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Physical
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1 ml
(3)
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de 2 mm
(2)
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de 10 microns
(2)
[9][_]
1,5 mm
(2)
[10][_]
20 minutes
(2)
[11][_]
5 ml
(2)
[12][_]
5% de
(2)
[13][_]
48 h
(2)
[14][_]
85%
(2)
[15][_]
10 microns to 1.5 mm
(1)
[16][_]
25 deg
(1)
[17][_]
de 3 cm
(1)
[18][_]
2 N
(1)
[19][_]
10% de
(1)
[20][_]
10 minutes
(1)
[21][_]
0,1 micron
(1)
[22][_]
de 3 mm
(1)
[23][_]
20 ml
(1)
[24][_]
de 5 ml
(1)
[25][_]
12,5 ml
(1)
[26][_]
23%
(1)
[27][_]
0,01%
(1)
[28][_]
26%
(1)
[29][_]
18%
(1)
[30][_]
60 min
(1)
[31][_]
3%
(1)
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67%
(1)
[33][_]
8 ml
(1)
[34][_]
10%
(1)
[35][_]
5 x 10 3M
(1)
[36][_]
100 l
(1)
[37][_]
10 l
(1)
[38][_]
Polymer
(2/ 16)
[39][_]
SILICONE
(15)
[40][_]
Dextrane
(1)
[41][_]
Gene Or Protein
(6/ 12)
[42][_]
ETRE
(7)
[43][_]
DANS
(1)
[44][_]
Apte
(1)
[45][_]
HC1
(1)
[46][_]
Est-a
(1)
[47][_]
Serum Albumin
(1)
[48][_]
Molecule
(7/ 11)
[49][_]
water
(3)
[50][_]
DES
(2)
[51][_]
hydrochloric acid
(2)
[52][_]
EDTA
(1)
[53][_]
Nigrosine
(1)
[54][_]
mercapto-ethanol
(1)
[55][_]
p-mercaptoethanol
(1)
[56][_]
Disease
(1/ 4)
[57][_]
Rupture
(4)
[58][_]
Chemical Role
(1/ 1)
[59][_]
stimulant
(1)
[60][_]
Organism
(1/ 1)
[61][_]
bovine
(1)
[62][_]
Generic
(1/ 1)
[63][_]
acid
(1)
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Publication
_________________________________________________________________
Number FR2522014A1
Family ID 8131194
Probable Assignee Pasteur Inst
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title SUPPORT POUR CULTURES CELLULAIRES, ENSEMBLE DE CULTURE
COMPORTANT UN TEL SUPPORT ET PROCEDE POUR CULTIVER DES CELLULES EN
PRESENCE DE CE SUPPORT
EN Title SILICONE ELASTOMER SUPPORT FOR CELLULAR CULTURE - IN FILM OR
BEAD FORM
Abstract
_________________________________________________________________
SUPPORT POUR CULTURES CELLULAIRES, ENSEMBLE DE CULTURE COMPORTANT UN
TEL SUPPORT ET PROCEDE POUR CULTIVER DES CELLULES EN PRESENCE DE CE
SUPPORT.
LE SUPPORT 1 EN ELASTOMERE SILICONE TRANSPARENT ET SOUPLE PRESENTE A
SA SURFACE SUPERIEURE 2 UNE PLURALITE DE MICROCUPULES 3 EN FORME DE
TRONC DE PYRAMIDE, MICROCUPULES DANS LESQUELLES SONT CULTIVEES LES
CELLULES. CE SUPPORT N'A PAS BESOIN D'ETRE TRAITE EN SURFACE ET IL EST
D'UN EMPLOI TRES COMMODE.
A support for cellular culture comprises a transparent and flexible
silicone elastomer, pref. having 2 components in wt. ratio of 85-95
pts. first component to 5-15 pts. second component. The support may
assume the form of a plate or film of variable configuration, the top
surface being smooth or provided with microcapsules of frusto-conical
shape, the size of the sides of each microcapsule being 10 microns to
1.5 mm. Alternatively the support may be in bead form. Pref. elastomer
comprises Rhodorsil RTV 141 made up of 100 pts. Rhodorsil RTV 141A and
10 pts. Rhodorsil RTV 141B, both transparent, viscous liquids of
density 1.0 and 1.020 respectively and viscosity 3000 and 500 (mPa.s
at 25 deg.C) respectively. The support is non-toxic and does not need
to be surface- or depth-treated.
Description
_________________________________________________________________
La presente invention concerne le domaine des cultures cellulaires;
elle a trait plus precisement a un nouveau support pour cultures
cellulaires,a un ensemble comprenant un milieu de culture et un tel
support ainsi qu'a un procede pour cultiver des cellules en presence
dudit support.
I1 est bien connu d'utiliser pour la croissance cellulaire,des
supports,qui sont habituellement en verre ou en matiere plastique.
A titre d'exemple on peut mentionner les plaques pour culture connues
sous la designation commerciale "FALCON" et qui ont fait par exemple
l'objet du brevet US 3.472.369.
On peut egalement citer les plaques dites Greiner-
Terasaki",les bottes de Petri,les boites de Roux en verre
borosilicate,et autres moyens connus de l'homme de l'art pour cultiver
des cellules.
Tous ces supports sont des supports autonomes rigides.
On connait egalement des microsupports constitues de billes de
dextrane.
Par ailleurs,la demande de brevet FR 77 24 421 (publication nO
2.400.063)au nom de l'institut Pasteur decrit l'application sur des
supports de base d'une solution d'un plastique thermodurcissable pour
obtenir un revetement rigide.
Tous les supports selon l'art anterieur necessitent un traitement
particulier pour les rendre non toxiques et par cdnsequent aptes a la
croissance cellulaire. I1 s'agit soit d'un traitement de surface soit
d'un traitement en profondeur,par exemple,dans le cas de supports en
matiere plastique.
Ces traitements sont aleatoires,la qualite d'un bt a un autre varie et
de nombreuses incertitudes subsistent au cours d'une manipulation,
incertitudes qui ne sont pas tolerables car les manipulations sont
longues et couteuses.
En outre tous les supports connus tant en raison de leur matiere
constitutive que du cot du traitement pour les rendre non toxiques
sont d'un prix de revient tres eleve.
La presente invention propose un nouveau support pour cultures
cellulaires qui n'est pas toxique et qui supprime donc le besoin
d'effectuer soit un traitement de surface, soit un traitement en
profondeur.
Le support selon la presente invention est d'un prix de revient
extremement bas et permet une grande souplesse d'utilisation car sa
forme et sa configuration peuvent varier a volonte.
Conformement a la presente invention,le support pour cultures
cellulaires comprend un elastomere silicone transparent et souple.
En general,et selon un mode prefere de realisation, l'elastomere
silicone est du type bicomposant. I1 est alors forme apres mise en
presence des deux composants.
Le rapport en parties en poids entre les deux composants de
l'elastomere silicone transparent et souple se situe alors dans la
gamme de 85 a 95 parties pour 5 a 15 parties du premier composant par
rapport au second.
Le produit prefere selon la presente invention est un produit du
commerce connu sous la denomination Rhodorsil
RTV 141 (Rhone Poulenc Industries France)constitue de deux composants
savoir:
Rhodorsil RTV 141 A et Rhodorsil RTV 141 B.
Les caracteristiques de ce produit sont les suivantes: -1- AVANT
CATALYSE RHODORSIL
RTV 141 A RTV 141 B
Aspect Liquide visqueux
Couleur transparent
Densite a 250C,environ 1,0 1,020 (norme ASTH D 792)
Viscosite a 250C, mPa.s, environ 3000 500 -2-CATALYSE
RHODORSIL RTV 141 A 100 parties
RHODORSIL RTV 141 B 10 parties
Duree d'utilisation du melange catalyse a 250C,environ 4 heures
Temps apres lequel l'elastomere (ou l'objet)est manipulable,environ 24
heures -3-APRES RETICULATION
Mesures effectuees sur film de 2 mm d'epaisseur apres reticulation de
24 heures a 250C.
3.1 Proprietes mecaniques
Durete Shore A,points, environ 45 (Norme AFNOR T 46 003)
Resistance a la rupture,MPa,environ 6,0 (Norme AFNOR T 46 002)
Allongement a la rupture,%,environ 130 (Norme AFNOR T 46 002) 3.2
Proprietes physiques
Retrait lineaire, %,environ de l'ordre de 0,1
Coefficient de dilatation cubique, environ 9.10
Conductibilite thermique,W/m.K, environ 0,16
Temperature de fragilite,oC,environ (Norme ASTM D 746) -100
Tenue thermique en pointe, 0environ +200
I1 va sans dire que l'exemple ci-dessus n'est nullement limitatif et
qu'on peut utiliser,aux fins de l'invention des elastomeres de
silicone multi-composants,autres que les systemes a deux composants
precites.
Le support de la presente invention,constitue dudit elastomere
silicone peut etre moule a volonte dans tous moules appropries.
Dans un mode de realisation,il se presente sous la forme d'une plaque
ou d'un film.
Selon un autre mode de realisation il se presente sous forme de
billes.
Lorsque le support est sous la forme d'une plaque ou d'un film dont la
configuration peut varier a volonte,la surface superieure peut etre
lisse.
Toutefois selon un mode prefere de realisation la surface superieure
de la plaque est munie d'une pluralite de microcupules.
Chaque microcupule presente,de preference,une forme en tronc de
pyramide evase.
La dimension des cotes de chaque microcupule varie sensiblement dans
la gamme de 10 microns a 1,5 mm d'une facon preferee.
Le support est applique soit comme revetement amovible non toxique
dans un support de base constitue d'un substrat de verre,d'une
quelconque matiere plastique ou analogue soit en tant que support de
base non toxique.
La presente invention est egalement relative a un ensemble pour
cultures cellulaires comprenant a) un milieu de culture connu en soi
et adapte aux cellules a cultiver et b) un support tel que ci-dessus
defini.
Enfin la presente invention se rapporte aussi a un procede de culture
cellulaire en presence d'un tel support pour les cellules et d'un
milieu de culture.
Divers avantages et caracteristiques de la presente invention
ressortiront de la description detaillee ci-apres faite en regard des
dessins annexes sur lesquels:
Fig.l est une vue en perspective d'une premiere forme de realisation
d'un support selon la presente invention dont la surface superieure
est munie d'une pluralite de microcupules;
Fig.2 est une vue analogue a celle de la figure 1 illustrant un
support dont la surface superieure presente des microcupules de plus
grandes dimensions que celles de la figure 1;
Fig.3 illustre un support selon la presente invention dont la surface
superieure est lisse;
Fig.4 represente tres schematiquement un support selon la presente
invention sous forme de billes;
Fig.5 montre a echelle agrandie et en coupe la structure de
microcupules preferees ayant une forme en tronc de pyramide.
Aux dessins annexes,on a represente,a titre d'exemples non limitatifs
quelques modes de realisation du support selon la presente invention
qui est constitue d'un elastomere silicone transparent et souple.
Le support 1 de la figure 1 est un microsupport dont la surface
superieure 2 presente une pluralite de microcupules 3. Dans l'exemple
considere il est prevu 400 microcupules contenus dans un carre
sensiblement de 3 cm de cote. Les microcupules 3 ont la forme
illustree sur la figure 5 c'est-adire une forme en tronc de pyramide.
Le support 1 selon la figure 2 est un support de plus grande dimension
schematise sous forme d'un rectangle et dont la surface superieure 2
renferme,par exemple, 240 microcupules 3 de plus grandes dimensions
que celles de figure 1 mais qui ont egalement une forme en tronc de
pyramide.
La figure 3 illustre un support 1 dont la surface superieure 2 est
lisse. Un tel support se presente sous forme d'un film souple qui sera
utilise tel quel ou qui sera applique dans un support de base connu
tel que,par exemple, une botte de Petri.
La figure 4 illustre un support 1 sous forme de billes 4.
L'invention est encore illustree par les exemples non limitatifs
suivants:
EXEMPLE 1
Obtention d'un support a surface lisse.
On melange a la main 90 parties de Rhodorsil
RTV 141 A avec 10 parties de Rhodorsil RTV 141 B. Ces deux produits
sont commercialises par la Societe Rhone Poulenc
Industries France. Ils sont d'un aspect sirupeux. Le melange
termine,on le degaze sous vide d'une maniere classique.
On coule ensuite ledit melange a temperature ambiante dans n'importe
quel substrat approprie de forme quelconque.
Dans le present exemple on a utilise une botte de Petri.
On accelere la polymerisation en placant ledit melange dans une etuve
portee a 600C environ,on retire le produit de l'etuve et on
l'introduit pendant 2 heures dans une autre etuve dont la temperature
est de 1600C. Le produit obtenu se presente sous forme d'un film ayant
une epaisseur de quelques millimetres. Un tel film,illustre tres
schematiquement sur la figure 3 peut etre utilise directement comme
support pour les cultures cellulaires ou bien il peut reposer sur le
fond d'un support-base tel qu'une boite de Petri. Ce film est souple
et sa surface superieure est lisse. Grace a son interchangeabilite
dans le cas d'une utilisation dans un supportbase on comprend aisement
qu'il est d'un prix de revient tres faible.Le support ainsi obtenu
n'est pas toxique et ne necessite aucun traitement particulier. I1 est
apte en tant que tel a la croissance cellulaire.
EXEMPLE 1A Obtention d'un support hydrophile
Pour des cellules necessitant imperativement un support hydrophile,on
peut completer la preparation du support tel que defini dans l'exemple
1 ci-dessus par un traitement avec un agent chimique provoquant
l'apparition de groupements hydrophiles a la surface dudit support.
A titre d'exemple,le support tel que prepare a l'exemple 1 a ete
traite par de l'hydrochloric acid 2 N a temperature ambiante pendant
48 heures. (La temperature,la duree du traitement et la normalite de
l'acidpeuvent varier en fonction de la surface a traiter).
On a ensemence des bottes de Petri traitees selon le procede decrit
ci-apres avec 104 cellules/ml.(Les cellules utilisees etaient des
cellules L de souris). On a ajoute du milieu de culture RPMI 1640
auquel on additionne 10% de serum de veau foetal. (Le milieu RPMI 1640
est vendu par
CIBCO. I1 a ete decrit dans 3.A.M. A.1967199,pages 519 a 524 par HOORE
G.E., GERNER R.E. et al).
Les bottes de Petri sont placees a l'etuve a 370C.
La confluence a ete obtenue en 4 jours de maniere identique avec les
cellules placees dans des bottes plastiques de
Falcon. Une experience preliminaire a montre que les MRC5 (cellules
humaines normales)peuvent etre multipliees sur ce support modifie par
le traitement avec HC1.
EXEMPLE 2
Obtention d'un support muni d'une pluralite de microcupules.
On prepare un moule mere soit metallique soit en matiere plastique
rigide a partir duquel on obtient a volonte differentes matrices
secondaires comme cela est bien connu dans la technique.
On melange a la main comme dans l'exemple 1 ci-dessus 90 parties en
poids de Rhodorsil RTV 141 A avec 10 parties en poids de Rhodorsil RTV
141 B.
On coule le produit dans le moule constitue par une matrice
secondaire. On degaze sous vide de facon habituelle dans une enceinte
a vide pendant 5 a 10 minutes. On repasse ensuite le produit a l'etuve
a 600C pendant 2 a 3 heures afin qu'il polymerise. On demoule. Pour
bien terminer la polymerisation on le repasse encore au four a 1600C.
Le produit est exempt de residu libre et est sterilise en meme temps.
I1 se presente sous forme d'une plaque souple de dimensions variables
et fonction du moule utilise. La surface superieure de la plaque est
pourvue d'une pluralite de microcupules dont le nombre et la dimension
peuvent varier a volonte selon le moule de base utilise. Comme on l'a
deja mentionne on prefere,selon la presente invention,que les
microcupules presentent une forme en tronc de pyramide.
Toutefois, il est possible que lesdits microcupules presentent
d'autres formes geometriques par exemple cylindriques, en forme de
troncs de cone et analogues. De preference encore la densite des
microcupules sur la surface superieure de la plaque est tres
importante et couvre toute ladite surface superieure. I1 n'est
cependant pas exclu de realiser une plaque pourvue de microcupules a
emplacements determines et choisis au prealable.
La dimension des microcupules est fonction du moule mere utilise. Dans
le cas d'un moule metallique la dimension limite susceptible d'etre
obtenue est de l'ordre d'une dizaine de microns,tandis que dans le cas
d'un moule mere en matiere plastique la dimension limite des
microcupules obte nues est de l'ordre du millimetre. Ainsi la
dimension d'un cote varie de 0,5 a 1,5 mm.
Le support ainsi obtenu qui dans le cas d'une tres petite dimension de
la plaque est un micro-support peut etre utilise directement comme
support non toxique pour cultures cellulaires.
A cet effet,on introduit dans ledit support,comme cela est habituel,le
milieu a l'aide d'une microseringue.
EXEMPLE 3
Obtention d'un support sous forme de billes.
1) On reprend le mode operatoire selon l'exemple 2 si ce n'est que
l'elastomere silicone souple final est moule dans deux cavites
hemispheriques pourvues d'un event de liberation des gaz. Les billes
obtenues ont une dimension variant a volonte fonction des dimensions
des cavites de moulage.
2) Des billes de petites dimensions (diametre compris entre 0,1 micron
et quelques millimetres)sont obtenues par suspension du compose
elastomere silicone prepare selon l'exemple 2,dans une solution
aqueuse sous agitation.Le controle de la vitesse d'agitation et
d'injection du compose permet d'obtenir des billes dans une gamme de
taille choisie. La polymerisation s'effectue directement dans la
solution aqueuse chauffee.
EXEMPLE 4
Application directe du support selon l'exemple 2 sans l'utilisation de
microseringues.
Le support selon l'exemple 2 est autoclave a l'envers dans de l'water
distillee c'est-a-dire que sa surface superieure est tournee vers le
bas. On fait le vide dans l'autoclave,on admet de la vapeur pendant 20
minutes,on fait le vide pendant 20 minutes en produisant une
evaporation de liquide,les microcupules sont chargees d'eau,on fait un
rincage du support avec le milieu de culture de facon a faire un
echange avec l'water et eviter les problemes de bulles
d'air,directement sur le support lave avec le milieu de culture. On
place les cellules qui sont dans le milieu de culture,elles se
repartissent au hasard. Apres trois ou quatre jours de culture,on
observe des colonies dans chaque microcupule.
EXEMPLE 5
Application du support selon la figure 3 pour cultiver des macrophages
peritoneaux.
On recouvre le fond de bottes de Petri en verre au borosilicate d'un
film circulaire de 3 mm d'epaisseur selon la figure 3 et on sterilise
en chauffant 2 heures a 16O0C.
On prepare des cellules peritoneales a partir de souris souche C57B116
2 (femelles).
On rince avec du liquide Hanks (5 ml).
On effectue un lavage a 1000 tlminutel40C/l0 minutes.
On effectue ensuite une reprise du culot de cellules avec du milieu
Eagle contenant 5% de serum de veau foetal.
On a 5 x 106 -cellulesibottes dans 20 ml de milieu.
On constate un etalement tres convenable des macrophages.
EXEMPLE 6
Application du support selon la figure 3 pour
A-etalement des macrophages
B-transformation des lymphocytes peritoneaux avec la concanavaline A
A- On prepare comme dans l'exemple 5 des bottes de
Petri dans lesquelles on place le film support en elastomere silicone
transparent et souple.
On preleve des cellules peritoneales de souris souche C57 81/6 2,on
rince avec du liquide de Hanks a raison de 5 ml, on effectue un lavage
et on reprend le culot avec du milieu Eagle renfermant 5% de serum de
veau.
La mise en culture est effectuee sur la base de 8 x 104 cellules/cm2
avec une densite analogue en surface
-en botte "Falcon"
-en botte Petri avec le revetement de film support selon l'invention.
On constate apres 6 heures un etalement identique des macrophages.
B- transformation des lymphocytes peritoneaux en presence de
concanavaline A (3 sg/ml final)
application: 12,5 ml sur botte de Petri + film support de l'invention
5 ml sur boite Falcon au taux de 5.105 cellules/ml.
Les resultats obtenus sont les suivants:
Botte Falcon Support de l'invention
Quantite 2,5 x 106 cellules 6,25 x 106 cellules
Cellules surnageantes a 48 h 4,5 x 105 cellules 1,43 x 106 cellules
tl8X) (23%)
Tapis adherent 6,6 x i05 cellules 1,12 x 106 cellules 48 h (apres
0,01% EDTA (26%) (18%)
60 min a 4 C)
Nigrosine + 3% 67%
Pourcentage de cellules blastiques apres coloration 80 a 85% 85% avec
mitoses
EXEMPLE 7
Numeration des cellules precurseurs (colonie)avec le support selon la
figure 2 renfermant 240 microcupules par rapport a une plaque
Greiner-Terasaki.
On preleve des cellules de moelle C57B1/6 9 avec suspension a 1,03 x
108 cellules/ml.
On effectue une mise en culture en milieu:
RPMI 1640 8 ml
BSA serum albumin bovine
10% 1 ml
Serum de veau foetal
inactive 1 ml mercapto-ethanol
(5 x 10 3M) 100 l
La suspension des cellules est de 3,2 x 104 cellulesimi on distribue
10 l dans chaque microcupule du support de l'invention et 10 rl dans
chaque godet de la plaque Greiner
Terasaki.
On effectue une lecture au 7eme jour concernant le nombre de
microcupules et de godets positifs en presence de
CSF (Facteur stimulant les colonies, en l'espece il s'agit de serum de
souris qui a ete preleve 3 heures apres que les souris aient recu 5 fi
g d'endotoxine ou LPS par voie sous-cutanee).
On note la presence de colonies de cellules comptant plus de 50
cellules en moyenne 500 a 2000
Les resultats obtenus sont les suivants:
plaque Greiner-Terasaki:14+ / 40
support selon la figure 2:74+ / 200 14+/40 signifie 14 positifs sur 40
godets ensemences; il s'agit d'une technique de numeration simple qui
consiste a compter les godets ou les microcupules positifs.
EXEMPLE 8
Numeration des colonies avec le support selon la figure 1 et une
plaque Greiner-Terasaki.
On preleve des cellules de moelle de souris
C57 Bol/6 2. On ajuste en milieu RPMI 1640,BSA, SVF (serum foetal de
veau) et p-mercaptoethanol en presence de
CSF (voir exemple 7).
Le support selon la figure 1 renfermant 400 microcupules est autoclave
dans l'water distillee,sous une boite de
Petri en verre de facon a obtenir un bon mouillage dudit support et on
le rince avec le milieu de culture comme indique dans l'exemple 4. A
cet effet on realise un aSustement des cellules a 1,32 x 105 cellules
/ml et a 4,8 x 104 cellules/ml.
On place 1 ml de suspension cellulaire sur ledit support et on
repartit les cellules dans le fond des microcupules.
La culture est mise en oeuvre durant 7 jours. Dans le meme temps on
realise une dilution des cellules de facon a faire une culture sur une
plaque de Greiner-Terasaki a 480 cellules/godet.
Resultats obtenus
Support de l'invention a 4,8 x 104 cellules/ml:
(130 cellules/microcupules) 308 /366
Support de l'invention a 1,32 x 105 cellules/ml
(330 cellules/microcupule) 254-/391
Plaque Terasaki-Greiner 20 /49
4,8 x 104 cellules/ml 27-/50
(480 cellules/godet)
Conclusion
On constate une excellente efficacite de clonage avec le support de
l'invention sensiblement identique a celle d'une plaque
Greiner-Terasaki alors que la concentration des cellules est plus
faible.
La presente invention fournit donc un support pour cultures
cellulaires d'un prix de revient extremement faible et exempt de
contamination.
Selon un mode tel que celui de la figure 3,il suffit de placer ce
support dans une botte de verre.
Il importe aussi d'observer que la forme en tronc de pyramide
conduisant a une arete vive permet aux cellules de tomber dans le fond
avec un mouvement limite,sans brassage,ce qui pourrait expliquer que
de telles microcupules soient des sieges de developpement privilegie
des cultures.
Au sens de la presente invention,le mot film signifie une pellicule
autonome d'epaisseur variable et de toute configuration qui n'adhere
pas sur le substrat sur lequel elle repose et qui est par consequent
amovible.
L'invention n'est pas limitee aux modes de realisation representes et
decrits en details et elle englobe les equivalents techniques.
Claims
_________________________________________________________________
-REVENDICATIONSl.Support pour cultures cellulaires,caracterise en ce
qu'il comprend un elastomere silicone transparent et souple.2.Support
selon la revendication l,caracterise en ce qu'il comprend un
elastomere silicone a deux composants.3.Support selon la revendication
2,caracterise en ce que le rapport en parties en poids entre les deux
composants de l'elastomere silicone transparent et souple se situe
dans la gamme de 85 a 95 parties pour 5 a 15 parties du premier
composant par rapport au second.4.Support selon l'une quelconque des
revendications 1 a 3,caracterise en ce que l'elastomere presente les
caracteristiques ci-apres: (a) avant catalyseRHODORSIL a deux
composantss RTV 141 A RTV 141 BAspect. Liquide visqueuxCouleur s
TransparentDensite a 250C environ 1,0 1,020(norme ASTM D 792)Viscosite
a 250C, mPa.s, environ 3000 500(b) catalyse "Rhodorsil" RTV 141 A 100
parties "Rhodorsil" RTV 141 B 10 partiesDuree d'utilisation du melange
catalyse a 250C,environ 4 heuresTemps apres lequel l'elastomere (ou
l'obJet)est manipulable,environ 24 heures (c) apres
reticulationMesures effectuees sur film de 2 mm d'epaisseur apres
reticulation de 24 heures a 250C.(c)-l- proprietes mecaniquesDurete
Shore A,points,environ (8orme AFNOB T 46 003) 45 Resistance a la
rupture,MPa,environ, (Norme AFNOR T 46 002) 6,0Allongement a la
rupture,%, environ (Norme AFNOR T 46 002) 130 bc)-2 proprietes
physiquesRetrait lineaire,X,environ de l'ordre de 0,1Coefficient de
dilatation cubique environ 9.10-4Conductibilite thermique,W/m.K,
environ 0,16Temperature de fragilite, C,environ (Norme ASTM D 746) -
100Tenue thermique en pointe, 0environ + 2005.Support selon l'une
quelconque des revendications 1 a 4,caracterise en ce qu'il se
presente sous la forme d'une plaque ou d'un film dont la configuration
peut varier a volonte.6.,Support selon l'une quelconque des
revendications 1 a 5, caracterise en ce que la surface suprieure de la
plaque ou du filme est lisse.7. Support selon l'une quelconque des
revendications 1 a 6,caracterise en ce que la surface superieure de la
plaque, est munie d'une pluralite de microcupules.8. Support selon
l'une quelconque des revendications 1 a 7, caracterise en ce que
chaque microcupule presente une forme en tronc de pyramide evase.9.
Support selon l'une quelconque des revendications 1 a 8 caracterise en
ce que la dimension des cotes de chaque microcupule est compris dans
la gamme de 10 microns a l,Smm.10. Support selon l'une quelconque des
revendications 1 a 4,caracterise en ce qu'il se presente sous forme de
billes.11. Support selon l'une quelconque des revendications 1 a
lO,caracterise en ce qu'il comprend,en outre,un support de base
constitue d'un quelconque substrat en verre,en matiere plastique ou
analogue.12.Support selon l'une quelconque des revendications 1 a
lO,caracterise en ce qu'il est traite avec un agent chimique pour
rendre sa surface hydrophile.13. Support selon la revendication
12,caracterise en ce que l'agent chimique est de l'hydrochloric
acid;14. Ensemble pour cultures cellulaires comprenant:a) un milieu de
culture connu en soi et adapte aux cellules a cultiver et b) un
support selon l'une quelconque des revendications 1 a 13.15. Procede
pour cultiver des cellules en presence d'un support et d'un milieu de
culture,caracterise en ce que le support est tel que selon l'une
quelconque des revendications 1 a
13.
? ?
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