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[5][_]
Molecule
(18/ 92)
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METHIONINE
(49)
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DL-METHIONINE
(16)
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sorbitol
(6)
[9][_]
sodium chloride
(4)
[10][_]
Cl
(2)
[11][_]
D,L-methioninesulfoxide
(2)
[12][_]
L-cysteine
(2)
[13][_]
presuren
(1)
[14][_]
calcium
(1)
[15][_]
resi
(1)
[16][_]
L-histidine, HCl
(1)
[17][_]
L-arginine
(1)
[18][_]
L-lysine
(1)
[19][_]
n'-thionine
(1)
[20][_]
glycine
(1)
[21][_]
L-alanine
(1)
[22][_]
ammonium sulfate
(1)
[23][_]
water
(1)
[24][_]
Physical
(24/ 53)
[25][_]
1 % de
(9)
[26][_]
50 L
(8)
[27][_]
2 % de
(4)
[28][_]
1 %
(3)
[29][_]
1,0 % de
(3)
[30][_]
2,0 % de
(3)
[31][_]
0,1 %
(2)
[32][_]
0,2 %
(2)
[33][_]
1,5 %
(2)
[34][_]
18 %
(2)
[35][_]
0,25 % de
(2)
[36][_]
50 %
(1)
[37][_]
2-3 %
(1)
[38][_]
3 %
(1)
[39][_]
1,6 %
(1)
[40][_]
2,25 M
(1)
[41][_]
11 %
(1)
[42][_]
2 %
(1)
[43][_]
0,50 % de
(1)
[44][_]
50 % de
(1)
[45][_]
10 %
(1)
[46][_]
de 40 %
(1)
[47][_]
4 %
(1)
[48][_]
de 18 %
(1)
[49][_]
Generic
(3/ 21)
[50][_]
amino acid
(19)
[51][_]
salt
(1)
[52][_]
sulfoxide
(1)
[53][_]
Organism
(4/ 14)
[54][_]
Mucor miehei
(10)
[55][_]
Mucor pusillus
(2)
[56][_]
Endothia parasitica
(1)
[57][_]
Mucor
(1)
[58][_]
Gene Or Protein
(3/ 5)
[59][_]
Etre
(3)
[60][_]
Dera
(1)
[61][_]
Chymotrypsin
(1)
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Publication
_________________________________________________________________
Number FR2522681A1
Family ID 1901377
Probable Assignee Novo Industri A S A Danish Corp
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title SOLUTION STABILISEE DE PRESURE PAR LA METHIONINE
Abstract
_________________________________________________________________
SOLUTION STABILISEE DE PRESURE CONTENANT LA METHIONINE A TITRE D'AGENT
STABILISATEUR. L'AGENT STABILISATEUR EST AJOUTE EN UNE QUANTITE
CORRESPONDANT A UNE CONCENTRATION COMPRISE ENTRE 0,1 (EN POIDS)
CALCULEE SUR LA BASE DU POIDS TOTAL DE LA SOLUTION ET CELLE D'UNE
SOLUTION SATUREE.
LA FIGURE UNIQUE MONTRE QUE LA L-METHIONIONE A UNE ACTIVITE
STABILISANTE SUPERIEURE A CELLE DE LA DL-METHIONINE.
Description
_________________________________________________________________
Solution de presure stabilisee par la methionine.
La presente invention concerne une solution
stabilisee de presure.
En raison de -son dosage olus facile, la presure
est souvent commercialisee a l'etat de solution.
Cependant, une solution de presuren'est generalement
pas aussi stable qu'une poudre de presure, en ce qui con-
cerne l'activite de la oresure Particulierement a des temn'yratures
relativement elevees On neut ajouter desagents stabilisateurs a la
solution de presure afin d'ameliorer la stabilite; un agent
stabilisateur utilise dans le commerce est le sorbitol qui est
generalement additionne en une quantite
d'environ 50 % en poids calculee sur la solution.
La majeure partie d'un tel agent stabilisateur ajoutee a la solution
de presure est absorbee par la phase de petit lait Camne, oenendant,
une faible partieest aussi absorbee par la phase decaille, l'agent
stabilisateur
se retrouvera dans le fromage finalement produit.
Dans le cas par exemple du sorbitol qui est une substance etrangere,
ceci est particulierement indesirable et, de ce fait, l'usage du
sorbitol n'est pas accepte dans certains pays En outre, le sorbitol
est une substance assez chere et etant donne qu'il faut ajouter
environ
% de sorbitol pour obtenir une stabilisation raison-
nable, le prix de la solution de presure stabilisee est
considerablement plus eleve que celui de la solution
de presure non stabilisee.
Ainsi, il existe un besoin de disooser d'une solution stabilisee de
presure dans laquelle l'agent stabilisateur ne presente pas le
caractere d'une substance etrangere et dans laquelle l'agent
stabilisateur n'augmente pas
de beaucoup le prix de la solution de presure.
L'invention reside dans la decouverte surprenante que de faibles
methionine exercent un effet de stabilisation puissant sur l'activite
enzymatique de
la presure.
Suivant l'invention, on fournit une solution stabilisee de presure
dans laquelle l'agent stabilisateur est la methionine ajouteeen une
quantite correspondant a une concentration comprise entre 0,1 % (en
poids) calculee sur la base du poids total de la solution et
celle d'une solution saturee.
Suivant un mode d'execution particulierement prefere de la presente
invention, on ajoute une methionine correspondant a une concentration
comprise, 19 entre 0,2 % (en poids) calculee sur la base du poids
total
de la solution et celle d'une solution saturee.
L'activite de la presure dans sa solution est d'au moins 5 000 UP/ml
et, de preference, au moins
10.000 UP/ml (UP = unites de presure).
L'activite de la presure indiquee en UP/ml (UP = unites de presure)
est mesuree conformement au
British Standard 3624: 1963 (Method for the determina-
tion of the milk coagulating power of rennet) (Procede pour la
determination de la force de coagulation du lait
de la presure).
Une solution de presure saturee en methionine est normalement une
solution a 2-3 % (en poids) selon
les autres constituants de la solution et la tem Dera-
ture Dans le cas, par exemple, d'une presure destabili-
see comme decrit plus bas, un residu de l'agent destabi-
lisateur reagit avec la methionine en laissant moins de methionine a
disposition pour le but de l'invention et, par consequent, il faut
plus de methionine pour
obtenir une solution saturee.
Cependant, comme il apparaitra dans les exemples
suivants, on utilise la methionine en une quantite tel-
lement faible comparee avec le sorbitol utilise dans le commerce,
qu'on obtient une reduction remarquable des prix. De preference, on
ajoute la methionine en une quantite correspondant a une concentration
comprise entre 0,1 et 2, et plus particulierement entre 0,5 et 1,5 %
{en poids) calculee sur la base du poids total de la solution. Comme
la methionine est un amino acid essentiel qui est deja contenu dans le
fromage, on n'introduit aucune substance etrangere dans le fromage
en utilisant la methionine en tant qu'agent stabilisa-
teur En outre, on n'ajoute qu'une faible methionine par rapport a ce
qui est deja contenu
dans le fromage.
Dans le brevet us n 3 051 627 et dans le brevet r B N O 866 423, on
indique que l'on peut utiliser, parmi un groupe de differents amino
acids, la methionine en tant qu'agent stabilisateur pour des solutions
de chymotrypsin La presente invention est cependant specifiquement
limitee
a la methionine et concerne specifiquement la presure.
En outre, il apparait du tableau D des brevets cites ci-dessus que les
amino acids testes, y compris la D,L-methionine,presentent tous
pratiquement le meme effet. Par consequent, il est tres surprenant de
voir que la methionine utilisee en tant qu'agent stabilisateur dans
une solution de presure suivant la presente invention soit apparue
comme le seul agent stabilisateur
efficace parmi ungrand groupe d'autres amino acids.
Suivant le brevet GB no 900 115, on
peut utiliser la D,L-methionine en tant qu'agent stabi-
lisateur pour des solutions de trypsine Cependant, la D,L-methionine
n'est citee qu'en tant qu'exemple d'amino acid possible dans la partie
generale du memoire descriptif du brevet, aucun effet nayant ete
signale dans la partie experimentale De plus, les amino acids sont
consideres comme devant etre utilises en combinaison avec un
calciumsalt (voir page 1, lignes
A 39).
Un mode de realisation nrefere de la solution stabi-
lisee de presure suivant l'invention comporte le fait que
la methionine est utilisee sous sa forme D,L.
Un autre mode de realisation prefere de la solution stabilisee de
presure selon l'invention comporte le fait que la methionine est
utilisee sous sa forme L. Un autre mode de realisation encore prefere
de la solution stabilisee de presure selon l'invention comporte
le fait que la presure est une presure microbienne.
Les presures suivantes peuvent etre utilisees en tant
que presures microbiennes: presure de Mucor miehei, presu-
re de Mucor pusillus et presure d'Endothia parasitica, et un mode de
realisation prefere de la solution stabilisee
de presure selon l'invention comporte le fait que la pre-
sure est derivee de Mucor miehei.
Un autre mode de realisation prefere de la solution stabilisee de
Dresure selon l'invention comprend le fait
que la presure est derivee de Mucor miehei et que la pre-
sure de Mucor miehei est destabilisee thermiquement.
Un autre mode de realisation prefere de la solution stabilisee de
presure selon l'invention comprend le fait que la presure est derivee
de Mucor miehei, que la presure de Mucor miehei est destabilisee
thermiquement et que le procede de destabilisation est mis en oeuvre
conformement au brevet US n 4 255 454 ou aux brevets BE n 882 689 ou
882 690.
Si on utilise un oxydant en tant qu'agent destabili-
sateur thermique, l'utilisation de la methionine suivant la presente
invention constitue un autre avantage, etant donne que la methionine
qui est un reducteur reduit de faibles residus possibles de l'oxydant
et elimine ainsi
de tels constituants indesirables du produit.
252268 1
La presente invention sera decrite plus en detail en reference aux
exemples ci-dessous et a la figure annexee. Normalement; on ajoute la
methionine a l'une des etapes finales de recuperation lors de la
preparation de la presure microbienne et, si la presure microbienne
est destabilisee thermiquement avec un oxydant, la methionine
doit etre ajoutee apres le processus de destabilisation.
La teneur en enzyme active des solutions de presure est reglee a 0,2
4, de preference a 0,25 3 % (en poids) par exemle par addition d'une
solution de sodium chloride. En se referant a la figure, le graphique
illustre l'activite residuelle d'une presure de Mucor miehei
(Rennilase 50 L type TL) a 40 'C apres 2 et 4 semaines.
Il apparait que l'effet stabilisant de la L-methionine
est superieur a celui de la D,L-methionine, particu-
lierement a des concentrations assez basses.
L'invention est decrite plus en detail au moyen
des exemples suivants, non limitatifs.
Exemple 1
La preparation de presure utilisee dans cette experience est une
presure commerciale de Mucor miehei destabilisee (Rennilase 50 L type
TL) produite suivant l'exemple 3 (dose approximative: 1,6 % en volume
par
volume de Na O Cl 2,25 M) du brevet BE N O 882 689.
Cette preparation est standardisee avec une solution de sodium
chloride a 18 % en poids jusqu'a
une teneur d'environ 11 % d'enzyme active.
On a teste deux reparations de cette Rennilase 50 1 type TL en ce mui
concerne la stabilite au stockage a un n H de 6,5, les essais ayant
ete effectues avec un temoin ne contenant aucun agent stabilisateur et
un echantillon contenant 1 % en poids de D,L-methionine Les essais de
la stabilite au stockage ont ete effectues en tant qu'essai de
stabilite "normal" a 25 C et en tant qu'essai accelere a 40 QC Les
resultats sont indiques dans le tableau suivant.
Tableau I
Il en resulte que l'addition d'l % D,L-methionine fournit une
amelioration
de la stabilite au stockage.
en poids de remarquable
Exemple 2
Afin de comparer l'effet stabilisant de la methionine avec celui de
quelques autres amino acids, on a ajoute 1 % en poids de differents
amino acids a une rennilase 50 L type TL (Dreparation PRN 4518 prepare
selon l'exemple 1) On a utilise un echantillon ne contenant aucun
ajout d'amino acid en tant que temoin On a regle le p H de tous les
echantillons a 6,5 Les echantillons ont ete stockes a 40 C pendant 2
semaines et on a
determine les activites residuelles, cf tableau II.
Pouroentaqe d'activite residuelle Temperature d'incubation 25 C 40 C
Duree d'incubation 4 18 2 semaines semaines semaines Prepa temoin sans
95,3 81,3 74,3 ration ration stabilisant PRN 4519 avec 1 %de 102,0
97,9 89,5 D, L-methionine Preca temoin sans 97,1 81,0 75,5
Preoa-
ration stabilisant
PRN '
4520 avec 1 % de 102,8 94,4 88,4 D, L-methionine
Tableau II
Des chiffres ci-dessus, il resulte que seule la methionine
fournit une stabilisation efficace de la preparation d Ae resure.
Exemple 3
Dans cet exemple, on a compare l'effet stabilisant
de la methionine avec celui d'encore l'autres amino acids.
On a ajoute 2 % en poids des amino acids a une Rennilase 50 L-type TL
(f Dr Aoaration PRN 4516 obtenue suivant l'exemple 1) Un echantillon
ne contenant aucun ajout d'amino acid a ete utilise a titre de temoin
On a regle le p H de tous les echantillons a 6,5 et on les
a stockesa 40-C pendant 2 semaines Les activites resi-
duelles sont indiquees dans le tableau suivant: Pourcentagc d'activite
residuelle Rennilase 50 L Type TL apres 2 semaines a 40 C Temoin sans
ajout d'amino acid 69,8 Avec 1 % dDL-methionine 88,1 Avec 1 % de
Lasparagine 72,2 Avec 1 % de L-histidine, HCl 74,5 Avec 1 x de
L-arginine 74,1 Avec 1 % de L-lysine 72,0 Avec 1 % de L glutairinate
de Na 71,7
Tableau IV
Rennilase 50 L type TL Pourcentage d'activite residuelle Temperature
d'incubation 25 C 40 C Duree d'incubation 26 2 4 semaines semaines
semaines Temoin sans ajout d'amino acid 63 66 53 Avec 0,25 % de
D,Lmethionine 70 71 58 Avec 0,50 % de D,L-methionine 76 77 65 Avec 1,0
% de D,L-methionine 84 83 74 Avec 2,0 % de D,L-methionine 90 90 85
Avec 0,25 % de L-methionine 78 84 70 Avec 0, 50 % de L-methionine 83
88 75 Avec 1,0 % de L-methionine 89 92 81 Avec 2,0 % de L-methionine
96 94 81 Avec 1,0 % de D,L-methioninesulfoxide 67 74 60 Avec 2,0 % de
L-cysteine 60 67 57 I Il resulte des chiffres ci-dessus que la
L-n'-thionine fournit une meilleure stabilisation de la preparation de
presure que la D,L-methionine La L-cysteine n'a aucun effet et le
sulfoxyde de D,sulfoxide- methionine n'a qu'un effet
mediocre sur la stabilite.
5.
Tableau III
Exemple 4
Dans cet essai, on a compare l'effet stabilisant
de la D,L-methionine avec celui de la L-methionine.
En outre, on a etudie l'effet d'un derive de la methio-
nine, le D,L-methionine sulfoxide et un autre amino acid, la Lcysteine
On a ajoute des -ronortions variables des differents amino acids a une
Rennilase 50 L type TL
(melangesde parts egales de PRN 4526, PRN 4527 et PRN 4528).
On a utilise un echantillon ne contenant aucun ajout d'amino acid a
titre de temoin On a regle le p H de
tous les echantillons a 6,5 et on a stocke les echantil-
lons a 40 C pendant 2 et 4 semaines et a 25 C pendant 26 semaines Le
tableau suivant indique les activites residuelles. Pourcentae
d'activite residuelle Rennilase 50 L type TL apres 2 semaines a 40 C
Temoin sans ajout d'amino acid 74 Avec 2 % de D,L-methionine 96 Avec 2
% de glycine 77 Avec 2 % de D, L-alanine 78
Exemple 5
On a examine l'effet stabilisant de la D,L-
methionine dans une solution a 10 % en poids d'une presure
commercialede Mucor pusillus, Nourylab 1: 220 000 (charge n 75 I 1 22)
contenant 18 % en poids de sodium chloride ajoute pour la conservation
On a regle le p H des echantillons a 4,7 et on a fait incuber un
echantillon temoin et un echantillon contenant 1 % de D,L-methionine a
40 C, 25 C et 4 C et on a mesure lest
activites residuelles au caillement.
Tableau V
Temoin sans ajout d'amino acid 34 25 55 93 76
Avec 1 % de D,L-
methionine 51 39 73 96 88 Il en resulte que la D,L-methionine fournit
egalement une amelioration remarquable de la stabilite
au stockage de la presure de Mucor ousillus.
Exemple 6
La substance de depart pour cet essai a ete un concentre de presure
prepare comme indique dans " 2nd Pilot Plant Experiment" du brevet GB
n 1 108 287 On n'a concentre que le liquide de culture pour obtenir
une activite correspondant a une
solution a environ 1 % de l'enzyme pure.
Cette substance a ensuite encore ete purifiee et concentree par
precipitation au moyen de 40 % poids par % en poids de Nourylab
?ourcentaae d'activite residuelle Temperatured'incubation 40 C 25 C 4
C Duree d'incubation 2 4 4 4 26 sem sem sem sem semaines volume de
ammonium sulfate et par lavage a l'water de robinet pendant
l'ultrafiltration ulterieure Le concentre de presure obtenu
(erenaration PRB 1031) contenait environ 4 % d'enzyme active apres
addition de 18 % en poids de sodium chloride pour la conservation.
L'essai a la stabilite avec deux teneurs de methionine et avec un
echantillon temoin a ete effectue
A 40 C et a p H 6,8.
Tableau VI
P)urcentage d'activite residuelle Concentre de presure PRB 1031 apres
4 apres 13 apres 26 semaines semaines semaines Temoin sans methionine
88,1 72,1 59 Essai avec 1 % de D,L-methionine 98,8 88,7 80 Essai avec
2 % de D, L-methionine 98,9 92,1 84
Claims
_________________________________________________________________
REVENDICATIONS
1 Solution stabilisee de presure, caracterisee en ce que l'agent
stabilisateur est la methionine ajoutee en une quantite correspondant
a une concentration comprise entre 0,1 % (en poids) calculee sur la
base du poids total de la solution et celle d'une solution saturee. 2
Solution stabiliseede presure suivant la revendication 1 carat^ 4 see
en ce que la methionine est ajoutee en quantite correspondant a une
concentration comprise entre-0,2 % (en poids) calculee sur la base du
poids total de la solution et celle d'une solution saturee. 3 Solution
stabilisee de presure suivant la revendication 4 caracterisee en ce
que la methionine est ajoutee en quantiti correspondant a une
concentration comprise entre 0,5 et 1,5 % (en poids) calculee sur la
base du poids total de la solution.
4 Solution stabilisee de presure suivant l'une
quelconque des revendications 1 a 3,caracterisee en
ce que la methionine est la D,L-methionine.
Solution stabilisee de presure suivant l'une
quelconque des revendications 1 a 3,caracterisee en
ce que la methionine est la L-methionine.
6 Solution stabilisee de presure suivant l'une
quelconque des revendications 1 a 5, caracterisee en
ce que la presure est une presure microbienne.
7 Solution stabilisee de presure suivant la revendication
6,caracterisee en ce que la presure
microbienne est derivee de Mucor miehei.
8 Solution stabilisee de presure suivant la revendication 7,
caracterisee en ce que la presure
microbienne de Mucor miehei est destabilisee thermi-
quement.
9 Solution stabilisee de presure suivant la revendication 8,
caracterisee en ce qu'on a effectue la destabilisation thermique au
moyen d'un oxydant,
notamment Na O Cl.
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