close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Фармакорегуляция проницаемости антибактериальных препаратов в ткани предстательной железы

код для вставкиСкачать
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном
образовательном учреждении высшего образования
«Ставропольский государственный аграрный университет»
Научный руководитель:
Беляев Валерий Анатольевич,
доктор ветеринарных наук, профессор
Официальные оппоненты: Медетханов Фазил Акберович, доктор
биологических наук, доцент, заведующий
кафедрой фармакологии, токсикологии и
радиобиологии ФГБОУ ВО «Казанская
государственная академия ветеринарной
медицины»,
Дерезина Татьяна Николаевна, доктор
ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВО
«Донской государственный технический
университет (Ростов-на-Дону)», профессор
кафедры "Биология и общая патология"
Ведущая организация:
ФГБОУ ВО «Пермский Государственный
аграрный университет имени академика
Д.Н. Прянишникова»
Защита диссертации состоится 26 апреля 2018 г. в 10 00 ч. на заседании
диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВО «Кубанский
государственный аграрный университет» по адресу: 350044, Россия, г.
Краснодар, ул. Калинина, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на официальном
сайте ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет» http://
http://kubsau.ru/
Автореферат разослан «____»______________ 2018 г. и размещен на
сайтах:
ВАК
Минобразования
и
науки
РФ:
http://vak.ed.gov.ru
«____»____________ 2018 г.; ФГБОУ ВО «Кубанский ГАУ»: http:// kubsau.ru
«____»_____________ 2018 г.
Ученый секретарь диссертационного
Петровна
совета
2
Винокурова Диана
3
Общая характеристика работы
Актуальность темы. Хронический простатит является одним из широко
распространенных заболеваний, и частота возникновения его увеличивается год
от года (A. Khaikova, 2011). Патологии предстательной железы могут возникать
на фоне перенесенных инфекций, гормональных изменений или нарушений
эмбрионального развития половых органов (W. Nizanski, 2011).
Заболевания предстательной железы у животных сопровождаются
воспалительными явлениями, как при септическом и асептическом остром, так
и хроническом простатите, в условиях эндокринных изменений, гиперплазии,
простатической метаплазии и других условиях (S.D. Johnston, 2001; J.
Verstegen, 2008).
Исследования последних двадцати лет показали, что основной проблемой
хронического простатита, является низкая проницаемость лекарственных
препаратов в ткани предстательной железы, что снижает эффективность
лечения.
Некоторые
исследователи
выдвинули
концепцию
о
«гематопростатическом барьере» (B.R. Fulmer, 2000; Yonggang Shang, 2014).
Подобно гематоэнцефалическому барьеру, гематопростатический барьер в
простате защищает ее ткани и имеет способность селективной проницаемости.
У всех многоклеточных организмов, гистогематические барьеры представляют
собой плотные межклеточные контакты эндотелиальных клеток, между
апикальными и базальными структурами на их мембранах (N. Sawada, 2003),
которые имеют слабую проницаемость (В.Н. Ткачук, 1989).
Из-за болезненных симптомов у самцов продуктивных и непродуктивных
животных, низкой эффективности лечения, высокой частоты рецидивов,
значительно снижаются показатели продуктивности, что отражается на
экономических показателях хозяйств и существенных затратах на лечение у
частных владельцев животных. Несмотря на многочисленные исследования,
проведѐнные на эту тему, как у человека, так и у животных,
патофизиологические изменения и эффективные способы лечения простатита
до конца не изучены. Это требует разработки научно обоснованных способов
терапии
хронического
простатита,
основанных
на
рациональной
антибиотикотерапии с внедрением в практику препаратов, обладающих
свойствами адресной доставки в органы и ткани.
Степень разработанности. В отечественной ветеринарной медицине
изучением структурно-функциональных характеристик предстательной железы,
вопросами профилактики, диагностики и лечения хронического простатита у
животных занимались Е.Е. Кудашева (2006), И.В. Никишина (2003), П.А.
Хоришко (2004), Р.Ц. Цыдыпов (2014). Изучению простатита в медицинской
практике посвятили свои работы Ткачук В. Н. (1989, 1993, 1994), Шангичев
А.В. (2011). Вопросы патогенеза раскрывал Тюзиков И.А. (2012),
моделирование с дальнейшим изучением патогенеза заболевания - Аль-Шукри
С.Х. (2012,2013), Цветков И.С. (2013), которые провели клиникоэкспериментальное обоснование терапии простатита.
4
В зарубежной практике исследования хронического простатита собак
нашли отражение в работах Jacqueline R. Davidson (2008), Горман Нейл,
Девидсон Ж.Р. (2003), Ниманд Х.Р. (2001). Изучение распространения,
диагностики и терапии заболевания у животных проводили Nizanski W. (2014)
и Shafiee R. (2014). Вопросами о строении и функциях «гематопростатического
барьера» занимались Brand R. Fulmer (2000) и Yonggang Shang (2014).
Проникновение антибактериальных препаратов в ткани предстательной железы
у животных исследовали Yong Yoon Bahk с соавторами (2000). В доступной
нам отечественной и зарубежной литературе отсутствуют сведения о
целенаправленных способах коррекции проницаемости гематопростатического
барьера для достижения терапевтической концентрации антибактериальных
препаратов в органе-мишени, поэтому данный вопрос остается актуальным и
требует детальных исследований.
Цель
работы:
изучить
проницаемость
барьерных
структур
предстательной железы для антибактериальных препаратов с возможностью
фармакокоррекции их концентрации в органе.
Для достижения поставленной цели были выдвинуты следующие
задачи:
1. Изучить возможность проницаемости барьерных структур
предстательной железы для гентамицина, ципрофлоксацина и
цефатоксима у клинически здоровых животных и при
патологических состояниях, вызывающих хронический простатит;
2. Определить способность эритемных доз никотиновой кислоты
выступать в роли корректоров концентрации антибактериальных
препаратов в простате;
3. Определить эффективность терапии заболеваний предстательной
железы
антибактериальными
препаратами
совместно
с
никотиновой кислотой в эритемных дозах;
4. Разработать способ доставки цефатоксима в ткани предстательной
железы при различных путях введения.
Научная
новизна
работы.
Впервые
изучена
возможность
проницаемости
барьерных
структур
предстательной
железы
для
антибактериальных препаратов у животных. Изучена возможность
фармакокоррекции проницаемости барьерных структур при патологиях
предстательной железы с использованием корректоров микроциркуляции.
Изучены способы достижения и поддержания терапевтической концентрации
антибактериальных препаратов при различных патологиях предстательной
железы.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая
значимость диссертационной работы заключается в том, что научнопрактические вопросы, которые поднимаются автором исследования связаны с
актуальной на сегодняшний день проблемой рациональных способов лечения
5
хронического бактериального простатита и является трудноизлечимой
патологией. Расширены знания о способах комбинированного применения
антибактериальных препаратов, в том числе впервые в ветеринарной практике в
ниосомальной форме. Впервые описана фармакокинетика антибактериальных
препаратов различных групп через барьерные структуры предстательной
железы и изучены способы поддержания терапевтической концентрации
препаратов в органе-мишени. Результаты исследований приняты в учебный
процесс и используются как справочный материал для лекций и лабораторнопрактических занятий в ФГБОУ ВО «Ивановская ГСХА», ФГБОУ ВО
«Саратовский ГАУ», ФГБОУ ВО «Ставропольский ГАУ», ФГБОУ ВО
«Алтайский ГАУ», ФГУ ОУ ВО «Курганская ГСХА им. Т.С. Мальцева».
Методология и методы исследования. Основой методологии
исследования явилась обоснованная постановка проблемы лечения
хронического бактериального простатита у животных и изучения способов
преодоления барьерных структур предстательной железы, с получением
результатов, показывающих эффективность выбранной терапии. Полученные в
ходе
проведения
экспериментальных
работ
данные
позволяют
усовершенствовать существующие схемы лечения хронического простатита у
животных.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Влияние проницаемости барьерных структур предстательной железы на
концентрацию антибиотиков и возможность ее фармакокоррекции;
2. Зависимость
терапевтической
концентрации
антибактериальных
препаратов в предстательной железе от использования корректоров
микроциркуляции в процессе лечения животных, больных хроническим
простатитом;
3. Перспективность
использования
ниосомальных
форм
химиотерапевтических средств при терапии болезней «забарьерных»
органов.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность
полученных
результатов
подтверждены
статистической
обработкой.
Экспериментальная работа проведена с применением современных методов на
сертифицированном оборудовании. Результаты опубликованы в рецензируемых
источниках и апробированы на отраслевых научных конференциях. Данная
научно-исследовательская работа была выполнена в рамках реализации
федеральной грантовой программы Фонда содействия развитию малых форм
предприятий в научно-технической сфере «УМНИК» (договор 740ГУ1/2013 от
25.11.2013; 5420ГУ2/2014 от 30.03.2015) и за счет средств гранта ученого
совета ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный
университет».
Основные положения диссертации были представлены, обсуждены и
одобрены на 75- 80-й научно-практических конференциях «Диагностика,
лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных»
6
(Ставрополь, 2012-2017 гг.), на открытом конкурсе Министерства сельского
хозяйства России среди студентов, аспирантов и молодых ученых (II этап, г.
Махачкала, 2014, 2015, 2016 гг. III этап, г. Санкт Петербург, 2015, г.
Ставрополь, 2016), круглом столе "ВетБиоПрепараты" (2015 г.), III и V
Международной конференции «Инновационные разработки молодых ученых –
развитию агропромышленного комплекса» (г. Ставрополь, 2014, 2016 г.) и
конкурсе научно-технического творчества молодежи (г. Москва, 2013, 2016).
Личный вклад соискателя. Все этапы работы, включающие
планирование, подготовку и проведение экспериментов, а также
статистическую обработку полученных результатов проведены лично автором.
Доля участия соискателя в выполнении работы составляет 85 %.
Публикация результатов исследования. По теме диссертации
опубликовано 12 научных работ, в которых отражены основные положения и
выводы диссертации, в том числе 4 научные статьи - в изданиях, включенных в
«Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК
Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации
основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени»
(«Вестник АПК Ставрополья», Инновации в АПК: проблемы и перспективы). 1
работа представлена в виде патента Российской Федерации на изобретение
«Способ лечения хронического простатита собак».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на
142 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы,
материалов и методов исследования, собственных исследований, заключения,
выводов, практических предложений, рекомендаций и перспектив дальнейшей
разработки темы и списка литературы. Список литературы содержит 260
источников, из них 181 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 29
рисунками и 17 таблицами.
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1. Обзор литературы
В обзоре литературы изложены данные о влиянии экзо и –эндогенных
факторов на формирование, развитие и течение патологического процесса в
«забарьерных» органах, в том числе и предстательной железе. Также
представлена роль барьерных структур предстательной железы в
фармакокинетике и фармакодинамике антибактериальных препаратов.
Изложены существующие способы рациональной терапии заболеваний
предстательной железы у животных. Представлено обоснование использования
микро- и нанокапсулированных средств в фармакотерапии заболеваний
животных.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1.
Материалы и методы исследования
Экспериментальные исследования проводили в период с 2014 по 2017 год
на базе кафедры терапии и фармакологии и научно-диагностическом и лечебно-
7
ветеринарном центре ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный
университет».
В лабораторных опытах использовано 1000 самцов белых беспородных
крыс и 200 самцов морских свинок. Объектом исследования служили плазма
крови и предстательная железа крыс, предметом исследования - концентрация
антибактериальных препаратов в плазме и предстательной железе. Для
выполнения
поставленных
задач
проведен
ряд
гистологических,
биохимических и микробиологических исследований.
Изучение фармакокинетики антибактериальных препаратов проводили в
соответствие с руководством по экспериментальному (доклиническому)
изучению новых фармакологических веществ (Р.У. Хабриев, 2005).
Хронический бактериальный простатит у крыс вызывали путем
трансуретрального введения суспензии уропатогенной E.coli G 938. Изучение
эффективности комбинированной терапии антибактериальных препаратов с
эритемной дозой никотиновой кислоты проводили через 45 дней после начала
моделирования простатита. Крыс умерщвляли путем декапитации, после чего
отбирали кровь и предстательную железу. Проводили осмотр половых органов
и взвешивание.
Для сравнения выраженности простатита использовали шкалу,
описанную в патенте Малинина В. В., Пушкарѐва А. Н., Хромова А.Н. (2011)
(Пат. 2430733, 08.10.2009).
Для сбора суточной мочи от животных контрольной и опытных групп
крыс помещали в индивидуальные клетки на сутки, доступ к воде не
ограничивали. Моча стекала в стеклянные промаркированные колбы.
Полученные образцы хранили в холодильнике при -18 °С. Консервантов не
добавляли. Анализ мочи проводили с помощью портативного анализатора мочи
для животных Uri -Doctor Vet (DFI, Корея)
Изучение проницаемости гематопростатического барьера проводили для
трех групп антибактериальных препаратов: аминогликозиды (гентамицин),
фторхинолоны (ципрофлоксацин) и цефалоспорины (цефотаксим).
Крысам контрольных групп вводили 4% раствор гентамицина сульфата
(РУП «БЕЛМЕДПРЕПАРАТЫ», Республика Беларусь) из расчета 0,1 мл/кг
двукратно (каждые 12 часов), внутримышечно, в заднебедренную группу
мышц, одноразовым стерильным шприцем с иглой 0,63*32 мм (23G) (SFM
Hospital Products GmbH, Германия). Раствор ципрофлоксацина 0,3% (капли
глазные/ушные, ООО «Гротекс», Россия) вводили из расчета 0,03 г/кг. Раствор
цефотаксима (ООО «ФАРМАГАРАНТ РУС», Россия) вводили животным из
расчета 194 мг на животное.
Через 60, 180 минут, 13 часов, через сутки, на третьи, пятые, десятые и
четырнадцатые сутки животным проводили декапитацию, после чего собирали
кровь (1 мл) и отбирали ткани предстательной железы (не менее 1 г).
Изучение фармакокинетики антибактериальных препаратов проводили
после гистологической оценки воспалительного процесса в простате крыс и
морских свинок. Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином,
8
для выявления характерных для хронического простатита изменений (Н. Ю.
Фролова, 2010). Для исследований использовали вентральную часть
предстательной железы крыс, которую фиксировали в 10% нейтральном
формалине и после стандартной проводки через серию растворителей заливали
в парафин.
Для изучения влияния сосудорасширяющих средств на проницаемость
гематопростатического барьера и концентрацию гентамицина сульфата в
тканях животным опытных групп вводили раствор никотиновой кислоты.
Животным опытных групп, вводили антибактериальные препараты и
никотиновую кислоту (ОАО «Биосинтез», Россия) в дозах 0,019 мкг/кг; 0,058
мкг/кг; 0,11 мкг/кг через 20 минут после введения антибиотика. Отбор проб
проводили через 60 минут после введения антибактериальных препаратов в
течение 14 суток.
Исследование сыворотки крови и гомогенизата из тканей предстательной
железы после введения гентамицина и ципрофлоксацина исследовали методом
иммуноферментного анализа (ИФА) на автоматическом биохимическом
анализаторе Chemwell Combi V 1.03 («Awareness Technolody Inc.», США) по
методике
разработанной
Всероссийским
научно-исследовательским
институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии и Федеральным
государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный
Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и
кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») (ГОСТ 33634 —2015). Определение концентрации
цефотаксима
проводили
методом
высокоэффективной
жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ); (система жидкостной хроматографии UltiMate 3000,
Dionex, США).
Для определения эффективности терапии антибактериальными
препаратами и никотиновой кислотой в эритемной дозе, в сыворотке крови
определяли уровень оксида азота, тиобарбитуратреактивных продуктов (ТБКРП), церулоплазмина, простатической кислой фосфатазы и уровень
тестостерона.
На
базе
ФКУЗ
«Ставропольский
научно-исследовательский
противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия человека был разработан способ получения
ниосомной дисперсии на основе сорбитан моностеарата и полиэтиленгликоля
ПЭГ-4000 с включенным цефотаксимом методом обращенно-фазовой отгонки
(RU 2583135, Д. А. Ковалѐв, А. Н. Куличенко, М. Е. Михайлова, С. В.
Писаренко, Л. В. Ляпустина, 2016). Исходными компонентами для получения
нового препарата служили сорбитан моностеарат (Span 60) (Sigma, США),
холестерин (Sigma, США), дицетилфосфат (Sigma, США), полиэтиленгликоль
ПЭГ-4000 (Sigma, США) и цефотаксим (ОАО «Борисовский завод медицинских
препаратов», Республика Беларусь).
Изучение фармакокинетики цефотаксима в свободной и ниосомальной
формах проводили на взрослых половозрелых самцах морских свинок весом
400±35 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Животным всех
9
групп однократно внутримышечно и перорально вводили растворы
цефотаксима в свободной (ООО «ФАРМАГАРАНТ РУС», Россия) и
ниосомальной формах. Однократная доза антибиотика 194 мг на животное. Для
этого пробы крови и простату отбирали у морских свинок после декапитации
через 30 мин, 1; 3; 5; 24 ч после однократного введения соответствующего
препарата. Сыворотку и гомогенизаты использовали в качестве образца для
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Подготовку клинических образцов проводили по следующей методике. В
пробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл вносят 500 мкл
гомогенизированного препарата органа биопробного животного и 500 мкл
ацетонитрила. Смесь интенсивно перемешивают на вортексе в течение 30 сек и
центрифугируют в течение5 минут при 3000 об/мин. Супернатант объемом 800
мкл переносят в пробирку типа Фалькон объемом 15 мл, добавляют 5 мл
дихлорметана, полученную смесь перемешивают на вортексе в течение 5 минут
и центрифугируют в течение 5 минут при 3000 об/мин. Верхний (водный) слой
используют для анализа методом ВЭЖХ (Isla A., 2005).
Условия ВЭЖХ колонка Reprosil-Pur С18-AQ 250 × 3 мм, 5 мкм;
предколонка Teknokroma Novafix C18 (ODS), 1×0,4 см; подвижные фазы (ПФ):
А – 0,1 М раствор аммония ацетата в воде; В – ацетонитрил. Режим
элюирования – изократический: 85 % А – 15 % в течение 10 мин. Скорость ПФ
0,8 мл/мин. Температура термостата колонки 26 оС. Для вычисления времени
удерживания, площадей хроматографических пиков при детектировании и
графического представления хроматограмм использовали программу
«Chromeleon» (Dionex, США). Время удерживания анализируемого пика
цефотаксима 5,40 ± 0,05 мин.
Калибровочную кривую строили на основании значений площади пика
цефотаксима на хроматограммах, полученных при анализе образцов органов
морских свинок по описанной методике, содержащих цефотаксим в диапазоне
концентраций 0,10-10,00 мкг/мл. Линеаризацию кривой проводили с помощью
программы «Microsoft Excel» (Microsoft Corporation, США).
Статистическую обработку всех результатов выполняли с помощью
критерия Стьюдента в программе «Primer of Biostatistic 3. 01» для Windows на
IBM совместимом компьютере. Достоверными считали различия при p <0,05.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Изучение фармакокинетики гентамицина, ципрофлоксацина
и цефотаксима в предстательной железе в норме и при
патологии
Изучение фармакокинетики антибактериальных препаратов в сыворотке
крови и предстательной железе проводили у здоровых животных и у самцов с
моделированным хроническим простатитом.
Терапевтическая концентрация гентамицина для микроорганизмов
варьирует в пределах от 3-8 мкг/мл. После однократного введения 4 %
10
9
Концентрация ципрофлоксацина,
мкг/мл
Концентрация гентамицина, мкг/мл
раствора гентамицина сульфата из расчета 0,1 мл/кг двукратно (каждые 12
часов) здоровым самцам крыс и с моделированных хроническим простатитом,
его максимальную концентрацию в сыворотке крови наблюдали через 60 мин.
В предстательной железе у здоровых крыс остаточная концентрация
гентамицина через час после введения составляла 1,56±0,4 мкг/мл, что на 44,2
% ниже терапевтической концентрации, через 180 минут количество
антибиотика снизилось еще на 12 % (p <0,05). Терапевтическая концентрация
антибактериального препарата была достигнута на третьи сутки - 3,00± 0,44
мкг/мл и не снижалась до конца исследований (Рисунок 1). В среднем от
первоначальной инъекции уровень гентамицина в предстательной железе вырос
на 57 % (p <0,05).
В гомогенной массе простаты у больных крыс через час после введения
концентрация антибактериального препарата составляла 1,31±0,32 мкг/мл, что
достоверно на 52,8 % (p <0,05) ниже терапевтической концентрации, которая
была достигнута только на десятые сутки исследования - 3,06±0,15 мкг/мл. К
четырнадцатым суткам этот показатель увеличился на 19,4 % (p <0,05).
Здоровые
животные
8
7
6
Животные с
моделированны
м хроническим
простатитом
Нижняя граница
ТК
5
4
3
2
1
0
Верхняя
граница ТК
4
Здоровые
животные
3,5
3
2,5
Животные с
моделированным
хроническим
простатитом
2
1,5
1
Нижняя граница
ТК
0,5
0
Верхняя граница
ТК
Время взятия проб
Время взятия пробы
Рисунок 1
Рисунок 2
Фармакокинетика гентамицина (Рисунок 1) и ципрофлоксацина (Рисунок 2) в
предстательной железе у здоровых животных и у самцов с моделированным
хроническим простатитом (мкг/мл).
Оптимальная терапевтическая концентрация ципрофлоксацина для
наиболее распространенных уропатогенных микроорганизмов варьирует в
пределах от 0,2 -0,95 мкг/мл (В.П. Яковлев [и др.], 2000). После
внутримышечной инфузии 0,3 % раствора ципрофлоксацина в дозе 0,02 мг/кг
максимальная сывороточная концентрация у здоровых крыс и у животных с
моделированной патологией достигалась через 60 мин.
В предстательной железе у здоровых животных через 60 минут после
введения абсолютная концентрация ципрофлоксацина в гомогенизате
11
Концентрация цефотаксима, мкг/мл
составляла 1,77±0,34 мкг/мл, что выше средних терапевтических значений,
которая не снижалась на протяжении всего периода наблюдений (Рисунок 2).
В гомогенизате предстательной железы крыс с моделированным
хроническим простатитом через час после введения концентрация
ципрофлоксацина была на уровне 1,49±0,46 мкг/мл. Однако через 180 минут
показатель снизился на 11,4 %, но после 13 часов поднялся на 1,32 % от
первоначального значения, составив концентрацию выше терапевтической –
1,51 мкг/мл (p <0,05). Далее наблюдали увеличение концентрации антибиотика.
Согласно данным В.В. Рафальского и др. (2004), терапевтическая
концентрация цефотаксима для большинства уропатогенных бактерий
составляет от 8 до 16 мкг/мл. У здоровых самцов крыс после внутримышечной
инфузии раствора цефотаксима из расчета 194 мг на животное максимальную
концентрацию в сыворотке крови в первые сутки исследований отмечали через
60 минут - 80,9±0,51 мкг/мл. Через 180 минут концентрация препарата
достоверно снизилась на 83,3 %, что ниже терапевтической (p <0,05).
После очередной инъекции концентрация цефотаксима в сыворотке крови
увеличилась по отношению к первому показателю на 0,5 %, к пятым суткам на
5,2 %, а к концу исследования на 7,9 % (p <0,05) составив 92,7± 0,28 мкг/мл.
18
Здоровые
животные
16
14
12
10
Животные с
моделированным
хроническим
простатитом
Нижняя граница ТК
8
6
4
2
0
Верхняя граница
ТК
Время взятия пробы
Рисунок 3 – Фармакокинетика цефотаксима в предстательной железе у здоровых
животных и у самцов с моделированным хроническим простатитом
В предстательной железе у здоровых животных после первого введения
цефотаксима, его уровень отмечался в пределах терапевтической концентрации
– 8,8±0,18 мкг/мл (Рисунок 3). Через 180 минут показатель упал на 79,5 % (p
<0,05). После очередной инъекции концентрация выросла по отношению к
первоначальному значению на 8,3 % (p <0,05), в последующем она только
росла, оставаясь в пределах терапевтического значения.
В предстательной железе у самцов с моделированным простатитом,
терапевтическая концентрация антибиотика была достигнута только через
сутки после первого введения препарата и составляла 7,5± 0,35 мкг/мл. После
резкого спада через 180 минут на 78,6 %, отмечалось увеличение концентрации,
12
обусловленное очередным введением препарата, его уровень был на границе с
терапевтической концентрацией.
Таким образом, опытным путем установлено, что при стандартных
режимах введения концентрации гентамицина, ципрофлоксацина и
цефотаксима в тканях предстательной железы ниже на 40 – 70 %, чем в
сыворотке крови.
2.2.2. Изучение влияния никотиновой кислоты на фармакокинетику
гентамицина, ципрофлоксацина и цефотаксима, в простате в норме и при
патологии
С целью фармакокоррекции проницаемости гематопростатического
барьера нами был использована никотиновая кислота (витамин В3, витамин РР,
ниацин). Это вещество относится к фармакологической группе витаминов и
витаминоподобных средств. Согласно данным реестра лекарственных средств,
никотиновая кислота выступает в роли ангиопротектора и корректора
микроциркуляции [Реестр лекарственных средств, 2002]. Этот препарат
способствует расширению мелких кровеносных сосудов, улучшая
микроциркуляцию крови.
В качестве контрольных значений, мы использовали показатели
концентрации гентамицина, ципрофлоксацина и цефотаксима у здоровых
животных и с экспериментально вызванной патологией.
Для проведения исследований по каждому антибактериальному
препарату нами было сформировано 6 опытных групп, (всего 18): три группы
здоровых животных и три с моделированным хроническим простатитом,
которым через равные промежутки времени вводили антибиотики и через 20
минут никотиновую кислоту в дозах 0,019 мг/кг, 0,058 мг/кг и 0,11 мг/кг.
Отбор проб проводили также через 60 минут после первой инъекции
антибактериального препарат, 180 минут, 13 часов 24 часа, на третьи, на пятые,
десятые и четырнадцатые сутки.
Введение никотиновой кислоты в дозе 0,058 мг/мл способствовало
увеличению концентрации гентамицина в предстательной железе у здоровых
крыс через час после введения на 13,3 % по сравнению с контролем (p <0,05).
Наибольшее достоверное увеличение концентрации отмечали на третьи сутки,
на 14,7 % по сравнению с показателями через 24 часа (p <0,05).
Терапевтической концентрации гентамицин достиг на третьи сутки, но этот
показатель превышал контроль на 14,2 % (p <0,05). К концу исследования
концентрация возросла еще на 19,5 %, оставаясь в пределах терапевтической (p
<0,05). У самцов после введения никотиновой кислоты отмечали гиперемию
всех видимых слизистых оболочек, учащенное дыхание на протяжении 12 ± 4,6
минут и легкое беспокойство.
13
В группе животных с моделированным хроническим простатитом,
которым вводили никотиновую кислоту в дозе 0,058 мг/кг, терапевтическая
концентрация гентамицина была достигнута на пятые сутки, 3,03±0,26 мкг/мл,
что выше контроля на 31,6 % (p <0,05). Максимальная концентрация была
достигнута к четырнадцатым суткам, достоверно выше контроля на 13,6 % (p
<0,05).
Анализируя концентрацию ципрофлоксацина на фоне введения
никотиновой кислоты в дозах 0,019 мг/кг, 0,058 мг/кг и 0,11 мг/кг отметили, что
показатели на протяжении всего опыта и в сыворотке крови и гомогенизате
предстательной железы у здоровых животных и у крыс с моделированной
хронической патологией были в пределах или выше терапевтической
концентрации для большинства уропатогенных бактерий.
Однако, при применении никотиновой кислоты здоровым животным в
дозе 0,058 мг/кг (эритемная доза), в первый час после введения, уровень
ципрофлоксацина был выше на 18,4 % по сравнению с группой контроля.
Достоверное увеличение концентрации отмечали в период с двадцати четырех
часов до трех суток на 20,6 % и с пятые по десятые сутки на 19,6 % (p <0,05). С
третьих суток концентрация ципрофлоксацина была значительно выше средних
терапевтических значений.
Через час после введения 0,058 мг/кг никотиновой кислоты группе
животных с моделированным хроническим простатитом наблюдали
достоверное (p <0,05) увеличение концентрации ципрофлоксацина на 17,2 %.
На третьи сутки этот показатель увеличился по отношению к показателю
двадцати четырех часов на 23,8 %. Увеличение концентрации на 13,6 %
зафиксировали в промежуток с десятых по четырнадцатые сутки. Стоит
отметить, что уже на пятые сутки показатели превысили средние
терапевтические показатели.
Изучая показатели влияние различных доз никотиновой кислоты на
фармакокинетику цефотаксима в предстательной железе, мы отметили, что
введение 0,058 мг/кг никотиновой кислоты здоровым животным
способствовало достижению терапевтической концентрации цефотаксима в
предстательной железе через час после первого введения препарата.
Концентрация препарата была выше значений контроля на 26,2 % (p <0,05).
Через сто восемьдесят минут исследования, несмотря на низкую концентрацию
(ниже терапевтической), она была достоверно выше контроля на 64 % (p <0,05).
К десятым суткам исследования концентрация цефотаксима была выше средней
терапевтической концентрации и на четырнадцатые сутки составляла
19,31±0,39 мкг/мл.
Таким образом, введение никотиновой кислоты в предложенной нами
дозе 0,058 мг/кг достоверно влияло на фармакокинетику гентамицина,
ципрофлоксацина и цефотаксима, увеличивая их проникновение в ткани
предстательной железы.
14
2.2.3. Разработка схемы введения гентамицина, ципрофлоксацина и
гентамицина совместно с никотиновой кислотой для достижения ими
терапевтической концентрации при заболеваниях предстательной железы
С целью изучения эффективности применения никотиновой кислоты для
терапии хронического бактериального простатита, нами был проведен ряд
исследований. Для этого было сформировано восемь групп животных по десять
особей в каждой группе. Первая контрольная группа включала только здоровых
самцов. Животным второй группы проводили моделирование воспалительного
процесса - на протяжении исследования вводили 0,2 мл 0,9% раствор натрия
хлорида. В остальных группах инициировали хронический бактериальный
простатит, который вызывали путем трансуретрального введения суспензии
уропатогенной E.coli G 938, наиболее часто являющейся возбудителем
хронического простатита в нашем регионе (Пат. 2430733, 08.10.2009); (В.А.
Беляев, 2014). Трансуретральное введение суспензии уропатогенной E. coli G
938 способствовало развитию хронического инфекционного простатита через
45 суток, что также подтверждается и развитием воспалительного процесса в
пузырьковидной железе (Рисунок 4,5).
У крыс с моделированным хроническим простатитом масса
предстательной железы увеличилась на 32 % по сравнению с группой контроля;
средняя температура при ректальном исследовании у больных крыс составляла
37,9±0,11, у здоровых животных 37,3±0,12; суточный диурез у больных
животных был достоверно ниже на 58,2 % по сравнению со здоровыми
крысами. Отмечалась протеинурия - белка в моче было выше на 81,7 % (p
<0,05).
Мы отмечали очаги простатита, которые занимали не менее половины
структуры железы или ее четверти, с обширными воспалительными
инфильтратами вокруг выводных протоков железы, ацинусов и кровеносных
сосудов, в эпителии встречались лимфоциты и макрофаги. В просветах желез
также наблюдали лейкоцитоз (нейтрофилию) и моноцитоз (макрофаги). Такая
патологическая картина соответствовала 3-4 баллам выраженности простатита
согласно шкале, описанной в патенте 2430733 и в среднем, составляла 3,35±0,4
баллов.
Через 45 суток после заражения, двукратно вводили антибактериальные
препараты (гентамицин, ципрофлоксацин и цефотаксим) и никотиновую
кислоту в эритемной для крыс в дозе 0,058 мкг/мл. Введение препаратов
продолжали в течение 10 дней, после чего путѐм декапитации умерщвляли
крыс и отбирали кровь и пробы предстательной железы.
В
сыворотке
крови
определяли
уровень
оксида
азота,
тиобарбитуратреактивных
продуктов
(ТБК-РП),
церулоплазмина,
простатспецифической кислой фосфатазы и тестостерона.
15
При введении гентамицина масса
простаты снижалась на 16,6 % по
сравнению с больными животными, а
при
дополнительном
введении
эритемной дозы никотиновой кислоты
на 27,2 % к концу терапии (p <0,05).
При этом индекс воспаления по
сравнению с группой с моделированной
хронической
патологией
при
монотерапии снизился на 36,7 %,
комбинированной на 67,1 % (p <0,05).
Рисунок 4 - Выводной проток вентральной
части предстательной железы крыс до
начала терапии. Увеличение х100.
Окрашивание
гематоксилином и эозином
Рисунок 5 - Пузырьковидная железа крыс
Увеличение х200. Окрашивание
гематоксилином и эозином
Рисунок 6 - Выводной проток и интерстиций вентральной части предстательной
железы крыс на фоне лечения ципрофлоксацином. Индекс воспаления 2 балла. Увеличение
х200. Окрашивание гематоксилином и эозином
При введении ципрофлоксацина через десять суток после начала терапии
масса простаты у крыс снизилась на 22,7 % (p <0,05), индекс воспаления в
целом по группе на 41,7 % (Рисунок 6). Дополнительное введение никотиновой
кислоты способствовало снижению массы предстательной железы на 30 % (p
16
<0,05), индекс воспаления при этом составлял 0,83±0,4 балла, что в 4 раза
меньше, чем у животных из группы контроля с хроническим простатитом.
При введении цефотаксима масса вентральной части простаты снизилась
на 23,5 %, индекс воспаления на 38,8 % (p <0,05) по сравнению с животными из
группы контроля с простатитом. Совместное введении цефотаксима с
никотиновой кислотой снизило массу органа на 31,7 %, а степень воспаления
уменьшилась на 73,1 %.
При введении гентамицина суточный диурез через 10 суток от начала
терапии увеличился на 47 % (p <0,05), уровень белка снизился на 67,7 % (в 3,1
раза). Дополнительное введение эритемной дозы никотиновой кислоты
способствовала увеличению диуреза на 55,6 % и снижению белка на 71,9 % (p
<0,05). Лечение больных крыс ципрофлоксацином способствовало увеличению
диуреза на 59 % (практически 2,5 раза) и снижению белка на 69,3 % (p <0,05).
На фоне введения никотиновой кислоты в целом по группе суточное выделение
мочи увеличилось на 60 % (p <0,05), а протеинурия снизилась на 78 % (в 4,4
раза).
На фоне введения цефотаксима суточный диурез снизился на 53,4 %,
уровень белка в моче на 64 % (p <0,05). Введение никотиновой кислоты
способствовало увеличению количества мочи на 60,3 %, уровень белка
снизился на 74,8 % (p <0,05).
После введения гентамицина уровень оксида азота снижался на 23,4 % по
сравнению с животными с моделированным хроническим простатитом, на фоне
дополнительного применения никотиновой кислоты он снижался еще на 20 %
(p <0,05). Уровень тиобарбитуратреактивных продуктов (ТБК-РП) в сыворотке
крови коррелировал с показателями оксида азота, достоверно снижаясь на фоне
монотерапии гентамицином на 22,4 % в целом по группе, а с никотиновой
кислотой на 36,5 % (p <0,05).
Уровень оксида азота на фоне терапии ципрофлоксацином снижался на
37,6 %, ТБК-РП на 31,1 % (p <0,05). Введение никотиновой кислоты
способствовало уменьшению оксида азота в 1,8 раз, а ТБК-РП на 47,4% (p
<0,05)
Значение оксида азота после инъецирования цефотаксима уменьшалось на 30
%, а ТБК-РП на 25,4% (p <0,05). Никотиновая кислота снизила эти показатели
еще на 16,8 % и на 18,2 % (p <0,05) соответственно.
Значение оксида азота после введения цефотаксима уменьшалось на 30
%, а ТБК-РП на 25,4% (p <0,05). Никотиновая кислота снизила эти показатели
еще на 16,8 % и на 18,2 % (p <0,05) соответственно.
Уровень церулоплазмина в крови животных после терапии гентамицином
снизился на 34 % (p <0,05), после дополнительного введения никотиновой
кислоты в 2 раза или на 52 %. При введении ципрофлоксацина показатель
снизился на 55 %, а совместно с сосудорасширяющим препаратом на 61 %. На
17
фоне применения цефотаксима церулоплазмин снизился на 41 %, а
комбинированно с никотиновой кислотой на 56,6 % (p <0,05).
Изучая динамику основных маркеров воспаления простаты, а именно
уровень простатспецифической кислой фосфатазы и тестостерона мы отметили
следующее. Введение гентамицина способствует снижению кислой фосфатазы
на 25,6 % и увеличению тестостерона в сыворотке крови на 44,4 % (p <0,05).
Терапия ципрофлоксацином способствовала уменьшению уровня фосфатазы на
31,9 % и увеличению количества тестостерона на 44,6 %, а цефотаксимом на
30,5 % и 43,1 % (p <0,05).
Дополнительное введение никотиновой кислоты и гентамицина снижало
уровень простатспецифической кислой фосфатазы на 46,6 %, ципрофлоксацина
на 51,8 %, а цефотаксима на 53,4 % (p <0,05). Значение тестостерона при
комбинированном введении препаратов снижалось на 52,3 % для гентамицина,
ципрофлоксацина на 51,2 % и цефотаксима на 47 % (p <0,05).
Таким образом, введение никотиновой кислоты в эритемной дозе 0,058
мкг/мл через 20 минут после введения антибиотиков способствовало снижению
сроков терапии хронического простатита и восстановлению функций органа.
2.2.4. Разработка способа доставки цефотаксима в ткани
предстательной железы при различных путях введения
Сравнительное изучение фармакокинетики цефотаксима в свободной и
ниосомальной формах проводили на самцах морских свинок, которым
однократно внутримышечно и перорально вводили растворы цефотаксима в
дозе 194 мг. Усредненные фармакологические профили представлены в
таблицах 1 и 2. Определение концентрации действующего вещества в образцах
сыворотки крови и тканей проводили методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ).
Таблица 1 – Концентрация цефотаксима в свободной и ниосомальной формах при
внутримышечном введении, мкг/мл
Время
введения
Сыворотка
Предстательная
Сыворотка
Предстательная
Место
крови
железа
крови
железа
взятия пробы
Форма
Свободная
Ниосомальная
препарата
30 минут
62,34087±17,45*
1,6697±2,8*
21,27037±10,6*
2,1847±24,7*
60 минут
101,8164±20,48*
2,4695±11,13*
57,3038±18,2* 4,07355±12,81*
180 минут
14,9971±9,23*
1,6267±5,84*
27,70477±16,9*
1,9426±17,4*
300 минут
3,7335±12,6*
1,4206±19,53*
1,898±8,63*
1,412±8,45*
24 часа
4,092867±22,0*
1,6783±6,98*
5,6652±4,34*
1,956967±20,5*
22,5707±6,47*
123,6631±5,8*
25,7643±6,36*
AUC0-, мкг/мл·ч 150,5603±5,4*
18
Примечание: *- Статистическая значимость различий показателей концентрации
цефотаксима между свободной и ниосомальной формой препарата р <0,05.
Для оценки фармакокинетических параметров свободного цефотаксима и
его ниосомальной формы при различных способах введения мы сравнивали
показатели максимальной концентрации (Cmax) в сыворотке и предстательной
железе, времени еѐ достижения (Tmax) полученные при однократном введении
препаратов в дозе 194 мг на животное.
Таблица 2 – Концентрация цефотаксима в свободной и ниосомальной формах при
пероральном введении, мкг/мл
Время
введения
Сыворотка
Предстательная
Сыворотка
Предстательная
Место
крови
железа
крови
железа
взятия пробы
Форма
Свободная
Ниосомальная
препарата
30 минут
5,6643±8,54*
0,0532±19,03*
24,7072±7,36*
1,1684±21,6*
60 минут
10,5538±2,34*
0,292±1,14*
18,48613±11,8*
1,0341±16,7*
180 минут
7,435433±15,82*
1,4893±9,46*
2,78575±2,9*
3,7955±8,23*
300 минут
2,6257±11,5*
0,87515±2,51*
1,045533±15,4*
1,2573±9,4*
24 часа
4,7141±13,34*
1,6525±12,45*
3,6395±12,5*
1,8463±17,3*
61,0997±5,18*
16,9468±7,35*
48,2455±4,89*
23,9503±5,66*
AUC0-,мкг/мл·ч
Примечание: *- Статистическая значимость различий показателей концентрации
цефотаксима между свободной и ниосомальной формой препарата р <0,05.
Анализируя максимальную концентрацию цефотаксима в сыворотке
крови при внутримышечном введении, мы установили, что Сmax (максимальная
концентрация) для препарата в ниосомальной форме на 43 % ниже по
сравнению с его свободной формой (Таблица 1). При пероральном введении
максимальная концентрация антибиотика в ниосомальной форме была на 77 %
выше, чем в свободной форме (p <0,05).
При внутримышечном введении цефотаксима в обеих формах Тmax (время
достижения максимальной концентрации антибиотика) в сыворотке крови
достигалось через час после введения.
При пероральном введении антибиотика в свободной форме Тmax была
также обнаружена через час, а в ниосомальной через 30 минут (Таблица 2).
Максимальная концентрация в сыворотке крови цефотаксима при
введении per os в свободной форме в среднем по группе составляла 10,558
мкг/мл, что на 42,7 % меньше (p <0,05), по сравнению с ниосомальной формой,
которая была на уровне 24,707 мкг/мл.
Анализируя максимальную концентрацию цефотаксима в предстательной
железе при внутримышечном введении, мы установили, что С max для
19
ниосомального препарата достоверно выше на 39,3 % (p <0,05) по сравнению с
его свободной формой. При пероральном введении максимальная концентрация
антибиотика в ниосомальной форме была выше на 60,7 % (p <0,05), чем в
свободной форме.
При внутримышечном введении цефотаксима в обеих формах Тmax в
предстательной железе достигалось через 60 минут после введения. При
пероральном введении цефотаксима в обеих формах максимальная
концентрация была также обнаружена через 180 минут.
При
внутримышечном
введении
показатель
площади
под
фармакокинетической кривой AUC0-0- в свободной форме цефотаксима выше
на 17,8 % (p <0,05) по сравнению с ниосомальной формой. В предстательной
железе концентрация антибиотика в инкапсулированной форме больше на 12,3
% (p <0,05), чем в свободной.
При пероральном введении AUC0-0- в свободной форме на 21 % выше (p
<0,05), чем в ниосомальной. В предстательной железе площадь под
фармакокинетической кривой ниосомального препарата на 29,2 % больше (p
<0,05), чем свободного.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенных исследований впервые изучена проницаемость
барьерных структур предстательной железы для антибактериальных препаратов
в норме и при патологии.
Проведенными исследованиями было установлено, что концентрация
антибактериальных препаратов (гентамицин, ципрофлоксацин и цефотаксим) в
сыворотке крови больных и здоровых крыс не имела достоверного различия.
Однако в тканях предстательной железы у животных с моделированным
хроническим
простатитом
концентрация
цефотаксима
достигает
терапевтических значений через 24 часа, гентамицина - на десятые сутки.
Ципрофлоксацин достигает терапевтической концентрации в гомогенезате
предстательной железы через час после введения.
Была изучена возможность фармакокоррекции проницаемости барьерных
структур при патологиях предстательной железы с использованием корректоров
микроциркуляции.
Введение никотиновой кислоты в предложенной нами дозировке 0,058
мг/кг позволило достичь терапевтической концентрации гентамицина в тканях
предстательной железы у больных животных в два раза быстрее- на пятые сутки,
по сравнению с десятыми в контроле. Введение никотиновой кислоты в дозе
0,019 мг/кг, увеличивает концентрацию антибиотика в органе, но не более чем на
7 % (p <0,05). А введение высоких доз витамина – 0,11 мг/кг способствует
снижению концентрации антибиотика в предстательной железе, что вероятнее
всего связано с быстрым его выведением из тканей.
20
Введение никотиновой кислоты в дозе 0,058 мг/кг способствует
увеличению концентрации ципрофлоксацина в предстательной железе и у
здоровых животных, и у животных с моделированным хроническим простатитом
в первые сутки на 18,4 % и 17,2 %, соответственно. Применение завышенных доз
никотиновой кислоты привело к снижению концентрации антибиотика по
сравнению с контрольной группой.
Введение никотиновой кислоты в дозе 0,019 мг/мл и 0,058 мг/кг
способствовали достижению терапевтической концентрации цефотаксима в
сыворотке крови в первый час после введения у здоровых животных. У крыс с
моделированным хроническим простатитом только при введении 0,058 мг/кг
витамина концентрация антибиотика в предстательной железе достигала
терапевтических значений после первого введения, и поддерживалась на
протяжении всего периода наблюдения.
Таким образом, введение антибактериальных препаратов различных групп,
в частности гентамицина, ципрофлоксацина и цефотаксима совместно с
никотиновой кислотой в дозе 0,058 мг/кг способствует значительному
увеличению их концентрации в предстательной железе самцов крыс. Мы
сделали вывод, что 0,058 мг/кг – это оптимальная доза никотиновой кислоты для
крыс, которая облегчает проникновение веществ через гематопростатический
барьер, способствуя достижению терапевтических концентраций антибиотиками
в более короткие сроки, по сравнению с контрольными значениями. Это
позволяет нам рекомендовать введение корректоров микроциркуляции для
лечения хронического простатита у животных, с целью оптимизации терапии
этого заболевания и профилактики осложнений.
Комбинированная антибиотикотерапия с корректором микроциркуляции
по сравнению с монотерапией, способствовала увеличению диуреза к концу
терапии до 18 % и уменьшению протеинурии от 16 до 30 % во всех группах с
моделированным простатитом.
Применение гентамицина в комбинации с никотиновой кислотой
способствовало снижению показателей антиоксидантной защиты, таких как
оксид азота и тиобарбитуратреактивные продукты на 20 % и 18 %
соответственно, по сравнению с монотерапией. Введение ципрофлоксацина и
никотиновой кислоты в эритемной дозе способствовало снижению показателей
антиоксидантной защиты на 12 и 23,5 %, а цефотаксима на 17 % и 18 %.
Благодаря разработке ФКУЗ «Ставропольский научно-исследовательский
противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия человека ниосомальных форм
химиотерапевтических средств, в частности цефотаксима, стало возможным
использование этого препарата для терапии «забарьерных» органов. Установили,
что в гомогенной массе простаты после внутримышечного введения
ниосомального цефотаксима его максимальная концентрация была выше на 39,3
%, а площадь под фармакокинетической кривой на 12,3 % (p <0,05), а при
пероральном введении на 60,7 % и на 29,2 % (p <0,05) соответственно.
21
Это говорит о том, что ниосомальные микро- везикулы на основе
сорбитана моностеарата Span 60, холестерина, полиэтиленгликоля PEG 4000 и
дицетилфосфата стабильны в условиях in vivo, благодаря двухслойной мембране
защищают лекарственное вещество от нежелательной ферментативной и
химической деградации в желудочно-кишечном тракте (В.А. Беляев, 2016; ElRidy [et al.], 2015), что делает цефотаксим более доступным для тканей при
пероральном введении, а также создают депо в высоко васкуляризированных
органах, что обеспечивает пролонгированное действие антибактериального
вещества.
Таким образом, включение цефотаксима в ниосомальные контейнеры
повышает доступность препарата для предстательной железы. А разработанная
технология включения антибактериальных препаратов в ниосомы является
перспективным направлением в ветеринарной медицине для лечения или
инфекционных заболеваний предстательной железы и профилактики их
осложнений.
Проведенные исследования позволили сделать следующие выводы и
представить рекомендации по их практическому использованию.
1.
2.
3.
4.
5.
ВЫВОДЫ
Концентрация гентамицина, ципрофлоксацина и цефотаксима при
стандартных режимах введения в тканях предстательной железы ниже на 40
– 70 %, чем в сыворотке крови;
При монотерапии и применении стандартных схем лечения хронического
простатита крыс, гентамицин достигает терапевтической концентрации в
предстательной железе на десятые сутки, цефотаксим - через 24 часа,
ципрофлоксацин образует терапевтическую концентрацию - через час после
введения.
Введение никотиновой кислоты в дозе 0,058 мг/мл здоровым животным
способствовало
достижению
терапевтической
концентрации
в
предстательной железе: гентамицина на третьи сутки (на 14,2 % выше
значений в группе контроля), и цефотаксима через час после первого
введения препарата (на 26,2% выше значений в группе контроля).
В предстательной железе у животных с моделированным хроническим
простатитом на фоне дополнительного введения никотиновой кислоты в
дозе 0,058 мг/кг, концентрация гентамицина достигала терапевтических
значений на пятые сутки, цефотаксима - через час после первого введения
препарата (на 16 % выше значений в группе контроля).
При введении ципрофлоксацина в комплексе с никотиновой кислотой, его
концентрация в предстательной железе у здоровых животных превышала
соответствующие значения в группе контроля в среднем на 20,5 %, а у
животных с моделированным хроническим простатитом в среднем на 21 %.
22
6. Предложенная нами схема терапии хронического простатита - применение
антибактериального
препарата
в
комбинации
с
корректором
микроциркуляции (никотиновая кислота в эритемной дозе 0,058 мкг/мл
через 20 минут после введения антибиотика) способствовала снижению
сроков лечения и восстановлению функций органа.
7. При внутримышечном введении цефотаксима в ниосомальной форме его
максимальная концентрация в предстательной железе на 39,3 % превышала
соответствующий показатель при введении свободной формы антибиотика.
8. При пероральном введении цефотаксима в ниосомальной форме в
предстательной железе его максимальная концентрация превышала на 60,7
% соответствующий показатель при введении свободной формы
антибиотика.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Практикующим ветеринарным специалистам для эффективного
лечения, профилактики хронического простатита у животных и его рецидивов,
удешевления стоимости терапевтических мероприятий рекомендуется
применять антибактериальную терапию в комплексе с корректорами
микроциркуляции в эритемной дозе;
2. Полученные сведения дополняют и расширяют имеющиеся данные
о применении микрокапсулированных форм препаратов, в частности ниосом в
ветеринарной практике и могут быть использованы при подготовке
учебников, учебных пособий, монографий, справочников, диссертаций,
научных статей, чтении лекций по фармакологии, терапии внутренних
незаразных болезней животных и проведении занятий со студентами
факультета ветеринарной медицины и слушателей ФПК, а разработанная
лекарственная субстанция перспективна для внедрения в терапию
инфекционных заболеваний.
РЕКОМЕНДАЦИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ
ТЕМЫ
Результаты проведѐнных исследований будут использованы в разработке
схем лечения хронического простатита с оптимизированным действием
антибактериальных веществ за счет применения эритемных доз никотиновой
кислоты. Изучение и создание метода функционализации поверхности ниосом
специфичными векторными фрагментами, позволит создавать лекарственные
средства обладающих свойствами адресной доставки, что является
перспективным методом терапии «забарьерных» органов.
23
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
Научные статьи в рецензируемых научных изданиях,
рекомендованных Высшей аттестационной комиссией РФ:
1. Микробиологический анализ возбудителей инфекционных заболеваний
предстательной железы в ставропольском крае у кобелей / В.А. Беляев,
Е.В. Сафоновская, В.Н. Шахова, Л.Ф. Сыч, А.А. Дорохина // Вестник АПК
Ставрополья. – 2014. – № 3, (15). – С. 91-94.
2. Дорохина, А.А. Коррекция фармакодинамики гентамицина сульфата в
структурах предстательной железы у мышей в норме. / А.А. Дорохина,
А.В. Дегтяренко, Л.Ф. Сыч // Вестник АПК Ставрополья. – 2015. – № 1 –
С.162—165.
3. Изучение проницаемости барьерных структур предстательной железы
антибактериальными препаратами группы аминогликозидов у мышей в
норме / А.А. Дорохина, А.В. Дергтяренко, В.А. Беляев, Е.В. Сафоновская,
В.Н. Шахова, Л.Ф. Сыч // Инновации в АПК: проблемы и перспективы. –
2014. – № 4, (4). – С. 96-100.
4. Фармакокинетика ципрофлоксацина при индуцированой патологии глаз /
В.Н. Шахова, В.А. Беляев, В.А. Оробец, А.А. Каниболоцкая, Л.Ф. Сыч //
Вестник АПК Ставрополья. – 2015. – № 4, (20). – С. 124-128.
Патенты на изобретения, зарегистрированные
в установленном порядке
5. Пат. Российская Федерация, МПК 31/455 (2006.01),
A61К 31/496
(2006.01), A61D 7/00 (2006.01), A61P 13/08 (2006.01) Способ дечения
хронического простатита у собак / В.А. Беляев, Л.Ф. Сыч, В.Н. Шахова,
И.В. Беляев, А.А. Каниболоцкая, Н.А. Гвоздецкий; заявитель и
патентообладатель
федеральное
государственное
бюджетное
образовательное учреждение высшего образования «Ставропольский
государственный аграрный университет». – № 2017100731//15 ; заявл.
10.01.2017.
Публикации в других изданиях
6. Сафоновская, Е. В. Разработка рациональных схем лечения с помощью
мониторинга
концентрации
антибактериальных
препаратов
в
биологических средах с помощью ИФА / Е.В. Сафоновская, А.А.
Дорохина, Л.Ф. Сыч // Сборник научных трудов Всероссийского научно—
исследовательского института овцеводства и козоводства. – 2013. – Т.3. №
6. – С.238—241.
7. Дорохина А.А. Эпизоотологическое распространение заболеваний
предстательной железы кобелей в Ставропольском крае / А.А. Дорохина,
24
В.Н. Клюшникова // Молодые аграрии Ставрополья : сб. науч. тр. 78-я
научно-практ. конф. / СтГАУ. – Ставрополь, 2014. – С. 58-59.
8. Беляев, В.А. Изучение этиопатогенетических факторов хронического
простатита у кобелей / В.А. Беляев, Л.Ф. Сыч, А.А. Каниболоцкая //
Материалы V Международной конференции «Инновационные разработки
молодых ученых – развитию агропромышленного комплекса». – г.
Ставрополь. – 2016. – С. 280—281.
9. Сыч, Л.Ф. Этиопатогенетические факторы развития хронического
простатита кобелей / Л.Ф. Сыч, А.А. Каниболоцкая, В.А. Беляев //
Сборник научных статей по материалам 82–й Международной научно–
практической конференции «Аграрная наука – Северокавказскому
федеральному округу». – 2017. – С. 207–211.
10.Разработка
и
обоснование
применения
ниосомальных
форм
антибактериальных препаратов / В.А. Беляев, В.Н. Шахова, Д.А. Ковалев,
С.В. Писаренко, А.А. Каниболоцкая, П.К. Таралова // Актуальные
проблемы современной ветеринарной науки и практики : материалы
Междунар. научно-практ. конф., посвященной 70-летию Краснодарского
научно-исследовательского ветеринарного института / Краснодар, 2016. –
С. 9-12.
11.Обоснование применения микро- и нанокапсулированных форм
лекарственных препаратов в ветеринарии / В.А. Беляев, В.Н. Шахова, Д.А.
Ковалев, С.В. Писаренко, А.А. Каниболоцкая, П.К. Таралова, Л.Ф. Сыч //
Сб. науч. тр. Всероссийского научно-исследовательского института
овцеводства и козоводства. / Ставрополь, 2016. – Т. 1. – № 9. – С. 265-268.
12.Каниболоцкая, А.А. Обоснование разработки метода адресной доставки
антибактериальных препаратов для терапии хронических патологий
предстательной железы животных / А.А. Каниболоцкая, Л.Ф. Сыч, Д.А.
Зинченко // Инновационные технологии в сельском хозяйстве,
ветеринарии и пищевой промышленности : сб. науч. ст. по материалам 82й Междунар. научно-практ. конф. / г. Ставрополь, 2017. – С. 81-84.
25
Подп. в печать г. Бумага офсетная. Формат 60/84 1/16.
Зак. № . Печ. лист 1,0. Тираж 100 экз.
Цех оперативной полиграфии ФГБНУ ВНИИОК
г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 15.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
4
Размер файла
1 041 Кб
Теги
антибактериальная, препарата, предстательной, железы, фармакорегуляция, ткани, проницаемость
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа