lys-; R5 is Cys or Tyr. HCG is sugar protein and a
sexual hormone which plays an important role on support of pregnancy.
Determination or detection of HCG is useful for early diagnosis of
pregnancy, ectopic pregnancy and choriocarcinoma etc. Antibody obtd.
by means of the novel peptide of formula (I) as antigen has immunity
cross activity; and so the peptide (I) is useful for prepn. of
antibody for HCG determination system and as labelling reagent. End
cpd. (I) may be produced by condensing single amino acids or lower
peptides in the order shown in formula (I) and eliminating protective
gp. for functional gp. of side chain at the final stage of condensn.
reaction.
Description
_________________________________________________________________
La presente invention concerne
C-terminale de la gonadotropine chorionique humaine [HCG].
Plus particulierement, l'invention concerne un peptide de formule ou
R: H ou groupe R1-Ser-Ser-Ser-Ser-Lys-Ala-Pro-Pro-Pro
R1: H ou groupe R2-R3-Asp-Asp-Pro-Arg-Phe-Gln-Asp
R2: H ou groupe R4-Asp-His-Pro-Leu-Thr
R4: groupe H-R5-Gly-Sly-Pro-Lye
R5: groupe Cys ou Tyr, et
R3: groupe Cys ou S-acetamidemethyl-Cys, ou un de ses salts.
LtHCG est une hormone glycoproteique secretee per le placenta lors de
la grossesse, dans laquelle elle jeune un role important. On peut
utiliser l'analyse quantitative ou qualitative de 1'HCG pour le
diagnostic de la grossesse, de le grossesse extra-uterine ou du
choriocarcinome. Cependent on trouve de l'hormone luteinisante (LH),
de la folliculostimuline [FSH] et de la gonadotropine chorionique
CCG) dans l'hormone gonadotropique, et leur structure moleculaire se
ressemble; ce sont des glycoproteins. De plus, elles se composent de
deux sous-unites, une channe oC et une cheine (3. L'echange de la
choie and alpha d'une hormone gonadotropique n'affecte pas son
activite, et la structure de leurs chaines se ressemble donc
beaucoup.La channe est specifique de chaque gonadotropine, et les
chaines de LH et Co sont assez voisines l'une de l'autre. On peut
cependant distinguer la sequence d'amino acids au voisinage de
l'extremite C-terminale de la CG, et on peut donc fournir un systeme
precis et Fiable de dosage de la CG sans interference de autre hormone
gonadotropique, en particulier LH.
L'invention a ete realisee selon l'idee exposee ci-dessus, et
l'anticorps obtenu a partir de l'antigene constitue par le nouveau
peptide de formule [1] temoigne d'une activite immune croisee. Le
peptide (I) est utile pour la preparation d'un anticorps pour doser
ltHCG ou pour un reactif marqueur.
La synthese du peptide (I) de l'invention peut s'effactuer comma
suite:
On fait reagir un amino acid et/ou un peptide inferieur par
condensation dans tordre de la sequence diamino acids de Formule [I],
et le groupe protecteur du groupe reactif est libere au stade final de
la reaction.
La reaction de condensation peut s'effectuer par synthese classique
des peptides en repetant l'adjonction et le retrait des groupes
protecteurs et en condensant. Les groupes protec teurs pour la
synthese des produits de depart ou des intermediaires sont des groupes
protecteurs clmaziques pour la synthese des peptides et sont faciles a
retirer par hydrolyse, decomposition acide, reduction, aminolyse ou
hydrazinolyse.
Ainsi, on peut proteger le groupe amino classiquo- ment par un groupe
acyl comme un groupe Formyl, trifluora- tetyle, phthaloyl,
benzensaulfonyls, p-toluenesulfonyl, o-nitrophenylsulFonyl ou
2,4-dinitrophenylsulfonyl; un groupe aralcoyle comme le benzoyl, le
diphenylmethyl ou le triphenylmethyl Cces groupes peuvent
eventuellement etre substitues par un groupe alkoxy inferieur comme le
o-methoxy ou le p-methoxy); un groupe benzyloxycarbonyl comme le
benzyloxycarbonyl, o-bromobenzyloxycarbonyl, p-bromobenzyloxycarbonyl,
o-chlorobenzyloxycarbonyl e, p-nitrobenzyloxycarbonyl,
p-methoxybenzyloxycarbonyl, p-phenylazobenzyloxycarbonyl ou
p-(p'-methoxyphenylazo)-benzyloxycarbonyl; un groupe oxycarbonyl
aliphatic comme le cyclopentyloxycarbonyl, le
trichloroethyloxycarbonyl, le t-amyloxycarbonyl, le t-butoxycarbonyl
ou le diisopropylmethoxycarbonyl, ou un groupe arelcoyloxycarbonyle
comme le 2-phenylisopropoxycarbonyl, le -tolyl i
2-tolylisopropoxycarbonyl ou le 2-p-diphenyl-isopropoxycarbonyl. Ces
groupes amino peuvent etre proteges en formant une enamine que l'on
fait reagir avec une 1,3dicetone comme la benzoylacetone,
l'acetylacetone ou la dimedone.
On peut proteger le groupe carboxyl par formation d'un amide,
formation d'un hydrazide ou esterification.
Le groupe emide est substitue par un groupe 3,4-dimethoxybenzyl ou
bis-[p-methoxy-phenyl]-methyl. Le groupe hydre zide est substitue par
un groupe benryloxycarbonyle, trichloroethyloxyoarbonyle,
trifluoroacetyl, t-butoxycarbonyl, trityl ou
2-p-diphenyl-isopropoxycarbonyl.Le groupe esterest substitue par un
alkanol, comme le methanol, 1 'ethanol, le t-butanol ou le
cyanomethylalcohol; un aralcanol comme le benzylalcohol, le
p-bromobenzylalcohol, le p-chlorobenzylalcohol, le
p-methoxybenzylalcohol, le p-nitrobenzylmlcool, le
2,4,8-trimethylbanzylaloool, le benzhydrylaloool, le
benzoylmethylalcohol, le p-bromobenzoylmethylalcohol ou le
p-ohlorobenzoylmethylalcool; un phenol comme le 2,4,6-trichlorophenol,
le 2,4,5-trichlorophenol, le pentachlorophenol, le p-nitrophenol, le
2,4-dinitrophenol, le p-cyanophenol ou le p-methanesulfonylphenol; ou
un thiophenol comme le thiophenol, le thiocresol ou le
p-nitrothiophenol. Le groupe hydroxy dans la serine, la threonine ou
la tyrosine peut etre eventuellement protege par esterification ou
etherification.
Un groupe protege par esterification est, par exemple, un groupe
alkanoyl inferieur comme un groupe acetyl; un groupe aroyl comme un
groupe benzoyl; ou un groupe derive du carbonyl comme le
benzyloxycarbonyl ou l'ethyloxycarbonyl. Un groupe protege par
etherification est,- par exemple, un groupe benzyl, tetrahydropyranyl
ou t-butyl.
La protection du groupe hydroxy peut etre effectuee par un groupe
Z,2,2-trifluoro-1-t-bytyloxycarbonylaminoethyl e OU
Z,2,2-trifluoro-1-benzyloxycarbonylaminoethyl. Cependant il ntest pas
toujours necessaire de proteger ces groupes hydroxy.
Le groupe amino du groupe guanidino dans l'erginine peut etre protege
par un groupe nitro, tosyl ou benzyloxy-carbonyl. Cependant, il n'est
pas toujours necessaire de proteger le groupe guanidino.
Le groupe imino dans l'histidine peut etre protege par un groupe
benzyle5 trityl, benzyloxycarbonyl, tosyl, admmantyloxycanbonyle,
2,2,2-trifluoro-1-t-butyloxycarbonylemincethyle ou
2,2,2-thfluopro-1-benzyloxycarbonyleminoethyle, bien que le groupe
imino m'nit pas toujours besoin d'etre protege.
Le groupe mercapto dans la cysteine peut etre protege par un groupe
benzyl, p-methoxybenzyl, p-nitrobenzyl, trityl, benzylthiomethyl,
ethylcarbamoyl ou acetamidemethyle.
Le peptide (I) est synthetise par condensation d'amino acids ou de
peptides inferieurs. Ainsi, on fait reagir un amino acid ou un peptide
ayant un groupe alpha-amino protege et un groupe carboxyl terminal
active avec un amino acid ou un peptide ayant un groupe alpha-amino
libre et un groupe carboxyl terminal protege. D'un autre c8te, on Fait
reagir un amino acid ou un peptide ayant un groupe alpha-amino active
et un groupe carboxyl terminal protege avec un amino acid ou un
peptide ayant un groupe carboxyl terminal libre et un groupe
alpha-amino protege.
Le groupe carboxyl peut etre active par, par exemple, un azide
d'acide, un acid anhydride, un imidazolide d'acidou un esteractiF,
comme par transformation en cyanomethylester, thiophenylester,
p-nitrophenylester, p-nitrothiophenylester,
p-methanesulfonylphenylester, triiodylester, 2,4-dinitro-phenylaster,
2,4,5-trichlorophenylester, 2,4,5-triohlorophenylester,
pentachlorophenylester, N-hydroxy suocinimidester,
N-hydroxyphthalimidoester, 8-hydroxyquinole inester ou
N-hydroxypiperidinester, carbodiimide, N,N'-carbonyl-diimidazole ou un
isoxazoliumsalt comme le reactif de Woodward.
Les reactions de condensation preferees sont les procedes du
carbodiimide, de 1' azide, de l'esteractif et de l'acid anhydride.
Dans la reaction de condensation il faut eviter avec soin une
racemisation, et les procedes preferes sont ceux de l'azide, de
l'esteractif, et le procede de Wuensch CZ. Naturforsch., 216, 426 196
ou le procede de Geiger (Chem. Ber., 103, 788 [1970]], avec en
particulier le N-ethyl-N'-3-dimethylaminopropyl-carbodiimide (WBCI)
comme agent de condensation.
Le procede de l'invention est precede par une reaction de condensation
dans la sequence d'amino acids de formule CI3, et il est preferable de
synthetiser a partir de l'extremite C-terminale.
Il est preferable de synthetiser l'HCG protegee 127-1453 par un
procede de Geiger modifie en utilisant du
WSCI avec condensation du fragment C-terminal 132-145 et du fragment
N-terminal 127-131. Le fragment C-terminal 132-145 est synthetise de
preference avec condensation du fragment 132-137 et du fragment
138-134 par le procede de Geiger modifie utilisant le WSCI. e fragment
N-terminal 1Z7-131 est synthetise de preference avec condensation du
fragment 127-129 et du fragment 130-131 par le procede de Geiger
modifie utilisant du WSCl.
On synthetise de preference 1'HCa protegee (118-145] par condensation
du fragment C-terminal 127-145, c'est-a-dire l'HCGprotegee C1Z7-1453
et le fragment N-terminal 118-126 par le procede de Geiger modifie
utilisant le
WSCI. Le fragment C-terminal 118-126 est dc preference synthetise avec
condensation du fragment 118-121 et du fragment 122-126 par le pronede
de l'azide
L'HCH protegee (105-145) est ynthetisee de preference avec
condensation du fragment C-terminal 112-145 et du fragment N-terminal
105-111 par le procede de Geiger modifie utilisant le WSCI.Le fragment
C-terminal 112-145 est de preference synthetise avec condensation
sequentielle de l'HCG protegee (118-145] at du fragment 116-117, du
fragment 113-115 et du 112e soide amine par le procede de
l'esteractif. On condense de preference le fragment N-terminal 105-111
par le procede de l'azide avec le fragment 110111 et le fragment
105-109.
L'HCG protegee 100-1453 est de preference condensee par le procede de
l'esteractif avec le fragment C-terminal 11a-145 et le fragment
N-terminal 100-111. Le fragment Nterminal 100-111 est de preference
condense avec le fragment 100-104 'et le fragment 105-111 par le
procede de 1'azide
Le [Tyr100) -HCG [100-145] est de preference synthetisee par
condensation du fragment C-terminal 112-145 et du fragment N-terminal
100-111 par le procede de l'esteractif.
Le fragment N-terminal 100-111 est de preference condense avec le
fragment 100-104 et-le fragment 105-111 par le procede de l'azide.
Dans la synthese peptidique ci-dessus, le groupe carboxyl C-terminal
n'a pas toujours a etre protege. Ainsi, dans la reaction de
condensation par le procede de 1,azide ou de l'esteractif, il n'est
pas necessaire de le proteger. Le groupe carboxyl peut etre protege
par une esterification comme par le methyl-, ethyl- ou benzylester.
Le groupe estercomme le methylester peut etre retire par une solution
diluee sodium ou par transformation en hydrazide, et on peut retirer
le groupe benzylester par de l'hydrofluoric acid anhydre ou par
hydrogenation catalytique. Le groupe alpha-amino du peptide est
protege par un groupe protecteur classique, comme un groupe
benzyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl ou t-amyloxycarbonyl. On retire le
groupe benzyloxycarbonyl par hydrogenation catalytique et on retire
les groupes t-butoxycarbonyl et tamyloxycarbonyle par trifluoroacetic
acid.Les groupes protecteurs preferes sont pour le groupe hydroxyl de
la serine et de la threonine, un groupe benzyl; pour le groupe
hydroxyl de la tyrosine, un groupe 2,6-dichlorobenzyl; pour le groupe
-amino de la lysine, un groupe o-chlorobenzyloxycarbonyl; pour le
groupe amino du groupe guanidino de l'arginine, un groupe tosyl;et
pour le groupe mercapto de la cysteine, un groupe p-methoxybenzyl. Ces
groupes protecteurs peuvent etre retires par de l'hydrofluoric acid
anhydre. Le groupe acetamide-methyl peut etre utilise comme groupe
protecteur pour le groupe mercapto de la cysteine.
Comme ce groupe est stable vis-a-vis de hydrofluoric acid anhydre, on
peut le retirer avec l'acetate mercurique a pH 4 au moment de 11
enlevement dos autres groupes.
On obtient ainsi l'HCG protegee C127-145), ltHCG protegee (119-145),
l'HCG protegee (105-145), ltHCG protegee (100-145] et la (Tyr 100]-HCG
porteges (100-145). Ces groupes protecteurs sont de preference separes
par decomposition acidcomme par un retrait en une etape avec de
fluorhydric acid anhydre pour obtenir le compose de formule [I].
Lorsqu'on protege le groupe mercapto de la cysteine en position 110
et/ou- 100 par un groupe acetamide-methyl, on peut le retirer par
l'acetate mercurique a pH 4 apres retrait des autres groupes
protecteurs avec fluorhydrique anhydre.
On peut purifier le compose (I) ci-dessus par des procedes connus de
purification des peptides. On peut par exemple le purifier par
chromatographie sur colonne en utilisant le Sephadex LH-ZO marque
deposee), le Sephadex G50 Cmarque deposee), le Dowex 1 [marque
deposee) et la carboxymethylcellulose.
On peut obtenir le peptide (I) sous la forme de la base ou de son
salt. On peut generalement le conserver par une forme de salt avec un
organic acid comme L'acetic acid.
On peut doser l'HCG par une reaction immune utilisant un anticorps
obtenu a partir du peptide (I) comme antigene ou le peptide (I)
lui-meme comme antigene en appliquant une technique d'immuno-dosage
enzymatique, de radio-immunodosage, une reaction d'inhibition
d'hemagglutination, une reaction d'hemagglutination ou un test de
fixation du latex.
On trouvera des exemples ci-dessous.
[Preparation d'antiserum).
Exemple 1
On dissout 500 g de chmoune des hormones susivantes:
HCG [118-145]. HCG (110-1450, (Cys[Aom)100]-HCG [110-145],
(Cys[Acm]110)-HCG (105-145 et (Cys[Acm)110-HCG (100-145) dans du sel
physiologique et on melange avec une quantite-egale d'adjuvant complet
de Freund pour preparer l'emulsion. On injecte chaque emulsion a 5
cobayes males pesant Z80-350 g, la premiere fois dans le gras des
membres et de la croupe, et la seconde fois par voie sous-cutanee dans
le cou pour chaque administration, et on recueille du sang par
ponction cardiaque le dixieme jour.
Les anticorps ainsi obtenus sont appeles Lot A-2,
Lot B-3, Lot C-2, Lot 0-1 et Lot E-1.
Exemple Z
On ajoute du WSCI C200 mg) dans une solution de SAB Cserum-albumine de
boeuf) [30 mg) et d'HCG (127-145] (60 mg) dissoute dans un tampon
phosphate 0,1 M (pH 8,0, 1 ml) et on agite a la temperature ambiante
pendant 30 minutes. On fait passer le melange reactionnel a travers
une colonne de Sephadex 6-50 (1,5 x 50 cm) avec de l'water distillee
pour la Filtration sur gel. On recueille la Fraction contenant le
SAB-HCG (127-1450 et on lyophilise pour obtenir le SAB-HCG (127-1450
(34 mg).
On injecte le produit (1 mg) dissous dans du salt physiologique [2 ml]
a des cobayes de la meme maniere qu'il est dit dans l'exemple 1 et on
recueille le sang. L'anticorps obtenu est appele Lot F-I.
Exemple 3
On dissout de la SAB t6O mg) et de l'acide 2,2'-dithiobenzothiezy
-propionic acid [0,2 mg] dane un tempon phosphate 0,1 M [pH 7,5, 2 ml)
et on agite a 0 C pendant 10 minutes. On y ajoute une solution de
succinimidester de l'aci de 2,2'-dithiobenzothiazyl-propionique [G mg]
dans le OMF [0,3 ml) et on agite a 0 C pendant 1 h. On ajuste le
melange reactionnel a pH 5 en ajoutant HCl 1 H et on Fait passer a
travers une colonne de Sephadex G-50 [1,5 x 50 cm] en utilisant un
tampon phosphate 0,1 M [pH 7,5] pour la
Filtration sur gel. on recueille des fractions a 27-35 ml.
On en preleve 3,2 ml (contenant 20 mg de SAB), on ajoute de l'HCG
[100-145] (20 mg) et on agite a 0 C pendant 1 h.
Apres dialyse contre l'water distillee pendant un jour, on lyophilise
le dialysat pour obtenir la SAB-HCG (100-145) [36 mg].
On injecte le produit [1 mg) dissous dans le salt physiologique [2 ml)
a des cobayes comme dans l'exemple 1 et on recueille le sang.
L'anticorps ainsi obtenu est appele
Lot G-1.
CDiagnostic de l'urine en cas de grossesse par le test de l'inhibition
de l'hemagglutination).
On effectue le diagnostic de l'urine en cas de grossesse par le test
d'inhibition de l'hemagglutination selon le procede decrit dans Acta
ondocrinol., 35, 261 Cl960).
On obtient des resultats positifs lorsqu'on diagnostique des specimens
d'urine en cas de grossesse Egrossesse de 10 semaines) en utilisant
l'un quelconque des anticorps ci-dessus. L'inhibition de
l'hemagglutination negative est confirmee par le diagnostic de
specimens d'urine normaux.
Les abreviations dans l'invention ont les significations suivants:
BOC: t-butoxycarbonyl AOC: t-amyloxycarbonyl-benzyloxycarbonyl Z-Cl:
o-chlorobenzylo greater than rycarbonyle
Bzl: benzyl Tos:
tosyl
Bzl-C12-2,6-dichlorobenzyl OMe: methyl-estor,
OEt: ethyl-ester ON?: p-nitrophenyl-ester,
OBzl: benzyl-ester Cys: L-cysteine,
OSU: N-hydroxysuccinimide ester,
Ser: L-serine, Thr: L-threonine,
MBzl: p-methoxybenzylei Acm: acetamidemethyl e
Leu: L-leucine, Pro: L-proline,
Asp:
L-aspartic acid
Arg: L-arginine, Gly: glycine,
Ala: L-alanine, Gln: L-glutamine,
Lys: L-lysine, His: L-histidine,
Tyr: L-tyrosine, Ile: L-isoleucine,
Phe: L-phenylalanine, TEA: triethylamine
TFA:Acide triflucracetiquacid DURA: dicyclohexylamine,
CHA: cyclohexylamine, DMF: dimethylformamide,
THF: tetrahydrofuran TBA: tribenzylamine
NMM: N'-methylmorpboline HOBT; 1-hydroxybenzotriazole,
WSCI: N-ethyl-N'-dimethylaminopropyl-carbodiimide,
Les exemples suivants precisent l'invention. Dans les exemples, on
utilise le support et le solvant de developpement suivants pour la
chromatographie en couche mince (CCM).
Support: gel de silice w.
Solvant de developpement:
1. chloroform- methanol - scide acetique [95:5:3)
2. - - " - " (85: 15: 5) 3. chloroform-methanol-acide acetique
t85:10:53 4. " " " [80:25:2] 5. " " " [24:6:1] 6.
ethyl-chloroformethanolacetate [5:2:5] 7. ethyl acetate 8.
ethyl-methanol acetate (10:1) 9. ethyl-benzene acetate (1:1).
10. butanol-acide acetique-eau [3:1:1)
Support: cellulose Merck
Solvant de developpement: 11. butanol - pyridine-acetic acid - water
15:10:3:12[
Exemple 1.
HCG 1127 - 145):
1) P(143 - 144): BOC-Leu-Pro-OBzl [1],
On ajoute du THF t300 ml] a BOC-Leu-OH.H2O (149,59 g, 0,6 M]. On y
ajoute du THF (150 ml] et du OMF (100 ml3 pour preparer une solution.
On ajoute encore
H-Pro-OBzl [152,28 g, 0,63 M], on ajoute goutte a goutte du
WSCI [120,8 ml, 0,66 M) A -10 C, et on ajoute encore du
DMF [100 mi), puis on agits e la temperature ambiante pendant la nuit.
Apres avoir enleve le solvant par distillation sous vide, on ajoute de
l'ethyl acetate [600 ml] au residu, et on lave trois fois avec du
sodium aqueux a 5X, deux fois avec HCl 1 N et deux fois avec de
l'water. On seche la couche d'ethyl acetate avec du sodium sulfate
anhydre et on concentre sous vide. On dissout la matiere huileuse dans
le benzene (1 litre) et on concentre sous vide pour obtenir une
substance huileuse (1).
CCM: RF = 0,89 2) P[142-144]: BOC-11a-Leu-Pro-OBzl [2]:
On ajoute du TFA t300 mi) a la substance (1) [192 mM) dissoute dans le
methylene chloride (100 mi), et on agite a la temperature ambiante
pendant 30 minutes. On enleve le TFA par distillation sous vide. On
ajoute de l'hexane, et on l'enleve par distillation sous vide. On
neutralise le residu huileux dissous dans le THF (200 ml) par NMM
(56,1 ml) jusqu'a pH 7 a D.On ajoute HOC-11e-OH.H2O (38,33 g, 159,5
mM) et HOBT [21,55 g, 159,5 mM). On dissout le melange dans le OMF
(100 mi) et on y ajoute goutte a goutte du WSCI 34,1 mi) tout en
refroidissant avec de la glace, puis on agite a la temperature
ambiante pendant la nuit.
On enleve le solvant par distillation sous vide et on ajoute de
l'ethyl acetate (500 mi) au residu, puis on lave 3 fois avec du sodium
bicarbonate a 5, une fois avec une solution saturee de sodium
chloride, 2 fois avec HCl 9 N, 2 fois avec une solution saturee de
sodium chloride et 1 fois avec de l'water, dans cet ordre. On seche
avec du sodium sulfate anhydre la solution lavee et on concentre sous
vide.
On ajoute de l'hexane au residu et on separe le precipite par
decantation. On procede a la recristallisation a partir de
l'ethyl-hexane acetate. Lors de la filtrztion, une
Faible part est dissoute et le reste est dissous dans le benzene, et
lyophilise pour donner la substance [2] [rendement; 90,9 percent ].
Pp: 60-64 C.
[ and alpha]24D: -66,34 (c = 1, DMF)
CCM: Rf1 = 0,63.
3) P[142-144]: BOC-Ile-Leu-Pro-OH [3]: (76,98 g, 145 mM)
On dissout le substance [2]/dans le n-butanol (20 ml) et l'ethanol
(300 ml). On y ajoute du Pd/C a 5 percent [15 93 et on procede a une
hydrogenation catalytique pendant 3 h. Apres avoir enleve le
catalyseur, on concentre la liqueur-mere sous vide. Un ajoute au
residu du diethylether [300 ml) et on extrait avec 500 ml et ZOO ml de
sodium bicarbonate aqueux a 5 percent, respectivement.On ajuste
l'extrait a pH 4 en ajoutant de l'HCl 1 N en refroidissant avec de la
glace pour precipiter en continu le produit, que l'on extrait avec de
l'ethyl acetate et qu'on lave 2 Fois avec de liteau. Apres sechage
avec du sodium sulfate anhydre, on concentre la solution sous vide. On
solidifie le residu en ajoutant de l'ether-haxane. La
recristallisation avec de l'ethylether-hexane acetate donne la
zubstance [3] [60,33 g, rendement, 94,2 percent ].
P@: 114-119 C.
[ and alpha]24D: -61,98 [c = 1, OMF)
CCM: Rf1 = 0,53, Rf6 = 0,47.
Anelyac elementaire [C22H39O6N3]:
C percent H percent M percent trouve: 59,82 9,42 9,56 calcule: 59,84
8,O 9,52.
4) P[142-145]: BOC-Ils-Lou-Pro-Gln-DBzl,
On ajouto du TFA (150 ml) dans BOC-Gon-OBzl (38,41 g, 108 mM) dissous
dans le methylene chloride (100 ml) et on agite a la temperature
ambiante pendant 30 minutes. On enleve le TFA par distillation sous
vide et on dissout le residu dans le THF (100 ml) que l'on ajuste a pH
7 en sajou tant du FNMM (40 ml) en refroidissant avec un melange
refrige- rant.On y ajoute une solution 100 mi) de substance t33 [47,69
g, 108 mM) dans le THF et-une solution dans le DMF de
HOBT 14,50 g, 108 mM). On verse goutte a goutte du WSCI (19,76 ml 108
mM) en refroidissant avec un melange refrigerant pendant 10 minutes et
on agite pendant la nuit. On ajoute au melange reactionnel de l'ethyl
acetate (500 ml) et on lave avec du sodium bicarbonate aqueux a 5X.
On extrait le couche aqueuse aveo de l'ethyl acetate t300 ml). On
combine la couche ethyl acetate et on lave avec du sodium bicarbonate
aqueux a 5 percent, du sodium chloride sature, HCl 1 N Cdeux Fois), du
sodium chloride sature (deux fois] et de l'water, dans cet ordre. On
seche la solution avec du sodium sulfate anhydre et on concentre sous
vide. On solidifie le residu en ajoutant de l'etherhexane. On effectue
la recristallisation a partir de l'aceta- te d'ethyl [400 ml] pour
obtenir le substence [4] [56,98 g, rendement 80,0 percent ].
Pf: 141-143 C.
Analyse elementaire [C34H53O8N5): GX H,'
Trouve: 61,76 8,41 10,84
Calcule: 61,89 8,10 10,61 5) P [140-141]: BOC-Thr[Bzl]-Pro-OBzl [5]:
On dissout BOC-Thr-[Bzl]-OH (32,88 g, 0,15 M) dans le THF (100 ml). On
y ajoute de l'HOBT (20,94 g, 0,155 M) et de l'H-Pro-OBzl.HCl (37,47 g,
0,155 M], puis on ajoute du OMF [200 ml] pour preparer une solution.
On ajoute goutte a goutte du WSCI (28,37 ml, 0,155m) pendant 10
minutes tout en refroidissant avec un melange refrigerant, puis on
agite a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve le solvant
par distillation sous vide.On ajoute au residu de l'ethyl acetate t500
mi), et on lave avec du sodium bicarbonate aqueux a 5X (deux fois],
une solution saturee de sodium chloride, HCl 1 N (deux fois), du
sodium chloride sature (deux foid et de l'water, dans cet ordre. Apres
sechage avec du sodium anhydre, distillation et concentration sous
vide, on obtient une substance huileuse t53 (57,41 g, rendement: 77,1
percent).
COM: Rf6 = 0,65, Hf1 = 0,03.
6) P(140-141): BOC-Thr(Bzl)-Pro-OH [6]:
On dissout la substance (5] (52,78 g, 106,29 mM) dans le methanol [300
ml]. On ajoute goutte a goutte NaOH 1 N [150 ml, exces 1,4 molaire]
pendant 20 minutes au bain de glace et on gite a la temperature
ambiante. un ajoute HCl 1 N [43,71 ml, exces 0,4 molaire) en
refroidissant avec de la glace pour ajuster a pH 7 et on enleve le
methanol par. distillation sous vide. On lave la couche aqueuse avec
de l'ether[150 mi) et on ajuste le pH de la couche aqueuse a 3 en
ajoutant HCl 1 N [110 mi). On extrait 2 fois la solution avec de
l'ethyl acetate [300 ml et 150 ml], et on lave deux fois avec du
sodium chloride aqueux et une nouvelle fois a Peau. un seche l'extrait
en ajoutant du sodium sulfate anhydre, puis on concentre sous vide. On
ajoute au residu de l'etheret de l'hexane pour obtenir le precipite.
On repete la meme operation et on dissout le precipite dans l'ethyl
acetate, puis on seche sous vide pour obtenir la aubstanoe solide
mousseuse [6] [32,27 g, rendement: 77,75 percent ].
Pf: 60-55 C.
[ and alpha]24D: - 36,84 (c = 1, DMF)
CCM: Rf6 = 0,34.
Analyse elementaire [C21H30O5N2.H2O]:
C percent H percent N percent
Trouve: 61,02 7,6d 6,67
Calcule: 61,75 7,90 6,86 7]P[140-145]:
BOC-Thr[Bzl]-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln-OBzl [7]:
On verse la substance (b) [54,77 g, 83 mM) dans le methylene chloride
(80 mi). On ajoute du TFA (240 mi) en reFroidissant avec de la glace
et on agite a la temperature ambiante pendant 25 minutes. On enleve le
TFA pardistillation a 0 C sous vide et on ajoute del'etherau residu.
On separe le precipite par filtration et on concentre sous vide la
solution filtree. On ajoute de l'etherau concentre pour precipiter la
matiere. On combine le precipite et on le seche dans un dessicateur
sur une base pendant la nuit. On dissout le precipite dans le OMF (200
mi) que l'on ajuste a pH 7 en ajoutant du NMM [9,5 mi) en
reFroidissant avec un melange refrigerant. On y ajoute du HOBT (11,21
9, 63 mM] et du
BOC-Thr[Bzl]-Pro-OH [32,27 g, 83 mM] et du DMF (40 ml) pour preparer
une solution. On verse goutte a goutte du
WSCI [15,19 ml, 83 mM) pendant 10 minutes tout en refroidissant avec
un melange refrigerant. Au bout de 2 h d reaction, on agite le melange
reactionnel a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve le
OMF par distillation sous vide.
On ajoute du sodium bicarbonate aqueux a 5 percent (300 ml) au residu
que l'on extrait Z fois avec de l'ethyl acetate t800 ml et 300 ml]. On
lave Z fois la couche d'ethyl acetate avec du sodium bicarbonate
aqueux a 5 percent, une solution saturee de sodium chloride, a fois
avec MCl 1 N, 2 fois avec du sodium chloride sature et de l'water,
dans cet ordre.
On seche la couche ethyl acetate avec du sodium sulfate anhydre, puis
on concentre sous vide.
On separe la matiere precipitee en ajoutant de l'ether.
On effectue la recristallisation avec de l'ethyl acetate et on y
ajoute del'etherpour obtenir la substance [7] t63,98 g, rendement 81,3
percent ].
Pf; 101-103 C
[ and alpha]20D: -61,78 [c = 1, OMF]
Analyse elementaire (C50H73O11N7.
C percent H percent
Trouve: 62,21 7,89 10,03
Calcule: 82,18 7,82 10,15
Analyse des amino acids [1,330 mg/HCl U,3 ml, acide acetic acid 0,3
ml, anisol 0,1 ml, 1050C, 24 h): Thr 0,84 [1), Pro 2, Ile 0,97 [1],
Leu 1,00 [1], Gln 0,98 [1], e) P[39-145]:
BOC-Asp(Bzl)-Thr(Bzl)-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln
OBzl [8];
On ajoute l substance (7) (63,98 g, 87,48 mM) dissoute dans le
methylene chloride (150 ml) a du TFA t300 ml) en refroidissant avec de
la glace, et on agite a la temperature ambiante pendant 30 minutes. On
enleve le
TFA par distillation sous vide a O0C et on ajoute de l'etherau residu.
On filtre le precipite, et on le combine avec les seconds cristaux
obtenus a partir de la liqueur-mere, et on seche sur une base dans un
dessicateur pendant la nuit
Crendement: 67,1 g).On dissout le precipite dans le DMF t350 mi), que
l'on ajuste a pH 7 en ajoutant du NMM [7,42 mi) en refroidissant avec
un melange refrigerant. On y ajoute du BOC-Aap [BOzl]-Oh (29,77 g,
87,72 mM) et du HOBT 11,85 g, 87,72 mM). On ajoute goutte a goutte du
WSCI (16,05 ml, 87,72 mM) en refroidissant avec un melange
reFrigerant. Au bout de Z h, on maintient la temperature a la
temperature ambiante puis on agite pendant la nuit. On enleve le
solvant par distillation et on ajoute de l'water au residu, puis on
separe le precipite forme par decantation en refroidissant avec de la
glace.On lave le precipite dissous dans l'ethyl acetate [1,5 1) avec
du sodium bicarbonate a 5X [2 fois), une solution saturee de sodium
chloride [1 fois], de l'HCl 1 N (1 fois0, ane solsution saturee de
chlorure de sodium [2 fois] et dechloridel'esu [1 fois], dans ost
ordre. Apres sechage avec du sulfate de sodiusulfate anhydre, on
concentre le melange sous vide. On laisse reposer le concentre et on
filtre le precipite forme. On effectue deux recristal lisations a
partir de L'ethyl ether pour obtenir la subatence [8] [rendement: 94,8
percent ].
Pf: 99-103 C.
[ and alpha]24D: -82,44 (c = 1, DMF)
CCM: Rf3 = 0,62, Rf2 = 0,79.
Anslyse elementaire [C6H84O14N3]:
C percent H percent N percent
Trouve: 63,38 7,56 9,80
Calcule: 63,52 7,34 9,7z 9) P(138-145]:
BOC-Ser[Bzl]-Asp[OBzl]-Thr(Bzl)-Pro-Ile-Leu
Pro-Gln-OBzl C9):
On ajoute du methylene chloride (100 mi) a la substance (a) (73,88 g,
63,97 mM). On y ajoute du TFA t300 ml] tout en refroidissant avec de
la glace et on agite a la temperature ambiante pendant 30 minutes. On
enleve le TFA par distillation sous vide a 0 C. On ajoute de etherau
residu, et on seche le precipite ainsi forme sur potassium hydroxide
dans un dessicateur pendant la nuit.On ajuste le precipite dissous
dans le DMF [200 ml) a pH 7 en ajoutant du NMM (5 mi) tout en
refroidissant avec un melange refrigerant.
On y ajoute BOC-Ser[Bzl]-OH [24,56 g, 83,16 mM), HOBT t11,23 9, 83,16
mM) et du OMF 50 mi). On ajoute encore goutte a goutte du WSCI [15,22
ml] en refroidissant avec un melange refrigerant, puis on ajoute
encore du NMM (2,03 ml]pour ajuster a pH 6. Au bout de 2 h on amene la
temperature a la temperature ambiante, et on agite pendant la nuit. On
enleve le
DMF par distillation sous vide, et on verse le residu dans l'water
froide [2 litres.On recueille le precipite ainsi forme par flutration
et on l'extrait avec CHCl3 [5 litres] et du sodium bicarbonate aqueux
a 5 percent 5 percent (2 litres). Apres avoir lave la couche de
chloroform avec du sodium bicarbonate a 5 percent, du sodium chloride
sature, HCl 1 N, du sodium chloride sature et de lleau, dans cet
ordre, on seche la couche organique en ajoutant du sodium sulfate
anhydre. On seche la couche de solvant sous vide et on ajoute au
residu de l'ethylether-hexane acetate. On dissout le precipite forme
dans le chloroform [300 mi), on y ajoute de l'ethyl acetate [1 litre),
puis on enleve le chloroform par distillation. On melange la
suspension ainsi obtenue avec de l'ether-hexene pour obtenir le
precipite.
On repete la recristallisation de la meme fagon pour obtenir la
substance 93 Crendement: 95,1 percent, 80,95 g).
Pf: 120-122 C.
CCM: Af2 = 0,70.
Anaolyse elementaire [C71H95O16N9]:
C percent H percent N percent
Trouve: 63,87 7,38 8,62
Calcule: 64,09 7,20 9,47 10] P[136-137]: BOC-Gly-Pro-OBzl[10]:
On ajoute du THF [100 mi), du OMF [100 mi) et de l'HOBT [20,94 tg,
0,155 M] a du BOC-Gly-OH [26,28 g, 0,15 M].
On y ajoute une solution dans le DMF C20 ml) de H-Pro-
OBzl.HCl C37,47 g, 0,155 M], on refroidit a -10 C et on ajoute du WSCI
[28,37 ml, 0,155 M) pendant 10 minutes. Apres avoir ajoute du OMF t30
mi), on agite le melange a la temperature ambiante pendant la nuit. On
enleve le solvant par distillation sous vide, on ajoute de l'
ethyl acetate
(500 mi) et on lave P fois avec du sodium bicarbonate a 5 percent, une
solution saturee de sodium chloride, 2 fois avec
HCl 1 N, 2 fois avec une solution saturee de sodium chloride et de
l'water, dans cet ordre. On seche la couche d'ethyl acetate avec du
sodium sulfate anhydre, et on concentre sous vide pour obtenir la
matiere huileuse [67 g] que l'on dissout dans le benzene (100 ml).On
introduit la solution dans une colonne [7 x 33 cm) de gel de silice
t500 g) remplie de benzene et on fait passer a travers le benzene
[300 ml]. On affeotue l'elution avec du ethyl benzene-acetate t10: i
-+5: 1 -+2: 1 # 1: 1] jusqu'a l'ethyl acetate. On recueille les
fractions presentant Rf1 = 0,86 par CCM et on seche sous vide pour
obtenir la matiere huileu se (9) [46,16 g). On conoentre sous vide les
fractions res tantes et on les introduit dans une colonne [4,5 x 16
cm) de gel de silice [100 g) et on chromatographie de la meme maniere
que ci-dessus pour obtenir la matiere huileuse [10]
[8,78 g]. Quantite totale: 54,84 g.
CCM: Hf1 = 0,86.
11) P(134-135]: BOC-Lau-Pro-OH (11):
On dissout du BOC-Leu-Pro-OBzl [82,76 g, 0,252 mM) dans le methanol
[600 ml]. On ajoute goutte a goutte MaOH 1 i [327,6 ml, exces 1,3
molaire) en refroidissant avec de la glace, et on agite pendant 1 h a
la temperature ambiante.
On ajoute au melange reactionnel HCl 1 N [8 ml] en refroidissant avec
de la glace, puis on enleve le methanol par distillation sous vide.
Apres avoir lave la couche aqueuse avec du benzene et de l'ethyl
acetate, on ajoute de l'HCl 1 N (260 mi) en reFroidissant avec de la
glace pour Former une matiere huileuse que lton extrait avec de
l'ethyl acetate.
On lave l'extrait avec une solution saturee de sodium chloride et de
l'water et on seche avec du sodium sulfate anhydre. On seche la
solution sous vide et on dissout le residu dans le benzene et on
lyophilise pour obtenir la substance [11) (58,57 g, rendement: 70,8
percent ].
Pf: 63-67 C [ and alpha]24D: -66,42 (c = 1, DMF)
Analyse elementaire (C18H28O6N2):
C percent H percent N
Trouve: 58,Z9 8,87 8,59
Calcule: 58,52 8,59 8,53 12] P[234-137]: BOC-Lau-Pro-Bly-Pro-OBzl
(12]:
On ajoute du methylene chloride (100 ml) et du
TFA (200 mi) a la substance (10) t54,36 g, 0,15 ti) et on agite a la
temperature ambiante pendant as minutes. Bn enleve le TFA par
distillation sous vide et on seche le residu sur potassium hydroxide
dans un dessicateur.Apres avoir dissouS dans le TKF [100 ml] et avoir
ajoute de la triethylamine t48 ml pour ajuster a pH 7 en refroidissant
a -10 C, on y ajoute une solution dans le THf [100 ml] de la qubstance
(11) [48,26 g, 0,15 M) et du HOBT [20,27 g, 0,15 M].
On ajoute encore du THF [50 ml) et l'on verse goutte a goutte du WSCI
(27,45 ml] a -10 C pendant 10 minutes. Au bout de 2 h, on amene la
temperature a la temperature ambiante et on agite pendant la nuit. On
enleve le solvant par distillation et on dissout le residu dans
l'acetare d'ethyl [700 ml),puis on lave avec une solution de sodium
bicarbonate a 5X [500 mi). On extrait la couche aqueuse a nouveau avec
de l'acte ethyl (300 mi), on combine avec la couche ethyl acetate, et
on lave avec du sodium bicarbonate aqueux a 5 percent, une solution
saturee de sodium chloride, deux fois avec
HCl 1 t4, Z fois avec une solution saturee de sodium chloride et de
l'water, dans cet ordre.Apres sechage avec du sul
sodium anhydre, on concentre sous vide. On ajoute du benzene au residu
et on concentre sous vide. On introduit le concentre dans une colonne
(6,5 x 20 cm) de gel de silice t300 93 remplie de benzene et on elue
avec du benzene # ethyl benzene-acetate (3: 1 #2: ethyl acetate.
On recueille les fractions presentant un Rf1 = 0,57 et on seche sous
vide pour obtenir la substance [12] qui mousse en se solidifiant
(45,73 g). On recueille les fractions restantes, on concentre sous
vide et on chromatographie de la meme meniere que ci-dessus poor
obtenir le substance [12] [18 g]. Ensuite on concentre les fractions
restantes sous vide, on les introduit dans une colonne [4,5 x 15 cm)
de gel de silice Clou g) et on elue de la meme maniere que ci-dessus
pour obtenir la substance [12] C7,11 g). Quantite totale: 70,84 g
Crendement: 82,64 percent ].
Pf: 65-89 C.
[ and alpha]24D: -93,64 (c = 1, DMF)
CCM: Rf1 = 0,57, Rf6 = 0,54
Analyse elementaire (C30H44)7N4]:
C percent H percent N percent
Trouve: 62,98 7,94 10,07
Calcule: 32,92 7,74 9,78 13] P[133-137]:
BOC-ARg[Tos]-Leu-)Pro-Gly-Pro-OBzl [13];
On ajoute du TFA [220 ml] a le substence [12] [88,72 g, 120 mM]
dissoute dans le chloride dem6thylene [100 ml) et on agite a la
temperature ambiante pendant 20 minutes. On enleve le TFA par
distillation a 0 C sous vide, on y ajoute de l'hexane et on seche sous
vide.On seche le residu sur potassium hydroxide dans un dessicateur,
on dissout dans le DMF [200 ml] et on ajuste a pH 6 en ajoutant NMM
59,4 ml) a -10 C. On ajoute une solution dans le
DMF (50 ml) de BOC-Arg(Tos-OH (53 g, 123 mM) et de HOBT (16,88 g, 125
mM) pour dissoudre et on verse goutte a goutte du WSCI [22,86 ml, 125
mM) a 10 C pendant 10 minutes. Au bout de 2 h, on agite le melange
reactionnel a la temperature ambiante pendant la nuit. On ajoute
encore du WSCI (3,66 ml, 0,2 mM) a -10 C au melange reactionnel et on
agite a la temperature ambiante pendant 4 h. On enleve le DMF par
distillation sous vide et on ajoute au residu une. solution de sodium
bicarbonate a 5 percent (600 ml].On extrait 2 Fois le precipite avec
de l'ethyl acetate t500 ml]. On lave l'extreit avec une solution a 5X
de sodium bicarbonate, du sodium chloride sature, deux fois avec HCl 1
N, 3 fois avec du sodium chloride sature et de l'water, dans cet
ordre. On seche la solution avec du sodium sulfate anhydre et on
concentre sous vide. On ajoute au residu de l'ether-hexane et on
filtre la matiere ainsi precipitee. On effectue la recristallisation a
partir de l'ethyletherhexanacetate pour obtenir la substance (13)
[100,77 g, rendement: 95, 1 percent ].
Pf: 107-112 C [dec.].
[ and alpha]24D = 64,84 [c = 1, DMF]
CCM: Rf1 = 0,19.
Analyse des amino acids [0,709 mg/HCl 0,3 ml, acide acetic acid 0,3
ml, anisol 0,1 ml, 1050C, 24 h); Pro [2],
Gly 0,95 (10, Leu 1,01 (1) et Arg (0,90 (1).
14] P[132-137]: BOC-Ser(Bzl)-Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-OBzl (14):
On ajoute du methylene chloride [100 ml] et du
TFA (400 ml] a la substance [13] 100,77 g, 114 mM) et on agite a la
temperature ambiante pendant 35 minutes. On enleve le TFA par
distillation sous vide a 0 C, on ajoute de l'etherau residu et on
Filtre le precipite. On concentre la liqueur-mere sous vide pour
obtenir le second precipite.
On combine le precipite et on le seche sur potassium hydroxide pendant
la nuit, et on dissout dans le DMF (aOO mi). On ajoute du MMM [10 mi)
a -10 C pour ajuster a pH 8, puis on verse goutte a goutte a pH 5 du
HOBT [16,94 g, 125,4 mM) et du BOC-Ser[Bzl]-Oh C37,03 g, 125,4 mM). Au
bout de 2 h on agite le melange reactionnel a la temperature ambiante
pendant la nuit.On enleve le DMF par distillation sous vide et on
verse le residu dans un melange d'water et de glace [1,5 1) pour
obtenir le precipite, que lton extrait a fois avec de l'ethyl acetate
t1 litre et 500 mi). On lave la couche d'ethyl acetate avec HCl 1 N,
une solution saturee de sodium chloride, 2 fois avec NaOH 1 N, une
solution saturee de sodium chloride et de l'water, dans cet ordre.
Apres sechage avec sodium sulfate anhydre on concentre sous vide.
On ajoute de etherau residu et on recueille le precipite par
filtration. On effectue deux fois la recristallisation a partir de
l'ethylether acetate pour obtenir la substance [14] [107,34 g,
rendement; 87,0 percent ].
Pf: 101-105 C.
CCM: Rf@ = 0,71, RF3 = 0,49.
Analyse des amino acids (1,818 mg/HCl 0,3 ml, acide acetic acid 0,3
ml, anisol 0,1 ml, 1050C, 24 h);
Ser 0,72 (1), Arg 0,95 (1), Leu 1,03 (1), Pro(2).
15] P(132-137]: BOC-Ser[Bzl)-Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-OH [15]:
On dissout la substance (14) [105,44 g, 97,43 mM) dans le methanol
[350 ml). On verse goutte a goutte NaUH 1 N (125,36 ml, exces 1,3
molaire) en refroidissant avec de la glace et on agite a la
temperature ambiante pendant 2 h. On ajoute au melange reactionnel
NaOH 1 W [20 ml) et on agite a la temperature ambiante pendant 1 h
percent. On ajoute au melange reactionnel de l[HCl 1 N [49 ml] pour
ajuster a pH 6 et on enleve le methanol par distillation sous vide. On
ajoute de l'water a la couche aqueuse et on lave a ether(100 ml).
On verse goutte a goutte de l'HCl 1 M 50 mi) en refroidissant avec de
la glace dans la couche aqueuse. Comme il devient impossible d'agiter
etant donne la Formation d'un precipite de matiere visqueuse, on
ajoute de l'ethyl acetate t300 mi) et on verse goutte a goutte de
l'HCl 1 M (80 ml] pour ajuster le pH de la couche aqueuse a 2. On
extrait la couche aqueuse avec de l'ethyl acetate (1 l et 500 ml), et
on lave Z fois avec une solution saturee de chloride-de sodium et de
l'water.Apres sechage avec du sodium sulfate anhydre, on concentre la
couche ethyl acetate sous vide pour obtenir une matiere huileuse que
l'on solidifie en ajoutant de l'ether. On recristallise a partir de
l'ethylether acetate pour obtenir la substance (15) C95,1 g rendement:
100 percent ].
CCM: Rf2 = 0,10, Rf4 = 0,32.
16] R[132-145]: BDC-Ser[Bzl]-Arg[Tos]-Leu-Pro-Gly-Pro-Ser
(Bzl)-Asp[OBzl]-Thr[Bzl]-Pro-Ile-Leu-Pro-Gln-OHBzl [16]:
On dissout le substanne [9] [49,68 g, 37,32 mM] dans le methylene
chloride [130 ml]. On y ajoute du TFA (220 mi) et on agite a la
temperature ambiante pendant 45 minutes. On concentre le melange
reactionnel sous vide et on ajoute de l'etherau residu. On recueille
le precipite et on seche sur potassium hydroxide pendant la nuit, et
on dissout dans le DMF [220 ml]. Apres avoir ajuste a pH 7 en ajoutant
du NMM [4,10 mi) a -100C, on ajoute la substance (15) [43,72 g, 44,79
mM] et du HOBT [8,58 g, 48,52 mM].Apres dissolution, on ajoute du WSCI
[8,88 ml, 48,52 mM) goutte a goutte a -10 C et on agite a la
temperature ambiante pendant Z jours. On enleve le OMF par
distillation sous vide, et on verse le residu dans de l'water glacee
[2 i). On filtre le precipite, on le met en suspension dans l'water,
on le lave et on filtre. On repete cette operation 5 Fois a pH, et on
seche dans un dessicateur sous vide pour obtenir le solide t109 9],
que l'on dissout dans le methanol, que l'on concentre sous vide et que
l'on distille de fagon azeotropique en ajoutent du benzene pour
enlever le reste d'water. On repete cette operation 3 fois.On effectue
la recristallisation a partir de l'ethylether acetate pour obtenir la
matiere t90,09 g] que l'on dissout dans le chloroform [270 mi) et que
l'on introduit dans une colonne de gel de silice [600 g) remplie de
chloroform, puis on elue avec du chloroform-methanol (20:1). On
recueille les fractions presentant une tache dans la
CCM et on les seche sous vide pour obtenir la substance C153.
On concentre sous vide les fractions restantes et on les introduit
dans une colonne de gel de silice [220 g) et on elue de la meme
maniere que ci-dessus.
On recueille les fractions presentant une tache a la 0CM et cn seche
sous vide. On repete 4 fois l'operation de chromatographie ci-dessus
pour obtenir la substance [16] [quantite totele: 64,26, g, rendement:
78,9 percent ].
CCM: Rf3 = 0,40, Rf2 = 0,60
Pf: 120-125 C
Analyse elementaire:
C percent H percent N percent
Trouve: 60,65 7,20 11,50
Celcule: 60,63 7,09 11,38
[ and alpha]24D = -63,3 (c = 1, DMF) 17] P[130-131]:
COC-Ser[Bzl]-Pro-OBzl [17]:
On ajoute du THF [100 ml], du H-Pro-OBzl.HCl [31,5 g, 0,3 M] et du
HOBT [17,5 g, 0,13 M] dns du
BOC-Ser[Bzl]-OH (35,4 g, 0,12 M], et ony ajoute encore du
OMF (50 ml] pour preparer la solution.On verse goutte a goutte du WSCI
[24,8 ml] et on agite a 0 C pendant 1 h et a la temperature ambiante
pendant la nuit On enleve le solvant par distillation sous vide et on
ajoute du benzene au residu, puis on lave trois fois avec une solution
de sodium bicarbonate a 5 percent, trois fois avec HCl 1 N et trois
fois avec de l'water. Apres sechage avec du sodium sulfate anhydre, on
seche la solution sous vide pour obtenir la qubstance (17) sous la
forme d'une matiere huileuse [58 g, rendement 100 percent ].
CCM: RF1 = 0,68 18] P[127-129]: BOC-Ser[Dzl]-Leu-Pro-OBzl [18]:
On ajoute du methylene chloride [30 ml] a du
BOC-Leu-Pro-OBzl (71,27 g, 156 mM). On ajoute du TFA [350 ml] a 0 C et
on agite a la temperature ambiante pendant 30 minutes. On enleve le
TFA par distillation sous vide pour obtenir une matiere huileuse que
l'on seche sur potassium hydroxide pendant 3 h. On dissout la matiere
huileuse dans le
DMF [170 ml), que l'on neutralise a 0 C en ajoutant du NMM [60 ml]. On
y ajoute du BOC-Ser[Bzl]-OH [46,0 g, 156 mM] et du HOBT [21,1 g, 156
mM) pour preparer une solution.On verse goutte a goutte du WSCI Cas,
ml, 156 mM) a 0 C, et on agite a 0 C pendant 1 h et a la temperature
ambiante pendant la nuit. On enleve le OMF par distillation et on
ajoute au residu de l'ethyl acetate [500 mi), et on lave avec du
sodium bicarbonate a 5 percent (3 fois), HCl 1 N [3 fois] et de
l'water [3 Foie), dans cet ordre. Apres avoir seche la couche d'ethyl
acetate avec du sodium sulfate anhydre, on concentre la couche
organique sous vide. On dissout la matiere huileuse dans une faible
benzene que l'on introduit dans une colonne de gel de silice [500 g)
remplie de benzene, puis on elue avec du benzene (1 litre), du ethyl
benzene-acetate [10:1] [2 litres]; du ethyl benzeneacetate [5:1] [1
litre) et du ethyl benzene-acetate (1:1) [2 litres), dans cet ordre.
On recueille les fractions correspondantes verifiees par CCM et on
concentre sous vide. On dissout le residu dans le benzene et on
lyophilise pour obtenir la substance [18] [81 g, rendement: 87,0
percent ].
CCM: Rf1 = 0,81.
Analyse elementaire (C33H4507N3):
C percent H percent N percent
Trouve: 5X,34 7,81 6,80
Calcule: 66,53 7,81 7,05 19) P[127-129]: BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-OH [19]:
-On dissout la substance [18] [81 g, 135,5 mM) dans methanol [300 ml].
On verse goutte-a goutte du NaOH 1 N [178,15 ml, exces 1,3 molaire) a
OOC pendant 30 minutes et on agite a la temperature ambiante pendant 3
h. On neutralise le melange reactionnel en ajoutant de l'HCl 1 N a 0 C
et on enleve methanol par distillation sous vide. On ajoute de l'water
(300 ml] a le couche aqueuse, on lave 2 Fois avec de l'ether, en
ajoutant HCl 1 N [150 ml] a 0 C et on extrait avec de l'ethyl acetate
[400 ml].On lave le couohe d'ethyl acetate avec de l'water, on seche
avec du magnesium sulfate anhydre et on concentre sous vide. On seche
sous vide la matiere huileuse ainsi obtenue. On repreopipts le poudre
avec de l'ether-hexane pour obtenir la substance [19] [65,0 g,
rendement: 94,5 percent ].
Pf: 56-63 C
COM: Rf1 = 0,58
[ and alpha]22D: -47,1 (o = 1, DMF)
Analyse elementeire [C28H39O7N3]:
C percent H percent N percent
Trouve: 61,5 7,71 8,50
Calcule: 61,76 7,78 8,31 20] P[127-131]:
BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-Ser[Bzl]-Pro-OBzl [20]:
On ajoute du methylene chloride [30 ml] a la substancs [17] [58 g,
0,12 M]. On y ajoute du TFA [350 ml) a 0 C et on agite a la
temperature ambiante pendant 30 minutes. On retire le TFA par
distillation sous vide, on dissout le residu dans le DMF [150 ml]. On
y sjoute du NMM (50 ml) pour neutraliser a 0 C.On y ajoute la
substance (19) (61,6 g, 0,12 X) et du HOBT [16,2 g, 0,12 M) et ajoute
youtte a goutte du WSCI (22 ml, 0,12 M) A 0 C, puis on agite a 0 C
pendant 1 h et a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve le
OMF par distillation sous vide et on ajoute au residu de ethyl ether
(400 ml). Apres avoir lave 3 fois avec une solution a 5 de sodium
bicarbonate, 3 Fois avec HCl 1 N et 3 bois avec de l'water et seche
avec du magnesium anhydre, on concentre la solution sous vide.
On dissout la matiere huileuse ainsi obtenue dans une Faible benzene
et on l'introduit dans une colonne de gel de silice (500 g) remplie de
benzene. On procede a l'elution avec du benzene (500 mi), du ethyl
[10:1] [2 1], du ethyl benzene-acetate (10:1) [2 1], du ethyl
benzene-acetate [3:1] [2 litres], du ethyl benzene-acetate (1:1) C4
litres) et de l'ethyl acetate t3 litres), et on recueille les
fractions correspondantes verifiees par CCM, puis on seche sous vide
pour obtenir le substance [20] [84,07 g, rendement; 80,8 percent ].
Pf: 58-65 C
CCM: Rf1 = 0,51
[ and alpha]D: -63,7 (c = 1, DMF]
Analyse elementaire [C48H63O10N5]:
C percent H percent N percent
Trouve: 60,31 7,aS 8,09
Calcule: 68,26 7,30 8,05
Analyse des amino acids: Ser 1,42 [2], Pro [2],
Leu 1,01 (1).
21) P[127-131]: BOC-Ser[Bzl]-Leu-Pro-Ser[Bzl]-Pro-OH [21):
On dissout la substance [20] C74,4 g, 85,4 mM) dans le methanol C300
mi), on verse goutte a goutte du
NaOH 1 N [110 ml, exces 1,3 molaire) a 0 C, et on agite a la
temperature ambiante pendant 3 h. Apres neutralisation a 0 C en
ajoutant HCl 1 N, on enleve le methanol par distillation sous vide. On
lave 2 fois la couche aqueuse avec de l'ether, on ajoute de l'HCl 1 N
C8 ml] a 0 C et on extrait avec de l'ethyl acetate. On lave deux fois
la couche d'ethyl acetate avec de l'water, on seche avec du magnesium
sulfate anhydre et on concentre sous vide. On ajoute de l'hexane au
residu et on filtre le precipite ainsi forme.
On dissout le precipite dans une faible chloroform et on l'introduit
dans une colonne de gel de silice remplie de chloroform. On procede a
l'elution avec du chloroform, du ethyl-chloroformacetate [1:1] et du
ethyl-chloroformethanolacetate [5:1:5]. On recueille les fractions
correspondant a la substance verifiees par CCM et on seche sous vide
pour obtenir la substance (21) C53,75 g, rendement: 81X3.
CCM: Rf1 = 0,34
[ and alpha]D: -66,4 (c = 1, DMF]
Analyse elementaire [C41H57O10N10]:
C percent H percent trouve 63,11 7,65 8,85 calcule 63,14 7,37 8,98
Analyse des amino acids [0,77 mg/GN-HCl 0,3 ml, 105 C 20 Reures]: Ser
1,84 [2], Pro 2,06 [2], Leu (1).
22) P[127-145]: BOC-Ser[Bzl]-leu-Pro-Ber[Bzl]-Pro-Ser[Bzl]
Arg(Tos)-Leu-Pro-Gly-Pro-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Thr[Bzl]
Pro-Ile-Leu-Pro-Gln-OBzl [22]:
On ajoute du methylene chloride a la substance [16] [63,66 g, 29,17
mM], On y ajoute du TFA [260 ml] a 0 C et on agite a la temperature
ambiante pendant 40 minutes.
On enleve le TFA par distillation sous vide et on ajoute de l'etherau
residu. On filtre le precipite ainsi forme et on le seche sur
potassium hydroxide pendant la nuit [87,6 g) et on dissout dans le DMF
[200 mi) [pH 43. On y ajoute du
NMM [4,21 mi) pour ajuster a pH 7 a -10UC. On verse goutte a goutte a
-10 C du HOBT [4,73 g, 35 mM), substance [21] [27,30 g, 35 mM] et du
DMF [100 ml] et du WSCI [6,41 ml,35 mM], puis on agite a -10 C pendent
2 h et a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve le solvant
par distillation sous vide et on verse le residu dans un melange
d'water et de glace C1,5 litre). On met le precipite ainsi forme en
suspension dans l'water et on filtre. Cette operation de mise en
suspension et de filtration est repetee cinq fois a pH S.
On seche le precipite pendant 2 jours sous vide, on le dissout dans le
methanol et on concentre sous vide. On ajoute du benzene dans le
residu et on concentre. On repete deux fois le traitement au benzene.
On ajoute de l'etherau concentre et on filtre le precipite ainsi
forme. On repete 8 fois les operations allant du traitement au
methanol au traitement a l'etherci-dessus pour obtenir la substance
[22] [79,85 g, rendement: 96,2 percent ].
Pf: 127-130 C.
CCM: Rf2 = 0,61 [ and alpha]22D: -67,58 [c = 1, DMF]
Analyse elementaire [C148H207D36N23S]:
C percent H percent N percent
Trouve: 1,05 8,96 11,03
Calcule: 60,95 7,15 11,05
Analyse des amino acids [1,893 mg/6 N-HCl 0,5 ml,
105 C, 21 heures]: Asp 0,89 [1], Thr 0,96 [1],
Ser 3,74 [4], Gln 1,04 [1], Pro 6,00 [6], Ile
0,95 CI), Leu 3), 'Arg 0,94 Ci), Gly 0,S8 C1).
23] HCG [127-145]:
On aoute de l'anisol t5 ml) a la substance [22] C1 g, 0,34 mM). On y
ajoute de l'hydrofluoric acid anhydre (HF) C30 ml) a 0 C et on agite
pendent 1 h. On retire rapidement l'HF sous vide. On ajoute au residu
de l'etherC100 ml] et de l'acetic acid (0,1 N C50 ml) et on agite. On
introduit le couche aqueuse dans une colonne [3,3 x 18 cm) de Dowex-1
(Forme acetate) et on elue avec l'acetic acid 0,1 N. Oncombine l'eluat
et la solution de lavage et on lyophilise pour obtenir le produit brut
[SGO mg].On dissout ce produit brut dans l'urea aqueuse 8 M C30 ml),
on ajuste a pH 9 en ajoutant de l'ammoniaquammonia, on introduit dans
une colonne [4,5 x 120 cm) de Sephadex LH-20 et on elue avec l'acetic
acid 0,1 N. On divise lteluat en fractions de 10 ml, on recueille les
fractions n 58-64 et on lyophilise pour obtenir le produit C540 mg).
On dissout le produit dans l'acetic acid 0,1 N [30 ml], on introduit
dans une colonne C5X13 cm) de carboxymethylcellulose, on lave avec un
tampon-a l'ammonium acetate 0,01 M [pH 4,53 et on elue selon un
gradient avec un tampon d'ammonium acetate de 0,01 M A 0,1 M CpH 4,53
(Fractions de 400 ml].On divise l'etluat en en fractions de s ml, on
recueille les fractions n 79-86 et on lyophilise pour obtenir la
matiere [180 mg).
On dissout celle-ci dans l'acetic acid 0,1 N, on l'introduit dans une
colonne [3 x 17 cm) de Sephadex LH-20 et on elue avec l'acetic acid
0,1 N. On repartit l'eluat en fractions de 10,5 ml et on recueille les
fractions n 25-30 et on lyophilise pour obtenir l'HCG [127-145] 135,4
mg).
Pf: 215-225 C [ and alpha]28D: # 55 [ c = 0,1, acetic acid 0,1 N]
CCM: Rf11 = 0,71
Analyse des amino acids: Asp 1,05 [1], Thr 0,97
[1] Ser 3,44 [4], Gln 1,10 [1], Pro 6,50 [G],
Gly 1,04 [1], Ile 0,89 [1], Leu 3 [3], Arg 1,02 [1].
Exemple 2
HCg [118 - 145]:
1) P(125 - 126); BOC-Pro-Pro-OBzl [23]:
On ajoute du THF (180 ml), du H-Pro-OBzl. HCl 43,5 g, o,ie M) et du
HOBT (24,3 g, 0,18 M) 3 du BOC-Pro-OH (38,b g, 0,17 M), on ajoute du
DMF Clou ml) et on verse goutte a goutte du WSCI [33,0 ml, 0,18 M) A 0
C./ Apres avoir agite a 0 C pendant i h et a la temperature ambiante
pendant la nuit, on enleve le solvant par distillation sous vide.
On ajoute du benzene [500 ml] au residu et on lave 3 Fois avec du
sodium bicarbonate a 5 percent, 3 fois avec HCl 1 N et 3 fois avec de
l'water. Apres sechage avec du sodium sulfate anhydre, on concentre la
solution sous vide pour obtenir une matiere huilleuse [23] [74 g,
rendement: 100 percent ].
Apres qu'on l'ait gardee au refrigerateur, la matiere se cristallise
partieliement et on la recristallise a partir du benzene-hexane.
Cependant, il reste une matiere presque huileuse, que l'on utilise
pour la reaction suivante;
Pf: 73-74 C.
[ and alpha]D; -85,7 [c - 1, DMF]
Analyse elementaire [C22H30O5N2]:
C percent H percent N percent
Trouve: 85,98 7,81 6,83
Clacule: 65,85 7,51 6,96
CCM: RF9 = 0,71 2] P[123-124]: BOC-Ala-Pro-OBzl [24]:
On ajoute du THF [200 ml), du H-Pro-OBzl. HCl [48,3 g, 0,2 M] et du
HOBT [27,0 g, 02 M] a du BC-Als-OH [37,8 g, 0,2 M], on ajoute du DMF
[100 ml] et on verse goutte a goutte du WSCI [38,6 ml, 0,2 M] A 0 C.
Apres avoir git6 a OoC pendant 1 h et a la temperature ambiante
pendant la nuit, on enleve le solvant par distillation sous vide.On
dissout le residu dans l'ethyl acetate [500 ml], on le lave trois fois
avec une solution de sodium bicarbonate a 5, 3 fois avec de l'HCl 1 N
et 3 fois avec de l'water, on seche avec du magnesium sulfate anhydre
et on concentre sous vide.
On dissout le residu dans une faible benzene et on l'introduit dans
une colonne de el de silice [250 g) remplie de benzene. On procede a
l'elution avec du benzene [1 l], du ethyl-benzene [10:1] (1 litre) et
du ethyl benzene-acetate [1:1] 1 litre), on recueille les
Fractions correspondantes verifiees par CCM et on concentre sous vide
pour obtenir le substance huileuse [24] [75,55 g, rendement: 100
percent ].
CCM: RF1 = 0,87 3] P[123-124]: BOC-Ala-Pro-OH [25]:
On diseout la substance [24] dans l'ethanol [200 ml].
On verse goutte a goutte du NaOH 1 N [240 ml, exces 1,2 molaire) a O0C
et on agite a la temperature ambiante.
Au bout de 2 h, on ajoute du iQaOH 1 N [20 ml] et on agite encore
pendant 30 minutes. On neutralise le melange reactionnel avec HCl 1 N
[60 ml] a ODC, on enleve l'ethanol par distillation sous vide. Apres
avoir lave Z fois la couche aqueuse avec de l'ether100 mi), de l'HCl 1
N CdOO ml] y est ajoute a OtC. On filtre le precipite ainsi forme, on
le lave completement et on seche sous vide. On procede a la
recristallisation a partir de l'ethyl acetate [45 ml)- hexane pour
cristalliser la substance [25] [47,92 3, rendement: 83,8 percent ].
Pf 159-160 C.
[ and alpha]D: -72,9 [c = 1, DMF]
CCM: AF1 = 0,18
Analyse elementaire [C13H22O5N2,2/3 H2O]:
C percent H percent N percent
Trosuve: 52,74 8,13 9,58
Calcule: 52,34 7,81 9,38 4] P[123-126]: BOC-Ala-Pro-Pro-Pro-OBzl [26]:
On ajoute du methylene chloride [30 ml] a la substance [23] [74 g,
0,17 M]. On y ajoute du TFA [500 g] a 0 C et on agite a la temperature
ambiante pendant 30 minutes.
On enleve le TPA sous vide et on dissout le residu dans le
OMF [150 ml], et on neutralise en ajoutant du NMM (60 ml] a OOC. Apres
avoir ajoute la substance Ces3 [47,9 g, 0,16 M] et du HOBT [23 g, 0,17
M), on ajoute du WSCI [33 ml, 0,17 M) A 0 C et on agite pendant 1 h et
a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve du OMF a raison
d'environ 80 ml.
On ajoute au residu de l'ethyl acetate CSOO mi), puis on lave avec une
solution de sodium bicarbonate a 5 percent, de l'HCl 1 N et de
l'water, en repetant 3 Fois chaque operation de lavage, dans cet
ordre. Apres avoir seche la couche d'ethyl acetate avec du magnesium
sulfate anhydre, on concentre la solution sous vide.On ajoute de
l'hexane au residu, on filtre le precipite et on recristallise Z Fois
a partir de l'ethyl-hexane acetate pour obtenir la substance [26]
80,08 g, rendement: 88,5 percent ]./
Pf: 116-1170C
CCM: Af2 = 0,89
Anaolyse elementaire [C30H42O7N4]:
C percent H percent N percent
Trouve: 63,12 7,73 9,97
Calcule: 63,14 7,42 9,82 5] P[122-126]:
BOC-Lys[Z-Cl]-Ala-Pro-Pro-Pro-OBzl [27]:
On ajoute du methylene chloride [40 ml] a la substance [26] [77,84 g,
136 mM], on ajoute du TFA [350 ml] a 0 C et on agite a la temperature
ambiante pendant 30 minutes. On enleve le TFA sous vide et on dissout
le residu dans le OMF [200 ml], puis on neutralise en ajoutant du NMM
[80 ml] a 0 C. On y ajoute du BOC-Lys [Z-Cl]-OH prepare a partir de
BOC-Lys[Z-Cl]-OH.TBA [80 g, 163 mM) et du HOBT [220 g, 163 mM), on
ajoute goutte a goutte du WSCI (29,8 ml, 163 mM), et on agite a ODC
pendant i h et a la temperature ambiante pendant la nuit. On enleve le
OMF sous vide, on ajoute detl'ethyl acetate [600 ml] au residu et on
lave avec une solution a 5X de sodium bicarbonate, du HCl 1 N et de
liteau, en repetant 3 fois chaque operation de lavage, dans cet ordre.
On seche la couche d'ethyl acetate avec du magnesium sulfate anhydre
et on concentre sous vide.On dissout la matiere huileuse ainsi obtenue
dans la plus faible quantite possible de chloroform, et on l'introduit
dans une colonne de gel de silice [500 g), remplie de chloroform. On
procede a l'elution avec du chloroform [1,5 1) et du
ethyl-chloroformacetate (1:1) [2 litres). On recueille les fractions
correspondantes veri
Fiees par CCM et on concentre sous vide pour obtenir la substance [27]
[90,27 g, rendement: 79,0 percent ].
CCm: TF6 = 0,69, Rf2 = 0,95.
[ and alpha]D: - 100,8 (c = 1, DMF].
Analyse elementaire [C44H58O15N6Cl.H2O]:
C percent H percent
Trouve: 59,62 7,07 9,39
Calcule: 59,68 6,94 9,49
Analyse des amino acids: Ala 0,94 [1], Lys 0,99
[1], Pro[3].
6] P[120-121]: BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-OMe [28]:
On ajoute du THF [700 ml] et du BOC-Ser[Bzl]-OH [23,6 g, 0,8 M) et du
HOBT t108 g, 0,5 M) a du H-Ser[Bzl]- OMe.HCl [196,57 g, 0,8 M) et on
ajoute du OMF [200 mi) pour preparer une solution. On verse goutte a
goutte du WSCI t146 ml, 0,8 M) A 0 C et on agite a 0 C pendant 1 h et
a la temperature ambiante pendant la nuit.On concentre le melange
reactionnel sous vide, on ajoute de l'ethyl acetate (1 litre] au
residu, puis on lave avec une solution de sodium bicarbonate a 5, de
l'HCl 1 N et de l'water, en repetant 3 fois chaque operation de
lavage, dans cet ordre. On ajoute de l'hexane au produit huileux que
l'on cristallise en ajoutant un germe cristallin. On recristallise a
partir de l'ether-hexane pour obtenir la substance [23] [340,4 g,
rendement: 87,5 percent ].
Pf: 55-55 C.
[ and alpha]D: + B, 1 [c = 1, DMF]
CCM: HF = 0,96
Analyse elementaire [C26H34O7N2]:
C percent H percent N percent
Trouve: 84,08 7,21 5,43
Calcule: 84,18 7,04 5,75 7] P(118-119): BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-NHNH2
[25]:
On dissout la substance [28] (191 g, 0,393 M] dans le DMF [500 ml]. On
verse goutte a goutte de l'hydrazine hydratee [100 percent ] [200 ml]
et on agite a la temperature ambiante pendant 3 h. On enleve le DMF
sous vide et on y ajoute de l'water. On filtre le precipite ainsi
Forme, on seche, on recristallise Z fois a partir de l'ethyl-hexane
acetate pour obtenir la substance Cas3 [183,6 g, rendement: 96,0
percent ].
Pf: 123-124 C
[ and alpha]D: +9,3 [c = 1, DMF]
CCM: Rf9 = 0,30 [substance [28] Rf9 = 0.73]
Analyse elementaire [C26H34O7N2]:
C percent H percent N percent
Trouve: 64,60 7,34 5,87
Calcule: 64,18 7,04 5,65, 8] P[118-121]:
BOC-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Ser[Bzl]-Me [30]:
On dissout la substance [29] [146 g, 0,3 M] dans le OMF (500 ml). On
verse goutte a goutte une solution de HCl 4,49 N/dioxan [202 ml, 0,9
M) A -60 C et de l'isoamylnitrile [48 ml, 0,33 M], puis on gite a -20
C pendant 20 mintues. On ajouts du TBA [125 ml, 0,9 M] A -20 C pour
obtenir une solution azidee. @'un autre cote, on ajoute a du TFA a 0 C
[350 ml] le substance [28] [122 g, 0,25 M], on agite a la temperature
ambiante pendant 30 minutes et on enleve le TFA sous vide.On ajoute de
l'hexane au residu, on Filtre le precipite ainsi forme, puis on
dissout dans le
OMF [300 ml) et on neutralise en ajoutant du TwA a OOC.
On ajoute la solution neutralisee a la solution d'azide ci-dessus et
on agite a 0 C pendant la nuit. On filtre le TEA.
HCl et on concentre le filtrat. On ajoute au residu de la glace et de
l'HCl 1 N, on recueille le precipite par filtration et on lave avec du
sodium bicarbonate a 5 percent et de l'water.
Apres sechage sous vide, on procede a une recristallisation a partir
du methanol pour obtenir la substance trans [223g, rendement 88,4
percent ].
D: +9,6 percent (c = 1, DMF)
Analyse elementaire [C46H56O11N4]:
C percent H percent N percent
Trouve 65,81 6,89 6,73
Calcule 65,70 6,71 6,66 9) P(118 - 121):
BOC-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-NHNH2 [31]:
On dissout la substance [30] [98,4 g, 117 mM) dans le DMF [300 ml]. On
y verse goutte a goutte de 1'-hydrazine hydratee [100 percent ] [117
mi) et on agite a la temperature pendant 3 h. On enleve le OMF par
distillation sous vide et on ajoute au residu un melange d'water et de
glace. On Filtre le precipite ainsi Forme et on seche. On
recristallise a partir de l'acetone pour obtenir la substance t313
[97,44 g, rendement: 99 percent ].
Pf: 176 - 177 c.
[ and alpha]D: +9,8 (c = 1, DMF)
CCM: Rf7 = 0,49 10) P (118 - 126);
BOC-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Lys(Z-Cl)-Ala-
Pro-Pro-Pro-OBzl [32]: on dissout la substance [30] [60,6 g, 72 mM]
dans le DMF [300 ml] et on verse goutte a goutte une solution d'HCl
4,32 N/dioxan [50 ml, 216 mM] a -50 C. Apres avoir verse goutte a
goutte de l'isoemylnitrile [11,5 ml, 80 mM], on agite a -20 C pendant
30 minutes. On ajoute du TEA [30 ml, 216 mM) a -50 C pour preparer une
solution d'azide.
D'un autre cote, on ajoute la substance [27] t53 g, 60 mM) a du TEA
(180 ml) a 0 C, on agite a la temperature ambiante pendant 30 minutes
et on enleve le TFA sous vide. On ajoute de l'etherau residu, on
filtre le precipite forme, on le dissout dans le OMF [100 ml] et on
nautralise par NMM [15 ml] a 0 C. On ajoute oatte solution neutralisee
a la solution d'azide ci-dessus et on agite a 0 C pendant la nuit. On
enleve le solvant par distillation sous vide et on ajoute au residu un
melange d'water et de glace. On recueille le precipite par filtration
et on le lave avec HCl 1 N, du sodium bicarbonate a 5 percent et de
l'water. On recristallise a partir du methanol-DMF apres sechage sous
vide pour obtenir la substance [32].
[Rendement: 95,9 percent ].
Pf: 210 - 211 C (decomp.)
Analyse elementaire
CRo HZ NAo
Trouve 6 3 4 2 6 A¦ greater than?, 5 6
Calcule 6 3,) s i,7 83
Analyse des amino acids j
11) P(llS - 126):
On dissout la substance C3a) [88,51 g, 46,2 mM) dans le chloroform
[600 ml], on ajoute de l'potassium hydroxide [20 g, 360 mM) dans le
methanol a 90X [500 ml) a 5 C, et on agite a le temperature ambiante
pendant 4 h.
On neutralise le melange reactionnel en ajoutant de l'HCl 1 N [70 ml],
on retire le solvant sous vide et on verse le residu dans l'HCl 1 N
[1,5 1) froid (5 C]. On filtre le precipite ainsi forme, on ajoute de
l'ethyl acetate [600 mi) et on lave avec HCl 1 N et de l'water [3
fois3. On seche le couche d'ethyl acetate avec du magnesium sulfate
anhydre et on concentre sous vide. On ajoute de l'etherau residu et on
filtre le precipite, que l'on lave avec de l'ethyl acetate pour
obtenir la substance [33] (55 g; 80,1 percent ].
Pf: 125 - 135 C.
[ and alpha]D: -56,4 (c = 1, DMF)
CCX: Rf6 =autour de la ligne de depart, Rf5 = 0,45
Analyse des amino acids Ser 3,23 (4), Pro 3 (3), Ala 0,98 (1),
Lys 0,97 (1).
12 P(118 - 145):
On ajoute du methylene chloride [200 mi) a la substance [22] [78 9, as
mM] de l'exemple 1. On y ajoute du TFA C400 ml] a 0 C et on agite a la
temperature ambiante pendant 50 minutes. On enleve le TFA sous vide,
on ajoute de l'etherau residut on filtre le precipite et on seche sur
potassium hydroxide pendant la nuit sous vide [85,35 g).
On dissout ceci dans le DMF [270 ml, pH 3], et on ajuste a pH 6 en
ajoutant du NMM [4,58 ml] a -10 C. On ajoute la substance [33] (49,93
g, 33,6 mM) et on ajoute encore du
DF [100 ml] pour preparer la solution, Un verse goutte a gou6tte du
WSCI [6,20 ml] a -10 C [pH 5], puis on gite a -10 C pendant 2 h et a
la temperature ambiante pendant 2 jours. On enleve le solvant sous
vide, et on verse le residu dans l'water glacee (1,5 litre). Un
recueille le precipite forme, on le met en suspension dans l'water et
on procede a des lavages repetes puis on seche pendent jours [130 g).
On y ajoute du methanol, on concentre sous vide, et on ajoute du
benzene au residu puis on concentre sous vide.On recristallise en
ajoutant de etherau residu, et on repete 12 fois l'operation. Apres
avoir ajoute du methanol, on concentre la solution sous vide et on
recristal lise a partir du methanol pour obtenir le produit [34]
[108, 43 g, rendement 91,9 percent ].
Pf: 129 - 1310C.
[ and alpha]24D: -72,76 (c - 1, DMF)
CCM: Rf2 = 0,56
Anaolyse elementaire [C220H294O51N33SCII:
C percent H percent N percent
Trouve 61,49 7,07 11,02
Calcule 61,67 6 greater than 92 10,79
Analyse des amino acids 10,978 mg/6 N-HC1 0,5 ml, 105 C, 21 h 3
Asp 1,00 (1), Thr 0,96 (1), Ser 6 greater than 87 (7), Gln 1,05 (1),
Pro 9,63 (9),
Gly 1,03 (1), kla 1,09 (i), Ile 0,94 (1), Leu 3 (3), Lys 1,09 (1),Arg
0,97 (1).
13) HCG 1118 - 1451:
On ajoute de l'anisol [10 ml] a la substance [34]
[30 g, 0,17 mM]. On introduit du HF [80 ml] et on gite
A 0 C pendant 1 h. On retire le HF sous vide. On ajoute de l'etherau
residu, et on Filtre le precipite forme. On introduit cette poudre
dissoute dans l'cide acetique 0,1 N
[50 ml] dans une colonne [3,5 x 35 cm) de Dowex-1 Cforme acetate) on
lave avec de l'acetic acid 0,1 N.On combine l'eluat et la solution de
lavage et on lyophilise pour obtenir le produit [1,46 g], que l'on
dissout dans une solution d'urea 8 M (30 mi), on ajuste a pH 9 en
ajoutant de ltammoniaquammonia a OOC, puis on introduit dans une
colonne [4,5 x 120 cm) de Sephadex LH-20 et on elue avec de 1'-acetic
acid 0,1 N. On divise l'eluat en fractions de 7 ml et on recueille les
fractions n 55-83, puis on lyophilise pour obtenir la poudre [990 mg).
On dissout la poudre dans l'acetic acid 0,1 N t30 ml] et on
l'introduit dans une colonne [5 x 14 cm) de CMC.
Apres avoir lave avec un tampon d'ammonium acetate 0,01 M [pH 4,5, 200
ml], on ohromatographie par elution a gradient lineaire avec un tampon
d'acetate [0,01 M A 0,1 M, par 400 ml, pH 4,5). On combine les
fractions n 85-115 (une Fraction: 6 mi), puis on lyophilise pour
obtenir la poudre (850 mg). On introduit la poudre dissoute dans
l'acetic acid 0,1 N dans une colonne [4 x 120 cm) de
Sephadex LH-20, et on elue avec de l'acetic acid 0,1 N.
On recueille les fractions n 35-43 (une Fraction: 10,5 mi) et on
lyophilise pour donner la poudre [650 mg). On dissout ceci dans
l'acetic acid 0,1 N C30 ml] et on introduit a nouveau dans une colonne
[5 x 15 cm) de CMC, que l'on lave avec un tempon d'ammonium acetate
0,01 M [pH 4,5, 200 ml].
On elue par un gradient lineaire de tampon d'.amino acetate- nium 0,01
M [400 ml] a 0,1 m [400 ml] [pH 4,5]. On reoueille les frections n
100-111 (une fraotion:,5 ml) et on lyophilise pour obtenir la poudre
t480 mg). On introduit la poudre dissoute dans l'acetic acid 0,1 N
dans une colonne [3 x 117 cm) de Sephadex LH-20 et on elue avec
l'acetic acid 0,1 N. On combine les fractions n 24-30 Cune frection:
10,5 ml) et on lyophilise pour obtenir l'HCG [118-14] [320 mg].
Pf: greater than 2200C (decomp.)
CCM: Rf11 = 0,57
Analyse des amino acids: Asp 1,07 (1), Thr 0,97 (1), Ser 8,23 (8),
Gln 1,13 (1), Pro 9,98 (9), Gly 1,07 (1),
Ala 1,06 (1), lie 0,89 (1), Leu 3 (3),
Lys 1,08 (1), Arg 1,07 (1).
Exemple 3
[Cys(Acm)110]-HCG [110 - 145]:
1) P(116 - 117); BOC-G1n-Asp(OBz1)-OH [35]:
On met en suspension du H-Asp [OBzl]-OH C33,4e g, 150 mM) dans le DMF
C400 ml). On y ajoute du HOBT [2,03 g, 15 mM], du BOC-Gln-ONP [55,10
g, 150 mM] et du DMF [100 ml].
On ajuste le melange reactionnel a pH 7 en ajoutant du NMM [2 ml] a
100 C et on agite a la temperature ambiante pendant la nuit. On ajuste
3 fois le pH du melange a pH 7 en ajoutant du NMM t16 ml].
Apres la reaction CpH G], on enleve le DMF sous vide.
On ajoute une solution d'citric acid C300 ml] et de chloroform t300
ml] et on agite. On extrait la couche aqueuse avec du chloroform C300
ml.et 10U ml]. On combine les couches de chloroform et on les lave 4
fois avec du sodium chloride sature, de l'water acidpH 33 et de
l'water acidCpH 4].
On seche la couche aqueuse avec du sodium sulFate anhydre et on
concentre sous vide. On ajoute de l'etherau residu et on recueille par
Filtration le precipite Forme. On y ajoute du methanol et on concentre
sous vide, puis on recristallise 2 Fois a partir du chloroform-ether
pour donner la substance [35] [32,31 g, rendement: 7,7). On concentre
le liqueur-mere sous vide et on recristallise a
Fois a partir du chloroform-ether pour obtenir la substance [35] (6,3
g). On introduit ensuite la liqueur-mere dans une colonne de gel de
silice [100 g) et on elue avec du ethyl-chloroformethanolacetate
[5:1:5]. On seche sous vide les Fractions correspondantes verifiees
par CCM pour obtenir la substance [35] CZ,98 g). Rendement total:
44,12 g [65,1 percent ].
Pf: 92 - 15 C
[ and alpha]24D: -4,9 [c = 1, DMF)
CCM: Rf4 = 0 greater than 27, Rf2 = 0,56
Anlayse elementaire [C21H29O8N3]:
C percent H percent N percent
Trouve 55,86 6,50 9,61
Calcule 55,86 6,47 9,31 2) P(116 - 145):
On dissout le subswtence [34] de l'exemple 2 [101,10 g, 24 mM] dans le
chloride demethylene [150 ml].
On y ajoute du TFA C350 ml] a 0 C, et on agite a la temperature
ambiante pendant 1 h. On enleve le TFA par distillation sous vide, on
ajoute de l'etherau residu, on Filtre le precipite ainsi forme, et on
seche sur potassium hydroxide pendant la nuit [114,14 g). On dissout
la poudre dans le DMF
C300 ml] CpH 3], on ajuste a pH o en ajoutant du I4MM [8,64 mi) a 0 C
et on ajoute de la substance [35] [13,00 g, 28,8 mM] et du HOBT [3,89
g, 28,8 mM] pour preparer la solution.
On y ajoute du PCP C7,7 g, 28,8 mM] et on ajoute encore du
DMF [50 ml] et du THF [50 ml]. On ajoute du NMM [3,17 ml] a la
solution a 0 C CpH 5], on ajoute goutte a goutte du
WSCI [5,27 ml] CpH 5) et on agite a la temperature ambiante pendant la
nuit. On enleve le solvant sous vide et on verse le residu dans de
l'water glacee CI,s 1) pour obtenir le precipite CpH 4), que l'on met
en suspension dans l'water et que l'on lave 3 Fois, respectivement CpH
5). On seche la poudre sous vide, et on la dissout dans le methanol,
on concentre sous vide, et on distille de Fanon azeotropique en en
ajoutant du benzene. On ajoute de l'etheret on separe par decantation
la matiere visqueuse precipitee.
On ajoute encore de l'etherpour obtenir une poudre brunatre pale. On
dissout la poudre dans le methanol, on ajoute du benzene et on
concentre sous vide. On ajoute de l'etherau residu pour cristalliser
la substance. On repete cette ope- ration 7 fois pour donner la
substance [38] [101,2 g, rendement: 93,5 percent ].
Pf: 134 - 139 C.
[ and alpha]24D: -68,72 (c = 1, DMF)
CC: Rf2 = 0,40, Rf4 = 0,93
Analyse elementaire [C236H315C57N36SCl5.H2O]:
C percent H percent N percent
Trouve 60,87 6,70 11,00
Calcule 61,15 6,85 10,88
Analyse des amino acids: Asp 2,00 (2), Thr 1 greater than 03 (1), Ser
7,16 (8),
Gln 2,02 (2), Pro 10,20 (9), Gly 1,09 (1),
Ala 1,13 (1), Ile 0 greater than 87 (1), Leu 3 (3), Lys
1,16 (1), Arg 1,05 (1).
3) P(114 - 115): AOC-Arg(Tos)-Phe-OEt (37),
On dissout de i'AOC-ArgCTos)-OH C63,83 g, 150 mM] dans le DMF C0O mi).
On y ajoute du H-Phe-OEt.HCl
[36,18 g, 157,5 mM] et du HOBT [21,28 g, 157,5 mM].
On verse goutte a goutte du WSCI [28,82 ml, 157,5 mM)
A -10 C et on agite a la temperature ambiante pendant la nuit. On
enleve le DMF sous vide et on ajoute au residu une solution de sodium
bicarbonate a 5 percent [500 ml]. On extrait a fois le precipite ainsi
forme avec de l'
ethyl acetate
C500 ml-300 ml). On lave la couche d'ethyl acetate avec du sodium
bicarbonate -a 5 percent, avec de l'water, 2 fois avec
HCl 1 N, 3 fois avec du sodium chloride sature et avec de l'water,
dans cet ordre. Apres avoir seche avec du sodium sulfate anhydre, on
concentre la solution sous vide. On ajoute de l'hexane au residu et on
redistallise le precipite a partir de l'ethyl-benzene-hexane acetate
pour obtenir la substance [37] [85,52 g, rendement: 92,3 percent ].
Pf: 70 - 73 C.
[ and alpha]D = -5,12 (c = 1, DMF)
CCM: Rfl = 0,69
4) P(113 - 115): BOC-Pro-Arg(Tos)-Phe-OEt [38]:
On dissout la substance [37] (85,0 g, 138 mM] dans le methylene
chloride [150 ml]. On y ajoute du TFA
C350 mi) a OOC, et. on agite a la temperature ambiante pendant as
minutes. On enleve le TFA et on ajoute de l'etherau residu, on filtre
le precipite, puis on seche sur hydroxyde de potahydroxide- sium
pendant la nuit. On dissout la poudre dans le DMF CtsO mi) et le THF
C300 ml).On ajuste la solution a pH 7 en ajoutant du NMM [15,17 mi) a
-10 C. On y ajoute du BIOC-Pro-OH [29,70 g, 138 mM] et du HOBT [18,64
g, 138 mM). On y ajoute du
WSCI [25,25 mi) a -10 C, on ag
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