close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Механизмы иммунорегулирующей активности грелина

код для вставкиСкачать
-1-
на правах рукописи
Логинова Ольга Александровна
МЕХАНИЗМЫ ИММУНОРЕГУЛИРУЮЩЕЙ
АКТИВНОСТИ ГРЕЛИНА
14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Челябинск – 2018
-2Работа выполнена в лаборатории иммунорегуляции Федерального
государственного бюджетного учреждения науки Пермский федеральный
исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
«Институт экологии и генетики микроорганизмов» Уральского отделения
Российской академии наук
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Ширшев Сергей Викторович
Официальные оппоненты:
Данилова Ирина Георгиевна доктор биологических наук, доцент,
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт
иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии
наук, лаборатория Морфологии и биохимии, заведующий, г. Екатеринбург
Осиков Михаил Владимирович доктор медицинских наук, профессор,
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Южно-Уральский государственный медицинский
университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации,
кафедра патологической физиологии, заведующий, г. Челябинск
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего
образования
«Кубанский
государственный
медицинский
университет» Министерства здравоохранения России, г. Краснодар
Защита диссертации состоится «___»___________ 2018 года в _____
часов на заседании Диссертационного совета Д. 208.117.03 при Федеральном
государственном бюджетном образовательном учреждении высшего
образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу 454092,
г.Челябинск, ул. Воровского, 64.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального
государственного бюджетного образовательного учреждения высшего
образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации (454092, г.
Челябинск, ул. Воровского, 64) и на сайте www.chelsma.ru
Автореферат разослан «_____» ____________________ 2018 года
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинский наук
Ю.С. Шишкова
-3ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования и степень ее разработанности.
Грелин - пептидный гормон с разнообразной биологической активностью,
которая включает широкий спектр эндокринных и неэндокринных эффектов:
грелин принимает участие в регуляции энергетического и жирового обмена,
контроле поведенческих реакций, ростовых процессов, полового созревания,
половых циклов и беременности, а также обладает выраженными
иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами (Baatar D.,
Patel K., Taub D.D. The effects of ghrelin on inflammation and the immune
system. Mol. Cell. Endocrinol. 2011. V. 340. P. 44-58; Muccioli G., LorenziT.,
Lorenzi M. et al. Beyond the metabolic role of ghrelin: a new player in the
regulation of reproductive function. Peptides. 2011. Vol. 32. P.2514-2521).
При беременности уровень грелина нарастает и достигает своего
максимума в середине II триместра, что обусловлено усилением потребности
матери и плода в питательных веществах и энергии, при этом грелин
дополнительно продуцируется плацентой, а регуляция грелином процессов
гестации начинается с имплантации и продолжается в течение всей
беременности (Fuglsang J., Skjaerbaek C., Espelund U. et al. Ghrelin and its
relationship to growth hormones during normal pregnancy. Clin. Endocrinol. 2005.
V. 62. P.554-559). Понижение уровня грелина при беременности, а также
другие нарушения жирового обмена, сопряжены с аутоиммунными
патологиями и репродуктивными проблемами иммунного генеза, такими как
бесплодие и спонтанные аборты (O'Brien M., Padraig E., J. Morrison J. et al.
Ghrelin in the human myometrium. Reproductive Biology and Endocrinology.
2010. V.8. P.55-66; Viani I., Vottero A., Tassi F. et al. Ghrelin inhibits steroid
biosynthesis by cultured granulosa-lutein cells. J. of Clin. Endocrin. and
Metabolism. 2008. V.93. P.1476-1481). Причиной этих явлений является срыв
состояния иммунной толерантности, которое, как известно, сопровождается
развитием эффективных регуляторных механизмов и формированием
состояния «неотвечаемости» иммунной системы матери к генетически
чужеродному плоду (Ширшев С.В. Иммунология материнско-фетальных
взаимодействий. Екатеринбург.: УрО РАН. 2009. 582 с). При беременности в
децидуальной оболочке происходит увеличение доли толерогенных
дендритных клеток, способствующих формированию индуцированных (i)
регуляторных Т- лимфоцитов (англ. Treg), которые, в свою очередь,
блокируют развитие индукторов провоспалительного иммунного ответа Тхелперов 1 типа (англ. Th1) и IL-17-продуцирующих Т-хелперов (англ. Тh17)
(Blois S.M., Kämmerer U., Alba Soto C. Dendritic cells: key to fetal tolerance. J.
Biol. Reprod. 2007. V.77. P.590-598; Kammerer U., Kruse A., Barrientos G. et al.
Role of dendritic cells in the regulation of maternal immune responses to the fetus
during mammalian gestation. J. Immunol. Invest. 2008. V.37, I.5. P.499-533; Saito
S., Nakashima A., Shima T. et al. Th1/Th2/Th17 and regulatory T-cell paradigm in
pregnancy. Am. J. Reprod. Immunol. 2010. V. 601, № 63. P.601-61). Кроме того,
-4некоторые исследователи отмечают, что регуляторные В-лимфоциты (англ.
Breg) также могут принимать участие в индукции и кумуляции Treg,
продуцируя соответствующие цитокины и хемокины (Noh G., Lee J.H..
Regulatory B cells and allergic diseases. Allergy Asthma Immunol. Res. 2011.
V.3. P.168-177). Также необходимо учитывать, что формирование Treg идет
не только на периферии, но и в тимусе, где дендритные клетки тимуса
принимают участие в регуляции развития натуральных (n) Treg (Шарова
Н.И., Литвина М.М., Митин А.Н. и др. Линия дендритных клеток из тимуса
человека. Иммунология. 2011. Т.32., № 6. С.296-300). Стоит отметить, что
большинство клеток иммунной системы, а именно моноциты, макрофаги,
дендритные клетки, Т-, В-, и натуральные киллерные (англ. NK) клетки,
несут рецепторы к грелину (Hattori N., Saito T., Yagyu T. et al. GH, GH
receptor, GH secretagogue receptor, and ghrelin expression in human T cells, B
cells, and neutrophils. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001. V.86. P. 4284-4291).
Таким образом, несмотря на то, что грелин прежде всего
метаболический гормон, он обладает плейотропными эффектами в организме
млекопитающих,
в
том
числе
грелин
обладает
выраженной
иммунорегуляторной активностью. Учитывая, что снижение уровня грелина
при беременности сопряжено с угрозой ее прерывания, необходимо
исследовать эффекты гормона в отношении клеток, обладающих
толерогенной активностью, обеспечивающих формирование иммунной
толерантности при беременности.
Цель исследования - изучение иммуномодулирующего действия
грелина в концентрациях, характерных для беременности, на уровне
регуляторных лимфоцитов и дендритных клеток периферической крови и
тимуса.
Задачи исследования:
1. Определить роль грелина в процессах индукции и функциональной
активности регуляторных подтипов T- и B-лимфоцитов периферической
крови;
2. Исследовать влияние грелина на процессы формирования дендритных
клеток из моноцитов периферической крови и их функциональную
активность, а также оценить способность прединкубированных с грелином
дендритных клеток к индукции регуляторных T- и B-лимфоцитов;
3. Определить вклад грелина в регуляции баланса основных
субпопуляций дендритных клеток тимуса и роль прединкубированных с
грелином миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса в
регуляции дифференцировки тимоцитов.
Методология и методы исследования. Работа выполнялась в
лаборатории иммунорегуляции (ЛИР), заведующий лабораторией д.м.н.,
профессор, заслуженный деятель науки РФ Ширшев С.В. Федерального
государственного бюджетного учреждения науки Пермского федерального
исследовательского
центра
«Институт
экологии
и
генетики
-5микроорганизмов» Уральского отделения Российской академии наук
(ФГБУН ПФИЦ «ИЭГМ УрО РАН») с 2013 по 2018 гг. Исследование
проводили в моделях in vitro. Объектами исследования иммунные клетки Т- и
В- лимфоциты периферической крови, дендритные клетки тимуса и
тимоциты, а также дендритные клетки, генерируемые из моноцитов
периферической крови. Для оценки влияния грелина на фенотип и
функциональную активность исследуемых клеток их культивировали с
гормоном от 24 ч до 5 суток, в зависимости от условий эксперимента. Грелин
использовали в концентрации, отражающей его уровень по триместрам
беременности. Влияние грелина оценивалось после инкубации исследуемых
клеток с гормоном методом проточной цитофлюориметрии по экспрессии
мембранных и внутриклеточных молекул-маркеров, а также по продукции
ими цитокинов в супернатантах культур методом иммуноферментного
анализа.
Степень достоверности, апробация результатов, личное участие
автора. Достоверность полученных результатов обусловлена достаточным
объемом выборки, четко сформулированными критериями включения в
исследование, подбором сопоставимых иммунологических методов,
соответствующие современному мировому уровню в области молекулярной
и клеточной биологии.
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на
региональной молодежной конференции «Фундаментальные и прикладные
исследования в биологии и экологии» (г.Пермь, 2014 г.); XII Конференции
«Иммунология Урала» (г.Пермь, 2015 г.); XIII Конференции «Иммунология
Урала» (г.Калининград, 2016 г.); IX Всероссийском конгрессе молодых
ученых-биологов «Симбиоз-Россия 2016» (г.Пермь, 2016 г.); Всероссийской
научно-практическая конференции с международным участием «Наукоемкие
и биомедицинские технологии: от фундаментальных исследований до
внедрения» (г.Пермь, 2016 г.); Международной конференции «Рецепторы и
внутриклеточная сигнализация» (г.Пущино, 2017 г.); XIV Конференции
«Иммунология Урала» (Челябинск, 2017 г.); II международной научнопрактической конференции «Высокие технологии, определяющие качество
жизни», проводимой в рамках Пермского естественнонаучного форума
«Наука и глобальные вызовы XXI века» (г.Пермь, 2018 г.).
Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии на всех
этапах диссертационного исследования. Основная идея, формулировка
рабочей гипотезы, формирование целей и задач, планирование научного
исследования выполнены автором совместно с научным руководителем
д.м.н., профессором заслуженным деятелем науки РФ Ширшевым С.В., а
также руководителем проектов, поддержанных грантами Российского фонда
фундаментальных исследований, где соискатель является исполнителем,
д.б.н. Орловой Е.Г., за что автор выражает им искреннюю благодарность.
Автором лично выполнены анализ и систематизация литературных данных, а
-6также весь комплекс практических исследований, статистической обработки
и интерпретации полученных результатов, написание и оформление
рукописи. Публикации по теме диссертации подготовлены автором
совместно с научным руководителем.
Автор
выражает
благодарность
сотрудникам
лаборатории
иммунорегуляции, а также сотрудникам лаборатории экологической
иммунологии «ИЭГМ УрО РАН», и лично к.м.н. Бахметьеву Б.А. и д.м.н.
Шмагелю К.В. за предоставление возможности выполнения исследований
методом проточной цитофлюориметрии, а также доценту кафедры
гистологии, эмбриологии, цитологии Федерального государственного
бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального
образования «Пермский государственный университет им. акад. Е.А.
Вагнера» Министерства здравоохранения Российской Федерации, д.м.н.
Логиновой Н.П. за помощь в организации исследования клеток тимуса.
Положения, выносимые на защиту:
1. Грелин оказывает модулирующие эффекты на регуляторные
подтипы Т- и В-лимфоцитов периферической крови, контролируя
экспрессию ими иммуносупрессорных мембранных молекул. Грелин не
влияет количество регуляторных Т-лимфоцитов и интерлейкин-17
продуцирующих Т-хелперов, при совместном культивировании CD4+лимфоцитов с регуляторными В-клетками;
2. Грелин регулирует продукцию цитокинов дендритными клетками и
модулирует их способность индуцировать формирование регуляторных Влимфоцитов, а также продукцию цитокинов аллогенными Т-лимфоцитами;
3. Грелин не влияет на количество миелоидных и плазмоцитоидных
дендритных клеток тимуса, и индукцию ими регуляторных Т-лимфоцитов и
интерлейкин-17
продуцирующих
Т-хелперов,
но
разнонаправлено
контролирует способность миелоидных и плазмоцитоидных дендритных
клеток тимуса индуцировать формирование инвариантных Т-лимфоцитов с
функциями натуральных киллеров.
Научная новизна. В работе впервые установлены модулирующие
эффекты гормона в индукции толерогенного фенотипа регуляторных Т- и Влимфоцитов периферической крови и дендритных клеток. Впервые
продемонстрирована способность прединкубированных с грелином
дендритных клеток в модуляции формирования инвариантных Т-лимфоцитов
с функциями натуральных киллеров (iNKT) из интактных тимоцитов. При
участии грелина в исследуемых клетках наблюдается усиление синтеза
толерогенных цитокинов и поверхностных иммуносупрессорных молекул
и/или подавление продукции провоспалительных цитокинов, что будет
способствовать смещению баланса от Th1 в сторону Th2/Treg и
формированию иммунной толерантности, которая является необходимым
условием для сохранения плода и успешного течения беременности.
-7Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные в
работе результаты дополняют современные представления о роли грелина в
регуляции иммунных процессов, углубляя представления о молекулярных
механизмах гормональной регуляции иммунных реакций, позволяя
обосновать исследования возможности использования грелина в качестве
лекарственного препарата для коррекции воспалительных и аутоиммунных
процессов.
Внедрение результатов исследования в практику. Данные,
полученные в ходе настоящего исследования, внедрены в учебный процесс в
программу курсов «Основы клеточных взаимодействий» и «Иммунология
репродукции и иммунотерапия» на кафедре микробиологии и иммунологии
Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения
высшего профессионального образования «Пермский государственный
национальный исследовательский
университет», а также в программу
курсов и «Гистология» на кафедре гистологии, эмбриологии, цитологии
Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения
высшего профессионального образования «Пермского государственного
медицинского университета» им. академика Е.А. Вагнера Министерства
здравоохранения Российской Федерации.
Публикации. Соискатель имеет 13 опубликованных работ, в том
числе по теме диссертации - 9 научных работ общим объемом 2 печатных
листа, в том числе 5 статей опубликованы в научных журналах и изданиях,
которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов
и изданий для опубликования основных научных результатов диссертации; 2
работы - в материалах Всероссийских конференций, 1 публикация - в
материалах международной конференции, 1 статья в журнале, входящем в
базу данных РИНЦ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132
листах машинописного текста, и включает разделы: «обзор литературы»,
«материалы и методы», «результаты собственных исследований», а также
введение, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список
используемых сокращений и библиографический список, включающий 221
источник, в том числе 20 отечественных и 201 зарубежный. Диссертация
содержит 29 рисунков.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования. Исследования были проведены
согласно Хельсинской Декларации ВМА 2000 г. и соответствуют протоколу
Конвенции Совета Европы «О правах человека и биомедицине» 1999 г.
Обязательным критерием включения в выборку являлось наличие
информированного согласия добровольного донора или законных
представителей несовершеннолетних об использовании биологического
материала в научных целях.
-8Исследование эффектов грелина в регуляции свойств иммунных
клеток проводили в моделях in vitro. Объектами исследования являлись Т- и
В- лимфоциты периферической крови, дендритные клетки тимуса и
тимоциты, а также дендритные клетки, генерируемые из моноцитов
периферической крови. Лимфоциты и моноциты получали из фракции
мононуклеарных клеток периферической крови (МПК). МПК использовали
для иммуномагнитной сепарации Т- и В-лимфоцитов, и выделения
моноцитов, которые использовали для генерации дендритных клеток.
Донорами периферической крови являлись условно-здоровые небеременные
женщины репродуктивного возраста (от 19 до 40 лет), забор крови
осуществляли в первую фазу менструального-овариального цикла (2-8 день).
Иммунные клетки небеременных женщин использовались в связи с тем, что
при беременности многократно увеличивается концентрации других
специфических гормонов, оказывающих влияние на иммунную систему, т.е.
для оценки «чистого» эффекта грелина. Миелоидные и плазмоцитоидные
дендритные клетки тимуса, а также тимоциты получали из фрагментов
тимуса, удаляемого в ходе плановых сердечно-сосудистых операций у детей
до года, в соответствии с существующей хирургической практикой
Федерального краевого центра сердечно-сосудистой хирургии г. Перми,
методом иммуномагнитной сепарации выделяли.
Оценка влияния грелина в регуляции свойств исследуемых клеток
проводилась после их культивирования с гормоном по экспрессии
мембранных и внутриклеточных молекул-маркеров с использованием
моноклональных антител к соответствующим антигенам на проточном
цитометре «FACS Calibur» («Becton Dickinson», США) и «CytoFlex S»
(«Beckman Coulter», США). Концентрацию цитокинов в исследуемых
образцах определяли методом ИФА с использованием коммерческих наборов
по параметрам оптической плотности на гибридном фотометре «Synergy H1»
(«BioTEC», США).
На первом этапе исследования определяли роль грелина в процессах
индукции и функциональной активности регуляторных подтипов T- и Bлимфоцитов периферической крови: изучали роль гормона в регуляции
экспрессии иммуносупрессорных молекул (GITR, GARP, CTLA-4) на Treg и
продукцию ими цитокинов (IL-4, TGF-β1); исследовали роль грелина в
индукции подтипов Breg (по экспрессии молекул FOXP3 и внутриклеточного
IL-10 на CD19+CD25+-лимфоцитах, а также CD86 и PD-L1); определяли роль
грелина в регуляции формирования Treg и Th17 из CD4+-лимфоцитов в
присутствии CD19+CD25+-лимфоцитов.
На следующем этапе изучали роль грелина в регуляции
дифференцировки дендритных клеток из моноцитов периферической крови
(по экспрессии молекул CD14, HLA-DR, CD83 и CD86) и продукции
цитокинов (IL-12 (p70), IL-12 (p40), IL-10, TGF-β1) в супернатантах культур;
определяли роль прединкубированных с грелином дендритных клеток в
-9регуляции девиации Treg и Th17-клеток, а также продукцию цитокинов в
супернатантах совместных культур (IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-17A); изучали роль
прединкубированных с грелином дендритных клеток в индукции Breg
подтипов, при их совместной инкубации с аутологичными CD19+CD25+лимфоцитами.
Влияние грелина в регуляции дифференцировки миелоидных и
плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса оценивали по экспрессии
соответствующих фенотипических маркеров CD11с+ и CD303+; определяли
роль миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса в
регуляции индукции Treg, Th17 и iNKT клеток.
Получение мононуклеарных клеток периферической крови. МПК
получали центрифугированием на градиенте
фиколл-вераграфина,
плотностью 1,077 г/см3, по стандартной методике (Boyum A. Isolation of
mononuclear cells and granulocytes from human blood. Isolation of monuclear
cells by one centrifugation, and of granulocytes by combining centrifugation and
sedimentation at 1 g. Scand J. Clin. Lab. Invest. 1968. V.21, Suppl. 97. P.77-89).
МПК использовали для получения моноцитов методом адгезии (для
генерации из них дендритных клеток), а также получения Т- и В-лимфоцитов
методом иммуномагнитной сепарации с использованием коммерческих
наборов.
Генерация дендритных клеток из моноцитов. Для генерации
дендритных клеток к моноцитам (1-5×106кл/мл) вносили 100 нг/мл
гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GMCSF) (recombinant human GM-CSF, «R&D», США) и 20 нг/мл интерлейкина
(IL)-4 (recombinant human IL-4, «Invitrogen», США) (Талаев В.Ю., Матвеичев
А.В., Ломунова М.А. и др. Действие клеток плацентарного барьера на
созревание дендритных клеток in vitro. Иммунология. 2010. №3. С.125-131).
Клетки инкубировали в течение 5 суток. По окончании 3-х суток инкубации
меняли часть среды и повторно добавляли индукторы дифференцировки
дендритных клеток (IL-4 и GM-CSF), а также индуктор созревания
дендритных клеток – бактериальный липополисахарид (E.coli serotype
0111:B4, «Sigma», США) по 1 мкг/мл.
Иммуномагнитная сепарация Т- и В-лимфоцитов. Для получения
обогащенной суспензии Т-хелперов (CD4+-лимфоцитов), Treg (CD4+CD25+лимфоцитов)
и
Вreg
(CD19+CD25+-лимфоцитов)
применяли
иммуномагнитную сепарацию с использованием коммерческих наборов
«Dynabeads Regulatory CD4+CD25+ T-cell Kit» («Invitrogen», США),
«MagCellect human CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit» («R&D», США);
«MagCellect human B cell isolation kit» («R&D», США), «MagCellect human
CD25+ isolation kit» («R&D», США). Чистота негативного выделения,
оцениваемая методом проточной цитометрии по экспрессии CD4 и CD19 в
лимфоцитарном гейте, составляла 90-98%, позитивной, оцениваемой по
экспрессии CD25+  80-85%.
- 10 Получение клеток тимуса. Клетки тимуса получали пипетированием
его измельченного фрагмента в культуральной среде в чашке Петри, для
этого собирали клетки, активно переходящие в среду при легком
механическом воздействии, затем их использовали в соответствии с задачами
эксперимента.
Выделение дендритных клеток из тимуса. Для получения
миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса использовали
иммуномагнитную сепарацию с предподготовкой, направленной увеличение
чистоты выделения клеток (Stoeckle C., Rota I., Tolosa E. et al. Isolation of
myeloid dendritic cells and epithelial cells from human thymus. Journal of
visualized experiments. 2013. V.79. pp: e50951). с использованием
коммерческих наборов «Myeloid dendritic cell isolation kit, Human» и
«Diamond plasmacytoid dendritic cells isolation kit II, Human» (MACS «Miltenyi
Biotec», Гремания).
Биологически активные вещества. В данном исследовании
использовалась ацилированная изоформа грелина (ghrelin, «Sigma», Израиль),
получаемая путем рекомбинантного синтеза (с чистотой более 97% по
данным
ВЭЖХ,
на
основании
сертификата,
предоставляемого
производителем). Грелин использовали в концентрациях 1,25 и 0,83 нг/мл,
отражающих его уровень в периферической крови при беременности в I-II и
III триместрах беременности, соответственно (Fuglsang J., Skjaerbaek C.,
Espelund U. et al. Ghrelin and its relationship to growth hormones during normal
pregnancy. Clin. Endocrinol. 2005. V. 62. P.554-559). В качестве контроля
использовали пробы, куда вместо грелина вносили физиологический раствор,
используемый для растворения лиофилизированного гормона.
Статистический
анализ.
Первичную
обработку
данных
цитофлуориметрии проводили с помощью программ «WinMDI 2.9», «Kaluza
1.5» и «CytExpert 2.0». Статистический анализ проводили с использованием
программы «STATISTICA 11.0», где осуществляли проверку нулевой
гипотезы о нормальности распределения в выборке с применением критерия
Колмогорова-Смирнова. Оценку статистических отличий для данных
подчиняющихся закону нормального распределения проводили с
использованием парного t-критерия Стьюдента, в случае ненормального
распределения – с использованием парного T-критерия Вилкоксона. Различия
считали статистически значимыми при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние грелина на процессы индукции регуляторных Т- и Влимфоцитов периферической крови
Роль грелина в регуляции функциональной активности Treg. При
оценке роли грелина в регуляции супрессорной активности Treg установлено,
что грелин в концентрации, отражающей его уровень в I – II триместрах
беременности достоверно и избирательно повышает только процент Treg,
- 11 -
%, от гейта CD4+CD25+клеток
экспрессирующих GARP, не влияя на экспрессию CTLA-4 и GITR (рисунок
1), что, вероятно, создает условия функциональной устойчивости Treg. Повидимому, гормон является селективным индуктором данной субпопуляции
Treg, при этом усиление экспрессии GARP на Treg может способствовать
усилению их супрессорной активности, благодаря секреции mTGF- и/или
контактному взаимодействию GARP-mTGF- комплекса с клеткамимишенями и будет способствовать индукции CD4+CD25+ Т-клеток в TFOXP3 аутокринным или паракринным способом (Shevach E.M. Garp as a
therapeutic target for modulation of T regulatory cell function. Expert Opin. Ther
Targets. 2017. V. 21, №2. P.191-200; Gregori S., Bacchetta R., Passerini L. et al.
Isolation, expansion, and characterization of human natural and adaptive regulatory
T cells. Methods. Mol. Biol. 2007. V. 380. P.83-105). Кроме того, TGF-β1,
связываясь со своим рецептором (TGF-R) на наивных CD4+-Т-клетках, будет
препятствовать их дифференцировке в эффекторные клетки, также
инициируя формирование T-FOXP3 (Hahn S.A., Stahl H.F., Becker C. et al.
Soluble GARP has potent antiinflammatory and immunomodulatory impact on
human CD4+ T cells. Blood. 2013. V.122. P.1182-1191; Zheng S.G., Wang J.H.,
Stohl W. et al. TGF-beta requires CTLA-4 early after T cell activation to induce
FoxP3 and generate adaptive CD4+CD25+ regulatory cells. J. Immunol. 2006. V.
176, №6. P. 3321-3329).
*
100
80
60
40
20
0
CTLA-4+, n=6
GITR+, n=4
GARP+, n=4
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 1 – Влияние грелина в регуляции экспрессии
иммуносупрессорных молекул на CD4+CD25+-клетках, Mm; * –
статистически значимые отличия (p<0,05) по парному t-критерию
Стьюдента
При изучении влияния грелина на продукцию TGF-β1 и IL-10 в
культурах Treg модулирующих эффектов грелина выявлено не было (рисунок
2). По-видимому, это обусловлено тем, что гормон не обладает
регулирующим действием на выработку иммуносупрессорных цитокинов
Treg. Полученные результаты показывают, что грелин, в определенной мере,
регулирует экспрессию мембранных молекул на Treg, усиливая их
супрессорный потенциал [1].
- 12 30
пг/мл
20
10
0
TGF-β1, n=10
IL-10, n=6
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 2 – Влияние грелина на продукцию цитокинов Treg, M±m
%, от гейта CD19+CD25+клеток
Влияние грелина на индукцию толерогенного фенотипа CD19+CD25+клеток. При оценке влияния грелина в регуляции толерогенного потенциала
Breg установлено, что грелин, в концентрации характерной для I-II триметра
беременности достоверно увеличивает процент FOXP3+ и снижает уровень
PD-L1+ на CD19+CD25+-клетках. В концентрации характерной для III
триместра беременности, грелин производит противоположный эффект –
угнетает экспрессию FOXP3 и увеличивает число PD-L1+CD19+CD25+клеток. Обе концентрации не влияют на количество молекул CD86 и
внутриклеточного IL-10 в CD19+CD25+-клетках. Данные представлены на
рисунке 3. Низкий уровень PD-L1+ В-лимфоцитов в I-II триместре
беременности, может способствовать выживанию Treg, а повышение
количества PD-L1+ В-лимфоцитов в III триместре, очевидно необходимо для
успешной подготовки к родовой деятельности [3, 4]. Таким образом,
полученные результаты раскрывают новый механизм участия грелина в
формировании периферической толерантности в период физиологически
протекающей беременности.
60
50
40
10
10
8
8
6
6
4
4
4
2
2
2
10
*
*
*
8
6
*
30
20
10
0
0
FOXP3+, n=6
0
0
PD-L1+, n=6
CD86+, n=6
IL-10+, n=6
Контроль
Грелин 0,83 нг/мл
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 3 – Влияние грелина на CD19+CD25+-клетки, Me (LQ:UQ); * –
статистически значимые отличия (p<0,05) по парному Т-критерию
Вилкоксона
- 13 -
%, от гейта лимфоцитов
Роль грелина в регуляции количества Treg и Th17 в присутствии
CD19+CD25+-клеток. При определении роли гормона в регуляции
формирования Treg и Th17 из CD4+-лимфоцитов в присутствии
аутологичных CD19+CD25+ установлено, что грелин, в концентрациях
характерных для I-II и III триместров беременности, не оказывает влияния на
трансформацию CD4+- лимфоцитов в T-FOXP3 (CD4+CD25+FOXP3+), но
формирует тенденцию к снижению Th17 (CD4+IL-17A+ROR-C+),
(статистически недостоверно) (данные представлены на рисунке 4). Повидимому, эффектов, оказываемых грелином на CD19+CD25+-клетки,
описанных ранее, недостаточно для эффективной модуляции ими T-FOXP3 и
Th17 [5].
3
3
2
2
1
1
0
0
CD4+CD25+FOXP3+, n=6
Контроль
CD4+IL-17A+ROR-C+, n=8
Грелин 1,25 нг/мл
Грелин 0,83 нг/мл
Рисунок 4 – Влияние грелина в регуляции формирования
CD4+CD25+FOXP3+ и CD4+IL-17A+ROR-C+ Т-лимфоцитов при совместном
культивировании с CD19+CD25+-клетками, Me (LQ; UQ)
Значение грелина в регуляции созревания дендритных клеток
периферической крови и их функциональной активности
Влияние грелина на созревание дендритных клеток, генерируемых
из моноцитов периферической крови и продукцию цитокинов. Поскольку
ДК получали путем генерации из моноцитов, в первую очередь оценивали
эффективность используемой модели. Установлено, что моноциты,
культивируемые без факторов дифференцировки ДК – IL-4 и GM-CSF, не
смотря на полученный сигнал через TLR, характеризуются высокой
экспрессией моноцитарного маркера CD14 (Моноциты – 65,7 ± 6,4; Контроль
– 35,4 ± 14,6, p<0,05 по парному t-критерию критерию Стьюдента),
экспрессия которого должна ослабевать на созревающих и зрелых
дендритных клетках (Талаев В.Ю., Матвеичев А.В., Ломунова М.А. и др.
Действие клеток плацентарного барьера на созревание дендритных клеток in
vitro. Иммунология. 2010. №3. С.125-131), но отличались низким уровнем
экспрессии маркеров зрелых дендритных клеток – CD83 и CD86 (CD83:
Моноциты – 7,6 ± 0,1; Контроль – 37,5 ± 19,9, p<0,05 по парному t-критерию
- 14 -
%, от гейта моноцитов
критерию Стьюдента; CD86: Моноциты – 29,1 ± 1,9; Контроль – 76,5 ± 11,9,
p<0,05 по парному t-критерию критерию Стьюдента). При добавлении в
культуры моноцитов IL-4, GM-CSF происходит утрата молекулы CD14,
повышается уровень экспрессии CD83 и CD86, не влияя на экспрессию HLADR, что свидетельствует об успешной генерации дендритных клеток из
моноцитов периферической крови. При оценке влияния грелина в регуляции
созревания дендритных клеток установлено, что гормон не влияет на данный
процесс (рисунок 5).
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
1 n=7 HLA-DR+
2
3 n=7
4 n=7
CD14+,
, n=7 CD83+,
CD86+,
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 5 – Влияние грелина на созревание дендритных клеток, M±m
Поскольку спектр вырабатываемых дендритными клетками цитокинов
определяет направленность дифференцировки Т-клеток и развитие
иммунного ответа в целом, важно было оценить влияние грелина на
продукцию ключевых поляризующих цитокинов дендритных. Установлено,
что грелин не влияет на IL-12(р70), но снижает количество IL-12 (р40) в
супернатантах культур дендритных клеток и повышает уровни TGF-1 и IL10 (данные представлены на рисунке 6)
3
Концентрация
цитокинов, пг/мл
30
*
25
2
20
15
10
1
5
0
0
IL-12 (р70), n=7
IL-12 (р40), n=7
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
*
80
*
70
60
50
40
30
20
10
0
IL-10, n=7
TGF- β1, n=7
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 6 – Влияние грелина на продукцию цитокинов
дендритными клетками, M±m; * – статистически значимые отличия
(p<0,05) по парному t-критерию критерию Стьюдента.
- 15 Таким образом, снижение уровня IL-12 (р40) в совокупности с
повышением уровней TGF-β1 и IL-10 под действием грелина будет
способствовать сохранению беременности и может свидетельствовать о
значимой роли грелина в поддержании беременности [2].
Роль прединкубированных с грелином дендритных клеток в
регуляции баланса Treg/ Th17 и продукции цитокинов. В результате
проведенной
экспериментальной
серии,
при
культивировании
прединкубированных с грелином дендритных клеток с аллогенными
лимфоцитами, не выявлено значимых отличий в поддержании формирования
T-FOXP3 (CD4+CD25+FOXP3+) и угнетении Th17 (CD4+IL-17A+ROR-C+),
оцениваемых по экспрессии мембранных молекул и транскрипционных
факторов (данные представлены на рисунке 7).
%, от гейта лимфоцитов
4,0
3,0
2,0
1,0
0,0
CD4+CD25+ FOXP3+,
n=8
Контроль
CD4+IL-17A+ ROR-C+,
n=8
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 7 – Влияние грелина на способность дендритных клеток
индуцировать формирование CD4+CD25+FOXP3+ и CD4+IL-17A+ROR-C+ Тлимфоцитов, M±m
В то же время, изучение супернатантов совместных культур показало,
что прединкубированные с грелином дендритные клетки не влияют на
продукцию
IL-4,
Th2-цитокина,
индуктора
гуморального
и
антипаразитарного иммунного ответа (Mosmann T.R., Coffman R.L. TH1 and
TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional
properties. Annu. Rev. Immunol. 1989. V.7. P.145-173), а также
противоспалительного и толерогенного цитокина IL-10, продуцируемого
Treg и толерогенными дендритными клетками (Kammerer U., Kruse A.,
Barrientos G. et al. Role of dendritic cells in the regulation of maternal immune
responses to the fetus during mammalian gestation. J. Immunol. Invest. 2008. V.
37, I.5. P.499-533) в совместной культуре, при этом достоверно снижался
уровень IFNγ, основного Th1-цитокина (Geginat J., Paroni M., Maglie S. et al.
Plasticity of human CD4 T cell subsets. Front. Immunol. 2014. V.5, №630. doi:
10.3389/fimmu.2014.00630),
регулятора
активности
цитотоксических
- 16 лимфоцитов, NK-клеток и макрофагов и, в значительной степени IL-17А,
Th17-цитокина, медиатора хронического воспаления (Mowen K.A., Glimcher
L.H. Signaling pathways in Th2 development. Immunol. Rev. 2004. V.202. P.203222.) (данные представлены на рисунке 8). Таким образом, межклеточный
контакт дендритных клеток и CD4+-лимфоцитов играет решающую роль в
индукции их дифференцировки, но при этом прединкубированные с
грелином дендритные клетки способны регулировать их функциональную
активность препятствуя продукции Th1/Th17-цитокинов, тем самым
способствуя поддержанию Treg, что также может являться одним из
механизмов участия грелина в поддержании иммунной толерантности при
беременности [6].
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
3
цитокинов, пг/мл
Концентрация
60
50
2
40
30
1
20
10
0
0
IL-4, n=8
IL-10, n=8
Контроль
*
25
20
15
10
*
5
0
IFN-γ,n=8
IL-17A,n=8
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 8 – Влияние грелина на продукцию цитокинов при
совместном культивировании дендритных клеток с аллогенными
лимфоцитами, M±m; * – статистически значимые отличия (p<0,05) по
парному t-критерию критерию Стьюдента
Роль прединкубированных с грелином дендритных клеток в
индукции толерогенного потенциала CD19+CD25+ В-лимфоцитов. В
отношении роли прединкубированных с грелином дендритных клеток в
регуляции фенотипа Breg установлено, что, грелин, в концентрациях
характерной для I-II триместра беременности, способен увеличивать число Влимфоцитов (CD19+) и B-FOXP3 (CD19+FOXP3+), не влияя на число
Br1(CD19+IL-10+). Прединкубированные с грелином дендритные клетки, в
концентрации характерной для III триместра беременности не влияют на
количество B-клеток и Breg подтипов. Данные представлены на рисунке 9.
Таким образом, грелин, в концентрации характерной для I-II триместра
беременности, действуя через дендритные клетки способствует расширению
пула B-FOXP3, не влияя на число Br1. Грелин, в концентрации характерной
для III триместра беременности не влияет на количество B-клеток и подтипов
Breg.
%, от гейта лимфоцитов
- 17 -
*
20
14
14
*
12
12
18
16
10
10
14
12
8
8
10
6
6
8
4
4
6
2
2
0
0
4
2
0
CD19+FOXP3+, n=5
CD19+, n=5
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
CD19+IL-10+, n=5
Грелин 0,83 нг/мл
Рисунок 9 – Влияние прединкубированных с грелином дендритных
клеток в индукции Breg, Me (LQ; UQ); * – статистически значимые отличия
(p<0,05) по парному Т-критерию Вилкоксона
%, от гейта моноцитов
Влияние грелина на формирование субпопуляций дендритных
клеток и Т-лимфоцитов тимуса и их функциональной активности
Значение грелина в регуляции фенотипа миелоидных и
плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса
В результате проведенного исследования установлено, что грелин в
исследуемых концентрациях не оказывают значимых эффектов на общее
количество тимических миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток,
оцениваемых по экспрессии CD11c и CD303, соответственно. Данные
представлены на рисунке 10. Таким образом, грелин, в концентрации 1,25 и
0,83 нг/мл, соответствующей его уровню в I-II и III триместрах
беременности, соответственно, не влияет на число миелоидных и
плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса [7, 9].
10
10
8
8
6
6
4
4
2
2
0
0
CD11c+, n=4
CD303+, n=5
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Грелин 0,83 нг/мл
Рисунок 10 – Влияние грелина в регуляции числа миелоидных и
плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса, Me (LQ; UQ)
- 18 Роль примированных грелином миелоидных и плазмоцитоидных
дендритных клеток тимуса в индукции формирования Treg, Th17 и
iNKT-клеток. При оценке роли прединкубиролванных с грелином
миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса в регуляции
дифференцировки тимоцитов установлено, что данные клетки не влияют на
дифференцировку T-FOXP3 (CD4+CD25+FOXP3+) и Th17 (CD4+IL-17A+RORC+), но разнонаправленно регулируют формирование субпопуляции iNKTклеток (CD3hiV24J18+) в культуре клеток тимуса, достоверно увеличивая
их количество в культуре с миелоидными дендритными клетками, и
уменьшая их количество при совместном культивировании
с
плазмоцитоидными дендритными клетками. Результаты эксперимента
представлены на рисунке 11.
Исходя из результатов данной экспериментальной серии, можно
предположить, что снижение уровня грелина при беременности будет
приводить к расширению пула iNKT-клеток в периферической крови и
децидуальной оболочке, что в свою очередь повлечет снижение уровня IL-10,
и усиление экспрессии IFNγ, создавая условия, благоприятствующие
развитию провоспалительного Th1 иммунного ответа, повышая тем самым
вероятность неблагоприятного исхода беременности. Учитывая данные
настоящего эксперимента, прединкубированные с грелином миелоидные и
плазмоцитоидные дендритные клетки тимуса могут оказывать оппозитные
эффекты на количество iNKT в тимусе [8].
%, от гейта лимфоцитов
3
Миелоидные дендритные клетки + тимоциты
2
*
1
0
3
CD4+CD25+FOXP3+, CD4+IL-17A+ROR-c+, CD3hi Va24Ja18+, n=6
n=6
n=4
Плазмоцитоидные дендритные клетки + тимоциты
2
*
1
0
CD4+CD25+FOXP3+,
n=6
CD4+IL-17A+RORc+, n=4
CD3hi Va24Ja18+, n=6
Контроль
Грелин 1,25 нг/мл
Рисунок 11 – Влияние прединкубированных с грелином миелоидных и
плазмоцитоидных дендритных клеток в регуляции дифференцировки
тимоцитов, Me (LQ; UQ); * – статистически значимые отличия (p<0.05) по
парному T-критерию Вилкоксона
- 19 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При осуществлении настоящего исследования продемонстрировано,
что механизмы, принимающие участие в реализации эффектов грелина,
обеспечивают усиление толерогенной активности дендритных клеток и
регуляторных лимфоцитов. При участии грелина в исследуемых клетках
экспрессируются транскрипционные факторы, способствующие либо
усилению
синтеза
толерогенных
цитокинов
и
поверхностных
иммуносупрессорных молекул (основные эффекты гормона представлены на
рисунке 12), либо подавлению продукции провоспалительных, что
способствует смещению баланса от Th1 в сторону Th2/Treg. Таким образом,
грелин, в концентрациях характерных для беременности, может
предотвращать
развитие
иммунной
агрессии
и
способствовать
формированию иммунной толерантности, которая является необходимым
условием для сохранения плода и успешного течения беременности.
Грелин 1,25 нг/мл
Грелин 0,83 нг/мл
Рисунок 12 – Основные эффекты грелина
Перспективы дальнейшей разработки темы. Полученные в
настоящем исследовании результаты углубляют представления об
иммунорегулирующей активности грелина. Дальнейшее изучение эффектов
грелина в регуляции клеток иммунной системы позволит расширить границы
использования этого гормона в медицинской практике.
- 20 ВЫВОДЫ
1.
Грелин в концентрации 1,25 нг/мл повышает число
натуральных
Т-регуляторных
лимфоцитов,
экспрессирующих
иммуносупрессорные молекулы, создавая условия их функциональной
устойчивости, но не влияет на продукцию трансформирующего фактора
роста-β1 и интерлейкина-10;
2.
Грелин в концентрации 1,25 нг/мл повышает количество
регуляторных CD19+CD25+FOXP3+-В-лимфоцитов, но снижает количество на
CD19+CD25+PD-L1+ В-лимфоцитов. В концентрации 0,83 нг/мл гормон
оказывает противоположный эффект, снижая количество регуляторных
CD19+CD25+FOXP3+-В-лимфоцитов, и повышая число CD19+CD25+PD-L1+
В-лимфоцитов;
3.
Грелин, в концентрации 1,25 нг/мл не оказывает эффектов на
девиацию CD4+CD25+FOXP3+-Т-лимфоцитов и T-хелперов, продуцирующих
интерлейкин-17 из CD4+-лимфоцитов, культивировавшихся в присутствии
CD19+CD25+-В-лимфоцитов;
4.
Грелин в концентрации 1,25 нг/мл не влияет на
дифференцировку и созревание дендритных клеток, но контролирует их
функциональную активность, снижая продукцию интерлейкина-12 (p40) и
повышая уровень трансформирующего фактор роста-β1 и интерлейкина-10 в
супернатантах культур дендритных клеток;
5.
Грелин, в концентрации 1,25 нг/мл, не оказывает влияния на
созревание дендритных клеток из моноцитов периферической крови и не
влияет на способность этих клеток индуцировать формирование
регуляторных
CD4+CD25+FOXP3+-Т-лимфоцитов
и
T-хелперов,
продуцирующих интерлейкин-17, при совместном культивировании
прединкубированных дендритных клеток с аллогенными лимфоцитами, и
угнетает выработку цитокинов интерферона-гамма и интерлейкина-17A, но
не влияет на синтез интерлейкина-4 и интерлейкина-10 аллогенными
лимфоцитами, оцениваемую в супернатантах совместных культур;
6.
Присутствие грелина в концентрации 1,25 нг/мл в процессе
созревания дендритных клеток, генерируемых из моноцитов периферической
крови,
усиливает
их
способность
индуцировать
регуляторные
CD19+CD25+FOXP3+-В-лимфоциты из аутологичных CD19+CD25+-клеток.
Присутствие грелина в концентрации 0,83 нг/мл в процессе созревания
дендритных клеток не влияет на их способность модулировать формирование
регуляторных подтипов В-лимфоцитов из аутологичных CD19+CD25+клеток;
7.
Грелин, в концентрациях 1,25 нг/мл и 0,83 нг/мл не влияет на
количество миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса;
8.
Прединкубированные с грелином (1,25 нг/мл) миелоидные и
плазмоцитоидные
дендритные
клетки
тимуса
при
совместном
культивировании с интактными тимоцитами разнонаправленно регулируют
- 21 формирование инвариантных Т-лимфоцитов с функциями натуральных
киллеров (CD3hiV24J18+), и не влияют формирование регуляторных
CD4+CD25+FOXP3+-Т-лимфоцитов
и
T-хелперов,
продуцирующих
интерлейкин-17.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Полученные в настоящем исследовании данные могут быть
использованы
при
планировании
дальнейшего
изучения
иммунорегулирующего действия грелина, а также могут стать обоснованием
изучения взаимосвязи уровня грелина при беременности и особенностей
иммунного статуса женщин с периодическими спонтанными абортами и
угрозой спонтанного выкидыша. Данное исследование углубляет
представления о регуляции грелином активности клеток иммунной системы,
позволяя расширить сферу его использования для лечения воспалительных и
аутоиммунных процессов. Полученные данные могут быть использованы в
программах курсов по «иммунология», «эндокринология» и «цитология» в
рамках подготовки специалистов в ВУЗах.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Орлова, Е.Г. Регуляция лептином и грелином экспрессии мембранных
молекул и продукции цитокинов натуральными Т-регуляторными клетками /
Е.Г. Орлова, С.В. Ширшев, О.А. Логинова // Вестник Пермского
университета. – 2014. – №1. – С. 49-52.
2. Орлова, Е.Г. Регуляция лептином и грелином созревания дендритных
клеток и продукции цитокинов» / Е.Г. Орлова, С.В. Ширшев, О.А.
Логинова // Российский иммунологический журнал. – 2015. – Т.9 (18),
№1. – С.114-117.
3.Орлова, Е.Г. Роль грелина в регуляции функций Breg / Е.Г. Орлова,
О.А. Логинова, С.В. Ширшев // Российский иммунологический журнал.
– 2016. – Т.10(19), № 2(1). – С.63-65.
4.Орлова, Е.Г. Роль грелина в контроле свойств Breg / Е.Г. Орлова, О.А.
Логинова, С.В. Ширшев // Тезисы Всероссийской научно-практической
конференции с международным участием «Наукоемкие и биомедицинские
технологии: от фундаментальных исследований до внедрения». Пермь, 2016.
– С. 78-79.
5.Орлова, Е.Г. Роль грелина в регуляции функциональной активности Treg и
Breg / Е.Г. Орлова, О.А. Логинова, С.В. Ширшев // Материалы IX
Всероссийского конгресса молодых ученых-биологов «Симбиоз-Россия»,
г.Пермь, 2016. – С. 20-24.
6.Орлова Е.Г. Лептин и грелин регулируют созревание дендритных
клеток, индуцирующих формирование регуляторных Т-лимфоцитов /
Е.Г. Орлова, С.В. Ширшев, О.А. Логинова // Доклады академии наук, –
2015. – Т.462, №6. – С. 723-726.
- 22 7.Ширшев C.В. Гормональная регуляция тимической дифференцировки
дендритных клеток / C.В. Ширшев, Е.Г. Орлова, О.А. Логинова, И.В.
Некрасова, О.Л. Горбунова, И.Л. Масленникова // Вестник пермского
университета. – 2016. – №4. – С. 395-400.
8.Орлова, Е.Г Примированные грелином дендритные клетки тимуса
контролируют формирование iNKT / Орлова Е.Г., Ширшев С.В., Логинова
О.А. // Материалы II международной научно-практической конференции
«Высокие технологии, определяющие качество жизни», г.Пермь, 2018. –
C.248-251.
9.Ширшев, C.В. Гормональная регуляция дифференцировки дендритных
клеток тимуса / Ширшев C.В., Орлова Е.Г., Логинова О.А. Горбунова
О.Л.,
Некрасова
И.В.,
Масленникова
И.Л.
//
Бюллетень
экспериментальной биологии и медицины, – 2018. – Т.165, №2. – С. 193198.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
– миллилитр
мл
– нанограмм
нг
– подтип регуляторных В-лимфоцитов
Br1
– подтип регуляторных В-лимфоцитов
B-FOXP3
– регуляторные В-лимфоциты
Breg
– (англ. cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 или CD152)
CTLA-4
Т-лимфоцит-ассоциированный протеин 4
– инвариантные Т-лимфоциты с функциями натуральных
iNKT
киллеров
– (или LRRC32) богатые лейцином повторы
GARP
– индуцируемый глюкокортикоидами TNF-рецептор
GITR
– гранулоцитарно-макрофагальный
колониестимулирующий
GM-CSF
фактор
– молекулы из группы человеческих лейкоцитарных антигенов
HLA-DR
– интерлейкин
IL
– натуральные киллерные клетки
NK
NKТ-клетки – Т-лимфоциты, объединяющие экспрессию классическихТ- и
NK-клеточных рецепотов
– лиганд для молекул программируемой гибели клеток
PD-L1
– подтип Treg
T-FOXP3
– рецепторы, распознающие молекулярные паттерны патогенов
TLR
– трансформирующий фактор роста β1
TGF-β1
– Т-хелперы 1 типа
Тh1
– интерлейкин-17-продуцирующие Т-лимфоциты
Th17
– Т-хелперы 2 типа
Тh2
– регуляторные Т- лимфоциты
Тreg
– рецептор для трансформирующего фактора роста
TGF-R
- 23 -
Логинова Ольга Александровна
МЕХАНИЗМЫ ИММУНОРЕГУЛИРУЮЩЕЙ
АКТИВНОСТИ ГРЕЛИНА
14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Челябинск – 2018
Подписано в печать __.__.____. Формат 60х90. Тираж __ экз. Усл. печ. л. __
Набор компьютерный.
Отпечатано в ______
- 24 -
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
2
Размер файла
640 Кб
Теги
иммунорегулирующей, активности, грелина, механизм
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа