close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Клинико-прогностическое значение иммунофенотипического профиля инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток в меланоме кожи

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
БОЖЧЕНКО ЯНА АНАТОЛЬЕВНА
КЛИНИКО-ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ ИНФИЛЬТРИРУЮЩИХ
ОПУХОЛЬ ЛИМФОЦИТОВ В МЕЛАНОМЕ КОЖИ
14.01.12 онкология
14.03.02 патологическая анатомия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук
Москва – 2018 г.
2
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении
«Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н.
Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации (директор –
член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук, профессор Стилиди Иван
Сократович).
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор
Демидов Лев Вадимович
кандидат медицинских наук
Вишневская Яна Владимировна
Официальные оппоненты:
Боженко Владимир Константинович, доктор медицинский наук, профессор, заведующий
отделом молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей Федерального
государственного бюджетного учреждения «Российский научный центр рентгенорадиологии»
Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Смольянникова
Вера
Анатольевна,
доктор
медицинских
наук,
профессор
кафедры
патологической анатомии имени академика А.И. Струкова Федерального государственного
автономного образовательного учреждения высшего образования Первый Московский
государственный
медицинский
университет
имени
И.М.
Сеченова
Министерства
здравоохранения Российской Федерации.
Ведущая организация:
Федеральное
государственное
бюджетное
учреждение
"Национальный
медицинский
исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения
Российской Федерации
Защита состоится «___» __________ 2018 года в 10-00 часов на заседании диссертационного совета
Д 001.017.01 на базе ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России по адресу:
115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 23.
С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н.
Блохина» Минздрава России по адресу: 115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24 и на сайте
www.ronc.ru
Автореферат разослан «……» …………………… 2018 года.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор
Шишкин Юрий Владимирович
3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы и степень ее разработанности
Меланома кожи (МК) - злокачественная опухоль из клеток меланоцитарной системы и
одно из наиболее агрессивно протекающих злокачественных новообразований человека,
обладающее высоким метастатическим потенциалом [Кабановская И.Н., 2010, Константинова
Н.М., 2007]. Современные эпидемиологические исследования установили стремительный рост
заболеваемости МК в разных странах, в том числе и в России, что позволяет рассматривать этот
факт, как общемировую тенденцию [Алиев М.Д, 2014].
Прогноз течения МК во многом определяется такими морфологические характеристики
первичной опухоли как: толщина по Бреслоу, уровень инвазии по Кларку, наличие или
отсутствие изъязвления, опухолевых эмболов в лимфатических и/или кровеносных сосудах,
участков периневрального роста [Balch C.M. et al, 2009, Clemente, C.G. et al, 1996].
Исследования последних 10 лет добавили к выше перечисленным факторам прогноза
еще и такой потенциально значимый фактор как лимфоцитарная инфильтрация опухоли или
tumor-infiltrating lymphosytes (TILs) [Deinlein T. et al, 2017, Cintolo J.A. et al, 2013].
TILs является одной из ее характерных особенностей и отражением состояния
локального иммунитета организма [Shevach E.M. et al, 2009]. Однако, стоит отметить, что TILs
включает множество субпопуляций лимфоцитов, выполняющих различные, а подчас и
противоположные функции [Piepkorn M. et al, 2004]. Исследования TIL в МК показали, что в его
состав входят преимущественно Т-клетки, экспрессирующие на своей мембране CD45+, CD3+,
CD4+, CD8+ кластеры дифференцировки [Riazi F. et al, 2015]. Отмечается наличие В-лимфоцитов,
макрофагов, дендритных клеток [Karagiannis P. et al, 2014, Salama P. et al, 2009]. В последние
годы получены многочисленные сведения о роли субпопуляции регуляторных FoxP3+ Тлимфоцитов в патогенезе патологических состояний иммунной системы у онкологических
больных [Roncarolo, M.G. et al, 2001, Walker, M.R et al, 2003, Weiss, S.A. et al, 2016]. Ряд
исследований показал, что Т-регуляторные клетки играют активную и значительную роль в
опухолевой прогрессии
и подавлении противоопухолевого иммунитета [Wang, W.H. et al,
2010, Merio, A. et al, 2009].
Оценка уровня содержания различных субпопуляции иммунных клеток и их
соотношений в лимфоидном инфильтрате МК позволит понять механизмы прогрессии данной
опухоли, выделить группы больных с неблагоприятным прогнозом течения заболевания и
оптимизировать тактику ведения и лечения данных групп пациентов.
Цель исследования
Определение
прогностического
значения
содержания
различных
иммунных клеток и их соотношений в лимфоидном инфильтрате первичной МК.
субпопуляций
4
Задачи исследования
1.
Изучить
интратуморальных
состав
и
лимфоцитов и
соотношение
различных
субпопуляций
макрофагов, инфильтрирующих
ПМК
пери-
и
с помощью
иммуногистохимических маркеров (CD45, CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3, TIA1)
2.
Определить корреляцию показателей субпопуляций пери- и интратуморальных
лимфоцитов и макрофагов в ПМК с такими клиническими характеристиками как пол, возраст
больного, стадия заболевания.
3.
Определить корреляцию показателей субпопуляций лимфоцитов и макрофагов,
инфильтрирующих ПМК с такими морфологическими характеристиками опухоли, как тип
роста, наличие изъязвления, сосудистой инвазии, участков периневрального роста, частичной
спонтанной регрессии, с толщиной опухоли по Бреслоу и глубиной инвазии по Кларку.
4.
Определить
средние
показателей
различных
субпопуляций
пери-
и
интратуморальных лимфотитов и макрофагов и индексов их соотношения у больных I-II стадии
заболевания без прогрессирования (1-ая группа наблюдения), у больных МК со II-ой стадией
заболевания с последующим прогрессированием заболевания (2-ая группа наблюдения) и у
больных МК с III-IV стадиями заболевания (3-я группа наблюдения).
5.
Определить прогностическое значение и пороговые значения прогностически
значимых субпопуляций пери- и интратуморальных лимфоцитов и макрофагов и индексов их
соотношения для общей и безрецидивной выживаемости больных МК.
6.
Выявить параметры локального иммунитета, имеющие наибольшую клинико-
прогностическую значимость с целью возможности использования ИГХ исследований для
выделения групп больных с неблагоприятным прогнозом, подлежащих диспансеризации и
более тщательному наблюдению.
Научная новизна
Проведено комплексное иммунофенотипирование и количественная оценка показателей
пери-
и
интратуморальных
лимфоцитов и
макрофагов,
как
параметров
локального
противоопухолевого иммунитета, с выявлением их взаимосвязи с клинико-морфологическими
особенностями ПМК и течением заболевания.
На основе этого анализа создан алгоритм иммуногистохимической и морфологической
диагностики, уточняющей прогноз течения меланомы кожи и ее исход.
Теоретическая и практическая значимость.
Изучение состава субпопуляций лимфоцитарного инфильтрата первичных МК с
использованием панели диагностических молекулярно-биологических ИГХ маркеров позволит
улучшить точность определения метастатического потенциала опухоли, исхода заболевания и
будет способствовать выбору адекватной тактики наблюдения и лечения пациентов.
5
Методология и методы исследования
Методологической
основой
диссертационной
работы
является
комплексное
исследование пери- и интратуморально расположенных субпопуляций лимфоцитов и
популяции макрофагов, а также индексов их соотношений как параметров локального
иммунитета с помощью иммуногистохимического окрашивания гистологических срезов и
подсчета среднего количества клеток, содержащихся в лимфоидном инфильтрате опухоли
В диссертационном исследовании также проводился анализ корелляционных связей
изучаемых параметров локального иммунитета с клинико-морфологическими параметрами, 5летней общей и безрецидивной выживаемостью.
Степень достоверности результатов и их апробация
Представленные в работе теоретические положения, выводы и методические подходы
основаны на глубокой и тщательной проработке значительного объема ретроспективного и
проспективного материала с применением комплекса современных статистических методов,
адекватных поставленным задачам. Представленный объем материала и его качество являются
достаточными для решения поставленных задач, обеспечивают достоверность результатов
исследования, сформулированных выводов.
Положения, выносимые на защиту
1.
У больных меланомой кожи с более поздними стадиями заболевания (III-IV)
отмечаются более низкие показатели содержания в лимфоидном инфильтрате CD8+ и TIA1+ Тлимфоцитов и более высокие показатели индекса их соотношения CD8+/TIA1+.
2.
Высокие
показатели
интратуморально
расположенных
субпопуляций
иммунокомпетентных клеток в первичной меланоме кожи коррелируют с большей толщиной
опухоли по Бреслоу, а также такими факторами прогноза как стадия заболевания, наличие
изъязвления опухоли, прогрессирование заболевания, наличием синхронных с первичной
меланомой кожи метастазов в лимфатических узлах.
3.
Низкие
показатели
индексов
соотношения
CD3+/CD20+,
CD4+/FoxP3+,
CD8+/FoxP+3 интратуморальных лимфоцитов коррелируют с более поздними стадиями
заболевания (III-IV).
4.
У больных меланомой кожи на благоприятный прогноз 5-летней общей
выживаемости влияют такие показатели местного (тканевого) иммунитета, как индекс
соотношения субпопуляций CD8+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов.
5.
У больных меланомой кожи неблагоприятный прогноз 5-летней общей и 5-летней
безрецидивной выживаемости связан с увеличением содержания в лимфоидном инфильтрате
первичной опухоли субпопуляций интратуморальных FoxP3+ и CD20+ лимфоцитов.
6
Апробация диссертации
Апробация работы состоялась 9 июня 2017 года на совместной научной конференции
отделения отдела патологической анатомии опухолей человека, хирургического №10
(биотерапии опухолей), отделения хирургического №1 (общей онкологии), отделения
химиотерапии
и
комбинированного
лечения
злокачественных
опухолей,
лаборатории
клинической иммунологии опухолей централизованного клинико-лабораторного отдела 7,
отделения
опухолей
головы
и
шеи
НИИ
клинической
онкологии,
лаборатории
экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики
и терапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России.
Основные положения работы доложены на V Евразийском форуме по меланоме и
опухолям кожи (Суздаль, 2016 г), IX Съезде онкологов и радиологов стран СНГ и Евразии
(Минск, 2016), на научно-практической конференции «Вопросы диагностики и лечения
меланомы и опухолей кожи» (Москва, 2017 г.).
Публикации
По материалам диссертации опубликованы 4 статьи, в журналах, рекомендованных
перечнем ВАК при Минобрнауки России.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.01.12
онкология, конкретно пункту 2 и 14.03.02 патологическая анатомия, конкретно пунктам 1,2.
Личный вклад автора
Автор самостоятельно провёл анализ опубликованных отечественных и зарубежных
исследований по теме диссертации, сформулировал и определил цели и задачи исследования,
спланировал
его
дизайн.
Автор
собрал
и
подготовил
для
морфологического
и
иммуногистохимического исследования 180 образцов меланомы кожи, проанализировал 5летнюю общую и безрецидивную выживаемость пациентов. С помощью современных методов
статистической обработки данных автор провёл анализ полученных результатов на
качественном и на количественном уровне.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста. Работа
содержит список сокращений, введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты,
обсуждение и выводы. Указатель литературы включает 20 отечественных и 112 зарубежных
источников. Работа дополнена 87 таблицами и проиллюстрирована 37 рисунками
7
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Общая характеристика обследованных больных меланомой кожи
В исследование вошло 180 больных МК, оперированных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.
Блохина» МЗ РФ за период 2003-2007гг., на гистологическом материале которых было
проведено иммуногистохимическое исследование лимфоидного инфильтрата первичной
опухоли.
Среди 180 больных МК пациенты женского пола наблюдались в 98 (59,2%) случаях,
пациенты мужского пола в 82 (40,8%) случаях. Средний возраст больных МК составил
51,3±11,1года.
Больные с IA стадией заболевания наблюдались в 10 (5,5%) случаях, с IB стадией
заболевания – в 18 (10%) случаях, со IIA стадией заболевания – в 20 (11,1%) случаях, со IIB
стадией заболевания – в 42 (23,3%) случаях, со IIС стадией заболевания –в 50 (27,7%) случае, с
IIIB стадией заболевания – в 2 (1,1%) случаях, с IIIC стадией заболевания - в 36 (20%) случаях,
с IV стадией заболевания – в 2 (1,1%) случаях.
Первичная опухоль локализовалась в области туловища в 90 (50%) случае, на нижних
конечностях в 40 (22,2%) случае, на верхних конечностях в 22 (12,2%) случаях, в области
головы и шеи в 16 (8,8%) случаях и акрально в 12 (6,7%) случаях.
В 134 (74,4%) случаях ПМК имела узловой тип роста, в 42 (23,3%) случаях
поверхностно-распространяющийся тип роста, в 4 (2,2%) случаях отмечалась лентигинозная
ПМК.
Эпителиоидноклеточная ПМК отмечалась в 114 (63,3%) случаях, веретеноклеточная
ПМК - в 8 (4,4%) случаях, невоидная - в 4 (2,2%) случаях, баллоноклеточная в 4 (2,2%) случаях,
смешаные варианты ПМК составили 50 (27,8%) случаев.
При оценке толщины опухоли по Бреслоу все случаи ПМК разделились следующим
образом: толщина опухоли менее или равная 1 мм наблюдалась в 12 (6,7%) случаях, от 1,1мм до
2мм – в 30 (16,7%) случаях, от 2,1 до 4мм – 44(24,4%) случаях, более 4,1мм – в 94 (52,2%)
случаях.
Уровень инвазии по Кларку I-ый – наблюдался в 2 (1,1%) случаях, II-ой – в 26(14,4%)
случаях, III-ий – в 80 (44,4%) случаях, IV-ый – в 36 (20%) случаях, V-ый – в 36 (20%)
случаях
Изъязвление опухоли наблюдалось в 124 (68,9%) случаях, опухолевые эмболы в
лимфатических и/или кровеносных сосудах - в 36 (20%) случаях, периневральное
распространение опухоли - в 12 (6,7%) случаях. Регрессия ПМК наблюдалась в 14 (7,8%)
8
случаях. Время наблюдения за больными МК составило 78,0±41,1 месяца, от 7,1 до 125,2,
медиана 100,2 мес.
Лабораторные методы исследования
Для иммуногистохимического исследования были использованы парафиновые блоки
ПМК от операционного материала, взятые из архива отдела патологической анатомии опухолей
человека ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН. Иммуногистохимическое исследование
выполнялось на серийных депарафинизированнных срезах опухолевой ткани с помощью
биотин-стрептавидинового
иммунопероксидазного
метода
с
антителами
к
маркерам
лимфоцитов (CD3, CD4, CD8 CD20, CD68, FoxP3, TIA1), представленным в таблице 1.
Срезы толщиной 3-5 мкм депарафинизировали и регидратировали по стандартной схеме.
Для демаскировки антигенов проводили предварительную обработку депарафинизированных
срезов в водяной бане при 95 оС в течение 40 мин с использованием цитратного буфера рН 6,0
(Dako). Срезы инкубировали с первичными антителами в течение 1 часа при комнатной
температуре. В качестве вторичных антител и пероксидазного комплекса использовали
стандартный набор реагентов LSAB+ Kit или систему детекции Super Sensitive™ Polymer-HRP
("Bi-oGenex"). Для визуализации реакции применялся раствор диаминобензидина DAB+ (Dako).
Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера. В тех случаях, когда опухоль была
гиперпигментирована проводили докрашивание Азуром В, окрашивающим меланин в зеленый
цвет.
Таблица 1 - Характеристика использованных в исследовании антител
Антиген
Антитело
Фирма
Титр
Функции белка
(клон)
CD3
F7.2.38
DAKO
1:140
Активированные Т-лимфоциты
CD8
С8/144В
DAKO
1:100
Цитотоксические Т-лимфоциты
CD4
4В12
DAKO
2:70
Т-хелперы
CD20
L26
DAKO
1:400
В-лимфоциты
FoxP3
22510b
ABCAM
1:2RTU
Регуляторные Т-лимфоциты
CD68
PG-M1
DBS
1:140
Макрофаги
TIA-1
2G9А10F5
BioGenex
1:140
Активированные
цитотоксические Т-лимфоциты
Оценку
лимфоцитарно-макрофагальной
инфильтрации
опухоли
проводили
гистологически, путем подсчета количества положительно окрашенных CD3+, CD4+, CD8+
CD20+, FoxP3+, TIA1+ лимфоцитов и CD68+ макрофагов не менее чем в 10 репрезентативных
полях зрения на увеличении х400 как в интратуморально, так в перитуморально расположенном
лимфоидном инфильтрате опухоли, в областях наиболее интенсивного окрашивания. [Hussein
9
M.R., 2006]. Оценка проводилась двумя независимыми исследователями. Определялось среднее
количество клеток в 1 поле зрения. Индексы соотношения субпопуляций лимфоцитов мы
получали путем деления среднего показателя одной субпопуляции на средний показатель
другой субпопуляции иммунных клеток, то есть как частное средних показателей двух
субпопуляций лимфоцитов.
Методы статистического анализа данных
Математический анализ полученных результатов проводили с использованием пакета
статистических программ SPSS 17.0 for Windows и Microsoft® Office Access 2007.
Рассчитывали среднее значение показателей, стандартную ошибку среднего, медианы.
Достоверность различий частот признаков в изучаемых группах определяли с использованием
критерия
χ2,
теста
Мантеля-Хэнзеля,
тест
Краскела-Уоллиса
(различия
считались
статистически значимыми при р<0.05).
Для оценки роли клинических и морфологических факторов на 5-летнюю общую и
безрецидивную
выживаемость
больных
МК
была
выполнена
серия
однофакторных
регрессионных анализов Кокса, где в качестве конечной точки выбрана переменная
прогрессирование и продолжительность жизни больных. На основе данных однофакторного
анализа проведен многофакторный анализ прогностической значимости комплекса клиникоморфологических признаков с учетом иммуногистохимических показателей. Многофакторный
анализ проводился методом регрессионного анализа по Cox (Proportional hazard regression
model).
Для оценки роли количественных переменных (уровень экспрессии лимфоцитарных
антигенов) в отношении прогрессирования заболевания и продолжительности жизни больных
выполнен анализ, основанный на построении ROC-кривых. Построение ROC-кривых
подразумевало выбор пороговых значений для переменных, статистически значимо влияющих
на прогрессирование и продолжительность жизни больных МК. При выборе пороговых
значений производился расчет чувствительности и специфичности переменной в отношении
предсказания прогноза продолжительности жизни больных МК.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Субпопуляций иммунокомпетентных клеток и индексы их соотношения в лимфоидном
инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения.
Проведен
сравнительный
анализ
показателей
медиан
субпопуляций
пери-
и
интратуморальных иммунокомпетентных клеток (ИКК) и индексов их соотношения у больных
3-х групп наблюдения.
10
Таблица 2 - Медианы субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК в 3-х группах
наблюдения.
Медиана
ИКК
1 Группа (n=60)
2 Группа (n=80)
3 Группа (n=40)
пт/ит
пт/ит
пт/ит
CD3+
129,9/19,6
148,8/26
122,3/50,6
0,11/0,0001
CD8+
82,2/10,2
83,1/14
72,6/28,9
0,42/0,0001
CD4+
43,6/7,5
61,6/11,3
50,9/20,5
0,003/0,0001
FoxP3+
19/1,3
42,1/4,3
24,6/5,7
0,0001/0,0001
CD20+
19,7/0,5
40,5/2,4
37,3/3,5
0,0001/0,0003
TIA-1+
39/3
34/5
16/5
0,0001/0,06
CD68+
46,5/20
55/27
30/25
0,0001/0,07
р
Самые высокие показатели содержания в лимфоидном инфильтрате ПМК субпопуляций
CD3+, CD4+, CD20+, FoxP3+, CD68+ перитуморальных ИКК наблюдались во 2-ой группе
наблюдения, самые низкие показатели содержания данных субпопуляций ИКК отмечались в 1ой группе наблюдения.
Показатели TIA1+, то есть активированных цитотоксических Т-
лимфоцитов в 3-ей группе наблюдения был в 2 раза ниже, чем в 1-ой и 2-ой группах
наблюдения (р=0,0001). Показатели содержания субпопуляций CD3+, CD8+ лимфоцитов в
лимфоидном инфильтрате ПМК не имели статистически достоверных отличий между 3-мя
группами наблюдения (р>0,05).
Статистически достоверно самые высокие показатели содержания интратуморальных
CD3+, СD8+, СD4+, CD20+, FoxP3+, TIA1+, CD68+ ИКК в лимфоидном инфильтрате ПМК
отмечались в 3-ей группе наблюдения, а самые низкие в 1-ой группе наблюдения (р<0,05).
Таким образом, можно отметить тенденцию увеличения содержания в лимфоидном
инфильтрате ПМК всех субпопуляций интратуморальных ИКК с увеличением стадии
заболевания и соответственно толщины опухоли по Бреслоу.
Таблица 3 - Медианы индекса соотношений субпопуляций пери- и интратуморальных
ИКК у больных МК 3-х групп наблюдения.
Медиана индекса
соотношения ИКК
CD3+/СD20+
CD4+/СD8+
CD4+/FoxP3+
CD8+/FoxP3+
CD8+/TIA1+
1 Группа (n=60)
пт/ит
2 Группа (n=80)
пт/ит
6,7/6,8
0,7/0,7
1,9/3,4
3,5/6,6
4,3/7,2
0,7/0,6
1,5/2
2,1/3,2
2,4/3,2
1,8/2,7
3 Группа
(n=40)
пт/ит
4/7,1
0,8/0,7
1,9/2,7
2,5/4,3
4,2/5
р
0,0001/0,5
0,05/0,1
0,0001/0,05
0,0001/0,0001
0,0001/0,004
11
По данным показателей индексов соотношения CD3+/СD20+ перитуморальных и
CD8+/FoxP3+ пери- и интратуморальных лимфоцитов в 1-ой группе наблюдения по сравнению
со 2-ой и 3-ей группами отмечалось преобладание Т- клеточного звена иммунитета, над Вклеточным и цитотоксических Т-лимфоцитов над Т-регуляторными лимфоцитами (р=0,0001). В
3-ей группе наблюдения по данным показателя индекса соотношения CD8+/TIA1+
субпопуляций пери- и интратуморальных лимфоцитов отмечалось самое высокое соотношение
Т-цитотоксических лимфоцитов и активированных цитотоксических лимфоцитов (р=0,0001)
Корреляция показателей содержания иммунокомпетентных клеток в лимфоидном
инфильтрате первичной меланомы кожи с клинико-морфологическими
характеристиками.
CD3+ перитуморально
СD3+ интратуморально
Стадия
Лимфоидная
инфильтрация
Изъязвлние
Регрессия
МК с метастазами
Прогрессирование
Метастазы в лимфоузлах
Толщина опухоли по
Берслоу
Возраст
Митозы
Периневральный рост
Периневральный рост
Отдаленные метастазы
-0,4
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,0
А
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 1 - Графики корреляции CD3+ Т-лимфоцитов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Показатели CD3+ перитуморальных Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли
имели среднюю корреляционную связь с выраженной лимфоидной инфильтрацией опухоли
(R=0,5; р<0,05), а интратуморальные CD3+ Т-лимфоциты коррелировали со стадией
заболевания (R=0,4; р<0,05), изъязвлением опухоли, прогрессированием заболевания, наличием
синхронных метастазов в лимфатических узлах, с толщиной опухоли по Бреслоу (R=0,3;
р<0,05).
12
CD8+ перитуморально
CD8+ интратуморально
Стадия
Изъязвление
Лимфоидная
инфильтрация
МК с метастазами
Прогрессирование
Возраст
Толщина опухоли по…
Периневральный рост
Митозы
Стадия
Глубина инвазии по…
-0,2
А
0,0
0,2
0,4
0,6
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 2 - Графики корреляции CD8+ Т-лимфоцитов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Наблюдалась средняя корреляционная связь перитуморальных CD8+ Т-лимфоцитов с
выраженной лимфоцитарной инфильтрацией, а интратуморальных CD8+ Т-лимфоцитов со
стадией заболевания (R=0,4; р<0,05), изъязвлением опухоли, прогрессированием заболевания и
наличием синхронных метастазов в лимфатических узлах (R=0,3; р<0,05).
CD4+ перитуморально
Лимфоидная
инфильтрация
CD4+ интратуморально
Стадия
Изъязвление
Регрессия
Прогрессирование
Метастазы в лимфоузлах
МК с метастазами
Митозы
Прогрессирование
Толщина опухоли по Берслоу
Изъязвление
Отдаленные метастазы
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
А
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 3 - Графики корреляция CD4+ Т-лимфоцитов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Наблюдалась средняя корреляционная связь высоких показателей перитуморальных
CD4+ Т-лимфоцитов с выраженной общей лимфоцитарной инфильтрацией опухоли (R=0,4;
р<0,05), с наличием участков частичной спонтанной регрессии опухоли (R=0,3; р<0,05).
Корреляция высоких показателей интратуморальных CD4+ Т-лимфоцитов была с более
поздними стадиями заболевания (R=0,4; р<0,05), изъязвлением опухоли, прогрессированием
заболевания, наличием синхронных метастазов на момент постановки диагноза (R=0,3; р<0,05).
13
CD20+ перитуморально
CD20+ интратуморально
Прогрессирование
Изъязвление
Толщина опухоли по…
Прогрессирование
Стадия
Лимфоидная
инфильтрация
Изъязвлние
Глубина инвазии по…
Митозы
Локальный рецидив
Метастазы в
лимфоузлах
Толщина опухоли по
Берслоу
Возраст
МК с метастазами
Митозы
Стадия
Периневральный рост
0,0
А
0,2
0,4
0,6
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 4 - Графики корреляции CD20+ В-лимфоцитов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Отмечалась
средняя
корреляционная
связь
высоких
показателей
CD20+
перитуморальных В-лимфоцитов с изъязвлением ПМК (R=0,4; р<0,05), с прогрессированием
заболевания, выраженной лимфоцитарной инфильтрацией опухоли (R=0,3; р<0,05).
Средняя корреляция показателей интратуморальных CD20+ В-лимфоцитов отмечалась с
прогрессированием заболевания (R=0,4; р<0,05), толщиной опухоли по Бреслоу, более
поздними стадиями заболевания, изъязвлением, глубиной инвазии по Кларку, (R=0,3; р<0,05).
FoxP3+ перитуморально
FoxP3+ интратуморально
Прогрессирование
Регрессия
Изъязвление
Лимфоидная
инфильтрация
Стадия
Отдаленные метастазы
Прогрессирование
МК с метастазами
Метастазы в лимфоузлах
Лимфоидная…
Изъязвление
-0,4 -0,3 -0,2 -0,1
А
Эмболы в сосудах
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
-0,4
-0,2
0,0
0,2
0,4
Б
Рисунок 5 - Графики корреляции FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов с основными
клинико-морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Средняя корреляционная связь высоких показателей перитуморальных FoxP3+ Тлимфоцитов наблюдалась с наличием участков частичной спонтанной регрессии опухоли
(R=0,4; р=0,0001), с прогрессированием заболевания в виде появлением метастазов в
лимфатических узлах и наличием изъязвления опухоли (R=0,3; р<0,05). Низкие показатели
14
перитуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов коррелировали с выраженной лимфоцитарной
инфильтрацией опухоли (R=-0,3; р<0,05).
Показатели
интратуморальных
FoxP3+
Т-лимфоцитов
коррелировали
с
прогрессированием заболевания (R=0,4; р<0,05), изъязвлением опухоли, стадией заболевания
(R=0,3; р<0,05)
TIA1+ перитуморально
TIA 1+ интратуморально
Изъязвление
Лимфоцитарная
инфильтрация
Бреслоу
Пол
Прогрессирование
Периневральный рост
Тип роста
Метастазы в лимфоузлах
Отдаленные метастазы
Митозы
Стадия
Кларк
МК с метастазами
-0,6
А
-0,4
-0,2
Стадия
0,0
0,2
0,0
0,4
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 6 - Графики корреляции TIA1+ Т-лимфоцитов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Отмечалась
средняя
корреляционная связь
высоких
показателей
субпопуляции
перитуморальных TIA1+ Т-лимфоцитов с выраженной лимфоцитарной инфильтрацией опухоли
и низких показателей с наличием синхронных метастазов в лимфатических узлах на момент
постановки диагноза (R=0,4; р<0,05), с более поздними стадиями заболевания с появлением
отдаленных метастазов (R=-0,3; р<0,05).
Высокие
показатели
интратуморальных
TIA1+
Т-лимфоцитов
имели
среднюю
корелляционную связь с изъязвленем опухоли (R=0,3), толщиной опухоли по Бреслоу, с
прогрессированием заболевания, (R=0,3; р<0,05 ).
15
CD68+ перитуморально
CD 68+ интратуморально
Прогрессирование
Отдаленные метастазы
Отдаленные метастазы
Стадия
Периневральный рост
Периневральный рост
МК с метастазами
-0,6
-0,4
-0,2
0,0
0,2
-0,3
0,4
А
-0,2
-0,2
-0,1
-0,1
0,0
Б
Рисунок 7 - Графики корреляция CD68+ макрофагов с основными клинико-
морфологическими характеристиками ПМК. А- перитуморально, Б-интратуморально.
Наблюдалась средняя корреляционная связь высоких показателей перитуморальных
CD68+ макрофагов с прогрессированием заболевания (R=0,3; р<0,05) и низких показателей с
наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах на момент постановки диагноза (R=0,4; р<0,05), с наличием участков периневрального роста опухоли (R=-0,3; р<0,05).
Корреляция индексов соотношения субпопуляций пери- и интратуморальных
лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи с клинико-морфологическими
характеристиками.
CD4+/CD8+ перитуморально
CD4+/CD8+ интратуморально
Стадия
Метастазы в лимфоузлах
Локальный рецидив
Прогрессирование
Регрессия
Регрессия
0,0
0,1
А
0,2
0,3
0,4
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
Б
Рисунок 8 - Графики корреляции индекса индекса соотношения CD4+/CD8+ пери- и
интратуморальных Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК
Высокие показатели индекса соотношения CD4+/CD8+ пери и интратуморальных Тлимфоцитов имели среднюю корреляционную связь с частичной спонтанной регрессией
опухоли (R=-0,3; р<0,05).
16
CD3+/CD20+ перитуморально
CD3+/CD20+ интратуморально
Пол
Кларк
Отдаленные метастазы
Тип роста
Метастазы в лимфоузлах
Митозы
Стадия
Митозы
Бреслоу
Кларк
Изъязвление
-0,6
-0,4
-0,2
0,0
0,2
А
-0,3
-0,2
-0,1
0,0
0,1
0,2
0,3
Б
Рисунок 9 - Графики корреляции индекса индекса соотношения CD3+/CD20+
перитуморальных Т- и В-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК. А-перитуморально Бинтратуморально
Низкие показатели индексов соотношения CD3+/CD20+ интратуморальных Т- и Влимфоцитов коррелировали с изъязвлением опухоли (R=-0,5; р=0,0001), толщиной опухоли по
Бреслоу, количеством митозов, более высокой стадией заболевания, появлением метастазов в
регионарных лимфатических узлах (R=-0,3; р<0,05).
CD8+/FoxP3+ интратуморально
CD8+/FoxP3+ перитуморально
Локальный рецидив
Изъязвление
Митозы
Отдаленные метастазы
Метастазы в лимфоузлах
Метастазы в
лимфоузлах
Стадия
Изъязвление
Регрессия
Прогрессирование
Прогрессирование
-0,5
-0,4
-0,3
-0,2
-0,1
А
0,0
-0,3
-0,2
-0,1
0,0
Б
Рисунок
10
-
Графики
корреляции
индекса
соотношения
CD8+/FoxP3+
перитуморальных Т- и В-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК А-перитуморально Бинтратуморально
Наблюдалась средняя корреляционная связь низких показателей индекса соотношения
CD8+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов с прогрессированием заболевания (R=-0,4;
р=0,001), с частичной спонтанной регрессией, изъязвлением опухоли (R=-0,3; р=0,001).
Корреляция низких показателей индекса соотношения CD8+/FoxP3+ интратуморальных
Т-лимфоцитов наблюдалась с прогрессированием заболевания (R=-0,3; р=0,004).
17
CD4+/FoxP3+ перитуморально
CD4+/FoxP3+ интратуморально
Регрессия
Кларк
Митозы
Тип роста
Метастазы в…
Метастазы в лимфоузлах
Отдаленные метастазы
Отдаленные метастазы
Стадия
-0,4
-0,3
Изъязвлние
Изъязвление
Прогрессирование
Прогрессирование
-0,2
-0,1
0,0
-0,4
А
-0,2
0,0
0,2
0,4
Б
Рисунок
11
-
Графики
корреляции
индекса
соотношения
CD4+/FoxP3+
перитуморальных Т- лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК. А-перитуморально Бинтратуморально
Средняя корреляционная связь низких показателей индексов соотношения субпопуляций
пери и интратуморальных CD4+/FoxP3+ Т-лимфоцитов наблюдалась с прогрессированием
заболевания, наличием изъязвления опухоли (R=-0,4; р<0,05).
CD8+/TIA1+ перитуморально
CD8+/TIA1+ интратуморально
Стадия
МК с метастазами
Отдаленные метастазы
Изъязвление
Стадия
Периневральный рост
Сосудистая инвазия
Митозы
0,0
А
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
-0,3
-0,2
-0,1
0,0
0,1
0,2
0,3
Б
Рисунок 12 - График корреляции индекса соотношения CD8+/TIA1+ Т-лимфоцитов в
лимфоидном инфильтрате ПМК. А-перитуморально Б-интратуморально
Наблюдалась средняя корреляционная связь высоких показателей индексов соотношения
перитуморальных CD8+/TIA1+ Т-лимфоцитов со стадией заболевания, появлением отдаленных
метастазов (R=0,4; р<0,05), а интратуморальных CD8+/TIA1+ Т-лимфоцитов с наличием
синхронных метастазов в лимфатических узлах (R=0,3; р<0,05).
18
Влияние субпопуляций перитуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их
соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи.
Для
оценки
влияния
всех
исследуемых
перитуморальных
субпопуляций
иммунокомпетентных клеток на 5-летнюю общую выживаемость больных МК были построены
ROC-кривые, представленные на рисунке 13.
Рисунок 13 - ROC-кривые влияния субпопуляций перитуморальных ИКК и их
соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных МК.
Таблица 4 - Результаты построения ROC-кривых для оценки прогностического значения
количества субпопуляций перитуморальных ИКК в лимфоидном инфильтрате на 5-летнюю
общую выживаемость больных МК.
Субпопуляция
AUC
95% ДИ для AUC
Значение р
ИКК
CD8+
0,487
0,403-0,573
0,778
CD3+
0,548
0,463-0,632
0,287
CD4+
0,624
0,540-0,707
0,006
CD20+
0,697
0,618-0,776
0,0001
FoxP3+
0,672
0,589-0,754
0,0001
TIA1+
0,450
0,362-0,538
0,263
CD68+
0,534
0,445-0,622
0,447
CD4+/CD8+
0,541
0,239-0,402
0,376
CD4+/FoxP3+
0,370
0,286-0,454
0,004
CD3+/CD20+
0,257
0,182-0,332
0,0001
CD8+/FoxP3+
0,290
0,211-0,369
0,0001
CD8+/TIA1+
0,573
0,486-0,660
0,102
Факторами, имеющими имеющих статистически значимое влияние на 5-летнюю общую
выживаемость больных МК, явились такие субпопуляции лимфоцитов как: CD4+, СD20+,
FoxP3+, а также соотношение таких субпопуляций лимфоцитов как: CD3+/CD20+,
19
CD4+/FoxP3+, CD8+/FoxP3+. Для данных факторов, были выбраны пороговые значения,
соответствующие оптимальному соотношению чувствительности и специфичности.
Таблица 5 - Пороговые значения субпопуляций перитуморальных лимфоцитов и
индексов их соотношения статистически значимо предсказывающих 5-летнюю общую
выживаемость больных МК.
Субпопуляция
Пороговое
Чувствительность
Специфичность
лимфоцитов
значение
20,0
82,4%
38,2%
CD20+
38
88,2%
34,5%
CD4+
18,2
82,4%
32,7%
FoxP3+
2,7
67,6%
12,7%
CD3+/СD20+
1,4
70,6%
14,5%
CD4+/FoxP3+
1,7
61,8%
12,7%
CD8+/FoxP3+
При значениях показателей перитуморальных CD20+В-лимфоцитов выше 20 кл/пзр,
CD4+ выше 38кл/пзр и FoxP3+ выше 18,2 кл/пзр вероятность 5-летней общей выживаемости у
больных меланомой кожи низкая. При значениях индексов соотношения перитуморальных
CD4+/FoxP3+ Т-лимфоцитов выше порогового значения 1,4, CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов выше
порогового значения 1,7 и
CD3+/СD20+ лимфоцитов выше порогового значения 2,7
вероятность общей 5-летней выживаемости высока.
Влияние субпопуляций интратуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их
соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи.
Для
оценки
влияния
всех
исследуемых
субпопуляций
интратуморальных
иммунокомпетентных клеток на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи
были построены ROC-кривые, представленные на рисунке 14.
Рисунок 14 - ROC-кривые влияния субпопуляций интратуморальных ИКК и их
соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных МК.
20
Таблица 6 - Результаты построения ROC-кривых для оценки прогностического значения
количества субпопуляций интратуморальных ИКК в лимфоидном инфильтрате на 5-летнюю
общую выживаемость больных МК
Субпопуляция
AUC
95% ДИ для AUC
Значение р
ИКК
CD3+
0,648
0,550-0,745
0,005
CD8+
0,642
0,545-0,740
0,007
CD4+
0,643
0,546-0,740
0,007
CD20+
0,681
0,584-0,778
0,01
FoxP3+
0,618
0,518-0,719
0,026
TIA1+
0,706
0,613-0,799
0,001
CD68+
0,552
0,448-0,657
0, 323
CD3+/CD20+
0,353
0,253-0,452
0,006
CD4/CD8+
0,504
0,402-0,606
0,943
CD4+/FoxP3+
0,424
0,318-0,529
0,151
CD8+/FoxP3+
0,430
0,325-0,536
0,189
CD8+/TIA1+
0,525
0,422-0,629
0,632
Факторами, имеющими статистически значимое влияние на 5-летнюю общую
выживаемость больных МК, явились такие субпопуляции интратуморальных лимфоцитов как:
CD3+, CD4+, СD20+, FoxP3+, TIA1+ (р>0,05), а также соотношения таких субпопуляций
лимфоцитов как: CD3+/CD20+. Для данных факторов, были выбраны пороговые значения,
соответствующие
оптимальному
соотношению
чувствительности
и
специфичности,
представленные в таблице 7.
Таблица 7 - Пороговые значения субпопуляций интратуморальных ИКК и индексов их
соотношения статистически значимо предсказывающих 5-летнюю общую выживаемость
больных МК
Субпопуляция
Пороговое
Чувствительность
Специфичность
лимфоцитов
значение
26
84%
37,8%
CD3+
14
84%
35,5%
CD8+
10
84%
37,8%
CD4+
2
80%
54,1%
CD20+
2,5
72%
40,5%
FoxP3+
3,6
88%
32,4%
TIA1+
2,7
96%
5,4%
CD3+/CD20+
При значениях показателей интратуморальных CD3+ Т-лимфоцитов выше порогового
значения в 26 кл/пзр, CD8+ Т-лимфоцитов выше порогового значения в 14кл/пзр, CD20+Влимфоцитов выше порогового значения 2 кл/пзр, CD4+ выше порогового значения 10кл/пзр,
FoxP3+ выше порогового значения 2,5 кл/пзр и TIA1+ выше порогового значения 2,7кл/пзр,
вероятность 5-летней общей выживаемости у больных меланомой кожи низкая.
При значениях индексов соотношения перитуморальных CD3+/СD20+ лимфоцитов
выше порогового значения 2,7 вероятность общей 5-летней выживаемости высока.
21
Многофакторный анализ влияния субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5летнюю общую выживаемость больных МК.
Факторы, статистически значимо предсказывающие 5-летнюю общую выживаемость
больных МК по результатам данным ROC-кривых субпопуляций интра- и перитуморальных
лимфоцитов были включены в многофакторный регрессионный анализ Кокса. По данным
многофакторного анализа на прогноз 5-летней общей выживаемости достоверно оказывали
влияние: субпопуляция перитуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов (р=0,0001, ОР =5,443 (95% ДИ
4,162-15,549)), CD20+ интратуморальных В-лимфоцитов (р=0,024, ОР =5,428 (95% ДИ 1,24923,590)), индекс соотношения перитуморальных CD8+/ FoxP3+ Т-лимфоцитов (р=0,0001, ОР
=0,966 (95% ДИ 0,269-3,465)).
Влияние субпопуляций перитуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их
соотношений на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных МК
Для оценки влияния исследуемых субпопуляций перитуморальных ИКК клеток на 5летнюю безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи были построены ROCкривые, результаты которых представлены в таблице 8.
Таблица 8 - Результаты построения ROC-кривых для оценки влияния субпопуляций
перитуморальных
ИКК
в
лимфоидном
инфильтрате
первичной
МК
на
5-летнюю
безрецидивную выживаемость больных МК.
Субпопуляция
AUC
95% ДИ для AUC
Значение р
ИКК
CD3+
0,532
0,433-0,631
0,495
CD8+
0,462
0,362-0,561
0,413
CD4+
0,632
0,543-0,725
0,04
CD20+
0,722
0,641-0,803
0,0001
FoxP3+
0,729
0,648-0,810
0,0001
TIA1+
0,405
0,312-0,497
0,403
CD68+
0,530
0,440-0,620
0,525
CD3+/CD20+
0,206
0,136-0,275
0,001
CD4+/CD8+
0,512
0,222-0,403
0,452
CD4+/FoxP3+
0,285
0,206-0,364
0,001
CD8+/FoxP3+
0,227
0,152-0,302
0,001
CD8+/TIA1+
0,655
0,569-0,741
0,001
Факторами, имеющими статистически значимое влияние на 5-летнюю безрецидивную
выживаемость
больных
МК,
явились
субпопуляции
как:
CD4+,
СD20+,
FoxP3+
перитуморальных лимфоцитов и соотношение таких субпопуляций лимфоцитов как:
CD3+/CD20+, CD4+/FoxP3+, CD8+/FoxP3+, CD8+/TIA1+. Для этих факторов были определены
пороговые значения, соответствующие оптимальному соотношению чувствительности и
специфичности, представленные в таблице 9.
22
Таблица 9 - Пороговые значения субпопуляций перитуморальных лимфоцитов и
индексов их соотношения статистически значимо предсказывающих 5-летнюю выживаемость
больных МК
Субпопуляция
Пороговое
лимфоцитов
значение
40
CD4+
16
CD20+
18,2
FoxP3+
3,1
CD3+/CD20+
1,5
CD4+/FoxP3+
2
CD8+/FoxP3+
2,1
CD8+/TIA1+
При значениях показателей
Чувствительность, %
81,1%
83%
83%
60,4
52,8
58,5
78,8
перитуморальных
Специфичность, %
40,5%
35,1%
43,2%
8,1
13,5
10,8
40
CD4+ выше 40кл/пзр
CD20+В-
лимфоцитов выше 16 кл/пзр, и FoxP3+ выше 18,2 кл/пзр вероятность 5-летней общей
выживаемости у больных меланомой кожи низкая. При значениях индексов соотношения
перитуморальных CD3+/СD20+ лимфоцитов выше порогового значения 3,1, CD4+/FoxP3+ Тлимфоцитов выше порогового значения 1,5, CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов выше порогового
значения 2 вероятность общей 5-летней выживаемости высока.
Влияние субпопуляций интратуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их
соотношений на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных МК
Для оценки влияния исследуемых субпопуляций интратуморальных ИКК клеток на 5летнюю безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи были построены ROCкривые, результаты которых представлены в таблице 10.
Таблица 10 - Результаты построения ROC-кривых для оценки прогностического
значения количества субпопуляций интратуморальных ИКК и индексов их соотношения в
лимфоидном инфильтрате на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных МК
Субпопуляция
AUC
95% ДИ для AUC
Значение р
CD3+
СD8+
0,712
0,642
0,615-0,809
0,561-0,724
0,0001
0,01
CD4+
CD20+
FoxP3+
TIA1+
CD68+
CD3+/CD20+
CD4+/CD8+
CD4+/FoxP3+
CD8+/FoxP3+
CD8+/TIA1+
0,704
0,712
0,672
0,709
0,755
0,321
0,465
0,420
0,367
0,519
0,543-0,725
0,612-0,813
0,571-0,773
0,611-0,806
0,662-0,848
0,213-0,430
0,349-0,582
0,289-0,507
0,289-0,507
0,405-0,632
0,01
0,0001
0,04
0,0001
0,065
0,002
0,55
0,17
0,04
0,75
лимфоцитов
23
Факторами, имеющими прогностическое значение в отношении 5-летней безрецидивной
выживаемости больных МК явились такие субпопуляции интратуморальных лимфоцитов как:
CD3+, CD4+, СD20+, FoxP3+, TIA1+, CD68+, а также соотношение субпопуляций лимфоцитов
в
интратуморальном
лимфоидном
инфильтрате
первичной
МК
как:
CD3+/CD20+,
CD8+/FoxP3+. Для этих факторов были определены пороговые значения, соответствующие
оптимальному соотношению чувствительности и специфичности, представленные в таблице 11.
Таблица 11 - Пороговые значения субпопуляций интратуморальных ИКК и индексов их
соотношения,
статистически
значимо
предсказывающих
5-летнюю
безрецидивную
выживаемость больных МК.
Субпопуляция
Пороговое
Чувствительность, %
Специфичность, %
лимфоцитов
значение
13
84.9%
43,2%
CD3+
7
83,0%
43,2%
СD8+
6
83,0%
43,2%
CD4+
2
77,4%
37,8%
CD20+
2
83,0%
48,6%
FoxP3+
3
81,1%
32,4%
TIA1+
20
62,2%
54,1%
CD68+
2,7
96%
15,4%
CD3+/CD20+
2
75,5%
18,9%
CD8+/FoxP3+
При значениях показателей интратуморальных CD3+ Т-лимфоцитов выше порогового
значения в 13 кл/пзр, CD8+ выше 7 кл/пзр, CD4+ Т-лимфоцитов выше 6кл/пзр CD20+Влимфоцитов выше 2 кл/пзр, и FoxP3+ выше 2 кл/пзр, TIA1+ выше 3 кл/пзр, CD68+ выше
20кл/пзр вероятность 5-летней общей выживаемости у больных меланомой кожи низкая. При
значениях
индексов
соотношения
перитуморальных
CD3+/СD20+
лимфоцитов
выше
порогового значения 2,7, CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов выше порогового значения 2 вероятность
общей 5-летней выживаемости высока.
Многофакторный анализ влияния клинических, морфологических факторов и
субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5-летнюю безрецидивную
выживаемость больных МК.
Факторы,
статистически
значимо
предсказывающие
5-летнюю
безрецидивную
выживаемость больных МК по результатам данным ROC-кривых субпопуляций интра- и
перитуморальных лимфоцитов были включены в многофакторный регрессионный анализ
Кокса. По результатам многофакторного анализа субпопуляции интратуморальных FoxP3+
(р=0,004, ОР =1,092 (95% ДИ 1,043-2,102)) и CD20+ интратуморальных В-лимфоцитов (р=0,04,
ОР =1,017 (95% ДИ 1,002-1,033)) статистически значимо влияли на прогноз 5-летней
безрецидивной выживаемости.
24
ВЫВОДЫ
1.
В лимфоидном инфильтрате ПМК как перитуморально, так и интратуморально
наблюдается преобладание CD3+ Т-лимфоцитов над CD20+ В-лимфоцитами и преобладание
CD8+ цитотоксических лимфоцитов над CD4+ хелперными Т-лимфоцитами.
2.
Статистически
достоверно
с
более
поздними
стадиями
заболевания
коррелировали низкие показатели субпопуляции перитуморальных CD8+ и TIA1+ лимфоцитов,
индексы
соотношений
перитуморальных
CD3+/CD20+,
CD4+/FoxP3+,
CD8+/FoxP3+
лимфоцитов, высокие показатели субпопуляции CD20+ лимфоцитов и индекс соотношения
CD8+/TIA1+ лимфоцитов (р>0,05).
3.
Высокие
значения
всех
субпопуляций
интратуморальных
лимфоцитов
коррелировали с более поздней стадией заболевания и такими стадииобразующими факторами,
как наличие изъязвления опухоли и толщина опухоли по Бреслоу. Также отмечалась
корреляций с такими факторами как глубина инвазии по Кларку, митозы, появление метастазов
в лимфоузлах и появление отдаленных метастазов.
4.
У больных 2 группы наблюдения (с прогрессированием) наблюдались наиболее
высокие показатели медиан всех субпопуляций перитуморальных иммунокомпетентных
клеток. В тоже время, у больных 1 группы наблюдения (без прогрессирования) были самые
высокие показатели индексов соотношения CD3+/CD20+ и CD8+/FoxP3+ и самый низкий
индекс соотношения CD8+/TIA1+ лимфоцитов.
5.
Содержание в лимфоидном инфильтрате ПМК субпопуляций перитуморальных
CD4+ лимфоцитов выше порогового значения в 38 кл/п.зр, CD20+ лимфоцитов больше 20
кл/п.зр и FoxP3+ лимфоцитов больше 18 кл/п.зр, а также интратуморальных CD3+ лимфоцитов
более 26 кл/п.зр, CD8+ более 14 кл/п.зр, CD4+ лимфоцитов более 10 кл/п.зр, CD20+
лимфоцитов более 2 кл/п.зр, FoxP3+ лимфоцитов более 2, кл/п.зр статистически достоверно
коррелируют с неблагоприятным прогнозом 5-летней общей выживаемости больных МК.
Индексы соотношения CD3+/CD20+ пери- и интратуморальных лимфоцитов c пороговым
значением выше 2,7, CD4+/FoxP3+ c пороговым значением выше 1,4, CD8+/FoxP3+ c
пороговым значением выше 1,7 статистически достоверно коррелируют с благоприятным
прогнозом 5-летней общей выживаемости больных МК.
6.
Содержание в лимфоидном инфильтрате ПМК субпопуляций перитуморальных
CD4+ лимфоцитов выше порогового значения в 40 кл/п.зр, CD20+ лимфоцитов больше 16
кл/п.зр и FoxP3+ лимфоцитов больше 18 кл/п.зр, а также интратуморальных CD3+ лимфоцитов
больше 13 кл/п.зр, CD4+ лимфоцитов больше 6 кл/п.зр, CD20+ лимфоцитов больше 2 кл/п.зр,
FoxP3+ лимфоцитов больше 2 кл/п.зр, TIA1+ лимфоцитов больше 3кл/п.зр, CD68 больше
20кл/п.зр статистически достоверно коррелируют с неблагоприятным прогнозом 5-летней
25
безрецидивной выживаемости больных МК. Индексы соотношения CD3+/CD20+ пери- и
интратуморальных лимфоцитов c пороговым значением выше 3,1 и 2,7 соответственно,
перитуморальных CD4+/FoxP3+ c пороговым значением выше 1,5, CD8+/FoxP3+ c пороговым
значением выше 2, CD8+/TIA1+ c пороговым значением 2,1 статистически достоверно
коррелируют с благоприятным прогнозом 5-летней безрецидивной выживаемости больных МК.
7.
Многофакторный регерессионный анализ Кокса показал, что факторами местного
иммунитета, связанными с неблагоприятным прогнозом 5-летней безрецидивной выживаемости
больных МК явился такие субпопуляции интра- и перитуморальных лимфоцитов как FoxP3+ и
CD20+. Факторами местного иммунитета, связанными с благоприятным прогнозом 5-летней
общей выживаемости больных МК явился индекс соотношения субпопуляций CD8+/FoxP3+
перитуморальных Т-лимфоцитов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Рекомендуется
внедрение
в
процесс
морфологической
диагностики
ПМК
дополнительного иммуногистохимического исследования лимфоидного инфильтрата опухоли с
целью количественной оценки таких субпопуляций лимфоцитов, как пери- и интратуморально
расположенные субпопуляций FoxP3+ Т-лимфоцитов и СD20+ В-лимфоцитов, а также для
подсчета индекса соотношения субпопуляций CD8+/FoxP3+ перитуморальных лимфоцитов,
которые будут достоверно определять прогноз 5-летней общей и безрецидивной выживаемости
больных МК
26
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ В ЖУРНАЛАХ,
РЕКОМЕНДОВАННЫХ ПЕРЕЧНЕМ ВАК ПРИ МИНОБРНАУКИ РОССИИ
1
Божченко Я.А. Сравнительная характеристика субпопуляций лимфоцитов и их
соотношений в участках частичной спонтанной регрессии и в перитуморальной лимфоцитарной
инфильтрации в первичной меланоме кожи / Я.А. Божченко, Я.В. Вишневская, И.А. Покатаев,
Л.В. Демидов // Вестник уральской медицинской академической науки. – 2017. - Т.14, №1. –
С.40-48.
2
Божченко Я.А. Клинико-прогностическое значение cоотношения субпопуляций
инфильтрирующих опухоль CD8+ и CD4+ Т-лимфоцитов у больных с меланомой кожи / Я.А.
Божченко, Я.В. Вишневская, И.А. Покатаев, Л.В. Демидов, Н.В.
Кокосадзе // Вестник
уральской медицинской академической науки. – 2015. - Т.4, №55. – С. 87-92.
3
Божченко
Я.А.
Влияние
соотношения
CD8+/FoxP3+
Т-лимфоцитов
в
перитуморальной зоне первичной меланомы кожи на прогноз течения заболевания / Я.А.
Божченко, Я.В. Вишневская, И.А. Покатаев, Л.В. Демидов, Н.В. Кокосадзе // Архив патологии.
– 2016. – Т.78, №4. – С. 27-31.
4
Божченко Я.А. Клинико-прогностическое значение степени выраженности и
состава лимфоцитарной инфильтрации опухоли при меланоме кожи / Я.А. Божченко, Я.В.
Вишневская, Л.В. Демидов // Сибирский онкологический журнал. – 2012. - №4. – С. 78-79.
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа