close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000103178

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
КАРЕВА
Елена Николаевна
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ
ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ СТЕРОИДОВ И ИХ
АНТАГОНИСТОВ
14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук
\s!
Москва 2003
Работа
выполнена в Российском государственном медицинском
университете
Научный консультант Академик РАМН, доктор медицинских наук,
профессор 11.В.СЕРГЕЕВ
Официальные оппоненты Заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук,
профессор Р.Д.СЕЙФУЛЛА
доктор медицинских наук, профессор М . В Л Е О Н О В А
доктор медицинских наук, профессор В.В.ЯСНЕЦОВ
Ведущее учреяадение Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова
Защита диссертации состоится «__»
^2003 г.
в
^часов
На заседании диссертационного совета Д 208.072.01 в Российском
Государственном медицинском университете по адресу:
117997,
Москва, ул. Островитянова, д.1
С диссертахщей можно ознакомиться в библиотеке Российского
государственного медицинского университета по адресу: 117997,
Москва, ул. Островитянова, д.1
Автореферат разослан «__»
^2003 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук,
профессор
11.Х.Джанашия
^99к±
3LX?AS^2
гицо(>
^^^ььчи
Актуальность темы.
Изучение молекулярных механизмов действия стероидных гормонов
является одной из задач медицинской науки, которая имеет не только
теоретические, но и прикладные аспекты, связанные с фармакологической
коррекцией гормонозависимых патологий.
Значительным событием в исследовании молекулярных механизмов
действия стероидов явилось открытие специфических мест связывания рецепторов для каждого класса стероидных гормонов.
Обычно
схему
реализации биологической активности стероидных гормонов представляют
следующим
образом:
специфическими
проникновение
внутриклеточными
в
клетку,
связывание
рецепторами,
со
активация
гормонорецепторных комплексов и транслокация их в ядро с последующей
индукцией или угнетением генной экспрессии [Christin-Maitre S. et al.,1998].
В приведенной схеме наименее изученным является первый этап,
поскольку долгое время считалось, что стероиды проникают в клетку путем
простой диффузии через клеточную мембрану. В последние 10-15 лет стали
появляться публикации, доказывающие, что начальным этапом реализации
гормонального
сигнала
в
биологический
ответ клетки является
специфическое "узнавание" и связывание гормона с плазматической
мембраной (ПМ). Наличие специфических мест связывания на П М клетокмишеней для стероидных гормонов было доказано исследованиями,
проведенными на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии
медико-биологического факультета Р Г М У им. Н.И.11ирогова. В частности,
было показано, что П М клеток миометрия человека и белых крыс содержат
специфические места связывания для 17р-эстрадиола [Сергеев П.В. и соавт.,
1979; 1985].
Показано,
что
стероидный
гормон
специфически
связывается с рецепторами П М клетки-мишени, образуя комплекс, который
за счет конформационных
изменений
механизм вторичньк передатчиков.
молекулы рецептора включает
Все известные системы
вторичных
! »»0С НАЦИОНАЛЬНАЯ
БИБЛИОТЕКА
1
С. Петербург
{ Ш^^РК
посредников
представляют
собой
несколько
белковых
молекул,
локализованных в одном домене П М и расположенных на разных сторонах
мембраны или погруженных в бислой на разную глубину. Активация этих
комплексов
предполагает
латеральную
диффузию его белковых
компонентов для их сопряжении в единый ансамбль,
что определяется
состоянием липидного бислоя мембраны [Саатов Т.С, 1981; Charman J.T.,
1987]. Следовательно, липиды П М
могут
рассматриваться
необходимого компонента при взаимодействии гормона с
в качестве
мембранным
рецептором, проявлении его мембранных эффектов и трансдукции сигнала
внутрь клетки.
В ряде работ [Красильников М.А. исоавт., 1993; Контрикадзе Н.Г. и
соавт.,
1987;
Crook
гиперпластические
D.,
1991]
преобразования
показано,
что
гормонозависимые
клетки-мишени
сопровождаются
изменением липидного состава ее ПМ. Однако, в связи с отсутствием в
литературе
сведений
проанализированы
о
плазмомембранной
причинно-следственные
рецепции
ст^юидов
взаимоотношения
характеристиками клеточной рецепции стероида,
не
между
состоянием липидного
матрикса и активности маркерных ферментов П М
при
опухолевого
необходимо для
выяснения
процесса.
