close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

3053 petuhovae.a. bessarabovar.f.haleneval.d.antonova o.a zootehnicheskiy analiz kormov

код для вставкиСкачать
ЗО О ТЕХН И ЧЕСКИ Й
А Н А Л И З КОРМОВ
УЧЕБНИКИ И УЧЕБНЫЕ ПОСОБИЯ Д Л Я ВЫСШИХ
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ УЧЕБНЫХ ЗА В Е Д Е Н И Я
»
Е. А. ПЕТУХОВА, Р. Ф. БЕССАРАБОВА,
Л. Д . ХАЛЕНЕВА, О. А. АНТОНОВА
ЗО О ТЕХ Н И Ч ЕС К И Й
А Н А Л И З КОРМОВ
Я|
Допущено Главным управлением высшего н среднего
сельскохозяйственного образования Министерства сель­
ского хозяйства СССР в качестве учебного пособия для
студентов высших сельскохозяйственных учебных заве­
дений по специальности «Зоотехния»
I
©
МОСКВА
«колос»
1981
ББК 45.45
—
3-85
УДК 636.085.3(075.8)
^
-------
■
---------
—
I_
Щ иГГ* "
*
Р е ц е н з е н т ы : доктор с.-х. наук профессор В. Я. Максаков*
доктор ветеринарных наук А. Ф. К узнецов, доктор с.-х. наук профес-1^
сор С. И. Хохрин, доцент кафедры кормления с.-х. животных Л ВИ
кандидат с.-х. наук В. Г. Чихиржин, доцент кафедры кормления с.-х.
животных ВСХИЗО Е. И. Ткаченко.
ш
Зоотехнический анализ кормов/Е. А. Петухова,
3-85 Р, Ф. Бессарабова, Л. Д . Халенева, О. А. Антоно­
в а .- —М.: Колос, 1981. — 256 с., и л . — (Учебники и
учеб. пособия для высш. с.-х. учеб. заведен и й ).
В пособии освещаются методы химического анализа кормов, опре­
деления их энергетической ценности, некоторые биохимические методы
и тесты контроля полноценности кормления сельскохозяйственных ж и ­
вотных, правила техники безопасности при работе в лаборатории зоо­
технического анализа и другие вопросы, в нем приводятся таблицы
химического состава и переваримости питательных веществ основных
кормов и другие справочные данные.
п
40202—081
— — 168—81.
0 3 5 (0 1 X— 81
3804010302
ББК 45.45
636.04
■
Издательство «Колос», 1981
ВВЕДЕНИЕ
Организация полноценного
кормления
сельскохозяйственных
животных — одно из основных условий повышения их продуктив­
ности и увеличения производства продуктов животноводства. Для
организации полноценного кормления сельскохозяйственных живот­
ных наряду с созданием прочной кормовой базы необходима д е ­
тальная характеристика качества кормов, производимых в колхо­
зах и совхозах. Качество кормов оценивают по органолептическим
признакам и химическому составу. ЗкГан-ие химического состава
кормов и норм потребности сельскохозяйственных животных в раз­
личных питательных веществах необходимо для организации ра­
ционального кормления животных и правильного кормопроизвод­
ства
Перевод производства продуктов животноводства на промыш­
ленную основу, создание крупных животноводческих ферм и комп­
лексов по производству молока и мяса, а также крупных птице­
фабрик предъявляет
особые требования к кормам
и кормовой
базе.
При промышленных методах производства продукции высокой
продуктивности сельскохозяйственных животных можно добиться
лишь при научно обоснованном их кормлении. С повышением про­
дуктивности животных возрастают также требования к полноцен­
ности рационов по всем питательным и биологически активным ве­
ществам. Увеличение числа контролируемых показателей питатель­
ности рациона с 5— 6 д о 20—50 и более привело к необходимости
разработки и постепенного перехода к новой системе оценки пита­
тельности кормов и нормирования питательных веществ по их кон­
центрации в 1 кг сухого вещества рациона.
Только полноценным кормлением можно обеспечить хорошее
состояние здоровья, нормальные воспроизводительные функции и
высокую продуктивность сельскохозяйственных животных и эф ­
фективное использование ими кормов. Полноценность кормления
зависит от многих факторов, в том числе от правильного установ­
ления потребностей животных в питательных веществах, количества
нормируемых показателей, химического состава, питательности и
качества кормов, а также от соответствия поступления питательных
веществ потребностям животных, доступности и усвоения ими пи­
тательных веществ рациона и наличия запасных веществ в ткане­
вых дело организма.
С ростом продуктивности животных увеличиваются случаи их
незаразных заболеваний, в том числе связанных с нарушением о б ­
мена веществ (остеодистрофия, кетозы,
гиповитаминозы и др.).
Нормальный уровень обмена веществ поддерживается при по ступ-
л е н и и в организм
белков^ жиров, углеводов, минеральных веществ
н витаминов в соответствии с физиологическими потребностями ж и­
вотных.
'
'
*~ '
При малейших нарушениях технологии промышленного ж ивот­
новодства в условиях резко возрастающих физиологических нагру­
зок на животных создаются предпосылки для воздействия на ор­
ганизм стрессовых факторов, что неблагоприятно отражается на
здоровье животных. В молочном скотоводстве это приводит к уве­
личению заболеваний коров кетозами, гиповитаминозами, остеоди­
строфией и другими болезнями. В результате этого хозяйствам на­
носится существенный экономический ущерб из-за сокращения сро­
ков использования наиболее ценных животных д о 2— 4 лет, сни­
жения на 30-—50% и более их молочной продуктивности, а также
живой массы из-за вынужденной выбраковки, увеличения яловости
маточного поголовья и других причин.
Активная форма плановой профилактики — диспансеризация
животных, при которой наряду
с их клинико-физиологическими,
биохимическими и морфологическими исследованиями контролиру­
ются качество и химический "состав кормов, сбалансированность и
полноценность рационов. Данные о кормах и кормлении животных
используются в хозяйстве при разработке целенаправленной про­
филактики. В этой работе большую роль играют ветеринарные и
агрохимические лаборатории. Специалисты биохимических отделов
ветеринарных лабораторий проводят исследования кормов, органов
и тканей животных, определяют доброкачественность кормов и пол­
ноценность кормления животных. Результаты таких исследований
становятся руководством для специалистов хозяйств по улучшению
кормления и предупреждению заболеваний животных, возникающих
из-за неполноценного их кормления. В крупных птицеводческих х о ­
зяйствах организованы зоотехнические лаборатории, осуществляю- ” щие контроль за питательностью кормов.
В системе государственной агрохимической службы - массовыми
исследованиями качества и питательности кормов занимается свыше
200
зональных
лабораторий
(З А Л ),
обслуживающ их
свыше
12 000 колхозов и совхозов (более 25% от всех хозяйств страны)
и анализирующих еж егодно около 300 000 образцов кормов. Резуль­
таты исследования кормов используют при организации научно
обоснованного кормления сельскохозяйственных животных.
Доказано, что при организации полноценного кормления сель­
скохозяйственных животных разных видов необходимо нормировать
от 15— 20 д о 40— 50 показателей, в том числе: сухое вещество,
энергию (в кормовых единицах или килодж оулях), сырой или переваримый протеин, растворимые его фракции, незаменимые или
лимитирующие аминокислоты (10-—11 или 3— 4), углеводный ком­
плекс (сырая клетчатка, сахара, крахмал), сырой жир, некоторые
. жирные кислоты (для птиц), сырую золу, и входящие в ее состав
минеральные элементы (кальций, фосфор, магний, калий, натрий,
хлор, сера, ж елезо, медь, цинк, марганец, кобальт, й о д ), а также
витамины А, В, Е, комплекса В и др.
Расчет оптимальных рационов, сбалансированных по всем нор­
мируемым показателям питательности (детализированные нормы),
с учетом стоимости и фактической питательности кормов часто ста­
новится невозможным
безэлектронно-вычислительных
машин
(Э В М ). Использование ЭВМ Дает возможность, оперативно изме-
А
нять рационы в зависимости от наличия кормов в хозяйстве и
химического состава, соблюдая при этом требования к полноцсмности и сбалансированности рациона по большому количеству нор­
мируемых показателей питательности. При расчете рационов в хо­
зяйствах той или иной зонЫ страны целесообразно учитывать тип
кормления и важнейшие факторы химического состава кормов, ли­
митирующие полноценность питания животных. Применение рацио­
нов, составленных на ЭВМ на основе детализированных норм корм­
ления и фактической питательности кормов, обеспечивает повыше­
ние продуктивности животных на 10— 15% при снижении затрат
кормов на получение единицы продукции на 10— 20%.
В современных условиях показатели химического состава кор­
мов являются основой оценки их питательности, так как дают им
разностороннюю характеристику. Однако по этим
показателям
можно судить только о валовом содержании в корме питательных
или биологически активных веществ. Доступность и усвояемость
питательных веществ можно определить в специальных опытах на
животных, а также с помощью комплексной оценки питательности
кормов и рационов.
Задача зоотехнического анализа — определить содержание пи­
тательных веществ в кормах. Методами такого анализа опреде­
ляют группы питательных веществ, содержащихся в кормах сов­
местно с примесями. По этой системе группового анализа корм
разделяют на шесть фракций: влага, сырая зола, сырой протеин,
сырой жир, сырая клетчатка и безазотистые экстрактивные веще­
ства (Б Э В ). Сырой протеин в корме определяют по, содержанию
азота в белке и продуктах его гидролиза или синтеза (полипеп­
тиды, аминокислоты, амиды аминокислот); учитывают также азот
липоидов, гликозидов, аммонийных солей, нитратов и др. При оп­
ределении сырого жира в эфирную или бензиновую вытяжку пере­
ходит нейтральный жир и жирйые кислоты, а также фосфатиды,
стеролы, воска, смолы, пигменты, растворимые в - жире витамины
и др.
. /V
У
V
Группа веществ, представляющих сырую клетчатку, состоит
из собственно клетчатки (целлулозы), а также из некоторого ко­
личества гемицеллулоз (пёнтозанов, гексозаЯов), инкрустирующих
и минеральных веществ и примесей. Группа безазотистых экстрак­
тивных веществ представлена крахмалом,
сахарами, пектинами,
органическими кислотами, растворимыми в воде витаминами, частью
гемицеллулоз и др.
Эта схема анализа кормов была разработана более 100 лет
назад немецким ученым Геннебергом. Хотя его метод не отвечает
современным требованиям, он все ж е дает возможность получить
ориентировочную информацию о питательной ценности кормов. В
настоящее время полученные по этой схеме сведения лаборатории
дополняют новыми данными о химическом составе кормов. Так, во
фракции сырого протеина при необходимости определяют белок,
амиды, аминокислоты, нитраты, аммиак и др.; в углеводном ком­
плексе, кроме сырой клетчатки, исследуют гемицеллулозы, крахмал,
декстрины, различные сахара, лигнин и др. Фракцию сырого жира
анализируют на содержание жирных кислот. Определяют также
энергетическую питательность органических веществ. Золу корма
анализируют на содержание кальция, фосфора, магния, калия, нат­
рия, серы, .хлора, железа, меди, кобальта, марганца, цинка, йода,
'
’
4
5
фторз;^&лена й др. ~В кормах определяют такж е содержание ка­
ротина и витаминов А, Е, Д К, С и комплекса В.
Количество анализируемых показателей
химического состава
кормов зависит от требований практики кормления сельскохозяй­
ственных животных, возможностей лаборатории и стоимости ана­
лиза кормов.
Современные методы химического анализа кормов предпола­
гают использование автоанализаторов, хроматографов, спектрофото­
метров и другого сложного оборудования (схема химического сос­
тава кормов и тела животных и их анализа приведена в учебнике
по кормлению сельскохозяйственных животных).
Настоящее пособие по зоотехническому анализу кормов слу­
жит руководством для студентов зооинженерного, ветеринарного
и ветеринарно-биологического факультетов при выполнении ими
лабораторных заданий, а также в период учебно-исследовательской
работы и самостоятельных исследований, проводимых в студенчес­
ком научном кружке.
*
. —
^
ВЗЯТИЕ СРЕДНЕЙ ПРОБЫ КОРМОВ
Основные понятия и требования к отбору проб кор­
мов. При анализе кормов большое значение имеет пра­
вильный отбор средней пробы. По химическому соста­
ву и основным свойствам средний образец должен быть
по возможности точной копией всей партии корма.
Согласно требованиям соответствующих стандартов
на корма, принята определенная терминология. Так,
партией считают любое количество однородного корма,
например, сена одного вида и класса, комбикорма, из­
готовленного по одному рецепту, предназначенное к од­
новременной приемке, отгрузке, сдаче или одновремен­
ному хранению.
Выемка, или разовая проба, — небольшое количество
корма, отобранное от партии за один прием для состав­
ления исходного образца.
Исходный образец (общая проба) — совокупность
всех выемок от одной партии корма, взятых из разных
мест хранилища, скирдц, вагона и т. д.
Среднюю пробу, или образец, отбирают из исходного
образца после тщательного его перемещнбания. Из сред­
ней пробы корма для определения отдельных его пока­
зателей качества берут точные навески.
На отбираемую для анализа среднюю пробу корма
заводят паспорт, в котором указывают сведения о хо­
зяйстве, районе, области, отделении и бригаде, а также
о ботаническом составе, фазе вегетации (для сена, се­
нажа и др.), технологии, сроках приготовления и ос­
новных показателях органолептической оценки. По з а ­
вершении анализа в лабораторий в паспорта вносят ре­
зультаты исследований качества кормов и данные о
содержании в нем питательных веществ.
Взятие средней пробы сена. Согласно требованиям
ГОСТ 4808— 75, среднюю пробу сена, закладываемого
на хранение в совхозах и колхозах, отбирают по окон*
7
чании его заготовки, но ке позднее 30 суток п о м е з а ­
кладки сен'а в стога, скирды, сараи. Разовые пробы из
непрессованного сена (по 200—250 г с каждого места)
отбирают вручную или пробоотборником. От партий не­
прессованного сена массой до 25 т отбйрают 20 разовых
проб, от каждых последующих 5 т сена — 4 разовые'
пробы.
г‘ .
От партии прессованного сена массой до 15 т отби­
рают пробы от 3% тюков, количество которых долж но
быть не менее 5., Если масса партии сена превышает 15 т,
но не более 50 т, то пробу сена отбирают от 1% тюков,
общее количество которых должно быть не менее 15. От
каждого отобранного тюка прессованного сена отбирают
разовые пробы. Д л я этого с тюка снимают проволоку или
шпагат, затем осторожно, избегая разрыва трав и о б р а­
зования трухи, отбирают из каждого тюка по одному
пласту: из первого тюка поверхностный пласт, из второ­
г о — следующий и т. д. О бщ ая проба может быть до­
вольно большой по массе (но не менее 5 кг). В таком
случае для получения средней пробы сена все разовые
п р о б ы объединяют, помещают на брезенте размером
2 X 2 м и осторожно перемешивают, избегая ломки рас­
тений и образования трухи. Затем д л я анализа берут
образец массой не менее 1 кг, для чего не менее чем из
10 различных мест смешанного на брезенте сена отбира­
ют пучки его по 90— 110 г. При этом образовавшуюся
при смешивании сена труху и мелкие части растений то­
ж е включают в среднюю пробу.
Сено средней пробы закаты ваю т без поломки расте­
ний в плотную бумагу.
Д л я определения влажности сена пробу массой 300 г
отбирают отдельно и помещ ают в стеклянную банку с
притертой пробкой. Отобранные таким образом пробы
направляют в лабораторию. Н а пакет и банку с проба­
ми^ сена наклеивают этикетку с указанием хозяйства,
района, области, отделения, бригады, звена, номера по­
ля и участка, ботанического состава трав, фазы их ве­
гетации, даты скашивания, технологии приготовления и
способа хранения, номера скирды (хранилищ а), даты
укладки сена и сдачи его на хранение, а такж е даты
отбора пробы на анализ. На этикетке должны быть т а к ­
ж е подписи лиц, ответственных за заготовку, хранение
и отбор пробы.
8
Поступившее в лабораторию сено записывают в ре­
гистрационную книгу,
описывают
результаты его
осмотра: внешний вид, ботанический состав, цвет, з а ­
пах, признаки порчи, наличие примесей (земли, метал­
лических и 'д р .). . " V .
Взятие средней пробы силоса и сенажа. Пробы си­
лоса и сенажа берут из мест хранения (башни, тран­
шеи, ямы), заполненных однородным сырьем. Если си­
лос или сенаж приготовлен не из однородных растений,
то среднюю пробу составляют для каждого вида сырья,
занимающего не менее ' / 4 объема башни или траншеи.
Пробы для анализа отбирают из траншей не позд­
нее чем за 1 0 дней, из башен не позднее чем за 5 дней
до скармливания животным или передачи другим хо­
зяйствам, но не ранее чем через 4 недели после заклад­
ки сенажа (силоса) на хранение и окончания процесса
консервирования. Д ля отбора проб сенажк из траншей
и башен .применяют ручной (конструкции Ленинград­
ской областной агрохимической лаборатории) и. меха­
нический ПС - 1 (конструкции Центрального института
агрохимического обслуживания) пробоотборники. Из
траншей пробы отбирают на .глубину не менее 2 м;при
слое сенажа менее 2 м их отбирают на всю толщину
слоя.
Из башен пробы отбирают вначале из верхнего
2 -метрового слоя, а после его выемки из оставшейся ча­
сти сенажа на глубину не менее 2 м.
Из траншей отбирают три точечные пробы, первую
берут в центре одной из наклонных частей на расстоя­
нии 5 м от торцовых сторон сооружений; вторую — в
траншеях с прямыми стенами — на расстоянии 0,5 м, а
в траншеях с наклонными стенами — на расстоянии 1 м
от одной из стен в средней части по длине траншеи;
третью — в центре траншеи. Массу каждой точечной
пробы сенажа помещают в отдельный пакет из полимер­
ной пленки. Из башен при каждом отборе проб также
отбирают три точечные пробы: первую берут в центре,
вторую — на расстоянии 2 м и третью — на расстоянии
0,5 м от стены башни. Масса каждой точечной пробы
должна быть не менее 0,5 кг. Перед взятием точечных
проб сенажа и силоса снимают слой укрытия до плен­
ки. В пробу для анализа не включают силос и сенаж,
взятые из верхних слоев из траншей на глубине 2 0 см,
а из башни — 50 см. Точечные пробы сенажа из башни
Ш .С'- *Я '
■ ЧЧ 9
объединяют в одну пробу, помещают в пакет из поли­
мерной пленки и тщательно перемешивают.
Пробы сенаж а и силоса, взятые из траншей, переме­
шивают и методом деления квадрата берут часть корма
для анализа. В зависимости от емкости траншей массу
сенажа (М ь М 2, Мз) в граммах, отбираемую соответст­
венно от первой, второй и третьей точечных проб, вы­
числяют по формулам:
'
2Л+1
,
2(1— 4 Л - 2 )
ЛЬ = 1,5----------- ; М 2= 1,5—----------1-2Н -1
. .
* ( / —2Л—1)
( « ~ 2) ( / - 4 Л - 2 )
Л|3= 1 , 5 -----------------------.
« ( / —2й— 1)
где к — высота сенажа в траншее (м ); / — длина тран­
шеи (м ); 5-— ширина траншеи (м).
Количество силоса, отбираемого от каждой точечной
пробы (М\, М2, Мз), вычисляют по формулам:
2А +1
М 1= 2- — —
I—2(1—I
2(1— А Н - 2 )
( з - 2 ) ( /— \ Н - 2 \
« ( / —2Л—1)
5(1—2А— 1)
М2= 2—---------- М3= 2 - ------------------------- -
Объединенную пробу сенажа и силоса перемеши­
вают, определяют цвет, наличие плесени и запах; ре­
зультаты записывают в паспорт качества.
В пробу силоса, помещенную в пакет из плотной по­
лимерной пленки или стеклянную банку с герметически
закрывающейся крышкой, добавляю т 5 мл смеси хлоро­
форма с толуолом в соотношении 1 :1 . Консервант вно­
сят на дно, в середину и сверху пробы. П акет с пробой
завязывают, предварительно вытеснив воздух, банки
должны быть полностью заполнены пробой корма.
Проба сенаж а должна поступить на исследование в
течение 24 ч с момента отбора. Д о анализа пробы сило­
са и сенажа хранят в холодильнике. Допускается хра­
нить такие пробы в замороженном виде в течение 24 ч
с момента их поступления в лабораторию.
Взятие средней пробы зеленого корма. При отборе
средней пробы зеленого корма для химического и бо­
танического анализа учитывают характер травостоя и
рельеф всего изучаемого участка. Если травостой неод­
нородный, рекомендуется разделить все угодья на од­
нотипные участки. Пробы зеленого корма отбирают в
период скармливания его животным или при заготовке
сена, травяной резки, сенажа и т. д. Пробы травы бео
рут в сухую погоду после росы и зах6дай солнца. На
каждом однотипном угодье выделяют участок площадью
1 га, на котором наме,чают 10 пробных делянок разме­
ром 1 м2. С каждой пробной делянки траву скашивают
на высоте 3 5 см туг земли. Разовые пробы из проко­
сов каждой делянки берут рукой из 10 мест.
Общую пробу составляют из травы, .взятой со всех
пробных делянок. Если ее количество превышает 3—
4 кг, то из всего исходного образца после его тщатель­
ного перемешивания берут среднюю пробу так же, как
и среднюю пробу сена. Среднюю пробу зеленого корма
тут ж е взвешивают и помещают в полиэтиленовые па­
кеты. Весить средняя проба должна в пределах 1,5—
2 кг. Поступившую в лабораторию пробу зеленого кор­
ма быстро измельчают и по принципу квадрата отби­
рают для высушивания образец массой 0,5—0,8 кг.
Чтобы остановить ферме'нтативные процессы в клетках растений, не позднее чем через 4 ч после взятия
средней пробы траву помещают в сушильный шкаф и
выдерживают в нем при температуре 80° в течение 30—
40 мин. Затем сушат при температуре 60—65°, пока разница между смежными взвешиваниями будет не более
0,5 г.
•
Л Г
Взятие средней пробы корнеклубнеплодов. При взя­
тии средней пробы свеклы) моркови, брюквы руковод­
ствуются требованиями ГОСТ 1722—67, ГОСТ 1721—67.
Химический состав и*качество корнеплодов зависит от
величины корней. Поэтому в среднюю пробу для ана­
лиза пропорционально отбирают от партии крупные,
средние и мелкие корни, причем вначале от каждой пар­
тии корнеплодов берут исходный образец. Если в пар­
тии до 100 мест (контейнеры, ящики и т. д.), то пробы
берут из трех упакованных мест. Если в партии более
100 мест, то в расчете на каждые 50 дополнительных
мест пробу берут еще из одного упакованного места.
При хранении свеклы насыпью в качестве образда
следует брать из различных слоев (верхнего, среднего,
нижнего) примерно следующее количество корней: из
партии корнеплодов до 200 к г — 10 кг, из партии от 201
до 500 кг — 20 кг, из партии от 501 до 1000 кг — 30 кг
и из партии от 1001 до 5000 кг — 60 кг. Масса средней,
рробы должна составлять не менее 10% массы исход­
ного о б р а з ц у г
;
Г*
В совхозах и колхозах среднюю пробу корнеплодов
11
берут чаще всего из вскрытых буртов. Д л я определения
химического состава корней неодинаковой величины из
разных мест исследуемой партии берут подряд пример­
но 100— 150 корней. Их очищают от земли и сортируют
на крупные, средние и мелкие. Корни каждой группы
взвешивают и определяют их соотношение в образце.
■
Например, если крупных корней в образце было 35 кг, ср ед­
них 30 кг и мелких 15 кг, то соотношение их в образце составит
43,8; 37,5 и 18,7%.
ЩН
Исходный образец необходимо уменьшить в 10—
12 раз, но так чтобы соотношение крупных, средних и
мелких корней в средней пробе оставалось прежним.
В лабораторию необходимо отослать 6—8 кг корней.
При исходном ,образце массой 80 кг крупных корней в среднюю
пробу долж но войти 3,5 кг, средних — 3 кг и м елких— 1,5 кг.
Во избежание снижения влажности корнеплодов во
время их пересылки в лабораторию при упаковке в
ящик их обкладывают влажным мхом или опилками.
Средняя проба картофеля (ГОСТ 7194—69). При
взятии средней пробы картофеля число выемок з а ­
висит от общего его количества. При поступлении пар­
тии картофеля без тары (навалом) на любом виде
транспорта (автомашины,
повозки,
вагоны, барж и)
среднюю пробу отбирают от каждой транспортной еди- г
ницы.«Отдельные выемки берут.по всей высоте, ширине ’
и длине насыпи из разных мест и слоев (верхнего, сред­
него, нижнего) через равные промежутки. Количество
выемок указано в таблице 1.
Таблица
1
Количество выемок картофеля, доставленного
различным транспортом
С
Вид транспорта
Воз, автомашина, тракторная тележка (до 5 т)
Двухосный вагон, партия д о 20 т
Четырехосный вагон, партия от 20 д о 60 т
Баржа, партия от 60 др 150 т
Количество
выемок
(не менее)
5
10
16
24
П р и м е ч а н и е . При доставке на барж е партии картофеля свыше 150 т
в расчете на каждые следующие полные и неполные 60 т берут дополнительно
пять выемок.
ч-'- V• 3 { *
При хранении картофеля в таре выемки берут, как
указано в таблице 2,
>"••• •
•
*
12
М рдо
'
я * <.
Таблица
Количество выемок картофеля, хранящегося в таре
Количество
мест
в партии
Количество мест^лля выемок картофеля
"“V
(не менее)
Д о 20
3
От 20 д о 50
5
От 50 и выше На каждые следующие полные и непол­
ные 50 единиц выделяют одно место
2
Количество
выемок
от каждого
места
1
Выемки затаренного картофеля берут деревянным
совком или 'отсыпают из верхней, средней и нижней ча­
стей упаковок, выделенных для отбора проб. При хра­
нении картофеля навалом, а также в закромах, буртах,
траншеях отдельные выемки берут деревянными или ро­
ликовыми лопатами. В каждую выемку берут не менее
3 кг, а от партий картофеля массой 60 т и выше — не
менее 10 кг картофеля.
Отдельные выемки картофеля, взятые из разных
мест партии, смешивают и получают среднюю пробу.
Если последняя оказалась очень большой, то после
тщательного перемешивания картофеля для лаборатор­
ного анализа отбирают образец .массой обычно около
4—5 кЬ.
Взятие средних проб комбикормов. Руководствуются
при их взятии требованиями ГОСТ 13496.0—70.
Отбор выемок рассыпного комбикорма. В зависимо­
сти от места хранения комбикорма или вида транспорта
отбор средней пробы имеет некоторые особенности. При
хранении комбикорма на складах выемки (разовые про­
бы) берут вагонным или амбарным щупом, для чего
'Поверхность комбикорма делят на квадраты площадью
примерно по 4—5 м2. Выемки делают посередине каж ­
дого квадрата. При высоте насыпи 0,75 м комбикорм бе­
рут из верхнего и нижнего его слоев, а при высоте на­
сыпи свыше 0,75 м — из верхнего, среднего и нижнего
слоев.
Д ля выемки комбикорма из грузовых автомашин,
возоа и небольших насыпей в складах используют щуп
с укороченной ручкой, причем берут разовые пробы из
пяти различных мест (по схеме конверта), отступя на
0,5 м от края, со всей глубины насыпи.
13
Если комбикорм находится в закрытых мешках, то
разовые пробы берут мешочным щупом из верхней и
нижней частей. Щуп вводят желобком вниз, затем по­
ворачивают его на 180° и выводят наруж у (отверстие
в ткани мешка заделываю т при помощи щ упа). Выемки
корма берут из 5% всех мешков данной партии. Мешки,
из которых необходимо взять разовые пробы, должны
находиться не менее чем в трех местах.
При загрузке комбикорма в вагоны, пароходы, б ар ­
жи или выгрузке его оттуда выемки для средней пробы
берут из падающей с транспортных лент струи комби­
корма или в других местах его перепада, пересекая
струю комбикорма железным ковшом емкостью 0,5 кг
через каж дые 15 мин (не менее двух выемок за погруз­
ку^. При производстве комбикорма на заводах выемки
отбирают из-под смесителя после магнитной защиты,
пересекая струю комбикорма железным ковшом через
каж дые 2 ч.
Таким ж е способом отбирают среднюю пробу травя­
ной муки, отрубей, кормовой муки.
Отбор выемок гранулированного и брикетированного
комбикорма. При производстве гранулированных комби­
кормов или при их погрузке (выгрузке) разовые пробы
отбирают путем пересечения струи комбикорма ж е л е з­
ным ковшом емкостью 0,5 кг. При производстве брике­
тированного комбикорма в выемку включают отдельные
его брикеты при выходе их из мундштука пресса через
каждые 2 ч.
Если гранулированные или брикетированные комби­
корма затарены в мешки или кули, то выемки берут
из 5% мешков (кулей) данной партии, расположенных
не менее чем в трех местах. Мешки расшивают и разо­
вую пробу берут из верхней их части.
О бщ ая масса выемок исходного образца рассыпного,
гранулированного и брикетированного комбикорма, по­
мещенного в чистую тару, долж на составлять не менее
4 кг.
Среднюю пробу рассыпного и гранулированного ком­
бикорма из исходного образца выделяют путем кресто­
образного деления. Д л я этого исходный образец высы­
пают на ровную, поверхность (стол, деревянный щит)
и разравнивают в виде квадрата двумя деревянными
планкамй со скошенными ребрами, перемешивают З р а ­
за путем образования валика (см. взятие средней про­
14
бы зерна), снова разравнивают И планками делят по
диагонали на четыре треугольника. Комбикорм с двух
противоположных треугольников удаляют, а в двух
оставшихся объединяют вместе. Так продолжают до тех
пор, пока в двух треугольниках не останется примерно
2 кг, которые и будут представлять собой среднюю про­
бу. Среднюю пробу рассыпного и гранулированного ком*
оикорма вышеуказанным способом делят на две части,
каждую из которых помещают в чистую сухую банку.
Одну банку хранят в течение одного месяца на случай
арбитража, из другой берут навески комбикорма для
анализов.
*
'
Д ля составления средней пробы брикетировайного
комбикорма из исходного образца выделяют 6 брикетов,
а остальные измельчают и из полученной массы опи­
санным выше способом выделяют среднюю пробу. Один
или два брикета из 6 выделенных используют для оп­
ределения их плотности, а остальные помещают в чис­
тую тару и хранят в течение месяца на случай арби­
траж а. .
В среднюю пробу вкладывают этикетку с указа­
нием наименования комбикорма, его рецепта, массы
партии, а для затаренного комбикорма— количества
мест, даты и места отбора пробы, наименования пред­
приятия, изготовившего комбикорм, и номера тран­
спортного документа."
В лаборатории среднюю пробу регистрируют и ну­
меруют. Присвоенный данной пробе номер проставляют
во всех относящихся к ней документах.
Взятие средней пробы зерна (ГОСТ
10839*^-64).
При хранении зерна в складах насыпью (высота насы­
пи до 1,5 м) для его выемки используют вагонный щуп,
при большей высоте насыпи зерна — щуп с навинчиваю­
щимися штангами. Перед взятием выемок всю поверх­
ность зерна на складе разделяют на секции площадью
около 100 м2 каждая. Выемку зерна делают в пяти точ­
ках каждой секции (в середине и четырех точках по
углам), отстоящих примерно на 1 м от границы сле­
дующей секции. В каждой из пяти точек разовые про­
бы берут из верхнего (с 10— 15-сантиметровой глуби­
ны), среднего и нижнего, слоев. Общая масса зерна,
взятого из каждой секции, должна составлять 2 кг.
И з автомашин разовые пробы зерна берут щупбй в
четырех тдчка#' кузова (с поверхности и нижних елоев
15
или по всей глубине насыпи) на расстоянии 0,5 м от
бортов. О бщ ая масса выемок долж на быть не менее
1 кг.
.
-у."-.
Из вагонов, заполненных зерном до полной грузо­
подъемности, а такж е из складов и силосов элеваторов
разовые пробы зерна берут из его струи, падающей с
транспортерных лент. Используют для этой цели механи­
ческий пробоотборник или специальный ковш, вводи­
мые в струю зерна через равные промежутки времени.
Важно, чтобы общая масса таких выемок составляла
не менее 0,1 кг в расчете на 1 т перемещаемого зерна.
При неполной загрузке вагонов выемку зерна де­
лают щупом в каждом двухосном вагоне в пяти точках
поверхности насыпи (в четырех углах на расстоянии
50—75 см от стенок и в середине вагона), а в четырех­
о с н о м — в 11 точках поверхности насыпи (в 8 точках
по продольным сторонам на некотором расстоянии от
стен и в 3 точках в середине). В каждой из указанных
точек разовые пробы берут из трех слоев насыпи: из
верхнего — на глубине до 10 см, среднего — на глубине,
равной половине высоты насыпи зерна, и нижнего — у
пола вагона. О бщ ая масса выемок зерна из двухосного
вагона долж на быть около 2 кг, а из четырехосного —
около 4,5 кг.
У, г / й
Выемки зерна, затаренного в мешки, делаю т щупом
в трех местах (после их расш ития): вверху, в середине
и внизу. Из зашитых мешков разовые пробы зерна от­
бирают зерновым мешочным щупом, который вводят с
угла мешка снизу вверх желобком вниз по направлению
к середине. Затем щуп поворачивают на 180° и выни­
мают. Количество мешков, из которых делают выемки
зерна, зависит от величины его партии (табл. 3).
в9
Та бл иц а 3
Количество мешков, предназначенных для выемок зерна,
при разной величине партии
Количество мешков
в партии
Количество мешков, из которых берут
Д о 10 включительно
Свыше 10, до 100 вклю­
чительно
Свыше 100
Из каж дого второго мешка
И з 5 мешков *К5.% количества
мешков
в партии *
И з 10 мешков+ 5 % количества мешков
в партии
16
разовые пробы аераа
ц
Пробы зерна, взятые от каждой его партии, осмат­
ривают и сравнивают. Если зерно однородно, то из всех
выемок его ссыпают в чистую тару. Это и составит ис­
ходный образец (иногда его называют общей пробой).
Если зерно исходного образца весит не более 2 кг,оно
может являться средней пробой. При большей массе
исходного образца все зерно высыпают на стол с ровной
поверхностью, распределяют его в виде квадрата и
троекратно смешивают с помощью двух коротких дере­
вянных планок. После перемешивания исходный обра­
зец снова распределяют ровным слоем в виде квадрата
и при
пон помощи планки делят по диагонали на четыре
треугольника. Из двух противоположных треугольников
зерно отбрасывают, а из двух оставшихся вновь пере­
мешивают, делят на треугольники. Так делают до тех
пор, пока не останется около 2 кг зерна, которые и со­
ставят среднюю, пробу.
При поступлении из хозяйств на хлебоприемны е
пункты большого количества зерна его качество оцени­
вают по среднесуточным образцам. Последние состав­
ляют из исходных образцов, взятых из каждой автома­
шины. Д ля этого пользуются меркой объемом 200 см3,
причем^от образца партии доставленного на пункт зерна
массой до 1,5 т берут одну мерку, а от образца партии
зерна свыше 1,5 т до 3 т — две мерки. Д алее от каждой
1,5 т зерна сверх 3 т дополнительно отбирают по одной
мерке. Из среднесуточного образца выделяют среднюю
пробу зерна вышеописанным способом.
Взятие средней пробы кукурузы в початках. Выемки
кукурузы
початках из автомашин делают в двух точках по продольной осевой линии, отстоящих на 0,5—
0,7 м от переднего и заднего бортов кузова. I_Вначале
_______
в точках выемок удаляют верхние початки и с глубины
10 см берут в каждой точке по пять рядом лежащих по­
чатков. При погрузке початков в вагоны или выгрузке
их оттуда в каждом вагоне делают 20 выемок (по 5 по­
чатков). Такие разовые пробы .беру? через равные про­
межутки времени. Всего из каждого вагона отбирают
100 початков.
Д л я выемок початков из складов, навесов, сапеток,
бунтов всю поверхность насыпи кукурузы делят на сек­
ции площадью примерно 100 м2 каждая. Из каждой
секции ра^шЗфГё пробы початков, отбирают
ми рм V **»—м
стах: в склад&х и навесах — пО'“дйЬтегск
ЛегкЬжД
II
2. З а к а з 7446
) Л М»7
|
1
I
и бунтах — по центру. Берут в каж дой точке выемки
подряд 16— 17 леж ащ их вблизи початков с 10-сайтиметровой и метровой глубины. Всего в каждой секции
площадью 100 м2 отбирают 100 початков. Места выемок
кукурузных початков должны отстоять от стен в с к л а ­
дах и навесах на расстоянии 3 м, а в сапетках — на
75 см. Початки всех выемок объединяют и составляю^исходный образец, который одновременно является так ­
ж е средним образцом.
При приеме^ от колхозов и совхозов однородных по
качеству партий кукурузы в початках составляют сред­
несуточный образец. Д л я этого от каждой автомашины
отбирают по . писанным выше правилам по 10 початков,
которые помещают в плотно закрываю щ ую ся тару (де­
ревянные ящики, металлические бочки, крафт-мешки
и т. д.). Д ал ее по мере заполнения тары, в которой хра­
нится исходный образец, из нее отбирают каждый де­
сятый початок. Они и входят в состав среднесуточного
образца. И з тары, в которой хранится среднесуточный
образец, отбирают среднюю пробу, для чего последо­
вательно изымают по одному початку из определенного
, их количества. В результате долж на получиться сред­
няя проба из 10 початков. Д л я определения выхода из
■початков зерна кукурузы и его качества среднюю пробу
ошелушенного зерна смешивают и выделяют из нее с
помощью делителей или вручную определенные на­
вески.
Взятие средней пробы жмыхов и шротов, кормовых
дрожжей. Руководствуются в таких случаях требова­
ниями ГОСТ 13979.0—68 и ГОСТ 20083—74.
Жмыхи. При погрузке и выгрузке ж мыха из вагонов
выемки его делаю т автоматическим пробоотборником,
при этом в расчете с 1 т продукции берут 250 г, по не
менее 2,5 кг ж м ы ха от партии. Д л я отбора в так и х сл у чаях разовых проб через равные промежутки времени
ковшом не менее 10 раз пересекают поток ж м ы ха в
местах его свободного падения. Если жмыхи затарены
в мешки, то для выемок используют конусный щуп, при­
чем из каждого пятого мешка берут 0,5 кг продукта (из
первого мешка — сверху, из второго — с середины, из
третьего — снизу).
Д л я составления исходного образца ж мы ха, находя­
щегося в хранилищах в виде насыпи, всю ее1 поверх­
ность условно делят на секции пЛощадыЬ 1 м2. Затем в
18
шахматном порядке с каждой такой секции берут р а ­
зовые пробы из верхнего, среднего и нижних слоев.
Важно, чтобы общая масса выемок жмыха при ручном
отборе проб составляли 1 кг с каждой тонны продукта
После осмотра все выемки _жмыха тщательно пере­
мешивают и получают исходный образец. Д алее жмых
разравнивают в виде квадрата высотой 10 см и описан­
ным выше способом делят до тех пор, пока не останет­
ся его 2,5 кг. Так получают среднюю пробу, которую
делят на две части, которые помещают в банки с плот­
ными крышками.
Шроты. Среднюю пробу шротов отбирают так же,
как и среднюю пробу жмыхов, за исключением того, что
используют для выемок каждый десятый мешок про­
дукта. При хранении ж е шротов насыпью разовые про­
бы берут конусным щупом через каждые 2 м поверхно­
сти из верхних, нижних и средних слоев. Общая мас­
са выемок должна составлять не менее 2,5 кг.
Кормовые дрожжи. Д л я проверки качества порош­
кообразных кормовых дрожжей от партии, насчитываю­
щей до 100 упакованных мест, разовые пробы берут из
3% упаковок, расположенных в разных местах. Если
партия' насчитывает более 100 упакованных мест, то
пробы берут из 1% общего количества упаковок, но не
менее 3 единиц упаковок.
Разовые пробы отбирают деревянным или металли­
ческим щупом, погружаемым на всю глубину тары.
Объем разовой пробы должен составлять не менее 350 г.
Объединив вместе разовые пробы, составляют общую
пробу (исходный образец). Последнюю тщательно пе­
ремешивают и доводят описанным ранее способом до
2 кг. Оставшуюся часть делят пополам и помещают в
две чистые сухие банки с притертыми крышками. Н а ­
вески кормовых дрожжей, взятые из одной банки, ис­
пользуют для анализов. Д рож ж и другой банки хранят
в течение 2 месяцев на случай повторных анализов.
От партии гранулированных дрожжей исходный об­
разец массой не менее 4 кг отбирают от каждой еди­
ницы упаковки, каждого транспортного средства или
каждой насыпи. Разовые пробы берут со всей глубины
насыпи из пяти разных ее мест п о схе«ле конверта на
расстоянии 0,5 м от краев.
Перед анализом дрожжи в гранулах измельчают 8
ступке, затем на лабораторной мельнице до пороицсо2*
19
образного состояния и просеивают через сито с диамет­
ром ячеек 0,25 мм.
-1
Взятие средней пробы кормов животного происхож­
дения, подкормок и жидких кормов. Согласно требова­
ниям ГОСТ 17681—72, общую пробу муки животного
происхождения при бестарном ее хранении берут С:
транспортера (нории, шнека) через равные промежутки
времени, причем в расчете с 1 т продукта берут 250 г.
но « е менее 1,5 кг муки от партии. При хранении муки в
таре общую пробу отбирают щупом по диагонали от
10% общего количества упаковок, расположенных в
трех местах. Перед отбором пробы корм осматривают,
проверяют состояние тары и выделяют из партии 5%
всех мест. И з них и берут разовые пробы. Если корм
неоднороден по качеству, то рекомендуется отобрать из
партии для вскрытия большее число мест. М асса общей
пробы долж на быть не менее 1,5 к п.
Д л я зоотехнического анализа достаточно направить
100— 150 г муки, которую отбирают из общей пробы
общепринятым способом. Корм измельчают, просеивают
через сито с диаметром отверстий 0,5 мм и помещают в
ба«ку с притертой крышкой.
Кормовая мука, рыбий жир и жир морского зверя
(ГОСТ 7631—55). Разовы е пробы рыбьего ж ира и ж и ра
морского зверя берут после перемешивания сифоном или
стеклянной трубкой. М асса разовых проб долж на быть
равна 1 кг.
. '
Если пробы отбирают из железнодорожной цистер­
ны, то на трубе насоса устанавливают пробоотборочный
кран (диаметр 12,5 мм). С его помощью часть струи
ж ира отводят в сухую приемную емкость в течение все­
го времени разгрузки цистерны. Общую пробу затем
перемешивают й отливают из нее около 250 г ж и р а в
Чистую банку с притертой пробкой.
Молоко. Перед взятием пробы молоко тщательно
перемешивают. Пробы отбирают металлической труб­
кой диаметром 9 мм, которую погружают вертикально
до дна сосуда с молоком. З акр ы в верхнее отверстие
трубки пальцем, трубку вынимают из сосуда и молоко
выливают в чистую сухую склянку, которую плотно
закры ваю т пробкой. Д л я анализа необходима средняя
проба молока массой 250—500 мл. Содержание сухого
вещества, белка, ж и р а ,' золы, кальция, фосфора, ви та­
мина А и каротина определяют в двухсуточной пробе
20
. Я
ЙШй
молока, а его кислотность, пригодность для> производ­
ства сыра и содержание витамина С определяют в про*»
бе молока, взятой от одного утреннего удоя. Двухсу­
точные пробы молода рекомендуется консервировать
40 % - н ы м раствором формалин* из расчета 1—2 капли
на 100 мл молока. Если анализ на содержание золы и
минеральных веществ не проводят, то молоко можно
консервировать 10%-ным двухромовокислым калием из
расчета 1 мл на 100 мл молока.
Д ля определения сахара, альбумина, казеина, гло­
булина, а также плотности, количества и величины ж и­
ровых шариков используют односуточную пробу незаконсервированного хранящегося на холоде молока.
Кратность исследований зависит от поставленных
• при этом задач.
Например, в опытах по изучению эффективности скармливания
животным определенных кормов молоко исследуют не менее двух
раз в предварительный и заключительный периоды, а в опытный
период не менее трех-четырех раз. Содержание жира в молоке оп­
ределяют. один раз в 10 дней из двухсуточных проб молока.
и
Пробы молока берут от каждой коровы, а также от
группы коров и от животных всего стада.
Средняя проба жидких и водянистых остатков тех­
нических производств (барда, пивная дробина, мезга,
жом свежий, патока кормовая). Д ля проверки качества
таких кормов от партии их,пробу берут черпаком или
пробоотборником водянистых кормов ПВК-1 конструк­
ции НПО «Агроприбор» из 10 мест с различной глуби­
ны (после стекания основной массы воды — для пивной
дробины, барды). Разовые пробы затем смешивают и
из исходного образца массой не менее 10 кг отбирают
среднюю пробу. Величина последней должна обеспечить
получение для анализа около 150 г сухого вещества.
Если быстро провести анализ невозможно, то корм по­
мещают в стеклянную посуду с плотной пробкой и кон­
сервируют его смесью хлороформа и толуола, смесью
толуола и ксилола Ц : 1 ) или одним формалином (5 мл
на 1 кг корма), тщательно перемешивая консервант с
кормом. При определении сахара консервировать фор­
малином нельзя.
Взятие средней пробы подкормок. Д л я проверки ка­
чества кормового моноКальцийфосфата разовые пробы
отбирают с транспортерной ленты через равные проме­
жутки времени из расчета 25 проб от каждой партии.
у 21
ь
(партией считают не более 65 т продукта). Если мине­
ральная подкормка упакована в мешки, то разовые
пробы берут пробоотборником из 25 мешков каждой
партии. Разовы е пробы из мешков отбирают щупрм*
погружая его на 3Д глубины. М асса разовой пробы*
взятой с транспортерной ленты и мешков, долж на со­
ставлять 200 г. Разовы е пробы объединяют, перемеши1вают и для получения средней пробы общепринятым
методом доводят до массы не менее 0,5 кг.
Разовые пробы обесфторенного кормового фосфата
берут из каждого двадцатого, а разовые пробы других
кормовых фосфатов — из каждого пятидесятого мешка.
Разовы е пробы синтетической мочевины берут не
менее чем от 1 % мешков всей партии, но не менее чем
из 10 мешков.
• §р§
■......' ;,1«.
Среднюю пробу помещают в полиэтиленовый мешок
или в чистую сухую банку. Н а банку наклеивают эти­
кетку с указанием наименования продукта, сорта и мар­
ки, номера партии, обозначения стандарта или техни­
ческих условий, наименования предприятия-изготовите­
ля, даты отбора проб и фамилии лица, взявшего пробу.
ПОДГОТОВКА КОРМА К АНАЛИЗУ
И О П РЕДЕЛ ЕН И Е ПЕРВОНАЧАЛЬНОЙ ВОДЫ
Содержание воды — важный показатель питатель^
ности кормов и степени зрелости растений. Вода в кор?
мая находится в свободной и связанной формах. Сво­
бодная вода является растворителем сахаров, амино?
кислот, органических кислот и других веществ расти*
тельных клеток. Она более подвижна, чем связанная
вода. Последняя не растворяет вещества, растворимые
в свободной воде, входит в состав мицелия различных
гидрофильных коллоидов. Вся вода (связанная и сво­
бодная) может быть удалена высушиванием кормов
при 100— 105°С.
Определение первоначальной
влажности основано
на испарении воды в процессе высушивания корма в
сушильных ш кафах или термостатах при определенной
температуре.
Перед
определением
первоначальной
влажности корм подготавливаю?.
Приборы и посуда. Фарфоровые чашки диаметром
20—30 см или эмалированные кюветы, технические ве22
сы с разновесами, сушильным шкаф или термостат, нож
для измельчения сена, силоса и других кормов.
Подготовка корма к анализу. И з проб кормов, по­
ступивших в лабораторию для анализа, следует немед­
ленно взять лабораторную пробу и определить в ней
первоначальную влагу. Если в лабораторию поступило
1,5—2 кг сена, то его измельчают (длина частиц долж ­
на быть 1—2 см). Силос также предварительно измель­
чают и берут для анализа 800— 1000 г. Из поступивших
в лабораторию средних проб зерновых, шротов, отходов
мукомольной промышленности и других концентриро­
ванных кормов отбирают образец массой 150—200 г.
Чтобы взять образец для высушивания, средние про­
бы кормов (измельченное сено, силос, а также зерно,
мучнистые корма и др.) перемешивают и делят обще­
принятым способом до тех пор, пока масса корма не
будет равна 150—200 г.
Перед определением
первоначальной
влажности
жмыхи необходимо раздробить. Корнеклубнеплоды от­
мывают водой от земли и вытирают аккуратно сухим
полотенцем. От каждого корня средней пробы отрезают
вдоль половину, V* или Ув часть (это зависит от вели­
чины средней пробы, которую берут с таким расчетом,
чтобы масса образца для анализа составила 1000—
1200 г).
Ход анализа. Чашки или кюветы нумеруют, высуши­
вают в течение 30 мин при 90— 100°С, охлаждают и
взвешивают; массу записывают. В чашку помещают
указанное количество анализируемого корма и вновь
взвешивают на тех ж е весах. Затем чашки с кормами
помещают в сушильный шкаф и выдерживают в нем
при температуре 60—65°С до тех пор, пока разница
между двумя последующими взвешиваниями не будет
превышать 0,5 г. Результаты взвешиваний (г) и анализа
записывают по приведенной ниже форме:
Масса сосуда с корм ом ________________________________
Масса пустого сосуда ________________________________________________
Навеска корма
-
Масса сосуда с кормом после высушивания
при 60—65°С:
1-е взвешивание
2-е взвешивание - ■ -
1■ '
1 ---- ------- --------- 1-------------------------
__________ 4
23
3-е взвешиванйё*
____________ __________ '
Масса сосуда с навеской корма в воздуш но-сухом состоянии
Масса испарившейся в о д ы ____________________________________■
Первоначальная влажность (% ) _ _ _ _ _
При определении первоначальной влаги в корне­
клубнеплодах отобранные экземпляры
последних ре­
жут поперек на тонкие пластинки, которые нанизывают
на предварительно взвешенные стеклянные палочки или
ный ш каф и выдерживают там при температуре 90°С
30 мин —^ 1 ч, чтобы прекратить ферментативные про-'
цессы. Д ал ее высушивание продолжают при температу­
ре 60—65°С, после чего поступают так, как и при опре­
делении влаги в других кормах.
Не рекомендуется одновременно ставить в сушиль­
ный ш каф корма, резко отличающиеся по содержанию
влаги (например, сочные, сено, концентраты).
После высушивания корм оставляют на 4—б ч в
чашке, прикрыв ее листом бумаги, д л я приведения его
в воздушно-сухое состояние и взвешивают. Т ак посту­
пают для того, чтобы при хранении образца влажность
корма в дальнейшем не изменялась и, следовательно,
не было больших погрешностей при взятии навесок для
анализа. Д л я определения первоначальной влажности
разность между массой чашки с веществом в первона­
чальном состоянии и массой чашки с веществом в воз­
душно-сухом состоянии умножаю т на 100 и делят на
первоначальную массу вещества.
Измельчение кормов для последующего анализа.
•Воздушно-сухой образец корма мелко перемалывают на
специальных лабораторных мельницах (м о ж н а на ко­
фейной мельнице или путем растирания в ступке), з а ­
тем просеивают через миллиметровое сито (за неиме­
нием набора лабораторных сит можно использовать
мелкое хозяйственное решето). Частицы, оставшиеся
на оите, снова разм алы ваю т и просеивают. Т ак посту­
пают до тех пор, пока остаток не будет превышать 2%
массы размалываемого образца. После этого остаток
примешивают ко всему образцу.
Измельченный образец хранят в банке с плотно за24
- .. Й Й •
Ш
К Й Я Ш
1 5
крывающейся пробкой, заполненной кормом .не более
чем на половину ее объема (чтобы при взятии навесок
можно было хорошо перемешивать образец).
•О П Р Е Д Е Л Е Н И Е ГИГРОСКОПИЧЕСКОЙ ВОДЫ
Приведенный в воздушно-сухое состояние корм со­
держит некоторое количество влаги, называемой гигро­
скопической. Определяют ее, высушивая навеску корма
в термостате при температуре 100— 105°С до постоянной
массы. В процессе высушивания из корма удаляются
гигроскопическая влага, летучие вещества эфирных ма­
сел, углекислоты, летучие кислоты, аммиак и некоторые
другие вещества и в результате окислительных процесс
сов поглощается кислород. Потеря летучих веществ, по­
глощение кислорода и другие процессы могут служить
причиной неточных результатов. Более точные резуль­
таты получают, высушивая образец исследуемого кор­
ма в струе индифферентного газа или в вакуум-аппа­
рате.
Приборы и посуда. Аналитические весы с разнове­
сами, термостат или сушильный шкаф, пронумерован­
ные бюксы (сушильные стаканчики с притертыми крыш-^
ками), ложка для взятия кормов, эксикатор. *
Ход определения. Бюкс или сушильный стаканчик
высушивают в термостате в течение 30—40 мин при
температуре 100— 105°С. При этом крышку кладут в
стаканчик на' ребро. Затем бюкс закрывают и ставят
для охлаждения в эксикатор. После охлаждения бюкс
взвешивают на аналитических весах, насыпают в него
2— 3 г воздушно-сухого корма, закрывают бюкс крыш­
кой и взвешивают. По разнице между взвешиваниями
находят массу корма, взятую для анализа. Затем бюкс
с кормом (крышку положить на ребро) помещают в
термостат и выдерживают там 2,5—3 ч при температуре
100— 105°С. После этого бюкс закрывают крышкой, вы­
нимают из термостата, ставят в эксикатор, охлаждают,
взвешивают и снова помещают на 1 ч в термостат. Пос­
ле охлаждения бюкс с кормом снова взвешивают. Так
поступают до тех пор, пока разность двух следующих
друг за другом высушиваний и взвешиваний будет не
более 1 мг.
Иногда при последующих взвешиваниях наблюдает­
ся увеличение массы бюкса -с кормом. В этом случае
высушивание прекращают, а для расчетов берут наи­
меньшую массу. Количество испарившейся воды нахо­
дят по разнице между массой бюкса с кормом до вы­
сушивания и наименьшей массой бюкса с кормом после
высушивания. Гигроскопическую влагу определяют по
формуле:
'
|р
м - 100
мх
где м
масса воды, испарившеися
-из навески корЩШШШШШШШ
ма (г); М\ — масса корма Вв 1воздушно-сухом состояНИИ (г); 100 — показатель для перевода гигроскопиче­
ской влаги в проценты. Результаты анализа записывают
в нижеприведенную форму.
Определение
Показатель
персое
второе
Масса стаканчика с навеской корма, г
Масса пустого стаканчика, г
Навеска корма, г
Масса
стаканчика с веществом после высуши­
вания образца при 100— 105°С, г:
1-е взвешивание
2-е взвешивание
о-е взвешивание
4-е взвешивание
Масса испарившейся воды, г
Содержание гигроскопической воды в воздуш но­
сухом веществе, %
Содержание гигроскопической
воды в
корме
при полной влажности, %
Общее содерж ание воды в исследуемом корме, %
Содержание в корма сухого вещества, %
ЭКСП РЕСС-М ЕТО Д О П Р Е Д Е Л Е Н И Я ОБЩ ЕГО
КОЛИЧЕСТВА
ВО
ДЫ
В
КОРМАХ
-ф
Общее количество воды в кормах можно определить
ускоренным методом, что имеет большое значение в ус­
ловиях производства. Д л я этого навеску измельченного
корма, отобранного из разных мест средней пробы и по­
мещенного в бюкс или металлическую чашечку, выдер­
ж иваю т в сушильном ш кафу при 130°С.
26
Ход определения. В предварительно высушенные до
постоянной массы стеклянные или алюминиевые бюксы
(диаметр 50 мм, высота 20 мм) берут две навески кор­
ма около 5 г каж дая (взвешивают с точностью до 0,01 г),
при этом корм рассыпают тонким слоем по дну бюксов.
2. Открытые бюксы вместе с крышками помещают
в предварительно подогретый до температуры 130±2°С
электросушильный шкаф и выдерживают в нем в те­
чение 40 мин. Корма с повышенным содержанием влаги
необходимо выдерживать в шкафу дольше.
3. По истечении 40 мин бюксы из сушильного ш ка­
фа вынимают тигельными щипцами, быстро закрывают
крышками и ставят на 20—30 мин в эксикатор для ох­
лаждения до комнатной температуры.
4. После высушивания и охлаждения в эксикаторе
бюксы с кормом снова взвешивают и по разности мас­
сы до и после высушивания определяют содержание
влаги. Д л я расчетов используют формулу:
м —м±
Х = ------- — 1100,
,^
.
а
где X — общее содержание воды в корме (% ); м — мас­
са корма до высушивания (г); М\ — масса корма после
высушивания (г); а — навеска корма (г).
ЭКСПРЕСС-МЕТОД О П РЕДЕЛ ЕН И Я ОБЩЕГО СОДЕРЖ АНИЯ
ВЛАГИ В КОРМАХ С ПОМОЩЬЮ ВЛАГОМЕРА
Д ля быстрого определения влажности корма исполь­
зуют влагомер ВЧМ. Прибор состоит из блока высуши­
вания, имеющего вид двух металлических плит, и блока
управления для автоматического регулирования темпе­
ратуры плит. Рабочая температура прибора составляет
160°С. Действие прибора ВЧМ заключается в быстром
обезвоживании образцов корма между двумя металли­
ческими плитами, нагретыми до 160°С.
Ход определения. 1. Обезвоживают корма в пакетах
из фильтровальной бумаги. Сначала пакеты заклады ва­
ют между электронагревательными плитами и выдер­
живают при температуре 160°±2°С в течение 3 мин.
Затем их помещают на 3 мин в эксикатор для охлаж­
дения, после чего взвешивают.
2.
В подготовленные таким образом пакеты берут
две навески корма по 5 г каж дая (взвешивают с иточ27
ностью до 0,01 г). Д л я полного обезвоживания корм в
пакете распределяют тонким слоем и помещают на
5 мин в предварительно нагретый до 160±2°С прибор.
3.
Затем пакеты вынимают из прибора, охлаж даю т
в эксикаторе и взвешивают на технических весах (1или
II класса, типа Т-1, Т-2). Д л я определения общего со­
держания воды в корме используют формулу:
(М\—Мг) • 100
м<—м
где X — общее количество воды ( % ) ; м — масса пусто­
го фильтра (г); м \ — масса фильтра с навеской корма
до высушивания ( г ) ; Жг — масса фильтра с навеской
кор.ма после висушивания (г).
Допускаемые расхождения при смежных определе­
ниях не должны превыш ать ± 0 ,2 % .
*
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е СОДЕРЖ АН ИЯ
АЗОТИСТЫХ ВЕЩЕСТВ
Оценка корма по содержанию протеина применяется
при кормлении всех животных. Потребность жвачных
в протеине может быть частично удовлетворена моче­
виной, бикарбонатом и сульфатом аммония. При б а л а н ­
сировании ‘рационов для свиней и птицы учитывают
содержание незаменимых аминокислот, которыми я в л я ­
ются: лизин, метионин, триптофан, валин, гистидин, фе­
нилаланин, лейцин, изолейцин, треонин, аргинин, глицин.
Все они входят в группу амидов. Амиды представ­
ляют собой органические азотистые соединения небел­
кового характера, включающие, кроме свободных ам и­
нокислот, их амиды, азотсодержащ ие глюкозиды, орга­
нические основания и аммонийные соединений. Они
хорошо используются в организме животного. Поэтому
в настоящее время при нормировании кормления учи­
тывают не белок, а протеин,
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е ОБЩ ЕГО АЗОТА И СЫРОГО
М ЕТОДОМ К Ь Е Л Ь Д А Л Я
ПРОТЕИНА
яр
Принцип метода. Ж и ры и углеводы корма при их
нагревании с концентрированной серной кислотой р а з­
рушаются до углекислого газа «и воды, а азотсодерж а­
щие вещества распадаю тся до ам м иака ( ^ Н ) з , которой
28
соединяется с серной кислотой и образует нелетучую
соль сернокислый аммоний.
Реакция протекает по следующему уравнению:
2Ы Н з+Н 25 0 4— ►(ЫН4) 25 0 4 (сернокислый аммоний).
В процессе перегонки в избыточно щелочной среде
выделяется ам м и а к :.
( Ш 4) 25 0 4+ 2Ы а0Н — ►№ 25 0 4+ 2Ы Н 40 Н
*
2МН4ОН — ►2 Ш 3 + Н20
Выделяющийся в ходе реакции аммиак поглощается
децинормальным раствором серной (или борной) кис­
лоты. Избыток серной кислоты титруют децинормальной
щелочью (К аО Н ). По количеству связанной серной
кислоты определяют количество азота, содержавшегося
в корме. При этом известно, что 1 мл децинормального
раствора серной кислоты (Н25 0 4) соответствует 0,0014 г
азота.
’
Реактивы и оборудование. Концентрированная сер­
ная кислота (удельная масса 1,84; ГОСТ 4204—77" х. ч.);
децинормальный ( 0 , 1 н.) раствор серной кислоты; бор­
ная кислота — Н 3 ВО 3 (ГОСТ 9656—61 х. ч.), из кото­
рой готовят 2 %-ный раствор; децинормальный раствор
едкого натра (ЫаОН ч. д. а.), 33%-ный раствор едкого
натра; сернокислая медь — С и 5 0 4-5Н20 (Г О С Т 4165—66
х. ч); сернокислый калий — К25 0 4 (ГОСТ 4145—65
х. ч.); селен элементарный (МРТУ 6—09—638—63); се­
леновый катализатор (растирают и смешивают 1 0 0 г
сернокислого калия, 1 0 г сернокислой меди и 2 г се­
лена. При отсутствии селена применяют смеси сернокис­
лой меди и сернокислого калия); индикаторы (Индика­
тор Таширо, конго рот, метилоранж. Д ля приготовления
индикатора Таширо 0,02 г метилового красного раство­
ряют в 60 мл этилового спирта, затем добавляют 40 мл
воды. После этого 0,1 г метиленовой синьки растворяют
в 100 мл воды. Перед работой смешивают 25 мл мети­
лового красного и 3 мл метиленовой синьки); дистил­
лированная вода; лакмусовая бумага (красная); пемза
порошкообразная или гранулированная; весы аналити­
ческие; цилиндрик на 1 0 мл для взятия навески корма;
колбы Кьельдаля (для сжигания — емкостью 200—
250 мл, для отгонки — емкостью 500—750 мл); штатив
для колб, используемый при сжигании корма; аппарат
для отгонки аммиака (отгонный аппарат Кьельдаля");
29
мерные цилиндры емкостью по 25—50 мл; установка
для титрованных растворов, колбы конические или мер­
ные на 250—500 мл; капельница для индикатора; каплеуловители; промывалка.
Ход определения. 1. В цилиндрик помещают 0,5—
1 г исследуемого корма (мяса 0,3 г, мочи и молока по
2—3 г), точно взвешивают его на аналитических весах
и массу записывают.
'
.^ ^^
2. В колбу Кьельдаля из цилиндрика осторожно пе­
реносят навеску воздушно-сухого корма, опустив ци­
линдрик глубоко в горло колбы.
3. Цилиндрик после переноса из него корма взвеши­
вают и по разности массы цилиндрика с кормом и без
него определяют навеску.
4. В колбу Кьельдаля осторожно приливают 10—
15 мл (в зависимости от испытуемого образца) концентрированнои серной кислоты •и содержимое аккуратно
перемешивают. При этом происходит обугливание вещества.
5. Вносят в колбу катализаторы: 0,5— 1 г сернокислой меди, 3—5 г сернокислого калия или 0,3 0,5 г селенового катализатора.
*6. Колбу с навеской корма в наклонном положении
ставят для сжигания в специальном штативе в вытяжной ш каф. Сжигание Я оводят на слабом огне во избеж ание потери азота (рис. 1).
7. Содержимое колбы доводят до кипения, за к р ы в а ­
ют специальными воздушным холодильником или стеклянной воронкой и продолжают нагревание, Происхо[ит минерализация органических веществ корма.
В период сжигания со­
держимое колбы необходи-*
мо периодически перемеши­
вать, чтобы на ее стенках не
осталось несгоревших час­
тиц корма.
При появлении на гор­
лышке колбы бурых капель
или темных частиц ее следу­
ет охладить, частицы смыть
в колбу водой и продолж ать
сжигание.
Рис. 1. Правильное положение
Ж идкость в колбе вн ача­
при сжигании навесок корма
ле имеет бурый или почти
в колбах Кьельдаля.
30
4
черный цвет, но по мере минерализации органических
вёщбств раствора в колбе начинает выделяться серни­
стый ангидрид (5 Н 3) и содержимое ее светлеет. По цве­
ту жидкости определяют окончание минерализации ор­
ганических веществ. Раствор в колбе должен быть про­
зрачным, бесцветным или слегка желтоватым.
8. После осветления жидкости колбу снимают со
штатива, остужают и осторожно небольшими порциями
(20—25 мл) туда приливают 100— 150 мл дистиллиро­
ванной воды, омывая ею стенки колбы. Жидкость при­
обретает зеленовато-голубоватый цвет (медный купо­
рос поглощает воду, в результате чего восстанавливает­
ся голубой цвет).
9. Раствор затем без потерь переносят в другую кол­
бу Кьельдаля емкостью 500—600 мл. Колбу несколько
раз омывают водой, сливая ее в большую колбу Кьель­
даля.;
10. Колбу с раствором ставят на колбонагреватель
отгонного аппарата Кьельдаля, предварительно подоб­
рав к колбе хорошую пробку (рис. 2).
Отгон аммиака в серную кислоту. 1. В приемную ко­
ническую колбу вливают из бюретки 30—50 м л'децинормального раствора серной кислоты и 3—5 капель ин­
дикатора конго рот.
2. Приемную колбу подставляют под стеклянну?о
трубку, соедйненную с холодильником аппарата Кьель­
даля, погружая конец’трубки в раствор.
I 3. В цилиндр осторожно отмеривают 50—60 мл
33%-ного раствора едкого натра
и осторожно по стенкам перели­
вают в отгонную колбу. Количе­
ство щелочи определяют в к а ж ­
дом случае: ее должно быть при­
мерно в 4 раза больше, чем взято
кислоты для сжигания корма.
Для равномерного кипения в кол­
бу добавляют немного пемзы.
4. Колбу быстро закрывают
пробкой с каялеуловителем и со­
держимое осторожно размешива­
ют.
5. Включают
колбонагрева­
Рис. 2. Аппарат для от­
тель (можно использовать газо­ гонки азота по методу
вую горелку) и начинают отгон
Кьельдаля. и •
31
аммиака. Выделяющийся при этом аммиак поглощается
децинормальным раствором серной -кислоты.
6. Конец отгона аммиака определяют с помощью
красной лакмусовой бумажки, которую подставляют
под стекающую каплю отгона. Если лакмус не синеет,
отгон аммиака окончен. При хорошем кипении отгон
длится примерно 30—40 мин.
7. После отгона аммиака отгонную трубку холодиль­
ника тщательно обмывают дистиллированной водой, ко­
торую сливают в приемную колбу.
8. Содержимое приемной колбы оттитровывают деци­
нормальным раствором едкого натра до красного о кр а­
шивания.
*
9. Полученные данные записывают в таблицу опре­
деления азота.
*
10. Устанавливают количество свободной серной кис­
лоты, не связанной с аммиаком, после чего по разности
серной кислоты, налитой в приемную колбу (50 м л), и
количеству свободной кислоты (например, 26 мл) опре­
деляют, сколько кислоты связалось с аммиаком
(50—26 = 24 мл). Результат умножают на коэффициент
0,0014, так как известно, что 1 мл децинормального рас­
твора серной кислоты связывает 0,0014 г азота. В итоге
получают количество азота в навеске корма (в грам ­
мах).
;
11. Содержание азота (в процентах) определяют по
формуле:
И ЁЙВ
а к - 100
б
где X — содержание азота в корме ( % ) ; а — объем сер­
ной кислоты, связанной с аммиаком; к — коэффициент,
0.0014, показывающий, что 1 мл децинормального рас­
твора серной кислоты связывает 0,0014 г азота; б — на­
веска корма (г).
12. Д л я вычисления содержания в корме сырого про­
теина показатель содержания азота умножают на 6,25
или на соответствующий исследуемому корму другой
коэффициент*.
*
*
Коэффициент 6,25 (вычислен исходя из содержания в сыро
протеине 16% азота) пригоден для зерна кукурузы, бобовых, мяса,
яиц; для пшеницы, ржи, ячменя установлен коэффициент 6,83; для
конопли, хлопчатника, подсолнечника, льна, сон, жмыхов — 5,3; для
молока — 6,38.
32
Отгон аммиака в борную кислоту. Вместо децинормального (0,1 н.) раствора серной кислоты можно
пользоваться 2%-ным раствором борной кислоты.
1. В приемник (в-виде конической колбы) вливают
из бюретки 20—30 мл раствора борной кислоты и 6—
8 капель индикатора Таширо.
2. Коническую колбу с борной кислотой ставят в ап­
парат Кьельдаля, опустив стеклянную трубку холодиль­
ника в борную кислоту.
3. В отгонную колбу на кончике ложки добавляют
пемзу (кусочки фарфора или фарфоровые трубочки),
что необходимо для спокойного равномерного кипения
содержимого.
4. В цилиндр (осторожно) отмеривают 50—60 мл
33%-ного раствора едкого натра.
5. Щелочь из цилиндра медленно переносят в колбу
Кьельдаля.
6. Колбу быстро закрывают пробкой с каплеуловителем.
7. Содержимое колбы хорошо размешивают. При
этом начинает выделяться аммиак, который попадает в
приемную колбу с борной кислотой.
8. Включают нагревательный прибор и отгоняют с
водяным паром аммиак, который поглощается 2 % -ной
борной кислотой.
9. Конец отгона аммиака определяют по красной
лакмусовой бумажке, подставленной под стекающую
каплю отгона. Если лакмус не синеет, отгон аммиака
окончен. При хорошем кипении содержимого он длится
30—40 мин.
10. После отгона аммиака отгонную трубку холо­
дильника тщательно обмывают дистиллированной во­
дой, которую сливают в приемную колбу.
11. Содержимое колбы оттитровывают децинормальным раствором соляной кислоты.
При титровании соляной кислотой в присутствии
смешанного индикатора (индикатор Таширо) изумруд­
но-зеленый цвет содержимого колбы при рН, равном
5,5, переходит в красно-фиолетовый. 1 мл 0,1 н, раство­
ра соляной кислоты, пошедшего на титрование, соот­
ветствует 0,0014 г азота. Записав все данные в приве­
денную ниже форму, рассчитывают содержание в корме
азота и сырого протеина.
3. З аказ 7445
33
Форма для записи данных, полученных при определении
содержания общего азота н сырого протеина
Определение
Показатели
первое
второе
Масса цилиндра с навеской корма, г •
Масса пустого цилиндра, г
Навеска корма, г
Пошло на титрование 0,1 н. соляной кислоты, мл
Количество соляной кислоты, связанное ионами
аммиака, мл
Содержание азота в навеске корма:
г
а
-V- "VI:
~ •'
%
|
Среднее из двух определений, %
С одерж ание сырого протеина, %:
в воздушно-сухом веществе
в первоначальном веществе
в абсолютно сухом веществе
Расчет содержания азота и протеина.
Содержание
азота (в процентах) вычисляют по формуле:
а-к *100
X = —■
*
б
- *
г
где X — содержание азота в исследуемом корме; а —
количество
миллилитров соляной кислоты, пошедшее
на титрование; к — коэффициент 0,0014, показывающий,
что 1 мл децинормального раствора соляной кислоты со­
ответствует 0,0014 г азота; б — навеска корма, г.
2.
Для вычисления содержания в корме сырого про
теина показатель содержания азота умножают на со­
ответствующий коэффициент (см. сноску н а стр. 32).
Ь-
МИКРОМЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АЗОТА
ПО
КЬЕЛЬДАЛЮ
Принцип этого.м етода тот же, что и при определе­
нии азота макрометодом.
Реактивы.
2%-ный
раствор
борной
кислоты
(ГОСТ 9656 61, х. ч.), 0,01 н. раствор серной или со­
ляной кислоты (ГОСТ 4204— 77 х. ч.). Остальные реактивы те же, что и при определении азота макромето­
дом.
‘
* д.г ^ й
Х о д о п р е д е л е н и я . Д ля анализа берут 0,1 г тонкоразмолотого сухого корма, мочи, молока, сала — по 0,2—
34
0,3 г; мяса — 0,1 г. Важно, чтобы в этом количестве ис­
следуемого образца содержалось около 0,5— 1,5 мг азо­
та. Отбирают и сжигают навеску продукта описанным
выше способом. Кислоты, используемой для сжигания
мяса, берут до 5 мл, для сжигания Других веществ —
до 3—4 мл; катализатора — около 200 мг.
При анализе недостаточно однородного материала
микрометод применим только для в г о н к и аммиака. Ми­
нерализация образца проводится так же, как и при
макрометоде (навеска продукта не уменьшена).
По завершении сжигания содержимое колбы пере­
носят в мерную колбу на 50 или 100 мл, добавляют ди­
стиллированной воды до метки и тщательно перемеши­
вают. Д л я отгонки берут 10 мл раствора.
При титровании отгонного аммиака для повышения
точности определения используют сантинормальный рас­
твор серной или соляной кислоты. Д ля отгонки исполь­
зуют прибор на шлифах. Дистиллируют раствор паром.
Титруют из микробюретки. Аммиак отгоняют в той же
колбе, в которой проводили сжигание. В приемную кол­
бу наливают 10 мл раствора борной кислоты и 2-т3 капли индикатора. В отгонную колбу приливают че­
рез воронку аппарата 15— 20 мл щелочи и пропускают
из парообразователя пар. Отгонку продолжают 5 мин.
Затем кончик трубки холодильника вынимают из рас­
твора кислоты и пар пропускают через всю систему при­
бора в течение 1—2 мин.
Расчет. Ведут его по количеству 0,01 н. кислоты, по­
шедшей на титрование. При этом используют формулу:
А -0,0014-100
Щ — :----------%
б
1
где X — содержание азота ( % ) ; А — количество 0,01 н .
кислоты (мл); б — навеска продукта.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е БЕЛКОВОГО АЗОТА В КОРМАХ
ПО СПОСОБУ БАРНШТЕПНА
Метод основан на осаждении белков гидратом окиси
меди [С и (О Н 2)] из водных растворов при избытке в
них медного купороса. При этом образуются белковые
соединения, нерастворимые даж е в горячей воде. Отмы­
тый от солей и растворимых небелковых азотистых ве-
ществ осадок белка сж игаю т с серной кислотой по ме­
тоду Кьельдаля.
^
Реактивы и оборудование. Сернокислая
медь 6%
( С и 5 0 4-5Н20 ;
ГОСТ 4165—66, х .ч .); едкий натр
(ГОСТ 4328—66, ч); 10%-ный раствор хлористого ба­
рия; 1%-ный и 20%-ный растворы трихлоруксусно'й кис­
лоты; реактивы, применяющиеся при определении сы­
рого протеина в кормах; стаканы химические емкостью
150—200 мл; пробирки стеклянные; воронки стеклян­
ные; водяная баня; стеклянные палочки; колбы Эрленмейера емкостью 500 мл; сушильный шкаф; капельница;
электроплитка; фильтровальная бумага; оборудование
и посуда, применяемые при определении сырого про­
теина.
'
■
•"..''"„г'
Ход определения. 1. На аналитических весах в ци­
линдрике отвешивают 1— 1,5 г тонко измельченного воз­
душно-сухого корма. В случае анализа корма в свежем
состоянии (корнеклубнеплоды, трава и др.) его необ­
ходимо хорошо измельчить (навеску корма в таком слу­
чае увеличивают до 4—6 г). Корм переносят в химиче­
ский стакан емкостью 150—200 мл. По разности массы
цилиндра с кормом и пустого цилиндра определяют на­
веску корма.
у
2. В стакан добавляю т 50—70 мл дистиллированной
воды, содержимое хорошо перемешивают стеклянной
палочкой и нагревают до кипения. Вещества, богатые
крахмалом, кипятить нельзя. В этом случае ограничи­
ваются 10-минутным нагреванием содержимого на во­
дяной бане при температуре 40—50°С.
,
3. В стакан с горячей жидкостью вливают по палоч­
ке 25 мл 6%-ного раствора сернокислой меди и содер­
жимое стакана размешивают.
4. К содержимому, стакана при помешивании не­
большими порциями приливают 2 5 мл 1 , 2 5 % - н о г о рас• твора едкого натра. Реакция не должна быть щелочной.
Смесь хорошо перемешивают. Затем стакан оставляют
на 1 ч для полного осаждения белков (можно оставить
на ночь).
•
• > .-- :
ОД О *
5. Отстоявшуюся жидкость осторожно сливают на
фильтр (важно, чтобы осадок не попал на него). Затем
к осадку приливают горячей дистиллированной воды,
хорошо перемешивают и после отстаивания жидкость
снова сливают на тот ж е фильтр. Промывают осадок
7—8 раз.
. ,
.
\
36
6. Осадок без потерь переносят на тот же фильтр и
продолжают промывать теплой водой до полного исчез­
новения в промывных водах ионов 504. Д л я проверки
наличия ионов 5 0 4 в пробирку собирают 3—4 мл про­
мывных вод и добавляют туда из капельницы 2—3 кап­
ли 10%-ного раствора ВаС1г. Если жидкость в пробирке
помутнеет, промывание продолжают. Промывание з а ­
канчивают, когда промывные воды при добавлении хло­
ристого бария остаются прозрачными.
7. Промытый осадок на фильтре вместе с воронкой
помещают в сушильный шкаф и подсушивают при тем­
пературе 60—80°С. Затем фильтр с веществом осторож­
но закатывают в шарик и без потерь помещают в колбу
Кьельдаля.
8В ту ж е колбу вливают 20 мл концентрированной
серной кислоты, затем добавляют катализаторы и про­
водят сжигание, после чего определяют содержание
азота
(как и содержание сырого протеина). Все дан­
ные записывают в приведенную ниже форму.
ш
» *—
* -
ж
Форма для записи данных, полученных в ходе определения
белкового азота
Определение
Я
Показатели^
* первое
второе
Масса цилиндра с навеской корма, г
Масса пустого цилиндра, г*
Навеска корма, г
Пошло на титрование 0,1 н. срляной кислоты,
связанное ионами аммиака, мл
Содержание белкового азота в навеске, г
Содержание белкового азота, %
Среднее из двух определений, %
Белка в воздушнол-сухом веществе, %
Белка в первоначальном веществе, %
Белка в абсолютно сухом веществе, %
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ*
В последние годы ведутся интенсивные исследова­
ния по разработке методов анализа кормов и других
биологических веществ на содержание
аминокислот.
*
Методика ЦИНАО; подготовлена Д . И. Марновым, Е. А. Пе­
туховой, Р. Ф. Бессарабовой.
37
Широко используются методы тонкослойной абсорбци­
онной и ионообменной хроматографии. В ряде л аб о р а­
торий применяются методы распределительной бум аж ­
ной и тонкослойной хроматографии. Разработаны и по­
лучили распространение жидкостные ионообменные а н а ­
лизаторы аминокислот в основном иностранного про­
изводства. По точности и производительности анализа
предпочтительно использовать автоматические ан али за­
торы в сочетании с электронно-вычислительной техни­
кой. Однако наиболее доступным и экономичным следу­
ет считать метод тонкослойной хроматографии, особен­
но если в качестве регистрирующего прибора применя- '
ется денситометр, позволяющий быстро и точно изме­
рить оптическую плотность пятен аминокислот.
Определение аминокислотного состава кормов вклю­
чает гидролиз пробы и анализ гидролизата методами
ионообменной жидкостной или тонкослойной хромато­
графии. Разделение аминокислот методами ионообмен­
ной и тонкослойной хроматографии основано на том,
что различные аминокислоты имеют разные величины
изоэлектрических точек, причем на разделение оказы ва­
ют влияние такж е структура молекулы аминокислоты,
заряды боковых радикалов и некоторые другие свой­
ства.
Методика гидролиза проб кормов. Д л я расщепления
белков, пептидов и других веществ с высвобождением
аминокислот необходимо провести гидролиз проб кор­
мов под действием кислот или щелочей при подогреве
и избыточном давлении или без него. Гидролиз белков
соляной кислотой в присутствии других веществ связан,
как известно, с разрушением некоторых аминокислот.
Очень устойчивы к действию горячих растворов соляной
кислоты глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин, фе­
нилаланин, пролин, лизин, гистидин и аргинин. Цистин,
■метионин и триптофан при кислотном гидролизе, осо­
бенно в присутствии углеводов, в значительной степени
или полностью разрушаются. Поэтому для определения
их содержания в кормах пользуются методами щелоч­
ного гидролиза и гидролиза надмуравьиной кислотой.
Приборы, материалы, реактивы. Автоклав, термо­
стат, центрифуга, водяная баня многогнездная, весы
аналитические (погрешность взвешивания не более
0,0002 г),, мельница лабораторная МРП-1 (или ан ало­
гичного типа), баллон с азотом особой чистоты, про­
зе
бирки, ампулы, колпачки
или
воронки, тефлоно­
вые трубки, фильтры
беззольные (белая
лента,
ГОСТ 120626—76); соляная кислота (ГОСТ 3118—67
х. ч., для гидролиза готовят 6 н. раствор: 492 мл кон­
центрированной соляной кислоты смешивают с 508 мл
дистиллированной вт>яы в мерной колбе вместимостью
1 л ),.п ер ек и сь водорода 30%-ная (ГОСТ 10929—64),
гидроокись бария (ГОСТ 4701—69), муравьиная кисло­
та 85%-ная (ГОСТ 5-48—73), этиловый спирт (техниче­
ские условия ИРЕА-20—66), дистиллированная вода
(ГОСТ 6709—72).
Проведение анализа. Автоклавный гидролиз в 6 н.ра­
створе соляной кислоты. На аналитических весах отве­
шивают 100—200 мг воздушно-сухого корма (в нем
должно содержаться 15—20 мг сырого протеина), пе­
реносят -его в пробирку и добавляют туда 2—3 капли
этилового спирта. Затем корм в пробирке заливают
Ю—20 мл 6 н. раствором соляной кислоты и пробирку
закрывают колпачком или воронкой для предотвраще­
ния разбрызгивания кислоты. Пробирки помещают в
штативы или биксы, прилагаемые к автоклаву. Гидро­
лиз проводят в автоклаве под давлением 2,5 атм, при
температуре 137°С в течение 2 ч. По завершении гид­
ролиза пробирки охлаждают до комнатной температуры.
Гидролизат фильтруют через бумажный фильтр. Филь­
трат собирают в небольшую тонкостенную фарфоровую
чашечку для выпаривания. Пробирки 2—3 раза ополас­
кивают небольшими порциями дистиллированной воды.
Этой же водой промывают фильтр. Фильтрат упаривают
на многогнездной водяной бане при температуре 50—
60°С. Во время упаривания содержимое чашечки поме­
шивают легкими вращательными движениями, чтобы из­
бежать появления ореолов. После удаления соляной кис­
лоты в чашечки добавляют 5— 10 мл воды и упарива­
ние повторяют. Фильтрат упаривают до слегка вл аж ­
ного состояния. Полученный осадок заливают 5— 10 мл
цитратного буферного раствора, рН которого равна 2,2,
и тщательно перемешивают стеклянной палочкой до
полного растворения. Затем раствор еще раз фильтруют
или центрифугируют 10— 15 мин при 3000—4000 оборо­
тах в 1 мин. Хранят гидролизагы в холодильнике.
Гидролиз в термостате. 100—200 мг корма перено­
сят в ампулу для гидролиза, смачивают двумя-тремя
каплями этилового спирта и приливают туда 10—20 мл
К
':
\
^ 39
мЫг1
6 н. раствора соляной кислоты. Затем через тонкую теф­
лоновую трубку со стеклянным наконечником в течение
3—4 мин пропускают из баллона азот особой .чистоты.
После этого ампулы запаиваю т и помещают в термо­
стат для проведения гидролиза. Гидролиз длится в те­
чение 24 ч при температуре 110°С. По окончании гид­
ролиза охлажденные ампулы вскрывают, гндродизат
фильтруют, упаривают и осадок после упаривания рас­
творяют, как описано выше, в 5— 10 мл цитратного бу­
ферного раствора, рН которого равна 2,2.
Получение оксидированных гидролизатов. Непосред­
ственно перёд проведением гидролиза готовят окисли­
тельную смесь: к 1 мл 3 0 % -ной перекиси водорода до­
бавляю т 9 мл 85%-ной муравьиной кислоты. Раствор
оставляют ст ять на 1 ч при комнатной температуре,
чтобы получить максимальное количество надм уравьи'
ной кислоты, затем охлаж даю т до 0°С в ледяной бане.
' Образец корма массой 100—200 мг помещают в ф ар ­
форовую чашечку, добавляю т надмуравьиную кислоту
из расчета 2 мл на 5 мг протеина. Если белок хорошо
растворяется, то образец оставляют при комнатной тем­
пературе на 4 ч. Если белок плохо растворяется, время
окисления увеличивают до 10— 15 ч. Затем раствор
упаривают, осадок растворяют в 6 и. растворе соляной
кислоты и гидролизуют в автоклаве или термостате.
В последующем гидролизат подготавливают так, как
описано выше.
Метод щелочного гидролиза для определения трип­
тофана. 100 мг тонкоразмолотой и просеянной через си­
то с 0,5-миллиметровыми отверстиями пробы переносят
в стеклянные ампулы, куда добавляю т 0,8 г сухой гид­
роокиси бария и 1,5 мл дистиллированной воды. Ампу­
лы запаиваю т и помещают в термостат. Гидролиз
длится 16— 18 ч при температуре 110°С, По окончании
.гидролиза содержимое ампул центрифугируют 15—
20 мин при 3000 об/мин. Центрифугат затем подкисля­
ют концентрированной соляной кислотой (д о .р Н 2,2) и
доводят объем буферным раствором (рН 2,2) до 3—
5 МЛ/
• *.
Проведение тонкослойной хроматографии. Н а пла­
стинку со слоем адсорбента наносят пробу (гидролизат)
в виде капли или полоски. Затем пластинку помещают
в хроматографическую камеру таким образом, чтобы ее
нижний край был погружен в растворитель на 1 см.
40
Продвигаясь по пластинке, растворитель увлекает за
собой пробу, причем каждый компонент пробы движет­
ся с характерной для него скоростью. Таким образом,
на пластинке образуются зоны, в которых находятся
отдельные компоненты смеси аминокислот. Обычно эти
зоны обрабатывают нингидрином или другим реактивом
и проявляют.
Д л я идентификации определенного компонента на
пластинку с пробой наносят стандартный раствор (мет­
чик).
Количественный анализ аминокислот можно вести
двумя способами. При первом способе зону, содержа­
щую определенный компонент, снимают с пластинки,
экстрагируют и в экстракте колориметрически опреде­
ляют содержание искомого компонента. При втором
способе измеряют с помощью денситометра степень
густоты окраски зоны, при этом денситометрическая
кривая записывается. По ней и рассчитывают содержа­
ние аминокислоты в пробе.
Приборы, материалы, реактивы. Основной комплекс
для тонкослойной хроматографии ОЕ-304 (Венгрия);
экстинкционно-регистрирующий прибор с интегратором
ЕРУ-65-М (Г Д Р ); фен «Сюрприз» (или аналогичный);
краскопульт «Ореол»; термостат воздушный с регуля­
цией температуры, в пределах 20—70°С; холодильник
бытовой вместимостью 160 л; потенциометр рН-340 (или
аналогичный); весы аналитические (ГОСТ 19491—74);
микрошприц вместимостью 10 мкл; микропипетки вме­
стимостью 1, 2, 5 мл; мерные колбы вместимостью 25,
50 мл; склянки пенициллиновые; трубки стеклянные
диаметром 5—7 мм; цилиндры мерные вместимостью 10,
25, 50, 100, 1000 мл; стаканы химические вместимостью
50 мл; бутыли или канистры вместимостью 3—5 л;
стеклянные капилдяры; пластинки «Фиксион 5 0 x 8 »
(размер 2 0 x 2 0 см), «Силуфол» и стеклянные пластин­
ки (размер 2 0 x 2 0 см); малый и большой наборы ами­
нокислот (МРТУ 6-69-2530—65 ,и 6-09-2529—65); нингидрин (МРТУ 6-09-2726—65, ч .); аммиак, 25%-ный рас­
твор (ГОСТ 3760—64, ч .д .а.);п и р и д и н (ГОСТ 13647—68,
ч. д. а); ацетон (ГОСТ 2603—71, ч. д. а.); ледяная уксус­
ная
кислота (ГОСТ 61—69);
соляная
кислота
(ГОСТ 3118—67, х. ч.); лимонная кислота (ГОСТ
3652—69, ч ) ; гидроокись натрия (ГОСТ 4328—77, х.ч.);
глицерин (ГОСТ 6259—75, ч.д. а.); тимол (МРТУ
1а
.
'
\ \ 41
6-09-3274—66, ч. д. а.); уксуснокислый кадмий (ГОСТ
5824 -7 1 , ч.д. а.); изопропанол (ТУ 22П — 3267, х .ч .);
гидроокись бария (ГОСТ 4107—69, ч .д .а .) ; хлористый
■натрий (ГОСТ 4233—66); метилцеллозольв (из комплек­
та реактивов к аминокислотным ан ализаторам ).
Подготовка к анализу. Приготовление буферных рас­
творов. Используют для этого дистиллированную воду
и реактивы, перечисленные в таблице 4. Хранят буфер­
ные растворы в холодильнике. рН их следует коррек­
тировать.
Таблица
4
Состав буферных растворов
рН буферньх растворов
Реактивы
Едкий натр, г-экв/л
Лимоннокислый нат­
рий, моль/л
Лимонная кислота, г
Едкий натр, г
Хлористый натрий, г
Соляная кислота, мл
Глицерин, мл
Метилцеллозольв, мл
3,28
(для
уравно­
вешива­
ния)
0 ,0 2 0
0,0067
1 ,4
0 ,8
1 ,2
—
3,3
6,23
5,23
6,00
0 ,2 0 0
0 ,4 0 0
0 ,3 5 0
0 ,3 5 0
1,500
0 ,0 6 7
14,1
0 ,4 0 0
8 4 ,0
1 6 ,0
3,28
в
8 ,0
1 2 ,3
100
5 ,9
---
0 ,1 1 7 0 ,1 1 7 0 ,0 3
7 ,0
2 4 ,6
2 4 ,6
4 ,0
1 4 ,0
1 4 ,0
8 1 ,9
——
6 ,5
6 ,5
——Щи 100
100
Уравновешивание пластинок «Фиксион». На одну
из сторон пластмассовой основы такой пластинки нане­
сен слой смолы «Дауэкс 5 0 x 8 » с натрием в форме к а ­
тиона (Ыа+). Перед использованием пластины ионооб­
менный слой необходимо уравновесить, т. е. Ыа+ в актив­
ных центрах частично заместить Н+. При уравновеш ива­
нии, как и при хроматографии на колонке, создается
.соответствующая ионная среда, а находящиеся в слое
примеси удаляются.
Пластинку «Фиксион» накладываю т на стеклянную
пластинку стороной, на которую не нанесена смола, и
накрывают четырьмя листами фильтровальной бумаги
размером 20X 30 см. Выступающий через верхний край
стеклянной пластинки конец фильтровальной бумаги пе­
регибают и закрепляю т резиновым кольцом. Несколько
приготовленных таким образом пластин целесообразно
42
сложить в стопку и накрыть дополнительной стеклянной
пластинкой для лучшего прилегания фильтровальной
бумаги. Стопку пластинок помещают в камеру для хро­
матографирования, куда предварительно наливают 1—
1,5-сантиметровый „о,л ой буферного раствора для урав­
новешивания (рН 3,28). Нижний край пластинок дол­
жен быть погружен в раствор на 1 см.
Пластинки выдерживают в камере в течение суток
при комнатной температуре. Затем их вынимают, сни­
мают фильтровальную бумагу и высушивают ее на воз­
духе. Такие пластинки готовы к употреблению. Хранят
пластинки в темном месте не более 1 месяца.
Подготовка камеры для хроматографии. Чтобы при
хроматографическом разделении аминокислот раство­
ритель, продвигаясь по ионообменному слою, не испа­
рялся, камеру для
хроматографирования насыщают
его парами. Д ля этого дно и стенки камеры выклады­
вают фильтровальной
бумагой. В камеру наливают
растворитель слоем 0,5— 1 см. Насыщение камеры про­
водят в термостате при температуре 50—60°С. Насыще­
ние заканчивают, когда фильтровальная бумага в ка­
мере полностью пропитается буферным раствором.
Подготовка микрошприца. Д л я нанесения на пла­
стинку «Фиксион» анализируемых и стандартных рас­
творов используют микрошприц вместимостью 10 мкл.
Перед нанесением проб из микрошприца удаляют шток,
а на верхний конец стеклянного цилиндра надевают ре­
зиновую трубку длиной 30 мм, с помощью которой за­
бирают в шприц исследуемые или стандартные раство­
ры. Конец резиновой трубки оставляют открытым.
Д ля нанесения на пластинку слабокислых гидроли­
затов конец иглы микрошприца следует обрезать пер­
пендикулярно ее длине на уровне половины скоса и
срез зашлифовать на абразивном бруске. Д ля нанесе­
ния сильнокислых гидролизатов металлическую иглу
заменяют стеклянным капилляром, который закрепляют
в цилиндре шприца с помощью резинового клея. К аж ­
дый раз по окончании работы шприц промывают ди­
стиллированной водой.
Приготовление кадмиево-нингидринового реактива.
Реактив этот стабильно окрашивает все аминокислоты,
кроме пролина. Д л я проявления хроматограмм исполь­
зуют смесь растворов А и Б. Д ля приготовления рас- ■
твора А 1 г нингидрина растворяют в 100 мл ацетона.
У43
Раствор Б готовят из 1 г уксуснокислого кадмия, кото*
рьш растворяют в смеси 50 мл ледяной уксусной кисло­
ты и 100 мл дистиллированной воды. Д л я проявления
двух пластин используют смесь из 50 мл раствора А и
10 мл раствора Б. Раствор А следует готовить непо­
средственно перед употреблением. Раствор Б можно хра­
нить в течение длительного времени.
Приготовление стандартных растворов. Д л я каждой
аминокислоты готовят отдельный стандартный раствор.
Д л я приготовления исходных и рабочих стандартных
растворов используют растворитель, приготовленный из
смеси 900 мл дистиллированной воды и 100 мл изопропанола. 0,0625 г 'чистой аминокислоты помещают в мер­
ную колбу вместимостью 25 мл и растворяют в 15—
20 мл смеси изопропанола и воды, затем содержимое
колбы доводят до метки этим ж е растворителем. В 1 мл
такого раствора содержится 0,0025 г аминокислоты.
Д л я приготовления рабочего стандартного раствора
исходный раствор каждой аминокислоты в количестве,
соответствующем предполагаемой концентраций данной
аминокислоты в корме (табл. 5), переносят в колбу вме­
стимостью 25 мл и доводят водой до метки. Если в 1 кг
корма содержится 1 г аминокислоты, то в 0,1 г— 0,0001 г
аминокислоты. Исходя из того, что 0,1 г корма после
гидролиза растворяют в 10 мл растворителя, в 10 мл
гидролизата содержится 0,0001 г аминокислоты, а в
1 мл гидролизата — 0,00001 г аминокислоты.-
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,5
0 ,6
- 0 ,7
0 ,8
0 ,9
1 ,0
.мг/мл
0 ,0 1
0 ,0 2
0 ,0 3
0 ,0 4
0 ,0 5
0 ,0 6
0 ,0 7
0 ,0 8
0 ,0 9
0 ,1
мкг/мл
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Объем исход­
ного стандарт­
ного раствора
(мл)
Концентрация
аминокислоты
в рабочем стандар­
тном растворе ■
Предполагае­
мое содержа­
ние аминокис­
лоты в корме
| (г/кг)
Объем исход­
ного стандарт­
ного раствора
(мл)
Предполагае­
мое содержа­
ние аминокис­
лоты в $орме
(г/кг)
Таблица
Концентрация
аминокислоты
в рабочем стандар­
тном растьоре
мг/мл
2 ,0
3 ,0
4 ,0
5 ,0
6 ,0
7 ,0
8 ,0
9 ,0
1 0 ,0
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0 ,.5
0 ,6
0 ,7
0 ,8
.0 ,9
1 ,0
►
44
5
мкг/мл
20Э
300
400
500
л ‘600
700
800
900
1С03
Проведение анализа. Подготовка пластинок «Фикси­
он». Перед нанесением гидролизата пластинки зачи­
щают по краям для более равномерного продвижения
буферного раствора. Д л я этого на пластинку наклады­
вают с краю линейку, оставляя незакрытой полоску ши­
риной 3 мм, с которой скальпелем счищают ионообмен­
ный слой. На расстоянии 2 см от нижнего края пла­
стинки мягким простым карандашом проводят линию
старта. На линии старта отмечают места нанесения по­
лосок, причем на одной пластинке размещают 7 поло­
сок. Гидролизат наносят 4-кратно в точках, обозначен­
ных номерами 2, 3, 5, 6, а стандартные рабочие раство­
р ы — 3-кратно в точках 1, 4, 7.
Техника нанесения растворов на [пластинки. Гидролизаты и стандартные рабочие растворы наносят на
хроматографические пластинки таким образом, чтобы
вся проба раствора (10 мкл) умещалась в полоске дли­
ной 10 мм и шириной не более 2 мм. Делшот это сле­
дующим образом: первую каплю раствора наносят на
край полоски, следующую на край предыдущей капли
и так далее до тех пор, пока не будет достигнут другой
край полоски. После этого нанесенную на пластинку
пробу необходимо высушить феном. На высушенную
полоску вновь таким же образом наносят оставшийся
раствор. Затем полоску снова высушивают. Эти опера­
ции проделывают до тех пор, пока не будет нанесено
10 мкл раствора.
Хроматографирование. После нанесения гидролизата
пластинку «Фиксион» кладут обратной стороной на стек­
лянную пластинку и с помощью'полоски из плексигла­
са и резинового кольца прикрепляют к пластинкам
фильтровальную бумагу, которая является приемником
для прошедшего пластинку раствора. Затем пластинки
помещают в предварительно нагретую до 60°С камеру
так, чтобы нижний край их был погружен в буферный
раствор, рН которого равна 3,3.
Камеру помещают в термостат при температуре 60°С.
В одной камере можно установить 2 пластинки. Хрома­
тографирование продолжают в течение 5 ч. Затем пла­
стинки вынимают из камеры и освобождают от резино­
вого кольца. Не снимая со стекла, хроматографические
пластинки высушивают при комнатной температуре. Вы­
сушенную пластинку (без стекла) помещают в камеру
для опрыскивания.
Проявление хроматограмм. Кадмиево-нингидриновыи
реактив распыляют с помощью краскопульта «Ореол».
Первые крупные капли не следует направлять на пла­
стинку. Опрыскивают пластинки в резиновых перчатках
(в вытяжном шкафу) до полного смачивания всей их
поверхности, при этом реактив следует наносить равно­
мерно, без потеков. После опрыскивания пластинку вы­
сушивают на воздухе, накрывают стеклом и оставляют
в темном месте на ночь при комнатной температуре
для полного развития окраски зон аминокислот. П рояв­
ленную пластинку можно хранить несколько дней в ко­
робке под стеклом.
При необходимости быстро получить результаты ан а­
лиза пластинку после опрыскивания и высушивания на
воздухе помещают в термостат и выдерживают там 5
6 мин при температуре 40°С. При этом окраска разви­
вается значительно быстрее, но появляется фон, кото­
рый уменьшает чувствительность анализа.
Денситометрирование. Пластинку разрезаю т на от­
дельные хроматограммы. Н а каждой
хроматограмме
мягким карандашом записывают номер пластинки и но­
мер хроматограммы. К аж дую хроматограмму поочеред­
но помещают на предметное стекло денситометра. По
бокам стекла укладывают черные экранирующие метал­
лические пластины, так чтобы они леж али строго па­
раллельно и закры вали только края пятен. Сверху хро­
матограмму накрывают покровным стеклом и вместе
с рамкой вставляют в гнездо денситометра. Н а план­
шет денситометра укладываю т лист миллиметровой бу­
маги. В верхнем'правом углу листа ставят дату денситометрирования, номер пластины, номер образца, номер
хроматограммы и объём нанесенного гидролизата. Вклю­
чив денситометр, с помощью рукоятки устанавливают
перо самописца на нуль, т. е. добиваются совпадения
рисок на рукоятке пера и на планшете. В процессе денситометрирования получают
записанную самописцем
прибора денситограмму, на которой более интенсивно
окрашенному пятну соответствует более высокии пик
кривой. П лощ адь каждого пика пропорциональна ко­
личеству аминокислоты в пятне.
Описание денситометра и инструкция по его исполь­
зованию прилагаются к прибору.
О бработка результатов. Д л я расчета площади пика
(5, мм2) на денситограмме проводят базовую линию, ка46
сательную к двум минимумам, и высоту (Л, мм) про­
ходящую через максимум кривой параллельно оси орщ Ш р (высота равна расстоянию от. максимума пика до
м м Г п » " „ Г . ) - На уГ ве половиньЩ
в
*
»
««ОБО*. Отредок, отсекаемый „а
7сТ
РИВ0И’ называется полушириной пика
1 “ > мм)- п л о щ ад ь пика находят по формуле- 3=Н-сс1
связь Ш Ш Й Я б 1еления 1 одно* пластинке взаимоаминокислот в стандартных растворах и гидролизатах выражается пропорцией:
{-гид
«-*гйд
Т.р
5 с т.р
Следовательно,
Сгид
Сс т.р *5гцд
ст.р
формуле^*3НИе аминокислоты в К0Рме рассчитывают по
•5рид-Сс».р. Угвд. 1000
^ст.в'Ш
тле х содержание аминокислоты в корме (г/кг)’
Сгнд — концентрация аминокислоты в гидролизате, мг/мл*
Л р ~ / К01?Це чТр?/ЦИЯ аминокислоты в стандартном рас­
творе (мг/мл); Угад| о б ъ е м гидролизата (мл); т - н а ­
веска корма (мг); 5 ^ — площадь пика гидролизаЛ
мм2 • ;
~ плогцадь пика стандартного раство­
ра (мм ); 1000 — коэффициент пересчета на 1 кг корма.
Ьсли на денситограмме невозможно определить по­
луширину пика, то следует исходить из того, что кон­
центрация аминокислоты пропорциональна высоте пика
И этом случае содержание аминокислот в корме рас­
считывают по формуле;
Агид-Сот р . Игвд* 1000
Лст.р-т
где Лщд — высота пика* гидролизата (мм); Астр — высо­
та пика стандартного раствора
(мм); Сср.р - концен­
трация аминокислоты в стандартном растворе (мг/мл);
Н И Щ Ш гидролизата (м л );щ — навеска корма (мг);
1000 — коэффициент пересчета на 1 кг корма.
Расчет содержания аминокислот по последней фор­
муле менее точен, чем по предпоследней формуле. и
47
Пример.
Допустим, навеска корма т = 0 , 1
г=100
мг;'
1'г»д=10 мл; Сст.Р= 0 ,1 мг/мл. Отсюда содержание, например, ли­
зина составит:
/
'г
3 9 -0 ,1 -1 0 -1 0 0 0
„п ,
------------------ - = 6 , 0 Г/КГ.
51-100
'
Определение содержания триптофана в щелочных
гидролизатах. Методика подготовки проб кормов к ан а­
лизу, проведение анализа, подготовка пластинок «Фиксион», нанесение на них растворов, хроматографирова­
ние, проявление хроматограмм, денситометрированиеи
обработка результатов описаны выше.
Хроматографирование проводят при комнатной тем­
пературе. Камера для хроматографирования может
быть изготовлена из плексигласа. В камеру наливают
сантиметровый слой буферного раствора, рН которого
равна 6,0. Хроматографирование заканчивают, когда
фронт растворителя поднимется на 18— 19 см от ниж­
него края пластинки.
Ускоренный анализ кормов на содержание лизина.
Подготовка к анализу — приготовление растворителя.
Растворитель готовят из пиридина (3 части), аммиака
(1 часть) и воды (1 часть). В колбе вместимостью
1000 мл смешивают 600 мл пиридина, 200 мл аммиака
и 200 мл воды. Правильно приготовленный раствори­
тель должен быть прозрачным.
Очистка пластинок <гСилуфол». Последние представ­
ляют собой тонкий слой селикагеля, закрепленный крах­
малом на алюминиевой фольге. Перед использованием
пластинок «Силуфол» их следует очистить методом
проточной хроматографии. Д л я этого используют стек­
лянный прямоугольный сосуд высотой 14 см, закрытый
крышкой с прорезями. На дно сосуда наливаю т раство­
ритель. В прорези на крышке вставляют пластинки так,
чтобы один край их был погружен в растворитель, а
другой выступал над крышкой примерно на 1 см.
В результате продвижения и высыхания поднимаю­
щегося по пластинке растворителя все примеси скапли­
ваются на выступающем над крышкой крае п л асти н к и ..
Очистку пластинок с помощью проточной хроматогра­
фии продолжаю т в течение 8—9 ч. Затем пластинки вы­
сушивают. Хранить их следует не более недели.
Подготовка камеры для хром атограф и и ,' подготовка
микрошприца, приготовление кадмиево-нингидринового
реактива и стандартных растворов описаны выше.
48
Проведение анализа — разметка пластин. На рас­
стоянии 20 мм от того края пластинки, который был
опущен в растворитель при ее очистке, проводят мягким
простым карандашом линию старта. На ней на равном
расстоянии друг от друга откладывают 6 полосрк ши­
риной 10 мм, причем две крайние полоски наносят на
расстоянии 15—20 мм от боковых сторон пластинки
«Снлуфол».
Хроматографирование. На первую, вторую и третью
полоски наносят стандартный раствор, а на четвертую,
пятую и шестую — солянокислый гидролизат. На каж ­
дую полоску микрошприцем наносят по 2 мкл раствора.
Хроматографируют в смеси растворителей, состоящей
из пиридина, аммиака и воды, при комнатной темпера­
туре до тех пор, пока фронт растворителя не поднимет­
ся на 14 см от нижнего края пластинки. Методика про­
явления хроматограмм и денеитометрирование описаны
выше.
При определении лизина денситометрируют в отра­
женном свете, так как пластины «Силуфол» непрозрач­
ны. Д л я этого соответствующую рукоятку устанавли­
вают в левое положение.
Результаты денситометрирования обрабатывают и
рассчитывают содержание лизина в кормах по схеме,
приведенной на страницах 46—48.
Ж ИРА
При анализе содержания жира одновременно в об­
разцах нескольких кормов наиболее удобно пользовать­
ся методом С. В. Рушковского (определение жира по
количеству обезжиренного остатка). Метод основан на
извлечении жира органическими растворителями: сер­
ным (температура кипения 35°С) или петролейным (30—
80°С) эфиром, бензином (80— 150°С), бензолом (80,3°С),
сероуглеродом (46°С), четыреххлористым углеродом
(76,5°С), трихлорэтиленом (88°С) и некоторыми други­
ми. Органические растворители извлекают, из корма не
только нейтральные жиры, но и воскообразные вещест­
ва, фосфатиды, альдегиды, кетоны, сернистые соедине­
ния, органические кислоты, смолы, красящие вещества
и т. д. Обычно такой общий экстракт носит название
сырого жира.
4. З аказ 7445
49
В состав природных
жиров входят незаменимые ненасыщенные
жирные кислоты, т а ­
кие, как линоленовая,
линолевая, арахидоновая и некоторые дру­
гие. Эти жирные кис­
лоты должны о б я за ­
тельно поступать в ор­
ганизм животного с
кормами, так как они
здесь не синтезируют­
ся.
При недостатке
указанных жирных ки­
слот у животного воз­
никает ряд заб о л ев а­
ний. При дефиците ж и ­
р а с кормами в о р га­
низм поступает обычно
мало растворимых в
I
жире витаминов (А,
Э,
Е,
К
).
Рис. 3. Аппарат Сокслета:
Приборы, посуда и
/ — колба; 2 — экстрактор; 3 — хо­
лодильник.
реактивы. А ппарат Сокслета,
органический
растворитель (в лабораториях чащ е используют серный
или петролейный эф ир), сушильный шкаф, бюксы, экси­
катор, бумажные пакетики из фильтровальной бумаги
(ГО СТ 120.26—66).
'
Аппарат Сокслета (рис. 3). Состоит из колбы-испа­
рителя, экстрактора и шарикового холодильника*. Экст­
рактор снабжен двумя трубками — одной более широкой, д р у го й —Iузкой (сифон), по которой сливается
эфир. Перёд работой аппарат Сокслета собирают, т. е.
колбу [ля растворителя соединяют с экстрактором, а
экстрактор_ — с холодильником. В собранном виде ап­
парат Сокслета укрепляют в штативе Бунзена.
Ход определения. 1. Приготовив пакетики из филь­
тровальной бумаги, помещают их в бюксы и высуши­
вают в сушильном ш кафу при температуре 100— 105°С.
В пакетик отвешивают 1—2 г корма, пакетик с кормом
помещают в бюкс и высушивают в термостате при тем­
пературе 100— 105°С до постоянной массы.
50
2. Высушенные и взвешенные в бюксе пакетики с
кормом (на пакетиках пишут простым карандашом но­
мер бюкса) помещают в экстрактор аппарата Сокслета,
заливают эфиром и оставляют на ночь. На следующий
день приливают в экстрактор столько эфира, чтобы пос­
ле его сливания из экстрактора в нем оставался еще
некоторый избыток (50—25 мл) эфира.
3. Колбу аппарата Сокслета ставят на водяную ба­
ню, нагревают на медленном огне (растворитель не дол­
жен сильно кипеть). Нагреваясь в колбе, эфир испа­
ряется и поднимается по широкой трубке экстрактора
в холодильник. В холодильнике эфир конденсируется и
каплями стекает в экстрактор, где находятся пакетики
с исследуемым кормом. Как только экстрактор напол­
нится эфиром до верхнего изгиба сифонной трубки, эфир
с растворенным в нем жиром начинает стекать по си­
фонной трубке в колбу.
4. При равномерной экстракции в течение 1 ч про­
исходит 4—5 сливаний эфира. Корма, богатые жиром,
экстрагируют в течение 10—12 ч, а корма с низким со­
держанием жира — 5—6 ч.
5. По окончании экстракции пакетики вынимают,
раскладывают на большом часовом стекле и высуши- ь
вают в вытяжном шкафу. Затем пакетики помещают в
соответствующие бюксы, ставят их в термостат и вы­
сушивают при 100— 105°С до постоянной массы. Резуль­
таты исследований записывают в приведенную ниже
форму.
..
Форма для записи результатов определения сырого жира
Определение
Показатели
первое второе
Масса стаканчика с фильтром и кормом после вы­
сушивания при температуре 100— 105°С, г
Масса стаканчика с фильтром и кормом после эк­
страгирования и высушивания при 100— 105°С, г
Масса жира в навеске корма, г
Навеска корма в воздушно-сухом состоянии, г
Содержание жира в воздушно-сухом веществе корма, %
Среднее между первым и вторым определениями
Содержание жира в первоначальном веществе, %
Содержание жира в абсолютно сухом веществе кор­
ма, %
4*
I -г,1
7.
Содержание сырого жира корма вычисляют по
формуле:
^1'
V* ' ^ Г'1
(,т—т1) ■100
Х = -------------------- -
в
''
' - ~:~1
где х — содержание сырого жира в исследуемом кор­
ме (% ); т — масса бюкса и пакетика с навеской корма
после высушивания до экстрагирования жира; т\ —
масса бюкса и пакетика с навеской после экстрагиро­
вания и высушивания; в — навеска корма в воздушно­
сухом состоянии; 100 — коэффициент для перевода в
проценты.
"
■/
.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е СЫРОГО Ж И РА ЭКСТРАГИРОВАНИЕМ
ЭТИЛОВЫМ ЭФИРОМ
Сущность метода заключается в определении коли­
чества жира, экстрагированного из навески корма эти­
ловым эфиром.
Приборы, посуда и реактивы. Весы аналитические
АДВ-200 или аналогичных марок, прибор Сокслета, ба­
ня водяная электрическая (или угольная электрическая
лампочка), шкаф сушильный электрический СЭШ
или
аналогичного
типа,
бумага
фильтровальная
ГОСТ 120.26—66), вата сухая обезжиренная гигроскопи­
ческая (ГОСТ 5556—66), эфир этиловый (ГОСТ 6265—52).
Ход определения. 1. Из куска фильтровальной бума­
ги размером 480— 100 мм изготавливают патрон, навер­
тывая бумагу на деревянную болванку. Свободный край'
бумаги подворачивают складками для образования до­
нышка патрона. Бумагу и болванку берут таких разме­
ров, чтобы стенки патрона получились двойными, а его
диаметр примерно соответствовал диаметру экстрак­
тора.
.
Ъ '
". '
2. Предварительно высушенную и взвешенную кол­
бочку прибора приблизительно на 2/з объема наполняют
чистым безводным этиловым эфиром с температурой
кипения 36°С и присоединяют к экстрактору.
3. Отвесив на весах 10 г корма с точностью не более
0,0002 г, помещают его в заранее взвешенный бумаж­
ный патрон.
4. На дно патрона и выше образца корма кладут
обезжиренную гигроскопическую вату. Патрон с кормом
помещают в среднюю часть прибора Сокслета так, что52
>
бы он не был выше выходного отверстия сифонной
трубки.
5. Пускают воду в Холодильнику нагревают колбу
с эфиром на электрической водяной бане при темпера­
туре 50—60°С или на4 электрической угольной лампоч­
кой, регулируя температуру нагрева так, чтобы экстрак­
тор заполнялся эфиром в течение 6—8 мин. Ввиду
легкой воспламеняемости эфира при его перегонке необ­
ходимо избегать близости огня. Во избежание потерь
эфиру в колбочке не дают кипеть слишком бурно.
6. По окончании экстрагирования и охлаждения при­
бора холодильник и экстрактор разъединяют для про­
верки степени извлечения жира, смачивают конец по­
лоски фильтровальной бумаги эфиром из экстрактора.
Если после иопарения эфира на фильтровальной бумаге
не остается жирного пятна, экстрагирование считают
законченным.
7. Присоединив колбочку с эфирной вытяжкой к хо­
лодильнику Либиха, отгоняют эфир, нагревая колбочку
на водяной бане при температуре воды до 70°С. Для
удаления следов эфира после его отгонки колбочку по­
мещают на 15—20 мин на верх нагретого сушильного
шкафа, а затем переносят в сушильный шкаф, где жир
высушивают при температуре 100°С до постоянной мас­
сы или до конца увеличения его массы. Первый раз
взвешивают через 1 ч после сушки жира в колбе, а в
последующем — через 30 мин.
8. Содержание сырого жира вычисляют по формуле:
гП)—т
х = ---------- 100,
,
.
тг
где * — содержание сырого жира (% ); т — масса
сухой колбы; т\ — масса колбы с жиром; т2 — масса
«авески корма (г),.
Допустимые расхождения между результатами двух
смежных определений не должны превышать ± 0,2% О П РЕД ЕЛ ЕН И Е СЫРОГО Ж ИРА ЭКСТРАГИРОВАНИЕМ
БЕНЗИНОМ ИЛИ БЕНЗОЛОМ
Сущность метода заключается в определении коли­
чества обезжиренного остатка корма после экстрагиро*
вания из него жира бензином или бензолом.
53
Приборы, посуда и реактивы. Весы аналитические
АДВ-200 или аналогичных марок, баня водяная элек­
трическая, колба плоскодонная вместимостью 250 мл
(ГОСТ 10394—72), обратный холодильник воздушный
(стеклянная трубка длиной 30—40 см с внутренним
диаметром 10 мм), штатив Бунзена, стеклянные стакан­
чики (бюксы) (ГОСТ 7148—70), бумага фильтроваль­
ная (ГОСТ 120.26»—66), вата сухая обезжиренная гигро­
скопическая (ГОСТ 5556—66), стекло часовое, пробки резиновые, бензин, бензол (ГОСТ 5955—68).
Ход определения. 1. Из фильтровальной бумаги раз­
мером 100x90 мм готовят пакетики или патрон разме­
ром 10X40 мм, помещают их в бюкс и высушивают в
сушильном шкЗфу при температуре 100— 105°С.
2. В зависимости от содержания в корме жира отве­
шивают и помещают в пакетик или патрон 1—2 г корма.
3. На каждом пакетике или патроне проставляют
простым карандашом номер. Н а дно патрона а выше
навески помещают обезжиренную гигроскопическую ва­
ту. Пакетик или патрон с кормом помещают в бюксу и
высушивают б*сушильном шкафу при температуре ГО0—
105°С до постоянной массы, затем охлаждают в эксика­
торе и вновь высушивают.
4. Высушенные и взвешенные в бюксе пакетики или
патроны с навеской корма помещают в колбу вмести­
мостью 250 мл и заливают бензином или бензолом.
5. Колбу закрывают пробкой с воздушным холодиль­
ником и ставят на водяную баню, которую нагревают
на медленном огне (растворитель не должен сильно ки­
петь). Температура кипения бензина 80— 105°С, бензо­
ла 80,3°С.
6. Корма, богатые жиром, экстрагируют в течение
10— 12 ч, корма с низким содержанием жира — 5—6 ч.
Порции растворителя меняют 6— 10 раз, через каждые
'1,5—2 ч работы. Одновременно можно экстрагировать
несколько проб кормов.
7. Экстрагирование считают законченным, если на
фильтровальной бумаге, смоченной
растворителем с
конца воздушного холодильника, отсутствует жирное
пятно.
|
:•
8. По окончании экстрагирования пакетики или пат­
роны вынимают, раскладывают на большом часовом
стекле и подсушивают на воздухе. Затем их помещают
в соответствующие бюксы и высушивают в сушильном
54
V
шкафу при температуре 100— 105°С до постоянной
массы.
Содержание сырого жира вычисляют по формуле:
п%1—т
х = --------- . 100,
»
.+
/Па
где х — содержание сыро?о жира (% ); т\ — масса бкжсы или патрона с образцом корма до экстрагирования;
т — масса бюксы или патрона с кормом после экстра­
гирования; т.2 — масса навески корма (г).
Допустимые расхождения между результатами двух
смежных определений не должны превышать ±0,3% .
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е СЫРОЙ КЛЕТЧАТКИ
ПО ГЕННЕБЕРГУ И ШТОМАНУ (М О ДИ Ф И КАЦ И Я)
Результаты анализа сырой клетчатки, по Геннебергу
и Штоману, отражают наиболее тесную связь ее содер­
жания с энергетической (общей) питательностью кор- мов. Данная модификация определения клетчатки в
корме позволяет сократить продолжительность анализа
в результате использования при гидролизе более кон­
центрированных реагентов. Кислота более высокой кон­
центрации способствует также разжижению в концен­
тратах крахмального клейстера и убыстряет фильтрова­
ние и отсасывание гидролизатов.
Метод определения, сырой клетчатки основан на
обработке исследуемого вещества растворами серной кис­
лоты и едкой щелочи, спиртом и эфиром. Под действи­
ем серной кислоты при кипячении нерастворимые угле­
воды (крахмал и частично гемицеллюлозы) гидроли­
зуются и в раствор переходят амидные соединения,
амины, частично алкалоиды и минеральные вещества.
Щелочь переводит в растворимое состояние белковые
вещества, жиры и жироподобные вещества, омыляя и
эмульгируя их; кроме того, щелочь растворяет значи­
тельную- часть оставшихся гемицеллюлоз и частично
лигнин. С помощью спирта и эфира извлекают раство­
римые в них вещества, остатки жира, воска, красящие
вещества и др. После воздействия перечисленных выше
растворителей в остатке получают сырую клетчатку.
Сырой ее называют потому, что указанные реагенты не
полностью удаляют сопутствующие клетчатке вещества:
' 55
лигнин, гемицеллюлозы, пентозаны, минеральные веще­
ства и др. ■
. - ...
-I;
Приборы и реактивы . Весы аналитические'точностью
взвешивания до 0,0002 г, шкаф сушильный, нагрева­
тельный прибор (плитка электрическая или газовая го­
релка с асбестовой сеткой), насос вакуумный или водо­
струйный, эксикатор, бюксы стеклянные пронумерован­
ные, химический стакан вместимостью 400—500 мл,
воронки Джандиери (в расширенной части ее находится
плоская стеклянная пластинка с отверстиями диаметром
1 — 1,5 мм), воронки стеклянные диаметром 7 см', ворон­
ки Бюхнера диаметром 8— 10 см, мерные цилиндры, кол­
бы Бунзена вместимостью 2—3 л, колбы мерные вмес­
тимостью 1000 мл, палочки стеклянные длиной около
20 см с рези 10вым наконечником, бумага фильтроваль­
ная быстрой фильтрации ФОБ (ГОСТ 120.26—76), л а к ­
мусовая бумага красная и синяя, серная кислота х. ч.,
гидроокись калия х. ч., спирт этиловый, эфир серный.
Приготовление реактивов. Д ля приготовления 4%ного раствора серной кислоты в мерную колбу вмести­
мостью 1000 мл берут около 800 мл дистиллированной
воды, затем вносят туда 23,3 мл серной кислоты плот­
ностью 1,84 г/см3 и после охлаждения объем содержи­
мого доводят дистиллированной водой до 1 л. Д ля при­
готовления 5%-ного раствора гидроокиси калия 50 г
КОН растворяют в 950 г дистиллированной воды.
Ход определения. 1. В сушильный стаканчик с крыш­
кой помещают бумажный фильтр диаметром, равным
размеру воронки Бюхнера, и высушивают в течение 1—
1,5 ч в сушильном шкафу при температуре 100— 105°С
до постоянной массы.
2. Взвесив на аналитических весах в мерном цилинд­
ре примерно 1,5 г тонко измельченного воздушно-сухого
грубого или сочного корма (концентратов около 2 г),
переносят корм в химический стакан вместимостью
400—500 мл. По разности массы цилиндра с веществом
и пустого цилиндра находят массу корма. .
3. К образцу корма в стакане с меткой на 200 мл,
сделанной восковым карандашом или наклеенной по­
лоской бумаги, приливают 200 мл 4%-ного раствора
серной кислоты, предварительно подогретого до 50°С
при исследовании концентратов или до 70—80°С при
анализе остальных кормов.
4. Смесь тщательно перемешивают стеклянной па-
лочкой с резиновым нако­
Кнасос
нечником, после чего стакан
ставят на нагревательный
прибор, доводя содержимое
до кипения, и кипятят 5 мин.
5.
Затем стакан снимают
с плитки, осадку даЮт от­
стояться и горячий раствор
отсасывают. Удобнее поль­
зоваться при этом прибором,
Рис. 4. Установка для отсасы­
изображенным
на рисун­ вания гидролизата и отмыва­
ке 4. Состоит он из колбы
ния сырой клетчатки.
Бунзена или толстостенной
и
конической колбы, соединенной каучуковой труокой с
водоструйным или вакуумным насосом. В резиновую
пробку, плотно закрывающую колбу, вмонтирована
изогнутая стеклянная трубка, к которой присоединяется
при помощи каучуковой трубки воронка Джандиери.
Д ля кормов, содержащих не менее 3% клетчатки, мож­
но использовать обычную воронку, обтянутую тканью
капронового сита с отверстиями не более 0,1 мм.
.6. Перед началом отсасывания на воронку Джандие­
ри кладут смоченный кружок фильтровальной бумаги,
соответствующий размерам воронки. Насос приводят в
действие, и бумага плотно присасывается к пластинке
воронки. Воронку с фильтром опускают в стакан до
соприкосновения с жидкостью (погружать глубоко в
жидкость не рекомендуется). Под действием разрежения
жидкость отсасывается в колбу Бунзена (по мере пони­
жения уровня раствора в стакане воронку опускают).
Отсасывают жидкость не досуха. Насос при отсасыва­
нии должен работать непрерывно, иначе фильтр может
упасть в стакан или в него перебросится часть жидко­
сти.
Затем воронку из стакана вынимают, переворачи­
вают ее фильтром вверх и оставшейся жидкости дают
стечь в колбу. В стакан до черты доливают горячей ди­
стиллированной воды и, дав осадку осесть, отсасывают
раствор, как и кислоту. Так делают еще 2—3 раза, по­
ка реакция раствора на синий лакмус не будет ней­
тральной. Иногда фильтр при отсасывании жидкости
забивается. Тогда насос выключают, пинцетом осторож­
но снимают фильтр и прикладывают его к внутренней
стенке стакана. Далее сильной струей горячей воды из
промывалки смывают приставшие к фильтру частицы
корма и присасывают к воронке новый фильтр'. При ис­
пользовании воронки, обтянутой тканью, горячей д и ­
стиллированной водой тщательно отмывают тканевой
фильтр.
По завершении отсасывания жидкости фильтр отмы­
вают небольшим количеством воды.
7. В стакан с осадком приливают 100 мл 5%-ного
раствора щелочи и дистиллированной водой доводят
содержимое в стакане до 200 мл (концентрация щелочи
в стакане составит 2,5% ).
8 . Содержимое стакана вновь нагревают до кипения,
кипятят в течение 5 мин, периодически помешивая, пос­
ле чего фильтруют через воронку Бюхнера с бумажным
фильтром. Массу фильтра вместе с бюксом в сухом сос­
тоянии определяют заранее. Осадок на воронке Бюхнера
тщательно промывают от щелочи горячей дистиллиро­
ванной водой (проба на лакмус), а затем 15 мл спирта
и 15 мл эфира.
После обработки корма щелочью можно отсасывать
жидкость и промывать осадок горячей дистиллирован­
ной водой до нейтральной реакции на красный лакмус,
как и после обработки вещества серной кислотой. Ос­
тавшийся раствор с осадком переносят затем на поме­
щенный в воронку бумажный фильтр, масса которого
вместе с бюксом в сухом состоянии определена заранее.
При этом стакан обмывают несколько раз горячей во­
дой, чтобы все частички клетчатки перенести на фильтр.
Клетчатку на фильтре промывают 15 мл спирта и 15 мл
эфира.
’•
9. Промытый таким образом осадок переносят вмес­
те с .фильтром из воронки Бюхнера или из стеклянной
воронки (в зависимости от метода анализа) в тот же
бюкс, в котором высушивали пустой фильтр, после че­
го сушат в сушильном шкафу при 100— 105°С в течение
3 —4 ц9 охлаждают в эксикаторе и взвешивают на ан а­
литических весах. Затем бюкс с осадком снова сушат
в течение 4 ч, охлаждают и снова взвешивают.
Высушивание осадка в бюксе продолжают до пос­
тоянной массы. '
^
10. Зная общую массу бюкса с фильтром и осадком,
а такж е массу фильтра и бюкса, по разнице показателей
определяют массу сырой клетчатки в воздушно-сухом
веществе.
58
Форма для записи результатов анализа корма на содержание
сырой клетчатки
Определение
первое второе
Масса цилиндра с кормом, г
Масса пустого цилиндра, г
Навеска корма, г
Масса бюксы с фильтром, г
Масса бюксы с фильтром и клетчаткой после высушивания при 100— 105°С, г;
первое взвешивание
второе взвешивание
третье взвешивание
четвертое взвешивание
Масса клетчатки, г
Содержание клетчатки в воздушно-сухом корме, %
Среднее содержание клетчатки, %
Содержание клетчатки в первоначальном корме. %
Содержание в корме сырой клетчатки (х) опреде­
ляют по формуле:
-у'
*
«100
Х«=------- ,
а
где а —навеска корма (г); в—масса сырой клетчатки (г);
100 — коэффициент для пересчета в проценты.
П р и м е р . Навеска корка 1,4850 г; масса бюкса с фильтром
30,1706 г; масса бюкса с фильтров и сырой клетчаткой после вы­
сушивания: первое взвешивание 30,5966 г, второе взвешивание
30.5910 г, третье взвешивание 30,5912 г. Отсюда масса сырой клет­
чатки равна (30,5910—30,1706) =0,4204 г. Следовательно, в корме
’
0,4204 • 100
сырой клетчатки содержится:
* = - -----------------=28,44% .
1,4850
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е ЛИГНИНА ПО КЕНИГУ
В МОДИФИКАЦИИ КОМАРОВА
Лигнин — инкрустирующее вещество, не являющееся
углеводом, но тесно связанное с целлюлозой. Содержа­
ние лигнина зависит от возраста растений: в молодых
растениях клеточные стенки состоят в основном из цел­
люлозы; с возрастом же растений стенки клеток дереве­
неют, отчего содержание лигнина возрастает. Чем боль-
ше в растениях лигнина, тем ниже его питательность.
Количественный анализ лигнина химическим методом
основан на гидролизе концентрированными кислотами
углеводной части измельченной и обезжиренной расти­
тельной ткани. Лигнин при этом остается в виде негид­
ролизованного остатка, определяемого взвешиванием.
Посуда и реактивы. Колбочки вместимостью 50 или
100 мл с притертыми или корковыми пробками, колбы
вместимостью 500 мл с пришлифованным обратным хо­
лодильником, стеклянные пористые фильтры, водяная
баня, цилиндры на 200 мл, колба Бунзена, водоструй­
ный насос; 72%-ный раствор серной кислоты, дистилли­
рованная вода.
. ^
'
Ход определения. Содержание лигнина определяют
в веществе, предварительно обезжиренном в аппарате
Сокслета.
1. В колбу вместимостью 50— 100 мл с притертой
пли корковой пробкой вносят около 1 г обезжиренного
вещества и 15 мл 72%-ной серной кислоты.
2. Колбу ставят на 2,5 ч на воздушную баню при
температуре 24—25°С (можно в термостат). Содержи­
мое колбы периодически встряхивают (во избежание
образования комков).
—
3. После этого содержимое колбы разоавляют дис­
тиллированной водой и переносят в колбу вместимостью
500 мл, снабженную обратным холодильником. Воды
для разбавления и смывания остатка со стенок колбы
требуется 200 мл. Смесь кипятят в течение 1 ч.
4. Затем лигнину дают осесть, после чего^осадок от­
фильтровывают через стеклянный ^ (пористый) предва­
рительно высушенный и взвешенный фильтр. Фильтрова­
ние ведут под вакуумом. Лигнин на фильтре промыва­
ют горячей (70—75°С) дистиллированной водой до ней­
тральной реакции.
*
5. Фильтр вместе с лигнином высушивают при 100
\ Ю5°С до постоянной массы. Перед взвешиванием фильтр
с лигнином каждый раз охлаждают в эксикаторе.
6. По разности массы фильтра с осадком и пустого
фильтра определяют количество лигнина во взятом для
анализа образце корма. Содержание лигнина в корме
вычисляют затем по формуле:
в (100—с) 11
ДГ= —-------- — *
...
60
✓
где х — содержание лигнина в исследуемом веществе
(%)'» о, — навеска обезжиренного вещества (г); в — ко­
личество лигнина в исследуемой навеске (г); с — со­
держание жира.в исследуемом веществе (%)•
П р и м е р . Навеска вещества 1,0170 г; содержание жира в
корме 1,96%; масса высуженного фильтра 58,2716 г; масса фильтра с лигнином после высушивания: первое взвешивание 58,3887 г,
второе взвешивание 58,3746 г, третье взвешивание 58,3748 г. От­
сюда масса сырого лигнина равна (58,3746"-:- 58,2716) =0,1030 г.
Следовательно, лигнина в корме содержится
0,1030(100-1,96)
* = ---------- I------------- И = 9 ,9 2 % .
1,0170
Содержащиеся в растительном материале минераль­
ные вещества, нерастворимые в серной кислоте, остают­
ся в остатке вместе с лигнином, в результате чего по­
лучают завышенный показатель его содержания. Для
внесения поправки в результаты анализа в полученном
лигнине определяют содержание золы и вносят поправ­
ку. При наличии в лигнине остатков белков определя­
ют его содержание по Кьельдалю и вносят поправку,
как и на золу.
Существует спектроскопический метод определения
лигнина. Последний имеет ряд преимуществ, но практи­
ческое его применение сопряжено со значительными
трудностями, связанными с приготовлением образцов
для получения спектров, так как скорость перевода лиг­
нина в раствор для различных растительных тканей
неодинакова. По этой причине в каждом случае необ­
ходимо подбирать режим делигнификации, что услож­
няет проведение анализа.
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е САХАРОВ
ЦЕНТРИФУЖНЫМ МЕТОДОМ БЕРТРАНА — БЬЕРИ
(М ОДИФИКАЦИЯ Е. А. ПЕТУХОВОЙ)
Наиболее распространенными сахарами в раститель­
ных кормах являются моносахариды — глюкоза и фрук­
тоза и дисахариды — сахароза и мальтоза. Химические
методы количественного анализа сахаров основаны на
нх способности восстанавливать в щелочной среде сер­
нокислую окись меди в закись и учета последней. Та­
ким путем могут быть определены только редуцирую­
щие сахара, в состав которых входит свободная альде­
гидная или кетонная группа. Дпсахариды определяют
тем же методом, но лишь после их гидролиза разбав­
ленными минеральными кислотами.
Реактивы для водного экстрагирования углеводов.
1. 10%-ный раствор нейтрального уксуснокислого свин­
ца. Использовать нейтральный свинцовый уксус: 300 г
уксуснокислого свинца помещают в фарфоровую чашку
вместимостью около 1200 мл, сюда ж е добавляют 50 г
окиси свинца и 50 мл дистиллированной воды; содержи­
мое хорошо перемешивают стеклянной палочкой и ста­
вят на кипящую водяную баню. Чашку при этом закры ­
вают стеклом и держат на бане до тех пор, пока перво­
начальная желтая масса не станет белой или розово­
белой. Затем при помешивании добавляют 950 мл горя­
чей дистиллированной воды. Смесь переносят в склянку,
которую закрывают пробкой и оставляют в теплом мес­
те до осветления раствора (на сутки). Можно оставить
в той же, закрытой стеклом чашке. После осветления
раствора его осторожно сливают через складчатый
фильтр в склянки на 200 мл, которые плотно закры ва­
ют, так как раствор на воздухе мутнеет. Д л я ежеднев­
ного употребления небольшое количество раствора
(50— 100 мл) переносят в хорошо закрываемую склянку.
2. Соляная кислота концентрированная и разбавлен­
ная ( 1 : 1 ) .
3. Насыщенный^. (20%-ный), раствор сернокислого
натрия■. , ■■■
4. Углекислый натрий или кальций.
Реактивы для определения сахара в водных вытяж­
ках кормов. 1. Раствор сернокислой меди. 80 г медного
купороса (С и504-5Н г0 ч. д. а.) растворяют в дистилли­
рованной воде, объем раствора доводят до литра и
фильтруют.
2. Щелочный раствор сегнетовой соли ^Ь Ц О бМ ^а*
•4Н20 ) . 300 г едкого натра (ч. д. а.) растворяют в дис­
тиллированной воде, сюда же добавляют 400 г сегнето­
вой соли и содержимое доводят до 1 л.
.
3. Фелингова жидкость — смесь равных объемов пер­
вого и второго растворов. Готовят ее непосредственно
перед использованием.
4. Раствор сернокислого окисного железа. 50 г сер­
нокислой окисной соли железа Ре2(504)з растворяют в
дистиллированной воде, сюда ж е добавляют 200 г
(108,7 мл) концентрированной серной кислоты; Раствор
не должен обладать восстанавливающими свойствами,
поэтому к нему по каплям приливают марганцевокис62
лый калий до появления чуть слабого розового оттенка,
.затем оощии объем раствора доводят до 1 л.
5. Раствор марганцевокислого калия. 5 г КМ п04
(ч. д. а. или х. ч.) растворяют в 1 л прокипяченной гоРяч*и Дис™ллиРоватю й воды- 1 мл 0,5%-ного раство­
ра КМ п04 соответствует округленно 10 мг меди, а 1 мл
0,1 н. раствора К М п04 - 6,36 мг меди.
Через 4—5 дней после приготовления перманганата
устанавливают его титр. Д ля этого целесообразно поль­
зоваться щавелевокислым натрием, который в стеклян“ ° м ,оло^е пР^ДваРительно высушивают в термостате
при 120 С в течение 2 ч. После остывания бюкса из него
в химические стаканы или колбы, предназначенные для
титрования, берут 3—4 навески щавелевокислого нат­
рия по 0,20 0,25 г, приливают туда же по 50 мл дистил­
лированной воды и 1—2 мл концентрированной серной
кислоты. Смесь нагревают до 70°С и горячую жидкость
титруют из бюретки 0,5%-ным раствором КМ п04 до
слабо-розового окрашивания. Количество миллиграм­
мов меди, соответствующее 1 мл К М п04, вычисляют, ис­
ходя из следующих уравнений реакций:
5№»2С20 4+ 2КМ п0 4+ 8Н25 0 4= 1ОСОа+ К25 0 4+
.
+ 2М л 5 0 4+ 5 Щ § 0 4+ 8Н20 ;
Си20 + Ре2( 5 0 4) 3+ Н25 0 4= 2 С и 5 0 4+ 2 Р е 5 0 4+ Н20 ;
Ю Ре504+ 2 К М п 0 4+ 8 Н 25 0 4= 5Ре2( 5 0 4)3н+ К а 8 0 |+ 2М п5 0 4+ 8Н20 .
Из приведенных выше уравнений реакций видно, что
2 молекулы К М п04 соответствуют
5 молекулам
1\1а2С,20 4 (первое уравнение) -или же 10 атомам железа
(третье уравнение) и что одна молекула щавелевокис­
лого натрия соответствует двум атомам железа и двум
атомам меди (второе уравнение). Количество милли­
граммов меди, соответствующее 1 мл К М п04 вычисля­
ют по формуле
В.к
лГ'
где В
навеска щавелевокислого натрия или щавеле­
вой кислоты (мг); М — количество раствора КМпО«
пошедшее на титрование (мл); К — коэффициент пере­
счета раствора К М п04 на медь. Д ля щавелевокислого
натрия К = 0,9483, для щавелевой кислоты — 1,412. и
63
П р и м е р . Навеска щавелевокислого натрия 0,2264 г, пошло
на титрование 0,5%-ного раствора К М п04 21,1 мл. Отсюда 1 мл
К М п04 соответствует следующее количество меди —
226,4 0,9483
'
— ------------- = 1 0 ,1 7 5 мг.
21,1
■>
Основной 0,5%-ный раствор К М п 04 перед титрованием пробы
разводят в 5— 10 раз, чтобы 1 мл перманганата соответствовал
2— 1 мг меди.
т
Ц|щ разведении в приведенном выше примере основного рас­
твора в 10 раз 1 мл разведенного перманганата будет соответство­
вать 1,0176 мг меди.
Оборудование и посуда. Ступки, мерные колбы с
широким горлом вместимостью 100 и 250 мл, колбы
вместимостью 500 мл, градуированные пробирки с мет­
ками на 25 и 50 мл, воронки, пипетки вместимостью 1,
2, 5, 10 и 25 мл, цилиндры мерные, лабораторные про­
бирки, микробюретка на 3 или 5 мл, центрифужные про­
бирки, стеклянные палочки, электроплитка или газовая
горелка, водяная баня, аппарат Коха или алюминиевый
бидон на 8 — 10 л с кастрюлькой, центрифуга, штативы
для пробирок, универсальная индикаторная бумага.
Подготовка пробы корма к анализу. Содержание са­
харов в растительном материале определяют сразу пос*
ле взятия пробы, так как под действием ферментов уг­
леводы легко разрушаются. Д ля прекращения фермен­
тативных процессов растительный материал необходи­
мо фиксировать: Самый надежный метод фиксации
замораживание зеленого корма жидким азотом или
твердой углекислотой и последующая его лиофилизация (высушивание холодом). Хорошие результаты дает
также фиксация материала горячим 96%-ным спиртом,
хуже — фиксация паром.
Обработка текучим паром. Берут в качестве средней
пробы 200—300 г свежесобранных растений и кладут.
■рыхлым слоем в фарфоровую чашку, которую опускают
в пары стерилизатора Коха. В качестве парообразова­
теля можно использовать алюминиевый молочный би­
дон на 8— 10 л, на дно которого налита вода и на под­
ставке помещена фарфоровая чашка или небольшая
кастрюлька с растительным материалом. Парообразова­
тель закрывают и материал выдерживают там в тече­
ние 15—20 мин. Затем чашку вынимают и корм раскла­
дывают тонким слоем на кювету и сушат в сушильном
шкафу при 50°С (высушивать можно в комнатных ус­
ловиях). Высушенный корм взвешивают, определяют
64
первоначальную влагу, затем измельчают и хранят в
воздушно-сухом состоянии в банках с притертой проб­
кой.
г г
г
Образцы сухого корма паром не обрабатывают. При
определении сахара в корнеклубнеплодах, силосе, сена­
же целесообразно использовать свежие образцы.
Фиксация спиртом. Измельченную пробу корма (2_
5 г и более) помещают во флаконы и заливают 5—7кратным (по массе) количеством нагретого примерно до
70 С 96%-ного этилового спирта. Конечная концентра­
ция спирта должна быть не ниже 70—80%. Флаконы с
пробами корма закрывают пробками и заливают пара­
фином. Перед анализом пробу корма переносят в ступку, спирт упаривают на водяной или воздушной бане
(50—70°С), после чего образец подвергают анализу.
Приготовление водной вытяжки. 1. 2—5 г воздушносухого или 5— 10 г свежего влажного корма тщательно
растирают в ступке с небольшим количеством битого
стекла.
2. Растертую массу переносят в колбу с отметкой
250 мл и приливают туда, омывая ступку и воронку,
100— 150 мл горячей дистиллированной воды (если при
анализе силоса, сенажа предполагают определять от­
дельно редуцирующие сахара и сахарозу, для нейтрали­
зации кислот до слабощелочной реакции по индикатор­
ной бумаге следует добавить на кончике ножа окись
кальция или углекислый кальций).
3. Колбу ставят на.,1 ч на водяную баню (темпера­
тура 60—70°С), периодически помешивая содержимое.
4. Д ля осаждения белков к чуть теплому раствору
приливают 2—3 мл 10%-ного раствора уксуснокислого
свинца. Содержимое колбы перемешивают и дают отсто­
яться. Каплями в колбу добавляют уксуснокислый сви­
нец, пока не прекратится выпадение осадка (взвеси),
что отмечается при некотором избытке свинца.
5. Д ля контроля избытка свинца в пробирку вносят
3 5 капель 20%-ного раствора сернокислого натрия и
1 0,5 1 мл экстракта из колбы. Помутнение смеси этих
растворов (лучше смотреть на темном фоне) означает,
что белки полностью осаждены и имеется избыток свин­
ца, который будет мешать дальнейшей работе. Поэтому
экстракт с сернокислым натрием выливают из пробирки
в колбу и для удаления избытка свинца пробирку про­
мывают 2—3 раза 5—8 мл раствора Ыа250/|, сливая его
б. Заказ 7446
.
и $5
в ту же колбу. Содержимое колбы хорошо перемеши­
вают, дают отстояться и снова проверяют. Если при
смешивании раствора Маг$ 0 4 с испытуемой жидкостью
содержимое не мутнеет, значит, избыток сйннца из ра­
створа удален.
^ ;-»н
?у •Ц |
6. Объем жидкости в колбе доводят дистиллирован­
ной водой до 250 мл, содержимое хорошо перемешива­
ют, дают осадку отстояться и фильтруют (ждать, пока
отфильтруется вся вытяжка, не следует; так как объем
ее уже определен). В водной вытяжке моЖно опреде­
лить только восстанавливающие сахара.
7. Д ля определения общего количества сахара (мо­
носахариды и сахароза) берут 25—50 мл фильтрата, до­
бавляют в него соответственно 0,6— 1,2. мл раствора
НС1 (разбавление 1 :1 , концентрация НС1 в гидролиза­
те должна быть 0,5%-ной) и проводят ЗО-минутйый
гидролиз на кипящей водяной бане (следят за объ­
емом).
'
■
~
1
8. Гидролизат охлаждают и кислоту нейтрализуют
сухой содой (ИагСОз), контролируя завершение нейтра­
лизации с помощью индикаторной бумажки. Если в оса­
док выпадает хлористый свинец, то гидролизат нужно
профильтровать.
Если анализ в тот ж е день не проводят, то вытяжку
и гидролизат можно оставить в холодильнике на ночь,
прилив к ним 2—3 капли толуола.
Ход анализа. Определение общего количества саха­
ра. 1. В центрифужные пробирки вносят по 4 мл гидро­
лизата.
"■ '
_|
'
2. Добавляют туда по 4 мл жидкости Фелинга, пос­
ле чего содержимое перемешивают, постукивая по кон­
чику пробирки (жидкость должна быть голубой; если
цвет ее стал бурым, это означает, что не хватило жид­
кости Фелинга).
3. Пробирки ставят на 10 мин на кипящую водяную
баню; по истечении этого времени выпадает красно-бу­
рый осадок закиси меди.
4. Пробирки охлаждают в воде, после чего содержи­
мое пробирок центрифугируют в течение 4—5 мин при
1500 об/мин.
: .
л
1
5. Жидкость с осадка декантируют и край пробирки
подсушивают фильтровальной бумагой. Необходимо
следить, чтобы осадок не сливался.
6. Сразу после сливания жидкости к осадку добав-
ляют 2 мл горячей дистиллированной воды и осадок
встряхивают, постукивая пальцем по концу пробирки.
7. К содержимому добавляют 6—8 мл горячей дис­
тиллированной воды^ обмывая ею стенки пробирки.
8. Пробирки с содержимым снова центрифугируют,
жидкость затем сливают, осадок промывают водой 2—
3 раза. После каждого центрифугирования смотрят, нет
ли на поверхности жидкости частиц закиси меди. Если
частицы ее плавают на поверхности, то в пробирки до­
бавляют 8— 10 капель этилового спирта, жидкость
встряхивают и снова-центрифугируют.
9. После промывания осадка в пробирки немедленно
приливают 2 мл горячей дистиллированной воды (чтобы
закись меди не соприкасалась с воздухом).
10. К взмученному палочкой осадку приливают 3 мл
раствора сернокислого окисного железа, продолжая
помешивать палочкой до полного растворения осадка
закиси меди (палочку оставляют в пробирке). Раствор
в пробирке становится зеленоватым.
И. Не вынимая палочки, раствор титруют из микро*бюретки до бледно-розового окрашивания 0,1- или
0,05%-ным раствором К М п04 (0,1- или 0,05%-ный рас­
твор готовят перед титрованием из 0,5%-ного).
12. Параллельно ставят контроль. Д ля этого вместо
испытуемого гидролизата берут 4 мл дистиллированной
воды. Ход дальнейшей работы тот же, что и с гидроли­
затом.
13. Содержание общего количества сахаров рассчи­
тывают по следующей формуле:
( а - Ь ) - С - У -100
*=
К.В-Уг
’
где х — содержание сахара в исследуемом корме (% );
а — количество раствора К М п04, пошедшее на титро­
вание испытуемой пробы (мл); Ь— количество раство­
ра КМпС>4, израсходованное на титрование контроль­
ной пробы (мл); С — количество миллиграммов меди,
соответствующее 1 мл К М п04 (1 мл 0,1%-ного раствора
К'МпО* Соответствует 2 мг меди); К — коэффициент пе­
ревода меди в сахар (1 мг сахарозы соответствует
1,90 мг меди); В — навеска корма (мг); V — общин
объем водной вытяжки сахара (мл);
— объем гидро­
лизата, взятый для анализа в центрифужную пробирку
(мл).
н
5*
67
■
П р и м е р . Корма взято 2,6542 г. На титрованме испытуемой
пробы израсходовано 4,78 мл, а контрольной — 0,18 мл 0,05%-ного
раствора перманганата калия. С =1,017б мг. Общий объем вытяж ­
ки 250 мл. Для анализа взято 4 мл гидролизата. Отсюда
(4,78—6,18}-1,0175.250- 100
т
1,90-2,6542-4
При необходимости раздельного определения реду­
цирующих сахаров (моносахаридов) и сахарозы анализ
проводят так, как описано, но для определения общего
количества сахара в одни центрифужные пробирки бе­
рут гидролизат, а для определения редуцирующих саха­
ров в другие пробирки — фильтрат.
. Д л я расчета содержания редуцирующих сахаров
пользуются той же формулой, но коэффициент перевода
меди в глюкозу ( К) будет равен 1,77 мг (а не 1,90).
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е В КОРМАХ РАСТВОРИМЫХ
И ЛЕГКО ГИ Д РО Л И ЗУ ЕМ Ы Х УГЛЕВОДОВ
*в И
1
Принцип метода*. Глюкоза под действием концент-^
рированной серной кислоты дегидратируется и превра­
щается в оксиметилфурфурол, который конденсируется
с антроном, образуя соединение, окрашенное в зеленый
цвет. Следует иметь в виду, что антрон реагирует не
только с глюкозой, но и с другими сахарами, находя­
щимися в растворе.
Реактивы, посуда, аппаратура. Стандартный раствор
глюкозы (150 мг глюкозы растворяют в мерной колбе
на 500 мл холодной кипяченой дистиллированной воды).
Хранят раствор в холодильнике не более недели. Перед
анализом основной раствор глюкозы разводят, для чего
20 мл его переносят в мерную колбу на 100 мл и доли­
вают дистиллированной водой до метки; .растворы
.Карреца (150 г К4ре(СЫ)6-ЗН20 растворяют в 1 л дис­
тиллированной воды, 230 г Х п (С Н зС 0 0 )2 ’2Н20 раство­
ряют в 1 л дистиллированной воды); антроновый реак­
тив (760 мл концентрированной серной кислоты —
ч. д. а. — приливают к 330 мл дистиллированной воды.
После охлаждения в раствор при постоянном помеши­
вании вносят 1 г тиомочевины и 1 г антрона. Раствор
хранят в холодильнике в темной склянке не более 3—■
*
Это несколько видоизмененный сотрудниками В И Ж вариа
методики, предложенной рабочей группой стран — членов СЭВ.
68
К
4 дней), 52%-ный раствор хлорной кислоты; окись алю­
миния; 96%-ный этиловый спирт; стеклянная вата; цен­
трифуга со стаканами вместимостью 50 мл; цилиндры
на 25 мл; фильтровальная бумага; воронки; водяная
баня; мерные колбы на 25, 50, 100, 200, 500, 1000 мл;
колонки; пипетка на щ 7 7 мл.
' •
Приготовление вытяжек. 1. В центрифужный ста­
кан вместимостью 50 мл помещают 0,5 г воздушно-сухо­
го вещества. Для перевода глюкозы в растворимое сос­
тояние исследуемый материал смачивают 5 мл биди­
стиллята и добавляют 25 *мл горячего 96%-ного этано­
ла. Смесь подогревают на водяной бане в течение 10
мин при периодическом помешивании и после охлажде­
ния центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин.
_ 2. Центрифугат фильтруют через рыхлый фильтр.
Для полного извлечения глюкозы к осадку приливают
25 мл холодной дистиллированной воды, содержимое
перемешивают в течение 10 мин и фильтруют через
тот же фильтр, после чего вытяжки объединяют.
3.
Этанол выпаривают на водяной бане до полного
исчезновения спирта. Оставшийся раствор переносят в
Мерную колбу на 50 мл и доливают дистиллированной
водой до метки.
; ^4. Осадок с фильтра смывают 5 мл дистиллирован­
ной воды обратно в центрифужный стакан. Д ля превра­
щения крахмала в глюкозу в стакан добавляют 10 мл
52%-ного раствора хлорной кислоты и содержимое пе­
риодически перемешивают в течение 20 мин. Затем до­
бавляют в стакан 20 мл дистиллированной воды, рас­
твор центрифугируют, центрифугат сливают и экстрак­
цию повторяют. При анализе продуктов, богатых крах­
малом (зерно,-комбикорм), экстрагируют трижды.
5.
При двукратной экстракции все вытяжки фильт­
руют в колбу на 100 мл, а при работе с образцами, бо­
гатыми крахмалом (зерно, комбикорм и др.), — в мер­
ную колбу на 200 мл; промыв фильтры дистиллирован- '
ной водой, содержимое колбы доводят до метки.
Осветление вытяжек. 1. Очистка спиртово-водной
вытяжки, содержащей растворимые сахара: 20 мл вы­
тяжки переносят в мерную к<?лбу на 100 мл, добавляют
туда по 2 мл растворов Карреца, содержимое колбы
доводят дистиллировайной водой до метки и фильтру­
ют через сухой рыхлый фильтр. При исследовании проб,
богатых сахаром, для осветления берут не 20 мл вытяж89
ки, а 10 мл вытяжки, при работе со свеклой даже
5 мл.
,
2.
Очистка вытяжки, полученной после превращения
крахмала в глюкозу: 10 мл вытяжки (5 мл для проб,
богатых крахмалом) пропускают через колонку, запол­
ненную стекловатой (1 'см — нижний слой) и окисью
алюминия (1 см — верхний слой). Затем колонку про­
мывают примерно 5 мл разбавленной хлорной кислоты
(10 мл 52% -ной НСЮ 4+ 2 5 м л воды). Очищенную вы­
тяжку собирают в мерную колбочку на 25 мл И доводят
дистиллированной водой до метки.
Ход определения. 1. В толстостенную пробирку (вы­
сота 20 см, диаметр 2 см) переносят 2 мл очищенной
вытяжки (при работе с комбикормом 1 мл, со свек­
лой — 0,5 мл. Объем вытяжки доводят дистиллирован­
ной водой до 2 мл), добавляют туда 10,77 мл антронового реагента (используют молочную пипетку Гербера),
закрывают стеклянной пробкой-колпачком и перемеши-1
вают.
м'-‘. у . - Ш
2. Пробирки ставят на 20 мин в кипящую водяную
баню, затем сразу охлаждают в холодной проточной
ВОДе.
- ...
.
-У' •
3. Интенсивность окраски, которая прямо пропорци­
ональна концентрации глюкозы, измеряют на спектро­
фотометре «Спекол» при длине волны 625 нм. Д оста­
точно точными являются лишь те измерения, при ко­
торых экстинкция лежит в пределах 0,150—0,500.
4. Каждое определение должно сопровождаться ана­
лизом стандартного раствора и холостой пробы. В хо­
лостую пробу вместо испытуемого раствора вносят 2 мл
:
дистиллированнои
воды, | станд артные
|
■пробы
■ ■ ■ (четырех
■ ■ ■ И
параллелях) — по 2 мл стандартного раствора. Д алее
поступают так же, как с испытуемыми образцами.
Содержание сахара в исследуемом образце рассчифор
0.12-Е-50-100-100
Ег-а-2-Ш
содержание глюкозы в 2 мл стандартного
где 0,12
раствора (мг); Е — экстинкция анализируемой-‘ пробы
(показатель экстинкции анализируемой пробы минус
разведение при полуэкстинкция холостой пробы); 50
чении вытяжки; 100
Щр —— разведение при осветлении вытяжки; Ц — экстинкция стандартного раствора глюкозы
70
100 — перевод в проценты; а — количество раствора са­
харного экстракта, используемого для осветления (мл);
500 — навеска корма (мг); 2 — количество стандартно­
го раствора (мл).
Содержание сахара в пробе следует рассчитывать
для каждого определения, а затем устанавливают сред­
нее значение. Д ля пересчета на содержание крахмала
пользуются коэффициентом 0,9. Содержание крахмала
(% )
-
0,12-2:-100*-25-0,9-100
^аб -2 -5 0 0
*
где 25 — разведение при осветлении вытяжки; б — коли­
чество раствора крахмального экстракта, взятого для
осветления.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е БЕЗАЗОТИСТЫХ
ЭКСТРАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
Содержание безазотистых экстрактивных веществ
(БЭВ) в зоотехническом анализе определяют путем вы­
читания из 100 содержания воды, золы, сырого протеи­
на, сырой клетчатки и сыродо жира (в процентах). Р аз­
ница и покажет содержание в корме безазотистых эк­
страктивных веществ. В группу БЭВ входят сахара, дек­
стрины, камеди, крахмал, гемицеллюлоза, инулин, не­
которые органические кислоты
и
др.
|I
Форма записи и расчет содержания безазотистых
экстрактивных веществ
Содержится (%)
V
Вода первоначальная
Вода гигроскопическая
Общее количество воды
Сырая зола
Сырой протеин
в воздушно- в первоначаль.
сухом вещест­ ном веществе
ве
и
13,50
5,02
18,52
7.00
12,60-
5,80
—
8,09
14,57
* 100 — разведение при получении вытяжки после гидролиза
крахмала. При использовании колб вместимостью 200 мл в фор­
мулу вводят эту величину. Следовательно, содержание крахмала
(%)
С
'( V]
;
I
0,12-Е .200-25-0,9* 100
~ Яа б-2*500
71
Содержится (к )
в воздушносухом
«У*°“
вещ естве
Сырой жир
Сырая клетчатка
.
Итого (а)
Безазотистые экстрактивные
(100 — а)
вещества
в »ервоиачаль1 ом вещ естве
3,12
28,21
59,79
2,70
24,40
65,22
40,21
34,78
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е В КОРМАХ СЫРОЙ ЗО ЛЫ
И М И Н Е РА Л Ь Н Ы Х ЭЛЕМ ЕНТОВ
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е СЫРОЙ ЗОЛЫ
Остаток, получаемый при сжигании навесок корма
в муфельных печах, называется сырой золой. Быстрому
и полному озолению способствует разрыхление корма и
свободный доступ в него воздуха. При сжигании корма
углерод, водород и частично кислород улетучиваются в
виде СО? и паров воды, а зольные элементы (макро- и
микроэлементы) остаются в виде окислов. В сырой золе
корма, кроме минеральных веществ, может содержать­
ся некоторое количество примесей — глины, песка, не­
сгоревших частиц угля.
Начинают озоление медленно при относительно не­
высокой температуре, чтобы исключить возможное раз­
брасывание мелких частиц корма. Это способствует бо­
лее полному сгоранию органического вещества. В про­
тивном случае легкоплавкие соли обволакивают неозоленное вещество и препятствуют его полному сгоранию.
В первый период нагревания происходит сухая перегон­
ка корма, в результате чего стенки тигля покрываются
темным смолистым налетом.
Чтобы избежать улетучивания фосфора, серы и хло­
ристых соединений щелочных металлов, озоление сле­
дует заканчивать при температуре не более 450—500°С
(начало темно-красного каления). Д л я предотвращения
потерь фосфора образцы кормов, богатых белком или
крахмалом (зерно, комбикорма, картофель и др.), це­
лесообразно смешивать в тигле с 1 г растертого нитрата
аммония.
'
-
Ход определения. 1. Фарфоровые тигли прокаливают *
в течение 30 мин — 1 ч в муфеле при температуре темно-красного каления.
2. Тигли из муфеля тигельными щипцами переносят
в эксикатор и охлаждают в течение 1— 1,5 ч.
3. Взвесив на аналитических весах пустой тигель,
записывают его массу, затем насыпают в дигель 2—5 г
исследуемого корма (примерно до половины тигля) и
взвешивают тигель с кормом. По разности показателей
определяют количество анализируемого _корма.
4. Поместив тигель в холодную муфельную печь,
включают ее на слабый нагрев (дверку муфеля откры­
вают для большего доступа воздуха). Через 50—60 мин
после того, как корм в тигле перестал дымить, нагрев
муфеля увеличивают до 450—500°С (передвигают рычаг
реостата). Тигли в муфеле при темно-красном калении
оставляют на 2—3 ч до получения золы светло-серого
цвета.
...
..
Закончив прокаливание, тигли с золой охлаждают
в выключенной муфельной печи, а затем переносят в
эксикатор и взвешивают.
5. Если в золе остаются несгоревшие обуглившиеся
частицы, тигли охлаждают и добавляют в них несколь­
ко капель горячей дистиллированной воды, а затем сно­
ва осторожно прокаливают в муфельной печи.
К остатку в тигле можно добавить в качестве окис­
лителя 1 2 мл 3%-ного раствора перекиси водорода
или несколько капель концентрированной азотной кис­
лоты (или столько же 10%-ного раствора азотнокис­
лого аммония).
6. Для выпаривания окислителя тигли ставят на
плитку с асбестовой сеткой или в слабонагретый му­
фель (80— 100°С).
7. После удаления окислителя тигли с электроплит­
ки снова переносят в муфель и усиливают его нагрев
до 450—500°С ^емно-красное каление). При этой тем­
пературе тигли должны простоять в муфеле 30—60 мин.
После такой обработки остатки угля обычно быстро
сгорают.
8. Если корм озолился не полностью (в тигле оста­
лись черные неозоленные частицы угля), то в охлаж­
денный тигель снова прибавляют дистиллированную,
воду или окислитель и содержимое вновь выпаривают
и прокаливают (обрабатывают 1—2 раза).
73
9. После получения золы тигель с золой ставят в эк­
сикатор, охлаждают и затем взвешивают.
10. Прокаливание в муфеле повторяют в течение
1— 1,5 ч, содержимое тигля охлаждают в эксикаторе и
снова взвешивают.
- 1
Повторные прокаливания необходимы для полного
сжигания вещества. Эту операцию продолжают до тех
пор, пока масса тигля с золой «е станет постоянной.
Д ля полного озоления пробы корма достаточно обычно
5—6 ч. Данные анализа записывают по следующей
форме.
Форма записи результатов определения сырой золы
Определение
первое второе
Масса тигля с образцом корма, г
Масса пустого тигля, г
Навеска корма, г
Масса тигля после прокаливания, г:
первое взвешивание
второе взвешивание
третье взвешивание
четвертое взвешивание
пятое взвешивание
Масса золы, г
«
Содержание золы в воздушно-сухом веществе, %
Среднее содержание золы, %
Содержание в первоначальном веществе, %
Содержание золы в абсолютно сухом веществе, %
Содержание органического вещества, %
Расчет результатов. Содержание сырой золы в воздушно-сухом веществе корма устанавливают по форму' ле:
’ .
.
(а—В)-100
* --------- и — *
где х — содержание золы (% ); а — масса тигля с сы­
рой золой (г); В — масса пустого тигля (г); Н — навес­
ка корма (г); 100 — Коэффициент пересчета в проценты.
Расхождения между отдельными определениями счи­
таются допустимыми, если они не превышают 2%
среднего показателя.
74
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРА ЗОЛЫ
В
Приборы, материалы и основные реактивы.
Весы
аналитические (погрешность взвешивания не более
1Щ Ш 11 муфельная^печь, тигли фарфоровые № 3—4—
5 (ГОСТ 9147—59), эксикатор (ГОСТ 6371—73), мерные
колбы вместимостью 100, 250 и Л ООО мл (ГОСТ 10394—73
и 1770 74), центрифужные пробирки, бюретки вмес­
тимостью 25—50 мл
(ГОСТ 20292—74), пипетки
вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 мл (ГОСТ 20292—74),
^го?иФ Уга» тигельные щипцы, воронки стеклянные
(ГОСТ 9147—59); соляная и-азотная кислоты концент­
рированные и разведенные, серная кислота разведен­
ная, окислители.
Ход работы. Полученную после сжигания золу раст­
воряют в разведенной соляной кислоте (1 :3 ). Для это­
го в тигель с золой добавляют 3—5 капель дистиллиро­
ванной воды и осторожно приливают 10 мл разведен­
ной соляной кислоты (при сжигании 1—2 г корма дос­
таточно 5 мл кислоты). Содержимое тигля перемеши­
вают стеклянной палочкой (при необходимости его наг­
ревают до кипения),-в результате чего зола растворяет­
ся (образуются хлористые соли). Иногда для лучшей
растворимости золы в тигель добавляют несколько ка­
пель азотной кислоты. Используя воронку, раствор без
фильтрования (или через фнльтр, смоченный соляной
кислотой) переливают в мернукУ колбу на 100 мл.
Тигель с остатками золы повторно обрабатывают
5—10 мл соляной кислоты ( 1 :3 ; при необходимости его
подогревают) и содержимое снова^переливают в колбу.
Затем в тигель наливают дистиллированную воду и,
обмыв ею стенки, переносят раствор в колбу. Довольно
часто на дне тигля остается нерастворенный осадок —
это песок. Тигель обмывают дистиллированной водой
несколько раз, объем раствора золы в колбе доводят до
метки и тщательно перемешивают. Получают основной
раствор золы, который можно использовать для опреде­
ления кальция, фосфора, магния, калия, натрия и не­
которых микроэлементов.
П р и м е ч а н и е . При определении калия и микро­
элементов, особенно в тканях животных, целесообразно
использовать сульфатную золу. При этом во время озоления глазурь тигля не разрушается, а зола сплавляет­
ся в меньшей степени.
•
75
Г
В тигель к корму добавляют разведенную ( 1 : 5 ) сер­
ную кислоту (1 мл в расчете на 1 г корма), содержимое
перемешивают стеклянной палочкой, которую затем об­
мывают небольшим количеством воды. Тигель с кормом
нагревают на плитке с асбестовой сеткой (или на воз­
душной бане) и после того, как содержимое высохнет
и обуглится, озоление продолжают в муфеле. Золу за ­
тем пропитывают пятью каплями серной (или азотной)
кислоты, 1 мл соляной и 2 мл дистиллированной воды и
осторожно выпаривают досуха. Д алее золу растворяют
в разведенной соляной кислоте. Трудно растворимые в
соляной кислоте темно-бурые окислы железа и почти не­
растворимые в ней металлическая медь и некоторые
другие элементы переходят при этом в раствор. М етал­
лическая медь может образоваться и при сухом методе
озоления (при температуре выше 500°С).
I
ОКСАЛАТНЫИ МЕТОД О П РЕД ЕЛ ЕН И Я КАЛЬЦИЯ
В КОРМАХ (ЦЕНТРИФ УЖ НЫ Й МИКРОМЕТОД)
■|
Сущность метода заключается в выделении кальция
из приготовленного заранее раствора золы -в виде щ а­
велевокислой соли (СаСгО*), которая в слабокислой
среде (рН 4—5) нерастворима. Осаждение идет по
уравнению:
СаС12+ (Г^Н^гСгО^гЫ ЬЦС^СаСгО*Осаждают щавелевокислый кальций в горячем ук­
суснокислом растворе (рН 4—5). Уксусная кислота пред­
отвращает выпадение солей щавелевокислого магния.
Соль щавелевокислого кальция после промывания
водой растворяют в 5— 10%-ной серной кислоте и пере­
водят в сернокислый кальций по уравнению:
СаС^04+ Н 25 0 4 = С а 5 0 4 + Н 2С 2О 4.
При этом освобождается эквивалентное кальцию ко­
личество щавелевой кислоты, кбторую титруют сантинормальным
раствором
марганцевокислого
калия
(К М п 0 4). При расчетах исходят из того, что 1 мл 0,01 н.
раствора К М п 0 4 соответствует 0,0002 г кальция.
Реактивы и посуда. 10%-ный раствор соляной кисло­
ты (или разведенной в соотношении 1 : 3 ) , концентриро­
ванная азотная кислота, 5%-ный или 10%-ный раствор
серной кислоты, 4%-ный раствор щавелевокислого ам ­
мония, 0,01 н. раствор марганцевокислого калия, 25%76
оаш’
и 2%-ный водные растворы аммиака,
80%-ный и 10%-ный растворы уксусной кислоты, 0,1%ный водный раствор метилоранжа, дистиллированная
вода, центрифужные пробирки, мерные пипетки разной
вместимости, бюретки^на 25 и 50 мл, капельницы, промывалки, водяная баня, центрифуга.
Ход определения. 1. В центрифужные пробирки на­
ливают 3—5 мл раствора золы.
2. В контрольные пробирки вместо раствора золы
наливают по 3—5 мл дистиллированной воды.
3. В пробирки с испытуемым и контрольным рас­
творами добавляют по 2—3 капли индикатора метил­
оранжа.
, •
4Для нейтрализации добавляют несколько капель
10%-ного водного раствора аммиака до перехода ок­
раски раствора из красной в желтую.
5. Д ля создания слабокислой реакции (раствор дол­
жен быть красно-оранжевого цвета) добавляют несколь­
ко капель 10%-ной уксусной кислоты.
6. Пробирки ставят на 2—3 мин на кипящую водя­
ную баню.
. ,
, ;
7. Прибавляют 2—3 мл щавелевокислого аммония
(насыщенный горячий раствор).
8. Пробирки снова ставят на кипящую водяную ба­
ню на 30—40 мин (можно оставить их на ночь без по­
догрева), щавелевокислый кальций оседает при этом на
ДНО-
9. Пробирки центрифугируют в течение 15—20 мин
при 2500 об/мин.
10. Затем их вынимают, раствор осторожно деканти­
руют, следя за тем, чтобы осадок щавелевокислого каль­
ция не был удален вместе с раствором.
11. В пробирки приливаютпо 4 мл 2%-ного раство­
ра аммиака и снова центрифугируют их в течение 15—
20 мин. После этого осадок вновь промывают раствором
аммиака и центрифугируют.
к
12. В пробирки приливают 2—3 мл горячей 5%-ной
или 10%-ной серной кислоты (можно азотной) и содер­
жимое перемешивают стеклянной палочкой. При этом
щавелевокислый кальций переходит в сернокислый.
13. Пробирки ставят на кипящую водяную баню.
14. Содержимое пробирок титруют при температуре
70 80 С с антинорма л ьным раствором марганцевокис­
лого калия до бледно-розового окрашивания, не исчеза—.
у*.
%
‘
1
'*Р
%
1 мин. Можно использовать
ющего в течение 30
0,02 или 0,03 н. раствор К М п 0 4. Количество К М п 04, из­
расходованное на титрование испытуемой и контроль­
ной проб, и все другие данные анализа записывают по
следующей форме.
Форма записи результатов анализа кормов на кальций
оксалатным Методом
Определение
первое второе
Тигель №
‘
, Д
- Маъса тигля с образцом корма, г
Масса пустого ткгля, г
Масса корма, г
Объем раствора золы, мл
Д ля анализа взято раствора золы, мл
Израсходовано КМ 11О 4 при титровании испытуемой
пробы, мл
Израсходовано КМпО* при титроваадш контрольной
пробы, мл
*
м
Содержание кальция з воздушно-сухом веществе, %
Содержание кальция в первоначальном веществе, %
Содержание кальция в абсолютно сухом корме, %
формуле
{ 0 ф $ ,Ж * У* 100
X
УТИ
где х — содержание кальция ( %) ; с — количество мл
0,01 н. марганцевокислого калия, израсходованного на
титрование испытуемого раствора; С\ — количество мил­
лилитров марганцевокислого калия, израсходованного
на титрование контрольной пробы; К — коэффициент
пересчета (1 мл 0,01 н. К М п 0 4 соответствует 0,0002 г
кальция); У —*общий объем раствора, полученный при
растворении золы (мл); У \ — объем раствора золы,
навеска корвзятой для осаждения кальция (м л); а
ма (г); 100 — коэффициент для перевода в проценты.
КОМПЛЕКСОМЕТРИЧЕСКОЕ О П Р Е Д Е Л Е Н И Е КАЛЬЦИЯ
И МАГНИЯ С ТРИЛОНОМ Б
МЕТОДОМ ОБРАТНОГО ТИТРОВАНИЯ
(М ОДИФИКАЦИЯ А. Ф. АРСЕНЬЕВА)
Комплексометрические определения кальция и маг­
ния основаны на способности трилона Б образовывать с
78
I
ионами металлов прочные внутрикомплексные соедине­
ния (требуется Определенный уровень рН). Грамм-ион
комплексона всегда связывается с грамм-ионом металл а (независимо от валентности последнего). При этом
освобождаются 2 грамм-иона водорода.
Поскольку комплексные соединения кальция и маг­
ния с трилоном Б бесцветны и хорошо растворимы в во­
де, эквивалентную точку устанавливают по изменению
окраски особых металлиндикаторов (рМ-индикатор)
Для определения суммы С а ^ - Н и одного магния
наиболее употребителен индикатор хромоген черный
(или смесь хромогена черного с метилротом), а для оп­
ределения кальция — мурексид (лучше применять смесь
мурексида с нафтолом зеленым или метиленовым си­
ним).
Металлиндикатор образует с катионами металлов
"интенсивно окрашенное комплексное соединение, менее
прочное, чем соединение этого катиона с трилоном Б.'
При обратном титровании вводится избыток трилона Б.
Поэтому окрашенное комплексное соединение катионов
металлов с металлиндикаторами образуется только пос­
ле того, как весь трилон Б будет оттитрован. В момент
достижения эквивалентной точки окраска раствора из­
менится. Она обусловлена окраской свободного индика­
тора. Трилонаты кальция и магния образуются лишь в
щелочной среде. Поэтому определяют их в присутствии
щелочного буфера. Гидроксильные ионы буфера обеспе­
чивают определенную ^величину рН титруемого раство­
ра и нейтрализуют ионы водорода, освобождающиеся
при взаимодействии кальция и магния с трилоном Б
Комплексометрическому определению кальция и
магния мешает содержание в растворе ионов меди,
марганца, железа и алюминия. Мешающее влияние фос­
фатов устраняют обратным титрованием. • При исполь­
зовании этого метода сначала определяют содержание
кальция и магния, затем — содержание кальция. Маг­
ний определяют по разности. Прямое определение маг­
ния возможно лишь после выделения из раствора каль­
ция.
Основные реактивы и посуда. 1%-ный водный рас­
твор сульфида натрия (Ыа25<10Н20 ) (хранить его мож­
но не более 5 дней; вместо сульфида натрия можно
применять 0,1%-ный раствор диэтилдитиокарбамата
натрия); 5%-ный водный раствор солянокислого гидро79
ксиламина; 0,1 и 0,01 н. растворы трилона Б; дистил­
лированная вода, проверенная на содержание кальция
и магния; стаканы химические вместимостью 150—
200 мл (целесообразно нанести метки на 50, 70 и
100 мл); бюретки; микробюретка на 5 мл; пипетки раз­
ной вместимости.
^
Реактивы на кальций: индикатор — смесь мурексида с нафтолом зеленым (0,25 г мурексида и 0,85 г наф­
тола зеленого растирают до состояния пудры со 100 г
хлористого натрия), индикатор мурексид (0,2 г мурек­
сида растирают со 100 г хлористого натрия), смешан­
ный индикатор (25 мл 0,02%-ного раствора метилрота
в 60% -ном спирте смешивают с 3 мл 0,1%,-ного водного
раствора метиленового синего), 1 н. раствор едкого нат­
рия, 0,01 и 0,1 н. растворы хлористого или азотнокис­
лого кальция.
~
Д ля приготовления 0,01 н. раствора хлористого кальция • 0,5 г
С аС О з (х. ч. или ч. д. а.) высушивают в течение 1 ч при 110°С, по­
мещают в высокий Химический стакан вместимостью 100— 150 мл
и наливают в него около 5 мл воды и 11 мл 1 н. раствора НС1
(по каплям). По окончании реакции содержимое стакана нагревают
до кипения и переливают в мерную колбу вместимостью 1 л . После
охлаждения раствор разбавляют дистиллированной водой, доводя
его до метки. Можно приготовить приблизительно- 0,1 н. раствор
азотнокислого кальция — Са(ЫОз)§| 4ЙЫЭ (ч. д. а.) и установить
его точную концентрацию обратным комплексометрическим титро­
ванием, пользуясь 0,1 н. раствором трилона. На основании расчета
раствор этот доводят до 0,01 н. концентрации.
Реактивы на магний и обтцее содерж ание кальция
и магния. 0,1 н. или 0,01 н. растворы сернокислого маг­
ния (1,235 г сернокислого магния растворяют в мер­
ной колбе вместимостью
1 л, доводя дистилли­
рованной. водой объем раствора до метки. Мож­
но использовать 0,1 н. или 0,01 н. растворы фиксанала этой ‘соли), хлоридно-аммиачный буферный
.раствор (20 г ЫН4С1 растворяют в 100 мл дистиллиро­
ванной воды, приливают 100 мл 25%-ного^ раствора
ЗМНиОН, разбавляют дистиллированной водой до 1 л и
тщательно перемешивают. Хранят в склянках с притер­
той пробкой); хромоген черный ЕТ-00 (индикатор) су~хой или в виде раствора.
Д ля приготовления сухой смеси индикатора к 100
г соли
МаС1, КС1 или К 23 0 4, тщательно растертой в ступке, прибавляют
небольшими порциями при постоянном и тщательном помешивании
1 г хромогена черного ЕТ-00. Сухой индикатор хранят в темной
б а н к е с притертой пробкой.
Раствор индикатора: 0,5 г хромогена черного растворяют в
10 мл хлоридно-аммиачного буфера и доводят этиловым спиртом
объем содержимого -до 100 мл. Раствор хранят в темной склянке
с притертой пробкой.
Ход определения кальция. 1. 5— 10 мл раствора зо­
лы (в зависимости 7)т содержания кальция) пипеткой
наливают в стакан для титрования, добавляя туда при
необходимости 2—3 капли раствора сульфида натрия.
2. В стакан добавляют 10—25 мл (точно) 0,01 н. ра­
створа трилона Б, а затем 10— 15 мл дистиллированной
воды и 2—3 капли смешанного индикатора.
3. Содержимое стакана нейтрализуют 1 н. раствором
едкой щелочи до изменения красно-фиолетовой окраски
содержимого в зеленую.
4. Приливают в стакан 5—7 или 10 мл 1 н. раствора
едкой щелочи (10% к объему жидкости, чтобы щелочь
в исследуемом растворе была в 0,1 н. концентрации).
5. Вносят в содержимое 1 мл 5%-ного раствора гид­
роксила мина и доводят объем раствора в стакане дис­
тиллированной водой до метки 50, 70 мл или 100 мл.
6. Перед титрованием к содержимому прибавляют
индикатор — около 0,12 г сухой смеси мурексида с наф­
толом зеленым или 0,12 г смеси мурексида с хлористым
натрием и 16 капель смешанного индикатора.
7. Избыток трилона оттитровывают 0,01 н. раствором
хлористого кальция до перехода сине-голубой окраски
раствора в фиолетово-розовую (сиреневатую). Титро­
вать необходимо перед окном, просматривая окраску в
проходящем свете. Яркого солнечного света, искажаю­
щего окраску, надо избегать.
8. Одновременно ставят контроль с раствором три­
лона Б (без раствора золы) для проверки его по 0,01 н.
раствору хлористого или азотнокислого кальция.
Если, например, на титрование 10 мл 0,01 н. раствора трило­
на Б израсходовано 10,2 мл 0,01 и. раствора хлористого или азот­
нокислого кальция, то считают, что на определение взято 10,2 мл
раствора трилона Б (20 мл 0,01 н. трилона Б соответствует 20,4 мл
0,01 н. раствора кальция).
9. Данные анализа записывают (см. форму на с. 82).
10. Содержание кальция в корме рассчитывают по
формуле:
(А—Б) -0,2- V
х=ж
уГН
'
где х — содержание кальция в корме (мг/г или
|
б. З ак аз 7446
г/кг);
81
Форма для записи результатов определения кальция
методом обратного комплексометрического титрования
Определение
первое Ш ’ ое
Номера колб и стаканов
Масса пустого тигля, г
Масса тигля с кормом, г
Количество корма (навеска), г
Общий объем основного раствора золы, мл
Объем раствора золы, взятый для анализа, мл
Объем 0,01 н. раствора трилона Б, взятый для оп­
ределения кальция
Объем 0,01 н. раствора соли Са, пошедший на ти­
трование
свободного
трилона (не связанного
с Са корма)
Содержание Са в воздушно-сухом веществе кор­
ма, мг/г или г/кг
Содержание Са в первоначальном корме, %
Содержание Са в абсолютно сухом веществе корма, %
объем 0,01 и. раствора трилона Б, взятый для оп­
А
ределения кальция; Б — объем 0,01 н. раствора соли
кальция, израсходованной на титрование свободного
трилона Б (не связанного с кальцием к о р м а); 0,2 — ко­
личество кальция (мг), соответствующее 1 мл 0,01 щ
раствора трилона Б, связанного с кальцием корма; V —
общий объем раствора золы (м л); VI — объем раствора золы, взятый для анализа (м л); Н — масса корма ( Г ) .
миП р и м е ч а н и я . 1. При определении кальция
неральных подкормках и комбикормах для птицы (на­
веска 5— 10 г ,.'У = 1 0 0 мл) применяют 0,1 н. растворы
соли кальция и трилона Б. Рекомендуется такж е разво­
дить раствор золы в 5— 20 раз.
фос
2. 1
фором
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е КАЛЬЦИЯ И МАГНИЯ
И РАСЧЕТ СО ДЕРЖ А Н И Я МАГНИЯ
Ход определения. 1. В химический стакан вместимо­
стью 150—200 мл (с меткой на 70— 100 мл) пипеткой
вливают 5 мл раствора золы, добавляют туда 10 мл
82
дистиллированной воды, 10—25 мл (точно) 0,01 н. рас­
твора трилона Б, 3—5 капель метилрота и нейтрализуют
(по каплям) раствором аммиака ( 1 : 1 ) до появления
желтой окраски.
"V
2. Из бюретки приливают к содержимому стакана
15 мл аммиачного буфера (20% к общему объему), з а ­
тем добавляют 1 мл 5%-ного раствора гидроксиламина
и доводят объем дистиллированной водой до метки
70 мл.
3. После этого добавляют 10— 12 капель 0,02%-ного
раствора метилового красного, а перед титрованием —
5 капель хромогена черного (металлиндикатор). При
этом окраска раствора становится зеленой. Если она
оказывается красной, то это свидетельствует о недоста­
тке трилона Б. Тогда добавляют еще 5 или 10 мл этого
раствора.
4. Избыток трилона оттитровывают 0,01 н. раство­
ром сернокислого магния до перехода окраски из зеле­
ной в красно-фиолетовую (сиреневую). Перед концом
титрования раствора, когда появляется переходная се­
ро-зеленая окраска, добавляют еще 1—2 капли хромо­
гена черного. Обычно результаты параллельных титро­
ваний не выходят из пределов 0,05—0,1 мл.
5. Одновременно с этим проводят титрование одно­
го трилона Б с добавлением всех необходимых реакти­
вов и индикаторов. Вместо исследуемого раствора бе­
рут дистиллированную воду.
6. Из результатов титрования одного трилона вычи­
тают результаты титрования исследуемого раствора. По
разнице определяют количество трилона Б, связанное с
кальцием и магнием (1 мл 0,01 н. раствора соответству­
ет 0,1 миллиэквивалента этих катионов).
Расчет содержания магния. Содержание магния рас­
считывают по следующей формуле:
( А - Б - К ) 0,1216 V
х=
йГя
’
где х — содержание магния в корме (мг/г или г/кг);
А — объем раствора трилона Б, взятый для .определе­
ния суммы кальция и магния (мл); Б — объем 0,01 н.
раствора сернокислого магния, израсходованного на тит­
рование избытка трилона Б (мл); К — объем 0,01 н.
раствора трилона Б, связанный с кальцием (данные бе­
рут из анализа кальция в таком же объеме раствора зо6*
83
лы ); 0,1216— количество магния, соответствующее 1 мл
связанного с ним 0,01 и. трилона Б (мг); V — общий
объем раствора золы (м л); У \ — объем раствора золы,
взятый для определения суммы кальция и магния (мл);
Н — масса корма (г).
. *' Щ .
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е ФОСФОРА
Определение фосфора по интенсивности окраски
фосфорно-молибденовой сини. Этот метод основан на
[авать с молибдесвойстве неорганических фосф
новокислым аммонием комплексные соединения, кото­
рые затем восстанавливаются сульфитом натрия и
гидрохиноном до молибденового окисла, окрашенного в
голубой цвет (так называемая молибденовая синь) . При
этом интенсивность синего окрашивания пропорциональ­
на количеству фосфора в растворе.
Д ля определения фосфора можно использовать рас­
твор золы, полученной сухим озолением (при температу­
ре 450—500°С) (методику озоления и получение основ­
ного раствора золы см. на страницах 75—76).
Д ля определения фосфора из первоначального (ос­
новного) раствора золы готовят после соответствующе­
го разведения рабочие растворы (табл. 6).
■г
Таблица
6
Объем раствора золы, используемого для колориметрического
определения фосфора
Сухое озоление
84
взято на
анализ
Сено, солома, силос, тра­
ва, корнеклубнеплоды
Зерно злаковых и бобо­
вых
Жмыхи, шроты, дрож ­
жи,
отруби,
комби­
корм
Мука
мясо-костная и
рыбная
общее коли­
чество рабо­
чего раствора
Корма (в воздушно-сухом
состоянии)
2си
О
*
«б
3а
т
X
разведение
раствора
се
первоначаль­
ный (основ­
ной)
объем раствора золы (мл)
100
2
200
2
2
100
Без
разве­
дения
2
100
25 до 50
2
100
10 до 100
1000
2
2
100
2 до 100
5000
2 ‘
Реактивы, посуда, оборудование. Основной эталон­
ный стандартный раствор фосфора (4,393 г химически
чистого однозамещенного фосфата калия — КН 2РО 4,
предварительно вы ед ен н о го в эксикаторе над серной
кислотой до постоянной массы, растворяют в дистилли­
рованной воде в мерной колбе на 1 л. К готовому рас­
твору прибавляют 5 мл хлороформа); рабочий стандарт­
ный раствор, в 1 мл которого содержится 0,01 мг фос­
фора (основной раствор разводят в день анализа в 100
раз); 5%-ный раствор, молибденовокислого аммония
(25 г молибденовокислого аммония растворяют прибли­
зительно в 300 мл дистиллированной воды и, если
нужно, фильтруют. В другой колбе к 125 мл дистилли­
рованной. воды приливают 75 мл концентрированной
серной кислоты. Растворы смешивают, охлаждают и
доводят,до 500 мл дистиллированной водой); 20%-ный ра­
створ сернистокислого натрия (сульфит натрия) (гото­
вят на 7 — 10 дней из сухой безводной соли ЫагЗОз; хра­
нят в хорошо закрытой склянке); 1 %-ный водный рас­
твор гидрохинона (добавлена 1 капля концентрирован­
ной серной кислоты); содово-сернистый раствор (20 мл
20 %-ного раствора сульфита натрия смешивают перед
работой со 100 мл 2 0 %-ного раствора углекислого нат­
рия. Перед употреблением фильтруют. Раствор несто­
ек); 0,50%-ный амидол на 5%-ном растворе сульфита
натрия; колбы мерные- вместимостью 100 мл; пипетки
мерные на 1, 2, 5 и 10 мл; бюретки на 25 и 50 мл; фото­
электроколориметры или визуальный колориметр.
Ход определения. 1. Берут мерные колбы вместимо­
стью 100 мл. В предназначенные для стандартных рас­
творов фосфора три колбы из пипетки наливают 2, 5 и
10 мл рабочего раствора фосфора (0,02; 0,05; 0,10 мг
фосфора); в две колбы для приготовления «нулевого
раствора» — по 50 мл дистиллированной воды; в колбы
■ для испытуемых проб кормов — раствор золы
(см.
табл. 6 ).
2. Во все колбы добавляют до 50 мл дистиллирован­
ную воду и приливают по 2,5 мл раствора молибдено­
вокислого аммрния. Раствор в колбах перемешивают и
оставляют на 5 мин.
3. Во все колбы вносят по 2,5 мл раствора сульфита
натрия. Колбы встряхивают, через 10 мин в них добав­
ляю т.по 2 мл раствора гидрохинона. Содержимое тща­
тельно перемешивают.
4. Объем раствора в колбах доводят до метки
100 мл, тщательно перемешивают и оставляют на 16—
24 Ч.
■' ''
Вместо раствора сульфита натрия можно использо­
вать содово-сернистый раствор, который осторожно по
стенке приливают в колбочки (по 5 мл) после раствора
гидрохинона. Содержимое колбочек осторожно несколь­
ко раз перемешивают, пока не прекратится его вспени­
вание. Вместо раствора сульфата натрия и гидрохинона
применяют смесь 0,5%-ного раствора амидола на 5%-ном
•растворе сульфита натрия (по 2,5 мл) (при использова­
нии содово-сернистого раствора или амидола колоримет­
рию окрашенных растворов можно проводить через
60 мин).
.
: \
^ •*:'
5. Проводят колориметрию растворов, окрашенных в
синий (голубой) цвет. Интенсивность окраски испытуе­
мого и .стандартного растворов сравнивают в колори­
метре Дюбоско или в фотоколориметрах ФЭК-М, ФЭК-Н
и др.
Расчет содержания фосфора при использовании ви­
зуального колориметра. Содержание фосфора в корме
при сжигании методом сухого озоления и использова­
нии колориметра Дюбоско рассчитывают по формуле:
С-Нст'УР
Х==
Нх - У1 а
’
где * — содержание фосфора в исследуемом корме
(мг/г или г/кг); С — количество фосфора в стандарт­
ном растворе (мг); Я ст — высота стояния стандартного
раствора в стаканчике колориметра, установленная по
шкале; Н х — высота стояния испытуемого раствора;
* V — общий объем раствора золы после разведения
(см. табл. 6);
объем раствора золы, взятый для
колориметрического определения фосфора; а — навеска
корма (г); Р — разведение подготовленного для коло­
риметрии окрашенного раствора.
Индекс Р показывает, во сколько раз объем (разведение) ис­
пытуемого раствора больше стандартного раствора фосфора. Р а з ­
водить подготовленный к колориметрии испытуемый раствор при­
ходится только в случае значительной разницы в интенсивности ок­
раски между испытуемым и стандартным растворами.
Если, например, объем стандартного раствора фосфора %равен
100 мл, а объем испытуемого (окрашенного) раствора золы корма
перед колориметрией — 200 мл,, то Р равно 2 (200 м л : 100 мл).
Чаще всего Р равняется 1 (100 м л : 100 мл).
86
Результаты анализа и колориметрии записывают в
приведенную ниже форму.
Форма для записи результатов анализа корма
на содержание фосфора при использовании
визульнрго колориметра Дюбоско
Определение
первое второе
Масса тигля с навеской корма, г
Масса пустого тигля, г
Масса корма, г
Разведение, мл
Для анализа взято, мл
Взято стандартного раствора КН2Р 0 4, мл
Высота стояния стандартного раствора
Высота стояния испытуемого раствора
Содержание фосфора, %:
в воздушно-сухом корме
в первоначальном веществе
в абсолютно сухом веществе корма
Особенности определения фосфора при использова­
нии фотоэлектроколориметра. При использовании вместо визуального колориметра фотоэлектроколориметра
ФЭК-М или ФЭК-Н строят калибровочную кривую и по
ней подсчитывают содержание фосфора. Д ля этого в
мерные колбы на 100 мл берут 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 и
15 мл стандартного рабочего раствора фосфора (в 1 мл
его содержится 0,01 мг фосфора). Затем, как и при оп­
ределении фосфора в кормах, добавляют в колбы рас­
творы молибденовокислого аммония, сульфита натрия и
гидрохинона (или амидол, или содово-сернистый р а о
твор). Доведя объем содержимого до 100 мл, оставляют
колбы с ним на 16—24 ч, после чего колориметрируют
с красным светофильтром. При этом используют стакан­
чики диаметром 30 мм.
Для построения калибровочной кривой стандартные
растворы колориметрируют 3—4 раза в разные дни с
одними и теми же реактивами. Затем вычерчивают кри­
вую. По горизонтали располагают данные о концентра­
ции фосфора (мг цли мкг), а по вертикали — показате­
ли колориметра. Нуль прибора электрофотоколориметра устанавливают по раствору с одой и реактивами
(нулевой раствор без фосфора).
87
К каждой партии анализируемых проб корма целе­
сообразно готовить 3 стандартных раствора фосфора
(содержащих соответственно 0,02; 0,05 и 0,10 мг фосфо­
ра) для построения так называемой переменной или
контрольной шкалы и для вычисления* поправочного ко­
эффициента К.
Схему подготовки к колориметрии испытуемого р а­
створа золы, раствора для установки показания «0» фо­
токолориметра и стандартного раствора дает препода­
ватель.
При использовании фотоэлектроколориметра для
расчета содержания фосфора окрашенные растворы колориметрируют и записывают показания шкалы фото­
колориметра, затем по калибровочной кривой находят
количество фосфора (мг), соответствующее показаниям
шкалы фотоколориметра. Содержание фосфора в кор­
мах при сухом озолении определяют по формуле:
С-У.р-К
где х — содержание фосфора (мг в 1 г или г в ч1 кг кор­
м а); С — количество фосфора в анализируемом раство-,
ре золы, установленное на калибровочной кривой в соот­
ветствии с показателями фотоколориметра (мг); V —
общий объем раствора золы после разведения (мл);
| | — объем раствора золы, взятый для колориметриче­
ского определения фосфора (мл); Р — разведение подготовленного к колориметрии окрашенного раствора зо­
лы (по сравнению со стандартным раствором, объем ко­
торого равен 100 мл); а — навеска корма (г); К
поп­
равочный коэффициент на показания ранее подготов­
ленной стандартной шкалы; его следует применять при
расчетах, если имеются расхождения с калибровочной
шкалой и не вычерчивают новый график (новую пере­
менную ш калу).
Коэффициент К рассчитывают по отношению суммы фактичес­
ких концентраций фосфора в приготовленных стандартных раство­
рах к сумме концентрации фосфора, определенных по показаниям,
электрофотоколориметра и ранее подготовленной стандартной ш ка­
лы на фосфор.
Например:
0,170 мг Р (0,02+0,05+0,100 мг) ==пя?-
"0,200 мг(0,024+ 0,058+ 0,118 мг)
Результаты анализа записывают в приведенную ни88
после чего рассчитывают содержание фосфора в корме.
Форма для эайиси результатов анализа корма
на содержание фосфора при использовании
фотоэлектроколориметра
Определение
первое, второе,
№ тиг­ № тиг­
ля
ля
Масса тигля с образцом корма, г
Масса пустого тигля, г
Масса корма, г
„
;
^
Объем основного раствора золы, мл
Разведение раствора золы
Общий объем раствора золы, мл
Объем раствора золы, взятый д л я анализа, мл
Количество фосфора, установленное по калибровоч­
ной кривой в соответствии с показанием колори­
метра, мг
Коэффициент, поправка на шкалу
Содержание фосфора:
в воздушно-сухом корме, установленное по фор­
муле, мг/г или г/кг
в воздушно-сухом корме, %
в первоначальном корме, %
в абсолютно сухом веществе корма, %
Ванадомолибдатный метод определения
фосфора
(из растворов золы). Метод основан на образовании в'
кислой среде фосфорнованадомолибдатного комплекса
желтого цвета. При концентрации фосфора, равной 1—
26 мкг/мл (0,001—0,020 мг/мл), интенсивность окраски
пропорциональна содержанию элемента. Реакцию сле­
дует проводить в 0,5—0,9 н. (до 1,5 н.) раствора азот­
ной кислоты.
, *
Р е а к т и в ы , п о с у д а , о б о р у д о в а н и е . Кон­
центрированная азотная кислота и ее раствор в дистил­
лированной воде (1 :2 ; раствор № 1); ванадиевокислый
аммоний—мета (ГОСТ 9336—60, ч.д. а.) и его 0,25%-ный
раствор (2,5 г соли растворяют в кипящей дистил­
лированной воде, после охлаждения добавляют 20 мЛ
концентрированной азотной кислоты и доводят дистил­
лированной водой объем раствора до 1 л; раствор № 2);
5%-ный раствор молибденовокислого аммония (50 г
соли растворяют в горячей дистиллированной воДй и
после охлаждения доводят водой объем до 1 л; растйор
89
№ 3); реагирующая смесь (растворы № 1, 2 и 3 смеши­
вают в соотношении 1 : 1 : У Смесь может храниться в
темном прохладном месте до 6 месяцев). Запасной
стандартный раствор фосфора* (4,393 г КН2Р 0 4 х. ч. •
растворяют в мерной колбе на 1000 мл в дистиллиро­
ванной воде и доводят объем до метки. В 1 мл запас­
ного раствора содержится 1 мг фосфора); мерные кол­
бы на 50, 100, 500 и 1000 мл (ГОСТ 1770—74); мерные
пипетки на 5, 10, 15, 20 мл (ГОСТ 202—92—74); мерные
цилиндры на 1000 мл (ГОСТ 1770—74); фотоэлектроко­
лориметр**, электроплитка с закрытой спиралью.
Х о д о п р е д е л е н и я . 1. В конические или мерные
колбы на 50 мл .(из термостойкого стекла) вливают пи­
петкой с резиновым баллончиком или шприцем-доза­
тором по 25 мл образцовых растворов № 1, 3, 5 и -7
(см. табл. 7; при построении градуировочного графика
используют все 8 растворов). В колбочки, предназна­
ченные для анализируемых проб, приливают пипеткой с
баллончиком по 5— 10 (при навеске корма 5 г) или по
25 мл (при навеске 1—2 г) раствора золы. При 5 10 мл
раствора золы добавляют по 5—7 капель 10%-ной со­
ляной кислоты и по 20— 15 мл воды. Одновременно про­
водят «холостое» определение в растворе, полученном
при обработке тигля без золы корма.
2. В колбы с образцовыми и испытуемыми раствора­
ми добавляют по 5 мл раствора азотной кислоты (1 :2 ;
раствор № 1); колбы ставят на плитку, доводят раство­
ры до кипеЪия и затем охлаждают.
3. Во все колбы вносят по 15 мл реагирующей смеси,
содержимое взбалтывают, доводят его объем дистилли­
рованной-водой до метки (или сначала переливают из
конической колбочки в мерную, обмывают 10 20 мл во­
ды). Растворы в мерных колбах перемешивают и остав­
ляют на 30 мин.
рррш р
4. Фотометрируют, используя синий светофильтр с
максимумом пропускания 450—500 нм и кюветТл с толщ
* Используют для приготовления шкалы образцовых растворов,
для чего в мерные колбы на 500 мл вливают определенное коли­
чество запасного стандартного раствора и по 5 мл 20%-ного раство­
ра соляной кислоты. Затем объем раствора в колбах доводят дис­
тиллированной водой до метки и перемешивают.
** Максимальное светопоглощение наблюдается в ультрафиоле­
товой части спектра при 315 нм. Колориметрируют при 460 500 нм,
* используя синий светофильтр. Окраска устойчива в течение пример­
но 48 ч.
90
Таблица
7
Шкала образцовых растворов
Номера колб
.
Показатели •
|
■* -| - •2*П•- «г- *■
>щШ
Ш
ф
■
-
................■ " ‘ ^
0
^
-
1.
.
.
.
.
_
■
■
2
_
3
.
.
..
_
_
У
4
-
-
—
'
.
.*
—
_____.
•
*
_ _ _ , . . .
6
7
8
0
б
8
10
16
0
6
8
10
16
0
5
1
Объем
запасного
стандартного
раствора
Содержание фос­
фора в 500 мл
образцового рас­
твора, мг
Содержание фос­
фора в 25 мл
образцового рас­
твора,
взятого
для колориметрин, мг
0
1
2
3
4
0
1 : 2
3
1А 1-
9
-
-
0 0,05 0,10 0,15 0,20 0,30 0,40 0,50 0,80 0
щнной просвечивающего слоя 20—30 мм. Д ля установки
колориметра используют «нулевой» раствор шкалы. .
5. Содержание фосфора в анализируемом растворе
золы корма определяют по градуировочному графику,
построенному по результатам фотометрирования образ­
цовых растворов шкалы. На оси абсцисс графика откла­
дывают содержание фосфора во всем объеме (50 мл)
образцовых растворов шкалы, подготовленных к фото­
метрии, а на оси ординат — их оптическую плотность.
Калибровочную шкалу проверяют для каждой новой
партии испытуемых растворов. Рассчитывают содержа­
ние фосфора по формуле:
С-V
, Х=>-Т7------VI-а .
(С-В)-У
ИЛИ
Х = К ------ п ----- — .
У х-а
где х — содержание фосфора (мг в 1 г или г в 1 кг кор­
ма); С — количество фосфора в-анализируемом объеме
(в 50 мл колориметрируемого окрашенного- раствора),
установленное по калибровочной кривой в соответствии
с показаниями фотоколориметра (мг); В — содержание
фосфора, найденное по графику, в объеме «холостого»
раствора, взятого для анализа; V — общий объем рас­
твора золы (мл); Ух — объем раствора зольг, взятого для
определения (мл); а — масса корма (г).
91
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е АЗОТА, ФОСФОРА, КАЛИЯ,
КАЛЬЦ И Я И НАТРИЯ ИЗ О Д Н О Й НАВЕСКИ
КОРМА
Д л я подготовки пробы корма к анализу используют
один из методов мокрого озоления: а) концентрирован­
ной серной кислотой с добавлением в качестве окисли­
теля хлорной кислоты; б) смесью концентрированней
серной кислоты, содержащей селен, и 30%-ного раство­
ра пергидроля (Н 2О 2).
Реактивы, посуда, оборудование. Концентрированная
серная кислота (ГОСТ 4204—77, х. ч.); селен (ТУСЗ
1 }—65, ч.); серная кислота, в 1 л которой содержится
5 г селена (аморфный селен растворяют при нагрева­
нии в колбе Кьельдаля в концентрированной серной
кислоте. Раствор должен быть бесцветным и прозрач­
ным); 30%-ный водный раствор перекиси водорода
(ГОСТ 10929—64); хлорная кислота (МРТУ 6—09—
6604—70); колбы Кьельдаля вместимостью 500 мл; мер­
ные пробирки на 100 мл из термостойкого стекла с про­
бирками или мерные колбы из термостойкого стекла на
100 мл (или колбы Кьельдаля вместимостью 100 —
250 мл)’; дозаторы на 3, 5 и 15 мл с погрешностью до­
зирования не более 1 %'; пипетки с грушей или дозаторы
на 0,5 и 1 мл; поршневая пипетка или пипетка с грушей
на 2 мл с погрешностью дозирования не более 1%; мер­
ные цилиндры на 10 мл; воронки или стеклянные пробки;
мерные колбы на 100 и 250 мл; аналитические или торзионные весы (погрешность взвешивания не более
0,5 м г ); технические весы нагревательные блоки для про­
бирок или электроплитка с нагревом до температуры
400°С; установка для озоления корма в вытяжном шкафу.
Ход озоления. Озоление серной и хлорной кислотами.
1 На аналитических весах в циЛиндрике на 10 мл или
пробирке отвешивают примерно 0,2 или 0,5 г корма
(можно использовать торзионные весы).
2.. Содержимое цилиндрика аккуратно переносят в
колбу Кьельдаля вместимостью 100—250 мл. По р аз­
нице между массой цилиндрика с кормом и без корма
определяют массу взятого для анализа корма.
3. В колбу с кормом вносят 1 мл дистиллированной
воды и осторожно приливают по 3 или 7,5 мл серной
кислоты (без селей а или с селеном 1,5 мл кислоты на
92
0,1 г корма), проверенной на содержание аммиачного
азота и фосфора. Прибавляют туда осторожно 10 или
20 капель (0,2 или 0,5 мл) хлорной кислоты. Содержи­
мое колб (или пробирок) аккуратно перемешивают
круговыми движениями и оставляют на 1 ч и более
(лучше на ночь) для обугливания органического веще­
ства корма. Колбы (пробирки) закрывают стеклянными
пробками или воронками.
4. Колбы (или пробирки йа штативе) ставят в на­
клонном положении на газовую горелку, электроплитку
или песчаную баню и нагревают в течение 15—30 мин
на слабом огне при температуре 100— 150°С до образо­
вания однородной жидкой черно-бурой массы. Затем
температуру постепенно увеличивают (до 300—400°С)
и продолжают озоление (15—20 мин) до полного освет­
ления жидкости в колбе. Если за это время раствор не
стал светлым, то колбу снимают с огня, дают ей охла­
диться и осторожно вносят пипеткой 1—2—3 капли
хлорной кислоты. Содержимое после взбалтывания про­
должают нагревать до просветления жидкости и интен­
сивного образования в колбе белого дыма серного ан­
гидрида. Кипение серной кислоты в колбе должно быть
все время слабым (сильное кипение ведет к потере
азота). В процессе озоления содержимое колбы часто
перемешивают (оставлять без наблюдения его нельзя).
5. По окончании озоления колбу (или пробирку) сни­
мают с огня и содержимое охлаждают до комнатной
температуры, после чего горло колбы обмывают дистил­
лированной безаммиачной водой (воду приливают по
стенке осторожно, так как реакция серной кислоты с
водой протекает бурно). Содержимое затем осторожно
переливают в мерную колбу на 100 мл (при навеске
0,2 г и объеме серной кислоты, равном 3 мл) или 250 мл
(при навеске 0,5 г и объеме кислоты 7,5 мл), цри этом
колбу Кьельдаля обмывают дистиллированной водой до
10 раз. Объем раствора в мерной колбе доводят до мет­
ки и тщательно его перемешивают. В результате будет
получен раствор примерно 1 н. концентрации по серной
кислоте (0,03 мл кислоты в 1 мл раствора). Его можно
использовать для определения азота, фосфора, калия,
кальция и некоторых других элементов (кроме серы и
хлора).
*
6. Д ля проверки воды и реактивов на содержание
азота, фосфора и других элементов обязательно прибй93
«
гают к контрольным сжиганиям без корма (холостая
проба).
П р и м е ч а н и я . 1. При массе образца корма около 1 г для
озоления используют 10 мл серной кислоты и 1,5 мл хлорной кис­
лоты (хлорную кислоту добавляют порциями, см. выше). Объем
минера лизата ‘ доводят до 100 мл, затем разводят водой в 5 раз
(10 мл до 50 мл) и используют для определения азота, фосфора,
кальция, калия. Общий объем раствора золы составит 500 мл.
В 4 мл его будет содержаться 0,03 мл серной кислоты (примерно
1 н. концентрации серной кислоты).
$
2. Хлорная кислота — сильный окислитель. Ее передозировка
при озолении может привести к частичному выделению азота в мо­
лекулярной форме.
3. При колориметрическом определении фосфора в виде фос­
форно-молибденовой гетерополикислоты добавление к раствору
восстановителей (амидола, аскорбиновой кислоты, гидрохинона и
сульфита натрия, *эйконогена и др.) дает комплексное соединение
синего цвета. На интенсивность окраски этого соединения влияет
кислотность раствора. В этом случае часть (5— 10 мл) исходных
растворов, полученных в процессе мокрого озоления с серной кис­
лотой, надо дополнительно разводить дистиллированной водой в
4 —5 раз. - Можно такж е серную кислоту нейтрализовать ЫаОН.
Д ля этого
часть исходного раствора (10—25 мл) нейтрализуют
20%-ным раствором ЫаОН в присутствии фенолфталеина. Если при
этом выпадет осадок, то его растворяют несколькими каплями
5 % -ной соляной кислоты. Объем жидкости в колбе № 2 доводят до
метки и перемешивают.
.
2
При расчетах содержания фосфора учитывают общий ооъем
раствора золы корма.
Озоление корма серной кислотой с селеном и пер­
гидролем (по прописи Ц И Н А О ). 1. На аналитических
или торзионных весах взвешивают около 0,2 г воздуш­
но-сухого корма, измельченного и просеянного через си­
то с отверстиями 1 мм, и переносят его в мерные про­
бирки из термостойкого стекла или колбы Кьельдаля.
2. Пробу корма заливают 2 мл 30%-ного раствора
пергидроля.
• -у
3. Через 1,5—2 мин в пробирку (колбу) приливают
3 мл концентрированной .серной кислоты, содержащей
селен, и содержимое слегка встряхивают.
'4 . Пробирки помещают в холодные нагревательные
блоки с автоматической регулировкой температуры
(или в песочные бани и др.) и в течение 0,5 1 ч повы­
шают температуру до 380°С.
5. Озоление продолжают до полного обесцвечивания
раствора. Д ля озоления требуется 1,5—2 ч.
6. После осветления раствор охлаждают, доводят
дистиллированной Ъ о д о й д о 100 мл и перемешивают.
94
Используют его в качестве исходного раствора для оп­
ределения азота; фосфора, калия и кальция.
7.
Одновременно проводят все стадии «холостого»
анализа (без анализируемого образца материала).
Исходные растворы можно также использовать для
определения азота, фосфора, калия и кальция с помо­
щью автоанализаторов проточного типа.
О П РЕД ЕЛ ЕН И Е АЗОТА
ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕАКЦИИ
ИНДОЛФЕНОЛЬНОЯ ЗЕЛЕНИ (ПО МЕТОДИКЕ ЦИНАО)
•.
г >•.
%
/ • '’
_ф г;
Определение азота в растворах после мокрого озоления кормов основано на образовании ионом аммония
окрашенного индолфенольного соединения, интенсивность
которого регистрируется фотоколориметром. В начале
реакции ион аммония окисляется хлором до хлорамина,
которой образует с салицилатом натрия сине-зеленое
индол фенольное соединение с максимумом светопоглощения около 655 нм. В качестве катализатора этой ре­
акции используют нитропруссид натрия.
Реактивы, посуда, оборудование. Хлористый аммо­
ний (ГОСТ 3773—72, х. ч.); запасной стандартный ра­
створ аммония (1,910 г хлористого аммония растворя­
ют в безаммиачной дистиллированной воде, объем рас­
твора доводят водой до 1 л. В 1 мл такого раствора
содержится 0,5 мг азота)*. Рабочие образцовые растворы
хлористого аммония для построения калибровочной
шкалы на азот**;- гидроокись натрия (ГОСТ 4328—77,
х. ч.); салициловокислый натрий (ГОСТ 17528—72, х. ч.)
и нитропруссидный (ГОСТ 4218—48, х. ч. или ч. д. а.)
*
Д ля работы на автоанализаторе применяют более концентри­
рованный запасной эталонный раствор хлористого аммония, в I мл
которого содержится 2,5 мг азота.
** Готовят образцовые растворы в мерных колбах на 100 мл,
в которые приливалот определенные объемы запасного стандартного
раствора (табл. 8). Затем каждую колбу доливают до половины
объема дистиллированной водой и прибавляют в них по 3 мл кон­
центрированной серной кислоты, содержащей селен, после чего Жид­
кость перемешивают. Охладив растворы, доводят их объем в колбах
дистиллированной водой до метки и снова перемешивают. Для срав­
нения используют нулевой раствор шкалы.
Если при озолении в качестве окислителя используют хлорную
кислоту, то для создания определенной кислотности применяют
концентрированную серную кислоту без селена (по 3 мл кислоты
на 100 мл образцового раствора или 0,03 мл в 1 мл раствора). \
%
«
гг:?:
^
-г.-.,
■>
натрий; сегнетова соль (виннокислый калий — нат­
рий) (ГОСТ 5845—70, х. ч. или ч. д. а.); трилон Б
(ГОСТ 10652—73, х. ч. или ч. д. а.); запасной окра­
шивающий раствор*; рабочий окрашивающий раствор**;
хлорная техническая известь (ГОСТ 1692—58); угле­
кислый безводный натрий (ГОСТ 83—63, х. ч.); со­
ляная кислота (ГОСТ 3118—67, х. ч.); йодистый к а­
лий (ГОСТ 4232—74, х. ч.)ксерноватистокислый натрий
(тиосульфат, фиксанал; ГОСТ 4215—66); запасной р а­
створ гипохлорита натрия***; рабочий раствор гипохло­
рита натрия с концентрацией хлора 0,125%**** (исполь­
зуют для анализа в течение дня). Мерные колбы на 50
и 100 мл; химические стаканы на 100, 250 и 500 мл;
шприц-дозатор или микропипетка вместимостью 0,5 мл;
*
56,7 г салнцилата натрия, 16,7 г сегнетовой соли и 26,7
гидроокиси натрия растворяют (поочередно) примерно в 700 мл
дистиллированной воды. Раствор кипятят около 20 мин для удале­
ния следов аммиака. После охлаждения в содержимое добавляют
0,4 г нитропруссида натрия и доводят объем раствора до 1 л дис­
тиллированной водой. В хорошо закрытой бутыли реактив может
храниться в холодильнике до 1 месяца.
** К 50 мл запасного окрашивающего раствора приливают
410 мл дистиллированной воды и 10 мл 2 н. раствора ЫаОН (80 г
Ш О Н в 1 л), затем добавляют 0,94 г трилона Б. Раствор готовят
в день проведения анализа.
*** 150 г хлорной извести смешивают в стакане на 500 мл с
250 мл дистиллированной воды. В другом стакане 105 г углекислого
натрия растворяют в 250 мл дистиллированной воды. Оба раствора
сливают вместе при постоянном перемешивании. Масса сначвла гус­
теет, затем разжижается. Суспензию оставдают на 1 2 суток для
отстаивания, затем прозрачную жидкость сливают и фильтруют или
отсасывают на воронке Бюхнера.
В полученном реактиве определяют концентрацию
активного
хлора. Д ля этого 1 мл прозрачного фильтрата разбавляют в кони­
ческой колбе дистиллированной водой >до 40—50 мл, прибавляют I г
■ Йодистого калия и 10 мл 1 н. раствора НС1. Образовавшийся при
этом йод оттитровывают 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (гипо­
сульфита), приготовленного из фиксанала, до исчезновения вишневой
окраски (1 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия соответствует
0,00355 г хлора).
'
Например, на титрование 1 мл запасного раствора гипохлорита
натрия пошло 22,2 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия. Следова­
тельно, в 1 мл запасного раствора содержится 0,0788 г хлора
{0,00355 г X 22,2 мл). Таким образом, концентрация хлора в растворе
гипохлорита составляет 7,88% (7,88 г хлора в 100 мл раствора).
В склянке из темного стекла со шлифом запасной раствор гипо­
хлорита натрия с концентрацией активного хлора 6— 10% сохраняет­
ся в холодильнике в течение года.
**** Запасной раствор гипохлорнта натрия разбавляют дистил­
лированной водой до 0,125%-ной концентрации. Объем запасного
96
шприц-дозатор вместимостью на 2,5 мл или градуиро­
ванные пипетки (погрешность дозирования не более
1%) ; дозатор вместимостью 50 или 47 мл либо мерный
цилиндр (погрешность дозирования не более 1%); фо­
тоэлектроколориметр ФЭК-М или ФЭК-56; автоанали­
затор проточного типа (при определении азота автома­
тизированным методом).
Ход определения азота. 1. В химические стаканы
вместимостью 150 мд (или цилиндры и мерные колбы
на 100 мл) отбирают шприцем-дозатором или микропи­
петкой по 1 мл раствора зольГ анализируемого корма.
В другие стаканы из образцовых растворов с известным
содержанием азота (табл. 8) берут также по 1 мл
раствора золы.
Из контрольных колб в отдельные стаканы или колбы
берут для холостого определения (без озоления корма)
по 1 мл раствора.
2. В стаканы или мерные колбы с испытуемыми и
образцовыми и контрольными растворами приливают
по 94 мл рабочего окрашивающего раствора, после чего
содержимое перемешивают.
3. Прибавляют шприцем-дозатором по 5 мл 0,125%-но­
го рабочего раствора гипохлорита натрия, растворы
снова перемешивают и оставляют на 1 ч прл комнатной
температуре до полного,.развития окраски.
4. На фотоколориметре измеряют оптическую плот­
ность растворов при длине волны 655 нм, используя кю­
вету с толщиной просвечивающего слоя 10 мм.
раствора» который следует взять для получения 100 мл рабочего ра­
створа гипохлорита натрия, рассчитывают по формуле:
.
0 125-100
I
К
*
где х — объем запасного раствора (мл), вносимого в колбу на
100 мл; К — содержание хлора в запасном растворе, % (в примере,
приведенном в сноске на странице 96, 7,88%). В данном примере
следует взять 1,58 мл запасного раствора
,
0 125-100
7,88
При определении азота на автоаналнзаторе проточного типа-.ис­
пользуют раствор гипохлорита натрия с концентрацией хлора, рав­
ной 0,05%.
7. З а к а з 7446
97
Таблица
8
Ш кала образцовых растворов хлористого аммония
Номера колб
^
Показателя
1
2
3
4
6
*
Т
8
«
Объем
запасного
стандартного ра­
16
20
24
12
28
О 2
4
8
створа, мл
Содержание азота
в 100 мл образ-!
цового
раство­
14
12
б
8
4
10
0 1
ра, мг
2
Содержание азота
в 1 мл образцо­
вого
раство­
0 0.010Ю, 020 0,040 0,060 0,08010,100 0,120 0,140
ра, мг
Содержание азота
в 0,5 мл образ­
цового раствора
(в 50 мл подго­
товленных к ко­
лориметрии об­
разцовых
рас­
0 0,005Ю,010Ю,020 0,030 0,040 0,050 0,060 0.070
творов), мг
5.
Содержание азота в анализируемом растворе оп­
ределяют по градуировочному графику, построенному по
результатам фотометрирования образцовых растворов
шкалы. Д л я определения содержания азота в воздуш­
но-сухом веществе корма используют формулу:
(а-К) .У.100
х==
уГя
*
где х — содержание азота в исследуемом корме (%} {
а — найденное по градуировочному графику количество
азота в 0,5 мл взятого для анализа минерализата кор­
ма (мг); К — количество азота в том же объеме конт­
рольного («холостого») раствора, найденное по градуи­
ровочному графику (мг); Н — навеска корма
(мг);
1 — количество минерализата корма, взятое для коло­
риметрического определения азота (м л); V — общий
объем минерализата корма (м л); 100 — коэффициент
для пересчета в проценты.
98
О П РЕД ЕЛ ЕН И Е ФОСФОРА (ПО МЕТОДИКЕ ЦИНАО)
Д ля определения фосфора в минерализате, получен­
ном в результате мокрого озоления корма концентриро­
ванной серной кислотой, используют колориметрические
методы (ванадомолибдатный и др.). Приготовление ре­
активов для ванадомолибдатного метода приведено' на
странице 89.
Подготовка калибровочной шкалы. 1. Для приготов­
ления шкалы образцовых растворов используют основ­
ной запасной раствор фосфора (стр. 90), содержащий
в 1 мл 1 мг фосфора и 1,26 мг калия, (запасной стан­
дартный раствор № 1).
2. Из него готовят рабочий стандартный раствор
фосфора, содержащий в 1 мл 0,2 мг элемента (стан­
дартный раствор № 2). Д ля этого в колбу на 500 мл
вливают 100 мл основного запасного раствора фосфора
(№ 1) и дистиллированной водой объем содержимого в
колбе доводят до метки.
3. В колбы на 100 мл, предназначенные для приго­
товления шкалы образцовых растворов фосфора, влива­
ют пипеткой с резиновым баллончиком определенные
объемы рабочего стандартного раствора № 2, указан­
ные в таблице 9.
4. В каждую колбу с образцовым раствором фосфо­
ра наливают до половины объема дистиллированную
воду и при озолении по методу А добавляют по 3 мл
концентриробанной серной кислоты без селена (при
озолении по методу Б содержащую селен).
5. В конические колбочки или'химические стаканы
пипеткой с баллончиком или шприцем-дозатором вли­
вают по 25 мл образцовых растворов, содержащих из­
вестное количество фосфора.
6. Дозатором прибавляют по 15 мл реагирующей
смеси; растворы перемешивают и оставляют на 1 ч.
7. На фотоколориметрё измеряют оптическую плот­
ность растворов, используя синий светофильтр и кюве­
ту с толщиной просвечивающего слоя 20—30 мм. Для
сравнения используют нулевой раствор шкалы.
8. Строят градуировочный график, для чего на оси
абсцисс откладывают содержание фосфора в образцо­
вых растворах, а на оси ординат — показатели их опти­
ческой плотности.
Ход определения. 1. В конические колбы на 100 мл
для проверки шкалы отбирают пипеткой или шприцем7*
„
99
С
Ч
о
СО
СЧ
СО
X
5
•=
5
СО
со
о
Н
о
СО
о
о
о
с?
чэ
о
оо
ев
О
СО
ао
00
«3
о.
о
*©
*
у
о
о
ч
о
»
«в
си
а»
сОв. | о
Г
X
я
*г
о
1С
<
4
О
СО
о
о
иэ
ю
о
00
«ъ
о
си
3
т
о
ясо
еО.в
«О
о
се
«=
;
се
х
о
о
о
ю
СО
о
Ш
т—
*
о
о
о
ч—Л
о■к
о
О
С
о
о
о
о
СО
о
8
О
о
сч
о
СО
ю
о
о
со
о
о
о«%
о
о
сч
о
**
*
•
•к
о
о
сч
л
о
сч
о
ол
о
Ю
о
о
о
о
о
о
о со
^
со
я
се
си
!
ф
о х
X *
$
я
се
о
8 8-5
о
О
н
со
а.
о
ю
5
О
)
С
05
X
X
м
в
0
X
сьв
с»
>.
К
ч
с*
сч
5* *
0 * 0 , ,*
се *о) се
х о о
се ^ *©"
о
о о
•В-
100
«я
О
СО
со
В
•5
X
X
о
л
о
о.
*©
X
4
се
О
о
со
о4%
о
о•к
о
о
сч
ю
О
ю
о
ш
О
оо
о>
сс
О
а.
о
со
н
а
О
00
•ч
О
О
63
••
и
се
Си
•§.
о
о
•Э*
О
)
X
X
се
*
си
о
И
б
н
о
се
а.
о
к
о
со
О
X
со
со
си
О
о
ч
2
О
О
ю
со
си
о
А
о
се
си
о
о
о
г*
со
со
си
чо
о
2
о
X ^X х
о
си1 3
о
I «3
X2
р
о Си§
се X х
си
К X*
X
3 «
*ц
А=
о
о
X X
X
ГО *
я
°
си
С
О1
сиЯ\0
о IX х х
О Xч
СО си
о Xн
О ф
4 «
А
г р; X
о X он
х Xо
сч о а>
хК
в
а
I1
>
к
м
л
в
а
я
1
1а
се
о
0)
й
>
ч
X
в
&
0р3
о
со
си
V
К
К
св
хг
О
)
2
ж
сх
п
дозатором по 25 мл образцовых растворов № 1, 3, 6
н 9. В колбы* предназначенные ‘ для анализируемых
проб, дозатором или пипеткой с резиновым баллончи­
ком вливают по 25 мл минерализата кормов. Из конт­
рольной колбы берут 25 мл раствора минерализата без
пробы корма («холостое определение»).
2. В колбы с минерализатом кормов, образцовыми
растворами фосфора и в «холостую» пробу прибавля­
ют дозатором по 15 мл реагирующей смеси, после чего
содержимое взбалтывают и оставляет на 1 ч.
3. На фотоколориметре измеряют' оптическую плот­
ность растворов, окрашенных вследствие образования
фосфорнованадомолибдатного комплекса в
желтый
цвет. Используют синий светофильтр и кюветы с тол­
щиной просвечивающего слоя 20—30 мм.
4. По градуировочному графику находят концентра­
цию фосфора во взятых на анализ испытуемых раство­
рах и в «холостой» пробе (проверка чистоты .реактивов
на фосфор).
5. Содержание фосфора определяют по формуле:
(а—К) • V
х *в
уГя
*
где х — содержание фрсфора в исследуемом корме
(мг/г или г/кг); а — количество фосфора, найденное по
градуировочному графику во взятом на анализ объеме
(25 мл) минерализата корма (мг); К — количество фос­
фора в том же объеме контрольного («холостого») минерализата, установленное по градуировочному графи­
ку (мг); V — общий объем минерализата корма (мл);
у, — объем минерализата корма, взятый для колори­
метрического определения фосфора (по прописи —
25 мл); Н — навеска корма (г).
П р и м е ч а н и е . В случае, если показатели фото­
метрии образцовых растворов, взятых для контроля, от­
личаются от показателей калибровочной шкалы, то в
расчеты вносят поправку, определение которой описано
на странице 88.
О П РЕ Д ЕЛ ЕН И Е КАЛЬЦИЯ В РАСТВОР8
ПОСЛЕ МОКРОГО
ОЗОЛЕНИЯ
%
При определении кальция в растворе золы пбЬле
мокрого озоления можно использовать оксалатный
(центрифужный микрометод) или кошлексометрнчс<?ю?
кие (метод обратного титрования) метод». Реактивы и
ход определения кальция в растворе золы приводятся
на страницах 76 и 80.
*
. * ‘ |Щ
Д ля определения кальция можно такж е применять
метод пламенной фотометрии, описание которого приво­
дится в специальных руководствах. Сущность этого ме­
тода заключается в сравнении интенсивности излучений
кальция в пламени газ — воздух при введении в него
анализируемых растворов или стандартных растворов
с известным содержанием исследуемого элемента. Д л я
определения кальция используют пламя воздушно-аце­
тиленовой или воздушно-пропановой смеси газов. Поме­
хи устраняют добавлением в фотвметрируемые раство­
ры солей магния (или стронция). Фосфат-ионы и полу­
торные окислы, влияющие на определение кальция,
можно предварительно удалить, осаж дая их уротропи­
ном в присутствии хлорида железа.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е КАЛИЯ И НАТРИЯ
Калий и натрий определяют в растворах золы, полу­
ченных при «мокром» или «сухом» методе озоления
корма. При сухом озолении проб корма возможны потери
калия, если температура в муфельной печи поднимается
выше 550°С.
Химические методы определения калия и натрия
трудоемки. При массовых анализах кормов на содержа­
ние калия и натрия'ш ироко используют пламенно-фото­
метрический метод анализа. Пламенная фотометрия
это один из методов спектрального анализа, использую­
щий в качестве источника света низкотемпературное
(1770— 1925°С) пламя горючего газа (пропан — б у т а н воздух, сетевой газ — воздух и др.). Метод основан на
способности калия, натрия, кальция и некоторых дру­
гих элементов, введенных в виде аэрозоля в пламя га­
зовой горелки, возбуждаться и испускать при этом лучи
определенной длины волны. Выделяют спектральные
линии отдельных элементов посредством специальных
интерференционных светофильтров с максимумом про­
пускания света в определенной зоне: для калия 766,5 и
769,9 нм, для натрия 580,0 и 589,9; для кальция 620 нм.
Излучаемые исследуемым элементом световые волны
направляют через светофильтры на фотоэлемент, прев102
ращающий лучистую-энергию в электрическую, регист­
рируемую гальванометром.
По силе возникшего фототока судят о концентрации
элемента.
Количественный анализ калия и натрия методом
пламенной фотометрии основан на том, что интенсив­
ность 'спектра излучения, возбуждаемого исследуемым
элементом, зависит от концентрации его в анализируе­
мом растворе. Сравнивая показатели излучения испы­
туемого и образцовых растворов,-определяют с помо­
щью градуировочных графиков концентрацию калия
или натрия в 1 мл раствора, а затем по формуле рас­
считывают их содержание в корме.
Пламенный фотометр позволяет определять калий н
натрий при концентрации их в 1 л раствора в пределах
от 0,5 до 100 мг. Точность определения элементов на
пламенном фотометре зависит от стабильности условий
возбуждения атомов в пламени, от режима работы
I прибора (т. е. от давления горючего газа и воздуха,
равномерности поступления раствора в пламя), а также
от идентичности химических и физических свойств ис­
пытуемых и стандартных растворов. Большое разбав­
ление исследуемых растворов устраняет или уменьшает
влияние состава пробы на результаты фотометрирова*
ння.
В растворах золы корма содержится целый комплекс
минеральных элементов
(кальций, фосфор, натрий
и др .), оказывающих влияние на интенсивность излу­
чения калия и натрия и являющихся часто причиной
погрешностей в анализах и плохой воспроизводимости.
Д ля уменьшения (иди устранения) влияния состава
пробы на результаты фотометрии используют различ­
ные методы:
1. Доводят концентрацию калия в исходном растворе
золы корма до 2— 10 мкг/мл.
2. Применяют растворы буферирующих солей (маг­
ния, стронция при определении кальция; хлоридов нат­
рия, фосфатов и др. при определении калия; солей ка­
лия при определении натрия).
3. Используют модельный стандартный раствор, вос­
производящий в среднем состав золы кормов по меша­
ющим анализу компонентам.
,
4. Метод внутреннего стандарта в сочетании с из­
быточной добавкой буферирующего вещества.
103
Д ля пламенной фотометрии используют* следующие
отечественные и зарубежные приборы: ФПФ-58; ПФМ;
ФПЛ-1; ППФ-УНИИ-3, «Цейсс III», «Флафо-4» с ком­
прессором и фильтром для очистки воздуха от влаги и
масла, флавокол с компрессором.
В целом метод пламенной фотометрии характеризу­
ется высокой точностью, быстротой и простотой и поз­
воляет проводить анализ при минимальном расходе ис­
следуемого вещества. Необходимо помнить, что уста­
навливать пламенный фотометр и работать на нем сле­
дует строго по инструкции, прилагаемой к прибору. При
этом необходимо соблюдать правила техники безопас­
ности.
' •
■ Щ и'
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е АЗОТА, ФОСФОРА, КАЛИЯ
И КАЛЬЦИЯ В КОРМАХ С ПОМОЩЬЮ
АВТОАНАЛИЗАТОРА ПРОТОЧНОГО ТИПА
При использовании автоанализатора проточного ти­
па для определения содержания азота, фосфора, калия
и кальция в кормах в несколько раз ускоряются сроки
анализа и обеспечивается требуемая точность и воспро­
изводимость результатов. Подготовка образцов корма к
анализу, методика мокрого озоления, получение испыту­
емых и образцовых растворов, необходимые для анализов посуда, реактивы и их приготовление указаны на
страницах 92—95.
Д ля проведения анализов автоматизированным ме­
тодом используют автоанализаторы проточного типа,
работающие по двух-, трех- или четырехканальной сис­
теме. Завод контрольных приборов «Медийген» (ГД Р)
выпускает автоанализатор непрерывного действия, ра­
ботающий по четырехканальной системе, при которой
возможно одновременное определение в минерализате
кормов азота, фосфора, кальция и калия. Работает
такой автоанализатор по поточному принципу. В зам к­
нутую систему труб в постоянных соотношениях непре­
рывно вводятся реактив, воздух и исследуемый раствор
(рис. 5). Все операции — дозирование, смешивание ре­
актива с испытуемым или образцовым (калибровочны­
ми) растворами, выдержка времени, невбходнмого для
прохождения реакции, термостатирование реакционной
смеси, а такж е фотометрия — проводятся в замкнутой
104
Рис. 5. Общий вид автоанализатора проточного типа.
системе труб. Общий принцип действия автоанализато­
ра показан на рисунках 6 и 7.
Автоанализатор не является единым компактным
прибором; он составляется из ряда базовых приборов
•и систем трубопроводов, соответствующих применяемо­
му методу анализа.
Принцип определения искомых элементов на авто­
анализаторе и характеристика комплектующих его ба­
зовых приборов. 1. Автоматический отборник проб
управляет автоматическим вводом проб в систему ана­
лиза. Анализируемые растворы золы корма наливаются
без дозировки в пробирки на 1,5 или 3 мл, вставляе­
мые по 10— 11 штук в сменные магазины (блоки) от­
борника. Испытуемая жидкость или образцовый рас­
твор из пробирок отбираются через капилляр отбираю­
щего устройства. В точно установленной по времени
последовательности посредством специального насоса
засасывается испытуемый раствор или промывная
жидкость. При этом после каждого отбора пробы .ка­
нюля опускается в сосуд с промывной жидкостью. Про­
должительность отбора проб и время промывки запро­
граммированы на контактных дисках. Сменой Контакт105
Воздих
В =1,60
Самописец
Ши-
Л1-1>5
Колориметр
X-630мм
Ш 15мм
Ш
Смешанный
реактив
2,00
Воздих
■
Пробоотборник
Сброс
Щ
0,32
Гхпохлорит
1,60
Промывка пробоотборника
ЗАО
Рис. 6. Схема определения азота (аммония) на
проточного типа.
Отсос из кюветТя
колориметра
автоанализаторе
Самописец.
Вода
Воздих
У =0,090
0,056
Колориметр
Л=600мм
1 = 10мм
0,020
Раствор мошдденобакисмго
аммония с сурьмой
Аскорбиновая кислота
Проба
0,090
0,040
Самописец
Воздух
Вода
Пробоотборник
Сброс из кюветы
колориметра
Сброс отпламенного
фотометра
Пламенный
фотометр
№ 7 0 мм
Рис. 7. Схема определения фосфора и калия на автоанализаторе
проточного типа.
V
ных дисков можно изменить частоту отбора проб (от
40 до 230 проб в 1 ч).
2. Дозировочный насос предназначен для перекачи­
вания испытуемых' растворов, растворов реактивов и
воздуха в систему анализа автомата. Он состоит из
перекачивающей системы и двигателя с редуктором
(для переключения скоростей перекачивания) и набора
шлангов.
3. Термостат состоит из бака термостатирования,
реле термостатирования и мешалки. Мешалка служит
для непрерывного перемешивания термостатной жид­
кости (дистиллированная вода) и поддержания рав­
номерного температурного режима в термостате. Регу­
лируется температура с * помощью специального кон­
тактного термометра.
4. Система стеклянных трубопроводов состоит из
смесителей, угольников, смесительных и реакционных
змеевиков. Объединяясь в этой системе, растворьГ реак­
тивов, воздух и проба образуют поток жидкости, пре­
рываемый воздушными промежутками. Химические ре­
акции (на азот или фосфор) протекают при прохожде­
нии растворов через один или несколько реакционных
змеевиков. Последние термостатируются в специальных
термостатах.
Например, определение азота на автоаналнзаторе проточного
типа осуществляется по следующей схеме: анализируемый раствор
череЗ капилляр пробоотборника поступает в определенный канал
проточной системы автоанализатора, куда подается смешанный ре­
актив — рабочий окрашивающий раствор (состав и приготовление
его см. на стр. 96) и воздух. В первой смесительной спирали ана­
лизируемая проба перемешивается с окрашивающим реактивом и
в полученную смесь дозируется рабочий раствор гипохлорита нат­
рия, содержащий 0,05% активного хлора. Во второй смесительной
спирали эти растворы перемешиваются, после чего поступают для
развития окраски в змеевик, который погружен в водяную баню
(бак термостатирования, температура 37°С). Затем окрашенная в
сине-зеленый цвет смесь растворов поступает в проточную кювегу
фоток ол ори метр а.
5. Проточный колориметр. Колориметр ДРК-1 позво­
ляет проводить колориметрические измерения проб
кормов, периодически вводимых в поток жидкос­
ти, сегментированной воздухом. Прибор — одноканчльный с интерференционным светофильтром и вакуум­
ным фотоэлементом.
Д ля определения азота и фосфора применяют кюветы, рассчитайные на 10-миллиметровый слой жидкости. Светопропускание
- - *
187
%
0
смеси растворов для определения азота измеряется при длине вол­
ны 625—630 нм, а окрашенного раствора на фосфор — при 400 нм.
Небольшая ширина прибора обеспечивает параллельную расста­
новку нескольких колориметров для сборки многоканальных авто­
анализаторов (например, на азот, фосфор и другие элементы).
Д ля питания источника света проточного колори­
метра используется электронный стабилизатор.
Фотометрические измерения испытуемых растворов
осуществляются по завершении соответствующих ре­
акций и отделении из потока жид-кости пузырьков воз­
духа. После удаления пузырьков воздуха окрашенная
жидкость проходит через проточную кювету колоримет­
ра. Периодически изменяющееся поглощение в проточ­
ной кювете света соответствует по своей частоте ра­
боте отбирающего устройства в автоматическом от­
борнике проб.
I
6 Результаты фотометрии регистрируются одноли­
нейным самописцем, предназначенным для приема и
регистрации сигнала только от одного подключенного
к нему фотометра.
,
Все изменения светопоглощения с помощью сротоэлемента преобразуются в электрические сигналы, пе­
редаваемые на регистрирующий прибор с устройством
выдержки и распознавания пиков (одноканальныи са­
мописец). По высоте пиков на диаграммной ленте, з а ­
писываемых последовательно в соответствии с после­
довательностью расположения пробирок, ^ з е л е н н ы х
в магазины автоматического отборника проб, мсжн
определить концентрацию искомых элементов в р
творах.
Д ля обработки результатов измерений можно ис­
пользовать специальный одноканальныи блок, состоя­
щий из регистрирующего црибора (с устройством вы­
держки и распознавания пиков), аналого-цифрового
преобразователя и выходного печатающего устройства.
При обработке небольшого количества^ результатов
анализа проб корма используют особый прибор для
обработки диаграмм (ДА-1; входит в комплект авто
анализатора). При этом диаграммную ленту с запи­
санными пиками перемещают .(рукой) по столу отсче­
та прибора и измеряют высоту пика в миллиметрах.
Показатели концентрации, соответствующие каждому
пику, можно отсчитывать непосредственно по прилагае­
мой к прибору номограмме или по градуировочным
графикам.
108
. 7. Д ля определения кальция и калия в систему
автоанализатора с непрерывным -потоком жидкости
включают одноканальные пламенные фотометры с го­
релкой ламинарного истечения, специальными интерфе­
ренционными светофильтрами и вакуумными фотоэле- •
ментами. Воздух от смешанного реактива отделяется
внутри приборов.
Часть минерализата корма из отборника проб пос­
тупает в систему трубопроводов, соединенных с пла­
менными фотометрами. Интенсивность спектров пла­
мени, излучаемых кальцием или калием, фотометрируется и регистрируется самописцами.
При анализе на калий
лучи с длиной волны 768
с длиной волны 625 нм. В
калия применяется пропан,
Расход воздуха составляет
используют светофильтр, пропускающий
нм, а при анализе на кальций — лучи
качестве горючего газа для определения
а для определения 'кальция — ацетилен.
280 Л в 1 ч.
8.
В комплект базовых приборов четырехканально­
го автоанализатора входят также блок промывки и пе­
рекачивания, компрессорная установка, система прово­
дов, стеклянные детали, элементы крепления, функцио­
нальные узлы, комплектующие и другие детали, мон­
тируемые на специальном основании.
К автоанализатору непрерывного действия и к каж ­
дому его базисному прибору прилагаются инструкции
по установке и эксплуатации и методические указания
по определению фосфора, азота, калия и кальция.
Подготовка и построение калибровочных шкал для
определения азота, фосфора, калия и кальция на ав­
тоанализаторе. 1, Готовят запасные эталонные рас­
творы:
а) на азот — 9,553 г ЫН*С1 (хлорид аммония) раст­
воряют в дистиллированной воде и доводят объем со­
держимого до* 1000 мл. 1 мл раствора хлорида аммо­
ния содержит 2,5 мг азота;
б) на фосфор и калий — 4,393 г КН2Р 0 4 растворя­
ют в дистиллированной воде и доводят объем раство­
ра до 1000 мл. В 1 мл этого раствора содержится 1 мг
фосфора (или 2,29 мг ЩЩ) и 1,259 мг калия (или
1,52 мг К20 ) ;
в) 2,497 г предварительно высушенного при темпе­
ратуре 110°С углекислого кальция (С аС 03, х. ч.) не­
большим количеством дистиллированной воды осто­
рожно смывают в мерную колбу вместимостью 1000 мл
и растворяют, добавляя в колбу 10 мл 25%-ной соля- 109
ной кислоты. Дистиллированной водой объем содержи1000
мл
и
тщательно
перемеметки
мого доводят до
1
мг
кальция.
■шивзют.
Ш Ё 1 Й Вв 1I—мл раствора содержится
2.
Готовят рабочие стандартные растворы, исполь­
зуемые для построения калибровочной шкалы на азот,
фосфор, калий, кальций. Калибровочные растворы при­
готавливают в колбах вместимостью 500 мл. В табли­
це 10 указаны объёмы запасных эталонных растворов,
добавляемых в колбы для приготовления стандартных
1Л
Я
рабочих растворов (образцовых), используемых
построения калибровочной шкалы.
Таблица
10
Шкала калибровочных (образцовых) растворов
Ноиер* колб
4
Объем
КНгР 0 4
ЫН4С1
СаСОз
запасных
№
К
Са
4
1
Примечание.
г
6
в,
мл
■
в
о
р
о
1
р
а
с
1
(эталонных)
12
8
6
4
2
24
20
16
12
8
20
15
1
0
,
5
3
т а в 1 ил
в о р а . иг
образцового
0,016
0,012
0,008
■
0
0
4
0 >,002
0,10
0,08
0,06
0,02
0
,0
4
о
0,020
0,015
0,010
),0025
0,005
о
о 0,002 006 0,010 0,020 0,030
г
Р
1
0
0
0
5
16
28
25
10,024 0,032
0,12 0,14
0,030 0,0Ю
0,040 0,050
Общий объем образцовых растворе» равен 500 мл.
В
каждую
колбу приливают
по 200 мл дистшЛлироО
л а л ч д ; ^
------ ---------------------1
~—
—
—
кислоты
с
селеном
ванной воды и по 10 мл серной
при
минерализации
(или одной серной кислоты, если
V г т п и у ш КИРЛОТУ! И
применяли в качестве окислитрля
. Щ ,
объем содержимого доводят дистиллированной водой до
метки 500 МЛ.
V >'
•' '-^ф. < д
3 Строят калибровочные графики на азот, фосфор,
калий и кальций, для чего на горизонтальной оси
откладывают концентрацию элемента в 1 мл стандарт­
ного рабочего раствора (мг/мл), а по вертикали в ы ­
соту пиков с диаграммной ленты (в мм), соответствуюконцентрациям
элементов
в
стандартщих различным
ных растворах.
на диаграммной
4 . Высота П1
110
ленте самописца, зависит от концентрации элемента в
стандартном или испытуемом растворах. При обработ­
ке данных анализа измеряют на диаграммах высоту
пиков, соответствующих определенным концентрациям
элементов в стандартных растворах и испытуемых про­
бах кормов. Сравнением этих величин с показателями
калибровочного
графика
определяют
содержание
(мг/мл) искомого элемента (азота, фосфора, калия
или кальция), соответствующее определенной высоте
пика, зарегистрированного для данной пробы корма
на диаграмме самописца.
5. Содержание исследуемого элемента в пробе кор­
ма рассчитывают по формуле:
а• V- Р' 100
•'
I!|Ш
И з1 1 | |
Щ
и -шоо
:•
где х — содержание искомого элемента (азот, фосфор,
калий или кальций) в пробе корма (% ); а — содержавие искомого элемента, установленное по калибровоч­
ному графику в соответствии с высотой пика на диаг­
раммной ленте (мг/мл); V — объем основного раствора
минерализата корма (мл); Р — кратность разведения
минерализата (для растворов минерализата без раз­
ведения Р равно 1); Я - 1000 — навеска корма, взятая
для озоления (мг); 100 — коэффициент для пересчета
в проценты.
6. Азот, фосфор, калий и кальций определяют в
двукратной повторности. Результаты анализов счита­
ются достоверными, если разница между смежными
определениями не превышает 5%. Если расхождение
превышает указанную величину, анализ проводят
вновь.
Результаты определения азота, фосфора, калия и
кальция пересчитывают на абсолютно сухое вещество
и на корм натуральной влажности.
тК
А
О П РЕД Е Л ЕН И Е МИКРОЭЛЕМЕНТОВ
‘Т&К«к* .Т*:•
При анализе микроэлементов необходимо приме­
нять- реактивы, освобожденные от примесей, особенно
железа, меди и цинка, которые могут мешать опреде­
лению. При сборе, высушивании и помоле образцов
важно соблюдать предосторожность. Нельзя измель­
чать пробы кормов в мельнице с металлическими жер111
новами. Металлическую посуду заменяют алюминневои,
пластмассовой или стеклянной1
. Стекло пирекс лишено
цинка.
Использовать посуду из этого стекла можно при
определении всех редких элементов
(кроме бора).
Сильные кислоты можно перегонять только в аппара­
тах из стекла пирекс без металлических частей.
Обычная дистиллированная вода содержит некото­
рое количество железа, меди, цинка, олова. Поэтому ее
можно использовать только для определения бора и
марганца.
Все стеклянные аппараты и посуду, используемые
для определения микроэлементов, промывают разведен­
ной кислотой (соляной, уксусной) и затем бидистиллированной водой. Обычно цх предварительно моют во­
допроводной и дистиллированной водой. Промывание
бидистиллированной водой еще не обеспечивает пол­
ного удаления всех элементов; по крайней мере не­
большое количество тяжелых металлов адсорбируется
стеклянной поверхностью. Они могут быть удалены
только при замещении другими ионами, такими, как *
ион водорода. Наиболее эффективный метод удаления
адсорбированных ионов металлов — полоскание ^ (про­
мывание) стеклянных предметов 0,5 н. ^уксусной или
0,5 н. соляной кислотой с последующей обработкой
бидистиллированной водой. Эта реакция обратима, и
чистая стеклянная поверхность будет адсорбировать
некоторое количество ионов металлов из водопровод­
ной воды, если снова вступит в контакт с ней. Чтобы
исключить потери микроэлементов при некоторых оп­
ределениях
(в результате адсорбции стеклянными
стенками сосудов), переносить раствор из одного сосу­
да в другой нужно по возможности при кислой реак,.ции.
Некоторые количества многих редких элементов
встречаются даж е в лучших аналитических реактивах.
Очищать их от примеси редких элементов можно в
лаборатории путем перекристаллизации и специаль­
ными методами экстракции, подобными тем, • которые
используются для определения этих элементов.
Сильные кислоты должны легко очищаться от тя­
желых металлов при перегонке. Можно применять
реактивы особой чистоты и спектрально чистые.
'
При анализе кормов на микроэлементы широкое
распространение получили, колориметрические, поля­
рографические и спектрофотометрические методы.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАРГАНЦА С ПЕРЙОДАТОМ КАЛИЯ
Колориметрическое определение марганца. П р # ко­
лориметрическом определении марганца перманганатиым методом применяют обычно перйодат калия (или
натрия) или персульфат аммония. Окисление Мп2+ до
МпО^“ возможно лишь в азотнокислой или сернокис­
лой средах при кислотности, равной 5—7 объемным,
процентам (10% при периодатном методе). Ионы же­
леза (Ре2+), сульфиды, хлориды, оксалаты и другие
вещества, склонные к окислению
(восстановители),
удаляют или разрушают выпариванием раствора золы
и последующей 2—3-кратной обработкой сухого остат­
ка азотной (в золе много кальция) или смесью азот­
ной и серной кислот. Фосфорная кислота предупреж­
дает осаждение перйодата трехвалентного железа^ (об­
разуется бесцветный комплекс) и. перйодата или йодата марганца.
П о д г о т о в к а м а т е р и а л а к а н а л_и з у. Про­
водят сухое озоление образца корма (или ткани жи■вотного) при температуре не выше 6О0°С с примене­
нием окислителей (см. методы озоления). Для опре­
деления марганца используют всю золу или часть
полученного раствора ее. Удобно брать в 2 тигля или
2 стакана по 5— 10 мл раствора золы (соответствует
0,5— 1 г сухого корма; 3—5 г сырой ткани печени*).
Раствор золы выпаривают досуха на водяной, воздуш­
ной или песчаной б т е. Сухой остаток 2—3 раза сма­
чивают раствором полуконцентрированной азотной кис­
лоты ( 1 : 1 ) для перевода хлоридов в нитраты и окисле­
ния восстановителей. Азотной кислотой смачивают не
только золу на дне тигля, но и стенки фарфоровой
чашки (тигель), на которых могут задержаться час­
тички золы. Н а первую обработку расходуют 1 2 мл
кислоты, на последующие — по 0,5— 1 мл. Всю работу
выполняют в вытяжном шкафу. Избыток азотной кисло­
ты удаляют выпариванием. При незначительном содержа­
нии кальция (печень) сухой остаток золы можно об*
Из образцов корма, богатых марганцем (сено из растений с
кислых почв), можно брать на выпаривание 2—5 мл раствора золы
<(0,10—0,25 г корма). . •
'
Ц
У
•*'-3^***
Л- **
€Г
' |1
Гг
*
8. З аказ 7445
‘
. 1 1 3
рабатывать разведенной ( 1 :1 ) серной кислотой (1—
2 мл). Выпаривают кислоту до появления белых паров
серного ангидрида.
Реактивы
и о б о р у д о в а н и е . Концентриро­
ванная и 10%-ная (по объему) азотная кислота, 5 % -пая
(по объему) серная кислота, 1%-ный раствор КГб4 в
8,5%-ной ортофосфорной кислоте (10 г порошка К Ю 4
вносят в мерную колбу на 1000 мл, добавляют 400 мл *
воды и 100 мл 85%-ной Н 3Р 0 4, раствор подогревают
на водяной бане, доводят объем до метки дистилли­
рованной водой и хранят в темной склянке); раствори­
тель (окислитель) с перйодатом (50 мл раствора пе­
рйодата калня смешивают со 100 мл азотной кисло­
ты и доводят объем содержимого дистиллированной
водой до 1 л ); тигли или фарфоровые чашки, мерные
колбы на 25 мл (или мерные пробирки), пробирки
вместимостью 40—50 мл, пипетки, бюретки, водяная
или воздушная баня, колориметр.
Х од о п р е д е л е н и я .
1. Остаток золы после
обработки азотной кислотой растворяют в 5 мл 5%-иой
серной (если кальция в пробе мало) или в 10%-ной
азотной кислоте (или лучше в растворе окислителя).
2. Растворы подогревают на водяной или воздуш­
ной бане и переносят через увлажненный фильтр в
пробирки на 40—50 мл (с меткой на 25 мл).
3. В тигель снова добавляют 5 мл растворителя,
обмывают его стенки и сливают раствор в пробирку.
4. Обмывают тигель дистиллированной водой.
5. Приливают по 10 мЛ 1%-ного раствора перйода­
та калия (можно через фильтр). В расчете на 1 мкг мар­
ганца должно приходиться не менее 300 мкг перйо­
дата.
•
'
.
6. Пробирки ставят на водяную баню, кипятят в
течение 1 ч, затем охлаждают, при необходимости пе­
реливают в мерные колбы на 25 мл и доводят дистил­
лированной водой объем содержимого до метки. Содер­
жимое пробирок тщательно перемешивают.
7. Окрашенные растворы колориметрируют через
30—60 мин, сопоставляя интенсивность окраски со
стандартным раствором марганца. Принцип расчета
при использовании визуального колориметра приведен
при определении фосфора.
В качестве «нулевого» компенсационного раствора
при использовании фотоколориметра применяют 10%-ный
114
раствор кислот (азотной или серной, или раство­
рителя), воды и перйодата калия (10 м л + 5 м л + 1 0 мл).
Колориметрируют с зеленым светофильтром, применяя
кюветы толщиной 20 мм.
Составление"4 калибровочной
кривой.
• Стандартный раствор марганца готовят из точного
0,1 н. раствора КМпО*. Один миллилитр 0,1 н. рас­
твора К М п04 соответствует 1098,8 мкг марганца (рас­
твор № 1). В мерную колбу на 100 мл берут 9,1 мл
0,1 н. раствора, приливают 30 мл дистиллированной во­
ды, подкисляют несколькими каплями серной кислоты
и доводят объем содержимого до метки (в 1 мл это­
го раствора будет содержаться 100 мкг марганца,
раствор № 2). Соответствующим разведением содер­
жимого колбы приготавливают растворы, содержащие
в 1 мл 2 и 10 мкг марганца (раствор № 2 разводят в
50 и 10 раз).
Д ля составления калибровочной шкалы в мерные
колбы на 25 мл (или мерные пробирки) вливают стан­
дартный раствор, содержащий 2, 4 , 6, 8, 10, 20, 25, 30,
40, 50, 60, 80, 100, 120„ 150 мкг марганца. Объем со­
держимого в колбах разведенной серной, или азотной
кислотой, или растворителем доводят до 15 мл, после
чего в колбы (мерные пробирки) приливают по 10 мл
перйодата калия. Далее поступают так же, как описа­
но на странице 114. После охлаждения содержимого до­
водят объем его в кблбах (пробирках) до метки 25 мл.
Таким образом, в 1 мл растворов будет содержаться
соответственно 0,08; 0,16; 0,24; 0,32; 0,4;, 0,6, 0,8, 1,0,
1,2; 1,6; 2,0; 2,4; 3,2; 4,0; 4,8; 6,0 мкг марганца.
Серию стандартных растворов готовят не менее
трех раз. Всю работу ведут с параллельными опреде­
лениями. Количество марганца рассчитывают по фор­
муле:
КУ
х = ~у\.<Г ’
-
где х — содержание марганца в корме или ткани жи­
вотного (мкг/г или мг/кг); К — содержание марганца
во взятом для колориметрирования объеме раствора
золы (находят по стандартной шкале и данным коло­
риметра); V — объем раствора золы (мл); V} объем
раствора золы, взятый для колориметрирования; в
масса корма (г).
,,
Поступление марганца в растения зависит от со­
держания его в почвах. Марганец щелочных почв, осо­
бенно богатых гумусом, менее доступен
растениям,
чем марганец кислых почв. Известкование почв пони­
ж ает содержание усвояемого растениями
марганца.
Бедны марганцем сероземы пустынь, опесчаненные под­
золы. От недостатка марганца в кормах чаще стра­
дает птица, особенно молодняк. Усвояемость это­
го микроэлемента снижается при избытке в рацио­
не кальция, фосфора и железа. Критическим счи­
тают содержание в 1 кг сухого вещества рациона
12—20 мг марганца. Марганец депонируется в печени,
костях и яичниках животных. Содержание его в тка­
нях отражает концентрацию в рационе.
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е
МЕДИ
С ДИЭТИЛДИТИОКАРБАМ АТОМ
НАТРИЯ
В слабокислоц или аммиачной среде (рН 7— 10)
диэтилдитиокарбамат натрия образует с медью интен­
сивно окрашенные в коричневый цвет комплексные сое­
динения (хелаты), нерастворимые в воде, которые мо­
гут экстрагироваться различными органическими раст­
ворителями (хлороформ, четыреххлористый углерод,
амиловый спирт, ксилол, амилацетат)'. Отрицательное
влияние железа, марганца, никеля и кобальта предуп­
реждается комплексообразованием с помощью^ трилона
Б. Последнего при этом должно быть примерно в 10
раз больше суммарного содержания указанных выше
элементов. Приливая к раствору повышенное количе­
ство трилона Б и цитрата, можно допустить увеличе­
ние содержания железа, никеля, кобальта и марганца
в исследуемых пробах. Кальций и марганец в аммиач­
ной среде образуют с трилоном Б растворимые в воде
комплексы и в осадок не вы падает, однако значитель­
ные концентрации кальция . и фосфатов [20 мг С а +
-(-25 мг (МН4Ь Н Р 0 4] приводят к образованию мутного
раствора и к получению неправильных результатов
анализа.
Д ля экстракции комплекса меди предпочитают при­
менять четыреххлористый углерод или хлороформ. Ок­
раска экстрактов устойчива в темноте. Аналитические
операции при использовании четыреххлористого угле­
рода следует выполнять при ослабленном дневном
116
(В
или при искусственном свете. Хлороформ имеет пре­
имущество перед четыреххлористым углеродом, так как
растворимость карбамата меди в нем большая. Однако
он отличается повыТЬенной летучестью и растворяется
в воде. Максимум светопоглощения диэтилдитиотсарбамата меди соответствует длйне световой волны около
435 нм. Чувствительность цветной реакции меди с диэтилдитиокарбаматом натрия — 0,5 мкг/мл.
Реактивы и оборудование. 1%-ный раствор диэтилдитиокарбамата (1 г диэтилдитиокарбамата натрия
растворяют в 100 мл горячей кипяченой дистиллиро­
ванной воды, затем раствор медленно охлаждают),
раствор трилона Б и лимоннокислого аммония (5 г
трилона Б и 20 г лимоннокислого аммония растворяют
в 100 мл дистиллированной воды, после чего раствор
фильтруют), гидроокись аммония (ЫН4ОН; 1: 1) , кон­
центрированная соляная кислота и 0,1 н. ее раствор,
четыреххлористый углерод (х.ч. или ч.д.а. Если чисто­
та не определена, его взбалтывают с крепкой серной
кислотой, промывают водой, осушают едким нат­
ром и перегоняют)* индикатор тимолблау или крезолрот, дистиллированная йода (без следов меди), 0,01 н.
серная кислота, стандартный раствор меди*^ (с содер­
жанием 100 мкг ее в 1 мл) и более слабый раствор
(2 мкг меди в 1 мл; разбавляют 0,1 н. соляной кисло­
той стандартный раствор); мерные колбы, тигли, де­
лительные воронки вместимостью 75— 100 мл, пипетки,
бюретки, пробирки с притертыми пробками, муфельная
печь, фотоэлектроколориметр, водяная баня, электро­
плитка.
Ход определения. 1. В делительную воронку влива­
ют 5— 10—20 мл анализируемого раствора**, содержа­
щего не более 25 мкг меди, и доводят дистиллирован­
ной водой его объем до 20 мл.
*
0.1964 г прозрачных невыветрившихся кристаллов С и 5 0 « .5 Н 20
растворяют в воде, прибавляют соляную кислоту до конечной при­
мерно 0,1 н. концентрации и затем разбавляют до 500 мл. Стан­
дартный раствор меди можно изготовить также из металлической
электролизной меди- особой чистоты, растворяя последнюю в не­
большом избытке азотной кислоты (1 :1 ), Затем раствор разбавля­
ют водой, кипятят до полного удаления окислов азота и доводят
до определенного уровня объема 0,1 н. соляной кислотой.
** Эквивалентно 0,5— 1,2 г сухого вещества корма (2 0 ^ 3 0 г
мочи).
ч
117
2. Туда ж е добавляют 5 мл (при высоком содержа­
нии железа и кальция 10 мл) смеси раствора трилона
Б и лимоннокислого аммония и 2—3 капли индика­
тора.
'
"
3. Содержимое нейтрализуют раствором аммиака до
рН 8,5—8,8 (сине-зеленая окраска раствора по тимолблау или красная по крезолроту) и доводят объем
раствора в делительной воронке до 30 мл (с точностью
± 1 мл).
• • |
«ЙЯ ' • '
4. Затем добавляют туда же 2 мл 1%-ного рас­
твора диэтилднтиокарбамата, 5 мл четыреххлористого
углерода, закрывают делительную воронку пробкой и
энергично встряхивают в течение 2 мин. Если в пробах
содержится очень много меди, то объем анализи­
руемого раствора нужно уменьшить или приливать в
раствор 10 мл четыреххлористого углерода*.
5. После отстаивания экстракт из делительной во­
ронки сливают, фиЛьтруют через высушенную гигро­
скопическую вату в сухую пробирку с притертой проб­
кой (особенно если раствор
мутный). Пробирки с
экстрактом ставят в темное место и выдерживают там
до тех пор, пока вся партия проб не будет готова к фо­
тометрии.
6. Окраску экстракта с помощью фотометра или
колориметра сравнивают по интенсивности с окраской
стандартного раствора и вычисляют содержание меди
в исследуемом образце.
Приготовление стандартной шкалы растворов меди.
В делительные воронки вливают стандартный раствор
из расчета последующего общего содержания в во­
ронках 2, 5, 8; 10, 15, 20, 25 мкг меди, после чего
дистиллированной водой доводят объем содержимого
до 30 мл. Д алее поступают так, как описано при из­
ложении хода анализа. Таким образом, получают стан­
дартную шкалу, растворы четыреххлористого углерода
которой содержат (в 1 мл) соответственно 0,4; 1; 1,6;
2; 3; 4 и 5 мкг меди (при объеме четыреххлористого
углерода, равном 5 мл). При использовании 10 мл че­
тырёххлористого углерода можно определить в пробе
корма, взятого на анализ, до 50 мкг меди.
*
При использовании СС1Ч (х. ч.) растворы бывают почти всег
да прозрачные.
•
_
' Я
118
$
При фотометрировании в качестве компенсационно­
го употребляют раствор, приготовленный со ©семи вы­
шеупомянутыми реат*тивам<и, но без раствора меди.
Полученные желтые растворы имеют максимум аб­
сорбции света при длине волны 435 нм, поэтому при
фотометрировании необходимо применять синий свето­
фильтр и кювету толщиной 5— 10 мм.
П р и м е ч а н и я . 1. Одна порция четыреххлористого углерода
не экстрагирует весь диэтилдитиокарбамат меди. Однако это не
имеет значения, если при построении калибровочной кривой взяты
приблизительно одинаковые объемы (в пределах 5%) анализируе­
мого и стандартного растворов и встряхивают содержимое доста­
точно энергично и долго (не менее 2 мин). При двух экстракциях
можно встряхивать по 1 мин.
2. Вместо диэтилдитиокарбамата натрия можно применять дибензилдитиокарбамат цинка. Этот реагент допускает присутствие
в анализируемом растворе больших количеств железа, никеля, ко­
бальта, марганца, алюминйя и др. Реакция осуществляется в кис­
лой среде (I н.). Кроме того, экстракт дибензилдитиокарбамата
меди в чётыреххлористом углероде устойчив к действию света.
3. Для проверку чистоты реактивов, посуды и воды всегда
ставят «холостой» опыт (без раствора золы).
4. Принцип расчета содержания меди в кормах тот же, что и
при определении фосфора.
Содержание меди в растениях зависит от вида почвы. Особен­
но бедны медью почвы опесчаненные, дерново-подзолистые, торфя­
ные, болотные. Сероземы, черноземы и каштановые почвы содержат
достаточное количество меди, а красноземы обогащены ею. Нор­
мальным считается содержание в 1 кг сухого вещества корма 6—
12 мг меди. Бедные медью растения содержат ее в 1 кг сухого ве­
щества 1—3 мг. Особенно чувствительны к недостатку меди овцы,
крупный рогатый скот и свиньи. Основным депо меди является пе­
чень.
?*
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОБАЛЬТА
Незначительные концентрации кобальта в тканях
растений и животных устанавливают колориметриче­
скими методами, основанными на образовании окра­
шенных комплексных соединений кобальта с нитрозоК-солыо, нитрозонафтолами и пи риди л азосоединения мя.
Д ля устранения возможного отрицательного действия
железа, меди и никеля рекомендуется выделять ко­
бальт экстракцией его дитизоната. Согласно имею­
щимся данным, 1 мкг кобальта в исследуемом образ­
це можно обнаружить в присутствии 100 мкг меди и
1000 мкг железа (методы А и Б ). При большем содер­
жании меди и железа их следует предварительно уда­
лить.
*
\
119
Определение кобальта с 2-нитрозо-1-нафтолом без
отделения от сопутствующих элементов.
Определять
кобальт этим методом рекомендуется в удобрениях и
кормах. Основан он на образовании в солянокисл'ой
среде красноватого комплексного соединения кобальта
с 2-нитрозо-1-нафтолом, экстрагируемого в последую­
щем толуолом. Избыток реагента удаляют едким нат­
ром. Осаждение железа и фосфатов предупреждают
введением нитратного буфера. Комплексные соедине­
ния никеля и меди разрушают соляной кислотой.
Установлено, уто определению 10— 15 мкг кобальта
в образце не мешает содержание в нем 0,1 г А1, Са,
Р е (III), РЬ, Мд, Мп, Мо, Р, ||> 2п и некоторых дру­
гих, а такж е 25 м г Си.
Р е а к т и в ы . 40% -ный раствор лимоннокислого нат­
рия, 2 н. раствор соляной кислоты, 2 н. раствор едко­
го натра, 3%-ный раствор перекиси водорода, 2-,нитрозо-1-нафтол (1 г реактива растворяют в 100 мл ледя­
ной уксусной кислоты и добавляют 1 г активированно­
го угля. Перед употреблением раствор взбалтывают и
отфильтровывают по потребности), толуол перегнанный
или х. ч., сернокислый безводный натрий, стандартный
раствор кобальта (1 мкг Со в 1 мл).
Х о д о п р е д е л е н и я . 1. В химический стакан на
100 мл вливают кислый раствор золы, полученной
после озоления 2— 10 г корма (в растворе должно
быть не более 15 мкг кобальта).
2. Добавляют в стакан 15 мл раствора цитрата
натрия и доводят дистиллированной водой объем со­
держимого до 50 м л.
„
3. Устанавливают рН раствора по индикаторнои бу­
маге между показателями 3 и 4, добавляя в стакан
растворы 2 н. щелочи и 2 я. соляной кислоты (воз:
можно осаждение окиси железа, растворяющейся при
нагревании). Содержимое стакана охлаждаю т затем
до комнатной температуры.
4. Добавляю т в стакан 10 мл 3 /о-ного раствора
перекиси водорода, через 5 мин — I мл раствора 2-нитрозо-1-нафтола, после чего стакан ставят на плитку с
асбестовой сеткой, нагревают примерло до 90 С (по­
явление пузырьков)
и затем на 30 мин оставляют
стоять при комнатной температуре.
5. По истечении 30 мин раствор из стакана перели­
вают в делительную воронку на 125 мл, добавляют
120
10 мл толуола, энергично встряхивают содержимое в
течение 2 мин и пос^е разделения фаз нижний водный ,
слой сливают (удаляют).
6. К толуоловому экстракту добавляют 20 мл 2 н.
соляной кислоты, содержимое встряхивают в течение
1 мин и «ижнюю водную фазу снова удаляют.
7. В воронку добавляют 20 мл 2 н. раствора едкого
натра, жидкость еще раз встряхивают в течение 1 мин,
■нижний водный слой опять сливают, снова добавляют
20 мл 2 н. щелочи и встряхивание повторяют.
8. Толуоловый экстракт фильтруют затем в пробир­
ку с притертой пробкой через слой гигроскопической
ваты и небольшое количество безводного сульфата
натрия.
9. Оптическую плотность испытуемого и стандарт­
ных растворов измеряют на спектрофотометре при дли­
не волны 367 нм. При работе с электрофотоколоримет^)ом фотометрируют растворы со светофильтром при
длине световой волны 413 нм или 530 нм. В качестве
нулевого раствора используют чистый толуол. Толщи­
на кюветы 1 см.
Для проверки чистоты реактивов проводят одновре­
менно «холостое» и контрольное (с 3 и 7 мкг Со) оп­
ределения с применением всех реагентов. Приготавли­
вают калибровочную ‘кривую с колебаниями от 0 до
15 мкг кобальта в 1 мл. Шкалу готовят из стандартных
растворов этого элемента.
Примечания.
1. Вместо 2-нитрозо-1-нафтола можно ис­
пользовать 1-нитрозо-2-нафтол.
2. Методика заимствована из Ве1егпнпаИоп о! Тгасе Е1етеп1з,
5реаа1 Ке1егепсе 1о РегИНзегз апй РеесИпд 51иГГз, 1963.
Определение кобальта с нитрозо-К-солью. Р е а к ­
т и в ы и о б о р у д о в а н и е . 0,1%-ный водный раствор
ннтрозо-К-соли (1 мг реагента в 1 мл. Хранить в
склянке из темного стек л а),. стандартный раствор ко­
бальта*, концентрированная и разбавленная (121)
*
Для приготовления раствора, в 1 мл которого содержалось
бы 1 мг кобальта, берут 2,6299 г сернокислого, 4,0372 г хлористо­
го и 4,9381 г азотнокислого кобальта. Одну из этих солей кобальта
(в виде кристаллов) помещают в 1000-миллилитровую мерную кол­
бу и растворяют в дистиллированной воде. Затем добавляют 2 мл
соответствующей кислоты и доводят объем раствора до метки. Стан­
дартные растворы меньшей концентрации (5 и 1 мкг в 1 мл) гото­
вят соответствующим разбавлением основного раствора.
121
азотная кислота, концентрированная и разбавленная
( 1: 1 и 1 :1 0 ) соляная кислота, 40%-ный раствор ук­
суснокислого натрия, индикатор бромкрезол зеленый
и универсальная индикаторная бумага, 15%-ный рас­
твор лимоннокислого и 16%-ный раствор уксуснокисло­
го натрия, смесь из одной части 85% -«ой фосфорной
и одной части концентрированной азотной кислоты;
фарфоровые тигли, химические ^ стаканы, бюретки,
пипетки разной вместимости, мерные колбы на 25 и
50 мл.
Метод А (ацетатная
среда).
Определять
кобальт этим методом допустимо при содержании в
исследуемом растворе 1 мг железа и 0,1 мг меди (колориметрирование проводят при длине волны 500
550 нм). В этцм сл у ч ае3можно исследовать корма, не
освобожденные от примесей.
Ход определения. 1. Раствор золы, содержащий
1— ю мкг кобальта, упаривают на воздушной или пес­
чаной бане почти досуха, к остатку добавляют 1 мл
концентрированной азотной кислоты и продолжают
упаривать почти досуха для окисления возможно содер­
жащегося в осадке двухвалентного железа.
2.
Осадок растворяют затем в смеси 5 мл воды
1 мл разбавленной ( 1: 1) соляной кислоты и 1 мл раз­
бавленной азотной кислоты. При необходимости рас­
твор кипятят в течение нескольких минут для раство­
рения всех растворимых соединений.
П р и м е ч а н и я . 1. Если образец корма богат солями каль­
ция, объемы кислот могут быть увеличены в 2—3 раза'.
2. Чтобы предотвратить разбрызгивание растворов при кипя­
чении, в химический стакан целесообразно положить фарфоровую
или стеклянную трубочку.
•*
3. Добавляют в содержимое 2 мл раствора нитрозоК-соли и 4 мл водного раствора ацетата натрия. На
этой стадии рН раствора должен быть близок к 5,5.
Кислотность раствора можно проверить, взяв неболь! Шую каплю раствора и установив ее рН с помощью
бромкрезола зеленого или по универсальной индика­
торной бумаге (р.аствор предварительно выдерживают
3 мин).
4. Раствор кипятят в течение 1 мин, после чего при­
ливают к нему 2 мл полуконцентрированной аэотной
кислоты и снова' кипятят столько ж е (при появлении
1> '
У|
большого осадка солей кальция можно добавить до
5 мл кислоты).
5.
Жидкость охлаждают в темноте до комнатной
температуры, переливают в мерную колбу (или про­
бирку на 25 мл), объем ее доводят до метки и опре­
деляют кобальт. Келориметрируют на визуальном ко­
лориметре или электрофотоколориметре с синим (при
длине волны 420 нм) или светло-зеленым светофильт­
ром (при длине волны 500—550 нм) в присутствии
железа (2 мг и более) при толщине кюветы 5 см.
П р и м е ч а н и я . 1. В голубой области спектра часть света
поглощается железом, если этот металл не удален. При. длине вол­
ны 500—550 нм ошибка из-за поглощения света железом, обуслов­
ливающим жеятую окраску раствора, сводится до минимума.
2. Если раствор непрозрачен, его фильтруют и затем измеряют
интенсивность окраски.
М е т о д Б. При определении содержания кобальта
в продуктах животноводства (печени, мышцах, крови,
молоке, яйцах), не освобожденных от сопутствующих
элементов, можно рекомендовать метод, применяемый
Академией наук Латвийской ССР.
Ход определения. 1. В химическом стакане анали­
зируемый раствор выпаривают на водяной бане до
10 мл.
2. При высокой концентрации железа к образцу
(кровь, печень й т. д.) прибавляют затем 2 мл 15%-но­
го.раствора лимоннокислого- и 16%-ного раствора ук­
суснокислого натрия. При малом содержании железа
в образце (молоко, мышцы и т. д.) прибавляют 2 мл
насыщенного раствора уксуснокислого натрия.
3. Анализируемую жидкость нейтрализуют 2 н. ра­
створом гидроокиси аммония до нейтральной реакции
(проверяют универсальной индикаторной или лакмусо­
вой бумагой), а от избытка гидроокиси аммония ее
освобождают нагреванием на электроплитке.
4. К подготовленной таким образом жидкости до­
бавляют 2 мл 0,1%-ного раствора нитрозо-К-соли.
5. Содержимое нагревают на электроплитке в тече­
ние 3 мин до кипения, чтобы образовался комплекс
кобальта и нитрозо-К-соли.
6. При высоком содержании железа в исследуемом
образце к жидкости добавляют 2 мл смеси одной час­
ти 85% -ной фосфорной и одной части концентрирован­
ной азотной кислот, а при малом содержании желе,
123
ф
V-Ё%^
$
V
*
за в исследуемом образце — 2 мл полуконцентрированной азотной кислоты.
•
7. Анализируемый раствор нагревают до кипения
для разрушения окрашенных соединений железа, меди
и никеля.
8, раствор затем охлаждают и переливают в мер­
ную колбу на 25 мл.
шифрованной водой объем раствора
до метки, содержимое перемешивают.
10.
Интенсивность окраски полученного
раствора
сравнивают с окраской приготовленного при тех ж е ус­
ловиях стандартного раствора и вычисляют содержание
кобальта в биологических объектах.
Приготовление стандартной шкалы кобальта (для
методов А, Б ). В химические стаканы на 100 мл вно­
сят стандартный раствор кобальта из расчета последую­
щего содержания в стаканах 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5,
5,0; 15,0 и 20 мкг кобальта, после чего дистиллирован­
ной водой доводят объем растворов в стаканах до
10 мл и далее поступают так, как описано при изло­
жении хода анализа по любому из вариантов методи­
ки. Таким образом получают стандартную шкалу, ра­
створы которой содержат (в 1 мл) соответственно
0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,20; 0,60 и 0,80 мкг кобальта.
Д ля постановки нулевого показания прибора при
фотометрировании в качестве компенсационного упот­
ребляют раствор, .приготовленный со всеми указанны­
ми выше реактивами, но*без раствора кобальта (и ез
раствора золы).
Кобальтом богаты черноземы. Бедны им подзолистые, песча­
ные к и с л ы е % ф я Ни
лесные, засоленные почвы
и сероземы. Известкование препятствует использованию
кобальта, а внесение в почву суперфосфата наоборот сп^°бствует
его усвоению. Бобовые растения содержат
И Щ
0,70 мг в 1 кг сухого вещества), чем-злаки (0,08 0,26 мг в 1 кг
сухого вещества).
Главная масса кобальта откладывается в 1
В
В
|
поджелудочной железе, печени, селезенке, летки^ крови животных.
Обогащены кобальтом железы внутренней секреции и плацента.
В крови и тканях животных содержится обычно весьма незначи­
тельное его количество. Поэтому на основании химического анали­
за крови или органов больных животных не всегда можно ставить
диагноз на отсутствие кобальта; надо проводить анализ кормов и
; “ в Резкие симптомы кобальтовой « ю и г и я ю я » , у . р у с о г о
рогатого скота проявляются при содержании в 1 кг сухого вещест
ва корма 0,04 мг, а у о в е ц — 0,07 мг кобальта.
124
ПЕРЕСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ХИМИЧЕСКОГО
АНАЛИЗА КОРМОВ
Пересчет данных-ч анализа на корм натуральной
влажности. Химическому анализу подвергают обычно
пробу воздушно-сухого корма. Полученные в резуль­
тате этого показатели следует пересчитать на корм на­
туральной (в условиях его хранения в хозяйстве) влаж­
ности*. Формула для такого пересчета:
х
а- ( 1 0 0 - 5 )
100
где х — содержание определяемого вещества в корме
при натуральной влажности ( %) ; а — содержание оп­
ределяемого вещества в воздушно-сухом корме ( %) ;
В — первоначальная влажность анализируемого корма
# ( %) ; (100— В) — содержание воздушно-сухого вещест­
ва в 100 г корма при натуральной влажности.
П р и м е р . Влажность кукурузного силоса равна 75^%., Со­
гласно результатам анализа силоса в воздушно-сухом состоянии,
сырого протеина в нем содержится 10% (а ). Сколько сырого про­
теина будет содержаться в кормё при натуральной влажности?
При первоначальной.влажности корма, равной 75%, в 100 г его "
будет содержаться 25 г воздушно-сухого вещества (100—75= 25;
100 — В) . Поскольку в 100 г воздушно-сухого корма содержится
10 г сырого протеина, то в 25 г воздушно сухого корма протеина будет содержаться
Следовательно, в 25 г воздушно-сухого корма, что соответст­
вует 100 г натурального влажного силоса, содержится 2,5 г сырого
протеина, т. е. 2,5%.
Аналогичным образом пересчитывают другие пита­
тельные вещества и гигроскопическую воду.
Вычисление всей влаги и сухого вещества корма.
Общее количество воды в корме находят сложением
показателя первоначальной влажности корма и коли­
чества гигроскопической воды, содержащейся в 100 г
корма при натуральной влажности.
Пример.
Первоначальная влажность кукурузного силоса
равна 75% (В), гигроскопической воды в воздушно-сухом корме
*
Если подвергали анализу образец гёорма без предваритель­
ного высушивания, то показатели анализа не пересчитывают. 1
125
содержится 8% (а). Следовательно, гигроскопической водц в корме при натуральной влажности содержится
8 -(1 0 0 -7 5 )
100
2 %.
Отсюда всего воды в силосе будет содержаться 75 + 2 - 77%,
а абсолютно сухого вещества — 23% (100—77).
Пересчет данных анализа на абсолютно сухое веще­
ство корма. Д ля сопоставления между собой данных
химического анализа различных кормов их пересчит вают в расчете на абсолютно сухое вещество по сле­
дующей формуле:а - 100
1 0 0 -Г
И
ь'ЛИ
ВДУУг ^
1^
-у ф
содержание вещества в абсолютно сухом корме
где х
в
03*
ещества
содержание
питательного
(%);■ а
со­
Г
коэффициент
душно-сухом корме ( % ) ; ю о
исследуемом корме гигроскопической воды
держание
Г
—
содержание
абсолютно
сухого
вещества
( %) ; юо
в 100 г воздушно-сухого корма ( %) .
П р и м е р . Сырой золы в воздушно-сухом корме содержится
6,5%, гигроскопической воды — 7,5%. Подставив эти данные в фор­
мулу, получим:
■ ■'
™
' У-'
6,5-100
7,02 %.
100-7,5
Таким образом сырой золы в абсолютно сухом веществе кор­
ма будет содержаться 7,02%.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ
КОРМОВ С ПОМОЩЬЮ КАЛОРИМ ЕТРА
УСТРОЙСТВО И П РИ Н Ц И П РАБОТЫ КАЛОРИМЕТРА
Оценка питательности кормов по содержанию об­
менной энергии требует определения количества энер­
гии, поступившей в организм с кормом (или рационом-)
и выделенной из организма с калом и мочой (для ло­
шадей и свиней) или с пометом (для птицы). Энерге­
тическую ценность образца корма определяют при сж и­
гании его в калориметре в кислородной среде под
давлением 25 атм. Выделенное при сгорании тепло у л ав­
ливается водой, находящейся в калориметрическом со­
суде, и контролируется термометром. Повышение тем­
126
Рис. 8. Схема калориметра с приспособле­
ниями:
1 — наружная оболочка;
сосуд калориметра;
3 — термометр Бекмана; 4 — лупа; б — стойка для
прикрепления лупы и термометра; 6 — электромо­
тор; 7 — калориметрическая бомба; 8 — распреде­
лительный щит.
пературы выражают в тепловых единицах — калориях
(джоулях* — Д ж или килоджоулях — кДж). Количест­
во тепла, необходимое для нагревания на 1°С 1 г во­
ды имеющей температуру 14,5°С, называется малой
калорией (кал). Большая калория (к к а л )— количество
тепла, необходимое для нагревания 1 кг воды на
ГС.
Необходимое оборудование, посуда, реактивы. Ка­
лориметр, пресс для приготовления брикетов (таблеток),
манометр, баллон с кислородом, технические весы,
секундомер или специальные <1асы, химические стака­
ны на 100 мл, мерные цилиндры на 25 мл. стеклянные
палочки длиной 20—25 см, две склянки для дистил­
лированной воды на 3000 мл, склянки на 2000—3000 мл;
0,1 н. раствор ЫаОН, метилоранж (или другой инди­
катор).
Устройство калориметра. Калориметр (рис. 8) состоит из наружнЪА оболочки, калориметрического сосуда, 'калориметрической
бомбы, мешалки, термометра Бекмана, электромотора и распре­
делительного щита.
Наружная оболочка — термостат
калориметра — представляет
собой двустенный сосуд с двойным дном, наполненный водой ком­
натной температуры. Закрывается он крышкой из двух половин с
• 1 кал равна 4,1868 Д ж (1 ккал — 4,1868 кДж) энергии.'
127
тремя отверстиями (для термо­
метра, мешалки и токопроводов).
На оболочке установлены две
стойки: на одной имеется пружин­
ный держатель для термометра,
на другой — для лупы. Термостат
предназначен для защиты калори­
метрического сосуда от потерь
тепла в<2 время проведения опыта.
Калориметрический сосуд
(вед­
ро), наполненный определенным
(взвешенным) количеством воды
(температура ее на 1,5—2°С ниже
комнатной), ставят внутри тер­
мостата на прокладку из тепло­
изоляционного материала. Глав­
ная часть прибора — калориметри­
ческая бомба (рис. 9 ), в кислород­
ной среде которой сжигается ис­
следуемое вещество. Она пред­
ставляет собой толстостенный ци­
линдрический сосуд из антикорро­
зийной стали вместимостью около
300 мл с герметично закрываю­
щейся крышкой. Крышка бомбы
оборудована двумя клапанами:
входным, заканчивающимся труб­
кой, доходящей почти до дна бом­
бы и необходимой для заполнения
Рис. 9. Калориметриче­
ее кислородом. Эта трубка одно­
ская бомба в разрезе:
временно служит электродом. Че­
рез другой клапан выпускают воз­
1 — вентиль для впуска кис­
лорода; 2 — вентиль для вы­
дух 'при заполнении бомбы кисло­
пуска продуктов сгорания;
родом, а также газы, образующие­
3 — трубка для ввода кисло­
ся при сжигании вещества. Клапа­
рода, сл у ж ащ ая электродом;
4 — кольцо для закрепления
ны закрываются винтами. Через
тигля; 5 — тигель д л я ежи*
крышку бомбы проводит второй
гания вещества; 6 — за п а л ь ­
электрод, изогнутый в кольцо, в
н ая
п р о в о л о к а ; 7 — стер­
ж ень — второй электрод; 8—
котором размещается платиновый
эбонитовая
прокладка; 9 —
или
кварцевый
тигель
(чашечка)
крыш ка бомбы.
Н Н Н Н Н Н Ц Н
с навеской вещества. Д ва электрода соединяются между собой запальным проводом (тонкая железная
проволочка), проходящим через таблетку испытуемого вещества (если
для сжигания вещества не используют хлопчатобумажную нить). При
пропускании электрического тока происходит сжигание вещества в
тигле.
При сжигании в калориметрической бомбе вещества важно с
большой точностью определить разность температур в этот период,
для чего используют термометр Бекмана, указывающий темпера­
туру в пределах 1 6 -2 5 ° С - (рис. 10). Термометр Бекмана состоит
и з большого резервуара со ртутью, капилляра очень малого радиу­
са, дополнительного резервуара для ртути у верхней его части- На
обычно очень длинной (около 5 см на 1 С) шкале термометра на
несены деления от 0 до 5°С, подразделенные на сотые части гра-
128
Ряс. 10. Термометр Бекмана:
нижний резервуар; 2 — капилляр; 3 — колено верхнего ре*
зервуараГЧ— верхний резервуар.
дуса*, причем с помощью лупы можно делать отсчеты
температуры с точностью до 0,001°С. ч*
Особая конструкция термометра дает возможность
настроить его для разных температур. Так как при к а -.
лориметрических исследованиях температура не подни­
мается более чем наг 3—4°С, то ртутный столб термо­
метра следует установить на ноль или несколько выше,
но не более чём на 0,5°С, чтобы участка шкалы хватило
для измерений.
Допустим, что температура воды в калориметриче­
ском сосуде слишком низка и ртуть в термометре стоит
ниже нуля. В этом случае необходимо переместить часть
ртути из верхнего резервуара в нижний, для чего берут,
термометр правой рукой посередине и подогревают ниж­
ний резервуар левой рукой, пока ртуть не заполнит весь
капилляр и небольшая капля ее не перейдет в верхний
резервуар (рис. 11, а). Затем быстро опрокидывают
термометр верхним резервуаром вниз и слегка посту­
кивают по нему с тем, чтобы ртуть из нижней части
верхнего резервуара перешла в верхнюю его часть и со­
единилась* с выступающей каплей ртути в капилляре,
после чего осторожно переводят термометр снова в
прежнее положение (рис. И , б ). Далее нижний резер­
вуар термометра помещают в воду, при этом капля рту­
ти, соединенйая с ртутью в капилляре, будет переходить
в иижний резервуар. Когда в верхнем колене резерву­
ара останется меньше ртути, термометр вынимают из
воды и, держа его за верхнюю часть, быстро обрывают
ртуть в капилляре, в месте его соединения с верхним
резервуаром (рис. 11, в), слегка ударив верхнюю часть
'Термометра об указательный палец,
д
Если при погружений в жидкость калориметра уро­
вень ртути будет стоять гораздо выше нужного деле­
ния, необходимо перегнать часть ее из нижнего резер­
вуара в верхний. Для этого, вынув термометр из воды,
нижний резервуар прогревают рукой или Теплой водой.
Затем каплю ртути, образующуюся в конце капилляра,
сбрасы&ают в верхний резервуар легким постукиванием верхней ча
сти термометра о руку.
Установка термометра — операция непростая: она требует оп
ределенного навыка.
После настройки термометр необходимо укрепить в вертикаль
ном положении. В таком положении он должен находиться всегда
и
*
При калориметрических исследованиях температура воды не
должна подниматься выше чем на 3—4°С, так как при более вы­
сокой температуре воды наблюдается большая потеря тепл)! кало*
риметром, что может служить причиной ошибок.
9. Заказ 7445
-\
129
5
4
3
2
1
Известно, что при сж ига­
нии вещества в калоримет­
ре тепло расходуется не
только на нагревание воды,
но и частично теряется на
нагревание калориметриче­
ского сосуда, бомбы, мешал­
ки, оболочки термометра.
Чтобы точно определить ко­
личество тепла, выделившее­
ся при сгорании исследуемо4
го вещества, необходимо
знать, сколько его поглоще­
но калориметром, т. е. опре­
делить так называемый вод­
ный эквивалент (теплоем­
кость) калориметра.
1
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е ВОДНОГО
ЭКВИВАЛЕНТА
Водный эквивалент кало­
риметра — это
количество
гепла, расходуемое для на­
гревания
калориметриче­
ской системы (калориметри­
ческого сосуда, находящей­
ся в нем воды, калориметри­
ческой бомбы с ее содержи­
мым и погруженных в воду
частей мешалки и термометра) на 1°С. Для определеа
6
ния водного эквивалента в
Рис. 11. Различные вариан­
бомбе калориметра сжига­
ты установки
термометра
ют эталонную бензойную киБекмана.”
слоту (СбН5СООН), тепло­
та сгорания I г которой равна 6324,4 кал (26,48 к Д ж ).
Предварительно ее в течение 2—3 дней высушивают в
эксикаторе над серной кислотой. Д ля приготовления
брикета используют 0,5— 1 г бензойной кислоты. Взве­
шенный с точностью до 0,1 мг- брикет помешают в тигель
калориметра и сжигают (технику сжигания см. на стр.
135— 136). Водный эквивалент вычисляют по формуле.
№
< 2 -4 130
где
— водный эквивалент; иР — общее количество вы­
делившегося тепла; / 1— повышение температуры.
П р и м е р . Масса брикета бензойной ^кислоты 0,7850 г; в ка­
лориметрический сосуд налито 2000 г дистиллированной воды (она
должна покрывать бомбу до колпачков штуцеров. При определе­
нии водного эквивалента и тепловой энергии веществ берут одина­
ковое количествог воды, причем, наливая ее в сосуд, учитывают ее
массу). При сгорайЬи бензойной кислоты температура повысилась
на 2,150°С. Теплота сгорания 1 г бензойной кислоты равна
6324,4 кал (26,48 к Д ж ). Отсюда при сгорании 0,7850 г бензойной
кислоты выделится 4964,7 кал (20,79 кДж) тепла. Теплота сгора­
ния проволочки 18,7 кал (0,078 к Д ж ), теплота образования и рас­
творения азотной кислоты 2,4 кал (0,01 кД ж ). Следовательно, все­
го выделится 4985,8 кал (20,87 кДж ) тепла (4964,7+18,74-2,4). Это
количество тепла выделяется
при повышении температуры . на
2,150°С. В расчете ж е на 1°С выделится тепла 2318,98 кал
(9,71 кД ж ) (4085,8 : 2,150).
Водный эквивалент рассчитывают как среднее ариф­
метическое пяти калориметрических определений, ре­
зультаты которых не должны отличаться друг от друга
более чем на ±0,3% .
Водный эквивалент — величина относительно посто­
янная. При неизменных условиях его определяют не ре­
же чем через 3 месяца. При соответствующих измене­
ниях (например, при ремонте, замене частей прибора
или проведении исследований в другом помещении) этот
показатель определяют заново.
ПОПРАВКА НА ТЕПЛООБМЕН КАЛОРИМЕТРА
Во время исследований .калориметр может отдавать
или получать некоторое количество тепла из окружаю* щей среды. В связи с этим вычисляют поправку, кото­
рая может быть положительной, отрицательной или рав­
ной нулю, причем возможны следующие варианты: 1) в
случае понижения температуры в предварительный и
заключительный периоды поправка будет положитель• ной; 2) повышение температуры в предварительный и
заключительный периоды приводит к отрицательной по­
правке; 3) температура снижается в предварительный
период и повышается в заключительный. В этом случае
поправка может быть положительной, отрицательной
или равной нулю; 4) температура повышается в предва• рительный период и понижается в заключительный, в
результате чего поправка может быть положительной,
отрицательной или нулевой.
9*
131
9
ч д
Г - т *. ’ ! .
" I * 1*
?
?
**■ -
-
Г
•*■*■•
*
'
Поправку на теплообмен калориметра определяют
по формуле:
. .
>
'0—1)\к
бц+ Оо
. ■/
П'
*2 Л / = 7 ^ - ( 2 6 г + - ^ -------- п 0 - ( я - 1 ) о ,
где п — число отсчетов температуры в течение главного
периода; V — колебание температуры в начальный пе­
риод в среднем за 1 мин (изменение температуры за
весь период делят на число минут); 01 — то же, для за ­
ключительного периода; | — средняя температура на
чального периода; ^ — средняя температура заключи­
тельного периода; б — температура главного периода,
при этом 6 П — последний отсчет, Ц — первый .отсчет;
б|-тбо
•
2 б/- = 60 + 6 1 + 6 2 + -------Ьбп-- 4 + -
.
9
Поправку ± 2 Д * п р и б а в л я ю т ^ наблюдавшемуся повы­
шению температуры в,главный период.
ят
Кроме поправки на теплообмен калориметра, вводят
поправки на теплоту сгорания запала (проволоки или
проволоки и нити) и на теплоту, выделяющуюся при
образовании кислот (азотной, серной).
Ш 1Ш
При калориметрических исследованиях для
используют железную проволоку Диаметром 0 1 - 0 ,1 5 мм,
теплота сгорания 1 г которой равна 1601 кал (6,70к Д ж ).
Обычно берут проволоку длиной 90— 100 мм при « г а г
ний без нити и длиной 60—70 мм при сжигании поср д
Зная массу сгоревшей проволоки, можно определить
количество выделенного ею тепла.
Например, масса проволоки равна 0,0195 г, масса несгоревшей
ее части — 00125 г, следовательно, сгорело 0,007 г (0,0195—0,0125).
Поскольку при сгорании 1 г такой проволоки выделяется 1601 кал
(6,70 кД ж ) тепла, то при сгорании 0,007 г выделится 11,207 кал
1601 ■0,007
(0,047 кД ж )
1
При сжигании пробы посредством проволоки и нити
используют воздушно-сухую хлопчатобумажную нить
длиной около 50 мм, которую взвешивают с точностью
до 0,1 мг. Теплота сгорания 1 г нити равна 4000 кал
(16,75 к Д ж ).
/
'.
При массе нити, равной 0,003 г, выделится 12,0 кал
(4000 0,003), или 0,05 кД ж тепла.
132
Перед сжиганием веществ на дно бомбы наливают
8— 10 мл дистиллированной воды для поглощения обра­
зующихся при сжигании окислов. По окончании сжигания воду из бомбы переливают в стакан, бомбу ополас­
кивают из промывалкн дистиллированной водой и
последнюю выливают в тот же стакан. Затем в стакан до­
бавляют индикатор и содержимое титруют 0,1 н. рас­
твором едкого натра. Расчет ведут условно на азотную
кислоту, зная, что 1 мл 0,1 н. раствора едкого натра со­
ответствует 0,0063 г азотной кислоты, а при образовании
1 г ее выделяется 227 кал (0,95 кДж) тепла.
Определить с помощью калориметрической бомбы
можно энергетическую ценность самых разнообразных
веществ — кормов, молока, кала, мочи и т. д. Жидкие
вещества предварительно высушивают в вакууме или
выпаривают, а затем, как и все другие вещества, высу­
шивают в сушильном шкафу при температуре 60—65°С.
Вещества, богатые жиром, который выдавливается при
прессовании, предварительно экстрагируют серным эфи­
ром, а после обезжиривания высушивают и размалыва­
ют. Эфирную вытяжку надо профильтровать, эфир ото­
гнать, а жир взвесить и определить его энергетическую
ценность. Затем энергетическую ценность жира и обез­
жиренного вещества суммируют в тех соотношениях, в
которых они находятся
испытуемом веществе
Для определения вало­
вой энергии отвешивают
около 0,8— 1 г испытуемого
вещества. Исключение составляют жиры, масса образца которых должна быть
не более 0,5 г, поскольку
они отличаются высокой
энергетической ценностью.
Высушенный и из мельченныи корм сжигать в виде
какН Н Н
порошка нельзя, так ' ' Щ
часть его может быть выбро­
шена из тигля. Поэтому спе­
циальным прессом (рис. 12)
из измельченного вещества
готовят таблетки (брикеты), рис 12. Пресс для «рнготовкоторые очищают от приления брикетов.
О
33
ставших частиц вещества и взвешивают с точностью до
0.1 мг'
т/
V ■
-"
Если брикет сжигают с помощью железной проволоки то ее взвешивают и вставляют в прорезь конуса
матрицы пресса, в котором готовят брикет. Если ж е для
сжигания используют нить, что надежнее, то брикет готовят без проволоки.
*1 * и
,
ТЕХНИКА
ПОДГОТОВКИ КАЛОРИМЕТРИЧЕСКОЙ
И СЖ ИГАНИЕ О БРАЗЦА КОРМА
БОМБЫ
Калориметрический сосуд наполняют таким ж е ко­
личеством воды, которое было взято для .определения
водного эквивалента. При этом обращают внимание на
то чтобы на наружной поверхности калориметрического
еосуда и внутренней его поверхности, находящихся вы­
ше уровня воды, не осталось ее капель, так как от ис­
парения их во время опыта точность результатов сни­
жается. Температура воды в калориметре должна быть
на 1 5 __2°С ниже температуры комнаты. Затем калори­
метрический сосуд ставят на подставку в оболочку ка­
лориметра. На дно чистой и сухой бомбы наливают пи­
петкой 8— 10 мл дистиллированной воды для растворе­
ния минеральных кислот, образующихся при сжигании
брикета. Крышку бомбы устанавливают на штатив с
кольцом и на кольцо токоведущего штока бомбы укреп­
ляют тигель для брикета.
Затем один конец запальной проволоки прикрепляют
к токопроводящему штифту, а другой обматывают вок­
руг кислородопроводящей трубки/ являющейся такж е
контактом. К середине проволоки привязывают один ко­
нец хлопчатобумажной нити, а другой ее конец опуска­
ют на дно предварительно прокаленного тигля. После
этого в тигель кладут образец сбрикетированного веще­
ства (брикет должен прижать конец нити).
Крышку калориметра с надетыми на нее резиновым
и металлическим кольцами медленно погружают до упопа в стакан, при этом металлическое кольцо должно
В
направлено косым срезом вниз. На стакан иадевают зажимное кольцо и завинчивают его до отказа.
Бомбу наполняют кислородом, д л я чего на входной кла­
пан навинчивают шланг от кислородного баллона, про­
ходящий через манометр, и открывают выходной клап ан Т ветти л ь). При открытых клапанах очень осторожьД10
134
но начинают открывать баллон с кислородом ( ток кисло­
рода должен быт* слабым). Воздух из бомбы при этом
вытесняется кислородом (выходной клапан оставляют
открытым на 1—2 мин). Затем выходное отверстие за ­
крывают конусом штуцера и бомбу наполняют кислоро­
дом. Когда давление в бомбе, достигнет 25 кг/см2, что
видно по показанию манометра, кран кислородного бал­
лона закрывают, шланг от входного клапана отвинчи­
вают (закрывается он автоматически) и на нарезанную
часть штуцеров навертывают колпаки.
Бомбу погружают в калориметрический сосуд с во­
дой, держа ее за колпачки так, чтобы не касаться паль­
цами воды. Токоведущие провода присоединяют к клем­
мам бомбы и устанавливают мешалку так, чтобы она не
задевала за бомбу или стенки сосуда. Затем устанав­
ливают термометр,, оболочку калориметра закрывают
крышкой и включают мотор, приводящий в движение
мешалку. После выравнивания температуры (температура
калориметрической системы начинает изменяться рав­
номерно) проводят исследование в три периода — пред­
варительный, главный и заключительный. В течение
предварительного периода, пользуясь секундомером, на
протяжении 5— 10 мин измеряют температуру через ин­
тервал в 1 мин. Вр избежание возможной ошибки, выз­
ванной прилипанием ртути к стенке капилляра, термо­
метр перед каждым отсчетом постукивают деревянной
палочкой, на конец которой надета резиновая трубка.
Температура должна изменяться медленно, но равно­
мерно. Этим заканчивается предварительный период.
Затем включают ток, чтобы замкнуть цепь зажига­
ния После включения тока лампочка нй щите управ­
ления должна вспыхнуть и погаснуть. Если лампочка не
зажглась, значит, неисправны контакты. С момента
включения тока начинается главный период, в течение
которого ежеминутно записывают показания термомет­
ра пока температура не достигнет максимума, что обыч­
но наблюдается через 5—6 мин после сжигания вещест­
ва. Последний отсчет температуры в предварительном
периоде является первым отсчетом ее в главном перио­
де, а последний отсчет температуры в главном перио­
де — первым отсчетом ее в заключительном периоде.
С установления в главном периоде постоянной тем­
пературы начинается заключительный период* в ходе
которого температуру продолжают отсчитывать в тече135
ние 5— 7 мин, пока ее колебания между смежными по­
казаниями не станут постоянными. Показания всех от­
счетов заносят в журнал. Количество теплоты, выделив­
шейся при сжигании исследуемого вещества в калори<г(*±2Д0-(&1+Ь)
метре, вычисляют по формуле:
х~
Щ
’
где х — количество энергии, содержащейся в 1 г вещест­
ва (кал, Д ж ); р — водный эквивалент калориметра;
^ п о в ы ш е н и е температуры в течение главного перио­
да; | 1 р — поправка на теплообмен калориметра; Ь —
поправка на теплоту, выделяемую проволокой или про­
волокой и нитью; Ьх — поправка на теплоту, выделенную
при образовании азотной кислоты; Н — масса корма,
взятая для сжигания (г).
По окончании опыта калориметр разбирают в следу­
ющем порядке: вынимают термометр и ставят его в шта­
тив в вертикальном положении. Отключают от бомбы
провода и вынимают мешалку. Затем, положив полотен­
це, чтобы капли воды не попали на дно оболочки кало­
риметра, осторожно вынимают бомбу и обтирают ее сна­
ружи. Поставив бомбу на стол в специальную подстав­
ку, отвинчивают колпачок выпускного штуцера, осто­
рожно открывают штуцер и медленно выпускают из бом­
бы неиспользованный кислород и газообразные продук­
ты горения. После этого отвертывают зажимное кольцои вынимают крышку бомбы. Оставшуюся проволоку
снимают и взвешивают. Д алее вынимают тигель, воду
из бомбы выливают в стаканчик, бомбу споласкивают
дистиллированной'водой, сливают воду в тот ж е стакан,
приливают в него индикатор и оттитровывают 0,1 н. р а­
створом едкой щелочи.
По окончании работы с бомбой ее промывают дис­
тиллированной водой, высушивают, крышку протирают
. 96-градусным спиртом (для просушивания) и укрепля­
ют на штатив. Колпачки остаются в бомбе. Из калори­
метрического сосуда воду выливают и его также тщ а­
тельно протирают легкой тканью.
Я
Пример
вычисления
калорийности
вещества
(по М. Ф. Томме). Масса таблетки корма с проволокой 0,5189 г,
масса проволоки 0,0333 г, масса корма, взятог4о ДЛЯ анализа,
0,4856 г, масса несгоревшей проволоки 0,0222 г. На титрование
азотной кислоты пошло 0,92 мл 0,1 н. раствора щелочи. Водный
эквивалент калориметра 2758,8. Показания термометра Бекмана.
*
136
* •
Периоды
н^
температура
(град )
си
и
время от
начала опыта
(мин)
(мин)
.
заключительный
11-й
12-й
13-й
14-й
15-й
10
11
12
13
14
2 , 4 07
2 ,4 0 7
2 ,4 0 8
2 ,4 0 6
2 ,4 0 2
—
—
— щ
Щ
С
‘
О.
н
СО
С*.
5
се
4? о*
отсчеты
СО
«Аж
в. к
т
о»
н
О
,
V О
С **
отсчеты
время от
начала опыта
отсчеты
СИ
-
|
главный
время от
начала опыта
(мин)
1
предварительный
I
я
И
1-й
2-й
3-й
4-й
5-й
0
1
2
3
4
--■■
•
—
З
1,643
1,641
1,636
1,633
1,630
5-й
6-й
7-й
8-й
9-й
10-й
11-й
Щ
'
1 ,6 3 0
1,9 93
2 ,3 1 3
2 ,3 7 4
2 ,3 8 8
2 ,4 0 3
2 ,4 0 7
4б0
56,
66г
7 ...
8 ...
96(п-1)
Ю6„
I
Сначала надо вычислить поправку на теплообмен калориметра по формуле:
и -1
V
Щ - (я—1)17.
2
1,630 - 1,643
0,013
4
4
0,00325 ;
1,643-И ,641 + 1,636 +1,633 +1,630
5
VI
1
2 ,4 0 2 -2 ,4 0 7
1,636;
0,00125;
4
2,407+ 2,407+ 2,408+ 2,406+ 2,402
2,406;
5
0,002;
0,00325— ( —0*00125)
/ , - / = 2 , 4 0 6 — 1,636 = 0,770;
6п + бо
2,018
2
2
26г
2,407 + 1,630
6 ,-6 о
1,993 -1 ,6 3 0
9
9
0,040;
1,630+1,993+ 2,313+ 2,374 4* 2,388+2,403 + 0,040 -1 3 ,1 4 ! ?
;Й —7 *1,636= 11,452;
(я— 1) 1; = 6 - (-0 ,0 0 3 2 5 ) = —0,019; '
^
ЕЛ/
- 0 , 0 ° 2- . (1 3 ,1 4 1 + 2 ,0 1 8 -1 1 ,4 5 2 ) - ( - 0 , 0 1 9 ) =
0,770
0,0026 •3,707 + 0,019 = 0,0094.
\
137
Поправку эту надо прибавить к повышению температуры в
главный период. Повышение температуры в главный период • *
равна 2,407—1,630=0*777°.
:
.
Теплота образования и растворения азотной кислоты (стр. Щщ)
Ь[ равна 0,92• 0,0063• 227 = 1,32 кал (5,53 Д ж ).
Теплота сгорания железной проволоки (запала; стр. 1о1)
Ь равна 0,0111*• 1601 == 17,77 кал (74,40 Д ж ).
Следовательно, калорийность корма равна
2758,8 (0,777+0,0094) - (1,32+ 17,77)
4428,396 кал (18,54 к Д ж ).
0,4856
Д л я установки калориметра нужна отдельная комтемпературы
и
колебаниями
ната с минимальными
олажности воздуха. В ней не должны находиться нагре­
вательные приборы и храниться баллоны горючего газа
с кислородом. Калориметр, особенно его бомбу, соеди­
нительный трубопровод и манометр, необходимо защ и­
тить от загрязнения жирами (маслами). До проведения
необходимо
Исследований калориметрическую бомбу
проверить на герметичность.
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е ВАЛОВОЙ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ
'
КОРМА ПО ЕГО ХИМИЧЕСКОМУ СОСТАВУ
Д л я определения валовой энёргетической ценности
корма расчетным методом необходимо знать его хими­
ческий состав и энергетическую ценность каждого пита­
тельного вещества (табл. 11).
Т а б л и ц а 1'1
Содержание энергии в 1 г питательных веществ
Содержится
Питательные вещества
Ж ир масличных семян
Жир животного происхождения
Ж ир зерновых концентратов
Эфирный экстракт грубых кормов
Протеин животного происхождения
Протеин растительного происхождения
Клетчатка сырая
Ш §й|
Безазотистые экстрактивные вещества щ э К }
Углеводы:
полисахариды
дисахариды
кДж
9 ,5 4 0
9 ,5 0 0
.9 ,4 7 0
7 /962
5 ,7 0 0
5 ,6 3 6
4 ,2 0 0
4 ,0 5 0
39,942
39,775
39 ,6 4 9
33 ,3 3 5
23,865
231597
17I585
16; 957
4,1 8 5
3,9 5 6
17,522
16,563
* Масса сгоревшей проволоки (0,0333 г — 0,0222 г ).
138
*
С большой точностью валовую энергию (У) кормов
можно рассчитать пЗ^формуле: У = 5 , 7 2 (протеин)+
+ 9 ,5 0 -е2 (ж и р )+ 4 ,7 9 -г3 (клетчатка) + 4 ,1 7 -г А (БЭВ).
При расчете по данной формуле возможна ошибка,
равная ±0,9% .
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Р ЕЗ У Л Ь ТА ТО В ХИМИЧЕСКОГО
АНАЛИЗА КОРМОВ В П Р А К Т И К Е КО РМ ЛЕНИЯ
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ж и в о т н ы х
Химический состав кормов зависит от многих факто­
ров: почвенно-климатических условий произрастания,
вида, сорта и фазы вегетации растений, технологии при­
готовления и заготовки корма, условий и продолжитель­
ности хранения. Химический состав и питательность кор­
мов изменяются по годам. Очень большое влияние на
эти показатели оказывают условия погоды во время ве­
гетации растений,
Агротехнические мероприятия, в том числе вид и ко­
личество вносимых удобрений, орошение, система сево-'.
оборотов существенно изменяют ботанический состав и
питательную ценность трав, зерна и семян.
Так, известкование^ обогащает растения кальцием и приводит
к снижению содержания многих микроэлементов. При внесения ка­
лийных удобрений в растениях повышается
содержание калия и
снижается доля кальция и магния, особенно на кислых и легких
песчаных почвах. Внесение азотного или полного минерального
удобрения (ОТК) влияет на ботанический состав травостоя, со­
держание в растениях сырого протеина, и аминокислот. При высо­
ких дозах азотных удобрений (180—360—480 кг на 1 га) изменя­
ется фракционный состав сырого протеста. Повышается в нем доля
небелкового азота, особенно в злаковых травах, а также содержа­
ние нитратов. Концентрация сахара и меди, наоборот, снижается»
Все это может отразиться на использовании питательных веществ
животными и состоянии их здоровья.
К большим потерям питательных веществ и соответ­
ствующим изменениям химического состава кормов при­
водят несовершенство и нарушения в технологии их за­
готовки и хранения.
Так, при полевой сушке трав на сено потери сухого вещества
составляют 25—45%, при искусственной — 4—5%, при приготов­
лении сенажа — 12— 18%, силосовании — 20—30%, химическом кон­
сервировании тр ав— 10— 13%. Установлено также, что в процессе
сушки, особенно естественной, значительно изменяется химическим
состав сухого вещества: уменьшается содержание сахаров, каро­
тина, сырого протеина и аминокислот, минеральных элементов * при
Ш
силосовании заметно снижается также содержание лизина. Повы­
шение температуры в процессе приготовления кормов влияет на
содержание витаминов, аминокислот, их доступность и биологиче­
скую активность.
Ив
Р
Данные химического состава кормов широко исполь­
зуются в комбикормовой промышленности, так как вы­
сококачественные, полноценные комбикорма можно при­
готовить только из сырья с контролируемым лаборатор­
но содержанием необходимых элементов.
Известно, что данные, приводимые в опубликованных
таблицах химического состава и питательности кормов,
часто значительно отклоняются от фактического содер­
жания питательных веществ. Поэтому при составлении
в хозяйствах рационов и контроле полноценности корм­
ления животных, в том числе птицы, необходимо пользо­
ваться данными химического анализа кормов, получен­
ными в лаборатории.
Балансирование рационов по 15—20 нормируемым
показателям (вместо 5—6) с использованием при этом
данных о фактическом содержании питательных веществ
в кормах, способствует более полному проявлению по­
тенциальной продуктивности животных, лучшей пере­
варимости питательных веществ рациона, повышению
эффективности использования кормов и снижению их
затрат на получение-продукции. Зная химический состав
кормов и нормы потребности животных в питании, уста­
навливают фактическую обеспеченность животных пи­
тательными веществами и более точно определяют вид
и количество необходимых балансирующих добавок.
Высокие требования следует предъявлять не только
.к количеству отдельных питательных веществ, содер­
жащихся в кормах, но такж е к их качеству и доступно­
сти для организма.
При организации в хозяйствах полноценного кормле­
ния сельскохозяйственных животных необходимо конт­
ролировать их ответные реакции, используя ветеринарно-зротехнические (продуктивность, здоровье, состояние
воспроизводства, качество продукции и др.), биохими­
ческие и экономические показатели (см. Практикум по
кормлению сельскохозяйственных животных. М., «Ко­
лос», 1977).
При определении содержания в рационах сухого и
органического вещества, сырого протеина, аминокислот,
сырой клетчатки, крахмала, сахара, сырого жира и ж и р­
140
ных кислот, минеральных веществ и витаминов исполь­
зуют данные химиче'йюгО анализа' кормов.
При составлении рационов сельскохозяйственных жи­
вотных нормируют переваримый протеин. Поэтому в та­
ких случаях, а также при анализе рационов сырой про­
теин следует пересчитать в переваримый, пользуясь
коэффициентом переваримости. Коэффициенты перева­
римости питательных веществ некоторых кормов, уста­
новленные в опытах на жвачных-и свиньях, приведены
в Приложении.
.
|Н
Пример пересчета сырого протеина в перева­
р и м ы й . В кукурузном силосе содержится 2,5% сырого протеина,
коэффициент его переваримости равен 60%. Следовательно, перева2,5-60
римого протеина в силосе будет содержаться
Щд
1,0 *
Источником энергии для животных являются все
органические вещества кормов,- Эффективность преоб­
разования валовой энергии кормов рациона в обменную
и продуктивную (чистую) энергию зависит от вида, воз­
раста, физиологического состояния и продуктивности
животных, а также от состава и полноценности рациона,
переваримости питательных веществ и др.
Энергетическую питательность кормов и рационов
сельскохозяйственных животных оценивают в овсяных
кормовых единицах (ОКЕ) и энергетических кормовых
единицах (ЭКЕ), а в птицеводстве — в килоджоулях
(или килокалориях) обменной энергии. ^Содержание в
кормах валовой, переваримой и обменной энергии мож­
но определять прямым методом — сжиганием кормов,
кала и мочи в специальном приборе — калориметре. Ме­
тодика калориметрии приведена на страницах 134— 135.
Энергетическую питательность кормов в ОКЕ или
ЭКЕ можно рассчитать косвенно, используя данные хи­
мического анализа, коэффициенты переваримости пита­
тельных веществ (табличные или полученные опытным
путем) и коэффициенты энергетической ценности переваримых питательных веществ. Методика такого расче­
та на примере отдельных кормов приведена на страни­
це 146. Ориентировочную питательность кормов в ОКЕ
можно определить также Экспресс-методом непосредст­
венно в хозяйствах по содержанию сухого вещества и
поправочным коэффициентам.
141
МЕТОДИКА РАСЧЕТА ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОСТИ
ЗЕЛЕН Ы Х, СОЧНЫХ, ГРУБЫХ И КОНЦЕНТРИРОВАННЫ Х,
КОРМОВ ПО СО ДЕРЖ АН И Ю СУХОГО ВЕЩЕСТВА
И ПОПРАВОЧНЫМ КОЭФФИЦИЕНТАМ
Энергетическая питательность силоса, сенажа, зеле­
ной массы и других кормов зависит от климата и харак­
тера почв в том или ином районе страны, условий пого­
ды, а такж е от времени и способа уборки, хранения
кормов и многих других факторов. Эти факторы влияют
на химический состав кормов и содержание в них сухо­
го вещества.
Д л я ориентировочного определения энергетической
питательности кормов в ОКЕ можно использовать экс­
пресс-метод. Рассчитать содержание кормовых единиц в
зеленых, сочных и грубых кормах можно такж е по сле­
дующей формуле:
св-К
100
П
’
где Я — питательность 1 кг корма (корм, е д .); СВ — со­
держание сухого вещества в корме ( %) ; К — поправоч­
ный коэффициент (см. табл. 12).
П р и м е р р а с ч е т а . В 1 кг зеленой массы клевера красного
содержится 25% сухого вещества. Поправочный коэффициент равен
0,85. Следовательно, общая питательность 1 ,кг зеленой массы кле-
с /
А1 V
& V, I
П
1
Ш
МЛ
Л .Х Л А
% 0<
А
••
Лш*
-----— —
ЛХ
кормов с учетов содержания в них сухого вещества рас­
считывают по следующей формуле:
ф
п
=
в
а
-----с
г^е П — питательность I кг корма с учетом его факти­
ческой влажности (корм, ед.); Л — содержание кормо­
вых единиц в 1 кг корма с известной влажностью, уста­
новленное по таблице (книга «Корма С С С Р»); В — ф ак­
тическое содержание сухого вещества в корме по дан ­
ным химического анализа ( %) ; С — содержание сухого
вещества в корме (%)» соответствующее определенной
его энергетической питательности (по данным таблиц
химического состава и питательности кормов).
Таблица
12
Поправочные коэффициенты для расчета ОКЕ
по содержанию в корме сухого вещества
(данные Н. И. Белоносова, С. Я. Ка л мансона,
Г. Коноплева,
Л ГЧ Боярского, А. П. Дмитроченко, Е. А. Петуховой и др.)
Коэффи­
циент
Внд корма
Трава
лугов
0,60
0 ,8 0
0,85
Болотная
Заливного луга
Клеверного пастбища
Клеверно-тимофеечного
пастбища
Коэффи
цнеит
Вид корма
и пастбищ
0,80
0,70
0 ,7 0
0 ,8 0
Культурного пастбища
Лесного пастбища
Луговая
Суходольного пастбища
0 ,8 0
в
Трава злаковая
Ежа сборная
Житняк
Канареечник
Костер безостый
Кукуруза зеленая
Мятлик луговой
Могар
Овес зеленый
Овсяница луговая
Трава
0,75
- 0 ,6 0
0 ,7 0
0 ,6 5
1,00
0 ,7 0
0 ,7 0
0 ,8 )
0,75
г1
бобовая
и
0 ,9 0
Просо
Пшеница
озимая зеле­
ная
Райграс
Рожь озимая
Суданка
Сорго
Тимофеевка .
Ячмень зеленый
Чумиза
Смесь посевных злако­
вых трав
з л а к о в о-б о б о в ы х
0 ,7 5
0 ,7 5
0 ,8 5
0 ,9 0
0 ,9 0
0 ,8 0
0,80
0,70
0, §5
мешанок
0,85
0 ,8 5
0 ,8 0
0,80
0 ,7 0
0 ,7 5 1 Люпин
0 ,8 0
Эспарцет
0,85
Вико-о'вес
Клевер с тимофеевкой
Люцерна с тимофеевкой
0,85
0 ,8 0
Бобы кордовые
Вика
Горох
Клевер красный и отава
клеверная
Люцерна
Ботва
Брюквы
Картофельная
.Моркови
Свеклы кормовой
|
0 ,8 5
0 ,6 0
0 ,8 5
0,85
0 ,9 0
0,80
0,90
1,00
Свеклы сахарной
Турнепса
Капустный лист
Капуста кормовая
С ен о
Сено злаковое (разное)
и
злаково-разнотрав­
ное, убранное в фазе
до
начала цветения
(хорошее)
Люцерновое в фазе бу­
тонизации
и начала
цветения
0 .6 0
1
0,62
•
+
143
Продолжение
Вид коруа
Сено злаковое и злако­
во-разнотравное в ф а­
зе цветения (хорошее)
Сено злаковое и злаково-разйотравное в ф а­
зе отцветания
и со­
зревания семян
Клеверное в фазе буто
низации и из отавы
(очень хорошее)
Клеверное в фазе цвете­
ния (хорошее)
Клеверное полевой суш­
ки (среднее)
Коэффи*
циент
0 ,5 5
0 ,4 9
0 ,7 3
0 ,6 5
0 ,5 0
Вид корма
Люцерновое в. фазе пол­
ного цветения
Люцерновое в фазе со­
зревания бобиков
Бобово-злакбвое в фазе!
бутонизации и начала
цветения
(хорошее, в|
том числе досушенное'
активным
вентилиро­
ванием)
Бобово-злаковое в фазе!
полного цветения
Бобово-злаковое
при
сушке на вешалах
Бобово-злаковое в фазе
плодоношения
Коэфф**
циент
0 ,5 0
0 ,3 5
0 ,7 0
0 ,5 8
0 ,6 0
0 ,5 0
Солома
Овсяная
0 ,3 5 || Пшеничная
0 ,2 3
Си л о с
Кукурузный
Г ороховый
Клеверный
Капусты кормовой и ка­
пустного листа
Подсолнечников ый
Клеверо-тимофеечцый
Разнотравный
иг злако­
во-разнотравный
Ботвы корнеплодов
0 ,9 0
0 ,7 0
0 ,8 0
Рж и зеленой
Картофельный
Ботвы картофельной
Внко-овсяный
***? 1
0 ,9 0
0 ,7 0
0 ,8 0
0 ,7 0
0 ,7 0
Горохово-овсяный
Отавно-клеверО-тимофеечный
.1
Травы луговой
Комбинированный с кор
«еплодами
0 ,7 0
1,40
0 ,4 5
0 ,7 0 0 ,7 5
0 ,6 5
0 ,7 0
0 ,7 0
1,0
Сенаж
Из смеси
многолетних
трав в ранней фазе
вегетации
Из
смеси многолетних
трав в поздних фазах
вегетации
Из клевера в фазе буто­
низации — начала цве­
тения
Из смеси злаковых в
поздних фазах вегетаци и
0 ,7 5
0 ,7 0
0 ,8 0
0 ,6 3
И з клевера в фазе пол­
ного цветений
И з клевера в фазе конца
цветения
И з люцерны
Из вико-овса в ранней
фазе вегетации
И з вико-овса в поздней
фазе вегетации
И з гороха с овсом
0 ,7 5
0 ,7 0
0 ,8 0
0 ,8 0
0 ,7 0
0 ,6 7
Продолжение
....-ЧС;
Коэффи­
циент
Вид корма
ь
Вид корма
Корнеклубнеплоды
Брюква и куузику
Картофель
Клубни топинамбура
Клубни батата
Морковь кормовая
Свекла кормовая
1,05
1,40
1,20
1,35
1,20
0,95
Коэффи­
циент
и бахчевые
Свекла полусахарная
Свекла сахарная
Турнепс
Репа кормовая
Арбуз кормовой
Кабачки
Тыква кормовая
1,00
1,05
0 ,9 5
0 ,9 5
1,30
0 ,9 5
1,25
Барда
Зерновая
0 ,9 0
Жом,
пивная
1,00
Жом свежий
Жом кислый
для
0,80
Картофельная
Паточная
дробина,
0,70
0 ,5 0
мезга
Пивная дробина
Мезга картофельная
0,90
1,10
Пищевые остатки и кормосмеси
с в и н е й на о с н о в е п и Щ е в ы х о с т а т к о в
Пищевые остатки, 15
28% сухого вещества
1,190
Кормосмеси из пищевых
остатков и комбикор­
ма,
И —22% сухого
вещества:
в весенне-летний пе­
риод
в осенне-зимний пе­
риод
1,077
1,134
П р и м е р . Согласно данным таблиц, в 1 кг зерна ячменя при
15%-ной влажности содержится 1,13 кормовой единицы. Фактиче­
ская влажность корма в хозяйстве оказалась равной 20%. Следова­
тельно, 1 кг этого зерна по общей питательности будет соответст­
вовать 1,06 кормовой единицы
1,13-
( 100—
20 )
(100— 15)
РАСЧЕТ ПИТАТЕЛЬНОСТИ КОРМОВ
В ОВСЯНЫХ КОРМОВЫХ ЕДИНИЦАХ
Питательность кормов в овсяных кормовых единицах
вычисляют путем определения по данным химического
состава корма величины жироотложения, используя
коэффициенты переваримости питательных веществ и
констант жироотложения, предложенных Кельнером.
10. З а к а з 7445
45
Эти расчеты проводят в основном для жвачных живот­
ных. Питательность корма в кормовых единицах вычисляют следующим образом (см. т'абл. 16 и 17).
1. Выписывают валовое содержание питательных ве­
ществ (белка, жира, клетчатки и БЭВ в 1 кг корма, по
данным химического анализа корма).
2. Находят и записывают коэффициенты перевари­
мости питательных веществ данного корма (см. прило­
жение, табл. 2).
Ж § :* . . . . т
../?= .
3. Определяют количество переваримых питатель­
ных веществ умножением питательного вещества, со­
держащегося в корме, на коэффициент переваримости
этого вещества и последующим делением произведения
на 100.
,
т, . Щ
щ
4. Рассчитывают ожидаемое жироотложение отдель­
ных питательных веществ корма. Д л я этого найденное
количество переваримых белка, жира, клетчатки и БЭВ
умножают на соответствующий показатель продуктивно­
го действия чистых питательных веществ (константы
жироотложения, табл. 13).
■> . ,
* .*
5. Определяют общее ожидаемое жироотложение в
организме животных суммированием количества жира,
отложенного в результате использования всех питатель­
ных веществ.
.
6. Рассчитывают фактическое жироотложение в ре­
зультате усвоения организмом данного корма. Кельне­
ром установлено несоответствие ожидаемого (рассчитан­
ного по константам жироотложения) и фактического
(определенного на основании опытов) жироотложения.
Д л я зерновых кормов, побочных продуктов их перераТаблица
I * Щ
13
. 0
Показатели продуктивного действия чистых питательных веществ,
по О. Кельнеру
Переваримые питательные вещества
1 г переваримого белка
1 г переваримого жира грубых кормов
1 г переваримого жира зерновых и продуктов
их переработки
\
1 г переваримого жира семян масличных и жмы­
хов
*
1 г переваримого крахмала и клетчатки
146
*
Количество жира,
отложенного
в организме (г)
0 ,2 3 5
0 ,4 7 4
0 ,5 2 6
0,598
0,248
Таблица
14
Коэффициенты относительной ценности кормов, по О. Кельнеру
Коэффи­ >:*' рН*3■94
циент
Корм
Коэффи­
циент
Корм
б
Картофель средний
Морковь
Свекла кормовая
Свекла сахарная
Турнепс
Жом из сахарной свек­
лы свежий
Жом сушеный
Рожь,
пшеница, овес
(средние)
Ячйень,
горох,
бобы
(средние)
•
Кукуруза (средняя)
■1
•1,00
0 ,3 7
0 ,7 2
0 ,7 6
0 ,7 8
0 ,9 4
0 ,7 8
Соя
|
Отруби пшеничные
Отруби ржаные
Пивная дробина ячмен­
ная сухая
Барда ржаная свежая
Жмых подсолнечниковый
Жмых конопляный
Жмых льняной
Шрот льняной, обезжиренный
Молоко и кровяная мука
■
0 ,9 5
0 ,9 7
1 ,0 0
а, 98
0,79
0,76
0,84
0,87
0,95
0,89,
0,9Г
0,96 ^
1,00
ботки и корнеклубнеплодов фактическое жироотложение
определяют умножением суммарного ожидаемого жиро­
отложения на коэффициент относительной ценности переваримых веществ кормов (табл. 14).
Для грубых кормов, .травы, силоса и сенажа несоот­
ветствие ожидаемого и фактического жироотложения
связано в основном с содержанием в корме сырой клетТаблица15
Снижение жироотложения при использовании грубых
и зеленых кормов в зависимости от содержания
в них сырой клетчатки
Содержание сырой
клетчатки ( % )
Корм
Сено, солома*
Мякина
Зеленый корм и силос
То же
» »
»
»
»
»
10*
»
>
• *
Любое
16
От
>
»
»
»
»
»
количество
и более
в
14 до 16
12 » 14
10 » 12
8 > 10
6 » 8
4 * 6
.4 и ниже
■
Снижение жироотложення в расчете на
1 г сырой клетчат­
ки (г)
0 ,1 4 3 *
0 ,0 7 2
0 ,1 4 3
0,1 31
0,119
0,1 07
0,034
0 ,0 8 4
0 ,0 7 7
0 ,0 /2
147
%
,щ* ^
чагки. Снижение жироотложения в расчете на 1 г со­
держащейся в корме сырой клетчатки приводится в
таблице 15.
Снижение жироотложения в результате использова­
ния грубых, зеленых кормов, силоса и сенажа опреде­
ляют умножением количества сырой клетчатки, содер­
жащейся в 1 кг корма, на соответствующий коэффици­
ент. Фактическое жироотложение определяют по разно­
сти между ожидаемым жироотложением и показателем
его снижения, обусловленным содержанием сырой клет­
чатки.
,
7.
Определяют родержание кормовых единиц* в кор­
ме, для чего фактическое количество отложенного в ор­
ганизме жира делят на 150.
* Т а б л?и ц а 16
Пример расчета питательности 1 кг лугового сена
^1
Показатели
Питательные вещества сена
белок
жир
клет­
чатка
ЕЭВ
ш
Содержание питательных веществ в 1 кг
корма, по данным химического ана-
лиза,*г
.'
,. ■ж
76
48
26
46
256
50
397
69
Коэффициенты переваримости, %
Содержание переваримых питательных
36 ,4 8 11,96 12 8 ,0 23 8 ,2
веществ, г
0 ,2 3 5 0 ,4 7 4 0 ,2 4 8 0 ,2 4 8
Константы жироотложения (табл. 13), г
5 ,6 7 3 1 ,7 4 5 9 ,0 7
8 ,5 7
Ожидаемое жироотложение, г
ш*
Суммарное ожидаемое жироотложение равно 8 ,5 7 + 5 ,6 7 + 3 1 ,7 4 +
+ 5 9 ,0 7 = 1 0 5 ,0 5 г. Снижение жироотложения рассчитывают следую ­
щим образом. Согласно данным таблицы 15, 1 г сырой клетчатки
сена снижает жироотложение на 0,143 г, В нашем примере в I кг
лугового сена содержится 256 г сырой клетчатки. Следовательно,
жироотложение снизится на 36,61 г (256*0,143=36,61 г.). Отсюда
фактическое жироотложение будёт равно 68,44 г (105,05 г—36,61 г).
В результате питательность 1 кг лугового сена равна 0,456 кормо­
вой единицы (68,44: 150).
..
*
За 1 кормовую единицу принята питательная ценность 1 кг
овса, эквивалентная по продуктивному действию отложению в ор­
ганизме животного 150 г жира.
#
148
Таблица
17
Пример расчета питательности 1 кг овса
Питательные вещества
Показатели
^Содержание питательных веществ в 1 кг
корма, по данным химического ана­
лиза, г
.
Коэффициенты переваримости, %
Содержание переваримых питательных
веществ, г
Константы жироотложения (табл. 13), г
Ожидаемое жироотложение, г
белок
95
76
жир
41
83
клет­
чатка
99
27
ЕЭВ
587
79
72 ,2 34,0 26,7 463,7
0,235 0,526 0,248 0,248
16,97 117,88 6,62 115,00
Суммарное ожидаемое жироотложение равно
16,97+17,88+
+ 6 ,6 2 +'1«15,00 = 156,47 г. Так как коэффициент относительной ценно­
сти овса равен 0,95, то фактическое жироотложение в результате
использования этого корма составит 148,65 г (156,47 г . 0,95). Сле­
довательно, питательность 1 кг овса в данном примере будет равна
0,99 кормовой единицы (148,65:150).
РАСЧЕТ ПИТАТЕЛЬНОСТИ КОРМОВ
В ОБМЕННОЙ ЭНЕРГИИ И ЭКЕ
Пленум отделения животноводства ВАСХНИЛ в
1963 г. рекомендовал оценивать питательность кормов
по количеству обменной (физиологически полезной)
энергии. При этом оценивать питательность кормов
предложено в энергетических кормовых единицах*
(ЭКЕ).
В проекте государственного стандарта метода опре­
деления энергетической ценности кормов предложена
ЭКЕ, равная 10000 кД ж или 10 МДж обменной энергии.
Величину обменной энергии определяют по разности
между валовой энергией корма и потерями энергии в
кале и моче, а для жвачных и в кишечных газах (у сви­
ней и Птицы потери энергии с кишечными газами не-1
значительны, поэтому в расчет они не принимаются).
Содержание обменной энергии в корме или рационе
можно вычислить на основании данных о содержании
переваримых питательных веществ. Известно, что 1 г
*
I энергетическая кормовая единица равна 2500 ккал, или
10 473 кДж обменной энергии.
149
ч
Таблица
18
Пример расчета питательности 1 кг травы лугового пастбища в ЭКЕ
для коров
Питательные вещества
Показатели
про­
теин
клет­
чатка
жир
БЭВ
1Л
Содержание питательных веществ в 1 кг
‘ корма, по данным химического ана154
102
10
лиза, г
щ
, | 40
68
58
62
Коэффициент переваримости, %
43
Количество переваримых
питательных
2 4 ,8
4 , 3 , 5 9 ,1 6 104,72
веществ, г
2 4 ,8 + 4 4 ,3 • 2,25) + 5 9 ,1 6 +
Сумма переваримых
питательных ве­
ществ, г
•
+ 1 0 4 ,7 2 = 1 9 8 ,3 5 г
щ
Энергия суммы переваримых питательных веществ 1 кг травы
лугового пастбища будет равна 3661,54 к Д ж (198,35е 18,46). Ум­
ножив количество энергии суммы переваримых питательных веществ
на 0,84, получим содержание обменной энергии в данном корме.
В нашем примере в 1 кг травы лугового пастбища содержится
3075,69 к Д ж обменной энергии (3661,54-0,84). Следовательно, в 1 кг
- ^I ^
**
.ф
( 3075»6 9 ' 1 \
травы лугового пастбища содержится 0,29 ЭКЕ I —
~----- I
‘
« К
Г«в *
■■' .
.зЮ*
д-; Щг / -й
•
Л-:
щ
В случае, если за 1 ЭКЕ будет принято 10 000 к Д ж , то пита­
тельность травы лугового пастбища будет равна 0,31 ЭКЕ (3075,69:
: юооо).
т
^
ч
суммы переваримых питательных веществ (СПГ1В) со­
ответствует 18,46 &Дж (4,41 ккал) переваримой энергии.
Соотношение между энергией переваримых питатель­
ных веществ и обменной энергией считают постоянной
величиной: для жвачных оно составляет 0,84, а для сви­
ней — 0,96.
-: ^
Содержание обменной энергии в корме можно вычис­
лить другим методом: с помощью коэффициентов, пред­
ложенных Ж . Аксельсоном (в кормах для крупного рога­
того скота) и X. У. Тнтусом (в кормах для кур).
*
.
О Ц ЕН К А
К
А
Ч
ЕС
ТВ
А
СИЛОСА
К
Силосование — способ консервирования кормов ор­
ганическими кислотами, образующимися при сбраж ива­
нии сахаров. Д л я успешного силосования желательны те
виды брожения, в результате которых образуется молоч150
ная кислота. При оскоплении значительного количества
уксусной кислоты, а тем более масляной и продуктов
гниения белков качество силоса резко ухудшается.
В результате сбраживания молочнокислыми бакте­
риями гексоз образуется главным образом молочная
кислота (СбНцЮб— *-2СзНбОз). При сбраживании пентоэ
в результате жизнедеятельности молочнокислых, а не
уксуснокислых бактерий наряду с молочной образу­
ется уксусная кислота ( 6С 5Ню0 д= 8 СзН&0 э+ ЗС 2Н.402).
Питательность и качество силоса зависят от химиче­
ского состава силосуемых растений, главным образом
от содержания в них сахаров, протеина, минеральных
веществ, а также от силосуемости сырья и технологии
силосования. Качество силоса характеризуется величи­
ной истинной кислотности (рН), составом органических
кислот (молочной, уксусной, масляной), содержанием
аммиака и других веществ, образующихся при броже­
нии. Кроме, того, при оценке качества силоса обращают
внимание на запах, структуру корма, содержание в нем
сухого вещества, протеина, каротина и некоторые дру­
гие показатели.
Для определения питательности и качества силоса
берут среднюю
пробу
(см.
стр.
9).
**
•* 4
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛОЧНОЙ,
УКСУСНОЙ И МАСЛЯНОЙ КИСЛОТ
В СИЛОСЕ МЕТОДОМ Л ЕППЕРА — ФЛИГА
^
В соответствии с требованиями ГОСТ 23638—79 ко­
личество свободных и связанных молочной, уксусной и
масляной кислот определяют методом Леппера — Флига. Сущность метода заключается в том, что при нагре­
вании настоя силоса с водяным паром отгоняются ук­
сусная и масляная кислоты в строго определенных коли­
чествах.
Молочная кислота под действием двухромовокйслого
калия и серной кислоты окисляется до уксусной кисло­
ты, которая также отгоняется.
Реактивы, посуда, оборудование. 10%-ные врдные
растворы окиси кальция (ч. д. а.) и 5-водной сернокис­
лой меди (ч. д. а.), 50%-ный раствор серной кислоты
(х. ч.), 0,05 н. раствор едкого натра, раствор фенолфта151
леина*, раствор двухромовокислого калия**, пемза про­
каленная, лабораторная фильтровальная бумага марки
ФНБ; холодильник Либиха (прямой, длина 40 см)***,
круглые плоскодонные колбы вместимостью 500 мл со
шлифами (ГОСТ 10394—72), круглые плоскодонные
колбы без шлифов на 1000 мл, бюретки на 10—20 мл
(ГОСТ 20292—74) или мерные дилиндрй на 10—20 мл,
стеклянные воронки диаметром 12-^15 см; мерные ци­
линдры на 250 мл, мерные колбы на 50, 100, 250,
1000 мл, конические колбы на 100, 200 мл, технические
весы с погрешностью взвешивания ±0,1 г, колбонагре* ватели на 300 Вт и 200 В, штативы.
Ход определения. 1. Среднюю пробу силоса хорошо
измельчают, перемешивают и, отвесив из нее 100 г, по­
мещают в колбу вместимостью 1000 мл, после чего з а ­
ливают до метки дистиллированной водой. Колбу за к ­
рывают пробкой и встряхивают, а затем ставят в прох­
ладное место на 12 ч (обычно на ночь) для настаива­
ния. По истечении этого времени содержимое колбы
перемешивают и вытяжку фильтруют через вату в широкогорлой воронке или через сухой фильтр.
2. Обессахаривание фильтрата: 200 мл полученного
фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью
250 мл, автоматической бюреткой или при помощи ци­
линдра добавляют туда 20 мл взвеси окиси кальция и
10 мл раствора сернокислой меди, содержимое встряхи­
вают и оставляют на | ч. Затем доводят дистиллирован­
ной водой объем жидкости в колбе до метки, перемеши­
вают и фильтруют через сухой складчатый фильтр в
сухую колбу. Полученный фильтрат используют для ис­
следования.
3. 200 мл обессахаренного фильтрата помещают в
круглую плоскодонную отгонную колбу вместимостью
500 мл и для перевода, связанных кислот в свободные
прибавляют в колбу 5 мл 50%-ного раствора серной кис­
лоты, а для равномерного кипения вносят 4 5 кусочков
* 1 г фенолфталеина растворяют в 100 мл 70%-ного этилового
СПИрта.
.'.у ..
. . - ' ;Щ
** 67 г КгСг20 7 (ч. д. а.) растворяют в дистиллированной воде
при слабом подогревании, затем охлаж даю т до комнатной темпера­
туры, добавляю т АЪ мл серной кислоты (плотность Л,84 г/см3) и до­
водят дистиллированной водой объем раствора до 1 л.
*** Внутренняя трубка холодильника на всем протяжении дол­
жна быть без вмятин и углов.
152
%
пемзы. С о д ер ж и м о е-к о л б ы взбалты ваю т, колбу Iбыстро
соединяют с холодильником Л и би ха и нагревают.
4. С н ач ал а в течение 20—30 мин (с момента з а к и п а ­
ния жидкости) отгоняют первый дистиллят объемом
100 мл, затем , не преры вая отгона, в течение 10— 15 мин
отгоняют в другую колбу еще 50 мл (второй дистиллят;
за скоростью дистилляции сл ед я т). В качестве приемни­
ка удобно пользоваться мерными колбами вместимо­
стью 100 и 50 мл с притертыми пробками. После отгона
дистиллятов колбочки немедленно плотно закры ваю т.
5. После отгона первого и Второго дистиллятов к ос­
татку ж идкости в отгонной колбе д о б авл яю т д л я окис­
ления молочной кислоты в уксусную 55 мл раствора
двухромовокислого к ал и я (важ н о не допускать его по­
падания на ш ли ф ы ), а т а к ж е 100 мл дистиллированной
воды.
6 . Ж и д к о сть в колбе нагреваю т до кипения и затем
в течение 10— 15 мин отгоняют в мерную колбу 50 мл
(третий д и сти л л ят).
7. Все дистилляты поочередно переносят в коничес-*
кие колбы. М ерные колбы ополаскиваю т 10— 15 мл воды
(всегда одним и тем ж е количеством) и воду сливаю т в
колбы с дистиллятами.. Д и сти лляты титруют 0,05 н. р а ­
створом едкого натра в присутствии нескольких капель
ф енолф талеина до слабо-розового окраш ивания, не исче­
заю щ его в течение 1 мин. Количество израсходованной
на титрование щелочи ум нож аю т на 1,25 (т а к к ак при
обессахариванни 200 мл ф ильтрата реактивам и и водой
объем ж идкости доводили до 250 мл, а Для определения
кислот брали только 200 мл обессахаренного ф и л ь т р а ­
т а ). Количество миллилитров 0,05 и. щелочи, израсходо­
ванное на титрование первого, второго и третьего дис­
тиллятов, обозначаю т соответственно индексами Д\ , Дг
и Д 3. С одерж ание кислот .в силосе (в процентах) опре­
д ел яю т по следующим формулам:
уксусной . . . 0,096Да—0,021 Д\
масляной . . . ОДМЗД1—0,068Д2
молочной . . . 0,123Дз—0 , 0 4 6 0 , 0 0 6 Д 1
П р и м е р . Количество 0,05 н. раствора щелочи, израсходован­
ное на титрование, после умножения на коэффициент 1,25 состави­
ло; Дт = 21,50 мл; Да ** 13,26 мл; Д з» 2 1 ,9 9 мл. Следовательно, Кис­
лот в силосе содержится: уксусной 0,096*13,26—0,021*21,5*0,82% ;
масляной 0,043*21,5—0,068• 13,26«0,023% ;
молочной 0,123*21,93—
—0,046 • 13,26+0,006 *21,5 *=2,22 %.
Ц
•
153
Продолжение
Наименование
показателя
|
Характеристика и норма для классов
1
1
Содержание сухого вещества, %, не менее,
в силосе:
из
подсолнечника,
топинамбура
из однолетних све­
жескошенных трав
из провяленных трав
2
Г
3
V’
А
л
18
1
12
5
Ж тф
15
25
2
0
30
30
30
ф
Содержание сырого про­
теинаА в сухом веществе, %, не менее, в си­
лосе:
из бобовых трав
из бобово-злаковых
. трав и смесей д р у ­
гих растений с бо­
бовым»
из злаковых трав,
%сорго,
подсолнеч­
ника, других растении и их смесей
14
12
|
12
10
10
8
8
8
4
10
^
’
60
Содержание в сухом ве­
ществе каротина, мг/кг,
не менее
V
30
40
Шш**' $'Ш*
л
Содержание в сухом веществе сырой золы, %,
не более, в силосе:
из
подсолнечника,
топинамбура
из прочих растёний
т
•
Концентрация
водород­
ных ионов (рН)
Содержание
молочной
кислоты от общего ко­
личества молочной, ук­
сусной и масляной кис­
лот, %, не менее
Содержание
масляной
кислоты в силосе, %,
не более
Примечание.
определяют.
|
13
15
17
11
N
3 ,9 — 4 ,3
13
15
3 ,9 — 4 ,3
50
40
0 ,1
0 ,2
3 , 8 —4 ,5
1
20
0 ,3
В силосе, приготовленном из провяленных трав, рН не
.
156
I
Таблица
21
Требования ГОСТа к качеству силоса, приготовленного
с применением химических консервантов
Характеристика и норма для классов
Наименование
показателя
в
1
ф
.
Ф
•
Содержание сухого вещества,
не менее,
в силосе:
из
подсолнечника,
топинамбура
из кукурузы
из многолетних и од­
нолетних трав и
их смесей
Содержание сырого про­
теина в сухом вещест­
ве, %, не менее, в си­
лосе:
из бобовых трав
из бобово-злаковых
трав и смесей дру­
гих растений с бо­
бовыми |
из
злаковых трав,
сорго,
подсолнеч­
ника и других ра­
стений
Содержание в сухом веществе каротина, мг/кг,
не менее, в силосе:
из многолетних трав
из кукурузы и про­
чих растений
Содержание в сухом веществе сырой золы, %,
не более, в силосе:
из подсолнечника и
топинамбура
из прочих растений
Концентрация
водород­
ных ионов (рН)
дшь
%
2
Л
3
фруктовый, Допускается
Приятный
квашеных овощей
слабый запах
меда, свеже­
испеченного
ржаного хле­
ба, уксусной
кислоты
Допускается для всех классов специфи­
ческий запах консерванта
Запах
*7
1
<а
л
,
#
.
* 4
.
-
€
#
18
15
12
18
20
15
18
12
15
1513
13
11
И
9
11
9
~
'
’
9
Ф
80
70
70
60
50
40
13
15
17
И
3 ,8 —4 ,3
13
3 ,8 —4 ,3
в
1
15
3 ,7 —4 ,5
щ
157
Продолжение
Характеристика и 'норма для классов
ъ
; 1
2
3
55
50
О
Наименование
показателя
Содержание
молочной
кислоты от общего ко­
личества молочной, ук­
сусной
и
масляной
щ
кислот, %, не менее
Содержание
масляной
кислоты в силосе, %,
не более
0 ,2
0 ,1
0 ,1
П р и м е ч а н и я . 1. В силосе, приготовленном с применением пнросульфита натрия, рН не определяю т.,2. В силосе, законсервированном пропионовой
кислотой или ее смесями с другими кислотами, количество масляной кислоты
не определяют.
.
>'
Форма для записи результатов анализа силоса
год
месяц 19
число
силоса
Хозяйство, в котором взят образец
_____________ |
Место и условия хранения (башня, траншея и др.)
ПЗXI
Содержание воды, %
Содержание сухого вещества, % _________ ;__________ _______
Содержание каротина в силосе при натуральной влажности
мг/кг
Содержание каротина в сухом веществе силоса, мг/кг _________
Содержание сырого протеина в сухом веществе силоса _________
Содержание сырой золы в сухом веществе силоса
Концентрация водородных ионов (рН)
____________
%
%
___________________ _ _ _
Количество 0,05' н. ЫаОН (мл), пошедшее на титрование дистилля
тов: Д 1 — *
Дг —
Дз
Содержание кислот в силосе
—
____________________________________________________ & ........................................................................ — —
-
.
............—
Кислоты
Молочная
Уксусная
Масляная
Общее
содержание
(сумма кислот), г%
г%
Содержание молочной
кислоты от общего
количества кислот (% )
<м н>
кислот
Заключение о качестве силоса в соответствии с требованиями
стандарта
158
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е КА ЧЕСТВА С Е Н А Ж А
О
доброкачественности сен аж а судят по органолеп­
тическим п оказателям — цвету, запаху; об р ащ аю т т а к ­
ж е внимание на признаки порчи — плесневение, гниение,
загрязненность. В лаборатории, кроме органолептичес­
кой оценки к а ч е с т в а 'е е н а ж а , определяю т содерж ание в
нем сухого вещ ества, протеина, клетчатки, каротина, а
т а к ж е масляной кислоты.
Ц вет хорошего сен аж а серовато-зеленый, ж ел то -зе­
леный; буро-коричневый цвет у к а зы в а е т на перегрева­
ние массы.
При порче корм а преобладаю т темные тона — бурый,
черный.' '
З а п а х хорошего сен аж а ароматный, фруктовый. Е с ­
ли сен аж пахнет свежеиспеченным рж ан ы м хлебом, это
свидетельствует о его перегреве при з а к л а д к е или х р а ­
нении.
П ереварим ость такого с е н а ж а значительно с н и ж а ­
ется, особенно протеина. Испорченный еен аж издает
затхлы й запах, пахнет плесенью, навозом.
Согласно требованиям ГОСТ 23637— 79, по органо­
лептическим и химическим п о казател ям сен аж подр азд ел яю т на первый, второй, третий классы и н екл ас­
сный. . \ '
’,
- иС одерж ание масляной кислоты в сен аж е о п ред еля­
ют т а к ж е, к ак в силосе. р
яр
*
*•
Т а б л и ц а 22
Требования к качеству сенажа
Характеристика и норма для классов
Наименование
показателя
1‘
|
2
Ароматный фруктовый
Запах
№
Цвет
Ч
в
Серовато-зеленый,
желто-зеленый;
для клевера до ­
пускается
свет­
ло-коричневый
3
Ароматный
фрукто­
вый;
допускается
слабый запах меда
или
свежеиспечен­
ного ржаного хле­
ба
Серовато-зеленый;
желто-зеленый; для
клевера светло-ко­
ричневый, допуска­
ется светло-бурый
Продолжение
Наименование
показателя
Содержание сухого ве­
щества, %, в сенаже:
бобовом
злаковом и бобово­
злаковом
Содержание сырого про­
теина в сухом вещест­
ве, %, не менее, в се­
наже:
бобовом
бобово-злаковом
злаковом
Содержание сырой клет­
чатки в сухом веще­
стве, %, не более
Содержание в сухом ве­
ществе сырой золы, %,
не более
Содержание в сухом ве­
ществе легкораствори­
мых углеводов, %, не
менее*
Содержание в сухом ве­
ществе каротина, мг/кг,
не менее
Содержание
масляной
кислоты, %, не более
Характеристика и норма для классов
1
40— 55
40—60
40— 55
40—60
40— 55
40—60
15
13
13
11
11
9
12
10
8
29
32
35
12
14
15
40
30
2
55
Не допу­
скается!
0,1
0,2
• П оказатель будут определять о- 1 января 1983 г,
К н ек л ассн о м у о тн о сят с е н а ж бурого и т е м н о -к о р и ч ­
невого ц вета с си л ьн ы м з я п а х о м м ед а или с в е ж е и с п е ч е н ­
ного р ж а н о г о х л е б а , соответствую щ и й по о с т а л ь н ы м п о­
к а з а т е л я м т р е б о в а н и я м н а с т о я щ е го с т а н д а р т а .
Формы записей результатов анализа сенажа
Д ата взятия образца
Вид сенажа
Хозяйство, в котором взят образец
Запах
Цвет
Содержание сухого вещества, %
160
Содержание питательных веществ в сенаже
При натураль­
В сухом
ной влажно­ веществе {%)
сти (%)
Сырой протеин
^
Сырая клетчатка
Легкорастворимые углеводы
Каротин, мг%
Сырая зола, %
•
Количество 0,05 и. ЫаОН, израсходованное на титрование
Д | -------------------------------- Дг —____________________
Содержание масляной кислоты й________________________
Заключение о качестве сенажа в соответствии с требованиями стан­
дарта________________________
Н 1111
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРОТИНА И ВИТАМИНА А
В КОРМАХ, БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ
И ПРЕПАРАТАХ
Каротин — провитамин А — поступает в организм
животного с кормом. И з а*, р* и у-разновидностей к а р о ­
тина наиболее биологически активен р-каротин (С 40Н 56*).
В обмене веществ в организме животного он участвует
лиш ь после превращ ения его в витамин А (из одной м о­
лекулы каротина образуется две молекулы витамина
А — 2 С 20Н 29О Н ) . Такое превращ ение под действием
-фермента каротиназы происходит в стенках тонких кишОк, в печени, крови и в меньших количествах в почках,
надпочечниках и легких. Каротин и витамин А могут на­
капливаться в печени и частично в легких и почках.
Витамин А участвует в важнейш их биохимических про­
цессах обмена веществ. Он за щ и щ а е т организм ж и в о т­
ного от инфекции, участвует в восстановлении и защ ите
эпителиальной ткани, необходим д л я нормального ф ун к­
ционирования органов зрения и д л я роста молодняка,
важ ен д л я процессов воспроизводства, получения ж и зн е ­
способного приплода и высокой продуктивности.
К ак и витамин А, каротин не растворяется в воде, но
хорошо растворим в растительных ж и р а х и растворите* По химическому строению каротин является
углеводородом.
И. Заказ 7446
непредельным
• . 161
л я х ж и р а — х л о р о ф о р м е, эф и ре, сер о у гл ер о д е, бензине,
бензоле. Все кар оти н ои д ы п о д в е р ж е н ы окислению , л е г к о
р а зр у ш а ю т с я при д л и тел ьн о й суш ке и хран ен и и кормов.
О ки слен и е к а р о ти н а ки слородом в о зд у х а у с к о р я е т с я под
действием света, теп л а и м етал л о в .
Ч тобы п р ед о тв р ат и ть сн и ж ен и е акти вн ости в и т а м и н а
А и к а р о т и н а в ко р м ах и п р е п а р а т а х , п р и м ен яю т а н т и ­
окси дан ты — сантбхин, д и л у д и н и др.
П о биологической активности 1 мг р -к а р о т и н а со о твет­
ствует 1667 И Е в и там и н а А*. П р и н ед о статк е к а р о т и н а
в ко р м ах п р и м ен яю т п р е п а р а т ы в и т а м и н а А из Р /с ч е т а :
1 мг к а р о т и н а д л я ж в а ч н ы х э к в и в а л е н т е н 400 'ЩЩ д л я
свиней — 500 И Е в и т а м и н а А; 1 м кг к а р о т и н а д л я п т и ­
цы э к в и в а л е н т е н 1 И Е в и т а м и н а А.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРОТИНА В КОРМАХ
(МОДИФИКАЦИЯ ВИЖ)
Л
Принцип м е т о д а основан на р аств о р и м о сти к а р о т и ­
на в орган и чески х р а с т в о р и т е л я х и появлен и и при этом
ж е л т о й о к р аск и . И н тен си вн ость о к р а с к и и з м е р я ю т колор и м етр и р о в ан и ем р а с т в о р а при синем с в ет о ф и л ь т р е ^и
д л и н е волны 440 нм (и сп о льзую т при этом ш к а л у с т а н ­
д ар тн о го р а с т в о р а синтетического к а р о т и н а в б е н зи н е ).
Т а к к а к к р и стал л и ч еск и й кар'отин л егко о к и с л я е т с я на
воздухе, с т а н д а р т н ы й р аств о р готовят из д в у х р о м о в о к и с ­
лого к а л и я или а зо б е н зо л а . С т а н д а р т н ы е р а с т в о р ы д о ­
вольно стаб и л ьн ы , их и сп ользую т в течение д л и тел ь н о го
врем ени.
4'
^ ■'
:
В о р ган и чески х р а с т в о р и т е л я х р а с т в о р я ю т с я не т о л ь ­
ко каротин, но и т а к и е пигменты, к а к х л о р о ф и л л , к с а н ­
то ф и л л , ликопин, кри п то ксан ти н и други е, ко то р ы е н е­
обходим о о тд ел и ть от к а р о т и й а методом х р о м а т о г р а ф и ­
ческой адсорбции. И н тен си вн ость о к р а с к и о п р е д е л я ю т с
пом ощ ью ф о т о э л е к т р о к о л о р и м е т р а . П р и р а б о т е с этим
прибором пользую тся обы чно к а л и б р о в о ч н ы м и кривы м и.
С т р о я т их с пом ощ ью с т а н д а р т н ы х р аств о р о в р а з н о й
ко н ц ен трац и и : п о к а з а т е л и оптической плотности н а н о ­
с я т на ось о р д и н ат, а к о н ц ен тр ац и ю в е щ е ств а в с т а н ­
д ар тн о м р аство р е — на ось абсцисс. С оединив о п т и ­
м а л ь н ы е точки системы к о о р д и н ат, п о л у ч а ю т г р а ф и ч е *
Рационы всех сельскохозяйственных животных
контролируют по содержанию каротина и витамина А.
162
обязательн
ское изображ ение зависимости м еж ду концентрацией ве­
щества в стандартном растворе и его оптической плот­
ностью.
Н аиболее совершенным, хотя и б о ^ е сложным, при­
бором является спектрофотометр, с помощью которого измеряют интенсивность поглощения света в отдельных у з­
ких участках спектра. Н а спектрофотометре лучше устра­
няется влияние посторонних окраш енных соединений.
П ри этом можно измерять поглощение ультраф иолето­
вой и инфракрасной частей спектра.
В производственных условиях содерж ание каротина
в кормах и других биологических объектах (сыворотке
крови и др.) определяю т колориметрированнем его р а ­
створов при сопоставлении со шкалой стандартны х р а ­
створов двухромовокислого калия.
Колориметрическая ш кала д л я определения кароти­
на в кормах и сыворотке крови (табл. 23). Готовят из
720 мг двухромовокислого кали я (К 2Сг 20 7) и 1 л воды.
1 МЛ
ПЛРТРЛПП рпптоптртпнлт
мл ПГНОПНПГП
основного раствора
соответствует 0,00416 мг
(4,16 мкг) каротина.
Т а б л и ц а 23
Колориметрическая шкала для определения каротина
№ Про­
бирки
Основ­
ной
раствор
(мл)
Вола
Основ*
Каротина
№
про­
ной
(мг в I мл) < бирки р аствор
(мл)
(мл)
_____________
Вода
Каротина
(МЛ)
(мг в 1 мл)
(/Г>
6 ,0
6 ,5
7 ,0
7 ,5
8 ,0
8 ,5
9 ,0
9 ,5
9 ,6
9 ,7
9 ,8
9 ,9
0,001664
0,001456
0,001248
0,001040
0,000832
0,000624
0,000416
0,000208
0,000166
0,000125
0,000083
0,000042
_
1
о
3»
4
5
6
7
8
9
10
11
4\
12
с
10,0
9 ,5
9 ,0
8 ,5
8 ,0
\ 7 ,5
7 ,0
6 ,5
—
ш
6,0
5 ,5
5 ,0
Л
шяш
4 ,0
0 ,0
0 ,5
1 ,0
1.5
2 ,0
2 ,5
3 ,0
3 ,5
4 ,0
4 ,5
5 ,0
5 ,5
0,004160
0,003952
0,003744
0,003536
0,003328
0,003120
0,002912
0,002704
0,002496
0,002288
0,0020,80
0,001872
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
4 ,0
3 ,5
3 ,0
2 ,5
2 .0
1,5
1,0
0 ,5
0 ,4
0 ,3
0 ,2
0,1
Реактивы и оборудование. Безводны й сернокислый
н атр и й ^ (ГО С Т 4166—60, ч. д. а.), окись алюминия
10% -ной влаж ности, бензин авиационный (Б-70) и авто­
мобильный неэтилированный (АИ-93; ГОСТ 5818—71),
безводный сернокислый натрий, азобензол, петролей-
ный эф и р , эти л о вы й сп и р т (Г О С Т 5 9 6 2 - 6 7 ) , д и с т и л л и ­
р о в а н н а я в о д а (Г О С Т 6709— 7 2 ) ; и зм е л ь ч и т е л ь проб
р астен и й И П Р - 2 , м е л ь н и ц а М Р П -1 , ф о т о э л е к т р о к о л о р и ­
м етр Ф Э К -М , сп ек тр о ф о то м етр , у л ь т р а х и м о с к о п , х и м и к о ­
техн и чески е в ё сн ^ ф а р ф о р о в а я с т у п к а с пестиком , м ер ­
ный ц и ли н др н а 100 м л (Г О С Т 1 7 7 0 - 7 4 ) , б ю р е тк а вместим остью 50 м л (Г О С Т 2 0 2 9 2 - 7 4 ) , м ер н ы е к о л б ы на
100 и 1000 м л (Г О С Т 1770 — 7 4 ) , б ы т о в ы е б ан ки на
200 м л (Г О С Т 5717— 7 0 ), п о л и эт и л е н о в ы е к р ы ш к и д л я
б а н о к (д и а м е т р 60 м м ) , го м о ген и зато р (п ольски и или
о теч ествен н ы й ), т р у б к а А л л и н а (д и а м е т р 2 4 см)
Заполнение адсорбционной колонки (трубка Алли­
н а ) . В т р у б к у в в о д я т кусочек в аты , на которую н а с ы п а ­
ют 5 — 6 см окиси а л ю м и н и я (А1г03) в л а ж н о с т ь ю 10 % ,
с л е гк а уплотняя- с те к л я н н о й п ал о ч к о й , п о к р ы в а ю т кусоч
ком в а т ы и н а с ы п а ю т 1 см б езвод н ого с е р н о к и с л о г о нат-
РИЯПш 1Г0 Т0 вление стандартных растворов. Д л я п р и го ­
то в л е н и я с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а а з о б е н з о л а 14,5 мг к р и ­
с т а л л и ч е с к о го хим ически чистого а з о б е н з о л а р а с т в о р я
ют в 100 м л 9 6 -гр ад у сн о го эти л о в о го сп и р та. 1 м л ^ р а б о ­
чего р а с т в о р а
азобензола
со о тветств у ет
окраске
0 00235 мг к а р о т и н а . С т а н д а р т н ы й р а с т в о р ДвухР01*0 ™ '
кислого к а л и я го т о в я т из 720 м л д в у х р о м о в о к и с л о го к а ­
л и я и 1 л воды , 1 м л основного р а с т в о р а соответствует
° >0 П о д г о т о в к Г п р о б для анализа. Гру бые корма. П р о б ы
сена, солом ы и зм е л ь ч а ю т н а и зм е л ь ч и т е л е или н о ж н и ­
цам и, п е р е м е ш и в а ю т и из р а з н ы х м ест о т б и р а ю
>
после чего п р о п у ск аю т ч ер ез м е л ь н и ц у М Р П -1 б е з п р ед
в а о и т е л ь н о го п о д су ш и в ан и я . З а т е м п ро б у сн ова хорош о
^
“ ш й н аю т и* отвеси в 1 - 2 г, п о м е щ а ю т о б р а з е н »
коническую ко л б у и л и б ы то вы е б ан к а 1 н а 200 м л и з а л и
в а я 30— 40 м л б ен зи н а или п етр о л еи н о го э ф и р а и > д ер
ж и м о е т щ а т е л ь н о п е р е м еш и в а ю т, з а к р ы в а ю т пробкой и
с т а в я т в тем н ое м есто на 20 24 ч.
Сочные корма (з е л е н а я м ас са , к о р н еп л о д ы , с и л о с ).
З е л е н у ю м ассу и зм ел ь ч аю т, т щ а т е л ь н о п е р е м е ш и в а ю т и,
с о б р а в из р а з н ы х мест, о т в е ш и в а ю т 5— 10 г. Д о б а в и в к
о б р а з ц у к о р м а 2— 3 г серн о ки сл о го н а т р и я д л я п о л у ч е­
ния о б езв о ж ен н о й сыпучей м ассы , р а с т и р а ю т с и з м е л ь ­
ченны м стекл ом (или к в а р ц е в ы м песком ) д л я л у ч ш его
и звл еч ен и я к а р о ти н а . Р а с т и р а т ь н а д о бы стро, т а к к а к
к а р о т и н н а в о зд у х е л е гк о о к и с л я е т ся .
164
Ход определения. 1. Н а следующий день бензинный
экстракт с образца сена сливаю т в адсорбционную ко­
лонн* с окисью алю миния и фильтрую т его под слабым
вакуумом или с водоструйным насосом.
2. О садок вновь зал и в а ю т небольшим количеством
растворителя, переносят в адсорбционную колонку и
промываю т несколько р аз небольшими дозам и раствори­
теля до тех пор, пока раствор, вытекающий из воронки,
не будет бесцветным.
3. Объем вы тяж ки измеряю т цилиндром, после чего
раствор колориметрирую т на фотоэлектроколориметре
Ф ЭК М с синим светофильтром при длине волны 440 нм.
Д л я сравнения в кювету фотоэлектроколориметра н ал и ­
вают бензин.
4. При интенсивной окраске бензиновой вы тяж ки ее
р а зб а в л я ю т бензином. Д л я этого 25 мл вы тяж ки н а л и ­
вают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят
бензином объем до метки. Р езультаты определения в
этом случае удваиваю т.
Расчет результатов анализов. 1. П ри использовании
колориметра типа Д ю боско
_ЛУ-/(1О0О
Аг-а
где х — содерж ание каротина в 1 кг корма (м г); /г —
высота стандартного раствора (м м ); Н\ — высота столба
испытуемого раствора (м м ); V — общий ббъем бензино­
вого эк стр ак та каротина (м л ); К — содерж ание кароти­
на в 1 мл стандартного раствора (если используют а зо ­
бензол К — 0,00235, бихромат к а л и я К — 0,00416); а —
масса корма (г); 1000 — коэффициент д л я пересчета на
1 кг корма.
П р и м е р . Масса корма 3 г. Объем экстракта после адсорб­
ции 300 мл. Высота стояния стандартного раствора в колориметре
8 мм, высота испытуемого раствора 4,6 мм.
Подставив в формулу указанные данные, рассчитывают содер­
жание каротина в корме.
2.
ФЭК-М
При
использовании
ф отоэлектроколорим етра
К‘У- 1000
н
где х — содерж ание каротина в 1 кг корм а (м г); К —
коэффициент перевода 1 мл исходного раствора двухро­
мовокислого к ал и я в эквивалентное количество милли165
гр а м м о в к а р о ти н а ( д л я а з о б е н з о л а этот к о эф ф и ц и ен т
равен 0,00235); Я — м а с с а к о р м а ; V
эквивалентное
количество исходного р а с т в о р а , н ай д ен н о е по к а л и б р о ­
вочной кривой; 1000 — к о эф ф и ц и ен т д л я п ер есч ета на
1 кг к о рм а.
■
аЙШ
^ "
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е КАРОТИНА В МОЛОКЕ И М О ЛО ЗИ ВЕ
П ринцип м етода. К а р о т и н в м о л о ке и м о л о зи в е о п р е ­
д е л я ю т к о л о р и м етр и р о в ан и ем . П р и этом к а р о т и н в ы д е ­
л я ю т в чистом виде и интенсивность о к р а с к и его р а с ­
т в о р а с р а в н и в а ю т со с т а н д а р т н ы м р а с т в о р о м к а р о т и н а в
бензине, а з о б е н з о л а в спи рте или в о д н ы м р а ств о р о м
Д В У Х РО М О В О К И С Л О ГО
----- — --------------- „
Р е а к т и в ы и о б о р у д о ван и е. Э тиловы и спирт, петролеиный или серны й эф и р, ед к о е к а л и , р а с тв о р а з о б е н з о л а
или д ву хр ом о воки слого к а л и я ; а д с о р б ц и о н н а я к о л о н к а ,
пипетки, ф о т о эл е к т р о к о л о р и м е т р Ф Э К -М , Д елительны е
воронки на 250 мл, конические к о л б ы на 21Ю / о и мл,
в о д я н а я б ан я , пробирки.
|
__
Ход о п р ед ел ен и я. 1. 50 м л (в л етн и и п е р и о д ) или
100 м л (в зим ний п ери од) м о л о к а , 50 м л м о л о зи в а в л и ­
в а ю т в коническую колбу, д о б а в л я ю т 30 м л 4 0 / 0 -ного
водного р а с т в о р а К О Н и н а г р е в а ю т н а во д ян ой б а н е в
течение 2— 2,5 ч до полного р а с т в о р е н и я б ел к о в . О м ы ­
ленны й р а с тв о р стан о в и тся тем н о -б у р ы м с з а п а х о м
2. О х л а д и в р аств о р д о 20°С, д о б а в л я ю т в него 10 м л
96-градусного эти лового сп и р та, п осле чего р а з м е ш и ­
в а ю т и п е р е л и в а ю т из к о л б ы в д ел и те л ь н у ю воронку.
К о л б у 2 — 3 р а з а о п о л а с к и в а ю т серн ы м э ф и р о м , к о т о ­
ры й с л и в а ю т т у д а ж е (э ф и р а р а с х о д у ю т 70— 75 м л ) .
3. В д ел и тел ь н у ю в о р о н к у п р и л и в а ю т 30 м л серного
э ф и р а , з а к р ы в а ю т ворон ку п робкой и с о д е р ж и м о е осто­
р о ж н о см еш и ваю т, а з а т е м д а ю т отстояться. Н и ж н и и
щ елочной слой с л и в а ю т в другую д е л и т е л ь н у ю ворон ку
и повторно экстрагируют эфиром.
одн
у
д
ел
и
те
л
ь
н
у
ю
во4. Э ф и р н ы е в ы т я ж к и с л и в а ю т
ронку, промывают несколько раз дистиллированной во^
дои д о тех пор, п о к а п р о м ы вн ы е воды не с т а н у т н ей т­
р а л ь н ы м и (п р о б а с ф е н о л ф т а л е и н о м ).
5 Э ф и рн у ю в ы т я ж к у п ер ен о сят в к о л б у и в ы с у ш и в а ­
ют, д о б а в л я я 7— 8 г п р о к а л е н н о го N 8 2 8 0 4 . Э ф и рн ы й эк165
стракт упариваю т на водяной бане в токе углекислого
газа или азота.
6.
Сухой остаток в колбе растворяю т в 5— 10 м л петролейного эф ира и колориметрируют, используя в каче­
стве стандартного''"раствора азобензол или двухромовокислый калий.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРОТИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Каротин в сыворотке крови определяю т упрощенным
методом со ш калой стандартны х растворов двухромово­
кислого калия, а т а к ж е с помощью колориметрирования.
Д л я этого используют эфирный экстракт каротина.
Реактивы и оборудование. Этиловый спирт, серный
или петролейный эфир, раствор двухромовокислого к а ­
лия или азобензола; центрифуж ны е пробирки, центрифу­
га, мерные пробирки, стеклянные палочки, пипетки, ко­
лориметр.
Определение каротина с использованием стандартной
ш калы . 1. В центрифуж ную пробирку берут 1—3 мл све­
ж ей сыворотки крови.
2. В пробирку приливаю т 3— 5 — 8 мл этилового спир­
та и тщ ательно перемеш иваю т содерж им ое стеклянной
палочкой.
3. Полученную взвесь центрифугируют 15 мин (до
появления о с а д к а ).
4. С осадка белка сливаю т спирт, после чего в про­
бирку приливаю т 3—4 мл серного или петролейного эф и ­
ра и содерж имое тщ ательно перемеш иваю т стеклянной
палочкой.
5. Смесь белка и эф и ра центрифугируют 10 мин.
6 . П розрачны й эфирный эк стр ак т сливаю т в мерную
пробирку, доводят чистым эфиром объем экстракта до
5 мл и за к р ы в а ю т пробирку пробкой.
7. О краску содерж имого этой пробирки сравниваю т
со стандартной ш калой двухромовокислого калия, з а п и ­
сы ваю т номер соответствующей пробирки и по ш кале
находят, каком у количеству м иллиграм м ов каротина
соответствует д а н н а я о к р аск а (см. стр. 163). С о д е р ж а ­
ние каротина в сыворотке крови находят по формуле:
К- V• 100
ъ
где х — с о д е р ж а н и е каротина в сыворотке крови ( мг % ) ;
.
167
К __количество к а р о ти н а по с т а н д а р т н о й ш к а л е д в у х р о ­
м овокислого к а л и я (м г ) ; V — о б ъ ем эф и р н о го э к с т р а к ­
т а ( м л ) ; Ъ— о б ъ е м сы воротки крови, в зя т о й д л я а н а л и ­
за (м л).
I
____
О п р ед ел ен и е р -к а р о т и н а на ф о т о э л е к т р о к о л о р и м е тр е.
Э ф и рн ы й э к с т р а к т в щ ш р и в а ю т , сухой о с т а т о к р а с т в о р я ­
ют в эт а н о л е , у с т а н а в л и в а ю т общ ий объем э к с т р а к т а и
и зм е р я ю т эксти н кц и ю на ф о т о э л е к т р о к о л о р и м е т р е в к ю ­
вете при синем с в ето ф и л ь тр е и д л и н е волны 455 нм. ь с л и эксти н кц и я н и зк а я , р а с т в о р в ы п а р и в а ю т д о 5 ш м л .
Э кстинкцию р а с т в о р а о п р е д е л я ю т в со п о ставл ен и и с чи­
сты м этан о л о м . К о н ц ен тр ац и ю р -к а р о т и н а в о б р а з ц е
р а с с ч и т ы в а ю т по ф о р м у л е :
А
XV
т
гд е Л — к о н ц е н т р а ц и я к а р о т и н а ( м к г /г ) ; х — к о н ц е н т р а ­
ция, р а с с ч и т а н н а я по к а л и б р о в о ч н о м у г р а ф и к у ( м к г /м л ) ,
V — о б ъ е м спиртового р а с т в о р а ( м л ) ; Т
масса вещ е­
ства (г ).
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е ВИТАМИНА А В КОРМАХ,
БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ И ПРЕПАРАТАХ
О п р ед ел е н и е в и т а м и н а А п р о в о д и тся по сл ед у ю щ и м
э т а п а м : о м ы л ен и е о б р а з ц а , э к с т р а г и р о в а н и е н еом ы ляемой ф р а к ц и и , х р о м а т о г р а ф и р о в а н и е (п ри н ал и ч и и о б о ­
р у д о в а н и я ) или к о л о р и м етр и р о в ан и е. Р е з у л ь т а т ы о б р а ­
б а т ы в а ю т С и с п о л ь зо в а н и ем к а л и б р о в о ч н о го г р а ф и к а .
В зав и си м о сти о т п р и р о д ы а н а л и з и р у е м ы х о б р а зц о в
их о м ы л е н и е и э к с т р а г и р о в а н и е им ею т н ек о то р ы е о со ­
бенности. П о д р о б н ы й х о д а н а л и з а п о к а з а н на при м ере
о п р е д ел е н и я в и т а м и н а А в молоке. Х р о м а т о г р а ф и р у ю т
и к о л о р и м е тр и р у ю т все о б р а з ц ы о ди н аково. А н а л и з не­
об х оди м о п р о во д и ть бы стро (без п ер ер ы в о в м е ж д у э т а ­
п а м и ) при с л а б о м р а с с е я н н о м свете. О м ы л я т ь о б р а з ц ы
с л е д у е т в а т м о с ф е р е а з о т а или у гл е к и сл о го г а з а .
Р е а к т и в ы , п о су д а и о б о р у д о в ан и е. С ухой ХЛ0 Р?;
ф орм *, н асы щ ен н ы й р а ст в о р тр ех х л о р и сто и сурьм ы ,
*
Химически чистый хлоформ промывают 2—3 раза водой
высушивают прокаленным поташем или безводным сернокислым
нятоием и перегоняют в склянку из темного стекла.
** Треххлористую сурьму промывают хлороформом и высуши­
вают в темноте в эксикаторе над с е р н о й кислотои в течение 1—2 су­
ток. Для приготовления раствора на 100 мл хлороформа берут 25
168
свободный от перекисей серный эфир*, 40% -ный вод­
ный раствор едкого кали (ГО СТ 4203—65, х. ч.), фенол­
фталеин, прокаленный сернокислый натрий, 96-градус­
ный спирт (р ек ти ф и к ат), уксусный ангидрид, серная ки­
слота (удельный вес 1,84), углекислота (в балл он е);
бюретка с притертым краном на 10— 15 мл (для прнливания треххлористой сурьм ы ), пипетка на 2 мл или на
1 мл с делениями до 0,1 мл (для отмеривания испытуе­
мого р а ст в о р а ), делительны е воронки, конические кол­
бы, воздушные холодильники (стеклянные трубки д л и ­
ной 60 см и диам етром 1,2 с м ), бюксы, воронки для
фильтрования, мерные колбы вместимостью от 10 до
500 мл, эксикаторы , холодильники Л ибиха (необходи­
мые приборы у казан ы при описании методики опредеПостроение калибровочной кривой. И з чистого вита­
мина А ац етата или из м асляны х концентрированных
его препаратов с точно определенной активностью гото­
вят растворы; в навеске витамина А в расчете на чистое
вещество д о лж н о содерж аться 3,44 мг ретинолацетата.
Витамин (или п реп арат его) растворяю т хлороформом
в мерной колбе на 100 мл. В 1 мл такого основного р а ­
створа содерж ится 100 И Е витамина А. П осле этого го­
товят серию рабочих растворов. Б ерут 8 колб (или про­
бирок с притертыми пробками) и в первую из них от­
меряю т 1 мл, во вторую 2 мл, в третью 3 мл, в четвер­
тую 4 мл, в пятую 5 мл, в шестую 7 мл, в седьмую 9 мл,
в восьмую 10 мл основного раствора. Д а л е е объем р а с ­
твора в каж дой колбе (или пробирке) доводят хлоро­
формом до 10 мл. В 1 мл рабочего раствора в колбах
(с первой по восьмую) содерж ится соответственно 10,
20, 30, 40, 50, 70, 90, 100 И Е витамина А.
треххлористой сурьмы, причем содержимое оставляют на ночь. По­
лученный прозрачный раствор сливают в темную склянку, добавля­
ют туда 2 мл уксусного ангидрида и закрывают притертой пробкой.
Раствор годен для анализа через сутки и может использоваться в
течение 5—6 недель.
*
В колбу наливают 500 мл эфира, 25 мл 10%-ного раствора
Ре5С>4 и 25 мл 5%-ного водного раствора едкого кали. Содержимое
колбы взбалтывают. Реакционная смесь, периодически взбалтывае­
мая, стоит в течение 30 мин, затем содержимое колбы переливают в
делительную воронку и после отделения эфирного слоя нижний вод­
ный слой бурой жидкости сливают. После этого эфир промывают
4—5 раз дистиллированной водой, сушат (в течение суток) безвод­
ным сернокислым натрием и перегоняют. Наркозный эфир, как не
содержащий перекисей, не обрабатывают.
\
Д л я построения к ал и б р о во ч н о й кривой при опредем
I
|
ш
“
----Л
”
а
в
р
*
"
»
ф
отоколори
л е н и я х с треххлори стой сурьм ой
Н Щ
м етр а Н аливаю т 0,4 м л р аб о ч его р а с т в о р а из
Р _
к о л б ы и все р еакти вы , и сп ользу ем ы е при со ответству ю ­
щ ем м етоде а н а л и з а , после чего и зм е р я ю т ^ « н к ц ш о .
З а т е м и зм е р я ю т интенсивность о к р а с к и р а с т в о р а из вто
рой, третьей и. последую щ их колб.
„
П р и изм ерении эксти н кд и и р а с т в о р а из первой, вто­
рой и п оследую щ и х ко лб в кю вете с о д е р ж и т с я соответШ Й й а 4 I . 12 16, 20, 28, 36 и 40 И Е в и т а м и н а А. Э ти
величины и спользую т при построении И Л И «Р<® ” Я®™
г р а ф и к а , о т к л а д ы в а я их по оси абсцисс, а и зм ер ен н ы е
(при о п р ед ел ен и ях с треххлори стой сурьм ой) величиНЫ О м ы л ен и е о б р а з ц о в печени и яиц. 1,5— 2 г гом оген и ­
зи р о в ан н о го о б р а з ц а печени п ерен осят в к о л б у д л я о м ы ­
л ен и я, д о б а в л я ю т т у д а 20 мл э т а н о л а , 100 мг п и р о г а л ­
л о л а и 5 м л 6 0 % -н о го р а с т в о р а К О Н . О м ы л я ю т на в о ­
д ян о й б ан е при т е м п е р а т у р е 90— 95°С в тече н и е 3 0 м и ^
П р и а н а л и з е яичного ж е л т к а в колбу д л я о м ы л ен и я
н а л и в а ю т 5 мл д и сти л л и р о ван н о й воды , п ер ен о сят 5 7 г
ж е л т к а . С о д е р ж и м о е п ерем еш и ваю т, д о б а в л я ю т в него
30 мл эти лового сп и р та, снова п е р е м еш и в а ю т и после
д о б а в л е н и я 100 мг п и р о г а л л о л а (или аскорби новой к и с­
л о ты ) и 10 мл 6 0 % -н о го р а с т в о р а едкого к а л и о м ы л я ю т
при т е м п е р а т у р е 90—95°С в течение 30 мин. В проц ес­
се о м ы л е н и я к о л б у периодически с л е г к а ^ п о к а ч и в а ю т
д л я п ер ем еш и в ан и я с о д е р ж и м о го и б о л ее полного омы
ЛеНП о с л Т ?оДм0ы лен и я к о л б у о х л а ж д а ю т , с о д е р ж и м о е п е ­
р ен о сят в д ел и тел ьн у ю воронку, д о б а в л я ю т т у д а 20 мл
в о д ы и п о д в е р га ю т 4 -к р атн о м у
л о в ы м эф и р о м , п р и л и в а я его_первыи р а з 40 мл, а за т е м
П° О м ы л е н и е сы воротки или п л а зм ы крови. В к о л б у в л и ­
в а ю т 3 — 4 м л х ы в о р о т к и или п л а з м ы , д о б а в л я ю т 10 мл
э т а н о л а 100 мг п и р о г а л л о л а или аскорбиновой кислоты
Г з м л 6 0 % -н о го р а с т в о р а К О Н . О м ы л я ю т
в течение
30 мин при 90 95°С, после Ш С Ш Ш Ц Ш В
эф
иром
1ШШПУИ
-------а з а т е м 3 р а з а по 15 мл.
ш
т
а
м
и
н
А
О м ы л е н и е сухих п р е п а р а то в , с о д е р ж а щ и х
и п ри готовленн ы х на декстри н овой или б е л к о в ®й о с " ^
1. В зв еси в около 100 мг п р е п а р а т а в и т а м и н а А с ак ти в
170
Ч
ностью 1 г, равной 250 ООО— 325 ООО И Е, помещ аю т его
в колбу д л я омыления.
2. Д о б а в л я ю т туда около 100 мг п и рогаллола или
аскорбиновой кислоты, 1 мл горячей воды (65— 70°С) и
осторожно перемеш иваю т до полного растворения м ик­
рокапсул препарата.
3. З а т е м д о б авляю т в колбу 2 мл 60% -ного раствора
К О Н и 25 мл этилового спирта-ректиф иката и содерж и ­
мое снова перемешивают.
*
4. Колбу продуваю т азотом или углекислым газом,
присоединяют к обратному воздуш ному холодильнику
(или к холодильнику с водяным охлаж дением ) и поме­
щ аю т на 20 мин на водяную баню (при 90—95°С), из­
редка осторожно перемеш ивая содержимое.
5. Ч ерез 20 мин колбу отсоединяют от холодильника,
о х л а ж д а ю т в струе холодной воды, содерж имое перено­
сят в делительную воронку,' а колбу ополаскиваю т 20 мл
дистиллированной воды, которую т а к ж е сливаю т в д ел и ­
тельную воронку.
6 . П роводят 4-кратную экстракцию витаминов из
воДно-спиртовой ф азы диэтиловым эфиром, используя
его первый р а з 30 мл, а затем по 20 мл.
Омыление образц ов при определении витамина А в
премиксах. 1. В колбу д ля омыления набираю т 2— 3 г
среднего о б р азц а премикса.
2. Д о б а в л я ю т туда примерно 100 мг пирогаллола
(или аскорбиновой кислоты ), около 100 мг сульфида
натрия, 5 мл горячей воды и вы держ и ваю т содерж им ое
5 мин.
3. З а т е м д о б ав л яю т в колбу 30 мл этилового спирта
и 5 мл 60% -ного раствора К О Н , содерж им ое перемеши­
вают, колбу присоединяют к обратному холодильнику
и нагреваю т при 90— 95°С на водяной бане в течение
30 мин.
4. П осле омыления колбу о х л а ж д аю т в струе холод­
ной воды, а содерж им ое переносят в делительную ворон­
ку, куда д о б ав л яю т 20 мл дистиллированной воды.
5. Экстрапируют диэтиловым эфиром первый раз
30 мл, а затем по 20 мл.
О м ы л е н и е 'о б р а зц о в комбикорма, обогащенного пре­
паратом витам ина А. 1. П редварительно хорошо измель­
чив образцы комбикорма, содерж ащ его в 1 г 7 15 И Е
витамина А, отвеш иваю т 10 г его, помещ аю т в колбу,
д о б авл яю т туда 100 мг пирогаллола (или аскорбино171
вой к и с л о т ы ), 100 мг с у л ь ф и д а н а т р и я , 10— 15 м л г о р я ­
чей воды и в ы д е р ж и в а ю т 5 мин при т е м п е р а т у р е о э
7 0 °с.
'
. - \
2. З а т е м д о б а в л я ю т в к о л б у 50 мл эти лового сп и рта
и 60-%-ный р аств о р К О Н (из р а сч е та 1 мл на 1 г корг^~г^
^~
^ ^1' ^ ^ ^
^^,л:’.•^ *'■~'
3. С о д е р ж и м о е колбы , л егк о в с т р я х и в а я , п е р е м е ш и ­
ваю т, п р о д у в а ю т азотом или у гл еки сл ы м газом .
4. К о л б у "присоединяют к х о л о д и л ьн и к у и н а г р е в а ю т
при 90— 95°С в течение 30 мин на водяной бане, легки м
п о к ач и в ан и ем периодически п е р е м е ш и в а я со д е р ж и м о е,
не д о п у с к а я о б р а з о в а н и я комков.
5 З а к о н ч и в ом ы ление, колбу о х л а ж д а ю т в струе х о ­
лодной воды и п ер ен о сят с о д е р ж и м о е в д ел и те л ь н у ю в о ­
ро н ку д л я эк стр ак ц и и .
6 К олбу, в которой п роводи ли о м ы л ен и е о б р а з ц а ,
о п о л а с к и в а ю т 30 мл д и сти л л и р о в ан н о й , воды, которую
т а к ж е с л и в а ю т в д ел и тел ьн у ю ворон ку д л я эк стр ак ц и и .
7.
Э к с т р а ги р у ю т д и эти л о вы м эф и р о м ч е т ы р е х к р а т ­
но и сп ользуя первы й р а з 50 мл, а за т е м по 40 м л эф и р а.
' Э к стр аги р о в ан и е и о б е з в о ж и в а н и е
н ео м ы л яем о и
ф р а к ц и и липидов. Э к с т р а ги р о в а н и е ом ы лен н ого о б р а з ­
ц а и все п ослед ую щ и е этап ы а н а л и з а необходим о п р о ­
во д и ть в в ы т я ж н о м ш к а ф у . Д л я этого и сп ользую т две
д ел и те л ь н ы е воронки. С н а ч а л а в к о л б у с о х л а ж д е н н ы м
ом ы л ен н ы м о б р а з ц о м д о б а в л я ю т необходим ое к о л и ч е ­
ство э ф и р а и с о д е р ж и м о е энергично см еш и ваю т, а з а т е м
п ер ен о сят в первую д ел и тел ь н у ю воронку. К о л б у ж е
о п о л а с к и в а ю т д ц сти л л и р о в ан н о й водой, которую с л и в а ­
ю т в д ел и те л ь н у ю воронку. Р а с т в о р у д а ю т отсто яться в
течение 3 — 5 мин, после чего происходит р а с с л о е н и е со^
д е р ж и м о г о на верхний эф и рн ы й и ниж ний водны й слои.
В с л у ч а е м едлен н ого или неполного р ассл о ен и я с о д е р ­
ж и м о го в д ел и тел ь н у ю ворон ку д о б а в л я ю т 10 20 мл
сп и рта. З а т е м ниж ний слой с л и в а ю т в ту ж е колбу, в
которой п роводи ли ом ы ление, д о б а в л я ю т т у д а ди эти ловый эф и р, с о д е р ж и м о е с м е ш и в а ю т и в ы л и в а ю т во в т о ­
рую д ел и тел ь н у ю воронку. П о сл е р а з д е л е н и я слоев
н и ж н и й слой с л и в а ю т в колбу д л я о м ы л ен и я , а в е р х ­
ни й — в первую д ел и тел ь н у ю воронку. Н и ж н и й слой ещ е
д в а ж д ы э к с т р а г и р у ю т подобны м ж е о б р а зо м .
В се э ф и р н ы е э к с т р а к т ы о б ъ е д и н я ю т в первой д е л и ­
тельной воронке, к у д а д о б а в л я ю т 50— 70 м л д и с т и л л и р о ­
в ан н о й воды. С о д е р ж и м о е в с т р я х и в а ю т и после отделе172
ния воды ниж нии^елой сливают. Эту операцию проде­
лы ваю т 3—5 раз, пока последняя порция промывных
вод не будет нейтральней (по ф е н о л ф т а л е и н у ) .'
О статки воды из делительной воронки аккуратно у д а ­
ляю т, чтобы не потерять эфирны й экстракт, а последний
сливаю т в колбу на 200 мл, в которую предварительно
насыпаю т 15— 20 г безводного сернокислого натрия.
Ополоснув делительную воронку 10— 15 мл эф и р а, его
тож е сливаю т в колбу. Эфирный экстракт, с о д е р ж а ­
щий неомыляемую липидную фракцию , оставляю т в к о л ­
бе на 45 мин, после чего сливаю т в чистую колбу со
шлифом на 200 мл. О ставш ийся на дне сернокислый н а т ­
рий триж ды промываю т диэтиловым эфиром порциями
по 15 мл, которые присоединяют к экстракту. П ри этом
важ но, чтобы сульф ат натрия не попадал в экстракт,
д л я чего можно воспользоваться воронкой, на дно кото­
рой помещен небольшой комочек чистой хлопковой в а ­
ты. Эфир вы париваю т полностью (до исчезновения з а ­
п аха) в токе углекислого газа.
Сухой липидный экстракт ср азу ж е растворяю т в
хлороф орм е (в зависимости от исследуемого образца
и предполагаем ого содерж ан и я в нем витамина его тр е­
буется 1— 10* мл и более) и подвергаю т колориметрированию.
Например, при определении витамина А в печени, если при колориметрировании окраска будет очень интенсивной, первоначаль­
ный хлороформный раствор необходимо развести, для чего, отмерив
1 мл этого раствора, приливают к нему 4—5—7 мл хлороформа.
При подсчете количества витамина А учитывают степень разведе­
ния, т. е. объем всего хлороформа, взятого для растворения сухого
остатка.
Допустим, сухой остаток растворен в 5 мл хлороформа. При
колориметрировании раствор имеет интенсивную синюю окраску.
Следовательно, раствор надо разбавить. Для этого из 5 мл раство­
ра сухого остатка бярут 1 мл и добавляют 9 мл хлороформа. Об­
щее количество хлороформа, израсходованное на разведение сухого
остатка, будет равно 50 мл. Эту цифру подставляют в формулу (V).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА А В МОЛОКЕ И МОЛОЗИВЕ
Принцип метода состоит в установлении интенсивно­
сти синей окраски, которую в присутствии треххлористой сурьмы д ает витамин А, содерж ащ ий ся в извлечен­
ной неомыляемой ф ракции исследуемого вещества.УДля
этого строят калибровочную кривую раствора чистого
витам ина А ац етата (см. стр. 169).
73
О м ы л ен и е и и зв л еч ен и е н е о м ы л я е м о й ф р а к ц и и . Д л я
а н а л и з а и сп о л ьзу ю т средн ю ю п ро б у м о л о к а : летом
50 м л зим ой — 75— 100 мл. К пробе м о л о к а бы стро д о ­
л и в а ю т водны й р аств о р 4 0 % -н о го р а с т в о р а едкого к а л и
из р а с ч е т а 20 м л на 50 мл м о л о к а ( м о л о з и в а ) , 30— 4 0 м л
на 7 5 — Ю0 мл. З а к о н с е р в и р о в а н н ы е щ елочью п робы м о­
л о к а м огут х р а н и т ь с я в хо л о д н о м тем ном месте в теч е­
ние 3— 5 дней.
Х од о п р ед ел ен и я. 1. П р о б у м о л о к а (с К О Н ) п ер ен о ­
с я т в колбочку, ф л а к о н 2 р а з а о п о л а с к и в а ю т н е б о л ь ш и ­
ми п о р ц и ям и д и с т и л л и р о в а н н о й воды (около 10 м л ) , во­
д у з а т е м п е р е л и в а ю т в к о л б у и д о б а в л я ю т т у д а 10 мл
эти л ово го спирта.
2. К о лбоч ку с т а в я т н а в о д ян у ю б ан ю и, з а к р ы в ее
пробкой с во зд у ш н ы м х о л о д и л ьн и к о м , с о д е р ж и м о е омыл я ю т в течение 2 —2,5 ч. П р и з н а к а м и , х а р а к т е р и з у ю щ и ­
ми ом ы лен н ы й р а с т в о р , я в л я ю т с я тем н о-буры й цвет и
з а п а х м ы ла.
3. В к о л б у с о м ы л ен н ы м р аств о р о м д о б а в л я ю т с н а ­
ч а л а 20 м л д и с т и л л и р о в а н н о й воды , а после о х л а ж д е - >
ния 10 м л спирта.
4 С о д е р ж и м о е к о л б ы п е р е л и в а ю т в д ел и те л ь н у ю в о ­
ронку, к о л б о ч к у 2— 3 р а з а о п о л а с к и в а ю т эф и р о м , кото­
ры й с л и в а ю т т у д а ж е. Э ф и р а д л я первой э к с т р а к ц и и исп о л ь зу ю т 50 мл.
.
5. Д е л и т е л ь н у ю в о р о н к у з а к р ы в а ю т пробкой и ж и д ­
кости о с то р о ж н о см еш и ваю т.
6 . Д е л и т е л ь н у ю ворон ку с т а в я т в ш т а т и в и, ко гд а
п р ои зо й д ет четкое р ассл о ен и е ж и д к о стей , н ео м ы л я ем у ю
ч ас ть (т е м н а я ж и д к о с т ь вни зу) с л и в а ю т в сухой х и м и ­
ческий с т а к а н н а 500 мл, а эф и р н у ю в ы т я ж к у — в колбу,
в которой п р о во д и л и ом ы ление.
7. И з с т а к а н а н еом ы ленную ч асть сн ова п ерен осят в
д ел и те л ь н у ю воронку, с т а к а н
дваж ды
ополаскиваю т
25 м л э ф и р а и п р о в о д я т э к с т р а г и р о в а н и е , к а к и в п е р ­
вы й р а з . Э ф и рную в ы т я ж к у со ед и н яю т с первой. Т а к ж е
э к с т р а г и р у ю т третий р а з 25 мл э ф и р а .
8 . -О б ъ ед и н и в э ф и р н ы е в ы т я ж к и , их п ер ен о сят в д е ­
л и т ел ь н у ю во р о н к у и п р о м ы в а ю т д и с ти л л и р о в ан н о й в о ­
дой д о н ей тр ал ьн о й р еакц и и . Д л я этого в д ел и те л ь н у ю
в о р о н к у с эф и р н о й в ы т я ж к о й в л и в а ю т 70 м л воды, з а ­
к р ы в а ю т в о р о н к у пробкой и, вы нув ворон ку из ш т а т и ­
ва, с о д е р ж и м о е о сто р о ж н о смешивают.^ П о с л е того к а к
в о о о н к у п о с т а в я т в ш т ат и в и п р о и зо й д ет р а з д е л е н и е
174
жидкости, воду с щ р а ю т . П осле 4— 5-кратного п ром ы ва­
ния воронки водой проверяют наличие щелочи, исполь­
зуя д л я этого фенолф талеин. Если ж идкости при эк стр а­
гировании и промывании р аздел яю тся плохо, необходи­
мо добавить 10 мл этилового спирта.
9. П ромыты й эфирный эк стр ак т высуш иваю т ф и льт­
рованием его через безводный сернокислый натрий. В
сухую чистую колбочку пом ещ аю т воронку со с к л а д ч а ­
тым фильтром, насыпаю т на него безводный сернокис­
лый натрий и в воронку осторожно переливаю т э ф и р ­
ный экстракт. З а т е м небольшим количеством эф ира опо­
ласки ваю т колбочку и фильтр с сернокислым натрием.
10. П осле этого эфир отгоняют (на водяной бане) в
токе углекислоты.
11. Сухой остаток растворяю т в хлороформе. К о л и ­
чество добавленного хлороф орм а зависит от с о д е р ж а ­
ния витамина А в исследуемом веществе. Д л я ан али за
молока достаточно 1— 2 мл хлороф орм а, д л я молозива
его требуется 3— 5 мл.
Колориметрирование. 0,4 мл испытуемого хлороф орм ­
ного раствора витамина А переливаю т пипеткой в кю­
вету фотоколориметра (5 кюветы 0,5 см ). Кювету с т а ­
вят в кар етку колориметра и приливаю т 4 мл раствора
треххлористой сурьмы в хлороформе. Интенсивность
образовавш ейся синей окраски раствора в кювете изм е­
ряю т в фотоколориметре Ф ЭК -М не позднее чем через
5 — 10 с при красном светоф ильтре и длине волны
620 нм.
Вычисление содерж ания витамина А в испытуемом
растворе. Концентрацию витамина А в конечном хлоро­
формном растворе подбираю т таким образом , чтобы ве­
личина найденной экстинкции у к л а д ы в а л а с ь в преде­
л а х ранее составленного граф ика. О пределив в приборе
экстинкцию (или плотность) исследуемого раствора, н а ­
ходим по граф ику соответствующее ей содерж ание ви­
там ина А в 1 мл в интернациональных единицах.
С одерж ание витам ина А вычисляют по формуле:
л __ *• V- 0,3
А а
0 ,4 -Г '
где А — концентрация витамина А в 1 г вещества (м кг);
х — содерж ание витамина А, определенное по к ал и б р о ­
вочной кривой (И Е в 1 г ); Т — масса о б р азц а
(г);
0,3 — коэффициент д ля перевода интернациональных
*
175
х
л
о
р
о
ф
о
р
м
еди н и ц в единицы м ассы ; 0;4 - количество
V
—
обного э к с т р а к т а , в зя т о го д л я цветной р еакц и и ;
Щий о б ъ е м х л о р о ф о р м н о го р а с т в о р а н ео м ы л яем о й ф р а к ЦИ^ о с л е Дк а ж д о г о и зм ер ен и я кю веты о п о л а с к и в а ю т к о н ­
ц ен тр и р о ван н о й солян ой кислотой, з а т е м д и сти л л и р о ванной водой и вы суш и ваю т.
ХРОМ АТОГРАФИРОВАНИЕ (М ЕТОДИКА ВНИИТИП)
П р и оп ределен и и к а р о т и н а и в и там и н а А со п у тству ­
ю щ ие им вещ еств а ч асто з а т р у д н я ю т к о л о р и м е т р и р о в а ние и особенно сп ектро ф о то м етри ю . О с в о б о ж д а ю т с я от
этих вещ еств с пом ощ ью тонкослойной х р о м а т о гр а ф и и .
В и там и н А и 6 -кароти н о п р е д е л я ю т путем в о с х о д я ­
щ ей х р о м а т о г р а ф и и на н ей тр ал ьн о й окиси ал ю м и н и я , к
^ о т о р о Г м и н и м у м з а 12 ч до и с п о л ь зо в а н и я д о б а в л я ю т
д и с ти л л и р о в а н н у ю воду д л я п о д д е р ж а н и я в л а ж н о с т и н
уповне 10% В м е с т о - о к и с и а л ю м и н и я м о ж н о
исполь
з о в а т ь безводны й с и л и к а г е л ь (х р а н я т его в герметиче° К° Х о д о п р ед ел ен и я. 1. Н а с т е к л я н н у ю х р о м а т о г р а ф и ч е ­
с к у ю п л а с т и н к у то л щ и н о й 0 , 7 0 - 0 , 7 5 мм н а н о с я т р о в ­
н о м сл оем п о р о ш о к а д с о р б е н т а (п л асти н ы н а р е з а ю т из
с т ё к л а с г л а д к о й и ровной п о веРхнос^ь 1°Дпй 1
я стек.
2 . Д л я п олучен и я ровного с л о я а д с о Рб е н 1 % н а
®
л я н н у ю п а л о ч к у дли н ой 30 мм, д и а м е т р о м 5,7 мм н а ­
д е в а ю т 4 к о л ь ц а ш и ри ной 5 мм, н а р е з а н н ы х из резино
вой тру б ки *, и п р о в о д я т ею (в г° Р и з° нтальН 0^ ппн°оЛ° ^ '
ш ш ) 2— 3 р а з а по п л а с т и н к е с а д со р б ен то м в одном на
п р а в л е н и и (о т с е б я ) . П р и этом к р а й первого рези н ового
к о л ь ц а д о л ж е н с о в п а д а т ь с к р а е м п ластины .
3. П е р в а я п о л о с к а (ш и ри н о й 15 м м )
и сп о льзуется
д л я н ан есен и я «свидетелей», в т о р а я , т р е ть я и ч е т в е р ­
т а я — д л я н ан есен и я о б р а зц о в . В а ж н о , чтобы с б о ко в ы х
сторон п л а с т и н ы слой а д с о р б е н т а не д ох од и л до к р а е в
на 5 10 мм, но полностью п о к р ы в а л п л ас ти н у у в е р х н е ­
го и н и ж н его к р а ев .
4 Г ексан о вы й р а с т в о р а н а л и з и р у е м о г о о б р а з ц а (или
р а с т в о р его в п етр о лей н о м э ф и р е ) п астер о в ск о й п и п ет­
кой н а н о с я т на п о л о ск у а д с о р б е н т а по к а п л я м ровной
*
Толщина стенок трубки определяет толщину слоя адсорбента
а расстояние м еж ду кольцами — ширину его полос: первой— 15 мм,
трех последующих — по 60 мм.
176
линией, отступив 3 ( К ш от нижнего края пластины (мес­
то нанесения о б р азц а предварительно пропитывают гексаном — с т а р т ) .
5. В колбу, в которой находится образец, ополаски­
вают 1 мл гексана (или петролейного эф и ра) и пром ы в­
ную ж идкость т а к ж е наносят равномерно на линию
старта. П ром ы ваю т д в а ж д ы с тем, чтобы весь экстракт
перенести на линию старта. П олоска об разц а д олж н а
быть минимально узкой.
6 . Осторожно, чтобы не наруш ить слоя, пластину
помещ аю т в кристаллизатор, который сл у ж и т хром ато­
графической камерой (предварительно в кам еру н а л и ­
ваю т 200 мл растворителя из этан ола, диэтилового эф и ­
ра и гексана в соотношении 3 : 23 : 74; гексан можно з а ­
менять петролейным эфиром без перекисей).
7. Х роматографическую кам еру (кри сталли затор) з а ­
ранее устанавливаю т к поверхности стола под углом
около 5°. П ласти н у в кри сталли заторе устанавливаю т
под углом около 10°. Общий угол наклона пластины д о л ­
жен составлять 13— 14°. К ам еру сверху плотно з а к р ы ­
ваю т стеклянной пластинкой, чтобы растворитель не ис­
парялся. —
Н иж ний слой хрс?матографической пластины погру­
ж а ю т в растворитель так, чтобы он равномерно д в и гал ­
ся по всей его ширине. Х роматографическую камеру з а ­
щ ищ аю т от интенсивного света (можно применять тем ­
ную тк а н ь ).
8 . П осле того к а к растворитель достигнет верхнего
слоя Пластины (не доходя 1 см до к р а я ) , ее вынимают
из к р и стал л и зато р а и быстро отмечаю т скальпелем л о ­
кализацию полос р-каротина и оксикаротиноидов, кото­
рые хорошо видны.
9. П ласти н у помещ аю т под хемископ и по ж е л т о в а ­
то-зеленоватой люминесценции точно отмечают л о к а л и ­
зацию полосы витам ина А.
10. Отмеченный участок адсорбента, на котором л о ­
кализованы определенный витамин или каротиноиды,
быстро (пока он еще влаж н ы й ) переносят с пластины
в колбу на 150 мл (лучше в коническую) и ср азу ж е з а ­
ливаю т 10 мл диэтилового эф ира. С одерж им ое энергич­
но встряхиваю т и оставляю т на 5 мин. Эфирный эстракт
осторожно сливаю т в другую чистую колбу ?ербз во­
ронку с ватным фильтром. Адсорбент, содерж ащ ий а н а ­
лизируемый витамин, пром ы ваю т диэтиловым эфиром
12. З а к а з 7445
177
еще 3 р а з а (по 10 м л к а ж д ы й р а з ) и все порции э ф и р а
с о б и р а ю т в одну колбу. Э к с т р а к т ы , с о д е р ж а щ и е в и т а ­
мин А или |3-каротин, и сп о л ьзу ю т д л я с п е к т р о ф о т о м е т ­
рического о п р ед ел ен и я.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е Р И Б О Ф Л А В И Н А В КОРМ АХ
Р и б о ф л а в и н (в и там и н В 2) ш и роко р а с п р о с т р а н е н в
п р и р о д е. Он с о д е р ж и т с я и в р асти те л ь н ы х , и в ж и в о т ­
ных к о р м а х , си н тези р у ется р астен и ям и , д р о ж ж а м и , м н о­
гими м и к р о о р га н и зм а м и , в том числе и о б и т а ю щ и м и в
р у б ц е и киш ечни ке ж и вотн ы х. Б л а г о д а р я с и н тезу м и к ­
р о ф л о р о й ж ел у д о ч н о -к и ш еч н о го т р а к т а ' в и т а м и н а
1|
в зр о с л ы е ж в а ч н ы е не н у ж д а ю т с я в поступлении его и з ­
вне (в п р о ти в о п о л о ж н о сть т е л я т а м в р а н н е м в о зр а с т е ,
сви н ьям , л о ш а д я м и особенно п ти ц е).
Р и б о ф л а в и н о м б огаты д р о ж ж и , в ы с о к о к а ч е с т в е н н а я
р ы б н а я и м я с н а я м у к а , м олоко и о б р а т , т р а в я н а я м ука,
с у х а я б а р д а . Б е д н ы этим ви там и н о м к о р н е к л у б н еп л о д ы ,
зе р н о з л а к о в (его с о д е р ж а н и е в з е р н е у в е л и ч и в а е т с я в
3— 5 р а з при п р о р а щ и в а н и и последн его д о белого р о ст­
к а ) . П р и порче зер н о в ы х к о р м о в и п отере зер н о м в сх о ­
ж е с т и с о д е р ж а н и е в и т а м и н а Вг р е зк о с н и ж а е т с я .
К о ли ч ество р и б о ф л а в и н а в з е р н е з а в и с и т от его сп е­
лости. П о д а н н ы м К- Л . П о во л о ц ко й , *в зер н е п ш ен и ц ы
и я ч м е н я з а п ер и од от ф а з ы м олочной спелости д о п о л ­
ного с о зр е в а н и я с о д е р ж а н и е Щ с н и ж а е т с я на 25— 3 5 % .
В ы яснено, что р и б о ф л а в и н а б о л ь ш е в п и г м е н т и р о в а н ­
ных ч а с т я х растений.
В к о р м а х р и б о ф л а в и н н ах о д и тся в сво б о д н о м виде
или в соединении с ф о сф ор ом , белком . В н а с т о я щ е е
в р е м я известны четы ре ф о р м ы р и б о ф л а в и н а : свободны й
р и б о ф л а в и н , ф л а в и н м он он уклеоти д, ф л а в и н а д е н и н дйн у к л ео ти д и ф л а в и н а д е н и н д и н у к л ео ти д , соединенны й с
бел ко м не через* ф о сф ор н ую кислоту, а пептидны м и с в я ­
зям и . Р и б о ф л а в и н в стр еч аетс я в соединени и с м е т а л л а ­
ми (м ол и б ден о м , ж е л е з о м , м едью , к о б а л ь т о м
и цин­
к о м ) , причем в этом с л у ч а е он б о л ее реакти вен .
В и там и н Вг входит в с о ста в ак ти в н ы х групп м ного­
численны х клеточн ы х ф ер м ен то в, з а н и м а ю щ и х кл ю ч ево е
п о л о ж е н и е в п р о ц ессах ген ерац и и энергии. Он о б р а з у е т
простети ческую группу ф л а в и н о в ы х ф ер м ен то в, у ч а с т в у ­
ю щ их в переносе во д о р о д а. Эти ф ер м ен ты могут ле~ко
п р и со ед и н ять и о т д а в а т ь водород. Р и б о ф л а в и н со д гр 178
ж ится почти во всех ж ивы х клетках, в которых окисли­
тельные процессы протекаю т с участием ферментов, со­
д ер ж ащ и х этот витамин. В качестве кофермента рибо­
флавин участвует в углеводном обмене. С участием флавопротеидов происходит окисление аминокислот, оксикислот,- а т а к ж е гдцжозы, альдегидов и др. При недос­
татке рибоф лавина значительная часть аминокислот не
усваивается организмом и выводится с мочой, что при­
водит к непродуктивному расходу белка.
С увеличением доли белка в рационе потребность
животных в рибоф лавине повышается. П ри недостатке
белка или низкой его биологической ценности р и б о ф л а ­
вин вы деляется с мочой. Обмен рибоф лавина в орган и з­
ме тесно связан с обменом метионина: при м алобелко­
вой диете введение метионина мож ет заторм озить уси­
ленное выделение рибоф лавина.
Ф лавинные ферменты необходимы организм у т а к ж е
д ля синтеза и р асп ад а ж ирны х кислот.
Ри боф лавин активизируется лиш ь после его фосфорилирования, т. е. йэсле образован и я соответствующего
эф и ра фосфорной кислоты. Н а взаим освязь этого ви та­
мина и ф осф ора у к а зы в а е т резкое выделение последне­
го с мочой при Вг-авитаминозе у кур. Р и боф лави н не­
обходим организм у д ля нормального зрения (предпола­
гают, что он играет некоторую роль в светочувствитель­
ной реакции г л а з а ) , нормальной деятельности половых
ж е л е з и нервной системы, развития плода, д л я построе­
ния молекулы гем о гл о б и н а..
При недостатке рибоф лавина в рационе или плохом
его усвоении организм ом у животных наблю даю тся
ухудшение аппетита, дерматиты , анемия, снижение при­
роста ж ивой массы, припухлость век, выделение секрета
из глаз, снижение оплодотворяемости, рождение слабого
приплода, расстройство пищ еварения, параличи и др.
Р и боф лави н (С п Н д о ^ О е ) представляет собой м ел­
кие оран ж ево-ж елты е игольчатые кристаллы , нераство­
римые в растворителях ж и р о в (эфире, ацетоне, бензоле,
хлороф орме) и плохо растворимы е в спирте (4,5 мг в
100 м л ). Р и б оф л ави н относительно плохо растворяется
в воде (при 25°С 12 мг в 100 м л ) , хорошо растворяется
в щ елочных растворах, но он при этом быстро р а з р у ш а ­
ется. Д овольн о устойчив он к высокой температуре, осо­
бенно в кислой среде, к действию окислителей, кроме
марганцевокислого к ал и я и хромовой кислоты.
Р и б о ф л а в и н л е гк о р а з р у ш а е т с я на свету (п од д е й ­
ствием у л ь т р а ф и о л е т о в о г о о б л у ч е н и я ), о чем сл ед у ет
пом нить при в з в е ш и в а н и и и х р ан ен и и препарата^. О н обл а д а ё т о к и сл и тел ьн о -в о сстан о в и тел ьн ы м и свой ствам и ,
л е гк о в о с с т а н а в л и в а е т с я ги д р о су л ь ф и то м н а т р и я , п е р е ­
ходя в н еф л у о р есц и р у ю щ и й л е й к о ф л а в и н .
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е
ОБЩЕГО
КОЛИЧЕСТВА
РИБОФЛАВИНА.
П ринцип м е т о д а . М е т о д осн ован на способности р а ­
с т в о р а р и б о ф л а в и н а к я р к о ж е л т о -зе л е н о й ф л ю о р е с ц е н ­
ции в у л ь т р а ф и о л е т о в ы х л у ч а х , причем интенсивность
ее п р я м о п р о п о р ц и о н а л ь н а к о н ц ен т р а ц и и этого в и т а м и ­
на.
.'-у
*
В к о р м а х р и б о ф л а в и н н ах о д и тся в свободн ом и с в я ­
за н н о м состоянии. Ф ор м ы его, с в я з а н н ы е с б ел к о м , не
ф л ю о р е сц и р у ю т в у л ь т р а ф и о л е т о в о м свете. П о э т о м у при
оп ределен и и об щ его с о д е р ж а н и я р и б о ф л а в и н а (с в о б о д ­
ного и с в я з а н н о г о ) д л я р а з р ы в а с в я зи п р и б е га ю т к к и с­
л о тн о м у г и д р о л и зу и о б р а б о т к е ф е р м е н т а т и в н ы м и п р е­
п а р а т а м и , о б л а д а ю щ и м и ф о с ф а т а з н о й акти вн остью , а
т а к ж е п ротеоли ти ч ески м и ф е р м е н т а м и при с о о тв етс тв у ­
ю щ ей величине р Н р аств о р о в .
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в ан и е. С т а н д а р т н ы й р а ст в о р р и ­
б о ф л а в и н а * , 0,1 н. р а с т в о р серной ки сл оты (х. ч .), ф о с ­
ф атн ы й буф ер** (р Н 7,8— 8 ) , 4 % -н ы й р а с т в о р м а р г а н ­
цевоки слого к а л и я (в посуде и з тем н о го с т е к л а х р а н я т
не б о л ее 2 н е д е л ь ), 3 % -ны й р а с тв о р перекиси в о д о р о д а,
* 20 мг рибофлавина в мерной колбе на 500 мл растворяют
дистиллированной водой (в 1 мл такого раствора содержится
40 мкг рибофлавина). В темноте на холоде раствор может хранить­
ся в течение месяй)а.
,
Перед анализом готовят рабочий раствор, для чего 1 мл стан­
дартного основного раствора в мерной колбе на 100 мл доводят во­
дой ^ о метки (в 1 мл рабочего раствора содержится 0,4 мкг рибо­
флавина).
** Вначале готовят !Д$ М раствор двузамещенного фосфорно­
кислого натрия (Ыа2Н Р 0 4.2 Н 20 ) . Для этого 11,876 г его растворя- '
ют в 1 л дистиллированной воды. Затем готовят 715 М раствор фос­
форнокислого однозамещенного калия (К Н 2Р 0 4), для чего 9,078 г
его растворяют в 1 л дистиллированной воды. К 95 частям первого
раствора прибавляют 5 частей второго (рН буферной смеси прове­
ряют потендиометрически).
180
раствор хлористого олова * ( З п С Ь ) , гидросульфит н ат­
рия (Ыа 25 2 0 4 - 2 Н а0 ; перед анализом 0,25 г его раство­
ряют в 10 мл 2 %-ного раствора двууглекислого н атр и я),
ферментные препараты — трипсин, панкреатин (или клар а з а ) , п реп арат из мицелия Р еш 'сЩ ш т* * (или очищ ен­
ный энзиматический п р е п а р а т А з р е г ^ Ш и з ) ; флюорометр,
ш уттель-аппарат (механическая к а ч а л к а ) , термостат, по­
тенциометр, водяная баня, ф арф оровы е ступки, мерные
колбы на 100 , 250, 500 и 1000 мл, конические колбы на
100, 300 и 500 мл, мерные цилиндры на 25, 50, 100 и
250 мл, воронки диаметром 10— 12 см, стаканчики с при­
тертыми пробками (с отметкой 10 мл)* пипетки гр ад у и ­
рованные.
Ход определения. 1. 5— 10 г корма тщ ательно расти­
раю т в ступке с небольшим количеством фосфатного б у­
ф ера ( р Н = 7 , 8 — 8 ,0 ).
2. Растертую массу переносят в колбу и добавляю т
в нее того ж е буферного раствора, обм ы вая им ступку и
доводя его объем приблизительно до 15—20-кратного
количества по отношению к корму.
3. К олбу со смесью ставят на 45 мин на кипящую во­
дяную баню, смесь периодически помешивают.
4. В ы тяж к у о х л а ж д аю т до 30°С, проверяют величину
рН и в случае сдвига доводят ее до 7 ,8 —8,0, прибавляя
715 М раствор одно- или двузамещ енной фосфорнокис­
лой СОЛИ.
5 . в колбы со смесью вносят ферментативный препа­
р ат (трипсин, панкреатин, АзрегдШиз, к л а р азу ) из р а с ­
чета 30 мг на 1 г сухого вещества корма. З атем в к а ж ­
дую колбу прибавляю т по 0^5 мл толуола и колбы по­
мещ аю т в термостат, где вы держ иваю т 12 1Ь ч пр
37°С. При этом от белка отщ епляется прочно связанная
с ним ф орм а рибоф лавина.
•
.■
6 . П о истечении указанного времени колбы вынимаю т
*
10 г 5 пС12 растворяют в 25 мл концентрированной соляной кис­
лоты. Раствор хранят в темной склянке с притертой пробкой при
комнатной температуре. Рабочий раствор готовят каждый раз перед
анализом разбавлением 0,5 мл основного раствора водой до 100 мл.
** Все эти препараты могут быть использованы в качестве протеолитическнх ферментов. В качестве фосфатазных ферментов мож­
но использовать только Азрег^Шиз н препарат из мицелия РешсиШШПри внесении в вытяжку ферментный препарат рекомендуется
растирать в ступке с 5— 10 мл буферного раствора.
'
181
из т е р м о с т а т а , р Н см еси д о в о д я т д о 4,5, п р и б а в л я я
0,1 н. р а ст в о р Н 25 О 4.
'
- ’
7. В к о л б ы вн о сят ф о с ф а т а з н ы й ф ер м ен тн ы й п р е п а ­
р а т Р е т с Ш ш т или А зр егд Ш и з (р Н см еси при этом н е ­
обходим о довести д о 3,5— 4,0) и вновь с т а в я т их н а
12— 16 ч в т е р м о с т а т (/ + 37 °) д л я р а с щ е п л е н и я н у к л е о ­
ти д н ы х ф о р м р и б о ф л а в и н а .
8 . П о с л е и н ку б ац и и к о л б ы вы н и м аю т, с о д е р ж и м о е
о х л а ж д а ю т , о б ъ ем его д о в о д я т д о о б щ его р а з в е д е н и я
1 : 2 5 или 1 : 3 0 , после чего в ы т я ж к у ф и л ь т р у ю т через
б у м а ж н ы й с к л а д ч а т ы й ф и л ь тр . Ж и д к о с т ь д о л ж н а бы ть
п розрачн ой .
|
Н Н Н
9. В три с т а к а н ч и к а с притертой п робкой б е р у т по
8 м л ф и л ь т р а т а и в к а ж д ы й из них п р и б а в л я ю т по к а п ­
л я м 4 % -ны й р а с т в о р К М п 0 4 до тех пор, п о к а не п е р е ­
с т а н е т и сч езать к р а с н о в а т а я о к р а с к а (тр еб у е тся п р и ­
м ерно 0,2— 0,4 м л ) . В ы т я ж к у о с т а в л я ю т н а 10 мин д л я
о к и сл ен и я посторонних ф л ю о р есц и р у ю щ и х вещ еств.
10. Д л я у д а л е н и я и з б ы т к а К М 11О 4 в к а ж д ы й с т а к а н ­
чик д о б а в л я ю т по к а п л я м р а с т в о р п ереки си в о д о р о д а
д о исчезновения о к р аск и . З а т е м ж и д к о с т ь п е р е м е ш и в а ­
ю т и д о б а в л я ю т по 0,2 м л р аб о ч его р а с т в о р а х л о р и с т о ­
го о л о в а и по 0,1 м л р а с т в о р а г и д р о с у л ь ф и т а н атр и я.
11. С т а к а н ы з а к р ы в а ю т п р о б к а м и и с т а в я т на 20 мин
в ш у т т е л ь -а п п а р а т д л я в с т р я х и в а н и я . ^
12. О б ъ е м ж и д к о с ти в к а ж д о м с т а к а н ч и к е д о в о д я т
водой д о 10 мл (если в ы т я ж к а м у т н а я , то ее ф и л ь т р у ­
ю т) и п е р е л и в а ю т в кю веты ф л ю о р о м е т р а .
13. О д н о вр ем ен н о в д р у гу ю кювету^ ф л ю о р о м е т р а
(того ж е д и а м е т р а ) н а л и в а ю т р аб о ч и й с т а н д а р т н ы й
р аств о р и и з м е р я ю т интенсивность ф л ю о р есц ен ц и и с т а н ­
д а р т н о г о и испы туем ого растворов.
14. З а т е м во все кю веты п р и б а в л я ю т около 0,1 г
, Ы аН С О з и г и д р о с у л ь ф и т а н а т р и я д л я га ш е н и я ф л ю о р е с ­
ценции р и б о ф л а в и н а к а к в с т а н д а р т н о м , т а к и в испы ­
т у е м о м р а с т в о р а х (о с таетс я л и ш ь ф л ю о р есц ен ц и я пос­
торонних ф л ю о р е сц и р у ю щ и х в ещ еств ) и сн о в а и з м е р я ­
ю т интенсивность ф лю оресц ен ц и и . П р и этом в с т а н д а р т ­
ном р а с т в о р е ф л ю о р е с ц е н ц и я р и б о ф л а в и н а гаси тся д о
н у ля.
,
С о д е р ж а н и е р и б о ф л а в и н а р а с с ч и т ы в а ю т по ф о р м у л е .
(с—Сх) т ■V-У\
Х
182
(л—л , ) а - У 2
где х — содержание рибофлавина в исследуемом веще­
стве (мкг в 1 г или мг в 1 кг); с — показания шкалы
флю орометра для испытуемого раствора; С\
показания
шкалы флюорометра для испытуемого раствора после
гаш ения флюоресценции; т — содерж ание ри боф лави ­
на в 1 мл стандартного раствора (м кг); п — показания
ш калы ф лю ором етрЗ^для стандартного раствора, п\
показания ш калы флю орометра д ля стандартного р а ­
створа после гаш ения флюоресценции; V
объем р а с ­
твора, в котором разведено исследуемое вещество (м л );
VI — объем раствора после окисления
(10 м л ); У2 —
объем раствора, взятого на окисление (8 м л ); а
м ас­
са исследуемого вещества (г).
П р и м е р . 5 г корма разведено в 100 мл раствора (1 :2 0 ). Ин­
тенсивность флюоресценции испытуемой вытяжки до гашения ртена
32 после гашения — 6 единицам. Интенсивность флюоресценции
стандартного раствора 40 единиц. Отсюда содержание рибофлави­
на в корме равно:
I < « -6 > -Я И
40 -5-8
I
1
- 6 , 5 мг/кг.
*
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ РИБОФЛАВИНА
В КОРМАХ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТРИХЛОРУКСУСНОЙ
КИСЛОТЫ*
Реактивы , приборы и посуда те ж е, что и в предыду­
щем случае. Кроме того, требуются 20% -ный раствор
трихлоруксусной кислоты, 4 М раствор К 2Н Р 0 4 (ЬУЬ,й»г
двузамещ енного фосфорнокислого калия растворяю т в
мерной колбе на 1 л и доливаю т дистиллированной во­
ды до метки). Соответствующим образом готовят раоочий раствор рибофлавина.
Ход определения. 1. 5— 10 г корм а тщ ательно расти­
раю т в ф арф оровой ступке с небольшим количеством
фосфатного буф ера (рН 7,8 8,0).
2.
Р астертую массу переносят в колбу, ступку опо­
ласки ваю т фосфатны м буфером, сливая его в колбу.
Соотношение растертой массы и раствора д о лж н о быть
1 ' з5 К олбу со смесью став ят на 45 мин на кипящую
водяную баню, смесь периодически помешивают.
1
Метод разработан
Е. П. Скоробогатовой.
К.
Л.
Поволоцкой,
Н.
И.
Зайцевой,
4. В ы т я ж к у о х л а ж д а ю т до 30°С, п р о в е р я ю т вел и ч и н у
р Н и в с л у ч а е с д в и га д о в о д я т ее д о 7,8— 8,0, п р и б а в л я я
У 15 Ц р а с т в о р а одно- или д в у за м е щ е н н о й ф о с ф о р н о к и с ­
лой соли.
5. В к о л б у со см есью вн о сят ф е р м е н т н ы й п р е п а р а т
(трипсин, А зр егд Ш и з, к л а р а з у и л и д р у го й из п ер ечи с­
л ен н ы х н а стр. 181) из р а с ч е т а 30 м г на 1 г сухого в е ­
щ еств а, после чего см есь в ы д е р ж и в а ю т в т е р м о с т а т е
при т е м п е р а т у р е 37°С в течение 12— 16 ч.
6. С м есь д о в о д я т водой д о р а з в е д е н и я , со о тв етств у ­
ю щ его отнош ению 1 : 2 5 или 1 : 3 0 , и ф и л ьтр у ю т.
7. 5 мл ф и л ь т р а т а в л и в а ю т в к о л б о ч к у или с т а к а н ч и к
с п ритертой пробкой, д о б а в л я ю т т у д а 5 м л 2 0 % -н о го
р а с т в о р а тр и х л о р у к су сн о й ки слоты и н а г р е в а ю т см есь
на к и п ящ ей водяной б а н е в течение 10 мин.
8. П о с л е о х л а ж д е н и я в ы т я ж к и в нее д о б а в л я ю т
2,5 мл 4 М р а с т в о р а К г Н Р 0 4, чтобы д о вести величину
р Н до 6,0.
л о/
л
9. З а т е м к в ы т я ж к е п р и б а в л я ю т по к а п л я м 47<>-ныи
р а с т в о р К М п 0 4 д о тех пор, п о к а не п е р е с т а н е т и сч езать
к р а с н о в а т а я о к р а с к а (тр е б у е тс я обы чно 0,2— 0,4 м л ) и
в ы т я ж к у о с т а в л я ю т н а 10 мин.
10. Д л я у д а л е н и я и з б ы т к а К М .п 0 4 к в ы т я ж к е д о б а в - .
л я ю т по к а п л я м 3 % -н ы й р а ст в о р п ер еки си в о д о р о д а до
исчезновения о к р а ск и , после чего п р и л и в а ю т 0,2 м л р а ­
бочего р а с т в о р а хлори стого о л о в а и 0,1 м л 2,5% -н ого
р а с т в о р а ги д р о су л ь ф и т а н атр и я .
11. В течение 20 м и н ,с о д е р ж и м о е к о л б о ч ек энергич-.
но в с т р я х и в а ю т в щ у т т е л ь -а п п а р а т е .
12. О б ъ е м с о д е р ж и м о г о д о в о д я т д о 15 м л, в с л у ч а е
необходим ости ф и л ь тр у ю т и и з м е р я ю т ф лю оресц енц ию .
113. О п р е д ел е н и е ф л ю о р есц ен ц и и испы туем ого р а с ­
т в о р а в этом с л у ч а е с о п р о в о ж д а ю т и зм е р е н и е м ф л ю о р е с ­
ценции р аб о ч его (с т а н д а р т н о го ) р а с т в о р а р и б о ф л а в и н а ,
при готовлен ного на р а с т в о р е тр и х л о р у к су сн о й кислоты .
Д л я этого в м ерную к о л б у на 100 м л в л и в а ю т 37,5 мл
2 0 % -ной тр и х л о р у к су сн о й ки сло ты , 24 м л 4 М р а с т в о р а
К г Н Р 0 4, 1 м л с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а р и б о ф л а в и н а и д о ­
в о д я т водой о б ъ ем с о д е р ж и м о го до 100 мл. Ф л ю о р е с ц е н ­
ция т а к о г о с т а н д а р т а на 8— 10% с л а б е е ф л ю о р есц ен ц и и
с т а н д а р т а , п ри гото влен н ого на воде.
14. З а т е м в обе кю веты п р и б а в л я ю т на кончике
с к а л ь п е л я по 0,1 г Ы аН С О з и Ы агЗгО ^ с о д е р ж и м о е хо­
рош о п е р е м е ш и в а ю т и вновь и з м е р я ю т ф лю оресц ен ц и ю .
184
П о сравнению с предыдущ им вариантом определе­
ния общего содерж ан и я рибоф лави на настоящ ий метод
отличается быстротой а н а л и за и получением более очи­
щенных вы тяж ек. Н едостаток его заклю чается в з а м е д ­
ленном гашении ф луоресц ен ц и и гидросульфитом н ат­
рия, вследствие чего гаш ение приходится проводить 2—
3 раза. Д л я этого в кюветы повторно вносят новые пор­
ции гидросульфита и изм еряю т флюоресценцию.
Следует отметить, что определять общ ее с о д е р ж а ­
ние рибоф лавина в большинстве тканей ж ивотны х и р а с ­
тительных продуктов, лиш енных пигментов, мож но без
их окисления перм анганатом к ал и я и восстановления
хлористым оловом.
С одерж ан и е рибоф лавина рассчиты ваю т по формуле:
!%.
Кл.
•..
(с —^1) 0,4 V - VI - .
,' ?
Х
(п-я,)в-У 2
где х — содерж ание рибоф лавина в исследуемом вещ е­
стве (мкг в 1 г или мг в 1 к г ); с — п оказан и я ш калы
флю орометра д л я испытуемого раствора до гашения
флюоресценции; С\ — наименьш ее показание
ш калы
флю орометра д л я испытуемого раствора после гашения
флюоресценции; 0,4 — содерж ание рибоф лавина в 1 мл
рабочего стандартного раствора (м к г); V — объем р а с ­
твора, в котором разведено исследуемое вещество (м л );
у , - _ объем раствора после окислительно-восстанови­
тельной реакции (15 м л );
— объем раствора, взятый
д ля окисления (м л ); п — п оказан и я ш калы флю оромет­
ра д л я стандартного раствора; Щ '•— показания ш калы
флю орометра д л я стандартного раствора после гашения
флюоресценций.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИБОФЛАВИНА В ЯЙЦЕ
Н едостаток рибоф лавина в рационе племенной пти­
цы приводит не только к снижению выводимости молод­
няка из-за повышенной смертности эмбрионов на вто­
рой-третьей неделе инкубации, но и к нарушению постэмбрионального развития молодняка. Отмечается, в ч а ­
стности, повыш енная смертность цы плят в результате
ослабленности их организма, а т а к ж е снижение темпов
их роста. Это связано с недостатком рибофлавина в пе­
чени суточного цыпленка из-за малого его содерж ания
в яйце. Р еш аю щ ее значение д л я развития цыпленка в
. 185
первую н еделю ж и зн и им ею т р е зе р в ы р и б о ф л а в и н а в его
о р га н и зм е в м ом ент в ы л у п л е н и я из я й ц а, а не с о д е р ж а ­
ние этого в и т а м и н а в корме. ,
Р и б о ф л а в и н н ах о д и тся в б е л к е и ж е л т к е я й ц а
(таб л . 2 4 ), причем его с о д е р ж а н и е з а в и с и т от в и д а п т и ­
цы, ее породны х особенностей, в о з р а с т а , у сло ви й к о р м ­
л е н и я и с о д е р ж а н и я , а т а к ж е от у р о в н я продукти вн ости.
-
Таблица
24
Содержание рибофлавина в полноценных яйцах птицы (мкг в 1 г
сырого вещества)
Содержится рибофлазига
Вид птицы
Куры, индейки
Утки, гуси
в желтке
4—5
6 -7
|1
в бел
оелке
2 —3
1—2
М етод о п р ед ел ен и я основан на ф л ю о р есц ен ц и и р а с ­
т в о р а р и б о ф л а в и н а в у л ь т р а ф и о л е т о в ы х л у ч а х , причем ее
интенсивность п р я м о п р о п о р ц и о н ал ь н а кон ц ен тр ац и и
этого в и там и н а. В яйце р и б о ф л а в и н н ах о д и тся в с в о б о д ­
ной ф орм е.
_
Р е а к т и в ы , приборы , посуда. С т а н д а р т н ы й р аств о р р и ­
б о ф л а в и н а * ; 9 6 % -н ы й эти ло вы й сп и р т без прим есей а л ь ­
деги дов, 5 5 % -н ы й этиловы й спи рт (го то в ят из 9 6 % - н о ­
г о ), д в у у г л е к и с л а я сода (Ы а Н С О з), ги д р о су л ь ф и т н а т ­
ри я ( N 828204 ); ф л ю о р о м етр с н аб о р о м пробирок, м е х а ­
н и ч еск ая к а ч а л к а , м ерн ы е ц и л и н д р ы с п р и тер ты м и п р о б ­
к а м и , м ерны е ц и л и н дры на 50 мл, колбы Э р л е н м е й ер а
на 250 м л, м ерны е колбы на 250 и 100 мл, с т е к л я н н ы е
п ал о ч к и , с т а к а н ч и к и с носиком на 50 мл, воронки.
О п р ед ел ен и е р и б о ф л а в и н а в ж е л т к е . 1. С р ед н ю ю п р о ­
бу ж ел то ч н о й м ассы т щ а т е л ь н о р а з м е ш и в а ю т , при м ерн о
10 г ее н а л и в а ю т в с т а к а н ч и к с носиком и в зв еш и в аю т.
2.
В цилиндр с п ритертой пробкой в л и в а ю т 50
5 5 % -ного э т а н о л а и тонкой струей из с т а к а н ч и к а прили-
*
10 мг растертого в Ступке рибофлавина растворяют в дист
лированной воде в мерной колбе на 250 мл (в 1 мл такого раство­
ра содержится 0,04 мг, или 40 мкр, рибофлавина). При хранения в
темноте на холоде раствор устойчив в течение месяца.
Перед анализом из основного раствора готовят рабочий раствор.
Д ля этого 1 мл основного стандартного раствора рибофлавина
вливают в мерную колбу на 100 мл и добавляют дистиллирован­
ную воду д о метки (в 1 мл рабочего раствора содержится 0,4 мкг
рибофлавина).
186
вают около 5 г ж елточной массы (последняя не д о л ж ­
на касаться стенок цилиндра. П р и быстром вливании
желточной массы образую тся сгустки, которые впослед­
ствии плохо р азб и в аю тся ).
3. С таканчик с остаткам и ж е л т к а взвеш иваю т и по
разности находят массу использованного образца.
4. Ц илиндр зак р ы ваю т пробкой и в течение 2 мин
встряхиваю т вручную*.
5. Ц илиндры (или колбы) етав ят в механическую к а ­
чалку и встряхиваю т в течение 2 ч, после чего со д ер ж и ­
мое отфильтровываю т через сухой бум аж ны й фильтр.
6. В ы тяж к у р азв о д ят в 2 р а з а и изм еряю т интенсив­
ность ее флюоресценции на флю орометре (по инструк­
ции, п р и л а г а е м о й ' к прибору). Одновременно измеряю т
интенсивность флюоресценции стандартного раствора.
7. В обе пробирки (со стандартны м и испытуемым
растворами) прибавляю т на кончике ш пателя примерно
по 0,1 г Ы а Н С 0 3 и Ыа25 20 4 и вновь измеряю т флю орес­
ценцию. П ри этом в стандартном растворе флю оресцен­
ция рибоф лавина гасится до нуля. В исследуемых вы ­
т я ж к а х остается небольш ая флюоресценция, обуслов­
ленная посторонними флюоресцирующими веществами.
Гасить флюоресценцию рекомендуется д в а ж д ы , так к ак
иногда она протекает медленно. Д л я этого к пробам
повторно д о б ав л яю т гидросульфит натри я и соду и вновь
измеряю т флюоресценцию раствора.
С одерж ан и е рибоф лавина в исследуемой желточной
массе вычисляю т по формуле:
%
• /
( А - В ) - 0,4К
С-а
где х — содерж ание рибоф лавина в 1 г ж е л т к а (м кг);
А — п оказан и я флю орометра д ля испытуемого раствора
(первый отсчет); В — показани я флю оромётра для ис­
пытуемого раствора после гаш ения флюоресценции (вто­
рой-отсчет); С — п оказан и я ф лю орометра д ля с та н д а р т ­
ного раствора, содерж ащ его в 1 мл 0,4 мкг рибофлавина
*
При отсутствии цилиндров с притертыми пробками желточную
массу можно Уместить в конические колбы. Для этого на химико­
технических весах взвешивают конические колбы на 250 мл. Вливая
яичную массу, надо следить, чтобы она не попала на горло и стен­
ки колбы. Затем в колбу очень маленькими порциями при постоян­
ном помешивании палочкой добавляют 50 мл 5о /о-ного этанола,
после чего колбу закрывают пробкой.
187
(у с т а н а в л и в а ю т ч а щ е на вели чи н у 60 или 8 0 ); 0 ,4 —
с о д е р ж а н и е р и б о ф л а в и н а в 1 мл с т а н д а р т н о го р а с т в о р а
( м к г ) ; V — о б ъ ем в ы т я ж к и с учетом р а зв е д е н и я ( м л ) ;
а — м а с с а ж е л т к а (г ).
Объем вытяжки с учетом разведения рассчитывают следующим
образом: в 5 г желтка, взятых на анализ, содержится 2,5 г воды
(содержание влаги в желтке составляет 50% ). С учетом 50 мл эти­
лового спирта объем жидкости составляет 52,5 мл. Так как перед
измерением интенсивности флюоресценции фильтрат был разведен в
2 раза, то объем вытяжки составит 105 мл (52,5*2).
П р и м е р . Показание флюорометра для испытуемого раствора
(первый отсч ет)— 32, после гашения (второй отсчет) — 1,8; показа­
ние флюорометра для стандартного раствора — 00; масса желтка
Отсюда
(3 2 —1,8)-0,4-105.8
* = - . --------------------------- = 4 ,2 2 8 мкг, т. е. в 1 г желтка
60-5
.
'
. .
содержится 4,228 мкг рибофлавина.
Определение рибофлавина в белке. 1. Т щ а т е л ь н о раз­
м е ш а в средню ю пробу б е л к а , о т в е ш и в а ю т его в цилиндр
с притертой пробкой около 10 г. Д л я этого с т а к а н ч и к с
б елко во й массой в зв еш и в аю т, за т е м ч асть б е л к а п е р е л и ­
в а ю т в цилиндр и с т а к а н ч и к в з в е ш и в а ю т повторно, по
р а зн и ц е д вух в зв еш и в ан и й н а х о д я т м ассу в зято го д л я
а н а л и з а б е л к а (в а ж н о , чтобы не о б р а з о в а л а с ь п е н а ).
2. В б ел ко ву ю м ассу м а л е н ь к и м и п о р ц и ям и при т щ а ­
тельн ом п ер ем еш и ван и и д о б а в л я ю т 50 мл 9 6 % -ного э т а ­
нола.
3. Ц и л и н д р з а к р ы в а ю т пробкой, с о д е р ж и м о е э н е р ­
гично в с т р я х и в а ю т и о с т а в л я ю т на н еско л ько м инут в
покое. П о с л е этого з а п и с ы в а ю т изм ененны й о б ъ ем с о ­
д е р ж и м о г о ц и л и н д р а.
4. В ц и ли н др о п у с к аю т 8— 10 стек л я н н ы х бусинок,
з а к р ы в а ю т его пробкой и в с т р я х и в а ю т в м еханической
к а ч а л к е в течение 2 ч.
5. С о д е р ж и м о е ц и л и н д р а ф и л ь т р у ю т через сухой
ф и л ьтр и р а с с ч и т ы в а ю т общ и й о б ъ ем ф и л ь т р а т а .
П р и м е р . На анализ взято 13,1 г белка. Воды в нем содер­
жится 11,4 мл (в среднем 87% ). Добавлено в белок 50 мл этанола,
в связи с этим объем фильтрата должен составить 61,4 мл. Однако
после добавления этанола он уменьшился на 1,3 мл, т. е. оконча­
тельный общий его объем равен 60,1 мл. Эту величину вставляют в
расчетную формулу. Дальнейший ход определения и расчет содер­
жания рибофлавина в белке аналогичны исследованию и расчету его
содержания в желтке.
188
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИБОФЛАВИНА В МОЛОКЕ
Сийтез рибоф лави на в п р ед ж ел у д к ах ж вач н ы х зависит во многом от состава рациона.
^ ‘\
В частности, при с^рмливании животным сена, особенно лю­
цернового, а также кукурузного силоса, кормовой свеклы и карто­
феля отмечается повышение его биосинтеза.
В зависимости от породных особенностей, периода лактации, се­
зона года содержание рибофлавина в молоке коров колеблется, по
данным В. С. Смородина, от 139 ± 3 ,5 до 2 3 9 ± 4 ,4 мкг %.
В коровьем молоке рибоф лавин находится в основ­
ном в свободном состоянии (только около 10% в с в я за н ­
ном).
Реактивы, посуда, оборудование. Концентрированная
серная кислота, ферментные препараты «Оризин-П К*
или «А вам арин-П П К », 2,5 М раствор уксуснокислого
натрий, толуол, гидросульфит натрия, двууглекислый
натрий, стандартны й раствор рибоф лавина; флю орометр,
мерные колбы на 100 мл с обратны м холодильником,
цилиндр на 100 мл, водяная баня, термостат, колбы, во­
ронки.
Ц?
Ход определения. 1. В мерную колбу на 100 ^мл вли­
вают 80 мл молока и концентрированной серной кислотой доводят рН его до 4,0— 4,5 (требуется около 0,2 м л ).
2. С одерж им ое гидролизую т в той ж е колбе с о б р а т ­
ным холодильником на кипящей водяной бане в течение
45 мин.
3. Гидролизат о х л а ж д а ю т до 30—40 С и вносят в
него 300 мг ферментного п р еп ар ата «О ризин-П К » или
«А вам арин-П П К » (из расчета 30 мг на 1 г сухого вещ е­
ства м о л о к а), растворенного в 2,5 М растворе уксусно­
кислого натрия, чем доводят рН содерж имого до 5 5,5.
4. П рибавив в колбу 1 мл толуола, ее ставят на 12— ,
15 ч в терм остат и вы держ иваю т там при температуре
3 7 _ 4 0 °С для ферментативного гидролиза.
5. П осле этого гидролизат доводят дистиллированной
водой до 100 мл и фильтруют.
6. В пробирку берут от 2 до 4 мл ф и л ьтр ата и дово­
дят дистиллированной водой объем содержимого до
10 мл; флюоресценцию исследуемого раствора измеряю т
после его перемеш ивания. _
7. Д л я внесения поправки на посторонние флю оресци­
рующие вещ ества флюоресценцию рибоф лавина в испы­
туемых растворах после ее измерения гасят 0,2 г смеси
V-
•
189
ги д р о су л ь ф и та н а т р и я и соды (1 : 2 ) , п осле чего вновь
о тсч и ты в аю т п о к а з а н и я ф л ю о р о м е т р а . О п р е д е л я ю т ф л ю ­
оресценцию с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а , в 1 м л которого с о ­
д е р ж и т с я 0,4 м кг р и б о ф л а в и н а . С о д е р ж а н и е р и б о ф л а в и ­
на р а с с ч и т ы в а ю т по ф о р м у л е:
(А-В)е-У-Ж -№О
(с—С|) •а - л
’
где х — с о д е р ж а н и е р и б о ф л а в и н а ( м к г % ) ; А*— п о к а з а ­
ния п р и б о р а д л я испы туем ого р а с т в о р а (2 4 ); В — п о к а ­
за н и е п р и б о р а д л я и сследуем ого р а с т в о р а п осле его
гаш ен и я (8 ); с — п о к а з а н и е п р и б о р а д л я с т а н д а р т н о г о
р а с т в о р а (2 7 ); С\ — п о к а з а н и е п р и б о р а д л я с т а н д а р т н о ­
го р а с т в о р а п осле его г а ш е н и я ( 2 ) ; е — с о д е р ж а н и е р и ­
б о ф л а в и н а в 1 м л с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а (0,4 м к г ) ; а —
м а сса м о л о к а (80 г ) ; V — о б ъ е м г и д р о л и з а т а после
р а з б а в л е н и я водой (100 м л ) ; л — количество р а с т в о р а ,
в зя т о го д л я а н а л и з а ( 2 ) ; Ж — конечны й о б ъ е м р а с т в о р а ,
взятого д л я о п р е д е л е н и я ф лю о ресц ен ц и и (10 м л ).
Пример
скобках)
вычисления
(согласно данным, приведенным в
‘ « ,
_ (24- 8).0.«.100.10-100 _ |и,
(27—2 )-8 0 -2
Следовательно, в 1 кг молока
содержится
160 мкг
рибофлавина.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА, КАЛЬЦИЯ
И НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
щ
РЕФРАКТОМЕТРИЧЕСКИЙ М ЕТО Д О П РЕД ЕЛ ЕН И Я
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
БЕЛКА
О п р ед ел ен и е с о д е р ж а н и я б е л к а и б ел к о в ы х ф р а к ц и й
в сы во ро тке крови п р и о б р е т ае т все б о л ь ш е е зн а ч е н и е
при о ц ен ке состоян и я о б м ен а вещ еств у с е л ь с к о х о з я й с т ­
венны х ж и в о тн ы х . П о к а з а т е л и эти могут б ы ть и с п о л ь ­
зо в ан ы и д л я оценки полноценности их ко р м л ен и я.
В основе р е ф р а к т о м е т р и и л е ж и т свойство р а зл и ч н ы х
ср ед п о-разн о м у п р е л о м л я т ь п р о х о д я щ и е ч ер ез них л у ­
чи света. П е р е х о д я из одной сред ы в другую , л у ч света
м ен яет свое н а п р а в л е н и е — п р е л о м л я е т с я . О тн ош ен и е
синуса у г л а п а д ен и я к синусу у г л а п р е л о м л е н и я ( р е ф р а к ­
ция) носит н а з в а н и е п о к а з а т е л я п р е л о м л е н и я ( к о э ф ф и ­
ц и ен та п р е л о м л е н и я ). В ел и чи н а р е ф р а к ц и и р а с т в о р а
190
зависит от количества, величины, физического состоя­
ния растворенных в нем частиц и температуры внешней
среды.
: 4
I
Величина рефракции света в сыворотке крови з а в и ­
сит главным образом от содерж ан и я белков. М и н ер ал ь­
ные вещества и друх^-е составные части сыворотки кро­
ви практически не влияют на коэффициент ее р е ф р а к ­
ции. Д л я определения п о к азател я преломления света ис­
пользуют специальные приборы — рефрактометры.
Универсальный лабораторны й реф рактом етр состоит
из чугунного основания, станины, камеры прибора, сос­
тоящей из нижней и верхней половинок, и установлен­
ных в них осветительной и измерительной призм. Д л я
поддерж ания определенной температуры в половинках
камеры имеются полости, через которые с помощью ре­
зиновых ш лангов пропускают воду*. Температуру* к а ­
меры поддерж иваю т на уровне 17,5°С. И зм еряю т ее тер ­
мометром, укрепленным на штуцере. Н а кронштейне
прибора установлена зр и тел ьн ая труба, неподвижно сое­
диненная со ш калой коэффициентов преломления. В мес­
те со зрительной трубой кам ера с помощью рычага мо­
ж ет в р а щ а т ь с я вокруг оси. Аналогичен описанному прин­
цип работы на реф рактом етре И РФ -22 (рис. 13).
П еред началом работы прибор необходимо проверить
и установить на нуль. Д л я
этого приподнимают верх­
нюю половину камеры и на
призму наносят ' несколько
кап ель
дистиллированной
воды, кам еру закр ы ваю т и
устанавли ваю т на резкость
окуляр ш калы и окуляр зр и ­
тельной трубы. З е р к а л о ус­
тан авл и ваю т так, чтобы свет
от источника через окно пос­
тупал в осветительную при з­
му и равномерно освещ ал
поле зрения. Рукояткой устокраняю т 'Щспектральную
ЩШШ
13.
Рефрактометр
светотени.
Рис.
раску
границ
ИРФ-22.
У казательную линию окулячерез
*
В зависимости от температуры окружающей среды
шланги пропускают теплую или холодную воду.
191
р а ш к а л ы у с т а н а в л и в а ю т на д ел ен и и 1,3332 и с м о т р я т в
зр и т ел ь н у ю трубу. Е сли г р а н и ц а светотени п ро хо ди т
через центр пересечен ия линий, то прибор у с т а н о в л ен на
нуль. Е сл и этого нет, то при пом ощ и к л ю ч а н ео б хо ди м о
в р а щ а т ь винт в зр и тел ьн о й тр у б е до тех пор, п о к а г р а ­
ни ц а светотени не о к а ж е т с я в центре п ересечен и я линии.
П р и п ро см отр е б о л ьш о го к о л и ч ества п роб у с т а н о в к у
п р и б о р а на н уль п р о в е р я ю т н еск о л ьк о раз.
О п р ед ел е н и е о б щ его б е л к а сы воротки крови. П о с л е
у стан о в к и п р и б о р а на н уль верхню ю п олови н у к а м е р ы
п р и п о д н и м а ю т и п ри зм ы в ы т и р а ю т д о су х а неворсистои
с а л ф е т к о й . З а т е м на поверхность п р и зм ы н а н о с я т 1
■2 к а п л и сы воротки крови и бы стро з а к р ы в а ю т к а м е р у .
В р ащ ая рукоятку прибора и наблю дая в окуляр зри­
тел ьн о й тр у б ы , н а х о д я т гр а н и ц у светотени; ее о к р а ш е н ­
ность у стр ан я ю т. З а т е м р у к о я тк о й точно с о в м е щ а ю т г р а ­
ницу светотени с точкой пересечения д в у х линий. С м о т ­
р я т в о к у л я р ш к а л ы и о тсч и ты в аю т к о эф ф и ц и е н т п р е ­
л о м л е н и я р а с т в о р а . П о к а з а н и я з а п и с ы в а ю т и по ш к а л е
Р е й с с а (т а б л . 25) н а х о д я т с о д е р ж а н и е б е л к а в с ы в о р о т ­
ке крови.
.
...,
•
Например, коэффициент рефракции сыворотки равен 1,3499. Это
соответствует содержанию в ней 8,12% белка.
П о с л е к а ж д о г о о п р е д ел ен и я обе п р и зм ы т щ а т е л ь н о
п р о т и р а ю т в н а ч а л е с а л ф е т к о й , см оченной д и сти л л и р р ван ной водой, а з а т е м сухой м ягкой тряп очкой.
‘
Таблица
25
Данные для пересчета показаний рефрактометра РЛ У
на содержание белка в сыворотке крови (по Рейссу)
Показатель
преломления
1.3420
1.3421
1.3422
1.3423
1.3424
1.3425
1.3 4 2 6
1 I3427
1.3428
1.3429
1.3430
192
Содержание
белка в сыворот
ке крови (К )
3 ,5 0
3 ,5 6
3 ,6 2
3 ,6 7
3 ,7 2
3 ,8 0
3 ,8 7
3 ,9 4
3 ,9 9
4 ,0 5
4 ,1 0
Показатель
преломления
1.3431
1.3432
1.3433
1.3 4 3 4
1.3435
1.3436
1.3437
1.3438
1.3439
1.3440
1.3441
Содержание
белка в сыворот
ке крови Й Ц
4 ,1 6
4,21
4 ,2 7
'4 ,3 2
4 ,3 8
4 ,4 3
4 ,4 9
4 ,5 4
4 ,6 0
4 ,6 6
4,71
Продолжение
Ль
Показатель
преломления
1,3442
1.3443
1,3444
1,3445
1,3446
1.3447
1,3448'
1,3449
1,3450
1,3451
1,3452
1.3453
1,3454
1.3455
1,3456
1.3457
1,3458
1.3459
1,3460
},3461
1,3462
1.3463
1.3464
1,3465
1,3466
1,3467
1,3468
1.3469
1.3470
1.3471
1,3472
1.3473
1,3474
1.3475
113476
1,3477
},3478
1,3479
1,3480
1,3481
1,3482
1,3483
},34x4
1-3485
1,3486
1 3487
1,3488
13 Здказ 7445
Содержание
белка в сыворот­
ке крови (%)
Показатель
преломления
Ч>76
4,81
4,89
4,96
5,03
5.09
5,15
5,20
5,25
5,30
5,36
5,41
5,47
5,54
5,61
- 5,63
5,73
5,79
5,85
5,90
5,96
6,01
6,07
6,12
6,17
6,23
6.28
6,34
6,41
6,48
6,55
6,60
6,66
6,71
6,77
6,82
6,88
6,93
6,98
7,03
7,09
♦ 7,14
7.20
7,27
7,35
7,42
7,48
1,3489
1,3490
1,3491
1,3492
1,3493
1.3494
1,3495
1,3496
1,3497
1,3498
1,3499
1,3500
1,3501
1 1,3502
1,3503
1,3504
1,3505
1.3506
1,3507
1,3508
1,3509
1,3510 1,3511
1,3512
1,3513
1.3514
1,3515
1,3516
1,3517
1.3518
1,3519
1,3520
1,3521
1,3522
1,3523
1,3524
1,3525
1,3526
1,3527
1,3528
1,3529
1,3530
1,3531
1,3532
1,3533
1,3534
1,3835
Содержание
белка в сыворот­
ке крови (%)
в
I1
,
7,53
7,58
7,63
7,68
7,73
7,79
7,85
7,92
7,99
8,06
8,12
8,17
8,23
8,28
8,33
8,38
8,44
8,49
8,56
8,63
8,71
8,76
8,81
8,86
8,92
8,97
9.03
9,08
9,14
9,21
9,28
9,35
9,40
9,46
9,51
9,57
9,63
9,68
9.73
9.78
9,84
9 ,8 9
9 ,9 4
9 ,9 9
Ю, 06
10 13
10.20
113
Продолжение
Содержание
белка в сыворот­
ке крови (% )
П оказатель
преломления
10.25
10,31
10,36
10,41
10,47
10,54
10,60
10,65
10,70
10,75
10,81
10,86
10,91
10,96
11,00
11,07
11,14
11,21
11.26
11,31
11,36
11,40
11,47
1.3536
1.3537
1.3538
1.3539
1.3540
1.3541
1.3542
1.3543
1.3544
1.3545
1.3546
1.3547
1.3548
113549
1.3550
1.3551
1.3552
1.3553
1.3554
1.3555
1.3556
1.3557
1.3558
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание
белка в сыворот­
ке крови (% )
Показатель
преломления
11,54
11,60
11,65
11,70
11,75
11,80
11,87
11,94
12,02
12,10
12,17
12,24
12,30
12,35
12,40
12,45
12,50
12,57
12,64
12,70
12,80
12,90
13,00
1.3559
1.3560
1.3561
1.3562
1.3563
1.3564
1.3565
1.3566
1.3567
1.3568
1.3569
1.3570
1.3571
1.3572
1.3573
1.3574
1.3575
1.3576
113577
1.3578
1.3579
1.3580
1.3581
БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ
ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ*
Экспресс-метод основан на свойстве фосфатных ра­
створов различной концентрации осаждать белки. В е­
личину оптической плотности растворов с определенны­
ми белковыми фракциями устанавливают на фотоэлектроколориметре.
„ ,
.
„ __
Р е а к т и в ы , посуда, приборы . Основной фосфатный рафосфатных
раствора
створ**
1
1 По О
—
_
__ _ _ . . . т
V
л т Г %
л
л
л
т
9*
и Маккорду, в модификации С. А. Карпюка.
** 226 8 г КНгРО* смешивают до полного растворения с 400 мл
раствора, содержащ его 33,5 г ЫаОН, жидкость охлаж даю т до ком­
натной температуры и доводят ее объем дистиллированнои водой до
500 мл (или до массы 667,5 г).
____
*** Первый из четырех разведенных фосфатных растворов го­
товят из 92,6 мл (или 123,5 г) основного фосфатного раствора (вли­
вают в мерную колбу на 100 мл и добавляют до метки дистиллиро194
лл
однозамещенный фосфорнокислый калий, едкий натр;
бюретка, пипетки, пробирки с приш лифованными проб­
ками, мерные колбы, фотоэлектроколориметр.
Ход определения. 1. В ш татив у стан авли ваю т шесть
пробирок вместимостью по 10— 15 мл и нумеруют их
цифрами 0, 1, 2, 3, 4, 5.
2. В нулевую пробирку отмериваю т 10 мл Дистилли­
рованной воды, в пробирки № 1, 2, 3 и 4 — по 5 мл соот­
ветствующих разведенны х фосфатных растворов (р а с­
творы № 1, 2, 3, 4 ), а в пробирку № 5— 0,5 мл сы ворот­
ки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл ос­
новного фосфатного раствора.
3. С одерж им ое пробирки № 5 перемешивают, затем
из нее в пробирки № 1, 2, 3 и 4 переносят по 0,5 мл, а в
нулевую пробирку — 1 мл смеси.
4. С одерж им ое каж дой пробирки тщ ательно перем е­
шивают, избегая об разо ван и я пузырьков воздуха.
5. Через 15 мин на фотоэлектроколориметре опреде­
ляю т оптическую плотность растворов в пробирках 1—
4 при красном светофильтре и кюветах шириной 10 мм.
В качестве контроля используют раствор в нулевой про­
бирке.
6. П осле измерения оптической плотности содерж и ­
мого пробирок № 1, 2, 3, 4 проводят расчету. Из п о к а за ­
ний оптической плотности раствора в пробирке № 1 вы ­
читают п о к азател ь оптической плотности раствора в
пробирке № 2. Р азн ость будет равна оптической плотно­
сти альбуминов. И з оптической плотности содерж им о­
го пробирки № 2 вычитают оптическую плотность содер­
ж имого пробирки № 3. Р азн ость покаж ет величину опти­
ческой плотности а-глобудинов. И з оптической плотности
раствора в пробирке № 3 вычитают оптическую п л о т­
ность раствора в пробирке № 4. Р азн ость будет служ ить
показателем оптической плотности (3-глобулинов. О пти­
ческая плотность содерж имого пробирки № 4 будет р а в ­
на оптической плотности ^-глобулинов. З а т е м все п о к а­
затели разности оптической плотности растворов в про­
бирках № 1—4 суммируют и, приняв сумму оптических
ванную воду), второй, третий и четвертый — соответственно из
75,0 мл (100 г), 58,8 мл (78,5 г) и 48,7 ил (65 г) основного фосфат­
ного раствора. После добавления воды растворы тщательно пере­
мешивают. При хранении разведенных растворов в них добавляют
(в расчете на 100 мл) по одной капле хлороформа, чтобы преду­
предить бактериальное загрязнение.
13*
С
НМ1
V
плотностей з а 100% , в ы ч и с л я ю т с о д е р ж а н и е к а ж д о й
б ел к о в о й ф р а к ц и и в о тн о си тел ьн ы х п р о ц ен тах .
С о д е р ж а н и е о тд ел ьн о й ф р а к ц и и р а с с ч и т ы в а ю т »
гр а м м -п р о ц е н т а х . Д л я это го с о д е р ж а и и е о б щ е г о б е л к а
о п о е д е л я ю т р е ф р а к т о м е т р и ч е с к и м способом . П р и н и м а я
о б щ м коли чество б е л к а з а 100%. . и . з н а я ^ =
ж а„ие
к а ж д о й б ел к о в о й ф р а к ц и и з
а
б
с
о
л
ю
т
н
ы
х
п
р
о
ц
ен
тах.
проводят расчет ф ракций в
\
/
Л
^
X
|
1
4
т
ш ш *
•
—
■ -
■
—
—
-----------------
г
Таблица
26
Пример расчета белковых фракций в сыворотке крови коров
Фракции белка
Альбумины
а-глобулины
Р-глобулины
■у-глобулины
Сумма
Содержа*
п _и_ *
I вне обОпти­ Р азкость
Номер ческая _оптиче­
сительАбс0‘
шего
<
*
л
_
лютный ка в СЬ1
пробир­ плот­
ской
плотности ПроцеВт|проаент| воротке
ки
ность
(К)
1
2
3
4
0 ,6 8 5
0,321
0 ,2 7 2
0 ,1 9 0
0 ,6 8 5
0,3 6 4
0 ,0 4 9
0 ,0 8 2
0 ,1 9 0
5 3 ,1 4
7 ,1 5
11,97
2 7 ,7 4
4 ,6 5
0 ,6 3
1 ,0 5
2 ,4 3
8 ,7 6
Э к сп р есс-м ето д о п р е д е л е н и я б е л к о в ы х ф р а к ц и й в п о л ­
не п р и е м л ем д л я о ц ен ки и зм ен ен и я б е л к о в о го о б м е н а в
за в и си м о с ти от у сло ви й к о р м л е н и я .
О П РЕ Д Е Л Е Н И Е КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
(ПО Д Е ВААРДУ)
Н аиболее распространен метод осаж дения кальция
из сы воротки к р о ви в в и д е его щ а в е л е в о к и с л о й соли.
З а т е м щ а в е л е в о к и с л ы й к а л ь ц и й р а с т в о р я ю т в серн ой
к и с л о т е ,'п р и этом о б р а з у е т с я сер н о к и сл ы й к а л ь ц и и и
о с в о б о ж д а е т с я , э к в и в а л е н т н о е к о л и ч еств о щ а в е л е в о й
кислоты . П о с л е д н ю ю о п р е д е л я ю т т и т р о в а н и е м сан ти н о р мальным раствором марганцевокислого кали я и узнаю т
к о л и ч ество м и л л и г р а м м о в к а л ь ц и я .
Р е а к т и в ы , посуда, п ри б оры . Н а с ы щ е н н ы й р а с т в о р
КМп04,
щ а в е л е в о к и с л о г о а м м о н и я , 0,01 н. р а с т в о р
0 01 н. р а с т в о р щ а в е л е в о й ки сл о ты ( д л я п р о в е р к и т и т р а
п е р м а н г а н а т а ) , 5 0 % -н ы й
раствор
серн ой к и сл о ты ,
т
______ ______ .т о 'ЗППП л ^ / н и и
центрифуга
2 мл, микробюц е н т р и ф у ж н ы е проб!
ретка, в о д я н а я б ан я .
196
*
* 'М
1
Ход определения. 1. Н а л и в а ю т из бюретки в центри­
фуж ную пробирку 2 Мл дистиллированной воды.
2. Туда ж е пйпеткои вливаю т 1 мл прозрачной сыво- '
ротки; содерж им ое перемеш ивают, у д а р я я пальцем по
ниж нему концу пробирки.
3. Из пипетки в пробирку вливаю т 0,5 мл насы щ ен­
ного раствора щ авелевокислого аммония, содерж имое
перемеш иваю т и д ля полного осаж ден ия кальц и я д а й т
постоять 15 мин (при частом перем еш ивании).
| 4. З а т е м пробирки помещ аю т в центрифугу и цент­
рифугируют в течение 10— 15 мин.
5! Вынув пробирки из центрифуги, раствор о стор ож ­
но сливаю т, а край пробирки вы тираю т фильтровальной
бумагой. О садок кальц и я виден на дне пробирки.
6.
К нему из бюретки приливаю т 4 мл дистиллиро­
ванной воды или 4 мл 2 % - н о г а раствора а м м и а к а и со­
держ им ое снова центрифугируют в течение 10— 15 мин.
1 7. Вынув из центрифуги пробирки, ж идкость с л и в а ­
ют, край пробирок вы тираю т ф ильтровальной бумагой
и, прилив в пробирки по 4 мл дистиллированной воды
или 4 мл 2% -ного раствора ам м и ак а, содерж им ое снова
центрифугируют. А м м иак приливаю т д л я удаления щ а ­
велевокислых соединений, образую щ ихся над осадком
кальция. П ри недостаточно тщ ательном отмывании о с а д ­
ка получают завыш енный результат.
8. П ромы в осадок и вылив ам м иак, к осадку щ а в е ­
левокислого кальция приливаю т 1— 2 мл 50% -ной с ер ­
ной кислоты, осадок разм еш и ваю т стеклянной палочкой
и ставят пробирку на 2 ~ 3 мин на кипящ ую водяную
баню.
9. Горячий раствор титрую т 0,01 н. раствором
К М п 0 4 до появления бледно-розового окраш ивания, не
исчезающего в течение 30 с — 1 мин.
10. Одновременно е определением кальц и я в иссле­
дуемой сыворотке ставят т а к назы ваемы й «холостой»
опыт, т. е. определяю т содерж ание кальц и я в реактивах
и дистиллированной воде. Д л я этого в центрифуж ную
пробирку нали ваю т 3 мл дистиллированной воды, 0,5 мл
щ авелевокислого аммония, содерж им ое перемешивают,
ч е р е з . 15 мнн центрифугируют, д в а ж д ы промы ваю т а м ­
миаком, т. е. поступают т а к ж е, к а к с исследуемой сыво­
роткой.
Количество марганцевокислого кали я, и зрасходован­
ного на титрование содерж имого пробирки в «холостом»
"■ ^1!
******** - :
В
197
опыте в ы ч и т а ю т из его к о л и ч еств а, и зр а с х о д о в а н н о го
на ти тр о в ан и е испы туем ой пробы (1 м л 0,01 н. р а с т в о р а
КМпС >4 соответствует 0,2 м г к а л ь ц и я ) .
П р и м е р в ы ч и с л е н и я к а л ь ц и я . На титрование сыворотки И И 1 , 9 1 0,01 н. раствора КМпО., »а « Ж г а Ж Щ ;
жимого пробирки в « х о л о с т о м » опыте — 0,28 мл. Отсюда содерж а
ние кальция равно ( 0 ,9 - 0 ,2 8 ) .0 ,2 .1 0 0 = 1 2 ,4 мг%.
С о д е р ж а н и е к а л ь ц и я в с ы в о р о тк е к р о в и с н и ж а е т с я
н и ж е норм при н е с б а л а н с и р о в а н н о с т и р а ц и о н о в ж и в о т ­
ных по к а л ь ц и ю , н еп р а в и л ь н о м его соотнош ении с ф о с ­
ф ором , при н ед о статк е в и т а м и н а Р , р е гу л и р у ю щ е го ;ус­
воение й вы д ел ен и е из о р г а н и з м а м и н е р а л ь н ы х вещ еств.
П р и з н а к и н а р у ш е н и я м и н е р а л ь н о го о б м ен а и сн и ж ен и е
—
—
-------~
сы
в
о
р
о
тк
е
крови
о
т
м
е
ч
а
ю
т
с
я
к о н ц ен тр ац и и к а л ь ц и я -------- д
ч ас то при н еп р ав и л ь н о й с т р у к т у р е р а ц и о н о в , йог д а усв<>
ение о р га н и зм о м всех п и т а т е л ь н ы х вещ еств, в том чи сле
МИ С н и ж ен и е Щ Ш Ш
к а л ь ц и я в с ы в о р о тк е крови
менее чем д о 10 м г% - н а ч а л ь н ы й п р и з н а к н а р у ш е н и я
м и н ер ал ь н о го о б м ен а. П р и 8,5 ш % к а л ь ц и я и ,.и ж е о т ­
м еч аю тся часто ясно в ы р а ж е н н ы е к л и н и ч ески е п р и зн а
ки м и н ер а л ь н о -в и та м и н н о й н едостаточности.
О П Р Е Д Е Л Е Н И Е НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ПО Р. Я. Ю ДЕЛ ЕВИ Ч У )
М ето д о сн о вы вается н а свойстве н ео рган и ческого
ф о с ф о р а к р о ви (сы воротки к р о в и ) об Ра а ° в ы в а ^
ли бден овой к и с л о т о й п осле
н о м о л и б д ен ову ю кислоту, к о т о р а я в о с с т а н а в л и в а е т е
м ол и б д ен о ву ю синь гидрохиноном н Д .р п е н Г Г з м е н е н и я
р а ств о р о м . С р а в н и в а я в к о л о р и м е т р е степень и зм ен ен и я
интенсивности о к р а с к и испы туем ого р а с т в о р а по с р а в
нению со с т а н д а р т н ы м р а ств о р о м , н а х о д я т с°Де Р * ание
--------100 м л сы во р о тки крови.
^ » Г п о с Фу0ДаФОп р ^ о р ы , 2 0 %-иы'й р а с т в о р триг' П/
«г /ч т т п /л п Р Я И Н Н В ш Н Н
х л о р у к су сн о в ки слоты , 5 % -н ы й м оли бд ен овы й р аств о р
Г% ный раствор ги д р о х и н о н а, к 100 м л к о то р о го нрн*
25 г молибденовокислого аммония растворяют примерно
300 мл дистиллированной
другой колбе к 125 мл дистиллированнои воды приливают 75 мл
концентрированной серной кислоты. Второй раствор| соединяют с
первым и после охлаждения доводят дистиллированнои водой объем
ДО 500 МЛ..
Г'
•
198
€
бавлена одна к ап л я концентрированной серной кисло­
ты*, содово-сернистый раствор**, основной с т ан д а р т­
ный раствор***, бюретки, градуированны е пробирки на
6 и 10 мл, градуированны е пипетки на 1, 2 и 5 мл, цент­
рифуж ны е (или обычные) пробирки, центрифуга, элект­
рофотоколориметр.
Ход определения. 1. И з бюретки в две центрифуж ные
пробирки н али ваю т по 3 мл дистиллированной воды.
2. Сюда ж е приливаю т из пипетки по 1 мл сы ворот­
ки крови и по 1 мл трихлоруксусной кислоты.
3. С одерж им ое тщ ательно перемеш иваю т стеклянной
палочкой. П роисходит осаж дение белков.
Т а б л и ц а 27
Последовательность использования реактивов при постановке
цветной реакции
Реактивы
В пробирки на 6 мл* с делениями
берут:
прозрачный центрифугат
(фильтрат)
стандартный раствор фосфора
трихлоруксусную кислоту
дистиллированную воду
молибденовокислый
аммоний
(содержимое
пробирки
встряхивают)
«
гидрохинон
содово-сернистый раствор
Испытуемая
проба
1,5 мл
---
Д о 3 мл
0,5 мл
РабЬчий стан­
дартный раствор
фосфора.
—
1 мл; 1,5 мл;
2 мл; 2,5 мл
0,5 мл
Д о 3 мл
0,5 мл
0,5 мл
0,5 мл
Содержимое пробирок встряхи­
вают, появляется синее окра-]
шнвание. Пробирки оставляют
на 10 мин
мл
1 яГл
Г1П"
1
'
П р и м е ч а н и е . Рабочий стандартный раствор готовят в случае, если
используют колориметр Дюбоско.
*
Свежий раствор должен быть почти бесцветным. При хра­
нении становится коричневым и тогда к употреблению непригоден.
** 25 мл 15%-ного раствора сернистокислого натрия соеди­
няют со 100 мл 20%-ного раствора углекислого натрия (сухая без­
водная соль). Перед употреблением раствор фильтруют. Готовят его
из-за нестойкости в небольшом количестве непосредственно перед
анализами. Растворы сернистокислого и углекислого натрия готовят
отдельно из сухих безводных солей и смешивают перед работой.
*** 4,394 г химически чистого однозамещенного фосфорнокис­
лого калия, предварительно высушенного в эксикаторе над серной
I.199
4. Ч е р е з 5 мин с о д е р ж и м о е п р о б и р о к ц ен тр и ф у ги р у
течение тар—Й1 И И ****« ф и л ь т р у ю т .
гот1вв ЧМММРФВ
5 В д в у х п р о б и р к а х с т а в я т о д н о в р е м ен н о цветную
о. о д в у л чу’
У _ ___ — „ „ „ б е р у т п р о зр а ч н ы й
р еакц и ю . П р и этом в одн у из них
—
р
аб
о
ч
и
й
ц е н т р и ф у г а т (и с п ы т у е м а я п р о б а ) , в д р у гу ю
стандартный раствор фосфора. П оследовательность и п о л ь зо в а н и я р е а к т и в о в и их коли чество п р и в о д я т с я в
т а б л и ц е 27. п о стан о1вш
• к и цветной р е а к ц и и содово-сернис1
•
•ки
р^м п р и л и п ан и и содово-сернистого р а с т в о р а и неосто­
р о ж н о м в с тр я х и в а н и и п р о б и р о к пена в м есте с р а ст в о
оом в ы б р а с ы в а е т с я из пробирок.
,
П р и д о б а в л е н и и к а н а л и з и р у е м о м у р а с т в о р у гидр хинона и содово-сернистого р а с т в о р а п р о и сх од и т в о с­
с т ан о в л ен и е ф о сф о р н о м о л и б д ен о в о й ки сл о ты в м оли деновую синь о
^
т
восстаноВл е н и я
(о ас т в о р не п е н и т с я ), в п р о б и р к и из б ю р етки д о л и в а ю т
д и с т и л л и р о в а н н у ю воду, д о в о д я о б ъ е м с о д е р ж и м о го до
^ ? Л Ч е о е з ю мин с о д е р ж и м о е к о л о р и м е т р и р у ю т на
э л е ^ р ^ ф о т о к о л о р и м е т р е при к р а с н о м с в е т о ф и л ь т р е и
кювете шириной 10 м м . Рассчитывают содержание неорга
нического ф о с ф о р а по к а л и б р о в о ч н о й кривои. Д л я ее п
стр оеГ я сФтавФ
ятР серию определений
в которых кровь
|
з а м е н е н а с т а н д а р т н ы м р а с т в о р о м фосфора^ Д л я ^ э т о
п о д б и р а ю т 15— 20 п р о б и р о к с м еткой н а 10 мл. п о с л е
д о в ател ъ н о сть внесен ия р е а к т и в о в в п р о б и р к и у к а з а н а
II
В Т рГ < таоры в п р о б и р к а х п р о с м а т р и в а ю т в ф о т о э л е к т р о к о л о и н м е т р е и з а п и с ы в а ю т п о к а з а н и я п р и б о р а ..З а т е м на
о с Г а Т ц и с с о т м е ч а ю т к о н ц е н тр ац и ю ф о с ф о р а в п р о б и р ­
к а х , Г н а оси о р д и н а т - п о к а з а н и я
м етр а. Т очки п ересечен и я п е р п е н д и к у л я р о в восст
л е н н ы х из со о тв етств у ю щ и х о т м е т о к н а
^ ™ ный
и п о л у ч а ю т к а л и б р о в о ч н у ю кривую . К а л р
кислотой до постоянной массы, растворяют в 1 л дистиллированной
воды К готовому раствору добавляют 5 мл хлороформа. В 1 мл такото раствора содержится 1 мг фосфора. П еред употреблением ос­
новной стандартный раствор разводят в 100 раз (в 1 мл рабочего
стандартного раствора долж но содержаться 0,01 мг фосфора).
200
Т а б л и ц а 28
Последовательность внесения реактивов в пробирки с рабочим
^- V» ? '
раствором фосфата
Номера пробирок
;
Реактивы
1
Рабочий стандартный раствор фос­ 3
фора
--- Л5
Дистиллированная вода, мл
Молибденовый реактив
(пробир­ 0 , 5
ки встряхивают), мл
Гидрохинон (пробирки встряхива­ 0 ,5
ют), МЛ
'
Содово-сернистый раствор, мл
, 1
Дистиллированная вода до 10 мл/ 0,03
В 10 мл жидкости содержится
фосфора, мг
л ь
2
^ э
- 4
1* 5
2
1 Ш
0 ,5
0 ,2 5
1
0 ,5
2
0 ,5
2 ,5
0 ,5
2 ,7 5
0 ,5
0 ,5
0 ,5
0 ,5
0 ,5
0
1
0,02
1
0,01
I
1
0,005 0,0025
граф и к периодически проверяют. П ри к аж д о м определе­
нии ф осф ора рекомендуется готовить 2—3 стандартны х
раствора и при расхож дении с п оказан и ям и ранее сде­
ланного гр аф и к а вносят соответствующие поправки.
Точность а н а л и за от этого повышается.
С одерж ание неорганического фосфора в сыворотке
крови рассчитываю т по формуле:
'
С-100
4
где х — содерж ание неорганического ф осф ора ( м г % ) ;
С — концентрация ф осф ора (м г), найденная по к ал и б р о ­
вочной кривой в соответствии с показаниям и электроф о­
токолориметра; V — объем сыворотки (обычно 0,3 мл)
в центрифугате, взятом д ля цветной реакции. (1*5 м л );
100 — коэффициент д л я пересчета данны х в мг% .
Если о к р аск а исследуемой пробы получилась очень
интенсивная, то раствор р а зб а в л я ю т дистиллированной
водой (разведение учитывают при расч етах ). При отсут­
ствии в лаборатори и фотоколорим етра пользуются коло­
риметром Дюбоско. В этом случае содерж ание неорга­
нического фосфора в сыворотке крови вычисляют по
формуле:
•
..
^
щ
,
___С - Я , - 100
201
где х — с о д е р ж а н и е н ео рган и ческо го ф о с ф о р а
(м г /о);
Я , — вы сота с л о я с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а по ш к а л е к о ­
л о р и м е т р а ; # 2 — вы сота сл о я испы туем ого р а с т в о р а по
ш к а л е к о л о р и м етр а ; С — с о д е р ж а н и е ф о с ф о р а в с т а н ­
д а р т н о м р а с т в о р е ( м г ) ; 0,3 — коли чество м и л л и л и т р о в
сы воротки, в которой о п р е д е л я л и н еорган и чески й ф о с ­
ф ор .
.
.
.
Н о р м а л ь н о е с о д е р ж а н и е н ео рган и ческо го ф о с ф о р а в
сы вор отке крови ж и в о т н ы х к о л е б л е т с я в с л е д у ю щ и х
п р е д е л а х ( м г % ) : у к о р о в от 4,5 д о 5,5; у т е л я т о т 6,5
до 7,0; у с в и н о м а т о к от 4,5 до 5,5; у о вец от 5,5 д о 6,5;
у я г н я т от 7 д о 7,5; у л о ш а д е й от 3,5 до 4,0.
С о д е р ж а н и е неорган и ческого ф о с ф о р а в сы во р о тк е
крови с н и ж а е т с я обы чно при н ед о статк е ф о с ф о р а в к о р ­
м ах р а ц и о н а , н е с б а л а н с и р о в а н н о с т и п оследн его по ви ­
там и н у О, н еп р ав и л ь н о м соотнош ении к а л ь ц и я и ф о с ф о ­
ра, а т а к ж е при н едостаточн ом усвоении м и н е р а л ь н ы х
вещ еств.
Е сл и в р а ц и о н е ж и в о т н ы х к а л ь ц и й зн а ч и т е л ь н о
п р е о б л а д а е т н а д ф о сф ор ом , то это сп особствует о б р а ­
зо в ан и ю в киш ечнике н ер аств о р и м ы х соединений ф о с ­
ф ор н о ки сло го к а л ь ц и я и вы ведению ф о с ф о р а из о р г а н и з ­
ма. О тсю д а н е ц ел е со о б р а зн о ввод и ть - к а л ь ц и е в ы е п о д ­
корм ки, н ап р и м ер мел, в рац и он ы , н ед о стато чн ы е по
ф осф ору.
О п т и м а л ь н о е отнош ение к а л ь ц и я к ф о с ф о р у в р а ­
ционах ж и в о т н ы х м о ж е т к о л е б а т ь с я в п р е д е л а х 1 ,5 : I;
2 : 1 (в р а ц и о н а х рабоч и х л о ш а д е й 1 ; 1), а в летний п е­
р и о д — 2,5 :1 . З а в и с и т это т а к ж е от ви да, в о з р а с т а , п р о ­
дукти вн ости и ф и зи ологи ческого со сто ян и я с е л ь с к о х о ­
зя й ств е н н ы х ж и во тн ы х .
С н и ж е н и е с о д е р ж а н и я н еор ган и ческого ф о с ф о р а в с ы ­
во ро тке крови в зр о сл ы х ж и в о т н ы х д о 3 — 3,5 м г % , а в
сы вор отке кровиГ м олодняка до 3 — 4 м г% с в и д е т е л ь с т в у ­
ет о н ар у ш ен и и ф о сф о р н о го о б м е н а. С о д е р ж а н и е н ео р ­
ганического ф о с ф о р а в сы в о р о тк е крови ж и в о т н ы х по­
в ы ш а е т с я ч ас то при и зб ы тк е ф о с ф о р а в к о р м а х , а т а к ж е
весной, особенно после п ер ев о д а ж и в о т н ы х на п а с т б и ­
щ е ( б л а г о д а р я воздей стви ю у л ь т р а ф и о л е т о в ы х лучей
солн ц а), ;
""
'
' Ш
V’! Г
202
НЕКОТОРЫЕ СВЕДЕНИЯ ПО ТЕХНИКЕ
ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
ВЕСЫ И ВЗВЕШИВАНИЕ
■В
В зависимости ох ж елаемой точности взвеш ивания и
количества взвеш иваемого вещества в лабораториях
применяю т различны е виды весов. Д л я грубого взвеш и­
вания (в пределах от 1 до 5 кг, реж е до 10 кг) исполь­
зуют весы чашечные, циферблатные, ры чаж ны е и типа
безменов. Разновесы к весам д е р ж а т в специальном ф ут­
ляре. Н а каж дой гирьке обозначена ее масса. Весы ус­
тан авл и ваю т на горизонтальную поверхность.
При взвешивании веществ нельзя помещ ать их не­
посредственно на чаш ку весов: сначала надо взвесить
какую -либо посуду, а затем в ней — вещество.
Д л я более точного взвеш ивания используют аптеч­
ные и химико-технические весы. Н а первых взвеш ива­
ют вещества массой до 100 г, на вторых — от 200 г до
0,5 кг. Точность взвеш ивания 200-граммовых химико­
технических весов ± 1 0 мг.
Химико-технические весы. Вертикальный стержень
их укреплен двум я винтами на подставке с ножками, из
которых передние — винтовые. В пазы стерж ня подвиж ­
но входит коромысло со стрелкой. Н а к р аях коромысла
вмонтированы призмы, на которые надеваю тся сережки.
К ним при помощи стремян присоединены чашки весов.
Н а серьгах, стременах и чаш ках многих таких весов про­
ставлены номера. При сборке весов детали с одинако­
выми номерами соединяют друг с другом. Весы с н а б ­
ж ены арретиром в виде ручки или винта. У основания
вертикального стерж ня находится ш к ал а, сбоку его —
отвес, а на подставке укреплен конус. Вращ ением вин­
тов передних нож ек весы устан авли ваю т на горизон­
тальную поверхность строго по отвесу. Н а уравновеш ен­
ных весах после опускания арретира стрелка о стан авли ­
вается на нулевом делении ш к ал ы или равномерно от­
клоняется в обе стороны от нуля. При отклонении стрел­
ки в какую -либо сторону на большее число делений
весы уравновеш иваю т с помощью балансировочных г а ­
ек, находящ ихся на концах коромысла. Кроме грам м о­
вых гирь, разновес д л я химико-технических весов состо­
ит из гирек массой 10, 20, 50, 100, 200 и 500 мг. П ослед­
ние имеют вид пластинок с загнутым краеш ком (уш ко).
203
Аналитические весы. П р и м е н я ю т с я д л я
аналитиче-*
ск и х р а б о т при точности в з в е ш и в а н и я д о д е с я т и т ы с я ч н ы х
долей г р а м м а . У с т а н а в л и в а ю т т а к и е весы с т а ц и о н а р н о
(л у ч ш е в с п е ц и а л ь н о о б о р у д о в ан н о й к о м н а т е ) на п ро ч ­
ную поверхность, о п и р а ю щ у ю с я на к р о н ш тей н ах , у к р е п ­
л е н н ы х в к а п и т а л ь н о й стене. • Р я д о м с весам и н ел ь зя
с т а в и т ь н а гр ев а т е л ь н ы й и о то п и тел ьн ы е приборы.- А н а ­
л и ти ч ески е весы за к л ю ч е н ы в за с т е к л е н н ы й ф у т л я р с
п о д н и м а ю щ е й с я передней етенкой и о т к р ы в а ю щ и м и с я
б о ковы м и д в е р к а м и . В и т р и н а весов у к р е п л е н а н а о сн о ­
ван и и с т р е м я н о ж к а м и , д в е из которы х регули руем ы е.
В середине о сн о ван и я весов у к р е п л е н а к о л о н к а с о п о р ­
ной подуш кой, н а которую о п и р а е т с я с р е д н я я п р и зм а
к о р о м ы с л а весов. С а м ы е о тветствен н ы е части весо в —
п ри зм ы : с р е д н я я , н а которую о п и р а е т с я к о р о м ы сл о при
в зв еш и в ан и и , и д в е боковы е (н а них о п и р а ю тс я с е р е ж ­
ки с п о д веш ен н ы м и к ним ч а ш к а м и ) . Ч т о б ы о стр ы е р е б ­
р а п р и зм не туп и ли сь и весы н е т е р я л и ч у в с т в и т е л ь ­
ность, йх всегд а н а д о а р р е т и р о в а т ь (а р р е т и р д о л ж е н
б ы т ь з а к р ы т ) . С переди к к о р о м ы сл у весов п р и к р е п л е н а
с т р е л к а , к а ч а ю щ а я с я при в зв еш и в ан и и вм есте с к о р о ­
м ы слом . В низу под стр ел к о й н а х о д и тся ш к а л а , р а з д е л е н ­
н а я на 20 делен и й . П р и этом под д е л е н и я м и ин огда н а ­
п и сан ы ц и ф р ы (в середи н е ш к а л ы нуль, а в п р а в о ц в л е ­
во ц и ф р ы от 1 д о 10). У н еко то р ы х весов Цифр нет: в
т а к о м с л у ч а е при в звеш и ван и и сред н ее д е л е н и е ш к а л ы
п р и н и м а ю т з а д у л ь и вед у т отсчет от него по числу делен и й в п р а в о и влево.
П р и взв еш и в ан и и п р е ж д е всего п р о вер яю т, го р и зо н ­
т а л ь н о л и у с т а н о в л е н ы весы, т. е. с о в п а д а е т ли остри е
о тв е са с верш иной- конуса, н а х о д я щ е г о с я у п о д н о ж к и
колонки. В есы н екоторы х типов вм есто отвесов с н а б ж е ­
ны ж и д к о стн ы м и у р о в н я м и с п у зы р ьк о м в о зд у х а . Г о р и ­
зо н т а л ь н о г о п о л о ж е н и я о сн о в ан и я д о б и в а ю т с я и зм е н е ­
нием д л и н ы р егу л и р у ем ы х н о ж е к весов. З а т е м о п у с к аю т
. а р р е т и р и ч аш к и весов о с в о б о ж д а ю т с я от п о д д е р ж и в а ю ­
щ их их п о д став о к . Е сли при этом с т р е л к а о т к л о н я е т с я
о т нуля в п р а в о и вл ево на о д и н а к о в о е число делении,
весы у с т а н о в л е н ы п р а в и л ь н о и на них м о ж н о в з в е ш и ­
вать. Е сл и с т р е л к а к о л е б л е т с я в п р а в о и вл ево от н у ля
н а н еод и н ако вое число делен и й , то р а в н о в е с и я д о б и в аю тся при пом ощ и б а л а н с и р о в о ч н ы х гае к , которы е н а ­
х о д я т с я на ко н ц ах к о р о м ы сл а весов.
П р и в з в е ш и в а н и и на а н а л и ти ч ес к и х в есах соты е д о ­
204
ли гр а м м а определяю т с помощью м иллиграм м овы х р а з­
новесов, а тысячные и десятитысячные доли гр ам м а —
с помощью рейтера — проволочной П -образной фйгурки
массой 10 мг. Д л я этого на коромысле весов имеется
ш к а л а с делениями, чащ е всего двухсторонняя: с нулем
посредине. В п р а в о "^ влево от нуля сделано по десять
делений, у каж д о го деления стоит цифра, цена деления
1 мг (0,001 г). В свою очередь, к аж д о е из этих делений
разд елен о на 5 частей, а у весов некоторых видов — на
10 частей. В первом случае цена такого деления состав­
л я е т 0,0002 г, а во втором — 0,0001 г. Рейтер передви­
гается по коромы слу при помощи специального д в и ж к а
с крючком. Если он опущен на правую часть коромыс­
л а (на чаш ке которой л е ж а т гирьки ), показатели его
с к л ад ы в аю т с массой гирь, если ж е на левой стороне ко­
ромы сла (с взвеш иваем ы м грузом на ч а ш к е ), то необхо­
димо из массы гирь вычесть п о к азател ь рейтера.
Разновесы д л я аналитических весов помещены в фут­
л яр , в котором находится пинцет с роговыми или п ласт­
массовыми наконечниками (ими берут гири). Р азн о ве­
сы аналитических весов вклю чаю т гири массой 10, 20,
50, 100, 200 и 500 мг, 1, 2, 5, 10, 20, 50 и 100 г, а т а к ж е
д ва рейтера массой по 10 мг.
При работе с аналитическими весами необходимо со­
б лю д ать следую щ ие правила: 1) во время взвеш ивания
пользоваться только боковыми дверкам и ф утляра, не
подним ая передней; 2) любое вещество взвеш ивать толь­
ко в та р е (бюксе, цилиндре, стакане, часовом стекле и
д р .); 3) взвеш иваемый предмет класть на левую чашку
весов, гири — на правую (грам м овы е — в центр чашки
весов, м иллиграм м овы е — полукругом вокруг грам м о­
вы х); 4) ставить и снимать груз или гири, а т а к ж е пе­
редвигать рейтер мож но только тогда, когда весы арретированы (арретир з а к р ы т ); 5) взвеш ивать какие-либо
вещ ества или предметы только при температуре, одина­
ковой с температурой весов; 6) б р ат ь разновесы пинце­
том; 7) не касаться руками чаш ек весов; 8) поднимать
и опускать арретир не рывком, а плавны м поворотом
винта до о тк аза; 9) найденную массу по окончании взве­
ш ивания определять сн ач ал а по пустым гнездам в ф ут­
л я р е ( к а ж д а я разновеска имеет свое определенное мес­
т о ), а затем по снимаемым разн овескам и п оказателям
рейтера (его снимаю т и отводят рычаг с рейтером вле­
в о ).
205
Аналитические демпферные весы АД-200. Эти весы
заключены в деревянную остекленную витрину со съем­
ной крышкой, передней поднимающейся стенкой и двумя
боковыми выдвижными дверцами. Витрина закреплена
на толстой стеклянной пластинке или литом основании
весов.
К последнему прикреплена колонка с двумя кротштейнами и воздушными успокоителями-демпферами. На
колонке находится опорная подушка, на которую опира­
ется средняя призма коромысла весов. На концах коро­
мысла в специальных выемках закреплены грузоприем­
ные призмы, на которые навешиваются серьги с грузоприемными подушками. На верхнем крючке каждой
серьги подвешена чашка с дужками, а на нижнем —
стаканы воздушных успокоителей, входящие в укреп­
ленные на колонке корпуса демпферов. На коромысле
имеется стрелка, а внизу колонки
шкала. Под осно­
ванием смонтировано изолирующее устройство весов,
приводимое в действие с помощью маховичка-^арретира.
Весы снабжены задней нерегулируемой ножкой и двумя
боковыми регулируемыми; с их помощью весы устанав­
ливают по уровню, находящемуся на основании весов.
Под ножки подкладывают амортизационные подставки.
Грузоподъемность весов 200 г.
Порядок монтажа аналитических демпферных весов
описан в прилагаемой к ним инструкции. Взвешивают на
них так же, как и на аналитических весах периодическо­
го качания.
„ рЙшЙ;
л
Аналитические весы АДВ-200М и ВЛА-200М. От­
личаются они от весов АД-200 тем, что снабжены встро­
енными в них в виде колец миллиграммовыми гирями,
навешиваемыми на планку, скрепленную с правой серь­
гой. Манипулируют этими гирями с помощью вращ аю­
щихся рычажками лимбов, расположенных в правой
стороне витрины Весов. Вращением малого л и м б а.о су ­
ществляется накладывание или снятие десятков милли­
граммов (сотые доли грамма), вращением большого
лимба — накладывание или снятие сотен миллиграммов
(десятые доли грамма). Лимбы вращаются независимо
друг от друга.
Н а коромысле весов укреплена стрелка, на нижнем
конце которой расположена микрошкала с десятью де­
лениями в каждую сторону от нуля. Деления слева от
нуля обозначены знаком | —
справа — знаком « + ».
206
Цена большого деления равна 1 мг. Каждое большое де­
ление разделено на 10 маленьких (цена каждого
0,1 мг). С помощью оптического устройства, состоящего
из подсветки, объектива и отражающих зеркал, микро­
шкала весов проектируется на экран, расположенный
перед колонкой. Электроосветитель расположен сзади
весов, снаружи витрЪны. Лампочка получает питание от
городской сети.
При взвешивании граммовые гири ставят на чашку
весов. Десятые же и сотые доли грамма регистрируют
набором рейтеров/ навешиваемых на планку правого
коромысла.
Тысячные и десятитысячные доли грамма определя­
ют по шкале.
Монтаж и проверка установки весов изложены в опи­
сании и правилах пользования. К проверке весов можно
приступать не ранее чем через 24 ч после их установки.
Взвешиваемый груз и разновесы разрешается ставить
и снимать только при закрытом изоляторе-арретире.
После взвешивания лимбы ставят на нуль (поднимают
все кольцевые гири, чтобы не было давления на
призмы).
Торзионные весы. Предназначены они для быстрого
отвешивания небольших количеств исследуемых ве­
ществ. Устанавливают их по уровню, который находит­
ся на одной из ножек при основании весов. Д ля этого
вращают винты, находящиеся в ножках. Сбоку весов
находится крючок, на который надета чашечка. Рыча­
жок с чашечкой заключен в витрину. На диске весов
нанесены деления от 0 до 500 мг с интервалом в 1 мг.
Стрелка-указатель передвигается по циферблату руко­
яткой.
В нижней части коробки расположен рычаг-арретир,
которым ставят весы в нерабочее положение. Во время
работы их приводят в действие движением рычага по
направлению- к штативу. В корпусе весов против крюч­
ка имеются нулевая метка и небольшая стрелочка-ука­
затель, опускающаяся при помещении груза на крючок.
Тогда движением рукоятки перемещают по циферблату
большую стрелку, пока маленькая стрелка-указатель не
подойдет снова к нулю. Отметка, на которой остановит­
ся большая стрелка, и укажет массу чашечки с вещест­
вом в миллиграммах; вычитая затем массу чашечки, по­
лучают массу вещества.
Существуют торзионные весы, рассчитанные на мак­
симальную нагрузку 20 и 100 мг; наименьшее деление
шкалы у первых 0,02 мг, у вторых
0,1 мг.
ф о т о к о л о р и м -е т р и я
Фотоколориметрический анализ основан на получе­
нии окрашенного соединения для последующего измере­
ния интенсивности его окраски при помощи фотоэлектрокол ори метра. При этом уменьшение интенсивности
светового луча, проходящего через окрашенный раствор
исследуемого вещества, зависит от его концентрации.
Колориметрирование с применением фотоэлементов и
светофильтров позволяет уменьшить ошибку при измере­
нии интенсивности окрашивания до 0,1%.
Принцип работы фотоэлектроколориметра заклю ча­
ется в измерении гальванометром силы электрического
тока возникающего в фотоэлементе при попадании на
него луча света, прошедшего через окрашенный раствор
испытуемого вещества. Сила тока, возникающая в фото­
элементе, пропорциональна силе света. Поэтому измеряя
силу тока, можно определить интенсивность излучения.
Сравнивая два окрашенных раствора, можно изме­
рить разницу силы тока, вызванную различной степе­
нью освещенности, и по ней определить концентрацию
исследуемого раствора. При работе с фотоэлектроколо­
риметром важно правильно выбрать кювету и свето-
Рис. 14. Фотоэлектроколориметр 56М.
208
фильтр. Приборы ФЭК-М, ФЭК-56М (рис. 14) снабже­
ны набором кювет с расстоянием между рабочими гра­
нями от 1 до 50 мм. При более интенсивной окраске ра­
створа применяют кюветы с малой рабочей длинои (1
5 мм), а при менее интенсивной окраске
кюветы с
большей рабочей длиной.
Для увеличения точности измерения пользуются све­
тофильтрами. Они предназначены для получения пучка
света с приблизительно одинаковой длиной волны, в
значительной степени поглощаемого исследуемым веще­
ством. При правильно подобранном светофильтре, с по­
мощью которого удаляется «бесполезная» часть спект­
ра можно получить более точные фотометрические из­
мерения. Светофильтр подбирают так, чтобы длина вол­
ны пропускаемого им света соответствовала длине вол­
ны, поглощаемой анализируемым окрашенным раство­
ром. Светофильтры подбирают опытным путем. Для
этого раствор наливают в кювету и измеряют его опти­
ческую плотность при всех светофильтрах. По получен­
ным таким образом данным строят кривую, откладывая
по горизонтальной оси длины волн, соответствующие
наибольшему светопропусканию светофильтров, а по
__________
лзначения
ттпттпипа
О П Т И Ч 0соответствующие
вертикальной оси ------- и'ш
___
т
л .
а _—
—
. __
ской плотности раствора- На кривои отмечают участок,
оптическая плотность которого характеризуется значи­
тельной величиной, располагающийся примерно^ парал­
лельно горизонтальной оси. При выборе светофильтров
можно пользоваться данными таблицы 29.
г
•
Таблица
29
Характеристика светофильтров
Окраска исследуе­
мого вещества
Зеленовато-желтая
Желтая
Оранжевая
Красная
Пурпурная
Фиолетовая
Красно-синяя
Синяя
Сине-зеленая
Длина волны
поглощенного
света (ММК)
400
425
450
490
510
530
550
590
640
Цвет необходимого
светофильтра
Фиолетовый
Синий,
фиолето­
вый
Синий
Зеленый
Зеленый
Зелено-желтый
Желтый
Оранжевый
Красный
Длина волны
пропускаемого
света (ММК)
400—430
420— 450
430- 460
460 500
490 530
520 550
520 550
590
600—650
209
14. Заказ 7445
*
Выбор по этим данным светофильтров ориентировоч­
ный, поскольку растворы одинакового цвета могут изби­
рательно поглощать лучи с разной длиной волны. Что­
бы правильно выбрать светофильтр, нужно знать спект­
рофотометрическую кривую исследуемого вещества.
Брать следует светофильтр, пропускающий лучи в обла­
сти, где поглощение исследуемым веществом макси­
мальное.
1
>
у у |у Я
Колориметр-нефелометр фотоэлектрический ФЭК-56М.
Предназначен он для определения концентрации раз­
личных веществ в жидких растворах колориметриче­
ским (фотометрическим) методом, а также для измере­
ния коэффициента пропускания или оптической плотнос­
ти веществ по отношению к растворителю и по отноше­
нию к стандартному раствору. Прибор позволяет также
измерять светорассеивание взвесей, эмульсий и коллоид­
ных растворов в проходящем свете.
Устройство приборов ФЭК-М, ФЭК-56М подробно
изложено в инструкции к ним. Ниже кратко описана
лишь техника колориметрирования. Так как методика
определения концентрации вещества в окрашенных и
мутных растворах одинакова, то основные приемы ра­
боты на приборе сходны и при колориметрических, и
при нефелометрических измерениях. Начинают измере­
ния с помощью прибора спустя 30 мин после включения
блока питания. За это время электросхема прибора бу­
дет прогрета, что обеспечивает достаточно стабильный
режим ее работы. При работе с ртутной лампой ее
включают за 10— 15 мин до начала измерения после
30-минутного предварительного прогрева электросхемы
с лампой СЦ-98. Ртутную лампу оставлять надолго
включенной не следует, так как от этого сокращается
срок ее службы и перегреваются светофильтры.
Перед каждым измерением рабочие поверхности кю­
вет тщательно протирают. За их рабочие поверхности
нельзя брать пальцами (ниже уровня жидкости в кю­
вете): от загрязнения или капель раствора на рабочих
поверхностях кювет результаты измерений искажаются.
Перед началом работы выверяют нулевое показание
' прибора.
В левом световом пучке на все время измерения
устанавливают кювету с растворителем. Если раст­
воритель не окрашен, можно в левый пучок ставить кю­
вету с дистиллированной водой. Иногда кювету в левый
210
световой пучок не ставят, при этом не исключено разогреванйе левого фотоэлемента теплом светового пучка.
Известно, что вода и водные растворы хорошо поглоща­
ют Тепловые лучи.
_
Техника измерения оптической плотности или коэф­
фициента светопропускания раствора. Измерять эти па­
раметры раствора можно двумя способами: путем от- •
счета показаний по левому или по правому барабану.
Выбор того или иного способа измерений зависит от
диапазона измеряемы^еличин.
Первый способ измерения. Под правый пучок света
помещают кювету с исследуемым раствором, а под ле­
вы й— такую же кювету с растворителем. Индекс лево­
го барабана устанавливают на рулевое деление шкалы
оптической плотности (100% по шкале светопропуска­
ния). Вращением круговых фотометрических клиньев
стрелку гальванометра устанавливают на нуль, причем
сначала при положении первого, а затем второго пере­
ключателя. Затем под правый пучок света помещают
кювету с растворителем, при этом стрелка гальваномет­
ра отклоняется от нулевого положения. Вращением из­
мерительных барабанов ее вновь устанавливают на
нуль. Величину оптической плотности раствора отсчиты­
вают по левому барабану.
Второй способ измерения. Под правый и левый пуч­
ки света помещают кюветы с растворителем. Индекс
правого барабана устанавливают на ^ нулевое деление
шкалы оптической плотности. Вращением круговых фо­
тометрических клиньев стрелку гальванометра также
устанавливают на нуль. Затем под правый пучок света
помещают кювету с исследуемым раствором. Стрелка
гальванометра при этом отклоняется от нулевого положения. Вращением измерительных барабанов увеличи­
вают ширину щелевой диафрагмы и устанавливают
стрелку гальванометра снова на нуль. Величину опти­
ческой плотности раствора отсчитывают по правому ба­
рабану. Выбранного способа измерения следует придер­
живаться на протяжении исследования данного вещест­
ва. Нельзя снимать показания то с левого, то с правого
барабана.
_
Расчеты ведут по калибровочному графику. Состав­
ление таких графиков изложено в частных методиках.
Наиболее совершенным, хотя и более 'сложным при­
бором, является спектрофотометр, на котором измеряют
211
интенсивность поглощения света в отдельных узких уча­
стках спектра. На спектрофотометре лучше устраняется
влияние посторонних окрашенных соединений. М ожно
измерять на нем поглощение ультрафиолетовой и инф­
ракрасной частей спектра.
М Ы ТЬЕ И СУШКА ХИМИЧЕСКОИ ПОСУДЫ
Посуда для проведения химических анализов долж ­
на быть чистой и в большинстве случаев сухой. Чистой
считают такую стеклянную посуду, на стенках которой
не остается отдельных капель, а после стекания воды
видна ее тончайшая равномерная пленка. В случаях,
когда посуда не загрязнена жировыми или другими не
растворяющимися в воде веществами, ее моют теплой
водой с применением ершей и без них, а затем 2— 3 ра­
за споласкивают дистиллированной водой.
Мыть посуду можно мыльной водой или 10%-ным
раствором тринатрийфосфата. Хорошее средство для
удаления с новой посуды следов жира и других загряз­
нений или освобождения от растворимых солей, находя­
щихся в составе стекла, — обработка посуды паром.
Пропаривают посуду в течение 30 м и н —■'1 ч. Перед об­
работкой посуды паром ее предварительно моют.
Аппарат для пропаривания можно смонтировать в
любой лаборатории. Д ля этого берут 2—3-литровую кол­
бу, закрывают ее пробкой, в которую вставлена ворон­
ка. В воронку вставляют пипетку Мора с отрезанным
концом. Чтобы пипетка Мора плотно не прилегала к
воронке, между ними вставляют несколько кусочков би­
того стекла. Колбу до половины наполняют водой, на
дно кладут несколько кусочков пемзы или несколько
стеклянных капилляров (для равномерного кипения во­
ды) и ставят на нагревательный прибор. Пропаривае­
мую посуду надевают на пипетку Мора таким образом,
чтобы верхний конец трубки не касался дна посуды.
При пропаривании посуды, которая при надевании на
пипетку упирается в конец трубки, в воронку насыпают
стеклянные бусинки или битое стекло (не мелкое). Гор­
ло посуды в таком случае будет опираться на эти пред­
меты.
При кипении воды пар, проходя через пипетку Мора,
будет омывать посуду и, конденсируясь, стекать обрат­
но в колбу.
212
Применение химических моющих средств. Для мытья
посуды очень часто применяется' хромовая см ёсь,/ эф­
фективность которой основывается на сильном окисли­
тельном действии хромовокислых солей в кислой срёд^
Посуду же/ загрязненную парафином,; керосином; вос­
ком, минеральными маслами и другими продуктами ггерегонки нефти, хромовой смесью мыть бесполезно. Не
рекомендуется также мыть хромовой смесью посуду,
загрязненную солями бария, так как образующийся при
этом сульфат бария очень трудно удаляется с ее стенок.
Для приготовления хромовой смеси 9,2 г растертого в порошок
двухромовокислого калия всыпают в фарфоровую чашку, прилива­
ют туда 100 мл концентрированной серкой кислоты и нагревают со­
держимое на водяной бане при помешивании стеклянной палочкой
до полного растворения К 2СГ2О 7.
Приготовить хромовую смесь можно из двухромовокислого нат­
рия: 6 г его растворяют в 100 мл воды, после чего к этому раство­
ру приливают 100 мл концентрированной серной кислоты. М ожно
пользоваться также* раствором хромового ангидрида» для приго­
товления которого 85 г С г 0 3 растворяют в 120 мл воды и прили­
вают 500 мл концентрированной серной кислоты.
В качестве моющего средства можно применять так­
же раствор двухромовокислого калия в концентрирован­
ной азотной кислоте (200 г К2СГ2О 7 растворяют в 1 л
ЙМ рз). По своим моющим свойствам этот раствор даже
при комнатной температуре превосходит хромовую
смесь. Он устойчив в течение длительного времени. Од­
нако из-за выделения окислов азота работать с этой мо­
ющей смесью нужно в вытяжном шкафу.
Целесообразнее использовать подогретую (до 45
50°С) хромовую смесь, которая действует быстрее и эф­
фективнее.
ОднЬй и той же хромовой смесью мыть посуду мож­
но много раз. После длительного употребления цвет ее
из темно-оранжевого становится темно-зеленым. Такая
смесь уже непригодна для мытья.
Хромовую смесь готовят в фарфоровых стаканах или
в колбах из тугоплавкого стекла.
Для мытья посуды применяют также смесь Кома­
ровского, состоящую из равных объемов 6 н. раствора
соляной кислоты и 5 —6 %-ного раствора перекиси водо­
рода. Последнюю лучше использовать подогретой до
30—40°С. Обмыв стенки посуды смесью, ее для повтор­
ного использования выливают в ту же емкость, в кото­
рой она хранилась. После этого посуду моют водой (как
обычно).
?
213
Посуду, загрязненную смолистыми веществами, мо­
ют серной кислотой. Соляной кислотой растворяют
осадки, плохо растворимые в воде (некоторые окислы
и гидраты окислов). Крепкие растворы щелочей приме­
няют для удаления некоторых смолистых веществ.
Мыльную воду и щелочь используют для мытья жирной
посуды.
*
Я
Д ля мытья посуды, загрязненной керосином, приме­
няют
известковое
молоко
(5— 10 %-ную
взвесь
С а(О Н )г). В посуду наливают немного ( 100— 200 мл на
1 л объема) известкового молока и энергично его
встряхивают. Операцию повторяют 2—3 раза, затем по­
суду моют теплой водой.
К органическим растворителям, используемым для
мытья посуды, относятся спирт, эфир, ацетон, петролейный эфир, бензин, скипидар, четыреххлористый уг­
лерод, дихлорэтан и др. Органическими растворителями
удаляют смолистые и некоторые органические вещества,
которые не растворяются в воде, кислотах и щелочах.
После работы с солями марганца на стенках стек­
лянной посуды остается бурый налет, который можно
удалить обработкой раствором щавелевой кислоты или
йодистого калия. После удаления бурого налета посуду
тщательно промывают теплой водой и ополаскивают
дистилл ироваиной.
Сушка химической посуды. Наиболее распростране­
на сушка посуды на колышках, прикрепленных к доске,
которую подвешивают над раковиной. Колышки долж ­
ны быть чистыми, иногда их обертывают фильтроваль­
ной бумагой, после чего надевают на них посуду.
Быстро высушить посуду можно в сушильном шкафу
при температуре 80— 100°С. На полку шкафа кладут
чистый кусок фильтровальной бумаги, а затем помеща­
ют посуду.
^
Иногда для быстрого высушивания применяют спирт
и эфир. В таких случаях сверху сосуд обтирают чис­
тым полотенцем, затем ополаскивают его сначала чис­
тым этиловым спиртом, а затем серным эфиром. Пары
эфира удаляют продуванием холодного воздуха.
*
РАСТВОРЫ И ИХ П РИ ГО ТО В Л ЕН И Е
■
По точности выражения концентрации растворы де­
лят на приблизительные и точные. Концентрация приб214
лизителыгых растворов выражается в большинстве слу­
чаев в весовых, реже в объемных процентах. Вещества,
используемые для приготовления приблизительных раческих весах.
Процентные растворы. При выражении концентра­
ции в весовых процентах указывают число граммов ра­
створенного вещества в 100 г данного раствора.
Например, в 100 г 10^-ного раствора азотнокислого аммония
содержится 10 г данной соли.
I 4 Многие вещества, используемые для анализа, явля­
ются кристаллогидратами. Они содержат кристаллизаци­
онную воду (МагСОз* ШНа©, СиЗО^бНгО и т. д.). При­
готавливая из таких веществ растворы, необходимо обя­
зательно учитывать содержание этой воды.
|
Предположим, требуется приготовить 2 кг 10%-ного раствора
сернокислого натрия из его кристаллогидрата ЫагЗО** ЮНгСХ Сна­
чала рассчитывают, сколько потребуется для этого безводной соли
х
10 •2000
100
Ж*
= 2 0 0 г.
Следовательно, надо взять 200 г безводной соли.
Соответствующее количество десятиводной соля находят следу­
ющим образом. Вычисляют молекулярную массу МазЗО*. Она рав­
на 142,041. Молекулярная масса кристаллогидрата составляет
322,195, или округленно 322,20. Таким образом, если 142,04 г
М&гЗО* содержится в 322,2 г кристаллогидрата, то 200,0 г
В
Ка25 0 4 — в 453,7 г кристаллогидрата
/
I
200 *322,2
142 04
\
Следовательно, для приготовления 2 кг 10%-ного раствора надо
взять 453,7 г кристаллогидрата и 1546,3 г воды (2000— 453,7).
На каждый сосуд с раствором обязательно наклеи­
вают этикетку с указанием соли, из которой он приго­
товлен, например 10%-ный раствор Ыа25 0 4, 25%-ный
раствор ЫагЗО/г ЮН2О.
Раствор, концентрация которого выражена в объем­
ных процентах, готовят по-другому. Для этого отвеши­
вают нужное количество вещества (например, 10 г).
Переносят его в мерную посуду (в мерную колбу на
100 мл) и наполняют ее вЬдой до метки. После смеши­
вания в посуде будет находиться раствор данного ве­
щества, концентрация которого равна 10 объемным про­
центам.
215
Точные растворы. Д ля характеристики точных ра­
створов используют понятия: 1) нормальность; 2) молярность; 3) титр. Д ля приготовления точных раство­
ров вещества отвешивают только на аналитических ве­
сах («а часовом стекле или в бюксе) с точностью до
четвертого знака после запятой. Отвешенное вещество
небольшими порциями высыпают в чистую сухую во­
ронку, вставленную в чисто вымытую мерную колбу. Из
промывалки несколько раз небольшими порциями воды
обмывают бюкс или часовое стекло, в котором взвеши­
вали вещество. Все порции воды вливают затем в ворон­
ку, которую после этого также несколько раз обмыва­
ют дистиллированной водой. Вначале растворитель дол­
жен занимать не более половины мерной колбы. Закрыв
ее пробкой, воду перемешивают до полного растворения
твердого вещества, после чего добавляют воду до метки
и содержимое снова тщательно перемешивают.
Молярность растворов. Молярным называется рас­
твор,' в 1 л которого содержится один грамм-моль рас­
творенного вещества. Моль (грамм-молекула) — число
граммов вещества, равное его молекулярной массе.
0,1 моля называют децимолем, 0,01 моля — сантимолем,
0,001 моля — миллимолем.
Так, для К2СГ2О7 один моль составляет 294,22 г, децимоль —
29,422 г, сантимоль — 2,9422 г и т. д.
Соответственно этому при содержании в 1 л раство­
ра 1 моля вещества получают молярный раствор (М),
при содержании 1 децимоля— децимолярный (0,1 М),
1 сантимоля — сантимолярный раствор {0,01 М) и т. д.
Например, в 1 л 1 М раствора К2СГ2О7 содержится 294,2200 г
этой соли, в 1 л. 0,1 М раствора — 2Э,4220 г и в 1 л 0,01 М раство­
ра — 2,9422 г двухрбмовокислого калия.
Нормальность растворов. Концентрацию рабочих ра­
створов чаще выражают нормальностью. Нормальность
(н>) — цисло грамм-эквивалентов (г-экв.) вещества, со­
держащегося в 1 л раствора.
Эквивалент вещества — весовое количество его, ко­
торое может при химических реакциях присоединять
или замещать одну (1,008) весовую часть водорода или
8 весовых частей кислорода.
~
Количество граммов данного вещества, численно
равное его эквиваленту, называется грамм-эквивалентом (г-экв.).
216
Раствор, в 1 л которого содержится 1 г-акв. вещест­
ва, называется нормальным (н.) или однонормальным.
Для большинства аналитических целей и работ ча­
ще используют 0,1 н., 0,2 и., 0,3 н. н т. д.* растворы. Их
называют соответственно деци-, двудеци-, тридецинормальными. В 1 л их содержится 0,1; 0,2; 0,3 и. т. д.
грамм-эквивалента вещества.
1
л
совещества
в
Сотые доли грамм-эквивалента
держат сантинормальные растворы (0,02
г-экв.
0,02 н. — двусантинормальный раствор), тысячные до­
ли грамм-эквивалента — миллинормальные
растворы
(0,002 н. — двумиллинормальный раствор). Растворы с
определенной нормальностью очень удобно готовить из
фиксаналов.
Точную концентрацию рабочего раствора можно
ражать в виде титра. Титр раствора
содержание ве­
щества в граммах в 1 мл раствора.
Например, при содержании в 1 л раствора 5,843 г серной кислоты титр его будет равен
5,843
0,005843 г/мл.
Т
1000
ЯШ
Кроме молярных и нормальных растворов при ана­
лизах, особенно
Н М колориметрии, нередко используют
стандартные (эмпирические) растворы с разными, точ­
но определенными концентрациями исследуемых ве­
ществ, например содержащие в 1 мл 0,1; 0,01; 0,001 мг
вещества. Для приготовления таких растворов исполь­
зуют вещества, тщательно очищенные перекристалли­
зацией, а также продажные реактивы с квалификациеи
ч д а или х. ч., спектрально чистые, особой чистоты.
Общие принципы’ расчетов концентрации рабочих
растворов при объемном анализе. Объемные методы
анализа применяют при исследовании кормов и крови
животных. Формулы и примеры расчетов, проводимых
при приготовлении рабочих растворов точной концент­
рации, а также для определения концентрации исследу­
емых растворов по результатам титрования их ра очи
ми растворами приводятся ниже.
1. Вычисление нормальности раствора. Для таких
расчетов используют формулу:
М-1000
к.
#
.
217
где н. — нормальность раствора; М — масса растворен­
ного вещества (г); V — объем, в котором растворено
данное вещество (м л); Э — грамм-эквивалент вещест­
ва; 1000 — общий объем раствора (мл).
Нормальность раствора вычисляют с точностью до
четвертого знака (например, 0,0567).
Предположим, 5 г Нг5 С>4 растворили в 250 мл воды. Молеку­
лярная м асса ,серной кислоты равна 98,08; грамм-эквивалент — 49,04.
Подставив соответствующие данные в формулу, получим
5
• 1000
« .=
!----- -= 0 ,4 0 7 8 .
49,04-250
2. Расчет количества вещества, необходимого для
получения, раствора нужной нормальности. Вычисление
ведут по формуле:
н-х) • Э
<2=-----—,
1000
"
где <2 — масса вещества ( г ) ; н. — нормальность раство­
ра; Э — грамм-эквивалент вещества; V — объем раство­
ра, который нужно приготовить (мл).
Например, следует приготовить 500 мл 0,05 н. раствора К2СГ2О 7,
грамм-эквивалент которого равен 294,22 г. Для этого потребуется
двухромовокислого калия
0,05-500-294,22
§ И
0 = __ !--------------- 1-----= 7 ,3 5 5 5 г.
1000
3. Установление нормальности исследуемого раство­
ра по результатам его титрования известным рабочим
раствором: При работе с нормальными растворами оп­
ределяют сначала нормальность неизвестного раствора,
затем количество содержащегося в нем неизвестного ве­
щества. При такого рода объемных определениях поль­
зуются формулой:
«-= —-----,
V
где к. и н. 1 — нормальность неизвестного и известного
растворов; V — объем раствора (мл), нормальность ко­
торого устанавливают; Ц — объем известного (титро­
ванного) рабочего раствора (мл), израсходованного на
титрование неизвестного раствора.
Допустим, на реакцию с 10 мл исследуемого раствора ЫаОН
затрачивали по 15 мл 0,05 н. соляной кислоты. Следовательно, нор­
мальность ЙаОН будет равна:
218
\
N
Н Ш ^ § | . ,{ %н .= ° — — = 0 ,0 7 5 а
^
.................; ' /,; * '
10
. . ■. _
, ;;\ :• •/-г*'
4.
Установление^количества вещества, содержащего ся в определенном объеме исследуемого раствора. Ис­
пользуя нормальность исследуемого раствора, вычис­
ленную цо результатам его титрования и зная общий
его объем, определяют количество исследуемого веще­
ства в данном объеме. Для этого необходимо знать ве­
личину грамм-эквивалента исследуемого вещества. Об­
щее количество вещества, содержащееся в общем объ­
еме исследуемого раствора, находят по формуле:
Вк
*
'
'
н.'ХХ'Э
1000 ’
где (3 — общее количество вещества в исследуемом ра­
створе (г); н. — нормальность исследуемого раствора;
V |— общий объем исследуемого раствора (мл); Э
грамм-эквивалент вещества.
Предположим, имеется 250 мл раствора ЫаОН, нормальность
которого составляет 0,0750, и грамм-эквивалент 40. Отсюда в 250 мл
этого раствора будет содержаться
М Й Й Я Ш
й г №ОН.
1000
Если нормальность исследуемого раствора не вычи­
сляют, то используют следующую формулу:
К.1-01-В-3
о 1000 ’
где (2 — количество вещества в общем объеме исследу­
емого раствора (г);
— нормальность рабочего рас­
твора; й — объем рабочего раствора, израсходованного
на титрование (мл); о — объем исследуемого раствора,
взятого для титрования (мл); В — общий объем иссле­
дуемого раствора (м л); Э — грамм-эквивалент исследу­
емого вещества.
В приведенном выше примере в 250 мл раствора будет со­
держаться
О.06-15-259-40
ш он
10*1000
(0 05 — нормальность рабочего раствора соляной кислоты; 15 —
количество миллилитров этой кислоты, затраченное при титровании
на реакцию с 10 мл исследуемого раствора ЫаОИ).
*■ ^
ШI
,
'Л
219
5.
Расчет коэффициента нормальности. Иногда поль­
зуются' коэффициентом
нбрмальности
отношением
нормальности приготовленного раствора к его теорети­
ческой нормальности:
:
•
Щ :
. ч /1 ж . М> «1*. !#хМ^
■ ••
I
Ж
й
*
*
г
.
■•
V
о
*
Л
**
Сч.; *
л
-ЗшШ Ш
*■. • • 5#
и
С
Т
#
»»-г
1 ^
..
♦
*
у
.^ « 1
*
*
• ’
"Р1
Я л
■
4
,
ф
шЖ •*«.
•
*
1
*'*
«
•
/1»МЛВ • » «*; *йГ-. *- _ж/ *- -*?1-%- ш
■ ..^
^
~
»*'
-Ж
®5^
т
лл
я г
'^Ь
Я.О
где а* . нормальность приготовленного раствора; я.0 —
нормальность теоретическая.
Эта поправка обозначает количество миллилитров
точного нормального (теоретического) раствора, соот*
ветствующее 1 мЛ приготовленного (фактического) ра­
створа. При умножении показателей титрования
(в
миллилитрах) на эту поправку результат (объем) при­
водят к объему раствора точной концентрации, напри­
мер 0,1 н. раствору.
•
4
Так как объемы растворов реагирующих веществ
обратно пропорциональны их концентрациям (титрам),
то коэффициент нормальности определяют также по
отношению объемов растворов:
‘о»
к.
00
.
:
д
V
Н. о
V
Целесообразно, однако, готовить растворы точно и
при соответствующих расчетах обходиться без этой ус­
ложняющей их поправки.
6.
Расчет объема воды, добавляемой к исходному
раствору для доведения его до требуемой нормальности.
Предположим, 1000 мл 0,1057 н. раствора серной кисло­
ты нужно развести водой, чтобы его нормальность ста­
ла точно равна 0,1000. Новый больший объем можно
рассчитать исходя из соотношений;
•
V
1Н.у
''
V *н.
откуда У1= _ ,
-
где V — объем исходного раствора (м л ); Й| — объем
вновь полученного раствора (мл); н . \ — нормальность
вновь Полученного раствора;
— нормальность исход­
ного раствора.
М
Подставив в формулу приведенные - выше данные,
получим.
1000-0,1057
х)\ —----- — ------ -- 1057 мл.
220
Следовательно, если 1000 мл (1 л) 0,1057 н. НгЗО*
превратить в 0,1000 н. раствор, его объем возрастет с
1000 мл до 1057 мл,-нли на 57 мл (^ 1—V= 02)- Именно
столько (57 мл) воды нужно добавить к исходному объ­
ему имеющейся более концентрированной серной кисло­
ты, чтобы превратить ее в точно 0,1 н. раствор.
Примерно так же поступают, если нужно превра­
тить имеющийся раствор в раствор с меньшей концент­
рацией вещества. Для этого вначале находят объем раз­
бавленного (конечного) раствора, подставляя конкрет­
ные величины в следующую формулу:
Ь-
V •С
— сГ’
где V — объем исходного раствора (мл); С\ — концент­
рация раствора, который нужно приготовить; С — кон­
центрация исходного раствора.
Далее по формуле V\—V= Vг находят количество во. ды, которое нужно добавить' к исходному раствору, что­
бы получить новый раствор нужной концентрации.
7. Расчет титра раствора. Проводят его по формуле:
М
Г=— ,
шШшВЯЙшШШШМ .. .» *.
, V
Где т — титр раствора (количество граммов вещества в
1 мл его); м — масса вещества (г); V — объем раствора,
в котором содержится это вещество (мл).
При определении титра раствора вычисления ведут
до четырехзначных цифр, не считая предшествующих им
нулей (например, до 0,0005485).
8. Вычисление титра исследуемого раствора. От нор­
мальности, т. е. количества грамм-эквивалентов вещест­
ва в 1 л раствора, легко перейти к массе находящегося
в нем вещества в граммах ( Р). Д ля этого нормальность
раствора умножают на величину грамм-эквивалента ве­
щества ( Р - н -Э). Затем переходят к расчету титра ра­
створа, учитывая, что последний показывает, сколько
граммов вещества содержится в 1 мл:
-
н.-Э
т = ------ - •
1000
Следовательно, титр раствора равен произведению
нормальности его на грамм-эквивалент, деленному на
.
1000.
\
...
221
Концентрацию рабочих растворов удобно выражать
«титром на определяемое вещество». Это показывает,
скольким граммам исследуемого вещества соответствует
по-реакции 1 мл затраченного рабочего раствора.
Предположим, имеется 0,05 н. рабочий раствор соляной кисло­
ты. Нужно рассчитать, какому количеству граммов ЫаОН соответст­
вует по реакции 1 мл этой кислоты (титр соляной кислоты на едкий
Яатр). V
, - ■_ ; . -V <и4,,й-'
Находят этот показатель по формуле:
■
.
у
Я.НС1'^«аОН
,
НС1/К30Н —
1000
’
где « ,н с 1 — нормальность НС1; З к а о н — грамм-эквивалент ЫаОН.
Подставив в ф орм улу. соответствующие данные, получим:
0,05-40
Т
= - — — = 0 ,0 0 2 г.
.НС1/НаОН
1000
Следовательно, 1 мл 0,05 н. раствора НС1 будет соответствовать по
реакции 0,002 г едкого натра.
Таким образом, готовить точные 0,1 или 0,5 н. рас­
творы не обязательно, так как всегда можно определить,
какое количество искомого вещества соответствует 1 мл
раствора кислоты, щелочи или другого реактива извест­
ной нормальности.
Например, титр азота по 0,1 н. кислоте равен 0,0014 г (1 мл
0,1 н. кислоты эквивалентен 0,0014 г азота). Допустим, нормаль­
ность кислоты составляет 0,1157. Грамм-эквивалент азота 14. По
формуле
/ т _
| 1—
Н' ' Э
\
I
Ш Э
вычисляем титр азота для 0,1157 н.
раствора кислоты. Он будет равен
'
0,1157-14
-------------- = 0,0016198.
1000
Следовательно, округленно 0,0016 г
0,1157 н. кислоты.
азота
соответствует
1 мл
Метод нейтрализации (алкалиметрия или ацидиметрия). Используют его для определения количества кис­
лоты, израсходованной при титровании рабочим рас­
твором основания, а также для определения содержания
оснований по затраченному титрованному раствору кис­
лоты. Метод основан на взаимной нейтрализации кис­
лот и оснований, наступающей в точке их эквивалентно­
сти. Применяют в таких случаях титрованные растворы
соляной и серной кислот, растворы едкого натра и ед ­
кого кали. Чтобы установить точку эквивалентности в
222
момент нейтрализации, используют индикаторы — веще­
ства, изменяющие свою окраску в зависимости от Изме­
нения рН раствора.
1.
Рабочие растворы кислот. Вначале готовят рас­
творы кислот приблизительной концентрации и опреде­
ляют их нормальность. Для соляной и серной кислот ее
устанавливают обычно по буре, безводному углекисло­
му натрию или по титрованным растворам щелочей. ^
В лаборатории чаще пользуются соляной и серной
кислотами. Их продают в виде концентрированных рас­
творов серного ангидрида и хлористого водорода. В пер­
вую очередь устанавливают процентное содержание пос­
ледних в продажных кислотах, определяя их плотность
ареометром. По соответствующей таблице, исходя из
плотности, устанавливают концентрацию. На основании
полученных данных вычисляют объем продажной кис­
лоты, необходимый для приготовления заданного коли­
чества кислоты нужной концентрации.
рассчитывают количество хлористого водорода, неооходимого для
приготовления 20 л 0,1 и. раствора:
Далее определяют, в, каком объеме продажной кислоты содер
жится 72,93 г хлористого водорода
Допустим, плотность кислоты по ареометру составляет 1,19 г/см .
По таблице такой ее плотности &^ в е т е т в ^ ^
ЙШ Й
Ж
И
1 С /1
I
&
Л # * У 1 / п V I и *
V
1
1 Л
/ л
-3
Наконец, разделив найденную массу продажной кислоты на ее
плотность, определяют объем нужного количества продажной кислоты:
195,89
--------- = 1 6 4 ,6 мл.
1,19
Таким образом, чтобы в растворе содержалось 72,93 г хлорис­
того водорода, нужно отмерить 164,6 мл продажной кислоты. Для
получения приблизительно 0,1 н. раствора соляной кислоты к най­
денному объему продажного ее препарата следует добавить около
20 л (19,83 л) дистиллированной воды.
В ряде руководств есть таблицы, с помощью кото­
рых по плотности кислоты можно непосредственно най­
ти ее содержание (в граммах) в 1 л раствора.
Предположим, требуется приготовить 20 л 0,1 н. раствора сер­
ной кислоты (молекулярная масса 98,09; грамм-эквивалент 49,04о)
из ее препарата, плотность которого по ареометру равна 1,84 г/см’.
Согласно описанному выше способу, для получения 20 л ее 0,1 н.
раствора необходимо взять 98,09 г НгЗО*. По таблице справочника
находят, что 1 л исходной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3 ве­
сит 1759 г. Отсюда 98,09 г кислоты соответствует объем, равный
98,09-1000
1759
Следовательно, чтобы приготовить 20 л 0,1 н. раствора серной
кислоты, необходимо взять 56 мл кислоты плотностью 1,84 г/см3.
Последнюю необходимо осторожно внести в небольшое количество
дистиллированной воды (3—4 л) и тщательно перемешать, затем,
постёпенно и хорошо перемешивая раствор, добавить остальную
воду.
. .
Растворы кислот, приготовленные указанным спосо­
бом, еще не являются рабочими. Перед использованием
для анализа нужно точно установить их нормальность
по буре или безводному карбонату натрия. После раст­
ворения нужного количества каждого из этих веществ
получают эталонные растворы определенной концентра­
ции, по которой можно дать точную характеристику тит­
ра и нормальности растворов кислот и оснований.
2.
Установление нормальности кислот по карбонат
натрия. Соляная кислота и карбонат взаимодействуют
по следующему уравнению: Ыа2СОз+2НС1==2ЫаС1-1й НгСОз.
Д ля установления нормальности кислоты готовят
0,1 н. раствор карбоната натрия (грамм-эквивалент
ИагСОз равен 52,997). Д ля этого 5,2997 г его безводной
соли переносят через воронку в мерную колбу на I л и
добавляют в нее дистиллированной воды до метки. Р а ­
створ тщательно перемешивают. В 3—4 конические кол­
бочки на 100—200 мл пипеткой Мора берут по 25 мл по­
лученного раствора карбоната, добавляют по 2—3 кап­
ли раствора метилового красного и титруют кислотой до
перехода желтой окраски раствора в розовую.
Д ля приготовления 0,1 н. раствора карбоната обыч­
но используют фиксаналы углекислого натрия.
Способы расчета титра и нормальности кислот при­
ведены на страницах 218, 221.
224
3.
Растворы щелочей . Приготовление 0,1 и 0,5 н. ра­
створов ЫаОН. В жаростойкой стеклянной или фарфо­
ровой посуде готовят насыщенный, не содержащий кар­
бонатов раствор ЫаОН (молекулярная масса <39,997;
грамм-эквивалент 39,997). Для этого едкий натр (х . ч.
или ч. д. а.) раствор'ЙЮт в равном по массе количестве
воды. После охлаждения сильно разогревшегося при
реакции раствора его оставляют стоять на 2—3 недели
в склянке или цилиндре под резиновой пробкой. При­
месь карбоната натрия при этом выпадает в осадок и
оседает на дно цилиндра.
Концентрацию полученного раствора определяют по
его плотности и данным соответствующей таблицы или
титрованием.
Для изготовления, например, титрованного раствора едкого нат­
ра 2 мл прозрачного концентрированного препарата ИаОН переко­
сят пипеткой в мерную колбу на 250 мл и разбавляют водой до мет­
ки. Содержимое этой колбы титруют затем 0,1 н. раствором серной
или соляной кислот описанным выше способом. Нормальность исход­
ного насыщенного раствора щелочи рассчитывают по формуле, при­
веденной на странице 218.
Предположим, на титрование 25 мл этого раствора МаОН из­
расходовано 24 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты. Следовательно,
нормальность разведенного раствора МаОН составит
0,1 -24
—25—* ^ 0,09268.
Затем рассчитывают, сколько граммов МаОН содержится в
250 мл разведенного, т. е. в 2 мл приготовленного концент|
0,0026• 250 •40
рированного раствора:
-------Тобо” — ~ = 0,926 г (где 40 — граммэквивалент МаОН). Следовательно, в 2 мл концентрированного ра­
створа МаОН, лишенного карбонатов, содержится 0,926 г, а в 1 мл—
0,463 г основания. Из этой величины исходят при изготовлении из
данного раствора разведенных растворов едкого натра.
Допустим, требуется приготовить 20 л 0,5 н. раствора МаОН.
Для приготовления 1 л такого раствора расходуют 20 г щелочи, а
на 20 л понадобится 400 г. Если в 1 мл концентрированного рас­
твора щелочи содержится 0,463 г МаОН, то 400 г МаОН соответст, -40°
вует
~0 4 бз = 863,8 мл концентрированного раствора щелочи.
Таким образом, при использовании 400 г МаОН надо отмерить
863,8 мл концентрированного, но не содержащего карбонатов рас­
твора щелочи и для получения 20 л 0,5 н. ее раствора добавить
соответствующее количество воды.
Концентрированные, насыщенные растворы щелочи
хранят в бутылях, покрытых изнутри парафином и плот1$. Заказ 7445
225
но закрытых пробкой, залитой сверху парафином (за­
ливают после каждого взятия пробы). Приготовленные
для анализа растворы оснований еще не являются ра­
бочими. Перед употреблением устанавливают их точную
концентрацию, как и при использовании растворов кис­
лот В практике анализов титр растворов щелочи уста­
навливают по 0,1 н. раствору соляной или серной кисло­
ты Д ля этого в коническую колбу на 250 мл вливают из
бюретки 25 мл 0,1 н. раствора МаОН, приливают 3—
4 капли раствора метилового красного и титруют и, г и.
раствором НС1 до исчезновения желтой и появления
розовой окраски. Титруют трижды. По средним показа­
телям титрования находят нормальность и титр раство­
ра (см. стр. 218, 221).
Если резких колебаний температур не отмечается,
то концентрацию щелочей в процессе их хранения про­
веряют не реже одного раза в 3 месяца.
Приготовление раствора перманганата калия. П ри го­
товление 0,1 н. раствора. Крупнокристаллическии реак­
тив (х. ч. или ч. д. а.) перманганата калия (молекуляр­
ная масса 158,04; грамм-эквивалент в кислой_ среде
31 608) предварительно измельчают в фарфоровой ступ­
ке’ Примерно 3,2 г этой соли высыпают в стакан вмес­
тимостью 0,5 л (или 1 л ) , приливают 250 мл прокипячен­
ной и охлажденной до 40—50°С дистиллированно^ воды
и содержимое взбалтывают стеклянной палочкой (пер­
манганат калия растворяется в воде довольно медленно).
После полного растворения кристаллов жидкость пере­
носят в мерную колбу на 1 л и дополняют водой до
метки, после чего хорошо взбалтывают. В первые дни
после' приготовления раствора концентрация его неус­
тойчива вследствие разложения К М п 0 4, поэтому рас­
твор в течение 10— 14 дней держат в закрытой бутыли в
темном месте: Лишь после этого приступают к установлению его точной концентрации.
Если нужно приготовить 10 или более литров рас­
твора К М п 0 4, берут соответственно большее количество
соли и разводят ее в нужном количестве воды. Д алее
поступают так, как описано выше.
Д ля быстрого приготовления небольшого количест­
ва титрованного раствора перманганата калия необхо­
димое количество К М п 0 4 (х. ч.) растворяют в соответ­
ствующем объеме воды. Затем раствор доводят до ки^
пения и выдерживают в течение 1 | на кипящеи водяной
226
I
1
I
I
I
|
I
1
к
1
I
I
I
К
I
I
I
I
I
I
I
I
1
I
]
I
1
I
1
I
бане для окисления примесей. При выпадении осадка
МпОг раствор фильтруют через воронку с освобожденным от органических примесей асбестом, стеклянной ватой или пористой стеклянной пластинкой. После охлаждения раствора до 44рмнатной температуры в склянке с
притертой пробкой устанавливают его нормальность.
Растворы перманганата калия сохраняют в бутылях
из темного стекла, склянках, покрытых снаружи черным
лаком или оклеенных черной бумагой. Так как нормаль­
ность растворов КМ п04 изменяется при соприкоснове­
нии с резиной, то при титровании пользуются бюретка­
ми со стеклянными кранами. Для установления нор­
мальности , раствора
перманганата
калия
лучше
использовать растворы щавелевокислого натрия или
щавелевой кислоты.
Установление нормальности К М п04 по щавелевой
кислоте. Реакция взаимодействия марганцевокислого
калия и щавелевой кислоты протекает по уравнению:
5 Н 2С2О 4+ 2КМп04+ ЗН25 0 4 = 2Мп5С>4 + ЮС02+
Н -К а^+ вН гО .
*
Д ля приготовления 1 л 0,1 н. раствора 6,3035 г перекристаллизованной щавелевой кислоты (молекулярная
масса 126,07; грамм-эквивалент 63,035) переносят в литровую мерную колбу и растворяют в воде. Очень удобно также использовать для этого фиксанал щавелевой
кислоты.
Для установления нормальности раствора перманганата калия в 3—4 конические колбы пипеткой Мора берут по 25 мл раствора щавелевой кислоты, приливают туда по 5 мл раствора серной кислоты ( 1 :1 ) и нагревают содержимое колб до 80—90°С (почти до кипения). Затем горячую жидкость медленно титруют
раствором перманганата калия. В процессе титрования
содержимое колб подогревают. Перманганат калия приливают по каплям, пока раствор щавелевой кислоты не
окрасится в бледно-розовый цвет. Израсходованный на
титрование перманганат отсчитывают в бюретке по верх­
нему краю мениска с точностью до сотых долей миллнлитра. Нормальность раствора перманганата калия
рассчитывают по общепринятой методике (см. стр. 218).
Установление нормальности КМпО+ по щавелевокислому натрию. Для этого можно использовать 0,1 н. раствор щавелевокислого натрия (молекулярная масса
134,004; грамм-эквивалент 67,002), приготовленный из
15*
V227
*
фиксанала или из перекристаллизованного и высушен­
ного препарата. Реакция протекает . по уравнению:
5Ыа2С20 4+ 2КМ п0 4+ 8Н25 0 4= 1ОСОг+ 5Ыа25 0 4+
+ 2 М п 5 0 4+ К 25 0 4+ 8 Н 20 .
,
Взвесив на аналитических весах о, 71Ш. г гчаг'-г^,
растворяют его в воде в мерной колбе на 1000 мл. После
тщательного перемешивания содержимого для опреде­
ления используют 25 мл жидкости, прибавляют к ней
5 мл раствора Н25 0 4 (1 : 1) и 20 мл горячей воды, наг­
ревают содержимое до 70—80°С (почти до кипения) и
титруют его раствором К М п 0 4 при постоянном сильном
помешивании до появления слабо-розового окрашива­
ния. Первые капли перманганата калия обесцвечива­
ются очень медленно, так как в реакционной среде нет
ионов Мп2+, каталитически ускоряющих реакцию. П о­
этому титровать сначала надо очень медленно, не при­
бавляя последующей капли раствора, пока предыду­
щая полностью не обесцветится. С появлением в рас­
творе ионов Мп2"** реакция окисления ускоряется, поэто­
му титровать можно быстрее. Однако приливать рас­
твор перманганата струей не следует. Титрование закан­
чивают при появлении не исчезающей в течение 1 мин ■
розовой окраски раствора.
ч
Трилонометрия — объемнЪ-аналитическии метод. Оп­
ределения в трилонометрии основываются на учете рас
ходования трилона Б*, образующего комплексные сое­
динения с ионами некоторых металлов. Рабочим раство­
ром, используемым для трилонометрических определе­
ний, служит титрованный раствор трилона Б. Молеку­
лярная масса этого вещества равна 372,25; грамм-экви­
в а л е н т — 186,125. Трилон Б — белый мелкокристалли­
ческий Порошок, хорошо растворимый в* воде и раство­
рах щелочей. .Его водный раствор имеет слабокислую
реакцию (рН около 6).
1.Приготовление 0,1 н. раствора трилона Ь из про­
дажного препарата: Взвесив в бюксе 20 г продажного
препарата, переносят в литровую мерную колбу, кото­
рую наполняют водой до метки, после чего содержимое
долго тщательно перемешивают. Мутный раствор фильт­
руют. Из очищенного препарата можно без последую­
щей проверки сразу готовить точно 0,1 н. раствор. Д ля
*
Двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, ком
плексов III, титрплекс III, иргалон, версен, эдта, хелатон III.
228
этого на аналитических весах взвешивают 18,6125 г со­
ли, переносят ее в литровую мерную колбу, доводят во­
дой объем содержимого до метки и тщательно его пе­
ремешивают. Точные 0,1 н. растворы трилона Б можно
получить из фиксаналов, расфасованных по 0,1 г-экв. в
ампуле.
' -V
2.
Установление нормальности раствора трилона Б.
Нормальность раствора трилона Б определяют по рас­
твору сернокислого магния (0,1 или 0,01 н.), приготов­
ленному из фиксаналов. Если нет фиксанала, можно ис­
пользовать М §504-7Н20 и л и М<гС12-6Н20 .
Для приготовления 0,01 н. растворов расходуют
1,230 г кристаллогидрата сернокислого магния или
1,020 г соли хлористого магния. В химические стаканы
вливают по 10—25 мл 0,01 н. (или 0,1 н.) раствора три­
лона Б, приливают по 10 мл дистиллированной воды,
добавляют по 10 мл аммиачного буферного раствора,
1 мл раствора солянокислого гидроксиламина, дово­
дят объем содержимого дистиллированной водой до
50 мл и после прилития 5— 10 капель 0,02%-ного рас­
твора метилового красного раствор перемешивают. Перед
титрованием добавляют в него 5—7 капель индикатора
хромогена черного и титруют 0,01 н. (или 0,1 н.) рас­
твором сернокислого магния до перехода зеленой окрас­
ки в красно-фиолетовую. Нормальность раствора трило­
на Б рассчитывают затем по формуле, приведенной на
странице 218. Приготовление необходимых реактивов
описано на страницах 79—80.
НЕКОТОРЫЕ СВЕДЕНИЯ ПО ОХРАНЕ ТРУДА
И ТЕХНИКЕ БЕЗОПАСНОСТИ
ПРИ РАБОТЕ В ХИМИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Работа в химической лаборатории требует осторож­
ности, внимания и знания правил техники безопасности,
несоблюдение которых может привести к несчастным
случаям или порче лабораторного имущества. Лабора­
торные столы, приборы, вытяжные шкафы в лаборато­
рии должны быть установлены так, чтобы проход меж­
ду ними был не менее 1 м.
Прежде чем приступить к работе по зоотехническо­
му анализу кормов, работники лаборатории должны ус­
воить следующие основные правила.
, 229
1. В лаборатории следует работать в чистом халате,
соблюдая чистоту, порядок и правила техники безопас­
ности. В лаборатории нельзя пить воду, принимать пи­
щу, курить. *
2. До начала работы во всех помещениях лаборато­
рии необходимо включать вентиляцию. Контроль за ее
работой поручают специально выделенному сотрудни­
ку. Рабочие столы и вытяжные шкафы при работе с ог­
нем должны быть покрыты огнестойкими и термостой­
кими материалами, а при работе с кислотами и други­
ми едкими веществами — антикоррозийными материа­
лами.
■
Ауализы, связанные с выделением и образованием
вредных, ядовитых, огнеопасных паров, газов и т. п.,
проводят в вытяжном шкафу под тягой. При неисправ­
ности вентиляции работу в вытяжных шкафах немед­
ленно прекращают. Створки вытяжных шкафов в пере­
рывах между анализами необходимо держать закрыты­
ми. Во время работы их нужно открывать как мож­
но меньше. Приподнятые створки следует прочно укре­
пить.
- " “
1
При работах, сопровождающихся выделением вред­
ных газов и паров, над местом их образования устанав­
ливают ловушки, обеспечивающие их поглощение.
3. Реактивы и материалы надо хранить строго по
ассортименту в соответствующей посуде, на которой
должна быть этикетка с названием химического веще­
ства или иного материала. Нельзя пользоваться реакти­
вами, хранящимися в банках без надписи. Недопусти­
мо хранить вместе вещества, химическое взаимодейст­
вие которых может вызвать пожар или взрыв.
4. Работы, связанные с выделением пыли или обра­
зованием' мелких кусочков веществ (просеивание, из­
мельчение, например, стекла, используемого при опре­
делении каротина в кормах), а такж е анализы, при
которых возможно разбрызгивание жидкости, надо вы­
полнять в вытяжном шкафу под тягой в защитных оч­
ках, фартуках и нарукавниках; в необходимых случаях
используют респираторы.
5. Сосуды, предназначенные для работы под давле­
нием или вакуумом, предварительно испытывают на
максимальное давление и максимальное разрежение.
Д ля защиты работающих (в случае аварии) делают спе­
циальные ограждения.
При смешивании веществ, сопровождаемом выделе­
нием тепла, необходимо пользоваться термостойкой хи­
мической фарфоровой или полиэтиленовой посудой. Н а­
гретые соеуды нельзя закрывать пробками до их
полного осты вания^агревая жидкость в пробирке и дру­
гих подобных сосудах, необходимо использовать специ­
альный держатель. При этом горло сосуда направля­
ют в сторону от себя и соседей по работе.
При работе с источником ультрафиолетового излуче­
ния работник лаборатории обязан надевать специаль­
ные темные очки. Д ля защиты глаз работающих такие
лампы оборудуют черным ограждением. Над источни­
ком ультрафиолетового излучения устанавливают мест­
ную вытяжную вентиляцию.
При переливании жидкого азота работающий дол­
жен надевать на лицо специальную защитную маску из
прозрачного плексигласа.
По окончании работы в лаборатории рабочее место
необходимо привести в порядок, выключить вытяжные
шкафы и все электроприборы, закрыть газовые и водо­
проводные краны, а также окна и форточки.
6.
При работе с кислотами и щелочами (концентри­
рованными и слаборазведенными) важно, чтобы они не
попадали на одежду, столы и т. п. Особенно опасно по­
падание реактивов в глаза, на руки, лицо, так как от
этого возникают ожоги. При работе с концентрирован­
ными кислотами ,и щелочами необходимо соблюдать
следующие меры предосторожности:
а) работу проводить в вытяжном шкафу; во время
работы надевают очки, резиновые перчатки, нарукавни­
ки и резиновый фартук. Для переливания из бутылей
кислот, щелочей и других агрессивных жидкостей поль­
зуются специальными сифонами. Концентрированную
кислоту из сосуда берут с помощью специальной пи­
петки с грушей, сифоном или мерным цилиндром. При
приготовлении разведенных растворов кислот вначале
в сосуд наливают необходимое количество воды, а з а ­
тем туда понемногу приливают кислоту. При перемеши­
вании дымящейся соляной и азотной кислот нос и рот
закрывают марлей, смоченной слабым раствором соды,
или пользуются респиратором. Работу эту необходимо
проводить в вытяжном шкафу. Готовя растворы щело­
чей, определенную массу щелочи помещают в большой
сосуд с широким горлом, заливают необходимым коли'
231
чеством воды, после чего содержимое тщательно пере­
мешивают;
,
б) большие куски едкой щелочи разбивают на мел­
кие в отведенном для этого месте, причем разбиваемые
куски накрывают бельтингом или другим материалом.
При выполнении этой работы пользуются защитными
очками, фартуком и перчатками. Концентрированные
кислоты и щелочи, загрязненные в процессе анализа,
выливают в раковину после предварительной их нейт­
рализации или разбавлении их водой;
в) концентрированные кислоты и щелочи в лабора­
тории хранят в специально отведенном месте в исправ­
ных корзинах или в обрешетке, выложенной минеральватой или стружкой. Бутыли с кислотами, щелочами
и другими едкими веществами переносят в специаль­
ных ящиках, корзинах или перевозят на специальной
И
тележке. Перед транспортировкой кислот, щелочей
других агрессивных жидкостей проверяют исправность
тары. Пролитую на пол или стол серную кислоту засы­
пают песком, который затем собирают совком, поли­
вают предмет содой, после чего поверхность моют
______— __ _______
л
а т т л
а
гтгг>
П
Л
ГГ А Т I
Ч Л Ск
ТТ
О
7 Пои работе с легковоспламеняющимися вещества------ ——~±~— —
— эфиром
———
^ апллттл»# ацетоном,
бензином, уксусноэтиловым эфиром, сероуглеродом, петролейным эфиром и другими легковоспламеняющимися
жидкостями — необходимо проявлять особую осторож­
ность. Нельзя переливать их в лаборатории из больших
емкостей в маленькие, хранить в теплом месте (около
нагревательных приборов) и нагревать на открытом ог
не Все работы с легковоспламеняющимися и взрыво
опасными веществами выполняют в вытяжном шкафу
без применения огня.
Во время работы с легковоспламеняющимися и
зрывоопасными веществами в помещении следует
курить,
“
—--зажигать
спичек,
не
шштшк
потушить горелки, не
и
электроприборы,
при
выключить муфельную печь
возникнуть
искра.
Нагреваработе которых может
ют указанные вещества в вытяжном шк< ФУ
или водяной бане I закрытым электронагревателем.
По окончании работы перед разборкой прибора, в
котором находятся легколетучие воспламеняющиеся жид­
кости следует погасить пламя горелки (при перегонке,
экстрагировании и т. д.), охладить электронагреватель232
ные приборы, так как эти вещества могут воспламенять*
ся и при отсутствии открытого огня.
Если по методике необходимо нагревание сероугле­
рода, то проводят это на водяной бане при температуре
не выше 60°С, предварительно нагретой в другой ком­
нате.
При нагревании легковоспламеняющихся жидкостей,
таких, как эфир, диоксан, тетрагидрофуран, могут быть
сильные взрывы, особенно в тех случаях, когда они со­
держат перекиси. Поэтому до начала работы необходи­
мо убедиться в отсутствии в них перекисей (проба с
йодистым калием)*
Нельзя хранить легколетучие
жидкости — эфир,
эфирные растворы, ацетон и другие и выделяющие газы
реактивы — раствор гипосульфита натрия, хлористый
алюминий и др. в тонкостенной посуде, плотно закрытой
пробкой.
\/
Горючие и легковоспламеняющиеся жидкости хранят
в толстостенных склянках, железных ящиках, выложен­
ных асбестом. Ящики устанавливают вдали от прохо­
дов и тепловыделяющих поверхностей, обеспечив удоб­
ный подход к ним. Общий запас огнеопасных жидкос­
тей, одновременно хранящихся в каждом рабочем по­
мещении лаборатории, не должен превышать 2—3 л. На
рабочем месте огнеопасные и взрывоопасные вещества
держат лишь в количествах, необходимых для выполне­
ния анализов. Отработанные горючие жидкости соби­
рают в специальную плотно закрывающуюся склянку;
их при необходимости регенирируют или уничтожают.
Сливать эти вещества в канализацию запрещено. При
воспламенении указанных веществ для тушения исполь­
зуют огнетушитель, песок, листовой асбест, войлок,
шерстяное одеяло и т. п.
8.
Особенно важно защищать глаза, для чего при ра­
боте с металлическим натрием и калием, едкими щело­
чами, кислотами, взрывчатыми веществами или взрыв­
чатыми смесями, а также при работе с приборами под
уменьшенным давлением (перегонка в вакууме, откачи­
вание воздуха из эксикатора) или работе при повышен­
ном давлении (работа с запаянными трубками, в авто­
клавах и др.) используют очки.
Хранить калий и натрий следует с большой осторож­
ностью под слоем сухого керосина в специальных бан­
ках, закрытых корковыми пробками, избегая соприкос233
новения этих реактивов с водой. При отгонке эфира над
металлическим натрием необходимо использовать воз­
душную или песочную баню, а не водяную или паро­
вую. Нельзя сушить металлическим натрием бромистый
этил, хлороформ, так как это приводит к взрыву.
9.
Особую осторожность необходимо соблюдать при
работе с такими веществами, как синильная кислота,
цианистый калий, эфир, хлороформ, фосген, диметилсульфат, хлоралгидриды низших кислот, хлор, бром,
ртуть, окись углерода, окись и двуокись азота, амид
натрия, металлические натрий и калий. Во избежание
отравлений, ожогов и других поражений при работе с
указанными веществами важно строго соблюдать пра­
вила техники безопасности.
Меры предосторожности при обращении с ядовиты­
ми веществами. Комнаты или шкафы (сейфы), в кото­
рых хранятся ядовитые средства, должны закрываться
на замок. По окончании рабочего дня их опечатывают
сургучной печатью или пломбируют. Ключи от комнаты
или шкафов (сейфов), где хранятся ядовитые средства,
а также печать или пломбир передают лицу, ответст­
венному за эти средства.
Ядовитые вещества в лабораториях хранят в отдель­
ной комнате в металлических шкафах , или сейфах под
замком. (В небольших лабораториях допускается их
хранение не в отдельной комнате.) Особо опасные сред­
ства — сулема, цианистый калий и др. — надо держать в
специально выделенном внутреннем отделении этих
шкафов или сейфов. Окна комнаты, где хранятся ядо­
витые вещества, защищают железными решетками, а
двери обивают железом.
Взвешивают и отмеривают ядовитые вещества в вы­
тяжных шкафах, используя специально выделенные для
этого приборы и посуду (весы, воронки, ступки, цилинд­
ры и т. д.). На посуде (упаковке) с ядовитым реактивом
'д о л ж н а быть этикетка с его наименованием и изображе­
нием скрещенных костей и черепа, а также с надпися­
ми: «Яд», «Обращаться осторожно!».
Важно соблюдать осторожность при работе со
ртутью. Работать с ней разрешается только в специаль­
ных помещениях. Разлитую ртуть тщательно собирают, а
место, где она была разлита, на длительное время з а ­
сыпают серой или заливают хлорным железом. Пары
ртути вызывают медленное, но тяжелое отравление. К
234
выполнению работ, связанных с применением ртути или
ртутных приборов и аппаратов, допускаются лишь сот­
рудники,. прошедшие специальный инструктаж.
Первая помощь при несчастных случаях во время
работы в лабораториях. В легкодоступном и постоян­
ном месте лаборатории должны находиться заранее
приготовленные растворы бикарбоната натрия, разбав­
ленной уксусной и борной кислот и другие реактивы. В
комнатах, где проводят анализы, держат аптечки с на­
бором перевязочных средств и необходимых медика­
ментов.
Для тушения пожара лаборатории снабжают ящи­
ком с песком, огнетушителями, асбестовым полотном,
кошмой или войлоком и специальными растворами.
Персонал лаборатории должен быть обучен оказанию
пострадавшим первой помощи при несчастных случаях
с учетом специфики данной лаборатории.
Оказание первой помощи. 1. При попадании на ко­
жу кислот поврежденное место обмывают большим ко­
личеством воды, для чего в лаборатории держат спе­
циальный резиновый шланг, легко надевающийся на
кран. Пораженный участок кожи обрабатывают затем
5%-ным раствором двууглекислой соды.
2. При попадании на кожу щелочей ее обмывают
сначала водой, а после этого 4%-ным раствором уксус­
ной кислоты или 2%-ным раствором борной кислоты.
3. При попадании кислоты или щелочи в глаза необ­
ходимо хорошо пробыть их струей воды и осушить по­
лотенцем, после чего обратиться за медицинской по­
мощью.
V
4. При термических ожогах обожженное место следу­
ет смазать спиртом или 3—5%-ным раствором марган­
цевокислого калия, мазью от ожогов или 3—5%-ным
свежеприготовленным раствором танина.
Если обожжены большие участки тела, то после об­
мывания их водой необходимо немедленно вызвать ско­
рую помощь.
5. При вдыхании паров брома или хлора следует
вдыхать пары спирта, а затем выйти на свежий воздух.
Во всех случаях после оказания первой помощи пост­
радавшего отправляют к врачу.
При возникновении пожара нужно быстро закрыть
окна, форточки, выключить вентиляцию, моторы и дру­
гие электроприборы, вынести во двор горючие жидкое!Я |
ти, металлический натрий и баллоны с горючим газом
и принять все меры к его тушению.
Применяют несколько способов тушения пожара.
При загорании деревянных предметов пожар можно по­
тушить водой, песком и с помощью огнетушителя. При
загорании одежды нельзя бежать. Пострадавшего не­
обходимо быстро положить на пол и накрыть кошмой,
одеялом или облить водой. Если горят нерастворимые
в воде вещества, например бензин, скипидар, применять
воду нельзя: пожар от этого может усилиться. Его сле­
дует тушить песком. Можно также накрыть пламя ас­
бестом. Если горящее вещество, например спирт, ацетон,
растворяется в воде, то его можно тушить водой.
Хорошим средством для тушения пожаров является
четыреххлористый углерод. Применяют также солевые
растворы: насыщенный раствор углекислого натрия или
смесь из 40—50% воды, 40—55% хлористого цинка и 5—
20% хлористого магния. Растворы хранят в определен­
ном месте в соответствующих емкостях.
Пенные и углекислотно-бромэтиловые огнетушители
предназначены для тушения начинающихся очагов по­
ж ара при воспламенении всех горючих твердых и ж ид­
ких веществ, за исключением тех, которые химически
взаимодействуют с огнегасительными веществами, уси­
ливая горение или создавая опасность взрыва (напри­
мер, щелочные средства, алюминий, органические и дру­
гие соединения),
ПРИЛОЖЕНИЕ
Таблица
1
Химический состав кормов (%)*
Сырой
протеин
>т
12
н
и С*
Корма
св
•О=*
Я
3*=
г
В
м
5
ча> щ
о
св
ои
аид
со
04
а
*
ц>АИ
03.1001
И я
03 V
0
1
5Ню
н
«хг) О ад
п 3
н
(О
X
а
>
Й
•ч (и о52
ШН
•5
О
СО
Зелены й корм
71,71 3 ,8
Трава суходольного луга
68,9 3 ,9
заливного луга
»
степная
59 ,4 4 ,5
> злаковая заболоченно] (К
:!>§
луга
72 ,0 3,1
>
торфяно-болотистого л
га
73,0 2 ,2
»
горного луга
64 ,5 4,-2
»
лесных пастбищ
74 ,5 3 ,3
»
естественного луга
68,5 3 ,7
»
луговая пастбищная
6 6 ,5 4 ,0
Отава естественного луга
65,0 4 ,8
>
травы луговой
73,7 4 ,7
Кукуруза зеленая, целое рас
80,1 2 ,2
тение
76,5 3 ,9
Клевер
70,3 5 Г6
Люцерна
86,0 3 ,0
Люпин
Ежа сборная
69 ,0 3 ,7
62,3 4 ,3
Костер
Суданка
75,4 4 ,2
Рожь
78,6 3 ,3
Тимофеевка
62,1 3,1
Клевер с тимофеевкой
74 ,9 3 ,6
Вико-овес
77,6 3 ,7
78,3 3 ,5
Смесь злаково-бобовая
77,1 2 ,8
Смесь злаковая
8 8 ,(М 2 ,0
Капустный лист
82,51 2 ,6
Ботва свеклы сахарной
2 8 1,0 0 ,9 7 ,7 13,4 2 ,5
2 5 1,4 1,0 8 ,6 15,0 2 ,6
3 7 0 ,8 1,6 12,0 19,3 3 ,2
2 4 0 ,7 0 ,7 10,0 11,6 2 ,6
1
3
2
■2
2
3
4
6
6
3
9
9
4
0
0 ,6
0 ,6
1,0
0 ,8
1,1
1,4
0 ,7
0 ,9
1;4
1,0
1 ,0
1,0
1,1
1,2
9 ,3
10,0
8,1
9 ,0
10,2
8 ,6
8,1
12,9
17,2
10,8
15,2
15,4
17,5
9 ,3
1,7
2 ,7
2 ,3
2 ,6
2 ,9
3 ,0
3 ,0
1
3
4
2
2
3
3
2
2
3
3
3
2
1
2
7!
4
6
2
1
3
4
5
4
0
0
0
3
5
0
0 ,5
0 ,5
1,0
0 ,8
1,6
1,0
0 ,8
0 ,8
0 ,7
0 ,6
0 ,7
0 ,5
0 ,5
0 ,5
0 ,6
0 ,5
0 ,8
0 ,8
0 ,4
1,2
1,0
0 ,7
0,8
1,0
0 ,8
0 ,8
1,0
0 ,8
0 ,4
0 ,7
5,1
6,1
8 ,4
4 ,0
10,5
11,6
7,1
6 ,3
12,8
7,1
5 ,8
5 ,4
7 ,2
1,5
2 ,7
10,6
10,8
11,9
5 ,3
13,2
17,9
10,6
9 ,2
18,5
11,8
9 ,9
10,2
10,3
6 ,8
8 ,5
1,5
1,9
3 ,0
1,3
2 ,4
2 ,9
2 ,0
1,8
2 ,5
1,8
2 ,2
1,6
1,8
1,9
3 ,0
Сено
Луговое
»
бобово-злаково-раз
нотравное
э
злаковое
16,3 9 ,3 7 ,6
1,7 2 ,6 25,6 39,7 6 ,5
16,8 11,6 9 ,3 2 ,3 2 ,2 24,7 38,2 6 ,5
16,2 8 ,9 7 ,6 1,3 2 .4 26,2 39,8 6 ,5
237
Продолжение
• со
5а
н
о со
(Л ш
Н
Корма
03
р
Э
"
Н
СЗ
оз:
*
И
О
Сб
»
разнотравное
»
суходольное
Заливное
Болотное
Горное разное
Высокогорное
Целинное
Лесное
Клеверное посевное
Люцерновое
Клеверо-тимофеечное
и
и
да
»3
сс6п
о
я
со т
аг
«в
<
=
?
о
го
15.01 9.5 8.5 1,0 2,5 25,7 40,4 6.9
18,8 8,8 7,4 1.4 2.4 23,4 40,9 5.7
16.2 9.5
18,0 8.4
14,5 9,8
14.7 11,1
12.9 8.6
17,2 8.5
15.7 13,0
15,51 14,7
18.9 9.6
Травяная
Люцерн ввая
Клеверная
Злакового разнотравья
*
ои
в
/
ан 3
1,81 2.72 4 .8 40 .7
1.4 2.4 24,3 41,0!
2,01 2,7[24,§ 40,7
1.4 2.8 23,5 40,9
0,8 2.8 26,5 42,4
0,7 2.7 24,1 41,01
11.0 2 , 0] 2.4 23,3 38,9
11.5 3,2' 2,1 25,9(33,8
7,6 2 , 0| 2,4125,9137,9
7.7
7.0
7.8
9.7
7.8
7.8
6,1
5.9
7,4
7,0
6.8
6,ТЗ
6.7
7.7
5,3
мука
13,2 17,3 15,3 2 ,0 3 ,2 [20 Д 3 7 ,9 7.7
14,3 13,1 12,0 1,1 4 ,2 2 3 ,2 3 8 ,0 7.2
11.3 9 ,6 8,1 1 ,5 3 ,5 23.5' 47 ,3 4.8
Солома
Овсяная
Пшеничная озимая
»
яровая
Ячменная
Ржаная
Просяная
Кукурузная
Г ороховая
4,0
3.7
4,6
4,9
3.3
3,0
3.4
3.5
3,9
2,4
6.8 5.7
22,0] 6,0] 4.7
15,61 7.4 6.8
16,7
15,4
15,1
17,0|
15.0
16.0
1,0! 1.7 33.0138.6 6.0
0,3 1.3 3 6 ,4 3 6 ,8
1,1 1.5 35 ,1 36,81
1,0 1,9 3 3 ,1 3 5 ,9
0,9 1.4 3 7 .8 Э8,2
6,4
6.9
7.2
4.3
1,1 2,0 2 7 .8 40,6! 6,8
1,3 1.6 2 4 .6 39 ,2 5.9
0,6 1.7 3 3 ,0 3 7 ,9 5,0
Сенаж
Клеаерн ый
Вико-овсяный
Люцерновый
Злаковой травосмеси
5 3 ,5
5 0 ,0
5 0 ,0
50 ,3
6 ,7
5 ,2
7 ,9
5 ,4
4,1
3 ,2
5 ,0
2 ,8
2 ,6
2 ,0
2 ,9
2 ,6
1,2
1,7
1 ,2
1 ,4
12,4 2 2 ,7 6.5
13,9 2 2 ,7 6.5
14,9 18,6 7,4
11,0 2 2 ,5 М
С илос
Кукурузный в фазе молочной
80 ,6 1 ,6 0 ,8 | 0 ,8 0 ,4 5 ,§ 10,2 1,7
спелости
в фазе молочно­
»
восковой спелости 7 5 ,7 1 ,8 1 ,2 0 ,6 0 ,7 6,1 13,6 2.1
238
*> >-,-:«а* ***-*«. -•«-**
• • •-' г - :'
Ч Щ '& 'Г - '' '
Продолжение
Сырой
протеин
Корма
С
О
3
и
О
СО
П о д с олн ечн иков ый
Травы луговой
Вико-овсяный
сои
0
Ь д2 1 Ом
м щ
3Щ
2
3
3
с
у
а
в
со
О
X
X
в
и
я
о
СО
76.0 2 .5 1.7 0 ,8 1,1 7 ,0 1 0 ,6 2,8
77 .0 3 ,8 2 ,4 1,4 2 .3 6,6 7 ,3 3 ,2
71 .0 4 .6 2 .7 1,9 1 .4 8,8 11,6 3,1
К о р н е к лгу б н е п л о д ы ,
Свекла кормовая
»
полусахарная
»
сахарная
Картофель
Капуста кормовая
Морковь
Тыква
Куузику
Арбуз кормовой
ои
0
0
*(Т)
Н
ил
«н
си^
33
ев и *>
5
®
Н
со О«
5Н
* «
^3 3х
0Ч
> го С
О
V
я
10 Н
.
87,6
82,8
76 ,8
77,7
86,4
8 7 ,7|
9 0 ,2
89,6
91 ,5
сочные
1,3
1,6
1,6
1,9
2 ,2
1,2
1,3
1,2
0 ,7
0 ,8
0 ,9
1 ,0
1 ,3
1,5
0 ,7
1 ,0
--- |
0 ,3
плоды
0 ,5
0 ,7
0 ,6
0 ,6
0 ,7
0 ,5
0 ,3
--0 ,4
0,1
0,1
0 ,2
0,1
0 ,4
0 ,2
0 ,4
0,-1
0 ,3
0 ,9
1,1
1,4
0 ,6
2 ,3
1,1
1,3
1,4
2,1
9,1
13,2
19,0
18,7
7,1
8 ,9
6 ,2
6 ,4
4 ,7
1 ,0
1 ,2
1 ,0
1 ,0
1,6
0 ,9
0 ,6
1,3
0 ,7
0 ,9
1,2
1,3
1,7
0 ,8
2 ,0
1,2
2 ,9
2 ,4
2 ,6
5,1
3,1
4 ,7
4,1
3 ,3
2.1
1,9
2 ,9
2 ,3
1,6
1,9
5 ,2
15,3
1,3
2 ,7
9 ,9
8 ,3
2 ,6
2 ,2
3 ,5
5 ,5
7 ,7
5 ,4
13,2
7 ,3
4 ,3
66,1
5 8 ,7
60,8
66,8
68,4
65,8
65,7
48,2
54,1
32,5
27 ,6
53,6
1 ,5
3 ,3
3 ,3
1.8
1,8
2 ,3
3 ,0
3 ,2
2 ,8
3,1
5 ,2
3 ,1
Зе р но
Кукуруза
Овес
Просо
Пшеница фуражная
Рожь
Сорго
Ячмень
Бобы
Горох
Люпин
Соя
Чечевица
Побочные
14,8 10,2 9 ,3
13,3 10,7 9 ,5
12,0 12,3; 11,0
12,0 14,7 13,0
13,0 12,7 11,9
13,0 12,5 10,5
13,0 10,5 9 ,3
12,0 27,3 24,4
13,6 22,2 19,8
14,5 31 ,5 28,9
11,4 33,2 28,1
13,1 24,6 2 1 ,5
продукты переработки
других кормов
зерна, свеклы
и
Стержни кукурузных початков 11,7 3,1 2 ,9 0 ,2 0 ,9 3 2 ,5 4 9 ,9 1.9
14,8 15,5 14,0 1,5 3 ,2 8 ,4 53,2 4.9
Отруби пшеничные
13,8 13,9 11,9 2 ,0 3 ,5 12,8 51,1 4.9
»
ячменные
239
\
П оодолжение
Сырой
протеин
Корма
ев
СО
е(
О
СО
о
с,
О
а
3ц
X
ч
%
о
»
о
б
о
9 1 ,0 1,91 1 ,3
Барда хлебная свежая
8,0 14,9 12,41
>
хлебная сухая
»
картофельная свежая
9 5 ,3 1 .2 0 ,9
»
картофельная сухая
8,0 1 4 ,9 1 2 ,4
»
кукурузная свежая
88,2 2 .7 2 ,2
»
кукурузная сухая
8 .5 2 2 ,0 1 9 ,6
Д рож ж и кормовые
11.5 4 3 ,7 3 6 ,8
»
пекарские
73 .2 13,010,71
Дробина пивная свежая
76.8 5 .8 5 ,4
»
сухая
11.3 121,7 2 0 ,0
Ж ом свежий
88.8 1.2 1,0
8 9 ,9 2 ,6 1 ,5
» аммонизированный
13,2 7 ,7 7 ,3
> сушеный
19 ,6 г 9 , 9
Патока кормовая
Пищевые остатки столовых и
8 3 ,5 2 ,7 2 ,2
кухонь
Пищевые остатки общественно
|78,8
3
,5
3
,0
го питания
1
1
,2
3
0
,4
2
9
,8
Жмых конопляный
1
0
,9
2
9
,2
2
7
,6
>
льняной
8
,
8
3
9
,
2
3
6
,
4
»
подсолнечниковый
1
2
,9
3
8
,5
3
7
,0
»
соевый
9 ,0 3 7 ,0 3 6 ,2
»
хлопчатниковый
Корма
животного
Мука мясо-костная
20 %)
(золы
до
М
Н
<
в
9Н
С
и
Ф
8 Ч
Ш
СО
0,6! 0 ,4 0 ,9 4 .5
2.Й 6 , 020,8 51.2]
0 ,3 0,6 0,6 1.8
2 ,5 6 , 020,8 43.2]
0.5) 1,0 1,1 6 .5
2,41 1 0 ,9 1 0 ,6 44,5]
6 ,9 2 ,2 1 ,4 33 .9
2 ,3 0,8 0,1 10,1
0,4! 1 ,7 3 ,9 10,7
1,7 5 ,9 1 6 ,0 4 0 ,6
0,2] 0 ,3 3 ,3 5 ,7
1.1 0 ,6 3,1 2,5]
0 ,4 0 , 5 1 9 , 5 5 5 , 7
6 3 .0
0 ,5
1 .3
7 .1
0 ,5
7.1
0 ,5
3 .5
7 .3
2 .3
1.1
4 .5
0 ,7
1 .3
3 ,9
7 ,5
1,1 0 ,6 1 0 ,6 1 ,5
0 ,5 1 ,7 0 ,9 13,0
0 ,6 1 0 ,2 2 2 ,6 1 7 ,9
1 ,6 9 , 6 1 0 , 5 3 2 , 9
2 ,8 1 0 ,2 13,0 2 2 ,5
1 ,5 7 ,6 4 ,8 3 0 ,7
0 ,8 8 , 2 1 1 ,0 2 8 , 4
2 ,1
7 ,7
6 ,9
6 ,3
5 ,5
6 ,4
происхождения
8 ,3 5 1 ,7 4 3 ,9 7 , 8 1 2 ,8 0 ,8 4 ,3 2 2,1
6 ,0 1 3 ,7
10,4 5 4 ,3 4 8 ,6 5 ,7 15,6
0 ,4 2 8 ,9
9 ,4 5 9 ,4
1 ,9
Мука мясная
Мука рыбная непищевая
Молоко цельное
(жирность
[87,01 3 ,6 | 3 ,6
3,5— 4%)
9 0 ,9 3 ,3 3 ,3
Молоко снятое
190,5 3 ,5 | 3 ,5
Пахта
из
гидролизованного
Мука
9 ,0 7 5 ,0
пера
3 ,8
0 ,3
0 ,7
4 ,9 0 ,7
4 ,8 0 ,7
4 ,6 0 ,7
4,0]
2 010,0
яр
* И з книги «Корма С ССР, состав и питательность». М., 1964.
240
е§й
О
,
Таблица
2
Корма
Зеленый
И
Ч
4»
(О
Жира
1
о С*
#5 ®
чег ш
в
в 0
22
5 -е
Протеина
Коэффициенты переваримости питательных веществ кормов для
’
крупного рогатого скота
53
50
58
60
70
59
68
к
2
4
Н
о!
6нГ
<и
к
ссао
50
46
43
41
49
62
52
58
53
61
46
68
66
68
60
60
55
61
57
62
77
63
72
62
41
43
50
73
72
55
65
52
58
71
корм
Трава заливного луга
Г »
лесного пастбища
I »
луговая пастбищная
пастбищная злаково-разнотравная
в фазе цветения
в фазе плодоношения
пастбищная
разнотравно-злако­
вая, до цветения
» типчаково-ковыльного пастбища
> степная
культурного пастбища, отава
Кукуруза зеленая
ж
выход в трубку
»
до выбрасывания метелки
»
цветение
>
молочно-восковая спелость
Кукуруза, початки
Овес
Рожь озимая
Сорго
Суданка
Ячмень, начало выхода в трубку
Ежа сборная
Клевер
То же, цветение
Люпин кормовой
Люцерна
То же, цветение
Соя зерновая, зеленая
Эспарцет
Вико-овсяная смесь
То же
Клеверо-тимофеечная смесь
Ботва сахарной свеклы
»
кормовой свеклы
> картофеля
66
61
59
68
50
69
62
58
69
77
69
74
62
71
70
73
85
60
67
73
86
61
74
69
71
52
62
60
71
59
67
50
65
59
66
67
64
68
64
62
73
78
46
63
55
66
68
46
66
75
79
64
68
8
62
71
80
74
75
71
80
74
73
61
72
67
56
68
67
56
54
52
51
49
49
48
79
73
65
61
68
77
59
75
57
58
54
35
49
18
51
73
51
57
53
68
70
67
72
54
78
67
72
85
57
50
48
61
48
65
75
64
66
53
78
76
81
69
76
83
62
63
73
75
88
50
29
56
59
64
73
56
43
61
74
76
84
69
80
60
77
69
73
79
83
76
61
39
34
53
50
54
56
51
54
65
68
59
68
Сено
Болотное
То же
Горное
)6. Заказ 7445
53
241
Заливное
Злаково-р азнотра вное
Лесное
Луговое
злаковое
»
бобовое
»
злаково-бобовое
»
злаково-бобово-разнотравное
злаков о-осоковое
злаково-разнотравное .
>
разнотравное
суходольное
Целинное
Житняковое
Костровое
Суданкн
Тимофеевки луговой
•*
степной
Клеверное
Люцерновое
Клеверо-тимофеечное
1_
за
—
1—
1—
I—
1—
—
Г—
I—
—
—’
—
60
1~
—
—
| —
1—
—
Клетчатки
Ж ира
Белка
Корма
Протеина
Органическо­
го вещества
П родолжсние
50 51 49 52
49 47 43- 53
43 42 46 47
53 48 46 50
58 55 37 56
! 75 68 5 0 39
56 58 37 49
59 32 51
42
54 50 51 49
48 44 43 49
59 55 57 40
' 50 49 42 ; 56
46 40 ! 42 ' 51
57 52 44 58
60 52 44 55
62 ! 57 52 63
58 53 50 51
58 53 45 62
, 62 55 55 51
70 66 43 43
54 52 50 ■49
Vт
09
О)
иа
60
54
60
60
63
70
66
67
64
61
60
60
60
63
60
65
61
68
69
66
63
л
С ол ом а
44
42
32
38
31
32
39
38 55
45 52
53 46
50 3 7
50 40
51 39
5 4 В 53
1
—
60
42 40 1 40
—
— I — 65
51 — 50
31 ! 58
25 18
52 63
--71
—
---
57 34 70 1| 62
60 I --- | 69 71
67 63 64 64
57 51
75 47
48
* —— 46
— 43
--- И
—
19
—— 24
--- 27
Гороховая
Г речишная
Овсяная
Пшеничная озимая
яровая
Ржаная
Ячменная
Другие
40
40
32
9
19
16
21
к о р мм аа
Побеги и листья березы
Хвоя сосны
Сенаж из клевера
С илос
Кукурузный
То же
Початков кукурузы
Подсолнечниковый
242
72
72
84
65
|
Корнеклубнеплоды,
аЬ---
_
_
-
87
-
-
-
-
66
—
1
80
БЭВ
63
66
69
72
69
Клетчатки
35
48
49
49
80
51 53
57 ! 77
55 69
53 67
69 77
культуры
45
64
74
54
55
49
44
49
29
60
62
61
93
82
91
96
98
95
66
95
93
88
90
90
86
73
78
75
84
83
76
76
62 46
86 66
ГЗ 25
79 33
63 47
60 ! 53
74 35
55 48
93
94
77
75
92
92
^8
88
87
86
72
79
71
80
88
ез
80 58
63 46
89 ; 59
81 42
ео 33
90 33
65 51
65 58
91
93
95
79
78
81
90
92
73
76
87
67
70
79
72
79
67
75
76
78
64
73
84
62
42
80
91
80
58
53
60
60
86
73
78
75
84
83
76
. 81
87
86
72
1 79
77
80
88
83
93
59
69
50
70
30
41
30
-------------------------------
55
56
------------------------------
Зерноваядерт
ЩД' №\ ? V•V: *
лГороховая
^Кукурузная
Овсяная
• Просяная
I Пшеничная
Ржаная
Ячменная
|Т о же
*| «
(
1
|Б обовая
| Гороховая
Кукурузная
\ Овсяная сеяная
»
непросеянная
Просяная
Пшеничная
Ржаная
1 16*
49
53
64
63
66
б а х 1 евые
Картофель
Г*
Капуста кормовая
То же
Морковь
Свекла кормовая
Свекла п о л у сахарная
Я© же
Свекла сахарная
Топинамбур
Жыква
§Го ж е
Брюква
I
Жира
Разнотравный
Из кукурузы с подсолнечником
Из кукурузы с соей
Из клевера с тимофеевкой
Из кормового сладкого люпина
Белка
Корма
Протеина
Органическо­
го вещ естза
Продолжение
К о р м о в а я м ука
__________________
-
---------------------------
«
—
—
__________________
‘243
|
К
Щ
Жира
Клетчатки
А
Белка
Корма
Протеина
Органическо­
го вещества
Продолжение
ш
юI
52
89
80
.52
89
80
86
93
75
43
14
23
74
88
90
ф
Рисовая
Чумизы
Ячменная
—
—
Остатки
технических
Зародыши кукурузные
Л узга кукурузная
>
овсяная
Мучель просяная
Мучка гречневая
»
овсяная
*
пшеничная
»
рисовая
»
соевая
>
ячменная
Отруби гороховые
*
кукурузные
»
овсяные
»
пшеничные
»
ржаные
>
рисовые
»
ячменные
Пыль мельничная
»
пшеничная
Стержни кукурузных початков
Шелуха гороховая
»
просяная
»
'рисовая
»
соевая
»
ячменййя
Барда хлебная свежая
>
сушеная
»
картофельная свежая
>
картофельная сушеная
>
кукурузная свежая
>
кукурузная сушеная
Дробина пивная свежая
*
сушеная
Д рож ж и кормовые
»
пекарские
»
пивные
Ж ом разный
244
производств
--- 1 78 78 91
54 54 77
I
28
19 38
69 67 73
70 68 84
— 79 79 76
•
86 86 89
65 65 77
--- , 89 89 90
'+
77 77 79
75 75 71
—
54 54 77
50 50 55
47 74 75 60
73 73 81
1“
--- 65 65 77
%
81 81 78
‘■
--- 1 83 83 64
— ; 83 83 52
— — 1 —-* 34
—* 53 53 57
—
20 --— ; 10
10 67
44 44 57
-— 28
19 38
64 52 93
64 52 93
т
^яш
ш
яв 52 42 40
52 42 40
*
75 65 64 90
69 50 43 91
73 73 88
78 78 70
89 89 100
I
— а 91
91 63
91 91 63
•—— 50
50 50
75 84
57 76
33 30
23 76
*
31
83
25 75
35 95
25 79
39 69
23 92
80 92
57 76
37 71
38 62
33 74
25 79
22 78
49 50
23 48
60 54
79 83
4
11
10 35
51 73
33 30
50 80
50 80
28 64
28 64
90 73
83 73
39 62
47 57
— . 90
— 100
--- 100
71 85
Мезга картофельная свежая
»
силосованная
»
сушеная
»
кукурузная сушеная
Патока кормовая (мелясса)
Жмых конопляный
»
льняной
»
подсолнечников ый
То же
Жмых соевый
>
хлопчатниковый
Шрот кориандровый
»
кукурузный
льняной
То же
Шрот подсолнечниковыи
»
соевый
То же
Шрот хлопчатниковый
То же
Корма
животного
Молоко цельное свежее
Молозиво коровье
Молоко цельное сухое
Молоко снятое свежее
сухое
»
Пахта
Сыворотка
Мука
»
»
>
Яйцо
кровяная
мясо-костная
мясная
рыбная
куриное
Шш
X
<
ил
*
. И
о
си
С
«в
в
а>
Ш
_
|
27
— ,| 27
24
53
БЭВ
о2
св
Жира
Корма
*
о
V* О
С\]
5 «
6 5
X 3
ев
ий
в>
съ
К летчатки
Продолжение
83
83
83
91
89
— I --- 1
1 91
75 I 78 87 20 57
83
84 79 87
47
67 55 80
71 I 75
91 91 90 26 71
Щ Р90В 88 88 78 94
82 I 86 I 83 99 ! 50 78
55 55 88 56 80
78 78 91 75 84
86 86 89 49 80
99 \Л 2 77
71 I 85
92 I 88 93 33 77
90 90 95 94 97
89 I 90 88 71 75 92
82 79 79 65 66
64 I 59 I 57 80 58 78
85 I 85
'
щ
происхождения
— | 95 1 95 100 1 —
— 95 95 100 —
— 89 89 45 —
— 93 93 98 —
— 89 89 45 —
—
96 | 96 98 —
90 100 —
90
— 92 81 100 —
— 73 55 93 —
97 —
— 82 I —
76 —
■— эо I —
94 —
— 93
100
1
100
1
98
96
98
98
100
50
-
СО
о ь»
ея
се
X
К
о
оо
о
о
ч
хо
СО с о О
с*
о
о
оо
РЖ
ю
о юоосмсмо
О
г-ОС^О
С
Оо о
о
о
О О Ю С О
о
о о
о
с*
о
Н
СО
см
—О О О О
о
оо
00 °
о
о
—
ь-
о* о
о "
о
°
.
СМ
ОО 0 3 т - « ^
о " о " ^
'
ХО
*о
О
с
03
О
и.
>»
4
се
ш
се
си
СМ ^
Т р см
о о
0~ О *^
° СМ — ' °
ЩI I
°
оо
оо
л
СО С О С О СО СО
СО ''З 4 СО СМ СО СМ
•» •»
#ч
СМ
г-4
о
О СОо см N о
<0—00 —<ю
11®
1
11
О о о Юо
—«
— с о см
н
§
к
X
03
3
о
г
о о см
О
Оюсм
юо о оз *
=
с
^ ю см
23
га
О
ХО
О
ХО
л
8
х
се
ч
со
■»»
се
О
о
и и
О О
X X
СО с и
се > >
а си н
X н
хО О ч
(-• я > >
и со X
оо се
се се
X
л к с о*. се
к ч се О О 3
се о ■
ж и т X
со Ш н О о х о
О О О X X ни
о се
►»
° о ч се
щ со и
^Ё
246
\о ь
СО
.I**» »—« г —« 0 0
— 00 03 ^
I СМ | I
|
со ^ ю
Ю
-
I
1
1
I
ь-о
со ю со со со
см ю ю аз
— ^о ^о ^ — ^
а .
>>
н
•О
ч
>>
X
—
ю
со ю
ц§ о^с> о
О О О О со о о о о
—
см
о о
о
О см
05
О^О О ^О
Ол О***От*О • о о
с о см с о см
ОООО
ОООО
СМ
см
ос О
СМ с о
СМ I
I см
■^г-ооо
ю
& *>
— С О СМ о СО 0 5
*Ф *
СМ
Ф +* Ш
к
03
см — о
ю
о
оо о со О
^ см ^ ^
с о см ю о
о о г-н , - « г о с о
X
3
ас
со
о>
и
о
х
се
га
се
си
Н
си
я
щ
си
Оо
со о
о•* о о о о о
о о
ООО
сл
оар*
о
о(Ц
о
оо
00
СО
я *
см
ю
см
ф
00о
1^
3
ю
о
СМю N со Ю ^ Ю СМ•л
—
г-4
о
см г- о о
^ — 1ПСО
00
ЮСОГГЮ
о к
. се се
Ц со
с
X
I
Й I
>*
Лх
>» о
^ о
> > о
0
й
93 Ш
2
сп ас
о) се о Я
со Си се
\о
см см
а
X
ХО
н
и
Ч
о о
— — см
к
«=(
О)
о ,
щ
|
й
О) . Я
оI I с00
м
со
СО 0 0 тГ
с м -
се ХО
се
С4
о
о
О -, ° I
& се Ш
0
X
1
С
-и н
<и Ч) X
оа X § 1
Он
О
ч I I о
и
■ :г
х
&*
X т
ш си
ш
50 О
ХО
О
и ХО
0> I
со О
«
се Ф
X
н га а
■=*
го
о V
<и о
о8 пО Си
СОX Ц
а
х се 2 * *
ч * о
И со
со
сч
Ю- о~о “
ЮСОО СЧ I I
со•» || тг-Д
•
О
со
ООн ОС^О
г*оо
со ю
о
о
о оо о
■
о
о
о
сч
со
—О о о
сГ©
~о*о"
оо
^
СО00 О
О О
СО <0 со СО
?
8
о
8 °
* ~
Осч
О
о
о
о
о'
со
X
>»
оо
со
05
03
I
о
ю<о
I
со
о
оо~
о
е*
Ю
О
О
О
1
Л
»—•гГ>«—
4_
М 12
X
Л
х
о
со
о
1Ло о
со счосч_сосом
0 9 ^ 7 ^ 2
о
о
*-4 ^
СО
к
со
оз
о
си
Ю
Н г*~
\П
О I I
со1^оо
оо
о
СЧ00
гг со
ООО
со*.С
4л
.О
*•—
ООО
—
#1о^о^
О
О
О
СО
г
о
ююю
о
юсчсч
а
о о
о
со00
о 1о
Г4*» СО
— тг
о
СМ
5?
ООО^СОО
о
Гр
СЧ со
ооооо
г- 00 юо «о
о »-<сосчюсчо
Ы н счо| <2
в
сч
Т
“1'Й
1
счо о
о
Ю
С
Ч
2 10 Ю—со —*—*
<и
С
Ч
С
Ч
ч
*
*
тг
тг
и
соСО СО ^
2Й Ю
©
о
о
-о
ио 00 С*** 0^
I И I
й соеч5?
о---о--о
с-
о о”о' о"о"о'
ю
со со
*
С*^СЧ
СО
1
*
О СЧ^ со со со
ю оIь ю1ю1 1о 1о
СО СО
т“ “ *
^
\П ^ ^ г -< 0 0
о
оо
о
о
ш оою м
.Ю
- со~со~сг>г_г
ю^
—
Г
о о о о о о
О юI соI оI о| соI I
о о со со —
о о о о о
^ I
•оУ
ю
ог>
•ь
СО 1^- О г
о
юсо
Iи^
4
О
■
0000
__
СЧ ьО
о
со
с?
СЗ
№
*
з °03 4 >
3
X X
2 2 ж СО
в; ч 2 ао
Щ к о.
<0 0) \о г
60 а
Си
с? о X О
•X •к оз X
о о о СО
а к м н
о СХ а) и
35 СО X №
о . х О .С
«а
о СО
ш н м
к са
0 а>
щш
н
о* х
сч *
сз ев
а. ®
°Я
оА
в
л.
о а»
Ьб м
щЧ
г
й
X
сг
<У
ф
о
о
да
•9*
к
О
о
са
я
%
о
ов о X
н
О
о V О
V.
о
_ О * Й о*
8X
в
о а с
х
а.
с
х
2
ш
к о о(У аа) йк> оса ою
о *
а . со
С «г ч ч * >>о
и со
«
(О X
01
« 1X
XI X
к си 4>
1
т I я*
о с О*
247
Продолжение
I
о
1
*
сз
К
о
о
00СОООО)
ю
со
о о о о о оо
ОО I I
аь
сч
—
<
о о оо оооо^
—
>
С
О
О
О
О
ол О**°-^юсч
—0
о г 0 0 °-°со
00 о о
1
л
ю
о
о
13
о4ч оЛо о
о о о'о
5
п
т
(30ЮО^^, ©^
IоIС
IЧIсосо
I сч
11сосч
ц
о.4*—
»«
»О
лО
»О
•О
^X
0 о о о о оо
союсосчсосчсо
ОСЧСЧ*—
‘Ю
ООСОСЧ
ООО
пННН
о
С
О
Ю
"I4
I—
05
О
т
—
•
т
-н
С
О
С
Ч
С
О
оСЧсо
СЧ
Ю
гч
С
О
о
о
о
а>со »-н -г?
С
Ч
С
О
о
С
О
О
С
О
С
О
Ю
ю
о
о
*
-4
0
0
счсо00 ю о ю соо
СЧ СО СЧ 1— ю
Л
ч
К
ф
т
«*
оо*
&
248
5»
а33
о •^О
и в
?
5
й
)
О
га
3
Я
К
й
>
т
с
X
о а
#
о
0
5
п
X
г
*
я
о
|
о
со
о.
О
)
3
со
2
»
Х
§
о.
со
X
№
о
«
а
?
X
р
в 0
4
соо оСО и
<
а
7
а
с
а
»
►
а
в
о Он
со о
о
3
3
о оI С
и
^
о- о Ксо
3со Xо оС
О
>
>
о
с
о
й
)
*
ч
С
О
•»
8
.*
•• н
*з >» о о, *
оо \оо шк
и СО и; « с н с
о
3V0
§
и
о
ооо
о
II
СО
Т! ю- 1?I СО
I СО
IЮ
N^ !
С Ч О гн
о
*-
ш
щ
о
о
К
о
о
и.
8А
о о
сч 1 1
11
г
о
о•к
СОшосо- СЧ 10
^ о б о 'б о о ?
о
о
3
и
ю
»
о
С
О
01
^
со о
с ОООО04мо
•■о
сч
сч
сч
*-*оо сч ^ сь сч
с
N
со•%
о
ф
3
со соо—о
002
<и о.о«. со ► 0.0
V о о о‘ ьОI оШ
X
о
щ
03 т *о — ” ° ®Сс оо
\о
ООО О о §
О
О
<
3
о"
о"
о"
5
С
Ч
оо
2 о о югч^ счо
«=с
N
о
СЧ 4 « Н ^Г Н С О Т ^О
#ь #
*
^ 'т|
.«=5 ОО
О
с
о
а о СЧ
гг
- счо
о
С
О
'
С
Ч
Г
—
*
1
0
*
—
•
5>>
4 СЧООг- со
оо
со
о
ф
X
О*
о
о ор§ог^-ош ^сч
8
1
1
1
1
18
ь- о со ^ сч со
>
*
Ъ
ч
а
з
со
>»
*
и
С
О
ч ш я<уС
со
со со
ш
ж
§*23
в
>
ои«
° с
ов >, 3
ионн
»
ООО
т#*
со
О
ю*«*см
о I о Ою | о
СОСО °
О О О
см«Ь
о '«
О О О О
О О
О
о
0 . 0 — *^
о О ООО
о
о
о ^ г—о
N 1—
1N N
Г -О ^ тг ^ 0 0 ^ ^ 0 0 0 ^
со ^ оо со со ^
*
>*
I
ь-со
»—«со
3
н
>*
е* се
О в
син
С °
К
<и о
3
о
х
п
р*58
о О
УО
*9 19 ’т* Я?
чЕ?
сосмооооо ь- са
»
—
—смсосмсо
со
ь- до
о ю ь о о СЯсю
—
-усо
со
о
•
со
*
»
“
0
о«Я-1о~о о о I р —о о о о о
о
I
I
I
оо I
счсмсоо «мез -<
+ О
^
ОО.
о о о о_о о, о^
о о~о
о"о о"о о"о о
^
—•
^ см
мСОООгнI СГ- ОО ^ ср -г-»
I
I
I
I
I
I
м
I
I
I
ТГ'П'СМСОСМЮСО’^СОСООО
см
см
О И
с о
и-
* о
« ж
я
^ ^ о
5
СО О . с о —. —.
см
о
смю
•л 0 00*0
?I 1с о1с оI с з1
,о со О Ю
о* О о" о" О О О
о
0
1
1
1
М
!
0
0
I
°
•— с о с о — с о с о ^
“
0 0 0 .0 0 0 .0
—
1
л
^
о ООЬС!
ш
{
со
« I * •*
ООО
о
— О СО « С О
СО
00юI ю I юI До
ООО о
(N 0 0 0 0 0 0 0 0
^
о
ь
о
^ ^ со
О Ю<М со о
СОГ^Г^ со
1 0
а
н
о
Си
э
оосГ о о
М
М
!
о о ю со ю
ООО о о
соо^со
Г— СМ -гг* г-4 см
ев
X
3
с
*
со ■'Г Г"-
см
я
оо.см^смо^юсо
10СС
I
I
т
со см
1 оо
СО — см см —
1 0
си
о
«У
0 — 00
3
со
см см сосо
о
х
си
4*
СО
5
ои
§•
« и
2. 9
|* и<и |я р
>. в в
и ю с
О)
3
«с
о
в я 3
о XX
ж О со
о. *
о с о.
3
ы
А
5
а
гЗЗ
3
> 03
о
3
со
ы
X
о
«Б
*
к
* X
<и X
X
н
® о *>•*««
з
в*
д | о
и т с
3
0
И си О
8
Г 8* Р « Г Р
( х и | «= :оо
6
а &
•ев
о
2
гу Л о о ч
< г :р и х
249
\
Ю -
СО <М
С
О
о.
IIо
О I ООО
о *—•о
о
ю
# ч
сч
®
!
о
о г^.
о о
о о
со
со
Iо
гр
о
о
СЧю
т
г
*
С
Ч
Т^ч^-4 Г
— СЧСО о ^
со
О О I < о о б с ч '^ Х
со о
о ю
-о о
о
о
оо
со
со
о
СЧСО
тр
•*
#1
о —
я
о
о
Шгг*
о
к
к
со
— < О*
^
# ч
о о
О'
. 00
05
■___.____ I
сч -сч ^
СЧт-^ЮОСЧСЧ^гРСЧОЮЮ
сч
сч Ш
о
00
Ю СО г р
I оосчсч
сч
осч с?0
1
*
^
*
-•
ч
о
со
д
си
»=*
*
со
о
о
СЧ сч
О^со ^
О ' О 00 о Я р м
о О 0 «- О О О
о о
X — I 0 °ю
со
о § о
в о
о
о
о
о
о
си
05
о
N
с
т
-1 сч
о о~ст>
о
0
0)10-^
со
и
1СО
со
о о о
т
,
" *
Е-«
СО
оэ
к
о СЧ
Ш ГI СО
со
Ьо
ю
Г
р
со
о щ
сз
5
сч
1
—
■
’
ю
СО С Ч г р
со
СО
о<
И
(У
к
ЕГ
лО
#1
о
О СО I т ^ о
СО
I ^ 0 5
I
40
оо
О! | 6*.
О Гро
о о о*
о
^
СОЮю ОО~р1—
•-ср м
о
о
00
05 оосч
о
о
О
Гр ю 0 0 0 5
счо сч
ьсч
Оц
п
ю
СО
о
СО
О
О
О
00 Ю Тр
| ма1Т
юр-1о ®Л
I
Я
С
Ч00 счо
сч
о
05
ООО
о
Он
о *-* ^ ю о
^ ^ Л«|
#ь
ООО
О
сГ
о °
о сч
ююсч ююо
сч
о о о о 00-О о
л
+*
X
о
со
05
сч
!
сч
Оо
хргр
_Ю
Щ
г^
.
Гр
1 т р *-*
о
я
ф
О ю сч О Ф
с ^ 0 5
т— » Г - н С Ч
О
ю
00
литературным данным.
з
и
О
СОсо Г р
СО ГР СО г р О
О ^
о о
оо * ^ с о
о —о ь
о " | | о"
со оо
о
с
се
гг
во
*
ч
СО -Ф 33
я
ю
03
н
х и 4* X Я N
Ч Ч
ч §
§ л Г * ж 33
л
ш
X
ч
X
X
•*; ч
■
X ■X
ь
”
ч ? ч ч ч
X
X
X
х
сч
с о с о с 4* ч * с о
со
1Л — СО
«О
О
—
•
*>
•
см
N 0 5 0 0 0 0
3
^о ^-.
—« _ « _ « <-•* А} СЧ СЧ —■
—
$„
ыОСЧОЦЭ
о—
М Й - Ф О ф М О О О Л с© СЧ ^2
чг сч
—о
со
со- 2•— М
<
«Ю'Ф <0
сч
«
—
а
“>
чэ
~
«
в
Ш
М
5?
^
"
—
,,
•-*
л
_
П-Л
-Л
Л
22С000,0-ССХС1-<С/ЗСЛС/5Н^^0-В-ОО ОМ
о
о
2
33
ев
ш
^
*
со §
гм X X X X X
еч
а>О)о
с о ю -* — 4 оо
сп со
ю ^ сч о о сч оо
©Ч о о эо" —«' <о « э
*л
ю -Ф ^ со *о
я
СО сч
м
«я И
ШО
5 у
оН 2л
<0
СО
и
о
к
X
44
г
«и
ч
А
И
я
а
«я
<ч
я
в
<0
С
2
п
я
X
ф
*
(8
а
я
е
в
я
Э
Ё
о
н
<
*х
х се
3 я
*=с
оо
А "
х^ 8о ..
я§ *св
Я 5« X ай._ ,
2
Я
«
,п
4<о
X
а-» >о
я
ч
о
>3
л со VЩ
о , о5 в х 4 н я ^ X
я о
о л
I 5
X VО) _.ри
Н X О а
X о. Си О. О.
оо
о
«б
ха.
• © • о_
0 . 0л. X ж X
з Б.Х
й о о
5
2
«
^
х
а
й
й
а
.
|
ч
«
^
2
Е.2х
) н >. х и о .^ Г » Лг^-^-г
ев X Ч О « Ч « н о « О
х х о о С С а а и и и и и н ^ ^ в ’Э х х э э
я
с
в
У
о
е
в
2
•я
Р"-
•в
н
и
о
«в
р
я
«I
*=з
с
в
с®
к
а (в
X
и
X
в
о2
к 2
<
о
ш
2
X
я
со
ч
ю
XС
ОС
Чсо
ч
оо
СО X X
X
X X
ч ч
ч
»
X
со со
ю
X
со
сч
35 С-1 ® Ю
СО
СЧ СЧ X
сч
сО >
м **• **«
X
гЧ
>р> ^ 1 Ч
сч со
оо
I*—
со
о
о
С
Ч
—
О
О
О
О
трС
О
^С
Ч
СО^
—
^
—Ф ^ О О О С Л О О С О еЖ Щ Ф
О 300 сч
« •» *Ц ^ ** ** *» ** _ ...
» _
5*<о^ о а*аГ—^ I©^ <о®
*<$;§ соас ас со^
око *—1>-о оо«лст>
стючр©*!8
*
— Св
Ь- *~1 ,_* ‘-^
_,
Л \
_<
X
& < Щ03Ш;ШX &-^
/ч
«
ЬЛХ
«м *т—
й
О м
^ ^
о
41
я
X
<й
ш
во
«о
с
>х
•и
з
X
ё*о
я
«
2 я
2
о -я х а в о у
ч
о, о о
Ц
1
1
О. 0.0
е-
о
ч
<<1оююрасоса^со
»х
эх
X
х (Я X
А
ч; ё
=
сч ч
сг
я
св
о св е
Св
в Я
3X
ес
о н
О. Л
о ч
ЭХ
X >х
ЭЯ
я
ч X 2 X X
с_
о чо
X
О. X
х св
X О
о о.
V&
1
I
*X
8к
*[м «й 1X А
О.
Ч в
св ш о ш
Ш'Ж
\
251
ЛИТЕРАТУРА
А л и к а е в В. А., П е т у х о в а Е. А., Х а л е н е в а Л. Д., В 11д о в а К Ф. Руководство по контролю качества кормов и полноцен­
ности кормления сельскохозяйственных животных. М., Колос, 1967.
Б е л о н о с о в Н. И., К а л м а н с о н С. Я. Определитель пита­
тельности кормов в хозяйствах. М., Колос, 1968
Б е с с а р а б о в а Р. Ф„ Е м е л и н а Н. Т., П е т у х о в а Е. А.,
л а л е н е в л Л. Д . Методические указания для лабораторных заня­
тии по разделу «Химический состав кормов как показатель пита­
тельности» (Методы зоотехнического анализа кормов). М., 1976.
В а л я е в а К. Н. Справочник по охране труда работников
здравоохранения. М., Медицина, 1972.
и 6 п В г \Т 0 В е к И ®
Синкевич
В. А., С т р е л ь ц о ­
в а М . Л . Определение белковых фракций сыворотки крови у круп­
ного рогатого скота ускоренным методом. Зооветеринарная наука —
производству. Ученые записки, т. 20. Минск, Урожай, 1968.
Г о р ш к о в а Г. И., Б а х т и н С. Н. Инструкция для зональных
рГН ИМг ЧеСКИХ лабораторий по анализу кормов и растений. (МСХ
СССР. Главное управление химизации; центральная контрольная аг­
рохимическая лаборатория при ВНИИ удобрений и агропочвоведе­
ния им. Д . Н. Прянишникова). М., Колос, 1968.
Государственные стандарты на корма.
Ж у р а в л е в Е. М. Руководство по зоотехническому анализу
кормов. М., 1963.
1
К а р м о л и е в Р. X. Современные биохимические методы ис­
следования в ветеринарии и зоотехнии. М., Колос, 1971.
К а р п ю к С. А. Определение белковых фракций сыворотки кро­
ви экспресс-методом. Лабораторное дело, 1962, 7: 33-—36.
К о в а л ь с к и й В. В., Г о л о л о б о в А, Д . Методы определе­
ния микроэлементов в органах и тканях животных, растениях н поч­
вах. М., Колос, 1969.
ю*АКраТКТ!Й спРаб0чник химика. П од ред. Б. В. Некрасова. М.,
К р ю к о в В. С., О к о л е л е в а Т. М., Д м и т р о в с к и й А. А.
Определение витаминов А, Е и каротиноидов в кормах, препаратах
и биологических объектах. (Методические указания ВНИИТИП)
Загорск, 1978.
Л е б е д е в П. Т., У с о в и ч А. Т. Методы исследования кормов,
органов и тканей животных. М., Роосельхозиздат, 1976.
Л у к а ш и к Н. А., Т а щ и л и н В. А. Зоотехнический анализ
кормов. М., Колос, 1965.
Ш ЭД! | ЩЙЦ
М а р н о в Д. И., Ш у м и л и н И. С., Г о р ш к о в а Г. И., Е ф ­
р е м о в Е. Н. и др. Инструкция для лаборатории государственной
агротехнической службы по анализам кормов (МСХ СССР. Главное
252
ш
управление химизации; Центральный институт агрохимического об“ УХ Т » Яи = Т Г Г и " Й ™ ы
: кормления п » » ы . М.. Колос.
1975.
Методики постановки опытов и исследований по молочному хо-
1 ж™”™™м
р
д
Ш М
“ ■
г Г и » % ,Т к ,Г Й « ^ Т с “ ос». Под р е ,: А . А .Зубрилина. Дубровицы, 1967.
„
_ щ к а я -Н Н и др.
Методические Л а за н и я ’ п^определению азота, фосфора и к а л ^ в
Ж ГшСХ
а ^ к .и м и ео к ”
о о б в и в а ю , , сельокого *оИ » с т .а ). М.,
1978П е т у х о в а Е А , К р ы л о в а В. С., Е м е л и н а Н. Т., М а р ­
т ь я н о в И. М Практикум по кормлению сельскохозяйственных жи
ВОТТ о чМи нКо°кЛОСХ. Н77Методы биохимического
^ й |$ Т и е Д& ^ ™
х
анализа растений.
веществ в животноводстве. Практиче-
СКОер Т е 0цкДа Г ю % КТ р о з 6д е н к о Н. П. и д р . Методические
р ек ом ен д ац и и п о^ ш ^ ч ^ к ^ ^ ^ ^ н охк ^ ^ ск и м ^ ^ и ссл едов аш ^ ^
30° ТОхИрИайна( ^ у д а в нкучных учреждениях АН СССР. М., Наука,
1^ Р ек ом ен дац и и по заготовке высококачественных кормов в колХОЗаруководс™о ^ Г н и ч еск и м 1 ла'борат'орным исокдованиям. Под.
^
К Г дС
е 7 1 " Т Л о р ^ « “ ™еМ^ о '‘ ™ о1.ре«ел.»иЯ сле,оо ме-
таЛТ а Щ
Ш
Я. Определение микроэлементов в организме жи-
В° ТИТ омР мГэ М9 Ф. Корма СССР. М., 1964
I
и
Томмэ
к
З Й
А
Ь и н г п в
_’ и н а
^ Д о б а Х
И .
М О Д я И О В А. В., № а -
В. А. Методические рекомендации по со-
и Т
ватных, Дубровицы, 1977*
Н
м
= в
К
ас е Х о И
х о зХ " ен ^ Г ж и -
С О Д Е РЖ А Н И Е
ч
Введение
......................................
Взятие средней пробы кормов
. .
...........................
Подготовка карма к анализу и определение первоначальной
воды
.................................................................
Определение гигроскопической воды
......................................
Экспресс-метод определения общего количества *воды в
кормах
................................................................. .....
■Экспресс-метод определения общего содержания влаги в
кормах с помощью влагомера
........................... .....
Определение содержания азотистых веществ
. . . . . .
Определение общего азота и сырого протеина методом
Кьельдаля
............................................................................
Микрометод определения азота по Кьельдалю
! . . ’
Определение белкового азота в кормах по способу Барнштейна
......................'
.
Определение аминокислот методом тонкослойной хроматографии
. . ............................................................................ .....
„
Определение сырого жира в к о р м а х ......................
;
Определение сырого жира экстрагированием этиловым
эфиром
........................... ................................................ .....
Определение сырого жира экстрагированием бензином или
бензолом
............................................................................
Определение сырой клетчатки по Геннебергу и Штоману (м о­
дификация).
...........................
Определение лигнина по Кенигу в модификации Комарова .
Определение сахаров центрифужным методом Бертрана —
Бьери (модификация Е. А. Петуховой)
.................................
Определение в кормах растворимых и легкогидролизуемых
углеводов
.......................................................................................
Определение безазотистых экстрактивных веществ
. . . .
Определение в кормах сырой золы и минеральных элементов
Определение сырой золы
............................................................
Приготовление раствора золы
........................... .....
Оксалатный метод определения кальция в кормах (цент­
рифужный микрометод)
.................................................76
Комплексометрическое определение кальция и магния с
трилоном Б методом обратного титрования (модифика­
ция А. Ф. Арсеньева)
.................................................................
254
3
7
92
25
26
27
28
28
34
да
37
,4 9
52
53
55
59
61
68
71
72
72
75
78
Определение кальция и магния и расчет содержания магния
.................................................... ..... * ................................
ИР Определение фосфора I I
Определение азота, фосфора, калия, кальция и натрия из одной навески корма
.........................................................
Определение азота фотоколориметрическим методом с ис­
пользованием реайции индолфенольной зелени (
тодике ЦИНАО)
. ................ • ^тйн’д ™ .....................
Опоеделение фосфора (по методике ЦИШШ)
. • • •
Определение кальция в растворе после мокрого озоления
Определение калия и натрия
- * • * • * "
Опоеделение азота, фосфора, калия и кальция в кормах с
помощью- автоанализатора проточного т и п а ..........................
Определение микроэлементов
Определение марганца с перйодатом калия
• • * * •
Определение меди с диэтилдитиокарбаматом натрия
. .
О пределение кобальта
.
.
.
)82
54
92
95
99
101
102
104
111
ИЗ
11б
^
- —— ------------------------------------
уу*)
Пересчет результатов химического анализа кормов
. . . .
Определение эЛргетической ценности кормов с помощью ка^
лориметра
........................................................................
*
Устройство и принцип работы калориметра
..................... ^
Определение водного э к в и в а л е н т а ..........................................щ
Поправка на теплообмен калориметра
. .•
- •
Техника подготовки калориметрической бомбы и сжига|
134
ние о б р а зц а корма
......................................... ......
’
Определение валовой энергетической ценности корма по
^
его хим ическом у
состав у
............................................................
Использование результатов химического анализа кормов в
практике^ кормления сельскохозяйственных животных
. .
139
Методика расчета энергетической питательности зеленых
сочных, грубых и концентрированных кормов по со дер
жанию сухого вещества и поправочным коэффициентам
* Р а с ч е т Питательности кормов в обменной энергии и ЭКЕ
Расчет питательности кормов в овсяных кормовых еди
ницах
......................................................... ....
Оценка качества силоса
'
145
149
150
О п р едел ен и е молочной, уксусной и м асляной кислот в си-
^
лосе методом Леппера — Флига
......................................... ........
Определение качества сенажа
. - ....................................
Определение каротина * витамина А в кормах, биологических
161
объектах и препаратах
.................................................
" ■ '
Определение каротина в кормах (м°ДиФ"^Ция ВИЖ)
О п р едел ен и е каротина в молоке и м олози ве
•
. . . . .
^
Опоеделение каротина в сыворотке крови . ■ • • • •
Определение витамина А в кормах, биологических объектах и препаратах
Определение витамина А в молоке имолозиве
Х ром атограф ирование (м етодика
ВНИИ ГИ1 )
Определение рибофлавина в кормах
Определение общего количества рибофлавина
С Л
1 41Л
ГК
дд р
^
— - — - -
^
-
168
173
176
178
180
255
V
Определение общего содержания рибофлавина в кормах с
применением трихлоруксусной кислоты
. •
, •
1&
Определение рибофлавина в яйце
. . . • • • • • •
18Е
Определение рибофлавина в молоке
. . . . . . . .
Ш
Определение белка, кальция и неорганического фосфора в
сыворотке крови
................................................................................. 190
Рефрактометрический метод определения белка в сыво­
ротке крови
................................................................................ ......190
Определение белковых фракций сыворотки крови экс• пресс-методом
............................................................................194
Определение кальция в сыворотке крови (по де Ваарду)
196
Определение неорганического фосфора в сыворотке крови
(по Р. Я. Юделевичу)
........................................... * . «
198
Некоторые сведения по технике лабораторных работ
. . , 203
Весы и взвешивание
...................................................... * * ,
203
Ф о т о к о л о р и м е т р и я .................................................. ................................ 208
Мытье и сушка химической посуды . ...................................... 212
Растворы и их приготовление........................................................... 214
Некоторые сведения по охране труда и технике безопасности
при работе в химической л а б о р а т о р и и ......................................229
Приложение
* . . . . ........................... ............................... 237
Литература
........................................... 252
Екатерина Александровна Петухова,
Раиса Федоровна Бессарабова ,
Любовь Дмитриевна Халенева,
Ольга Алексеевна Антонова
Щг
,
ЗООТЕХНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КОРМОВ
'Редактор А. И. 3 а в а р с к и А
Художественный редактор Н. Ф. Ш л е з и н г е р
Технический редактор Н. В. Н о в и к о в а
Корректоры М. И. Б ы н е е в и М. В. Ч е р н и х о в с к а я
ИБ № 2125
Сдано в набор 25.11.80. Подписано к печати 03.03.81. Т-00456. Формат 84X1037^Бумага газетная. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. печ. л. 13.44.
Уч.-изд. л. 14,73. Изд. № 135. Тираж 30 000 экз. Заказ № 7445. Цена 65 коп.
Ордена Трудового Красного Знамени издательство «Колос»,
107807, ГСП, Москва, Б-53, ул. Садовая-Спасская. 18.
Областная типография управления издательств, полиграфии и книжной
торговли Ивановского облисполкома,
153628, г. Иваново, ул. Типографская, 6.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
17
Размер файла
18 134 Кб
Теги
kormov, petuhovae, analiz, 3053, antonova, zootehnicheskiy, bessarabovar, haleneval
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа