close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Особенности разных типов опухолевых микрососудов при раке молочной железы и их клиническое значение

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
НИКИТЕНКО
Наталья Викторовна
ОСОБЕННОСТИ РАЗНЫХ ТИПОВ ОПУХОЛЕВЫХ МИКРОСОСУДОВ
ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ
ЗНАЧЕНИЕ
14.01.12 – Онкология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Москва - 2018
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном
образовательном
учреждении
высшего
образования
"Оренбургский
государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения
Российской Федерации (ректор – доктор медицинских наук, профессор
Мирошниченко И.В.)
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, доцент СЕНЬЧУКОВА Марина Алексеевна
Научный консультант:
заслуженный деятель науки Российский Федерации,
доктор биологических наук, профессор СТАДНИКОВ Александр Абрамович
Официальные оппоненты:
СЕМИГЛАЗОВА Татьяна Юрьевна - доктор медицинских наук, доцент,
заведующая научным отделом – ведущий научный сотрудник научного отдела
инновационных методов терапевтической онкологии и реабилитации
Федерального государственного бюджетного учреждения "Национальный
медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н.Петрова"
Министерства здравоохранения Российской Федерации;
САЗОНОВ Сергей Владимирович - доктор медицинских наук, профессор,
заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии Федерального
государственного
бюджетного
образовательного
учреждения
высшего
образования
«Уральский
государственный
медицинский
университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Ведущее учреждение: Федеральное государственное бюджетное учреждение
«Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н.
Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Защита диссертации состоится «____» ______________2018 г. в _______
часов на заседании диссертационного совета Д 208.047.02 на базе федерального
государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский
исследовательский центр радиологии» Министерства здравоохранения
Российской Федерации по адресу: 125284, Москва, 2-й Боткинский проезд, дом 3.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского научноисследовательского онкологического института имени П.А. Герцена - филиала
федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный
медицинский
исследовательский
центр
радиологии»
Министерства
здравоохранения Российской Федерации (125284, Москва, 2-й Боткинский проезд,
дом 3) и на сайте http://nmicr.ru.
Автореферат разослан «____» ____________2018 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Доктор биологических наук
2
Елена Романовна Немцова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
В структуре онкологической заболеваемости среди женщин рак молочной
железы (РМЖ) занимает первое место (Дмитриев В.Н., 2015; Каприн А.Д. и соав,
2018). Несмотря на определенные успехи в диагностике и лечении этой
патологии, темпы роста заболеваемости РМЖ остаются высокими. При этом,
следует отметить, что значительную долю в структуре РМЖ составляют местнораспространенные формы заболевания, лечение которых продолжает оставаться
серьезной проблемой (Мерабишвили В.М. 2011; Волченко А.А., 2012; Каприн
А.Д. и соав, 2017). В связи с этим, поиск новых молекулярно-биологических
маркеров прогрессии РМЖ остается важной задачей, решение которой будет
способствовать улучшению качества диагностики, повышению точности прогноза
заболевания и индивидуализации лечения этой категории пациентов.
Ангиогенез является одним из ключевых факторов опухолевой прогрессии,
связанным с ростом и метастазированием злокачественных новообразований
(Folkman J, 1971; Folkman J, 1985; Liu T et al, 2014; Shen Y, et al, 2017). В
настоящее время, его оценка рассматривается как важный маркер прогноза
заболевания и чувствительности к противоопухолевой терапии (Şener E et al,
2016; Kraby MR et al, 2017; Ramnefjell M, et al, 2017).
Следует подчеркнуть, что технические и методологические подходы к
изучению особенностей ангиогенеза при злокачественных новообразованиях
весьма сильно отличаются у разных исследователей. Одни авторы отдают
предпочтение количественной оценке активности ангиогенеза. Так, при РМЖ
было отмечено, что высокая плотность микрососудов (ПМС) в опухоли и высокий
уровень экспрессии фактора роста эндотелия сосудов чаще наблюдаются при
распространенном опухолевом процессе, при наличии метастазов в регионарные
лимфатические узлы (РЛУ) и коррелируют с плохим прогнозом заболевания (Han
Z et al, 2015; Shrivastav S et al, 2016; Kraby MR et al, 2017; Zhang S et al, 2017).
Однако, следует отметить, что не все исследователи выявили корреляции между
активностью ангиогенеза и факторами опухолевой прогрессии, в том числе и при
РМЖ (Biesaga B et al, 2012; Mohammed ZM, et al, 2013; Chuangsuwanich T et al,
2014). Полагают, что это может быть связано с тем, что сосудистая сеть в опухоли
гетерогенна по своему происхождению и морфологии (Fukumura D et al, 2010;
Birau A et al, 2012; Nagy JA and Dvorak HF, 2012; Nagy JA et al, 2012). Именно
поэтому, другие исследователи для оценки роли ангиогенеза в опухолевой
прогрессии предпочитают учитывать не только количество сосудов, но и способ
их образования (Nagy JA, Dvorak HF et al, 2012; Qian CN, et al, 2016), степень
зрелости, (Hillen F et al, 2006), а также особенности морфологии (Senchukova M,
Kiselevsky MV, 2014). Полагаем, что такой подход к изучению особенностей
опухолевого ангиогенеза имеет целый ряд преимуществ, так как позволяет
оценивать не только прогностическую, но и предиктивную значимость разных
типов сосудов, что особенно важно с учетом недостаточной эффективности
клинического использования ингибиторов ангиогенеза.
Учитывая вышесказанное, а также то, что вопрос гетерогенности
опухолевых сосудов при РМЖ практически не изучен, актуальность
3
комплексного изучения морфологических особенностей разных типов сосудов в
опухоли и их связи с клинико-морфологическими и молекулярно-биологическими
факторами прогноза заболевания, не вызывает сомнений.
Цель исследования
Цель исследования - дать комплексную оценку морфологическим
особенностям и клинической значимости разных типов опухолевых микрососудов
при раке молочной железы.
Задачи исследования
1.
Изучить морфологические особенности и дать количественную
оценку разным типам сосудов в опухоли и прилежащих тканях при РМЖ.
2.
Оценить выраженность лимфоидной инфильтрации и особенности
экспрессии виментина в опухоли и прилежащих тканях.
3. Сопоставить установленные особенности ангиогенеза с выраженностью
лимфоидной инфильтрации и экспрессии виментина в строме опухоли и
прилежащих тканях.
4.
Провести корреляционный анализ между особенностями ангиогенеза
и следующими клинико-морфологическими характеристиками РМЖ: возрастом
пациенток, степенью злокачественности опухоли, стадией заболевания, наличием
рецепторов к эстрогенам, прогестерону и HER-2/neu.
Научная новизна результатов исследования
Впервые при РМЖ описаны разные типы микрососудов в опухоли и
прилежащих тканях, отличающиеся по морфологии и клинической значимости, и
установлены их корреляции с выраженностью лимфоидной инфильтрации стромы
опухоли, особенностями экспрессии виментина в опухолевых и стромальных
клетках, а также с клинико-морфологическими характеристиками и молекулярнобиологическими особенностями РМЖ. Показано, что множественные атипичные
дилятированные капилляры и структуры с частичной эндотелиальной выстилкой
располагаются преимущественно в интратуморальной строме и достоверно чаще
выявляются при негативном статусе рецепторов к эстрогенам и прогестерону, при
наличии CD34+ клеток в просвете сосудов и при высокой плотности виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток. Впервые установлены
корреляции между наличием характерных ячеистых структур в рыхлой
нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани перитуморальной
стромы и позитивным HER-2/neu статусом опухоли и показана связь описанных
структур с лимфангиогенезом.
Научно-практическая значимость исследования
Установленные морфологические особенности разных типов опухолевых
микрососудов и их корреляции с клинико-морфологическими характеристиками
РМЖ могут быть использованы для повышения точности прогноза заболевания и
коррекции индивидуальных схем лечения пациентов. Фактором, связанным с
неблагоприятным прогнозом РМЖ, является наличие в опухоли множественных
структур с частичной эндотелиальной выстилкой, что необходимо учитывать при
планировании лечения. Выявленные корреляции разных типов сосудов с
4
ведущими молекулярно-биологическими особенностями РМЖ указывают на
целесообразность дальнейшего изучения их предиктивной значимости, и
возможности использования, как маркеров ответа опухоли на проводимую химиои таргентную терапию.
Основные положения, выносимые на защиту
1.
Предложена новая классификация опухолевых микрососудов и структур с
эндотелиальной выстилкой при раке молочной железы, основанная на
особенностях их морфологии и клинической значимости.
2.
Атипичные дилятированные капилляры и структуры с частичной
эндотелиальной выстилкой распологаются преимущественно в интратуморальной
строме, имеют общие морфологические особенности и коррелируют с одними и
теми же характеристиками рака молочной железы.
3.
Дилятированные капилляры и характерные ячеистые структуры
располагаются преимущественно в перитуморальной строме и окрашиваются
антителами к подопланину – маркеру лимфатических сосудов.
Внедрение в практику
Результаты исследования используются в педагогической и научной
деятельности сотрудников кафедр лучевой диагностики, лучевой терапии,
онкологии, патологической анатомии и кафедры гистологии, цитологии и
эмбриологии ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский
университет» Минздрава России, а также в деятельности патологоанатомического
отделения ГБУЗ ООКОД.
Личное участие автора
Личный вклад автора состоял в анализе литературы, планировании и
выполнении исследований, проведении статистической обработки и
интерпретации результатов, подготовке данных для публикаций и представлении
результатов исследований на российских и международных конференциях
соответствующей тематики. Основные результаты работы получены лично
автором. Имена соавторов указаны в публикациях.
Соответствие паспорту специальности
Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности
14.01.12 – онкология, конкретно пункту 2.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит
из введения и 5 глав: 1 глава - обзор литературы, 2 глава - материалы и методы, 35 главы-результаты собственных исследований, заключения, выводов,
практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация иллюстрирована
14 таблицами и 53 рисунками (из них 15 графиков), 1 приложением.
Библиографический указатель включает 253 источников (13 отечественных и 240
зарубежных).
5
Публикации
По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них: 1 статья в
журнале, рекомендованном ВАК, 2 статьи в рецензируемых зарубежных
журналах (Scopus, PubMed).
Степень достоверности и апробация результатов
Достаточный объем клинического материала, использование современных
исследовательских методик и методов статистической обработки данных
свидетельствуют о достоверности полученных результатов.
Основные
результаты
исследований
доложены
на
следующих
международных, Российских и областных конференциях и съездах: I
Всероссийской научно-практической конференции «Молекулярная онкология:
итоги и перспективы», Москва, декабрь 2015 г.; Петербургском онкологическом
форуме «Белые ночи-2015», Санкт-Петербург, июнь 2015г; III Ежегодном
конгрессе Российского общества онкомаммологов (РООМ) "Золотой стандарт
диагностики и лечения РМЖ", X Юбилейном мероприятии РООМ, Сочи,
сентябрь 2016 г.; Большой конференции RUSSCO «РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ»,
Москва, февраль 2016г.; IX Съезде онкологов и радиологов стран СНГ и Евразии,
Минск, июнь 2016г.; Петербургском онкологическом форуме «Белые ночи-2017»,
Санкт-Петербург, июнь 2017г.; III Всероссийской конференции по молекулярной
онкологии, Москва, декабрь 2017г.; X Съезде онкологов и радиологов стран СНГ
и Евразии, Сочи, апрель 2018г.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика наблюдений, включенных в исследование.
В соответствии с критериями отбора в исследование были включены 65
пациенток с Т1 - Т2 стадиями инвазивного РМЖ неспецифического типа, в
возрасте от 35 до 86 лет, радикально оперированных с мая 2011 по апрель 2013
года в торакальном отделении ГБУЗ Оренбургский областной клинический
онкологический диспансер. Средний возраст пациенток составил 57.9±9.9 лет
(медиана - 57 лет). Этическое одобрение было получено от Комитета по этике
Оренбургского
государственного
медицинского
университета.
Конфиденциальность пациентов была защищена путем декодирования данных в
соответствии с требованиями о конфиденциальности, принятыми в ГБУЗ ООКОД.
Распределение пациентов в зависимости от клинико-морфологических и
молекулярно-биологических особенностей РМЖ представлены в таблице № 1.
6
Таблица 1.
Распределение пациентов в зависимости от клинико-морфологических и
молекулярно-биологических особенностей РМЖ
Клинико-патологические данные
N
%
26
39
40,0
60,0
Т стадия (Т)
рТ1
рТ2
N стадия (N)
pN0
pN1
pN2
pN3
G1
G2
G3
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Люминальный
Her2/neu позитивный
Трижды негативный
37
15
1
12
Степень дифференцировки опухоли (G)
8
43
14
Статус рецепторов к эстрогенам
34
31
Статус рецепторов к прогестерону
46
19
Статус HER2/neu
52
13
Биологические подтипы
38
11
16
56.9
23.1
1.5
18.5
12.3
66.1
21.5
52.3
47.7
70.8
29.2
80.0
20.0
58.5
16.9
24.6
В исследование не включали пациенток, получавших предоперационную
лучевую или неоадьювантную химиотерапию, а так же с декомпенсацией
сердечнососудистых, почечных заболеваний, обострением хронических
воспалительных процессов, выраженными аллергическими процессами и
получавших глюкокортикоиды, антигистаминные препараты и нестероидные
противовоспалительные средства.
У 45 больных были выявлены сопутствующие хронические заболевания.
Указанные патологические процессы не проявляли манифестной симптоматики,
что расценивалось как состояние устойчивой ремиссии.
Всем пациенткам были выполнены радикальные операции (R0):
радикальная мастэктомия – в 50 (76.9%) случае, радикальная резекция молочной
железы - в 15 (23.1%). Информация о статусе РЭ, РП и эпидермальном факторе
роста (HER2/neu) была извлечена из заключения патологоанатома. Размер
опухоли и ее узловой статус были оценены в соответствии с международной
классификацией по TNM (TNM Classification of Malignant Tumours – 7 edition,
2012), степень злокачественности опухоли – с использованием классификации
C.W. Elston и I.O. Ellis (2002). Послеоперационный период пациенток,
включенных в исследование, протекал без осложнений. После операции лучевая
7
терапия на зоны регионарного метастазирования была выполнена 36 (55,4%)
пациенткам, адьювантная химиотерапия проведена 42 (64,6%). Медиана периода
наблюдения за пациентками составила 68,2 месяцев. За период наблюдения у 14
пациенток возникли рецидивы РМЖ. Местный рецидив выявлен у 1 пациентки,
метастатическое поражение костей - у 6, метастазы в контрлатеральные лимфатические
узлы – у 1, метастазы в легкие – у 1 и диссеминация в печень, легкие, кости – у 5
пациенток. 4 пациентки умерли в сроки от 34,2 до 66 месяцев после операции.
Гистологический метод
Материал для морфологического исследования забирали в течение 30 минут
после удаления операционного препарата, проводили по стандартной методике и
заливали в парафин. Срезы толщиной 3 - 4 мкм окрашивали гематоксилином Майера и
эозином.
В строме опухоли и прилежащих тканях при увеличении х200 определяли
пери- и интратуморальные области и визуально-аналоговым способом оценивали
следующие показатели: 1. Выраженность лимфоидной инфильтрации (ЛИ)
стромы опухоли (нет, слабо выраженная - диффузная инфильтрация или мелкие
очаговые скопления и выраженная - крупноочаговые инфильтраты); 2. Наличие
рыхлой нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани стромы
опухоли в перитуморальной области (нет, есть); 3. Наличие характерных
ячеистых
структур
в
рыхлой
нежноволокнистой
неоформленной
соединительной ткани стромы опухоли (нет, есть).
Иммуногистохимические исследования
Данный вид работы выполнены на базе иммуногистохимической
лаборатории Оренбургского областного клинического онкологического
диспансера, оснащенной роботизированной системой Autostainer 480. Для
проведения иммуногистохимического исследования (ИГХ) использованы
антитела: CD34 Ab-1(Clone QBEnd/10, Novocastra Laboratories Ltd) в разведении
1:50, Podoplanin (4D5aE5E6, eBioscience™, BMS1105) в разведении 1:500 и
Vimentin (anti-Vimentin, клон Vim 3B4, Dako) в разведении 1:100. Исследования
проводились в соответствии с протоколом фирмы изготовителя. В качестве
системы визуализации применяли UltraVision LP Detection System HRP Polymer & DAB Plus
Chromogen. В качестве отрицательного контроля срезы аналогичным образом инкубировали с
раствором для разведения антител (UltrAb Diluent). Положительным контролем для CD34
служила окраска эндотелия сосудов, для подопланина – окраска эндотелиальной выстилки
синусов лимфатического узла, для виментина – стромальных клеток (фибробластов).
В гистопрепаратах, окрашенных с помощью антител к СD34, оценивали
следующие показатели: 1. Плотность микрососудов (ПМС) оценивали в точках
«максимальной васкуляризации» на площади 0,30 х 0,22 мм2, принятой за
условную единицу площади (УЕП), путем подсчета среднего количества
капилляров и отдельных клеток, экспрессирующих CD34 на УЕП (Goddard J.C. et
al, 2002). Подсчет ПМС проводили с использованием программы Adobe Photoshop
CS5 и наложением на изображение метрической сетки плотностью 140 точек; 2.
Количество дилятированных капилляров (ДК) в перитуморальной строме и
8
атипичных дилятированных капилляров (АДК) в интратуморальной строме
оценивали полуколичественным способом при увеличении х200 (нет; единичные
– не более 2 сосудов в поле зрения; множественные – более 2 в поле зрения). Для
деления сосудов на единичные и множественные был использован 35-й
перцентиль, определенный путем подсчета количества сосудов на УЕП в 20
исследованных образцах; 3. Количество структур с частичной эндотелиальной
выстилкой (нет, единичные – не более 2 в поле зрения: множественные – более 2
в поле зрения); 4. Наличие в сосудах опухолевых эмболов (нет, есть); 5. Наличие в
сосудах CD34 позитивных клеток (нет, есть).
В гистопрепаратах, окрашенных с помощью антител к виментину,
полуколичественным способом оценивали следующие показатели: 1. Экспресию
виментина в клетках внутрипротокового компонента (нет, есть); 2. Наличие
экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли (нет, есть); 3.
Плотность полиморфных стромальных клеток, хаотично расположенных по
краю опухоли, экспрессирующих виментин, определяли способом, аналогичным
подсчету ПМС. В зависимости от плотности полиморфных стромальных клеток,
все случаи были разделены на две группы: с высокой (14,4 и более клеток на
УЕП) и низкой плотностью (менее 14,4 клеток на УЕП). Для деления на группы
использовали 65-й перцентиль.
В гистопрепаратах, окрашенных с помощью антител к подопланину,
оценивали локализацию сосудов, их диаметр и особенности эндотелиальной выстилки.
Все гистопрепараты оценивались самим исследователем и, параллельно,
независимым морфологом. В спорных случаях решение принималось коллегиально.
Статистический анализ
Статистическую обработку результатов исследования проводили с
использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0. Для абсолютных
величин вычисляли среднее значение (М) и стандартное отклонение (σ).
Сравнение между группами проводили параметрическим и непараметрическими
методами (LSD Test, Kruskal-Wallis и Mann-Whitney тесты). Соответствие
анализируемых параметров закону нормального распределения оценивали по
значениям тестов Колмогорова-Смирнова и Уилксона-Гехана. Взаимосвязь между
различными показателями определяли параметрическим методом Pearson и
непараметрическими методами - ранговой корреляции по Spearman и Гамма
коэффициента. Достоверность различий частот признаков в изучаемых группах
оценивали с помощью критерия χ2. Анализ общей и безрецидивной 5-летней ОВ
и БВ выполняли по методу Каплана-Майера (Kaplan-Meier). Сравнение показателей
выживаемости между группами больных проводили с использованием Long-Rank теста.
Различия между показателями считали достоверными при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
I. Морфологические особенности разных типов сосудов при РМЖ
Исследование показало, что при РМЖ опухолевые сосуды гетерогенны по морфологии.
В зависимости от морфологических особенностей были выделены следующие типы
опухолевых сосудов и структур с эндотелиальной выстилкой:
9
Микрососуды обычного строения. К этому типу были отнесены капилляры
и другие микрососуды диаметром 5 – 40 мкм.
ПМС в перитуморальной строме составила 9,4±3,8 на УЕП, ПМС в
интратуморальной строме – 9,9±3,0 на УЕП. Сосуды имели обычное строение.
Цитоплазма эндотелиальных клеток равномерно и интенсивно окрашивалась
маркером CD34 и имела четкие, ровные контуры. При окраске гистопрепаратов
антителами к подопланину, лимфатические сосуды, диаметром 5-40 мкм были
локализованы преимущественно в перитуморальной строме.
Дилятированные капилляры. ДК - сосуды диаметром 40 мкм и более
(средний диаметр 164±88 мкм). Единичные и множественные ДК встречались
одинаково часто – в 44,0% случаев, отсутствовали в 12,0% случаев. Сосуды чаще
всего имели правильную округлую или овальную форму (рис. 1). Характерной
особенностью описанных сосудов являлось то, что в их эндотелиальной выстилке
часто наблюдались клетки с крупными светлыми ядрами с нежно сетчатой
структурой хроматина. На поперечных срезах ядра клеток были округлой или
овальной формы (рис. 2). Цитоплазма клеток довольно равномерно окрашивалась
маркером CD34 и имела четкие контуры. Наиболее часто ДК наблюдались в
перитуморальной строме, где их наличие было связано с характерной структурой
соединительно-тканного матрикса, который был представлен соединительной
тканью, богатой фибробластами и имеющей нежную тонкосетчатую волокнистую
основу. В просвете ДК, расположенных в перитуморальной строме, содержимое
чаще всего отсутствовало или оно было представлено клетками лимфоцитарного
ряда. Окраска гистопрепаратов антителами к подопланину выявила, что большинство ДК,
расположенных в перитуморальной строме, были лимфатическими.
Рис. 1. Дилятированные капилляры. ИГХ Рис. 2. Дилятированные капилляры. В
эндотелиальной
выстилке
сосудов
окраска с антителами к CD34, х 400.
наблюдаются клетки с крупными светлыми
ядрами с нежно сетчатой структурой
хроматина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин,
х 400.
Атипичные дилятированные капилляры. АДК - сосуды неправильной
формы, диаметром 40 мкм и более, с эндотелиальной выстилкой, представленной
хаотично расположенными клетками, которые нередко наслаивались друг на
друга (рис. 3). Контуры клеток были нечеткими, неровными. В просвете АДК
10
часто определялись CD34 позитивные клетки, не связанные с эндотелиальной
выстилкой, а также опухолевые эмболы (рис. 4). АДК не определялись в 18,9%
случаев, были единичными - в 35,8% и множественными – в 45,3% случаев и
располагались преимущественно в интратуморальной строме. В просвете
некоторых сосудов наблюдались эритроциты, в других только лейкоциты. При
окраске гистопрепаратов антителами к подопланину было выявлено, что в
перитуморальной строме, расположенной непосредственно по краю опухоли,
иногда наблюдались лимфатические сосуды, неправильной формы с хаотичным
расположением клеток эндотелиальной выстилки. В интратуморальной строме
лимфатические сосуды подобного типа не отмечались. Возможно, что эти
особенности свидетельствуют о том, что АДК, расположенные в
перитуморальной строме являются лимфатическими, а в интратуморальной –
кровеносными.
Рис.
3.
Атипичный
дилятированный Рис. 4. Атипичные дилятированные капилляры. В
CD34
капилляр. ИГХ окраска с антителами к CD34, просвете центрального сосуда видна
позитивная клетка, в просвете второго сосуда –
х400.
опухолевые эмболы. ИГХ окраска с антителами к
CD34, х400.
Структуры с частичной эндотелиальной выстилкой. Ранее при раке
желудка были описаны структуры с частичной эндотелиальной выстилкой и
характерные ячеистые структуры в рыхлой нежноволокнистой неоформленной
соединительной ткани стромы опухоли, которые были связаны с факторами
прогноза заболевания и отдаленными результатами лечения (Senchukova M,
Kiselevsky MV, 2014). При РМЖ подобные структуры также были обнаружены
(рис. 5). Структуры с частичной эндотелиальной выстилкой отсутствовали в
27,9% случаев, были единичные – в 39,5% и множественными – в 32,6%. При их
наличии, также как и при раке желудка, одновременно определялись структуры
без эндотелиальной выстилки и АДК, в просвете которых часто наблюдались
опухолевые эмболы (рис. 6).
11
Рис.
5.
Структура
с
частичной
эндотелиальной
выстилкой
в
строме
опухоли. ИГХ окраска с антителами к CD34,
х200.
Рис. 6. Структура с частичной эндотелиальной
выстилкой (черная стрелка), структуры без
эндотелиальной выстилки (зеленые стрелки) и
атипичные дилятированные капилляры (красные
стрелки). ИГХ окраска с антителами к CD34, х400.
Эндотелиальные клетки в описанных структурах, также как и в АДК, располагались
хаотично, цитоплазма клеток неравномерно окрашивалась маркером CD34.
Характерные ячеистые структуры в рыхлой нежноволокнистой
неоформленной соединительной ткани стромы опухоли. В некоторых случаях,
в рыхлой нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани
перитуморальной стромы наблюдались характерные ячеистые структуры (рис. 7).
Они отсутствовали в 37,9% случаев, были единичными – в 34,8% и
множественными – в 27,3%. При иммуногистохимической окраске с использованием антител к
CD34 часть ячеистых структур имела эндотелиальную выстилку, клетки которой очень слабо
окрашивались маркером. При этом контуры сосудов чаще всего были четкими, ровными (рис.
8). Аналогичные структуры были выявлены и при окраске гистопрепаратов
антителами к подопланину.
Рис. 7. Характерные ячеистые структуры в
рыхлой нежноволокнистой неоформленной
соединительной ткани стромы опухоли
(стрелка). Окраска: гематоксилин Майера и
эозин, х200.
Рис. 8. Характерные ячеистые структуры в
рыхлой нежноволокнистой неоформленной
соединительной ткани стромы опухоли.
Некоторые
структуры
имеют
эндотелиальную
выстилку,
слабо
окрашиваваемую маркером CD34 (стрелки).
ИГХ окраска с антителами к CD34, х400.
12
II. Выраженность лимфоидной инфильтрации и особенности экспрессии виментина в
опухолевых и стромальных клетках при раке молочной железы
Установлено, что у пациентов РМЖ часто наблюдается наличие ЛИ стромы
опухоли. Клетки инфильтратов были 7-10 мкм в диаметре, с круглым
гиперхромным ядром и тонким ободком цитоплазмы, что позволяло отнести их к
клеткам лимфоцитарного ряда. Слабо выраженные лимфоидные инфильтраты
выявлены у 19 (28,8%) пациентов, выраженные лимфоидные инфильтраты - у 25
(37,9%). ЛИ не обнаружена у 22 (33,3%) пациентов.
Изучение особенностей экспрессии виментина выявило экспрессию
виментина в следующих типах клеток:
1.
Обычные фибробласты. Визуализировались как вытянутые клетки,
нередко изогнутой формы. Экспрессия виментина была слабой или умеренной
интенсивности. Расположение клеток равномерное, соответствует рисунку
соединительно-тканных волокон (Рис. 9).
2.
Эндотелиальные клетки. Визуализировались как клетки с четкими,
ровными контурами. Цитоплазма окрашивалась маркером равномерно, средней
интенсивности.
3.
Вдоль базальной мембраны нормальных и опухолевых желез
визуализировались клетки вытянутой веретенообразной формы, равномерно
накапливающие виментин. По локализации и морфологическим особенностям их
можно было отнести к миоэпителиальным клеткам.
4.
Экспрессия виментина в полиморфных стромальных клетках, хаотично
расположенных по краю опухоли. Клетки были неправильной формы со
светлыми ядрами, разных размеров (рис. 10). Цитоплазма клеток интенсивно
окрашивалась виметином. Контуры клеток нечеткие, возможно за счет
цитоплазматических отростков. Плотность описанных клеток составила от 5,8 до
31,0 на УЕП, среднее значение – 14,0 ± 5,3 (Медиана – 13,5). При оценке
плотности виментин экспрессирующих полиморфных стромальных клеток,
плотность была низкой в 52,9% случаев и высокой в 47,1% случаев.
5.
В ряде случаев была отмечена экспрессия виментина в клетках
внутрипротокового компонента инвазивного РМЖ. Опухолевые клетки имели
крупные светлые ядра, неправильной формы с неравномерным распределением
хроматина. Тонкий ободок цитоплазмы активно окрашивался виментином (рис.
11). Экспрессия в клетках внутрипротокового компонента РМЖ наблюдалась в
29,4% случаев.
6.
Иногда наблюдалась экспрессия виментина в клетках инвазивного
компонента опухоли (рис. 12). Описанные клетки имели неправильную форму и
интенсивно накапливали виментин. Экспрессия была отмечена в 29,4% образцах
опухолевой ткани. Имели ли клетки эпителиальное, миоэпителиальное
происхождение или относились к клеткам лейкоцитарного ряда, сказать было
сложно.
7.
Часть лимфоидных клеток также экспрессировала виментин. Экспрессия
виментина в них отсутствовала в 23,5% случаев. Была слабо выраженной
(окрашивалось менее 30% клеток) – в 55,9% и выраженной (окрашивалась более
30% клеток) – в 20,6% случаев.
13
Рис. 9. Обычные фибробласты (стрелки).
Клетки вытянутой или изогнутой формы с
умеренной
экспрессией
виментина.
Расположены вдоль соединительно-тканных
волокон. ИГХ окраска с антителами к
виментину, х400.
Рис.
10.
Экспрессия
виментина
в
полиморфных
стромальных
клетках
(стрелки). ИГХ окраска с антителами к
виментину, х400.
Рис. 11. Характерная экспрессия виментина в
клетках внутрипротокового компонента
инвазивного рака молочной железы. ИГХ
окраска с антителами к виментину, х400.
Рис. 12. Экспрессия виментина в клетках
инвазивного компонента опухоли (стрелки).
ИГХ окраска с антителами к виментину,
х400.
III. Клиническая значимость разных типов опухолевых микрососудов,
выраженности лимфоидной инфильтрации стромы опухоли и экспрессии
виментина при раке молочной железы
Клиническая
значимость
плотности
микрососудов
в
интратуморальной и перитуморальной строме. Корреляционный анализ по
Спирмену не выявил значимых корреляций ПМС с клинико-морфологическими и
молекулярно-биологическими характеристиками РМЖ. Не установлено различий
в ПМС в зависимости от возраста пациенток, Т и N стадии, статуса РЭ и РП и
HER-2/neu. В тоже время, отмечены более высокие значения ПМС в
интратуморальной строме при Grade 3 (9,8±2,9, 9,9±3,0 и 11,2±3,2, соответственно
при G1, G2 и G3, р=0,12) и при трижды негативном РМЖ (9,8±3,4, 10,0±2,4 и
11,1±2,7, соответственно при люминальном, HER-2/neu позитивном и трижды
негативном РМЖ, р=0,104). В перитуморальной строме максимальные значения
ПМС наблюдались при 4 и более метастазах в РЛУ (9,7±2,91, 8,5±4,62 и 10,1±3,73,
14
соответственно при отсутствии, 1-3 и 4 и более метастазах в РЛУ, р1-3=0,02) и при
трижды негативном РМЖ (8,6±2,51, 8,8±3,32 и 11,4±4,93, соответственно при
люминальном, HER-2/neu позитивном и трижды негативном РМЖ, р1-3=0,03).
Клиническая значимость количественной оценки дилятированных
капилляров. В результате проведенного анализа было установлено, что
количество ДК коррелирует с выраженностью ЛИ стромы опухоли (р=0,0001),
наличием рыхлой нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани в
перитуморальной строме (р=0,0001) и наличием опухолевых эмболов в сосудах
(р=0,02). Также установлены корреляции сосудов этого типа с количеством АДК
(р=0,0001), структур с частичной эндотелиальной выстилкой (р=0,002) и
количеством характерных ячеистых структур в перитуморальной строме
(р=0,003). Множественные ДК достоверно чаще встречались при негативном
статусе РП (52,18% и 21,05%, соответственно при негативном и позитивном
статусе РП, р=0,04), при выраженной ЛИ стромы опухоли (в 36,4%, 21,1% и
68,0% случаев, соответственно при отсутствии, слабо выраженной и выраженной
ЛИ, р=0,005), при наличии рыхлой нежноволокнистой неоформленной
соединительной ткани в перитуморальной строме (в 53,5% и 26,1% случаев,
соответственно при ее наличии и отсутствии, р=0,03) и значимо чаще, при
наличии опухолевых эмболов в сосудах (24,0 % и 53,84%, соответственно при их
отсутствии и наличии, р=0,06). Множественные ДК встречались в 10,0%, 36,8% и
62,5% случаев, соответственно при отсутствии, единичных и множественных
АДК (р=0,01); в 16,7%, 47,1% и 64,3% случаев, соответственно при отсутствии,
единичных и множественных структурах с частичной эндотелиальной выстилкой
(р=0,04); и в 72,0% и 46,3% случаев, соответственно при наличии и отсутствии
характерных ячеистых структур в перитуморальной строме (р=0,04).
Клиническая
значимость
количественной
оценки
атипичных
дилятированных капилляров. Данные по количеству АДК в зависимости от
клинико-морфологических и молекулярно-биологических характеристик РМЖ,
представлены в таблице 2. Установлено, что количество АДК коррелирует со
статусом РЭ (р=0,0004) и РП (р=0,02), наличием опухолевых эмболов (р=0,004) и
CD34 позитивных клеток в просвете сосудов (р<0,0001), с количеством структур с
частичной эндотелиальной выстилкой (р<0,0001) и плотностью виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток (р<0,0001). Множественные
АДК встречались в 64,7% и 30,0% случаев (рис. 13), соответственно при
негативном и позитивном статусе РЭ (р=0,01), в 55,6% и 31,6% случаев,
соответственно при негативном и позитивном статусе РП (р=0,2), в 8,3%, 29,4% и
78,6%,
случаев (рис.14), соответственно при отсутствии, единичных и
множественных структурах с частичной эндотелиальной выстилкой (р=0,0004) и в
7,1% и 64,0% случаев, соответственно при низкой и высокой плотности виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток (р=0,002). При наличии
множественных АДК в сосудах чаще встречались опухолевые эмболы (в 77,4% и
45,5% случаев, соответственно при наличии и отсутствии, р=0,008) и CD34
позитивные клетки (в 100,0% и 54,6% случаев, соответственно при наличии и
отсутствии, р<0,00001).
15
Таблица 2.
Количество атипичных дилятированных капилляров в зависимости от клиникоморфологических и молекулярно-биологических особенностей рака молочной
железы
Характеристики
Нет
n
<50
>50
pT1
pT2
pN0
pN1
pN2-3
0
1-3
>3
G1
G2
G3
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Люминальный
HER2/neu позитивный
Трижды негативный
Нет
Есть
Нет
Есть
Единичные
%
n
%
Возраст
0
0,00
5
45,45
11
20,75
17
32,08
Т стадия
5
19,23
11
42,31
6
15,79
11
28,95
N стадия
7
18,92
11
29,73
1
6,66
7
46,67
3
27,27
4
27,28
Количество метастатических РЛУ
7
18,92
11
29,73
2
10,52
9
47,37
2
25,00
2
25,00
Степень злокачественности
5
62,50
2
25,00
5
11,63
16
37,21
1
7,69
4
30,77
Статус РЭ
3
8,82
9
26,47
8
26,67
13
43,33
Статус РП
7
15,55
13
28,89
4
21,05
9
47,37
Статус HER2/neu
9
17,65
17
33,33
2
15,39
5
38,46
Биологический подтип опухоли
8
21,62
14
37,84
1
9,10
5
45,45
2
12,50
3
18,75
Наличие опухолевых эмболов в сосудах
8
32,00
10
40,00
3
7,69
12
30,77
Наличие CD34+ клеток в сосудах
7
46,67
8
53,33
4
8,16
14
28,57
16
Множественные
n
%
р
6
25
54,55
47,17
0,09
10
21
38,46
55,26
0,40
19
7
5
51,35
46,67
45,45
0,53
19
8
4
51,35
42,11
50,00
0,66
1
22
8
12,50
51,16
61,54
0,007
22
9
64,71
30,00
0,01
25
6
55,56
31,58
0,20
25
6
49,02
46,15
0,94
15
5
11
40,54
45,45
68,75
0,32
7
24
28,00
61,54
0,009
0
31
0,00
63,27
0,00002
100,0%
100,0%
80,0%
65,7% 70,0%
40,0%
35,3%
78,6%
80,0%
нет, единичные
70,6%
нет, единичные
множественные
60,0%
91,7%
60,0%
множественные
40,0%
30,0%
29,4%
21,4%
20,0%
20,0%
0,0%
0,0%
негативный
позитивный
8,3%
нет
единичные
множественные
Количество структур с частичной
эндотелиальной выстилкой
Статус рецепторов эстрогенов
Рисунок 13.Количество атипичных дилятированных Рисунок 14. Количество атипичных дилятированных
капилляров в зависимости от статуса рецепторов капилляров в зависимости от количества структур с
эстрогенов, р=0,01
частичной эндотелиальной выстилкой, р=0,0004
Клиническая значимость количественной оценки структур с
частичной эндотелиальной выстилкой. Важно отметить, что структуры с
частичной эндотелиальной выстилкой и АДК имели не только общие
морфологические особенности, высоко значимо коррелировали между собой
(р<0,0001), но и были связаны с одними и теми же характеристиками РМЖ:
статусом РЭ (р=0,002) и РП (р=0,001), с наличием опухолевых эмболов (р=0,001)
и CD34 позитивных клеток в сосудах (р=0,001), а также с плотностью виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток (р=0,0004). Кроме этого
отмечены их корреляции со степенью злокачественности опухоли (р=0,01).
Множественные полостные структуры с частичной эндотелиальной выстилкой
чаще встречались при умеренной и высокой степени злокачественности опухоли
(Grade 2-3) (в 12,5%, 44,2% и 33,3%, соответственно, при G1, G2 и G3, р1-2=0,049),
при негативном статусе РЭ (47,1% и 27,6% случаев, соответственно, при
негативном и позитивном статусе РЭ, р=0,03) и РП (в 46,7% и 16,7% случаев,
соответственно при негативном и позитивном статусе РП, р=0,03), при наличии в
сосудах опухолевых эмболов (в 20,8% и 48,7% случаев, соответственно при их
отсутствии и наличии, р=0,03) и CD34 позитивных клеток (0% и 50% случаев,
соответственно при их отсутствии и наличии, р=0,00007). Множественные
структуры с частичной эндотелиальной вытилкой наблюдались в 21,2% и 56,7%
случаев, соответственно при низкой и высокой плотности виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток (р=0,004) и в 33,3%, 27,3%
и 56,2% случаев, соответственно при люминальном, HER-2/neu позитивном и
трижды негативном РМЖ, (р=0,03).
Клиническая значимость оценки наличия характерных ячеистых
структур в перитуморальной строме. Данные по количеству характерных
ячеистых структур в зависимости от клинико-морфологических и молекулярнобиологических характеристик РМЖ, представлены в таблице 3.
17
Таблица 3.
Количество характерных ячеистых структур в перитуморальной строме в
зависимости от клинико-морфологических и молекулярно-биологических
особенностей рака молочной железы
Характеристики
Нет
n
<50
>50
pT1
pT2
pN0
pN1
pN2-3
0
1-3
>3
G1
G2
G3
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Негативный
Позитивный
Люминальный
HER2/neu позитивный
Трижды негативный
Нет
Есть
Нет
Есть
Единичные
%
Множественные
n
%
n
%
Возраст
6
50,00
4
33,33
2
19
35,85
19
35,85
15
Т стадия
14
53,85
8
30,77
4
11
28,21
15
38,46
13
N стадия
14
37,84
16
43,24
7
7
46,66
4
26,67
4
4
25,00
3
25,00
6
Количество метастатических РЛУ
14
37,84
7
18,92
16
8
42,11
7
36,84
4
3
33,33
3
33,33
3
Степень злокачественности
3
37,50
4
50,00
1
18
41,86
14
32,56
11
4
28,58
5
35,71
5
Статус РЭ
9
26,47
14
41,18
11
16
51,62
9
29,03
6
Статус РП
15
32,61
19
41,30
12
10
52,63
4
21,05
5
Статус HER2/neu
24
46,15
15
28,85
13
1
7,69
8
61,54
4
Биологический подтип опухоли
17
44,74
13
34,21
8
1
9,09
6
54,55
4
7
43,75
4
25,00
5
Наличие опухолевых эмболов
13
52,00
5
20,00
7
12
30,77
17
43,59
10
Наличие CD34+ клеток в сосудах
6
40,00
4
26,67
5
19
38,78
18
36,73
12
р
16,67
28,30
0,59
15,38
33,33
0,08
18,92
26,67
50,00
0,31
43,24
21,05
33,34
0,44
12,50
25,58
35,71
0,70
32,35
19,35
0,11
26,09
26,32
0,22
25,00
30,77
0,01
21,05
36,36
31,25
0,16
28,00
25,64
0,11
33,33
24,49
0,71
Анализ показал, что наличие характерных ячеистых структур в
перитуморальной строме коррелировало с Т стадией (р=0,004), HER-2/neu
статусом (р=0,0002) и наличием опухолевых эмболов в сосудах (р=0,01). Этот
показатель также коррелировал с наличием рыхлой нежноволокнистой
18
неоформленной соединительной ткани в перитуморальной строме (р<0,0001) и
количеством ДК (р=0,003). Характерные ячеистые структуры в перитуморальной
строме чаще встречались при Т2 стадии РМЖ (в 15,4% и 33,3% случаев,
соответственно при Т1 и Т2, р=0,08) и при наличии опухолевых эмболов в
сосудах (в 48,0% и 69,2% случаев, соответственно при их отсутствии и наличии,
р=0,09). Наличие характерных ячеистых структур в перитуморальной строме
было единственным фактором, связанным с HER-2/neu позитивным статусом
(рис. 15). Описанные структуры достоверно чаще встречались при позитивном
HER-2/neu статусе, чем при негативном (р=0,006). Также важно отметить, что
описанные структуры достоверно чаще встречались при наличии рыхлой
нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани в перитуморальной
строме (в 4,3% и 92,8% случаев, соответственно при наличии и отсутствии,
р<0,0001, рис. 16). Не отмечено корреляций данного показателя с количеством
АДК, структур с частичной эндотелиальной выстилкой и выраженностью
экспрессии виментина.
100,0%
95,7%
92,8%
80,0%
80,0%
60,0%
100,0%
92,3%
54,7%
нет
45,3%
отсутствуют
60,0%
есть
присутстсвуют
40,0%
40,0%
7,7%
20,0%
20,0%
0,0%
0,0%
негативный
позитивный
нет
есть
Наличие рыхлой нежноволокнистой
неоформленной соединительной ткани
Статус рецепторов к HER2/neu
Рисунок 15. Наличие характерных ячеистых
структур в рыхлой нежноволокнистой
неоформленной
соединительной
ткани
стромы опухоли в зависимости от статуса
рецепторов к HER-2/neu, р=0,006.
7,2%
4,3%
Рисунок 16. Наличие характерных ячеистых
структур в перитуморальной строме, в
зависимости
от
наличия
рыхлой
нежноволокнистой
неоформленной
соединительной ткани, р<0,0001.
Клиническая
значимость
оценки выраженности
лимфоидной
инфильтрации стромы опухоли. Выраженность ЛИ стромы опухоли, как было
отмечено выше, коррелировала с количеством ДК, а так же с биологическим
подтипом опухоли (р=0,004) и плотностью виментин экспрессирующих
полиморфных стромальных клеток (р=0,001). Выраженная ЛИ стромы опухоли
чаще наблюдалась при
прогностически неблагоприятных биологических
подтипах РМЖ (в 23,1%, 63,6% и 56,3% случаев, соответственно при
люминальном, НER позитивном и ТНР подтипах РМЖ, р=0,01) и при высокой
плотности виментин экспрессирующих полиморфных стромальных клеток (в
52,0% и 21,4% случаев, соответственно при высокой и низкой экспрессии
виментина, р=0,02).
Клиническая значимость оценки экспрессии виментина в опухолевых и
стромальных клетках. Проведенный анализ не выявил различий в плотности
19
виментин экспрессирующих полиморфных стромальных клеток, в зависимости от
клинико-морфологических и молекулярно-биологических особенностей РМЖ.
Как было уже отмечено выше, высокая плотность виментин экспрессирующих
полиморфных стромальных клеток, чаще наблюдалась при наличии
множественных ДК (р=0,035), АДК (р=0,0003), структур с частичной
эндотелиальной выстилкой (р=0,008) и при наличии экспрессии виментина в
инвазивном компоненте опухоли (р=0,004).
Анализ экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента
опухоли показал, что экспрессия виментина чаще наблюдалась при
множественных АДК (р=0,007) и структурах с частичной эндотелиальной
выстилкой (р=0,0003).
Что касается экспрессии виментина в клетках внутрипротокового
компонента РМЖ, то этот показатель коррелировал только с возрастом
пациенток (р=0,05). При наличии внутрипротокового компонента пациентки были
моложе (54,5±13,8 и 60,0±7,1, соответственно при наличии и отсутствии, р=0,025).
Прогностическое значение разных типов опухолевых микрососудов
Данные о 5-летней БВ и ОВ, в зависимости от количества разных типов
опухолевых микрососудов представлены в таблице 5.
Таблица 5.
5-летняя безрецидивная и общая выживаемость пациенток РМЖ в
зависимости от количества разных типов опухолевых микрососудов
Типы опухолевых
микрососудов
5-летняя
безрецидивная1
выживаемость
5-летняя общая2
выживаемость
%
Уровень
значимости, р
Р1
Р2
Дилятированные капилляры
р>0,05
р>0,05
Нет, единичные
75,7%
91,9%
Множественные
75,0%
96,4%
Атипичные дилятированные капилляры
р>0,05
р>0,05
Нет, единичные
81,8%
93,9%
Множественные
71,0%
96,8%
Структуры с частичной эндотелиальной выстилкой
р=0,08
р>0,05
Нет, единичные
84,6%
94,9%
Множественные
66,7%
95,8%
Ячеистые структуры в рыхлой нежноволокнистой неоформленной
соединительной ткани
р>0,05
р>0,05
Нет
72,0%
92,0%
Есть
77,5%
95,0%
Проведенный анализ не выявил корреляции между 5-летней ОВ и
количеством разных типов опухолевых микрососудов и структур с
эндотелиальной выстилкой. Полагаем, что это, скорее всего, связано с небольшим
числом умерших пациентов (4 пациента). Что касается 5-летней БВ, то это
20
показатель коррелировал с ПМС в перитуморальной строме (p=0,03), количеством
структур с частичной эндотелиальной выстилкой (р=0,004) и наличием CD34+
клеток в просвете сосудов (р=0,01). 5-летняя БВ составила 93,3% и 71,4%,
соответственно при отсутствии и при наличии CD34+ клеток в просвете сосудов
(р=0,08). Наиболее низкие значения этого показателя были отмечены при
множественных структурах с частичной эндотелиальной выстилкой (рис. 17) –
94,4% 76,2% и 66,7%, соответственно при отсутствии 1, единичных2 и
множественных3 структурах (р1-3=0,03, Log-Rank Test). При наличии рецидива,
ПМС в перитуморальной строме была выше, чем при отсутствии (12,3±3,4 и
9,1±3,7 соответственно, р=0,02).
Complete
Censored
Кумулятивная 5-летняя безрецидивная
выживаемость
1,00
0,95
0,90
0,85
0,80
0,75
0,70
0,65
0,60
0
720
360
1440
1080
2160
1800
Нет
Единичные
Множест в енные
Время (дни)
Рис. 17. 5-летняя безрецидивная выживаемость в зависимости от количества структур с
частичной эндотелиальной выстилкой (Kaplan-Meier).
Резюме
Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что при
РМЖ сосуды в опухоли неоднородны по морфологии и клинической значимости
(см. приложение). Наибольшее клиническое значение отмечено для АДК,
структур с частичной эндотелиальной выстилкой и характерных ячеистых
структур в рыхлой нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани
стромы опухоли. Множественные АДК и структуры с частичной эндотелиальной
выстилкой имели не только схожие морфологические особенности выстилающих
эндотелиальных клеток, чаще встречались при высокой плотности виментин
экспрессирующих полиморфных стромальных клеток и при наличии CD34
позтивных клеток в просвете сосудов, но и коррелировали с одними и теми же
предиктивными и прогностическими факторами: негативным статусом РЭ и РП и
наличием опухолевых эмболов в сосудах. Наиболее низкие значения 5-летней БВ
наблюдались при множественных структурах с частичной эндотелиальной
выстилкой.
21
В свою очередь, клиническое значение характерных ячеистых структур в
рыхлой нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани стромы
опухоли обусловлено их связью с позитивным HER-2/neu статусом и наличием
опухолевых эмболов в сосудах.
Все вышесказанное свидетельствует о важности дальнейших исследований
прогностической и предиктивной значимости разных типов опухолевых
микрососудов и структур с эндотелиальной выстилкой, с целью уточнения
прогноза заболевания и оптимизации проводимого лечения пациентов РМЖ.
ВЫВОДЫ
1.
При РМЖ установлены следующие типы сосудов и структур с
эндотелиальной выстилкой: микрососуды обычного строения, дилятированные
капилляры, атипические дилятированные капилляры, структуры с частичной
эндотелиальной выстилкой и характерные ячеистые структуры в рыхлой
нежноволокнистой неоформленной соединительной ткани стромы опухоли.
2.
Особенностью
дилятированных
капилляров,
расположенных
преимущественно в перитуморальной строме, является наличие в их
эндотелиальной выстилке клеток с крупными светлыми ядрами с нежно сетчатой
структурой хроматина. Цитоплазма эндотелиальных клеток равномерно
накапливает маркер CD34 и позитивна при окраске антителами к подопланину.
3.
Характерные ячеистые структуры в рыхлой нежноволокнистой
неоформленной соединительной ткани располагаются, преимущественно, в
перитуморальной строме. Отдельные ячеистые сруктуры имеют эндотелиальную
выстилку, клетки которой слабо накапливают маркер CD34 и позитивны при
окраске антителами к подопланину.
4.
Атипичные дилятированные капилляры и структуры с частичной
эндотелиальной выстилкой наблюдаются преимущественно в интратуморальной
строме. Их эндотелиальная выстилка образована хаотично расположенными
клетками, неправильной формы, неравномерно накапливающими маркер CD34. В
просвете атипичных дилятированных капилляров часто наблюдаются опухолевые
эмболы.
5.
Множественные атипичные дилятированные капилляры и структуры с
частичной эндотелиальной выстилкой достоверно чаще выявляются при
негативном статусе рецепторов к эстрогенам (РЭ) (р=0,01 и р=0,03,
соответственно), при наличии CD34+ клеток в просвете сосудов (р<0,00001 и
р=0,00007, соответственно) и при высокой плотности виментин экспрессирующих
полиморфных стромальных клеток (р=0,002 и р=0,004, соответственно).
6.
Наличие в интратуморальной строме множественных структур с частичной
эндотелиальной выстилкой является фактором, связанным со снижением 5-летней
безрецидивной выживаемости пациентов раком молочной железы (р=0,03).
7.
Характерные ячеистые структуры в рыхлой нежноволокнистой
неоформленной соединительной ткани стромы опухоли значимо чаще
наблюдаются при Т2 стадии (р=0,08) и при наличии опухолевых эмболов в
сосудах (р=0,09), и достоверно чаще при множественных дилятированных
капиллярах (р=0,03) и позитивном HER-2/neu статусе (р=0,006).
22
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Полученные данные позволяют сформулировать следующие рекомендации:
1.
Для повышения точности прогноза заболевания при раке молочной железы
рекомендовано определение в опухоли количества структур с частичной
эндотелиальной выстилкой. Наличие в опухоли множественных структур с
частичной эндотелиальной выстилкой следует расценивать, как фактор
неблагоприятного прогноза заболевания и учитывать при планировании лечения.
2.
При изучении предиктивной значимости разных типов опухолевых
микрососудов
рекомендуется
определение
количества
атипичных
дилятированных капилляров и структур с частичной эндотелиальной выстилкой, а
также наличия характерных ячеистых структур в рыхлой нежноволокнистой
неоформленной соединительной ткани стромы опухоли, с целью их возможного
использования, как маркеров ответа опухоли на проводимую химио- и
таргентную терапию.
Приложение
Разные типы опухолевых микрососудов и их корреляции с выраженностью
лимфоидной инфильтрации, особенностями экспрессии виментина и
молекулярно-биологическими характеристиками рака молочной железы
23
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1.
Пучихина Н.В. Диффузные и воспалительные формы рака молочной
железы – как актуальная проблема современной онкологии /Сеньчукова М.А.,
Гайдукова С.Ю., Пучихина Н.В., Митряков С.О., Литвинов А.В., Корзун В.А.,
Самойлов П.В., Васюков М.Н., Калинин Е.А., Пиньчук С.В. - Межрегиональная
научно-практическая
конференция
онкологов,
посвященная
65-летию
онкологической службы Оренбургской области. – Оренбург, 2011. – С. 110-115
2.
Nikitenko N.V. Different types of tumor vessels in breast cancer:
morphology and clinical value /Senchukova M.A., Nikitenko N.V., Tomchuk O.N.,
Zaitsev N.V., Stadnikov A.A. - SpringerPlus. – 2015. – N 4. - Р. – 512. DOI
10.1186/s40064-015-1293-z (PubMed).
3.
Nikitenko N.V. Prognostic Value of CD34 Positive Cells in the Lumen
of Tumor Vessels in Breast Cancer /Senchukova M.A., Nikitenko N.V., Tomchuk
O.N., Zaitsev N.V. - Current Angiogenesis. – 2015. - №4 (1). – C. 1 – 9. (Scopus)
4.
Никитенко Н.В. Различные типы опухолевых сосудов при раке
молочной железы /Никитенко Н.В., Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., Дегтярев
А.М., Киртбая Д.В., Удовица Д.П., Стадников А.А. - Успехи молекулярной
онкологии. - 2015. - № 4. – С. 31-32.
5.
Пучихина Н.В. Клинические аспекты полостного типа ангиогенеза
при раке желудка и молочной железы / Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., Пучихина
Н.В., Зайцев Н.В. - Успехи молекулярной онкологии. - 2015. - № 4. – С. 31.
6.
Никитенко Н.В. Особенности экспрессии виментина и его корреляции
с разными типами опухолевых сосудов, клинико-морфологическими
характеристиками и биологическими подтипами рака молочной железы /
Сеньчукова М.А., Никитенко Н.В., Шурыгина Е.И., Томчук О.Н. - Успехи
молекулярной онкологии. – 2015, № 4. - С. 62
7.
Никитенко
Н.В.
Морфологическая
характеристика
и
прогностическое значение разных типов сосудов при раке молочной железы /
Никитенко Н.В., Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., Зайцев Н.В., А.А.
Стадников А.А., Митряков С.О., Дегтярев А.М., Киртбая Д.В. - Российский
биотерапевтический журнал. – 2016. – №3. – С. 15 – 22.
8.
Никитенко Н.В. Морфологическая характеристика и прогностическое
значение разных типов сосудов при раке молочной железы /Никитенко Н.В.,
Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., Стадников А.А., Дегтярев А.М., Киртбая Д.В.,
Удовица Д.П. - Газета Российского Общества Клинической Онкологии: Тезисы
устных докладов Большой Конференции RUSSCO, Москва, 2016. - №1. – С. 17.
9.
Пучихина Н.В. Морфологические особенности и клиническое
значение полостного типа ангиогенеза при раке желудка и молочной железы
/Сеньчукова М.А., Пучихина Н.В., Томчук О.Н., Зайцев Н.В., Шехтман А.Г.,
Климушкин А.В. - Евразийский онкологический журнал. – 2016. – т.4, №2. – С.
414 - 415.
10.
Никитенко Н.В. Клинико-морфологическая характеристика разных
типов сосудов при раке молочной железы /Сеньчукова М.А., Никитенко Н.В.,
Зайцев Н.В., Стадников А.А., Цыгулева А.Р. - Актуальные вопросы клинической
24
онкологии. Материалы научно-практической конференции онкологов и врачей
общей лечебной сети, посвященной 70-летию онкологической службы
Оренбургской области. – Оренбург, 2016. – С. 75 – 76.
11.
Никитенко Н.В. Особенности ангиогенеза при злокачественных
новообразованиях /Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., Стадников А.А., Никитенко
Н.В., Цыгулева А.Р. - Актуальные вопросы клинической онкологии. Материалы
научно-практической конференции онкологов и врачей общей лечебной сети,
посвященной 70-летию онкологической службы Оренбургской области. –
Оренбург, 2016. – С. 76 – 82
12.
Никитенко Н.В. Клинико-морфологические характеристики разных
типов сосудов при раке молочной железы /Никитенко Н.В., Сеньчукова М.А.,
Томчук О.Н., Дегтярев А.М., Киртбая Д.В., Стадников А.А. - Клиникоморфологические аспекты // В книге: Петербургский онкологический форум
«Белые ночи-2017» (3-й Петербургский международный онкологический форум):
Сборник научных трудов, Санкт-Петербург, 2017. – С. 60.
13.
Никитенко Н.В. Морфологическая характеристика и прогностическое
значение разных типов сосудов при раке желудка и раке молочной железы
/Сеньчукова М.А., Никитенко Н.В., Шурыгина Е.И., Томчук О.Н. - Успехи
молекулярной онкологии. – 2017, № 4. - С. 44
14.
Никитенко Н.В. Особенности экспрессии виментина и его связь с
опухолевыми сосудами, клинико-морфологическими и биологическими
характеристиками рака молочной железы /Сеньчукова М.А., Никитенко Н.В.,
Шурыгина Е.И., Киртбая Д.В. - Евразийский онкологический журнал. – 2018. –
т.6, №1. – С. 162.
15.
Никитенко Н.В. Клиническое значение разных типов опухолевых
сосудов при раке молочной железы /Сеньчукова М.А., Никитенко Н.В.,
Шурыгина Е.И., Митряков С.О. - Евразийский онкологический журнал. – 2018. –
т.6, №1. – С. 71.
25
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АДК
ДК
ИГХ
ЛИ
ПМС
РМЖ
РЛУ
РЭ
HER-2/neu
атипичные дилятированные капилляры
дилятированные капилляры
иммуногистохимия
лимфоидная инфильтрация
плотность микрососудов в опухоли
рак молочной железы
регионарные лимфатические узлы
статус рецепторов к экстрогенам
эпидермальный фактор роста
26
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
10
Размер файла
1 533 Кб
Теги
особенности, клинические, опухолевых, железы, типов, раке, микрососудов, молочной, значение, разные
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа