close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000102973

код для вставкиСкачать
НА ПРАВАХ РУКОПИСИ
БОГДАНОВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА
Сравнительное исследование пристеночной микрофлоры кишки
человека в норме и патологии
03.00.07. - микробиология
Автореферат
Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских
наук
Москва - 2004
Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова
Научные руководители:
академик РАМН,
доктор медицинских наук, профессор
Воробьев Анатолий Андреевич
доктор медицинских наук, профессор
Несвижский Юрий Владимирович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук
Истратов Валерий Григорьевич
доктор медицинских наук
Меньшиков Дмитрий Дмитриевич
Ведущая организация:
Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Защита состоится « УУ » и^-^-^^
2004г. в )У часов на заседании
диссертационного совета Д.208.040.08 при Московской медицинской академии
им. И.М. Сеченова по адресу: 119992, г. Москва, ул. Б. Пироговская, д.2,
строение 3.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской
академии им. И.М. Сеченова (117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49)
Автореферат разослан
« / i » ^:tWt^^X.^04r.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук
Андрей Юрьевич Миронов
4^iJ^
<???3^^3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
По сложившимся представлениям человеческий организм является
сложной микроэкологической системой с эволюционно сложившимися
взаимоотношениями с населяющими его микробами (Бондаренко В.М.,
2003; Шендеров Б.А.,
1998). Показано, что нормальная микрофлора
выполняет целый ряд жизненно важных функций (Петровская В.Г., 1976;
Шендеров Б.А., 1998). Она является антагонистом патогенных и условнопатогенных
человека,
микробов,
биосорбции
соединений,
выполняет
участвует
и
в
обменных
микробной
процессах
трансформации
морфо-кинетическую
функцию,
организма
токсических
участвует
в
иммунобиологической реактивности макроорганизма и т.д.
Одной
из
составляющих
частей
микроэкологической
системы
человеческого организма является микробиоценоз желудочно-кишечного
тракта ( Ж К Т ) . Он имеет сложную структуру и представлен просветной
(фекальной) и пристеночной фракциями (Коршунов В.М., 1984; Ленцнер
А.А., 1987; Пинегин Б.В., 1984; Macfarlane G.T., 1997). До настоящего
времени в основном изучалась просветная микрофлора как наиболее
доступный объект. Ее исследование широко внедрено в повседневную
практику
микробиологических
лабораторий
-
исследование
на
«дисбактериоз».
Биотоп пристеночного муцина, в отличие от просветного, практически
не изучен. Это обусловлено его малой доступностью, а также трудностью
выделения микроорганизмов из пристеночного муцина. В тоже время
знания о морфологии и физиологии пристеночного биотопа могут иметь
как общемедицинское, так и общебиологическое значение. В частности
они могут пролить свет на патогенез некоторых заболеваний. Это в
совокупности определяет актуальность направления исследования.
На кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией М М А им.
И.М. Сеченова был разработан микробиологический метод, который
, '"ОС
"11
I
НМЦЛ^ОМАДАЙАЯ
\
uiiMIIOTtKA
I
*
■Cfl*Tni(3#j|f|^
J^^'^C^V
позволил выделять микроорганизмы из муцинового слоя в эксперименте
(Воробьев
А.А.,
внедрением,
Несвижский
несмотря
на
Ю.В.,
Зуденков
объективные
А.Е.,
2001).
методические
С
его
ограничения,
появилась возможность изучения видового и количественного состава
пристеночной
микрофлоры
в
различных
отделах
ЖКТ
человека,
определения принципов формирования микробного сообщества в норме и
патологии,
взаимодействия
микроорганизмов
между
собой
как
в
пристеночной области кишки, так и между пристеночной областью и
фекалиями.
Цель работы и задачи исследования
Цель работы: изучение количественного и качественного состава
микробного
сообщества
пристеночного
муцина
на разных
этажах
желудочно-кишечного тракта в норме и патологии.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1.
Разработать
модификацию
метода
выделения
микроорганизмов из пристеночного муцина кишки человека и оценить
его эффективность.
2.
Изучить
количественный
и
качественный
состав
микрофлоры пристеночного муцина кишки человека неизмененной и
пораженной
ткани
кишки
(опухоль,
дивертикулез,
полипоз,
воспаление).
3.
Изучить
количественный
микробного сообщества
пристеночного
и
качественный
муцина кишки
состав
человека
в
различных отделах Ж К Т и фекалиях.
4.
Определить
сообщества
зависимость
пристеночного
муцина
клинико-лабораторных показателей.
характеристик
кишки
человека
микробного
от
некоторых
Н а у ч н а я новизна
Впервые дана характеристика количественного и качественного
состава микробного сообщества пристеночного муцина в различных
отделах кишки человека.
Впервые определены различия в составе просветной микрофлоры и
микробиоценоза пристеночного муцина толстой кишки человека.
Впервые установлена зависимость количественного и видового
микробного
характера
состава
пристеночного
поражения
кишечной
муцина
стенки
кишки
от
степени
(дивертикулез,
и
полипоз,
опухоль, воспаление).
Впервые определена связь нормальной микрофлоры пристеночного
муцина толстой кишки с биохимическими показателями и клеточным
составом крови и мочи.
П р а к т и ч е с к а я значимость работы
Предложен метод выделения микроорганизмов из пристеночного
муцина, который может быть
применен
в условиях
клинической
микробиологической лаборатории.
Результаты
настоящего
исследования
используются
при
проведении практических занятий и лекций на кафедре микробиологии
с
вирусологией
внедрения
№
и
22
иммунологией
от
ММА
16.12.2003),
в
им
И.М.
Сеченова
(акт
научно-исследовательской
деятельности кафедры хирургии (акт внедрения
№21 от 15.12.2003),
терапии и профболезней М М А им И.М. Сеченова (акт внедрения №23
от 22.12.2003), кафедры инфекционных
Сеченова
(акт
внедрения №24
технологии лекарственных
от
средств
болезней М М А
22.12.2003), а также
ММА
им И.М.
им
И.М.
кафедры
Сеченова
(акт
внедрения № 1 от 15.01.2004).
Материалы работы были использованы при разработке патента № . R U
2220745 С2.
Положения, в ы н о с и м ы е на защиту
1.
Разработана
исследования
эффективно
модификация
пристеночного
выделять
метода
муцина
микробиологического
кишки,
микроорганизмы
из
которая
позволяет
пристеночного
муцина
кишки человека.
2. Микробный
зависит
от
состав
пристеночного
морфо-функционального
муцина
состояния
кишки
человека
кишечной
стенки:
микробный
состав
наличия патологии и характера поражения.
3.
Количественный
и
качественный
пристеночного муцина кишки человека в значительной степени зависит
от уровня анатомической локализации в биотопе Ж К Т .
4. Состав пристеночной микрофлоры толстой кишки человека зависит
от некоторых клинико-лабораторных показателей крови и мочи.
Апробация работы
Результаты исследования доложены на V I I I съезде Всероссийского
обшества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002
г.), на международной конференции «Фундаментальные и прикладные
проблемы биотехнологии», посвященной памяти академика Р А М Н
и
А М Т Н Р Ф И.Н. Блохиной (Москва, 2001 г. и 2003 г.), на клинической
конференции
молодых
ученых
(Москва,
2001
г.),
на
Российской
конференции молодых ученых с международным участием (Москва, 2001
г.), а также на X
российском национальном конгрессе «Человек и
лекарство» (Москва, 2003 г.).
Диссертационная
микробиологии
с
работа
апробирована
вирусологией
и
на
заседании
иммунологией
ММА
Сеченова 09.03.04 (протокол №. 2).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 14 научных работ.
кафедры
им
И.М.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста,
включает
7
рисунков,
38
таблиц.
отечественный и 151 зарубежный
Библиофафия
содержит
61
источник литературы. Диссертация
состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов
исследования,
результатов
обсуждения
результатов,
собственных
исследований
заключения,
выводов,
(3
главы),
практических
рекомендаций и списка литературы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В соответствии с поставленной целью и задачами было проведено
микробиологическое исследование биологического материала от 73
пациентов
в возрасте от 20 до 85 лет, проходивших лечение
хирургическом
отделении
ГКБ
№
71
и
Клинике
терапии
в
и
профболезней им Е . М . Тареева М М А им. И.М. Сеченова.
Микробиологическое исследование пристеночного муцина тонкой
кишки
проводили
двенадцатиперстной
на
25
биоптатах
кишки, полученных
слизистой
оболочки
при гастродуоденоскопии.
Изучение микробного состава пристеночного муцина толстой кишки
проводили
на
193
биоптатах
слизистой
оболочки
кишки
от
48
пациентов с неизмененной (44 биоптата) и пораженной кишечной
стенкой: воспалительные заболевания - 77 биоптатов, опухоль - 30
биоптатов, дивертикулез - 23 биоптата и полипоз - 19 биоптатов.
Биоптаты
забирали
из
восходящей
ободочной
(34
биоптата),
поперечно-ободочной (26 биоптатов), сигмовидной (101 биоптат) и
прямой
(32
биоптата)
кишки
при
проведении
эндоскопического
исследования или интраоперационно. Биоптаты забирали из участков
кишки полностью свободных от химуса.
Биоматериал помещали в стерильный физиологический раствор в
соотношении 1 мг ткани к 100 мкл раствора и выдерживали в нем в
течение двух часов до разжижения муцина. Готовили
десятикратные
серийные разведения до конечной концентрации
производили
Выделяли
посев
материала
на
различные
10"', из которых
питательные
среды.
бифидобактерии, лактобактерии, эшерихии, клостридии,
стафилококки
и
микроорганизмов
грибы
рода
Кандида.
Идентификацию
проводили по стандартной методике, количество
микроорганизмов выражали в Ig КОЕ/г ткани. Удельное содержание
микроорганизмов в пристеночном муцине вычисляли как среднюю
концентрацию микроорганизмов в случае их обнаружения.
Определение
микрофлоры
видового
проводили
и
по
количественного
стандартной
состава
методике.
кишечной
Количество
выделенных микроорганизмов выражали в Ig КОЕ/г фекалий.
Выживаемость микроорганизмов в различных растворах в опытах in
vitro
изучали
на
чистых
культурах
Escherichia
coli,
Lactobacillus,
полученных из эубиотиков: Лактобактерии и Бификол («Биомед», Пермь),
а также на 64 биоптатах слизистой толстой кишки, взятых от 30 пациентов.
Материал помещался на срок до 24 часов в различные стерильные
растворы: 0,9% раствор NaCl, официнальный раствором Хенкса и 1М
раствор мочевины. В течение всего эксперимента пробирки с культурами
находились при T=2l''C. Через 0,5; 1 ; 2; 4; 8 и 24 часа определяли
концентрацию микробов.
Статистическую
использованием
обработку
полученных
данных
проводили
с
вариационного, сравнительного, дисперсионного
и
корреляционного методов анализа. Компьютерная обработка данных
проведена с использованием пакетов программ «Excel» и « S T A T C A L K » .
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Анализ эффективности выделения микроорганизмов из
пристеночного муцина к и ш к и человека
Ранее проведенные исследования показали, что 1М раствор мочевины
вызывает разрушение муцинового слоя и позволяет довольно быстро и
эффективно
выделять
микроорганизмы,
находящиеся
в
его
толще
(Воробьев А.А. и соавт., 2001). Между тем, в результате проведенного
исследования
раствор
на модельных
мочевины
уже
микроорганизмах
через
30
минут
установлено,
вызывает
что
гибель
микроорганизмов, а через 2 часа происходит падение
Ш
части
численности
микробов на 1 порядок. Воздействие раствора мочевины в течение 4 часов
и
более
вызывало
снижение
количества
эшерихий
на
2-3
Ig,
а
лактобактерий - на 1-2 Ig. В 0,9% растворе NaCl и растворе Хенкса
микробы, напротив, выживали в течение 24 часов без снижения их
численности. Кроме того, в этих растворах начиная с 4 часов, наблюдалось
нарастание числа бактерий, которое через 24 часа увеличивалось на 2 Ig.
Исследование
выживаемости
бифидобактерий,
адгезированных
толстой
в
кишки,
различных
эшерихий,
в
лактобактерий
пристеночном
растворах
муцине
показало
и
биоптата
(рис.
1),
что
эффективность мочевины как вещества, растворяющего муцин, бьша
заметна лишь в первые 30 минут. Но уже через 2 часа отмечалось резкое
снижение числа жизнеспособных микробных клеток.
В то же время микроорганизмы, адгезированные в муциновом слое,
хорошо переносили 24 часовую инкубацию в 0,9% растворе NaCl и
официнальном растворе Хенкса (см. рис 1), где они активно размножались.
При этом количественное соотношение всех изучаемых представителей
микробиоценоза сохранялось.
Таким образом, полученные данные указывают
на
выраженный
бактериотоксический эффект 1М раствора мочевины и подтверждают
непригодность этого вещества для хранения биоптатов, взятых для
микробиологического исследования.
Полученные
микроорганизмов
данные
позволили
из пристеночного
предложить
способ
выделения
муцина с использованием
0,9%
раствора NaCl или раствора Хенкса. На основании полученных данных
были определены оптимальные сроки проведения микробиологического
исследования пристеночного муцина: 2-4 часа с момента забора материала.
10
Lactobacterium spp.
КОЕ/Г, Lg
12108
6420-
i III
4
часы
0,5
24
Bifidobacterium spp.
E. coli
Рис.
I
Динамика
пристеночном
изменения
муцине
толстой
концентрации
кишки
микроорганизмов
человека
при
в
длительном
культивировании в физиологическом растворе (I), растворе Хенкса (II) и в
1 М растворе мочевины (III).
и
в этот период завершается высвобождение микроорганизмов из муцина и
не отмечается существенного изменения их численности (см. рис 1).
Данная
методика
была
применена
для
дальнейшего
изучения
пристеночных микробных ассоциаций Ж К Т человека.
Пристеночная микрофлора желудочно-кишечного тракта у человека в
норме и патологии
Результаты исследования качественного и количественного состава
микробного пейзажа пристеночного муцина толстой кишки человека
приведены на рис. 2 и в табл. 1. Исходя из представленных данных, вся
совокупность исследуемых микроорганизмов по частоте их обнаружения
может быть подразделена на две группы: часто встречающиеся (50-100%)
и относительно редкие (0-40%). К первым относятся бифидобактерии,
лактобактерии, эшерихии, энтерококки, ко
вторым
- стафилококки,
клостридии и грибы рода Candida.
Исследование
показало
(см. рис. 2), что
на
морфологически
неизмененной слизистой оболочке кишки бифидобактерии, энтерококки и
клостридии, встречаются на 27-36%, а лактобактерии - в 1,6 раза (р<0,05)
реже, чем на пораженной кишечной стенке. Стафилококки и грибы рода
Candida
вообще
не обнаруживаются
на
морфологически
интактных
участках, а с пораженных высеваются с частотой 12,9 -14,3%.
Удельное содержание часто встречающихся микробов (см. табл. 1)
варьирует от 5,6 до 6,9 Ig КОЕ/г ткани. При этом наибольшее значение
показателя характерно для бифидобактерии. Удельное содержание редко
встречающихся микробов заметно ниже, чем часто встречающихся и
определяется в пределах 3,7-4,2 Ig КОЕ/г ткани.
На патологически измененной слизистой, как правило, меньше
удельное содержание бифидобактерии и лактобактерии (р<0,05) и больше
стафилококков и кандид (р<0,001), чем в интактных участках (см. табл. 1).
12
Биф
Лаю-
Эшер
Энтер
Стаф
Кпостр
Канд
Рис. 2. Частота выделения микроорганизмов из пристеночного муцина
пораженной и неизмененной ткани. Серый столбик - неизмененная ткань,
белый - опухоль, штрихованный - дивертикулез, черный - воспаление.
Здесь и далее: *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001
Дифференцированный анализ частоты выделения микроорганизмов
при различных изменениях слизистой кишки обнаружил некоторые
особенности (см. рис. 2). Например, в муцине участка слизистой,
пораженного опухолью, частота высевания бифидобактерии на 40-66 %
ниже, чем при других патологических
состояниях. На слизистой
дивертикула и полипа заметно чаше встречаются бифидобактерии и
стафилококки. В пристеночном муцине воспаленной слизистой довольно
часто
содержатся
клостридии
(р<0,05)
и
кандиды,
но
реже -
бифидобактерии.
Исследование удельного содержания изученных микроорганизмов
(см. табл.
1) показал, что муцин слизистой кишечной стенки с
дивертикулёзом
и полипозом отличается
более низким удельным
содержанием бифидобактерии и лактобактерий, а с воспалением - более
высокой удельной концентрацией энтерококков и кандид.
«Удельное содержание» микроорганизмов при различных состояниях стенки толстой кишки человека
Таблица 1.
(IgKOE/r ткани)
Состояние слизистой
оболочки
Bifidobacterium
spp
M±m
к
Lactobactenum
spp.
M±m
к
E.coli
M±m
Enleroccocus
spp.
к
M±m
к
Staphiloccous Clostiidiumspp. Candida spp
spp.
M±m
к
-
M±ni
к
M±m
Всею
6,89±0,35 0,92 5.55±0,29 0,90 6,61 ±0,24 0,99
5,65±0,26 1,13 3,74+0,24
Неи)мененная
7,51 ±0,73 1,00 6,1910,59 1.00 6,69±0,36
1,00
5,01 ±0,72 1,00
Патологически
измененная (всего)
6,81+0.37 0,91* 5,54±0,30 0.89* 6,60±0.25
0,99
5,64±0,27 1,13 3,77±0,25
4,15±0.25 0,98 3,90±0,39
Дивертнкулез и
полипоз
6,59±0,37 0,88* 5,22+0,58 0,84* 6,32±0,34
0,94
5,20±0,62 1,04 3,27±0,36
4,21 ±0,72 0.99 3,30±О,30
Опухоль
7,38±0,67 0,98 5,95+0,56 0.96 6,68±0,60
1,00
5,31+0,51 1,06 3,96+0,36
3,96±0,54 0,93 3,50±О,20
Восма1ение
6.89+0,49 0.92 5,57+0,36 0.90 6.80±0,44
1.02
6,05±0.38 1,21* 3,65±0.33
Примечания
к - но сравнению с неизмененной слизистой оболочкой кишки.
0,00
4,15+0,24 0,98 3,90±0,39
4,25±0.33 1.00
_
к
0,00
4.18±0,35 0,98 4,06±0,49
_
14
Таким образом, пристеночный муцин слизистой толстой кишки
густо заселен различными микроорганизмами. При этом высеваемость и
концентрация микробов варьирует в широких пределах, что особенно
заметно
при
слизистой
сопоставлении
с
патологически
морфологически
измененными.
интактных
участков
Представленные
данные
свидетельствуют о том, что заселение пристеночного муцина кишечника
человека зависит от морфо-функционального состояния кишечной стенки.
Примечательно, что при патологическом процессе не происходит
конкордатного
изменения
содержания
всех
микроорганизмов,
населяющих пристеночный муцин, а затрагиваются лишь отдельные
компоненты микробного сообщества - в основном редко встречающиеся
микроорганизмы (стафилококки, кандиды и клостридии), а так же энтерококки.
Полученные
данные
показывают,
что
при
различных
заболеваниях кишечной стенки изменения в микрофлоре происходят не
только
в
составе
просветно-фекальных
микроорганизмов,
но
и
пристеночных. Причем эти изменения во многом зависят от характера
поражения. Этот факт может быть использован в диагностических целях. В
частности, обнаружение в пристеночном биотопе стафилококков и/или
кандид может явиться настораживающим фактом определенного тканевого
неблагополучия: с вероятностью ошибки менее 1 % выявление указанных
микробов в пристеночном муцине ассоциируется с одним из видов
изученных патологических состояний.
Микробное сообщество пристеночного муцина различных отделов
желудочно-кишечного тракга человека
При сравнительном анализе микробного пейзажа слизистой толстой
и тонкой кишки выявлено (рис. 3), что в тонкой кишке изучаемые микробы
обнаруживаются
гораздо
реже,
чем
в
толстой.
В
частности,
бифидобактерии из пристеночного муцина тонкой кишки выделяются реже
в 1,45 раза (р<0,05), лактобациллы - в 2,89 (р<0,001), клостридии - в 4,50
раз (р<0,01), а энтерококки - на 37 % (р>0,05). Е. coli, стафилококки и
кандиды из тонкой кишки не высевались вообще.
Удельное содержание микроорганизмов (табл. 2) в пристеночной
15
области тонкой кишки составляет 4-4,5 Ig КОЕ/г ткани, и было в среднем
на 1,4-3,2 Ig меньше по сравнению с толстой кишкой. В частности,
удельное содержание бифидобактерий в пристеночном муцине тонкой
кишки ниже на 3,17 Ig (р<0,001), лактобактерий - на 1,38 Ig (р<0,01),
энтерококков - на 1,25 Ig (р<0,01). Удельное содержание клостридий в
тонкой кишке значимо не отличается от толстой.
Таким образом, биотоп пристеночного муцина тонкой кишки по
своему
количественному
и
качественному
микробному
составу
существенно отличается от биотопа толстой кишки.
При сопоставлении микробного состава пристеночного муцина
толстой кишки и фекалий обнаружено (см. рис. 3), что в пристеночном
муцине чаще присутствуют бифидобактерий (на 33%, р<0,001). В то же
время из фекалий несколько чаще высеваются лактобактерий (р<0,05),
энтерококки (р<0,001) и кандиды (в 3,64 раза, р<0,001). Стафилококки и
клостридий из обоих биотопов высеваются с одинаковой частотой.
Биф
Пакт
Эшер
Энтер
Стаф
Клостр
Канд
Рис. 3. Частота выделения микроорганизмов из пристеночного муцина
различных биотопов ЖКТ человека и фекалий.
Серый столбик - тонкая кишка, белый - толстая кишка, черный - фекалии.
В
связи с
различными
системами измерения концентраций
микроорганизмов в пристеночном муцине и в фекалиях непосредственное
сравнение этих
биотопов
по данному
параметру
не проводили.
16
Примененный в данном случае корреляционный анализ не обнаружил
значимых связей между количеством микроорганизмов в фекалиях и
толстой кишке.
Следовательно,
несмотря
на
сходство
видового
состава
микроорганизмов в фекалиях и пристеночном муцине, имеется целый ряд
существенных отличий по частоте их встречаемости.
Биф
Лакт
Эшер
Энтер
Стаф
Клостр
Канд
Рис. 4. Частота выделения микроорганизмов из пристеночного муцина
различных отделов толстой кишки человека.
Серый
столбик-
восходящая
ободочная
кишка,
штрихованный
-
поперечно-ободочная кишка, черный - сигмовидная кишка, белый прямая кишка.
Сравнительный анализ частоты встречаемости
микроорганизмов
(рис. 4) в пристеночном муцине различных отделов толстой кишки
позволил выявить существенные различия между отдельными этажами
этого биотопа. Так, из восходящей ободочной кишки частота выделения
клостридий в 8,7-12 раз ниже (р<0,01), чем из других участков толстой
кишки. Энтерококки и кандиды реже всего встречаются в поперечноободочной кишке (соответственно, в 1,6-2,1 и 1,5-3,7 раза, р<0,05). Самой
скудной по обсемененности оказалась слизистая прямой кишки. Из этого
отдела бифидобактерии высеваются в 2 раза реже (р<0,01), а стафилококки
не высевались вообще.
Таблица 2.
Удельное содержание микроорганизмов в пристеночном муцине Ж К Т человека (Ig, КОЕУг)
Отдел Ж К Т
Bifidobacterium
spp.
M±m
Тонкая
кишка
Толстая
к
4,01±0,45 0,53*** 4,16Ю,42 0,71**
кишка всего 7,18±0,26
в том числе:
Восходящая
ободочная
7,5910,65
Поперечноободочная
7,2110,58
Сигмовид­
ная кишка
7,2110,35
Прямая
6,2610,88
Фекалии
к
Lactobacterium
spp.
Mlm
8,1510,44
E.coli
Mlm
0,00
Enteroccocus spp. Staphylococcus spp Clostndium spp.
к
Mlm
к
0,00*** 4,4010,20 0,73**
Mlm
0,00
к
Mlm
0,00*** 4,9011,03
Candida spp
к
Mlm
к
1,63
0,00
0,00***
0,95
5,7310,23
0,98
6,7210,20
0,94
5,6510,26
0,94
3,7410,24
0,95
4,1510,24
1,38
3,9010,39
1,18
1,00
5,83Ю,47
1,00
7,1210,58
1,00
6,0210,56
1,00
3,9510,37
1,00
3,0010,54
1,00 3,3010,30
1,00
0,95
5,54Ю,71
0,95
6,7510,44
0,95
5,65Ю,65
0,94
3,8011,57
0,96
4,48Ю,65
1,49 4,9010,39
1,49
0,95
5,4310,34
0,93
6,9210,29
0,97
5,6610,49
0,94
3,5910.24
0,91
4,1710,31 1,39 4,0610,54
1,23
0,82** 6,0110,72
1,03
5,62Ю,4б 0,79* 5,37Ю,72
0,89
0,00
0,00
4,41Ю,38 1,47** 3,3010,33
1,00
U7
7,79Ю,19
1,17
5^7Ю,77
1,33
5,3210,40 1,77 4,0810,37
1,24
1,07
7,3810,27
1,09
7,0310,34
Примечания
к - по сравнению с микробиоценозом восходящей ободочной кишки
В связи различными системами измерения концентраций микроорганизмов в пристеночном муцине и фекалиях сравнение этих биотопов не
проводили
18
Удельное содержание
микроорганизмов
в пристеночном
муцине
различных отделов толстой кишки существенно не отличалось (см. табл.
2). Тем не менее, в восходящей и поперечно-ободочной кишке по
сравнению с другими отделами толстой кишки на 1-2 Ig КОЕ/г ткани ниже
удельное содержание
клостридий и кандид, а в
прямой
кишке
-
бифидобактерий и эшерихий.
Обращает на себя внимание тот факт, что участок толстой кишки от
восходящей
ободочной до сигмовидной
по своим
качественным
и
количественным характеристикам имеет близкий микробный состав. В то
же время прямая кишка существенно скуднее других отделов толстого
кишечника.
Приведенные факты убедительно свидетельствуют о значимости
анатомо-морфологического
фактора в формировании
микробиоценоза
пристеночного муцина кишечной стенки.
При сопоставлении данных микробиологического исследования
пристеночного муцина толстой кишки и лабораторных показателей
крови и мочи установлены определенные корреляционные связи. Так,
нарастание
количества
моноцитов
коррелировало
с
увеличением
концентрации энтерококков, а базофилов - со снижением клостридий.
Повышение
количества
увеличением
эритроцитов
концентрации
нейтрофилов
отрицательно
энтерококков.
Повышение
в
энтерококков
крови
и
кандид.
коррелировало
тимоловой
сопровождалось
пробы
с
Количество
концентрацией
было
связано
с
увлечением количества эшерихий, бифидобактерий и стафилококков.
Концентрация
щелочной
фосфатазы
находилась
в
обратной
зависимости от содержания энтерококков. Появление оксалатов в моче
коррелировало с повышением концентрации лактобактерий, кроме
того, была отмечена отрицательная связь между количеством оксалатов
и концентрацией бифидобактерий в пристеночном муцине. Появление
цилиндров
в
моче
бифидобактерий.
отрицательно
коррелировало
с
концентрацией
19
Таким образом, установлено, что имеется существенная зависимость
видового и количественного состава пристеночной микрофлоры толстой
кишки от физиологических
процессов, протекающих
в организме
человека.
ВЫВОДЫ
1. Разработана модификация метода исследования микробного
состава пристеночного муцина кишки человека, которая позволяег
выделять и сохранять микробные компоненты муцина в течение
четырех часов.
2.
Видовой
пристеночного
и
количественный
муцина
кишки
состав
человека
микробиоценоза
зависит
от
морфо-
функционального состояния кишечной стенки: при патологических
состояниях
(опухоль, дивертикулез,
полипоз
и
воспаление)
по
сравнению с интактнои слизистой отмечается повышение частоты
выделения и концентрации стафилококков, клостридий и кандид.
3. При воспалительных заболеваниях толстой кишки человека, по
сравнению с опухолью, дивертикулезом, полипозом наблюдаются
наиболее выраженные изменения видового и количественного состава
микроорганизмов
пристеночного
муцина, которые выражаются в
увеличении частоты выделения и концентрации в пристеночном
муцине стафилококков, клостридий и кандид.
4. Микробный состав пристеночного муцина кишки человека в
значительной степени зависит от анатомической локализации биотопа в
ЖКТ. Наибольшая концентрация микроорганизмов регистрируется на
стенке участка от восходящей ободочной до сигмовидной кишки.
Пристеночный муцин тонкой и прямой кишки отличается скудностью
видового и количественного состава микроорганизмов.
5. Биотоп пристеночного
высокой
вариабельностью
муцина кишки человека обладает
микробного
состава
и
значительно
отличается от фекального биотопа. В пристеночном биотопе по
20
сравнению с фекалиями чаще встречаются бифидобактерии и реже
лактобактерии,
энтерококки
и
кандиды.
Корреляция
между
концентрацией микроорганизмов в фекалиях и пристеночном муцине
кишки отсутствует.
6.
Состав
коррелирует
пристеночной
с
количеством
микрофлоры
моноцитов
толстой
и
кищки
базофилов,
человека
показателем
тимоловой пробы, концентрацией щелочной фосфатазы и глюкозы в
крови, а также с наличием лейкоцитов, оксалатов и цилиндров в моче.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для комплексной оценки дисбиотических изменений в Ж К Т человека
целесообразно
на ряду
с
просветной
исследовать
пристеночную
микрофлору.
2.
Для микробиологического исследования пристеночной микрофлоры
кишки
человека
в
условиях
клинической
микробиологической
лаборатории может быть рекомендована представленная в диссертации
модификация метода выделения микроорганизмов из пристеночного
муцина кишки.
3. При
анализе
результатов
микробиологического
исследования
пристеночной микрофлоры рекомендуется учитывать анатомическое
расположение исследуемого биотопа кишки.
С П И С О К Н А У Ч Н Ы Х РАБОТ, О П У Б Л И К О В А Н Н Ы Х П О Т Е М Е
ДИССЕРТАЦИИ
1. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Буданова Е.В., Зуденков А.Е.,
Богданова Е.А., Корнеев М.Л. Изучение состава иммунокомпетентных
клеток пристеночного муцина толстой кишки. Современные проблемы
аллергологии, иммунологии и иммунофармокологии, сборник трудов,
Москва, 2001 г., том 2, стр.148.
2. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Липницкий Е.М., Кривошеее
О.Г., Богданова Е.А., Корнеев М.Л. К вопросу о методике изучения
21
микробного состава пристеночной микрофлоры кишки. Фундаментальные
и прикладные проблемы биотехнологии, тезисы докладов международной
конференции, посвященной памяти академика Р А М Н и А М Т Н Р Ф И.Н.
Блохиной, Москва, 2001 г., стр. 105-106.
3. Богданова Е.А., Корнеев М.Л, Кондакова Н.Е., Гуляев С В . ,
Кондратьева Т.В. Изучение выживаемости пристеночной микрофлоры
толстой кишки в простых транспортных средах. Фундаментальные науки и
прогресс
клинической
медицины,
материалы
второй
Российской
конференции молодых ученых с международным участием, Москва, 2001
г., том I, стр. 329-330.
4.
Богданова
Е.А.,
Корнеев
М.Л.
Случай
обнаружения
в
пристеночном муцине тонкого кишечника у пациентов с геморрагическим
васкулитом иерсинеподобных бактерий, Актуальные вопросы клинической
медицины,
материалы
клинической
конференции
молодых
ученых,
Москва, 2001 г., стр. 110-112.
5. А.А. Воробьев, Ю.В. Несвижский, Е.А. Богданова, М.Л. Корнеев
Метод анализа пристеночной микрофлоры.
Всероссийского
общества
эпидемиологов,
Материалы V I I I съезда
микробиологов
и
паразитологов, Москва, 2002 г., том 1, стр. 152.
6. А.А.
Алленов, Е.А.
Воробьев, Ю.В.
Несвижский, Е.М.
Липницкий, М.Н.
Богданова, М.Л. Корнеев, Исследование пристеночной
микрофлоры кишечника человека, Ж М Э И , 2003 г., № 1, стр. 60-63.
7. Матюшина Г.П., Тимофеева М.Ю. Несвижский Ю.В., Богданова
Е.А.,
Корнеев М.Л., Вениаминова Н.С. Влияние различных физико-
химических и временного факторов на антибактериальную активность
фосфата
полигексаметиленгуанидина,
X
российский
национальный
конфесс «Человек и лекарство» тезисы докладов, Москва, 2003 г., стр. 633.
8. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., Корнеев М.Л.
Сравнительное
исследование
колонизирующей
способности
микроорганизмов аутофлоры и штаммов пробиотиков в опытах in vitro.
Фундаментальные и прикладные проблемы биотехнологии № О, 2003 г.,
стр.52.
22
9. А.А.
Воробьев, Ю.В.
Несвижский, Е.М.
Липницкий,
М.Н.
Алленов, Е.А. Богданова, М.Л. Корнеев, Н.Е. Кондакова. Исследование
пристеночной микрофлоры толстой кишки при опухолях. Инфекционные и
паразитарные болезни в современном обществе. Клинико-лабораторное
обеспечение инфектологии, Москва, 2003 г., стр. 47-48.
10. Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., Корнеев М. Л., Майорова Е.В.
Исследование фекально-просветной микрофлоры при экспериментальном
моделировании нарушения эвакуаторной функции желудочно-кишечного
тракта. Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе.
Клинико-лабораторное обеспечение инфектологии, Москва, 2003г., стр.3132.
11. Липницкий Е.М., Несвижский Ю.В. Кондакова Н.Е., Богданова
Е.А., Нарушение кишечного микробиоценеоза у больных старше 60 лет с
невоспалительными
хирургическими
заболеваниями
толстой
кишки,
Клиническая геронтология, 2003 г., том 9, № 9, стр. 102.
12. Арзамасцев А.П., Краснюк И.И., Матюшина Г.П., Несвижский
Ю.В., Тимофеева М.Ю., Богданова Е.А., Корнеев М.Л., Патент №
RU
2220745 С2.
13. А.А. Воробьев, Ю.В.
Алленов, Е.А.
микрофлоры
Несвижский, Е.М. Липницкий, М.Н.
Богданова, М.Л. Корнеев, Исследование
желудочно-кишечного
тракта
у
человека
пристеночной
в
норме
и
патологии. Вестник Р А М Н , 2004 г., № 2, стр. 43-47.
14. А.А.
Воробьев, Ю.В.
Несвижский, Е.М.
Липницкий, М.Н.
Алленов, О.Г. Кривошеее, Е.А. Богданова, М.Л. Корнеев, Микробное
сообщество
пристеночного
муцина
различных
отделов
желудочно-
кишечного тракта человека. Вестник Р А М Н , 2004 г., № 4, стр. 23-28.
М М А им И М Сеченова
Подписано в печать 12 04 2004 Формат 60х90'/|б
Тираж 100 экз
РНБ Русский фонд
2006-4
23391
2 3 АПР гш
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
738 Кб
Теги
bd000102973
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа