close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000103138

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
ВАСИЛЕНКО ОКСАНА АНАТОЛЬЕВНА
ХАРАКТЕР И МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЙ
Н Е С П Е Ц И Ф И Ч Е С К О Й РЕЗИСТЕНТНОСТИ О Р Г А Н И З М А
И С П Е Ц И Ф И Ч Е С К О Й ИММУННОЙ ЗАЩИТЫ
ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ АРСЕНИТАМИ
14.00.16 - Патологическая физиология
14.00.36 - Аллергология и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
САРАТОВ-2004
Работа выполнена в Саратовском государственном медицинском
университете и в Саратовском военном институте радиационной, химической и
биологической защиты.
Н а у ч н ы е руководители:
доктор медицинских наук,
профессор Понзтсалина Елена Вячеславовна
кандидат медицинских наук,
доцент Германчук Валерий Геннадьевич
О ф и ц и а л ь н ы е оппоненты:
доктор медицинских наук,
профессор Брилль Григорий Ефимович
доктор медицинских наук,
профессор Девдариани Зураб Леванович
В е д у щ а я организация:
университет
Волгоградский государственный медицинский
Защита состоится «-^» июня
2004 г. в «
»
часов на заседании
диссертационного совета Д. 208.094.03 в Саратовском государственном
медицинском университете по адресу: г. Саратов, 410012, Б. Казачья, 112
С диссертацией можно ознакомиться
государственного медицинского университета.
Автореферат разослан «2i»
^^
в
библиотеке
Саратовского
2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
кандидат медицинских наук, доцент
Бабиченко Н.Е.
ясх^^
ХЬВХЬ
n^^o^i
3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Изучение действия ксенобиотиков на иммунный
гомеостаз и возможностей коррекции его нарушений при помощи
иммуномодуляторов является одной из наиболее актуальных проблем
патофизиологии, иммунологии и токсикологии. Это определяется наличием и
использованием в Вооруженных Силах Российской Федерации токсичных
химических веществ (военный аспект проблемы), загрязнением окружающей
среды экотоксикантами (экологический аспект проблемы), увеличением
химически опасных аварий (техногенный аспект), а также ростом отравлений
токсичными
химическими
веществами,
формирующих
вторичные
постинтоксикационные
иммунодефицитные
состояния
(иммунотоксикологический аспект проблемы), и, наконец, и это один из основных
аспектов проблемы, необходимостью уничтожения десятков тонн боевых
отравляющих веществ в сооответствии с Конвенцией о запрещении
разработки, производства, накопления и применения химического оружия и
его уничтожении [Александров В.Н., Емельянов В.И., 1990; Бадюгин И.С. и
соавт., 1991; Саватеев Н.В., Куценко С.А., 1982, 1993; Конвенция..., 1993;
Хаитов P.M. и соавт., 1995; Калинина Н.И., 2000а; Забродский П.Ф., 1998,
2002; Vos J . G. et a l , 1983; Loose L.D., 1985; Miller K. ,1985; Luster M.J. et al.,
1987; Sullivan J.B., 1989].
При этом первостепенную важность приобретает вопрос об
иммунотоксичности арсенитов - люизита и продуктов его перюработки. Это
связано с тем, что на арсеналах Министерства обороны Российской Федерации
находятся на хранении большие количества мышьяксодержащих веществ:
люизита, адамсита, дифенилхлорарсина и их смесей. Запасы люизита на момент
начала его уничтожения согласно Конвенции составляли порядка 7,5 тысяч
тонн в местах его хранения в Саратовской и Кировской областях и Удмуртии.
На территории Саратовской области находится могильник, содержащий около
3 тысяч тонн адамсита и дифенилхлорарсина. В процессе уничтожения люизита
и других мышьяксодержащих отравляющих веществ будет образовываться
значительное количество реакционных масс, в состав которых будет входить
арсенит натрия. Продукты утилизации боевых отравляющих веществ
планируется хранить на территории объектов по уничтожению химического
оружия [Алимов Н.И. и соавт., 2000а; 20006; 2000в; Калинина Н.И., 20006;
Щербаков А.А. и соавт., 2002].
Современные проекты специализированных объектов по уничтожению
химического оружия обеспечивают
безопасные условия хранения химического
РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ
ьиг;лнотскА
/■ СПепрбур!
оружия и уничтожения отравляющих веществ, в частности люизита, в штатных
режимах их функционирования. Однако при определенных обстоятельствах
этот режим
их работы
может быть
нарушен вследствие
возникновения
природных и стихийных бедствий, техногенных катастроф, а также
при
террористических актах на объектах по хранению и уничтожению химического
оружия.
Данные
ситуации
приведут
к
загрязнению
окружающей
среды
мышьяксодержащими соединениями, массовому поражению обслуживающего
персонала
объектов
по уничтожению
химического
оружия
и
населения
близлежащих населенных пунктов [Алимов Н.И. и соавт., 2000а, 2000в].
Влияние боевых отравляющих веществ кожно-нарывного действия, в
частности, люизита и продуктов его утилизации на иммунный гомеостаз
изучено недостаточно [Горшенин А . В . и соавт., 1998; Рембовский В.Р. и соавт.,
2000]. Мышьяксодержаппче соединения - люизит и вещества, образующиеся в
ходе
технологических
процессов
его
переработки
(арсенит
треххлористый мышьяк), могут снижать неспецифическую
натрия,
резистентность
организма ( Н Р О ) и показатели системы иммунитета у персонала объектов по
хранению
и
уничтожению
химического
оружия,
а также
у
населения,
проживающего вблизи данных объектов. Причем, иммунотоксический эффект
мышьяксодержащие соединения могут оказывать при воздействии достаточно
низких
доз
ввиду
высокой
чувствительности
иммунной
системы
к
ксенобиотикам [Забродский П.Ф., 2002; Descotes G., 1986, 1987; Luster М . J . et
al., 1987].
В
настоящее
время
имеются
многочисленные
доказательства,
полученные в экспериментах in vivo и in vitro, а также в процессе мониторинга
за
состоянием
здоровья, неспецифической
резистентностью
организма
и
системой иммунитета лиц, подвергающихся острому и хроническому действию
ксенобиотиков, что нарушение иммунного гомеостаза (повреждение популяций
и
субпопуляций
иммуноцитов)
токсичными
химическими
веществами
приводит к инфекционным осложнениям и заболеваниям [Забродский П.Ф.,
1993, 1998, 2002; Descotes G., 1986, 1987; Luster М . J . et al., 1987; Sullivan J . В.,
1989]. Можно полагать, что такой же эффект вызывают люизит и продукты,
получаемые при его утилизации.
Данные литературы о влиянии арсенита натрия - одного из наиболее
токсичных
продуктов,
неспецифическую
практически
образующегося
резистентность
отсутствуют
в
ходе
организма
утилизации
и
систему
люизита,
на
иммунитета
[П.Ф. Забродский, 2002; Давыдова В.И.,
1989;
5
DescotesG., 1986].
He вызывает сомнения тот факт, что нарушения иммунного гомеостаза
при остром отравлении мьппьяксодержащими соединениями, в частности
арсенитами, нуждаются в дальнейшем изучении.
Вопрос
иммунитета
о
под
фармакологической
коррекции
влиянием
и
люизита
дисфункций
продуктов
его
системы
деструкции
в
постинтоксикационном периоде не изучен [Забродский П.Ф., 1998, 2002]. На
сегодня необходим выбор наиболее приемлемых иммуностимуляторов из
большого арсенала препаратов этой группы, имеющихся в настоящее время.
Это позволит проводить научно обоснованную профилактику и лечение
возникающих при интоксикациях мьппьяксодержащими соединениями, как и
при действии многочисленных ксенобиотиков, различных инфекционньге,
аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний [Шубик В.М.,
1976; Хаитов Р. М. и соавт., 1995; Забродский П. Ф., 1986; 1998; Georgiev V. S.,
Yamaguuchi Н., 1993].
Таким образом, учитывая необходимость уничтожения люизита на
объектах по уничтожению боевых отравляющих веществ, существующую
возможность поражения работающих на них лиц и населения близлежащих
населенных пунктов в случае аварий, недостаточно изученные особенности
токсического действия арсенитов на систему иммунитета, следует заключить,
что проблема исследования нарушений неспецифической резистентности и
иммунного статуса под влиянием люизита и основного продукта его
утилизации - арсенита натрия с целью обоснования способов их коррекции
актуальна и важна как в теоретическом, так и в практическом отношении.
Цель исследования: изучить характер и механизмы нарушений
неспецифической резистентности организма и специфической иммунной
защиты в условиях острой интоксикации арсенитами и разработать
патогенетически обоснованные принципы медикаментозной коррекции сдвигов
иммунного гомеостаза.
Задачи исследования:
1.
Провести
комплексную
оценку
состояния
неспецифической
резистентности организма и специфических иммунньк механизмов защиты у
крыс при экспериментальной инфекции после острой интоксикации арсенитами
6
(люизитом
и
арсенитом
натрия)
по
величине
летальности
среднелетальной дозы Р. vulgaris и среднеэффективному
животных,
времени жизни
животных.
2. Установить закономерности влияния острого отравления люизитом и
арсенитом натрия на состояние неспецифической резистентности организма в
условиях
экспериментальной
инфекции
по
величине
летальности
крыс,
среднелетальной дозы Е. соИ и среднеэффективному времени жизни животных.
3.
Изучить
неспецифическую
активности
характер
и
механизмы
резистенттюсть
сыворотки
крови,
организма
воздействия
арсенитов
(показатели
бактерицидной
сывороточной
актийности
лизоцима
на
и
фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов).
4. Выявить характер нарушений специфических иммунных механизмов
загциты в эксперименте на животных на фоне воздействия возрастающих доз
мышьяксодержащих соединений по ряду интегральных показателей оценки
функционального состояния центральных и периферических органов иммунной
системы.
5.
Изучить
особенности
влияния
возрастающих
доз
арсенитов
на
Т-зависимый гуморальный иммунный ответ в различные фазы антителогенеза
(содержание антителообразующих клеток в селезенке ) и на кооперацию Т- и
В-лимфоцитов.
6. Оценить состояние Т-независимого гуморального иммунного ответа в
различные
фазы
антителообразования
по
показателям
содержания
антителообразующих клеток в селезенке в условиях острой интоксикации
арсенитами.
7. Выявить характер нарушений клеточного звена иммунного ответа при
острой интоксикации, моделируемой возрастающими дозами арсенитов, по
комплексу
показателей
(реакции
торможения
миграции
лейкоцитов,
формированию гиперчувствительности замедленного типа, антителозависимой
клеточной цитотоксичности, активности естественных клеток-киллеров).
8. Установить патогенетическую роль ацетилхолинэстеразной активности
Т-лимфоцитов,
содержания
эстеразопозитивных
перекисного окисления липидов
клеток
в
селезенке
и
в нарушениях специфических иммунных
механизмов защиты под влиянием арсенитов.
9. Разработать патогенетически обоснованную эффективную коррекцию
расстройств иммунного гомеостаза при остром отравлении арсенитами с
использованием антидота арсенитов и иммуномодуляторов.
7
Н а у ч н а я новизна работы заключается в том, что в ней впервые с
позиций реализации Программы по уничтожению химического оружия в
результате проведенного эксперимента на животных выявлено, что при остром
отравлении
арсенитами
- люизитом
и
арсенитом натрия
- нарушаются
иеспецифическая резистентность организма и показатели иммунного статуса.
Нами экспериментально показано, что острая интоксикация арсенитами
вызывает
дозозависимое
увеличение
летальности
животных
от
экспериментального перитонита, а также уменьшение среднелетальной дозы
микробных тел Е. соИ (без предварительной иммунизации) и P.vulgaris (после
предварительной
иммунизации),
животных,
свидетельствует
что
среднеэффективного
о
снижении
времени
жизни
неспецифической
и
иммунологической резистентности организма. Под влиянием арсенитов в дозах
0,2; 0,5 и
активности
1,0 ЛДзо происходит дозозависимое снижение
сыворотки
крови,
сывороточного
бактерицидной
содержания
лизоцима,
фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.
Впервые установлено, что под влиянием острой интоксикации люизитом и
арсенитом натрия происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в
тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих
показателей к 8 суткам. После острого действия арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0
ЛДзо через 2 сут происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов и в
других органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое действие
арсенитов
через
8 сут
приводит
к дозозависимому
уменьшению
числа
колиниеобразующих единиц в селезенке.
Нами установлено, что после острой интоксикации арсенитами происходит
дозозависимое более выраженное снижение Т-зависимого антителообразования
(по сравнению с Т-независимым) преимущественно в
продуктивный период
антителопродукции через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует о
снижении функции Т Ы - и ТЬ2-лимфоцитов и В-клеток (синтеза I g M и IgG).
Под влиянием люизита и арсенита натрия in vitro существенно нарушается
кооперация Т- и В-лимфоцитов. Арсениты in vitro в прямой зависимости от
концентрации ( 1 0 ' , Ю " и 10^ М ) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая
преимущественно Т-клетки.
Экспериментально зарегистрировано, что острое отравление арсенитами
приводит к дозозависимому снижению функции Т-клеток и
естественных клеток-киллеров до 9 сут; реакции
активности
гиперчувствительности
замедленного типа, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ
и функцию ТЫ-лимфоцитов; антителозависимой клеточной цитотоксичности.
8
Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10*, 10' и 10*М)
уменьшают активность естественных клеток-киллеров. При этом эффект
люизита статистически достоверно превьппает действие арсенита натрия
(р<0,05).
Нами экспериментально показано, что механизмами иммунотоксичности
арсенитов являются снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов
тимуса и селезенки, а-нафтил-А8-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтилбутиратэстеразопозитивных спленоцитов, а также инициация перекисного
окисления липидов, что доказано высокими коэффициентами корреляции
между показателями перекисного окисления липидов и основными
параметрами системы иммунитета.
В экспериментах определено, что при остром отравлении арсенитами люизитом и арсенитом натрия (1,0 ЛД50) - их антидот унитиол и
иммуностимулятор имунофан при изолированном применении повышают
основные показатели антиинфекционной неспецифической резистентности
организма, гуморального и клеточного звена иммунитета. Комбинированное
использование унитиола и имунофана полностью восстанавливает основные
показатели неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена
иммунитета, антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность
естественных клеток-киллеров.
Практическая значимость работы состоит в том, что нами доказано: в
результате
острой
интоксикации
арсенитами
развивается
постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, проявляющееся в
дозозависимом снижении показателей неспехщфической резистентности
организма, специфических иммунологических механизмов защиты, параметров
системы гуморального и клеточного иммунитета. Возникающий под влиянием
арсенитов иммунодефицит требует применения средств коррекции нарушений
неспецифической резистентности организма и иммунного гомеостаза. После
острого отравления арсенитами для восстановления неспецифической
резистентности организма, основных показателей гуморального и клеточного
иммунного ответа целесообразно применять унитиол в комбинации с
иммуностимулятором имунофаном.
Положения, выносимые на защиту
1. Острая интоксикация арсенитами - люизитом и арсенитом натрия - в
условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5; 1,0 ЛД50 вызывает прямо
связанную с дозой супрессию показателей неспецифической резистентности
организма, специфических иммунологических механизмов защиты, основных
9
гуморальных и клеточных иммунных реакций.
2. При остром отравлении люизитом и арсенитом натрия происходит
дозозависимая
супрессия
антителообразования
преимущественно
к
Т-зависимому антигену, которая более выражена в продуктивной фазе
антителогенеза. Арсениты вызывают редукцию синтеза IgG.
3. Механизмы снижения специфической иммунной защиты под влиянием
арсенитов обусловлены снижением содержания лимфоцитов в органах системы
иммунитета, нарушением кооперации Т- и В-лимфоцитов, приводящим к
редукции антителообразования вследствие преимущественного поражения
Т-лимфоцитов; ингибированием арсенитами ацетилхолинэстеразы Т-клеток
тимуса и селезенки, а также а-нафтил-А8-ацетатэстеразы и а-нафтилбутиратэстеразы
спленоцитов,
инициацией
мышьяксодержащими
соединениями перекисного окисления липидов.
4. Коррекция нарушений неспецифической резистентности организма и
специфической иммунной защиты после острой интоксикации арсенитами
достигается применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола
и
иммуностимулятора
имунофана,
которые
при
комбинированном
использовании
полностью
восстанавливают
основные
показатели
неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена системы иммунитета,
антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность естественных
клеток-киллеров.
Апробация работы, публикации. Результаты исследований были
доложены на заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и
уничтожения химического оружия Поволжского отделения А В Н (май 2001 г.,
март 2002 г., февраль 2003 г., апрель 2004 г.), на Российской научной
конференции
«Медико-биологические
проблемы
противолучевой
и
противохимической защиты», СПб, май, 2004 г., юбилейной научнопрактической конференции «Актуальные вопросы корабельной токсикологии,
радиологии, обитаемости кораблей и медицинского обеспечения личного
состава В М Ф » (СПб, 2004 г.), научно-практических конференциях
Саратовского военного института радиационной, химической и биологической
защиты (2001, 2002, 2003,2004 гг.), совместном заседании кафедры нормальной
физиологии Саратовского государственного медицинского университета,
кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ
Саратовского военного института радиационной, химической и биологической
защиты и кафедры токсикологии, радиологии и медицинской защиты
Саратовского военно-медицинского института (апрель 2004).
10
По теме диссертации опубликовано 10 работ.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследований и
практические рекомендации внедрены в учебный процесс на кафедре
технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ
Саратовского военного института радиационной, химической и биологической
чащиты и на кафедре токсикологии, радиологии и медицинской защиты
Саратовского военно-медицинского института. Материалы исследований
широко используются при проведении лекций, практических и лабораторных
занятий у курсантов и слушателей курсов повышения квалификации,
первичной специализации и усовершенствования врачей. По материалам
диссертации издано учебное пособие «Основы токсикологии».
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 165
страницах машинописного текста (включая таблицы и список литературы),
состоит из обзора литературы (глава 1); материалов и методов исследований
(глава 2); собственных экспериментальных исследований (главы 3-8);
заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 31
таблицей. Список литературы включает 268 наименований, из которых
отечественных -188 и зарубежных - 80.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал и методы исследований
Исследования проводились на 1173 беспородных белых крысах и на 140
беспородных белых мьппах обоего пола в равных соотношениях с массой тела
соответственно 180-240 г и 18-22 г.
Эксперименты на животных проводили в соответствии с требованиями
Женевской конвенции "International Guiding Principles for Biomedical Research
Inroling Animals" (Geneva, 1990).
Арсениты (AC) животным вводили подкожно в растворе оливкового масла
в дозах 0,2; 0,5 и (0,7) 1,0 ЛД5о(ЛД5оДля люизита и арсенита натрия составляли
соответственно 3,8+0,7 и 45,4+2,9 мг/кг).
Унитиол после отравления АС в дозе 1,0 ЛДзо вводили внутримышечно по
общепринятой схеме: в первые сутки - 15 мг/кг 3 раза с интервалом 8 ч, во
вторые сутки - по 15 мг/кг 2 раза с интервалом 12 ч; в последующие 3 сут - по
15 мг/кг 1 раз в сут. Первую дозу антидота животные получали через 10 мин
после введения арсенита. В качестве иммуностимулятора использовали
имунофан в дозе 10 мкг/кг, которую вводили внутримышечно ежедневно в
течение 3 сут. Доза иммуностимулятора для животных обоснована данными
литературы и расчетами по общепринятым методам вычисления [Рыболовлев
11
Ю.Р., 1982]. Первую дозу животные получали через 30 мин после острой
интоксикации арсинами.
Кровь для исследования факторов НРО получали из подъязычной вены
крыс. Органы системы иммунитета (тимус, селезенку, лимфоузлы, клетки
костного мозга) извлекали у животных после цервикальной дислокации в
различные сроки после интоксикации.
Антиинфекционную неспецифическуго резистентность организма без
предварительной иммунизации, а также комплексную неспецифическую
резистентность и специфическую иммунологическую защиту организма с
предварительной иммунизацией определяли по летальности крыс от
экспериментальной инфекции, по среднелетальной дозе соответственно Е. соИ
и P.vulgaris и среднеэффективному времени жизни животных (Etso) в опытной и
контрольной группах [Забродский П. Ф., 1987], рассчитанных методом пробитапализа [Беленький М.Л., 1963]. Факторы НРО - бактерицидную активность
сыворотки крови (БАСК), содержание лизоцима в крови крыс определяли
общепринятыми методами, а фагоцитарную активность нейтрофилов в тесте с
нитросиним тетразолием [Гембицкий Е.В. и соавт., 1987].
Содержание Т-клеток в тимусе определяли путем подсчета ядросодержащих
клеток в органе, учитывая то обстоятельство, что лимфоциты в вилочковой
железе представлены в основном только Т-популяцией [Ройт А. и соавт., 2000].
Лимфоциты в лимфоидных органах подсчитывали исходя из их относительного
содержания в окрашенных мазках данного органа. Влияние АС на содержание
колониеобразующих единиц (КОЕс) в селезенке изучали методом эндогенного
колониеобразования [Till J . Е., Мс Culloch Е. А., 1961].
Исследование показателей Т-зависимого и Т-независимого гуморального
иммунного ответа проводили у крыс через 5 сут после иммунизации
соответственно эритроцитами барана (ЭБ) и Vi-антигеном (Vi-Ag) по числу
антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [Jeme N. К., Nordin А. А.,
1963]. Иммунизацию проводили ЭБ (210* клеток) и Vi-Ag (8 мкг/кг) при
изучении действия АС в индуктивную фазу гуморального иммунного ответа
одновременно с их введением, а в продзгктивную - после введения АС через
3 сут после иммунизации. Изучение кооперации Т- и В- лимфоцитов in vitro
под влиянием АС для оценки роли Т- и В-лимфоцитов в обеспечение
антителопродукции определяли по методу J . К. Thomas, Т. Imamura (1986).
Для оценки состояния клеточного звена системы иммунитета определялись
функция Т-лимфоцитов по реакции тх)рможения миграции лейкоцитов (РТМЛ)
[Гембицкий Е.В. и соавт., 1987], реакция гиперчувствительности замедленного
типа (ГЗТ)' и показатель антителозависимои клеточной цитотоксичности
12
(АЗКЦ) [Зимин Ю.И., Ляхов В.Ф., 1985]. Оценка активности естественных
клеток-киллеров (ЕКК) проводилась в условиях in vivo и in vitro
спектрофотометрическим методом [Гордиенко С. М., 1984].
Активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Т-лимфоцитах крыс определяли
методом G.M. Ellman at al. (1961), выделяя клетки методом С В . Ширшева
(1998). Активность а-нафтил-А8-ацетатэстеразы и а-нафтил-бутиратэстеразы
спленоцитов крыс изучали гистохимическим методом рСейхоу Ф. Г. Дж.,
Кваглино Д., 1983]. Активность эстераз определяли через 3 сут после
отравления АС. Влияние АС на перекисное окисление липидов (ПОЛ)
оценивали по активности каталазы и пероксидазы титрометрическим методом
[Покровский А.А., 1969], содержанию малонового диальдегида (МД) в крови
фотометрически на колориметре КФК-2 [Коробейникова Э.Н., 1989] через 3
сут после отравления.
Полученные данные обрабатывались с использованием общепринятых
статистических методов [Урбах В.Ю., 1975]. Расчеты проводились на
персональном компьютере с использованием пакета программ Statgraphics.
Р Е З У Л Ь Т А Т Ы ИССЛЕДОВАНИЯ И И Х ОБСУЖДЕНИЕ
Изменение комбинированной антиинфекционной неспецифической
резистентности организма и специфических иммунологических
механизмов защиты после острого отравления арсенитами
В результате проведенных нами опытов было установлено, что острое
отравление АС приводило к дозозависимому увеличению летальности крыс от
экспериментального перитонита. При этом вполне закономерно уменьшались
ЛДзо Е. соИ и среднеэффективное время жизни животных - Etso- Так, при дозах
люизита, составляющих 0,2; 0,5 и 0,7 ЛДзо, по сравнению с контролем, при
котором летальность составляла 52,2+5,8 % , этот показатель увеличивался
соответственно на 14,5 (р>0,05); 22,8 и 28,8 % (р<0,05), а при воздействии
арсенита натрия в тех же дозах - соответственно на 8,9 (р>0,05); 20,0 и 24,2 %
(р<0,05). При действии люизита в дозах 0,2; 0,5 и 0,7 ЛДзо ЛДзо Е. соП
уменьшалась соответственно в 1,39 (р>0,05); 1,50 и 1,62 раза (р<0,05), а Е1зо соответственно в 1,30 (р>0,05); 1,44 и 1,89 раза (р<0,05). Такой же эффект
оказывало острое отравление арсенитом натрия.
Аналогичные данные нами были получены при изучении влияния острого
действия АС на комплексную неспецифическую резистентность и
специфические
иммунологические механизмы защиты организма с
применением P.vulgaris с предварительной иммунизацией.
13
Таким образом, после острого отравления АС происходит дозозависимое
увеличение летальности животных от экспериментального перитонита,
дозозависимое уменьшение ЛДзо Е. coli и P.vulgaris и среднеэффективного
времени жизни животных, что свидетельствует о снижении под влиянием АС
НРО и комплексной неспецифической резистентности и специфических
иммунологических механизмов защиты организма.
Влияние арсенитов на факторы неспецифической резистентности
организма
Оценка изменения БАСК, проводившаяся у крыс под влиянием острой
интоксикации АС в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, свидетельствует, что люизит и
арсенит натрия приводят к дозозависимому снижению БАСК через 1-6 сут
после отравления (р<0,05). Через 9 сут существенных отличий показателя от
контрольного уровня не отмечалось, хотя при дозах люизита, составляющих 0,5
и 1,0 ЛДзо, зарегистрирован более низкий показатель (р>0,05) по сравнению с
контролем. Так, при действии люизита в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо БАСК через 1
сут снижался соответственно в 1,18; 1,31 и 1,58 раза (р<0,05), а через 6 сут соответственное 1,15 (р>0,05); 1,22и 1,30 раза(р<0,05).
Аналогично после острой интоксикации АС снижалась сывороточная
активность лизоцима.
В экспериментах нами установлено, что под влиянием АС в дозах 0,2; 0,5
и 1,0 ЛДзо происходит дозозависимое снижение фагоцитарной активности
нейтрофилов через 1-6 сут. Через 9 сут сохранялось несущественное снижение
активности нейтрофилов при максимальной дозе АС, однако данная редукция
существенно не отличалась от контрольного уровня (р>0,05). Так, при действии
люизита в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо показатель через 1 сут снижался
соответственно в 1,28; 1,48 и 1,85 раза (р<0,05), а через 6 сут - соответственно в
1,19 (р>0,05); 1,32 и 1,61 раза (р<0,05).
Таким образом, под влиянием арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо
происходит дозозависимое снижение бактерицидной активности сыворотки
крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической
активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.
Изменение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке, КОЕс под влиянием
арсенитов
Оценка числа Т-лимфоцитов в тимусе показала, что в прямой
зависимости от дозы АС происходит снижение количества клеток в органе.
Данный показатель при дозах люизита, составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо,
уменьшался через 2 сут соответственно в 1,29 (р>0,05); 1,58 и 2,24 раза
14
(р<0,05), а через 4
сут - в 1,17 (р>0,05); 1,41 и 1,56 раза (р<0,05)
соответственно. Изменение числа Т-лимфоцитов в тимусе при действии
арсенита натрия носило приблизительно такой же характер, как и при действии
люизита. На 8 сут после острого отравления АС происходило восстановление
параметра до контрольного уровня. Изменения числа лимфоцитов в селезенке
были такими же, как и в тимусе.
Нами экспериментально установлено, что под влиянием АС в дозах 0,2;
0,5 и 1,0 ЛДзо через 2 сут происходит дозозависимое уменьшение содержания
лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах. Так, острое отравление люизитом в
дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 приводило к уменьшению содержания лимфоцитов в
костном мозге соответственно в 1,11 (р>0,05); 1,25 и 1,35 (р<0,05) раза, а
арсенитом натрия - в 1,10 (р>0,05); 1,23 и 1,27 (р<0,05) раза соответственно.
Острое отравление люизитом вызывало снижение содержания лимфоцитов в
лимфоузлах соответственно в 1,14 (р>0,05); 1,48 и 1,44 (р<0,05) раза, а
арсенитом натрия - в 1,04 (р>0,05); 1,46 и 1,55 (р<0,05) раза соответственно.
Аналогично изменялось содержание лимфоцитов в циркулирующей крови.
Необходимо отметить, что снижение лимфоцитов в крови сопровождалось
нейтрофилезом. Так, число нейтрофилов в крови через 2 сут в контроле
составляло 2,6+0,3'10% (п=12), а при действии люизита и арсенита натрия в
среднелетальной дозе - соответственно 3,8+0,4'10'/л и 3,7+0,3'10'/л (п==]1)
[р<0,05].
Проведенные нами исследования показали, что острая интоксикация
люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо вызывает дозозависимое снижение числа
КОЕс через 8 сут соответственно в 1,54 (р> 0,05); 1,66 и 2,11 раза (р< 0,05).
Арсенит натрия в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ДДзо вызывал редукцию миграции КОЕс
или их гибель (гибель СКК) в 1,23 (р>0,05); 1,54 (р>0,05) и 1,89 раза (р<0,05)
соответственно.
Таким образом, под влиянием острой интоксикации АС (0,2; 0,5 и
t ,0 ЛД50) происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и
селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей
к 8 суткам. Через 2 сут АС вызывают дозозависимое уменьшение числа
лимфоцитов в органах системы иммунитета и циркулирующей крови, а также
снижение числа КОЕс через 8 сут.
Влияние арсенитов на гуморальный иммунный ответ
При исследовании содержания антителообразующих клеток (АОК) в
селезенке к ЭБ у белых крыс через 5 сут после острой интоксикации АС в дозах
0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо было установлено (табл.1) дозозависимое снижение
15
показателя, позволяющее полагать, что арсениты вызывают супрессию синтеза
IgM.
В
индуктивной
фазе
иммунного
ответа,
когда
иммунизация
ЭБ
проводилась практически одновременно с введением А С , острое отравление
люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 приводило к уменьшению содержания
А О К в селезенке к Э Б у крыс соответственно в 1,42; 1,95 и 2,64 (р<0,05) раза, а
арсенитом натрия - в 1,24 (р>0,05); 1,77 и 2,24 (р<0,05) раза соответственно. В
продуктивном периоде антителогенеза (введение А С проводили через 3 сут
после иммунизации крыс Э Б ) острое отравление люизитом вызывало снижение
числа А О К в селезенке к Э Б соответственно в 1,73; 2,29 и 3,86 (р<0,05) раза, а
арсенитом натрия - в 1,64; 1,97 и 3,21 (р<0,05) раза соответственно.
Таблица 1
Влияние острого отравления арсешггами на число антителообразующих клеток
к эритроцитам барана (1(Я), синтезирующих IgM, в селезенке крыс через 5 сут после
иммунизации ЭБ (М+т, п~5-7)
Вещества
Доза
Время интоксикации после иммунизации, сут
Контроль
Люизит
Арсенит натрия
0
1
40,1+3 3
3
0
0,2ЛД5о
28,3±3,1*
0,5ЛД5о
20,6+2,9*
1,0ЛД5о
15,2+2,7*
10,4+2,0*
0,2ЛД5о
32,5+3,3
24,5+3,1*
0,5 ЛД50
22,7±2,8*
20,4+2,2*
1.0ЛД5о
17,9+2,6*
12,5+2,1*
23,2+3,0*
17,5+2,3*
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем
Результаты
исследований,
полученные
нами,
свидетельствуют
о
снижении под влиянием арсенитов функции ТЫ-лимфоцитов, индуцирующих
синтез I g M [Pfeifer С. et al., 1991] В-клетками селезенки, в большей степени в
продуктивной фазе антителогенеза по сравнению с индуктивной.
В наших исследованиях на белых крысах при острой интоксикации А С ,
при которой введение токсикантов проводилось одновременно с иммунизацией
ЭБ,установлено, что под влиянием люизита и арсенита натрия через 8 сут
происходит дозозависимое снижение синтеза IgG, оцениваемого по числу А О К ,
синтезирующих иммуноглобулины данного класса. Так, острое отравление
люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо приводило к уменьшению содержагтоя
А О К в селезенке, синтезирующих I g G к Э Б , у крыс соответственно в 1,33; 1,71
и 1,99 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,24 (р>0,05); 1,57 и 1,76 (р<0,05)
раза соответственно.
При оценке содержания А О К к Vi-Ag в селезенке у белых крыс после
острой интоксикации А С
через 5 сут было установлено
дозозависимое
16
снижение показателя. Редукция числа АОК к Vi-Ag свидетельствует о том, что
АС вызывают супрессию синтеза IgM В-клетками [Ройт А. и соавт., 2000]. В
индуктивном периоде гуморальной иммунной реакции АС оказывали менее
выраженный эффект, чем в продуктивном. Т-независимая антителопродукция
снижалась в меньшей степени, чем Т-зависимая.
В опытах in vitro на спленоцитах мышей установлено, что люизит в
концентрациях 10', 10'* и 10' М уменьшает кооперацию Т- и В-клеток
(р<0,05). Аналогичный, но менее выраженный эффект (р<0,05) оказывает
арсенит натрия. АС в большей степени снижают функцию Т-лимфоцитов
(р<0,05) при концентрациях, составляющих 10', 10 * и Ю'' М.
Таким образом, после острой интоксикации АС в дозах, составляющих
0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, происходит дозозависимое снижение Т-зависимого
антителообразования через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует
о снижении функции ТЫ- и Т112-лимфоцитов и В-клеток. Супрессия
показателя более выражена при действии АС в продуктивный период
антителопродукции. Острое отравление АС в дозах, составляющих 0,2; 0,5 и
1,0
ЛДзо,
вызывает
дозозависимое
снижение
Т-независимой
антителопродукции,
преимущественно
в
продуктивный
период
антителообразования, что обусловлено редукцией функции В-лимфоцитов.
Под влиянием АС in vitro существенно нарушается кооперация Т- и
В-лимфоцитов. АС in vitro в прямой зависимости от концентрации (10', 10" и
10^ М) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно
Т-клетки. Действие люизита на кооперацию лимфоцитов и в целом на
гуморальный иммунный ответ по сравнению с арсенитом натрия более
выражено (р<0,05).
Оценка воздействия арсенитов на клеточные иммунные реакции
Нами установлено, что при оценке функции Т-лимфоцитов по РТМЛ у
крыс через 1-6 сут после острой интоксикации, люизит (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50)
дозозависимо увеличивает миграцию лейкоцитов (снижает функцию Т- клеток)
на 12,7...35,9 % (р<0,05). К 9 сут происходило практически полное
восстановление показателя. Аналогичное действие оказывал арсенит натрия.
Нами установлено, что при острой интоксикации АС (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50)
происходит дозозависимое снижение реакции ГЗТ. Так, дозы люизита,
составляющие 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, вызывали сутфессию формирования ГЗТ
соответственно в 1,47; 1,68 и 2,24 раза (р<0,05), а арсенит натрия в тех же
дозах- соответственно в 1,35; 1,57 и 1,99 раза (р<0,05).
17
При острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия в дозах,
составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо, нами установлено (табл. 2) дозозависимое
уменьшение А З К Ц под влиянием А С . Люизит в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50
вызывал супрессию А З К Ц спленоцитов у крыс через 5 сут соответственно в
1,42; 1,81 и 2,84 (р<0,05) раза, а арсенит натрия - в 1,28 (р>0,05); 1,54 и 2,07
(р<0,05) раза соответственно.
При исследовании влияния А С на Е К К крыс нами установлено, что через
1-6 сут токсиканты (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) дозозависимо снижают активность
естественных клеток-киллеров. Так, острое отравление люизитом в дозах 0,2;
0,5 и 1,0 ЛДзо приводило к снижению активности Е К К у крыс через 1 сут
соответственно в 1,39; 1,90 и 3,64 раза (р<0,05), а арсенитом натрия - в 1,32;
1,72 и 2,79 раза (р<0,05) соответственно.
Таблица 2
Влияние острого отравления арсенитами на антителозависимую клеточную
цитотоксичность спленоцитов у белых крыс через 5 сут, % (М+т, п=5-7)
Доза
Контроль
Люизит
10Д+1,5*
0,2ЛД5о
8,0±1,4*
0,5ЛД5о
1,ОЛД5о
5,1±1,1*
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.
Арсенит натрия
14,5+1,3
11,3+1,6
9,4±1,7*
7,0+1,8*
При оценке влияния А С на активность Е К К селезенки крыс in vitro нами
установлено, что при концентрациях люизита, составляющих 1 0 * , 1 0 ' и 1 0 ' ' М ,
происходило прямо связанное с концентрацией уменьшение активности Е К К
соответственно в 1,57; 2,35 и 5,08 раза (р<0,05), а при действии арсенита натрия
в эквимолярных концентрациях - соответственно в 1,34; 1,61 и 2,91 раза
(р<0,05). Эффект люизита статистически значимо превышал действие арсенита
натрия (р<0,05).
Таким образом, острое отравление А С (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) приводит к
дозозависимому снижению функции Т-клеток и активности Е К К до 9 сут,
реакции Г З Т , характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и
функцию ТЫ-лимфоцитов, А З К Ц . А С in vitro в прямой зависимости от
концентрации ( 1 0 * , 1 0 ^ и 1 0 ^ М ) уменьшают активность Е К К .
Р о л ь аятихолинэстеразных механизмов и перекисного окисления липидов
в нарушении иммунного статуса после острой интоксикации арсенитами
Нами установлено (табл. 3), что люизит в дозе, составляющей 1,0 ЛДзо,
обусловливает дозозависимое снижение активности А Х Э Т-клеток тимоцитов и
18
спленоцитов соответственно в 1,32 и 1,41 раза (р<0,05), а арсенит натрия соответственно в 1,20 и 1,26 раза (р<0,05).
Под влиянием острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия в дозе
1,0 ЛДзо число клеток (в основном Т-лимфоцитов), содержащих а-нафтил-ASацетатэстеразу в спленоцитах крыс, снижалось соответственно в 1,50 и 1,23
раза (р<0,05), а содержащих а-нафтил-бутиратэстеразу - соответственно в 1,46
и 1,31 раза (р<0,05).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что преимущественное
снижение функции Т-клеток в гуморальных и клеточных иммунных реакциях
под влиянием А С связано с ингибированием эстераз Т-лимфоцитов.
Таблица 3
Влияние острого отравления арсенитами (1,0 ЛДзо) на активность ацетилхолинэстеразы
Серии опытов
Контроль
Тимус
Селезенка
68,2±6,3
59,5+6,1
Люизит
51,5+5,2**
42,1+4,9*
Арсенит натрия
57,0+5,0**
47,2+4,5**
Примечание: *; ** - различие с контролем достоверно - р<0,05, (*; ** - для расчета
достоверности различий использовали соответственно t -критерий Стьюдента и
пепараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни),
Наши исследования показали, что А С в дозе 1,0 ЛДзо инициируют П О Л .
Так, под влиянием люизита активность каталазы и пероксидазы снижалась
соответственно в 1,94 и 1,71 раза. Под влиянием А С снижение факторов
антиоксидантной
системы
было
сопряжено
с
увеличением
ПОЛ,
что
проявлялось увеличением содержания в плазме крови малонового альдегида.
Так, люизит и арсенит натрия статистически значимо (р<0,05) повышали
содержание данного соединения соответственно в 1,36 и 1,25 раза. Полученные
данные свидетельствуют, что люизит по сравнению с арсенитом натрия в
большей степени активирует П О Л в целом и лимфоцитов в частности.
При вычислении коэффициентов корреляции между числом А О К к Э Б при
остром отравлении люизитом и содержанием каталазы и пероксидазы в крови
крыс установлено, что они составляли соответственно 0,769+0,077 (р<0,05) и
0,754+0,082 (р<0,05). Коэффициенты корреляции при острьрс отравлениях
люизитом и арсенитом натрия между числом А О К к Э Б и содержанием М Д в
крови составляли соответственно -0,763+0,079 (р<0,05) и -0,710+0,096 (р<0,05).
Значения г между другими
параметрами системы иммунитета при остром
действии арсенитов и показателями антиоксидантной системы находились в
пределах от 0,687 до 0,805 (р<0,05), а коэффициенты корреляции между
содержанием малонового диальдегида в крови и показателями иммунного
19
статуса при действии АС составляли от -0,667 до -0,789 (р<0,05).
Таким образом, под влиянием острой интоксикации АС (1,0 ЛД50)
происходит снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса
и селезенки, а также числа а-нафтил-А8-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтилбутиратэстеразопозитивных спленоцитов (преимущественно Т-клеток) Это
свидетельствует о том, что одним из механизмов их иммунотоксичности
является антихолинэстеразный эффект. Острая интоксикация АС приводит к
инициации ПОЛ. Эффект люизита в эквилетальной дозе по сравнению с
арсенитом натрия более выражен (р<0,05). Инициация ПОЛ под влиянием АС
является
одним
из
факторов,
способствзтощим
формированию
постинтоксикационного иммунодефицитного состояния после их острого
действия, что доказывается высокими коэффициентами корреляции между
показателями ПОЛ и основными параметрами системы иммунитета.
Коррекция нарушений иммунного гомеостаза при остром
отравлении арсенитами
Использование унитиола - антидота АС - можно рассматривать как один
из способов снижения редукции показателей НРО и иммунного статуса. При
остром отравлении люизитом (1,0 ЛД50) после применения унитиола у крыс
происходило увеличение выживаемости животных от экспериментальной
инфекции, повышение ЛДзо Е.соИ и Etso (р<0,05) (оценку показателей
проводили через 1 сут). При использовании унитиола после отравления крыс
люизитом через 6 сут отмечалось уменьшение снижения БАСК (р>0,05),
сывороточного
содержания лизоцима (р>0,05), индекса активности
нейтрофилов в НСТ-тесте по сравнению с показателями при остром отравлении
(р<0,05). При этом полного восстановления до контрольных значений
значительно сниженных действием люизита исследованных показателей НРО
не происходило. Они оставались статистически значимо более низкими, чем в
контроле. Аналогичное действие оказывал унитиол при остром отравлении
арсенитом натрия.
Нами экспериментально установлено, что унитиол вызывал значительно
более выраженное повышение (р<0,05) гуморального иммунного ответа к
Т-зависимому антигену (в 1,83 раза) по сравнению с реакцией на
Т-независимый антиген (в 1,33 раза) по отношению к показателям при
отравлении люизитом. Унитиол достоверно повьппал сниженную люизитом
активность Е К К , АЗКЦ и реакцию ГЗТ у крыс. Аналогичное действие унитиол
оказывал при остром отравлении арсенитом натрия.
Выявленное уменьшение иммунотоксичности люизита и арсенита натрия
20
унитиолом, не обеспечивающим полного восстановления значительно
сниженных действием этих токсикантов исследованных показателей НРО и
системы иммунитета, предполагает обязательное включение в схему лечения
острой интоксикации иммуностимуляторов, повышающих показатели НРО,
активность Е К К и АЗКЦ, основных гуморальных и клеточных иммунных
реакций.
Сравнительная характеристика наиболее часто используемых в клинике
иммуностимуляторов свидетельствует о том, что имунофан при острой
интоксикации АС является препаратом выбора. Необходимо подчеркнуть, что
имунофан (по данным литературы) способен не только оказьгеать
иммуностимулирующее влияние на все звенья системы иммунитета, но и
обеспечивать детоксицирующий, гепатопротективный и антиоксидантный
эффекты при острых отравлениях АС.
Нами установлено, что применение после острого отравления люизитом
в
дозе
1,0
ЛДзо (как
наиболее
иммунотоксичным
арсенитом)
иммуностимулятора
имунофана
частично
восстанавливает
основные
показатели Н Ю , гуморального и клеточного иммунитета.
Экспериментально показано, что при остром отравлении люизитом
(1,0 ЛДзо) комбинированное применение его антидота унитиола и
иммуностимулятора имунофана полностью восстанавливает у крыс основные
показатели НРО, Т-, В-звена иммунитета, АЗКЦ и активность Е К К .
Выводы
1. При остром отравлении арсенитами (люизитом и арсенитом натрия) в
условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо происходит
прямо связанная с дозой редукция антиинфекционной неспецифической
резистентности организма, специфических иммунных механизмов защиты у
животных при экспериментальной инфекции, супрессия Т-зависимой и
Т-независимой гуморальной иммунной реакции (более выраженная в
продуктивной фазе антителогенеза), функции Т-клеток, антителозависимой
клеточной цитотоксичности и активности естественных клеток-киллеров.
Коррекция
выявленных
нарушений
достигается
комбинированным
применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола и
иммуностимулятора имунофана.
2. Острое действие люизита и арсенита натрия вызывает прямо связанное
с дозой увеличение летальности животных от экспериментальной инфекции,
вызванной Е. соП, уменьшение ЛДзо Е. соН и среднеэффективного времени
жизни животных, а также данных показателей при использовании P.vulgaris
21
после
предварительной
неспецифргческой
иммунизации,
резистентности
что
свидетельствует
организма
и
о
специфических
снижении
иммунных
механизмов защиты.
3. Под влиянием арсенитов происходит дозозависимое снижение факторов
неспецифической
сыворотки
резистентности
крови,
организма:
сывороточного
бактерицидной
содержания
лизоцима,
активности
фагоцитарно-
метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.
4. Острая интоксикации люизитом и арсенитом натрия вызывает прямо
связанное с дозой уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки
течение 4 сут с последующим увеличением
Острое
действие
лимфоцитов
арсенитов
в тимусе
восстановлением
этих
вызывает
дозозависимое
и селезенке в течение
показателей
к
в
этих показателей к 6 суткам.
8 сут.
уменьшение
2-4 сут
После
с
числа
последующим
острого
отравления
арсенитами через 2 сут происходит прямо связанное с дозой уменьшение числа
лимфоцитов в органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое
действие люизита и арсенита натрия через 8 сут приводит к дозозависимому
уменьшению числа колиниеобразующих единиц в селезенке.
5 После острого отравления арсенитами происходит прямо связанное с
дозой снижение Т-зависимого антителообразования через 5 и 8 сут после
иммунизации,
что
ТЬ2-лимфоцитов
и
свидетельствует
В-клеток.
о
Редукция
снижении
показателя
функции
более
ТЫ-
выражена
и
при
действии арсенитов в продуктивный период антителопродукции. Под влиянием
люизита и арсенита натрия in vitro снижается кооперация Т- и В-лимфоцитов.
Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации ( 1 0 ' , 10* и 10^ М )
снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки.
6. Острое отравление арсенитами вызывает дозозависимое снижение
Т-независимой антителопродукции преимущественно в продуктивный период
иммуногенеза
по сравнению с индуктивным периодом, что
обусловлено
супрессией функции В-лимфоцитов.
7. Острое отравление арсенитами приводит к прямо связанному с дозой
снижению функции Т-клеток и активности естественных клеток-киллеров до
9 сут; реакции гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей
первичный
клеточный
иммунный
ответ
и
функцию
ТЫ-лимфоцитов,
антителозависимой клеточной цитотоксичности. Арсениты in vitro в прямой
зависимости от концентрации ( 1 0 ^ , 1 0 ' и 1 0 * М ) уменьшают активность
естественных клеток-киллеров.
22
8. Под влиянием острой интоксикации арсенитами (1,0 ЛД50) происходит
снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки,
а также числа а-нафтил-А8-ацетатэстеразопозитивных
и а-нафтилбутиратэстеразопозитивных спленоцитов (преимущественно Т-клеток), которое
свидетельствует о том, что одним из механизмов их иммунотоксичности
является антихолинэстеразный эффект. Острая интоксикация арсенитами
приводит к инициации перекисного окисления липидов. Инициация
пе'рекисного окисления липидов под влиянием арсенитов является одним из
факторов,
способствующим
формированию
постинтоксикационного
иммунодефицитного состояния после их острого действия, что доказывается
высокими коэффициентами корреляции между показателями перекисного
окисления липидов и основными параметрами специфической иммунной
защиты.
9. При остром отравлении арсенитами в дозе 1,0 ЛД50 изолированное
применение унитиола и имунофана повьппает основные показатели
неспецифической резистентности организма, гуморального и клеточного звена
иммунитета,
однако
они
остаются
ниже
контрольного
уровня.
КомбинЕфованное использование унитиола и имунофана полностью
восстанавливает основные показатели неспецифической резистентности
организма и специфической иммунной защиты.
Практические рекомендации
1. В экспериментах на животных наиболее информативными
показателями для оценки иммуносупрессивных эффектов арсенитов являются:
содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность естественных
клеток-киллеров, АЗКЦ, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в
продуктивной фазе антителогенеза, функция Т-клеток в
реакции
гиперчувствительности замедленного типа, активность ацетилхолинэстеразы Тлимфоцитов
тимуса
и
селезенки,
число
а-нафтил-ASацетатэстеразопозитивных
и
о-нафтил-бутиратэстеразопозитивных
спленоцитов, показатели ПОЛ.
2. После острого отравления арсенитами происходит дозозависимое
снижение показателей неспецифической резистентности организма и
иммунного статуса, которое при острой интоксикации средней, тяжелой и
крайне тяжелой степени тяжести (дозы арсенитов - 0,5-1,0 ЛДзо и более)
требует применения средств профилактики и лечения постинтоксикационного
иммунодефицитного
состояния, так
как
возможно
возникновение
инфекционных осложнений и заболеваний.
23
3. После острого отравления арсенитами для восстановления
неспецифической
резистентности
организма,
основных
показателей
гуморального и клеточного иммунного ответа целесообразно применять
унитиол в комбинации с иммуностимулятором имунофаном.
Публикации по теме диссертации
1.
Василенко
О.А.
Иммунотоксические
свойства
2-хлорэтенилдихлорарсина, хлорида мышьяка и их связь с перекисным
окислением липидов / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Василенко О.А. //
Токсикологический вестник. - 2003.- №6.- С. 11-14.
2.Василенко О.А. Связь иммунотоксических свойств люизита, хлорида
мышьяка с перекисным окислением липидов / О.А. Василенко, П.Ф.
Забродский, В.Г. Германчук: Сб. науч. ст. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2003. - Вып.
№3.-С.159-165.
З.Василенко О.А. Действие имунофана на параметры иммунной системы
и перекисного окисления липидов после острых отравлений различными
токсикантами / О.А. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук: Сб. науч. ст.
СВИ РХБЗ. - Саратов, 2003. - Вып. ХоЗ.-С.167-172.
4. Василенко О.А. Модуляция антидотами влияния опасных токсических
веществ на неспецифическую резистентность организма /О.А. Василенко,
П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук: Научный отчет о НИР № 02042.- Саратов,
СВИ РХБЗ, 2003. - 65 с.
5. Влияние средств медицинской защиты на иммунотоксичность
химических ксенобиотиков / О.А. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук,
Е.В. Понукш1ина: Научный отчет о НИР № 99,-Саратов, СВИ РХБЗ, 2003. 95 с.
6. Изменения иммунного статуса при остром действии ядов с различными
механизмами токсического действия / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук,
О.А. Василенко, Н.М. Сидельникова: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. Вып. №4.-С. 144.
7. Механизмы
иммунотоксичности химических
соединений /
П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Н.М. Трошкин, О.А. Василенко: Сб. науч. тр.
СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. - Вып. №4. -С. 145.
8. Влияние антидотной терапии на формирование постинтоксикационных
иммунодефицитных состояний / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук,
О.А. Василенко, С М . Меркина: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. Вып. №4.-С. 154.
9. Сравнительная оценка эффективности различных иммуностимуляторов
при вторичных иммунодефицитах / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, О.А.
. i
!
Василенко, В.Ф. Киричук: Сб. науч. тр. С В И РХБЗ. - Саратов, 2004. - Вып'. №4.
-С. 155
10. Влияние соединений трехвалентного мышьяка на показатели системы
иммунитета и перекисное окисление липидов / О.А. Василенко,
П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Н.М. Трошкин // Медико-биологические
проблемы противолучевой и противохимической защиты: Материалы
Российской научной конференции. - СПб, 2004.- С.54.
АЗКЦ
Перечень сокращений
- антителозависимая клеточная цитотоксичность'
АОК
- антителообразующие клетки
АС
- арсениты
АХЭ
- ацетилхолинэстераза
ЬАСК
- бактерицидная активность сыворотки крови
ГЗТ
- гиперчувствительность замедленного типа
ЕКК
- естественные клетки-киллеры
'
2006-4
23823
КОЕ
- колониеобразующая единица
КОЕс
- колониеобразующЕГя единица селезенки
НРО
- неспецифическая резистентность организма
ПОЛ
- перекисное окисление липидов
РТМЛ
- реакция торможения миграции лейкоцитов
ЭБ
- эритроциты барана
ЛДзо
- средняя смертельная доза, вызывающая смертельный
Etso
-среднеэффективное время жизни
Ig
- иммуноглобулин
Th 1, Th2
- Т-лимфоциты- хелперы типа 1,2
Vi-антиген
(Vi-Ag)
- тимуснезависимый Vi - антиген брюшнотифозной
вакцины
исход у 50 % отравленных животных
Лицензия ИД№06268 от 14.11.01
Подписано в печать 22.04.04
Формат 60х8Д 1/1 б
Бум. тип.
Усл. печ. 1,0
Уч.-и|д. j ^ l i O
Тираж 100 экз.
Заказ 189.
Бесплато " ^ ^
Саратовский государственный технический университет
^^>.1^_
410054 г. Саратов, ул. Политехническая, 77
Копипринтер СГТУ, 410054 г. Саратов, ул. П(}луга!ао1Чвокая, 77
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
1 203 Кб
Теги
bd000103138
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа