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Molecule
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water
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sulfate
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DES
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sodium chloride
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4-sulfate
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chloride
(1)
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sodium
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acetic acid
(1)
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ethanol
(1)
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phosphate
(1)
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quide
(1)
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hydrochloric acid
(1)
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6-sulfate
(1)
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acetone
(1)
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Gene Or Protein
(12/ 22)
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ETRE
(5)
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Chondroitin-4
(4)
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DANS
(3)
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HUC
(2)
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LEURS
(1)
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Collagen
(1)
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Ral
(1)
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Frac
(1)
[29][_]
La Protein
(1)
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R Gene
(1)
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Sepa
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Tif
(1)
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Physical
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0,1 N
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de 1 kg
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0,5 N
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24 h.
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de 10 %
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de 1,2 %
(1)
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0,6 % de
(1)
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de 0,4 %
(1)
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de 0,6 %
(1)
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0,4 %
(1)
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de 1 %
(1)
[45][_]
10 %
(1)
[46][_]
de 2 g/l
(1)
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10 mm
(1)
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Generic
(5/ 11)
[49][_]
acid
(7)
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uronic acid
(1)
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hexosamines
(1)
[52][_]
organic acids
(1)
[53][_]
cation
(1)
[54][_]
Polymer
(3/ 9)
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MUCOPOLYSACCHARIDES
(6)
[56][_]
Chondroitin
(2)
[57][_]
Hyaluronic Acid
(1)
[58][_]
Disease
(1/ 1)
[59][_]
Rupture
(1)
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Publication
_________________________________________________________________
Number FR2517315A1
Family ID 2012355
Probable Assignee Centre Technique Cuir Chaussure Maroquinerie
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title PROCEDE DE PREPARATION DE FORMES NOUVELLES DE COLLAGENE,
NATIF OU DERETICULE, A STRUCTURE HELICOIDALE PRESERVEE, ASSOCIEES A
DES MUCOPOLYSACCHARIDES ET LEURS APPLICATIONS NOTAMMENT DANS LES
DOMAINES COSMETOLOGIQUES, PHARMACEUTIQUES, ANALYTIQUES ET AUTRES
Abstract
_________________________________________________________________
SELON CE PROCEDE, ON MET EN PRESENCE DU COLLAGENE EVENTUELLEMENT
DERETICULE, SOUS FORME DE SUSPENSION HOMOGENE OU DE SOLUTION, AVEC UNE
SOLUTION DE GLYCOSAMINOGLYCANE ET L'ON PORTE LE PH DU MELANGE A 7.
LES COMPOSITIONS AINSI OBTENUES PEUVENT ETRE APPLIQUEES DANS LES
DOMAINES COSMETIQUES, PHARMACEUTIQUES, VETERINAIRES ET THERAPEUTIQUES,
TELS QUE PAR EXEMPLE EN PARADONTOLOGIE, EN CHIRURGIE OSSEUSE ET EN
TANT QUE PANSEMENTS HEMOSTATIQUES ET CICATRICIELS, AINSI QUE DANS LES
DOMAINES ANALYTIQUES ET NOTAMMENT COMME SUPPORTS DE MOLECULES ACTIVES
TELLES QUE DES ENZYMES.
Description
_________________________________________________________________
La presente invention concerne un procede de prepara-
tions de formes nouvelles de collagene, natif ou dereticule,
A structure helicoidale preservee, associees A des mucopo-
lysaccharides, ainsi que les-compositions obtenues par mise en oeuvre
dudit procede et leurs applications notamment
dans les domaines cosmetologiques, pharmaceutiques, ana-
lytiques et autres.
Les tissus conjonctifs, et la peau en particulier,
sont constitues principalement de collagene Cette pro-
teine est donc responsable en grande partie de l'etat de la peau Au
cours du vieillissement, le collagene se re ticule -on dit qu'il se
polymerise et la peau se ride, tout en perdant son elasticite L'apport
de collagene jeune, a structure helicoldale preservee, peut pallier,
du moins
en partie, a ce processus de vieillissement.
Par ailleurs, le derme de la peau renferme deux autres
types de macromolecules, qui sont l'alastine et les pro-
t 4 oglycanes Alors que la premiere remplit un role qui lui est propre
en ne reagissant pas avec le collagene, les secondes peuvent avoir une
influence sur les propri 6 tos de la peau par l'interm 6 diaire de
leurs interactions avec
le collagene.
Les proteoglycanes sont des macromolecules consti-
tu 6 es d'hyaluronic acid et de substances proteiques, sur
lesquelles sont branches les glycosaminoglycanes, poly-
meres de masse moleculaire d'environ 50 000 constitues
d'uronic acid et d'hexosamines, que l'on appelle 6 ga-
lement mucopolysaccharides.
D'apres " O BRINK, COLSTON PAP, 26 (Struct Fibrous
Biopolym), 1975, 81-92 ", les interactions des prot 6 ogly-
canes avec le collagene sont de deux types: exclusion
sterique et liaisons electrostatiques La premiere in-
teraction est due a la taille importante des prot 6 ogly-
canes et elle n'apparait pratiquement pas dans le cas des
glycosaminoglycanes La deuxieme interaction, par contre, due aux
charges electrostatiques, existe aussi
bien avec les prot 6 oglycanes qu'avec les glycosaminogly-
canes D'autres auteurs-ont egalement 6 tudies le meca-
nisme de ces interactions:ITC LAURENT, COLSTON PAP, 26
(Struct Fibrous Biopolym), 1975, 27-34,f A HUC, P MAN-
SCHOTT, D HERBAGE et M WEISS ( 1975) in Protides of Biological Fluids,
22nd colloquium (H PEETERS ed), p 91, Pergamon Press, OXFORD and
NEW-YORK, E HERBAGE, J M.
LUCAS, A HUC, Biochim Biophys Acta, 336 ( 1974) o 108-116.
Certains auteurs ont mis en evidence leur influence sur les propriet 6
S mecaniques des tissusl(JACKSON et BENTLEY ( 1968) in Treatise on
collagen, (GOULD B S ed), vol 2 A, p.
189, Academic Press, NEW-YORK 3 Enfin, les glycosaminogly-
canes comportant de nombreux groupements charges sont entoures d'une
grande water, qui confere au tissu
une partie de sa souplesse L'action des glycosaminogly-
canes sur la peau peut ainsi etre r 6 sumee selon les trois criteres
suivants: Protection de la structure native du collagene, Influence
sur les proprietes mecaniques des tissus,
Hydratation de la peau.
On voit donc l'int 6 ret de l'association des glycosamino-
glycane avec le collagene pour de nombreuses applications.
On sait par ailleurs que le collagene a la propriete de passer
partiellement en solution aqueuse, sous l'action d'agents organiques
ou mineraux Neanmoins, sa solubilite
reste faible et il n'est possible de mettre en solu-
tion qu'une fraction relativement faible de collagene, en
gen 6 ral en milieu acide.
De nombreuses methodes ont ete proposees dans le but,
non seulement d'extraire les fractions solubles du colla-
gene, mais aussi d'augmenter la solubilite de la partie insoluble Ces
methodes sont gen 6 ralement basees sur le pretraitement des matieres
premieres a l'aide d'agents
chimiques ou d'enzymes plus ou moins specifiques.
D'autres solutions preconisees consistent a utiliser, par exemple,
l'action de la chaleur en milieu aqueux,
mais dans ce cas, il se produit une denaturation du col-
lagene en gelatine, voire meme une certaine hydrolyse
17315
du collagene, aboutissant a la rupture des liaisons trans-
versales de la molecule et a la destruction de la struc-
ture helicoidale du collagene.
En regle generale, les fractions solubles du colla-
gene en milieu aqueux ont des valeurs de p H inferieures ou egales a 4
Dans certains cas cette acidite peut presenter des inconvenients
majeurs pour l'utilisation du collagene soluble, dans la mesure o ces
valeurs de p H sont inferieures au p H physiologique Cela peut etre le
cas pour des applications cosmetiques, dermatologiques
et meme therapeutiques.
Or, on sait que le collagene a un point isoelectrique
voisin du p H physiologique et que la neutralisation de frac-
tions solubles du collagene provoque generalement une precipitation
Seulesde tres faibles quantites peuvent rester solubilisees dans des
solutions tampons, diminuant
d'autant l'interet de leur utilisation.
De meme, lorsque des mucopolysaccharides comme par exem-
ple de l'aeide chondroitin-4-sulfate ou de l'acidchondrol-
tine-6-sa Mte sont ajoutesen quantites assez importantes a une
solution aqueuse de collagene natif, la protein collageni-
que precipite, du fait des interactions physiques qui
s'etablissent entre les deux composes.
On a deja propose d'associer le collagene a des mu-
copolysaccharides pour certains traitements dermatologiques.
C'est ainsi que le brevet francais 2 362 632 propose d'in-
corporer a du serum une certaine quantite de glycoamino-
glycanes et de collagene, en meme temps que des agents facilitant la
lipolyse des tissus adipeux, mais aucune
indication ne permet de realiser cette association colla-
gene/glycoaminoglycanes sous forme de solutions lim-
pides ou de gels homogenes, toutes les proportions etant
indiquees en "principe actif sec".
On a egalement propose (brevet francais 2 332 863) de realiser la
premiere couche d'une membrane multicouche destinee a la realisation
de peaux synthetiques a l'aide d'un composite realise par mise en
contact intime de
collagene et d'un mucopolysaccharide suivie d'une r 6 ticu-
lation de l'ensemble Il est toutefois precise que le pro-
duit de reaction coprecipite dans le milieu aqueu Cdans le-
quel il se forme ce qui, bien evidemment, ne permet pas de disposer de
solutions limpides ou de gels homogenes. La presente invention vise a
pallier ces inconvenients en proposant un procede qui permet de r 6
aliser sous forme de solutions limpides ou de gels homogenes
l'association des glycosaminoglycanes avec du collagene dereticule ou
O 10 natif tout en conservant la structure helico;dale et les
propri 6 tes physiques et chimiques dudit collagene.
C'est ainsi que l'invention a pour objet un proced 6 de preparation de
compositions resultant de l'association
de collagene et de mucopolysaccharides et dont l'origina-
lit 6 consiste en ce que l'on met en presence du collagene,
6 ventuellement d 6 r 6 ticu 16, sous forme de suspension homo-
gene ou de solution avec une solution de glycosaminoglycane
et que l'on porte le p H du melange a 7.
Selon un mode de realisation de l'invention, le colla-
r gene est tout d'abord dereticule par contact prolonge du tissu
collagenique avec une solution de soude a p H 14 et
l'association est obtenue sous forme de solution limpide.
Selon un autre mode de realisation, le collagene utilise est du
collagene natif sous forme de gel obtenu a-partir de fibres
deshydrat&es, et l'association est
obtenue sous forme de gel homogene.
La concentration en collagene est de preference le
double de la concentration en glycosaminoglycane.
L'invention concerne egalement les compositions ob-
tenues par mise en oeuvre du proc 6 de selon l'invention ainsi que
leurs differentes formes de presentations telles que solutions,
poudres, eponges, films, tubes, crins, etc ainsi que leurs
applications notamment dans les domaines
cosmetiques,pharmaceutiques, veterinaires et therapeuti-
ques, telles qu'en paradontologie et chirurgie osseuse, et en tant que
pansements hemostatiques et cicatriciels,aisi que dans les domaines
analytiques et notamment comme supports de
molecules actives telles que des enzymes.
La presente invention sera mieux comprise d'ailleurs et ses avantages
ressortiront bien des exemples suivants
de deux modes de realisation qui l'illustrent sans toute-
fois la limiter. Exemple I Preparation d'une solution limpide d'une
composition a base de collagene dereticule et de chondroi-
tine-4-sulfate a) Preparation de l'acidchondroitin-4-sulfate a partir
des cloisons nasales de bovins
Les cloisons nasales fraiches sont tout d'abord la-
vees soigneusement dans une solution de chloride de
sodium 9 pour 1000 Elles sont ensuite hachees et broyees.
Le broyat est alors place a raison de 1 kg par litre dans une solution
de potasse 0,5 N Apres agitation,l'ensemble est laisse au repos a
temperature ambiante pendant 24 h. Au bout de ce laps de temps, le
surnageant est separe des matiares insolubles par centrifugation a 30
000 g pendant mn De l'acetic acid pur est ajoute au surnageant pour
nmtraliser la soude La solution est alors concentree cinq fois par
evaporation sous vide Le concentrat est verse dans un volume trois
fois superieur d'ethanol Le precipite recupere par decantation est
dissous dans l'water permutee L'acidchondroitin-4-sulfate est obtenu
par
lyophilisation de cette solution.
b) Preparation du collagane dereticule Des peaux de veaux provenant
d'animaux fraichement abattus sont tout d'abord lavees a l'water du
robinet par
brassage pendant une heure dans un foulon.
Le systeme pileux et le tissu sous-cutane sont sepa-
res du derme a l'aide d'une refendeuse a bande rotative.
Le derme recupere est hache et broye Le broyat est lave
par trois bains successifs de tampon phosphate (p H 7,8).
Entre chaque bain, le broyat est separe de la solution par
centrifugation en continu a 4000 t/mn Le residu est alors
rince par deux bains successifs d'water permutee et le li-
quide est separe du broyat de la meme facon que dans les operations
precedentes Ces premiers traitements servent a eliminer les substances
non collageniques Le tissu est alors place dans une cuve contenant une
solution de soude a p H 14 Apres agitation pendant une demi-heure
environ, l'ensemble est laisse au repos pendant huit jours Le milieu
est ensuite acidifie par l'hydrochloric acid jusqu'a obtention d'un p
H de 2 Dans le melange obtenu, du sodium chloride est ajoute jusqu'a
obtention d'une
concentration de 10 % Le collagene precipite est dia-
lyse contre de l'water permutee sterile.
c) Preparation de la solution limpide d'une composition
selon l'invention.
Le gel de collagene dialyse a une concentration de 1,2 %, est dilue a
raison de deux fois par une solution contenant 0,6 % de
l'acidchondroitin-4-sulfate prepare en a), additionnee de 0,4 % d'un
produit conservateur tel que
celui commercialise sous la denomination Phenonip On ajou-
te a ce melange une solution de soude 0,1 N jusqu'a ce que le p H
dcmelange soit egal a 7 X ce moment, on obtient une solution limpide
dans laquelle la concentration en collagene est de 0,6 % et celle de
glycosaminoglycane de
0,4 %.
La solution ainsi obtenue peut etre incorporee par
exemple dans une creme cosmetique.
D'autres applications cosmetiques (masques pour le
visage), pharmaceutiques ou therapeutiques (paradontolo-
gie, chirurgie osseuse) analytiques (supports de mo-
lecules actives et notamment d'enzymes) imposent toute-
fois de disposer de la composition selon l'invention sous forme de gel
homogene pouvant etre ensuite facilement
transforme en formes facilement utilisables telles qu'e-
ponges, comme decrit dans l'exemple 2.
Exemple 2 Preparation d'un gel homogene selon l'inven-
tion a) Preparation de l'acidchondroitin-6-sulfate On prepare cet
acida partir d'ailerons de requins
selon le processus decrit en a) dans l'exemple 1.
b) Preparation d'une suspension homogene de collagene On prepare une
pate de collagene a partir de peaux
d'origine animale par broyage suivi de malaxage en pre-
sence d'organic acids chlores selon le processus d 6-
crit dans le brevet francais N O 1 568 829 de la deman-
deresse Cette pate est diluee a l'water de facon a
obtenir une concentration de 1 % en collagene La pro-
teine contenue dans la solution est precipitee par du sodium chloride
a 10 % Les fibres obtenues sont separees du surnageant par
centrifugation en continu a 4000 t/mn Elles sont ensuite deshydratees
par sejour dans trois bains successifs d'acetone Le sechage des fibres
est effectue par chauffage a 301 C dans une etuve ventilee. Ces fibres
sont placees dans un bain d'water permutee a une concentration de 2
g/l Apres agitation pendant
une heure, un gel est obtenu.
c) Preparation d'un gel homogane de la composition selon l'invention
On ajoute au gel un volume egal d'une solution a lg/l
d'acidchondroitin-6sulfate prepare en a) Le gel a tendance a se casser
et une dispersion est obtenue Une solution de soude 0,1 N est alors
versee sous agitation dans le melange jusqu'a obtention d'un p H egal
a 7 La
dispersion se transforme alors a nouveau en un gel ho-
mogene.
On peut ensuite transformer ce gel par exemple en eponge. On place le
gel dans un plateau en quantite telle
que son epaisseur soit inferieure a 10 mm.
Une operation de lyophilisation ulterieure permet
d'obtenir une eponge sur le plateau.
Les eponges ainsi obtenues ayant une composition assez voisine du
tissu de soutien de l'os favorisent l'osteogenese quand elles sont
placees dans des cavites osseuses en facilitant la rehabilitation de
ces cavites par les osteocytes Elles trouvent donc des applications
en paradontologie et en chirurgie osseuse.
Comme il va de soi et comme il ressort de ce qui precede, la presente
invention ne se limite pas aux deux seuls modes de realisation
presentes a titre d'exemples elle en embrasse, au contraire, toutes
les variantes, quelle que soit notamment la forme de presentation des
compositions obtenues par mise en oeuvre du procede poudres, eponges,
films, tubes, crins ou autres
Claims
_________________________________________________________________
REVENDICATIONS -
l Procede de preparation de compositions resultant de l'association de
collagene et de mucopolysaccharides, caracterise en ce que l'on met en
presence du collagene eventuellement dereticule, sous forme de
suspension ho-
mogene ou de solutionavec une solution de glycosaminogly-
cane et que l'on porte le p H du melange a 7.
2 Procede selon la revendication 1, caracterise en ce que la
concentration en collagene est le double de la
concentration en glycosaminoglycane.
3 Procede selon les revendications l et 2, caracte-
rise en ce que le collagene est tout d'abord dereticule
par contact prolonge du tissu collagenique avec une solu-
tion de soude a p H 14 et que l'association est obtenue
sous forme de solution limpide.
4 Procede selon les revendications i et 2, caracte-
risand en ce que le collagene utilise est du collagene na-
tif sous forme de gel obtenu a partir de fibres deshy-
dratees et que l'association est obtenue sous forme de
gel homogene.
Compositions obtenues par mise en oeuvre du
procede selon l'une quelconque des revendications l a 4
ainsi que leurs differentes formes de presentations telles que
solutions, poudres, eponges, films, tubes, crins, etc
6 Applications des compositions selon la revendi-
cation 5 notamment dans les domaines cosmetiques, phar-
maceutiques, veterinaires et therapeutiques, telles que par exemple en
paradontologie, en chirurgie osseuse et en tant que pansements
hemostatiques et cicatriciels, ainsi que dans les domaines analytiques
et notamment comme
supports de molecules actives telles que des enzymes.
? ?
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