Решение данного
молекулярных
гиперплазии
в
тканях
механизмов
вопроса
развитая
матки. Следовательно,
развитии
гормонозависимьк
актуальньш
является
комплексный анализ ранее не изученной плазмомембранной рецепции
женских
половых
стероидов
и
липидного
матрикса
ПМ
при
гормонозависимых патологических процессах в миометрии и эндометрии.
Женские половые стероиды обладают очень широким спектром
биологической активности. На раду с регуляцией репродуктивной функции,
они оказывают
прямое
влияние на состояние сердечно-сосудистой,
иммунной, нервной систем, костной ткани [Con^ston JE., 2001; Dubey RK. et
al., 2002]. Проблемой современной фармакологической
науки является
вычленение
свойств,
интересующих
клиницистов,
из
комплекса
характеристик, присущих природному гормону, создание новых соединений
с заданным спектром активности и отбор наиболее перспективных для
внедрения
в
клиническую практику препаратов. Поэтому, актуальным
является отбор новых гормональных соединений с учетом рецепторных
механизмов действия стероидных гормонов.
Молекулярные механизмы развития ряда нежелательных эффектов
стероидов
обусловлены
особенностями
структурно-функциональной
организации рецепторных молекул суперсемейства S/T/Ai, к которьпи
относятся рецепторы
эстрадиола
и
прогестерона.
Так, на пример,
прогестерон в высоких дозах взаимодействует не только с собственньпли
рецепторами, но и с рецепторами андрогенов и глюкокортикоидов. В свою
очередь, все швестные антигестагены в той или иной степени проявляют
антиглюкокортикоидные и антиандрогенные эффекты, которые усиливаются
по мере повышения дозы и длительности введения препарата. В связи с этим,
в нашей работе предложен дополнительный критерий отбора новых
антигестагенов - анализ силы связывания веществ с глюкокортикоидньпли и
андрогеновыми рецепторами.
Таким образом, актуальным является дальнейшее изучение рецепции
эстрадиола
и
прогестерона
в
клетке-мишени
для
уточнения
патогенетических механизмов развития гиперплазии тканей репродуктивной
системы и
корректного
отбора
новых
синтетических
аналогов
и
антагонистов стероидов.
Цель работы: изучение молекулярных механизмов действия женских
половых гормонов и их антагонистов в норме и при гормонозависимых
патологических процессах тканей матки.
Задачи:
эстрадиола-17р
1. Изучение
с
характера связывания прогестерона и
плазматическими
мембранами
миометрия
овариэктомированных
белых крыс и влияние на этот процесс женских
половых стеровдов.
2. Исследование действия прогестерона и эстрадиола-17р на липидный
состав плазматических мембран миометрия овариэктомированных крыс.
3. Определение содержания половых гормонов в плазме крови, уровня
рецепторов женских половых стероидов в плазматических мембранах и
цитозоле, лшгадного спектра ПМ, уровня циклических нуклеотидов и
активности мгфкерных ферментов П М миометрия и эндометрия человека при
гиперпластических процессах.
4. Фармакологический анализ новых групп синтетических А) эстрогенов
- 8-изоаналогов эстрогенов, нистранола; Б) антиэстрогенов - производных
трифеннлэтилена; В ) гестагенов - прегна-В'-пентаранов, Г ) антигестагенов дигидро-прегна-В'-пент^)анов, 5Н-дигидропрогестеронов.
4.1.
Определение гормональной акгивности препгфатов.
4.2.
Изучение относительной связывающей активности препаратов с
цитозольными (цРЕ, цРП) и плазмомембранными рецепторами (пРЕ,
пРП) миометрия и эндометрия.
4.3.
Исследование рецепторотропной активности препаратов (влияние на
уровень цРП и цРЕ в миометрии овариэктомированных крыс).
4.4.
Изучение специфической активности препаратов (антиокислительной,
гиполипидемической,
антифергнльной,
влияния
на
спонтанную
сократительную активность миометрия и его чувствительность к
окситоцину и др.).
Научная новизна исследования:
В работе дана характеристика параметров связывания эстрадиола и
прогестерона с П М клеток миометрия белых крыс, эндометрия и миометрия
человека в норме и при гиперплазиях. На экспериментальных животных
продемонстрировано
регулирующее
влияние
половых
стероидов
на
собственную рецепцию в П М клеток-мишеней и на их липидный состав.
Показано, что антагонисты женских половых стероидов конкурируют с
эндогенным гормоном уже на уровне П М клетки-мишени.
В
ходе
работы
экспериментально
доказано,
что
метаболит
прогестерона - 5а-дигидропрогестерон проявляет свойства антагониста
прогестерона (работа проведена при финансовой поддержке Р Ф Ф И - грант
№00-04-49005 «Ближайшие
метаболиты половых стероидов
как их
антагонисты»).
Впервые было проведено динамическое изучение концентрации
половых стероидов в плазме крови и их рецепторов в миометрии накануне и
в процессе родов. Выявлено, что в инициации и развитии регулярной
родовой деятельности ведущая роль принадлежит рецепторному аппарату
миометрия.
Выявлены новые аспекты патогенеза гиперплазии тканей матки и
слабости родовой деятельности, включаюпще изменение параметров
циторецепции стероидов и метаболизма прогестерона.
Практическая значимость работы:
Разработаны дополнительные критерии состоятельности миометрия в
процессе родов, основанные на рецепторном анализе (а/с №2171472,1999).
Написаны практические рекомендации для врачей - «Профилактика
аномалий сократительной деятельности матки». Прогнозирование развития
слабости
родовой
деятельности
с
учетом
предложенных
нами
дополнительных критериев и фармакологическая коррекция этого состояния
путем применения антигестагена (мифегина) применяются в акушерских
клиниках МОНИИАГ, Ивановском НИИ материнства и детства им. В.Н.
Городкова МЗ РФ.
Произведен отбор перспективных для клинического использования
соединений:
метиловый
эфир
б-окса-В-гомо-8-изоэстрона
для
заместительной гормональной терапии у женщин в постменопаузальном
периоде, относящихся к группе высокого риска развития атеросклероза, с
целью
его
профилактики
этинилэстрадиол-диацетат
в
и
лечения;
качестве
11Ь-нитроокси-9а-гидрокси-
компонента
комбинированного
контрацептивного препарата; транс-изомер 1-бензилокси-4-(1,2-дифенил-2хлорэтинил)
бензола
для терапии
железисто-кистозных
полипов
и
аденокарцином эндометрия пациенток в перименопаузе; 6а-метил-16а,17а
циклогексанопрогестерон для использования в
онко-гинекологической
практике, в качестве компонента оральных контрацептивов, при лечении
бесплодия и не вынашивании беременности; 16а,17а-циклогексано-5апрегнан-3,20-дион для терапии атипической гиперплазии эндометрия.
Предложен новый метод
определения 5Н-дигидропрогестеронов в
нанограммовых концентрациях в плазме крови (а/с № 2183123,2002).
Полученные
в
ходе
работы
результаты
продемонстрировали
необходимость причисления пациенток в постменопаузе с железистокистозными полипами эндометрия к группе риска по развитию рака
эндометрия и выбора соответствующей тактики лечения этих больных.
Для преодоления толерантности к гестагенотерапии, одной из причин
которой является снижение уровня рецепторов прогестерона в тканимишени, необходимо чередование/сочетание курсов указанной терапии с
назначением препаратов, стимулирующих синтез и экспрессию рецепторов
прогестерона (антиэстрогены).
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и обсуждены: на 1-Х Российских
национальных конгрессах "Человек и лекарство" Москва, 1993-2003гг.; на
третьей (LXVI) сессии общего собрания Российской Академии медицинских
наук, 16 февраля 1994; Всесоюзном симпозиуме по биохимии лгашдов,
Алма-Ата, 1987; IV Всесоюзном съезде патофизиологов, г.Кишинев, 1989;
3-м Всероссийском съезде эндокринологов, 1996, Москва; 1 Российском
конгрессе по патофизиологии, Москва, 1996;
П съезде Российской
ассоциации врачей акушеров и гинекологов, Москва, 1997; Ш Российском
форуме «Мать и дитя», Москва, 2001; 1-м Московском международном
симпозиуме «1^шунология и иммунопатология системы «Мать-ПлодНоворожденный»» РАМН, Москва, 2001; 16 Eur. Congress of Obstetrics and
Gynaecology (EAGO/EBCOG) Malmo, Sweden, 2001; на совместных научных
конференциях кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии МБФ
и ПНИЛ молекулярной фармакологии РГМУ. Координационный Совет по
приоритетному направлению «Технологии живых систем» Министерства
науки и технологий Р Ф признал работу Каревой Е.Н. «Фармакологическая
регуляция рецепторных образований (стероидные гормоны и антигормоны)»,
выполненную
«Создание
по
новых
государственной
лекарственных
научно-технической
средств
методами
подпрограмме
химического
и
биологического синтеза» лучшей работой 2001 года.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
1. Первым этапом взаимодействия прогестерона и эстрадиола с клетками
эндометрия и миометрия является специфическое связывание стероида с
плазматическими мембранами клетки-мишени.
2. Половые
стероиды
регулируют
собственную
плазмомембранную
рецепцию и липидный состав П М клеток-мишеней.
3. Гиперпластические процессы эндометрия и миометрия сопровождаются
изменением связьгоающих
цитозольных
рецепторов
свойств как плазмомембранных, так и
прогестерона
и
эстрадиола.
Аффинитет
стероидных рецепторов к синтетическим аналогам и антагонистам
половых гормонов зависит: 1) от химической структуры вещества, 2)от
типа ткани - источника рецепторов и 3) возможной предварительной
гормональной терапии.
4. Ближайышй метаболит прогестерона - 5а-дигидропрогестерон является
натуральным антигестагеном.
Структура и объем диссерпгации
Диссертация написана на русском языке, состоит из введения, 4 глав,
выводов, списка литературы. Работа изложена на
машинописного текста, содержит
литературы включает
65
таблиц и
272
страншщх
50 рисунков. Список
50 источников на русском и 128 источников на
иностранном языках.
МАТЕРИАЛЫ И М Е Т О Д Ы ИССЛЕДОВАНИЯ
Объем
работы.
В
экспериментах
использованы
соединения,
синтезированные в лаборатории химии стероидов и терпеноидов (зав. - проф.,
Д.Х.Н. А.В. Камерницкий) института органической химии имени Н.Д.Зелинского
Р А Н - 16а,17а-циклогексано-5а-прегнан-3.20-дион, 16а,17а-циклогексано-5Рпрегнан-3.20-дион,
16а,17а-циклопропанопрегн-4-ен-3,20-дион,
16а, 17а-
циклогекс-2'-енопрегн-4-ен-3,20-дион, 16а,17а-циклогексанопрогестерон, 6аметил-16а,17а-цшсло-гексанопрогестерон,
циклогексано
-
6
дигидропрогестерон,
6а
-дигидропрогестерон,
-
метил
-
16а, 17а
-
16а,17а-циклогексано-6-
16а,17а-циклогексенопрогестерон.
В
отделе
химии
природных соединений (зав.- профессор, д.х.н. Шавва А.Г.) Н И И химии СанктПетербургского
университета
синтезированы
аналоги
8-изоэстрогенов,
переданные нам для изучения. Это 4 группы аналогов: 8-гооэстрона, метилового
эфира 8-изоэстрона, 8-изоэстрадиола и 8-изоместранола: 8-изоэстрадиол , 6окса-8-изоэстрадиол ,0-гомо-8-изоэстрадиол, 6-окса-1)-гомо-8-изоэстрадиол, 6окса-8-изоэстрон,
метил-В-гомо-8-изоэстрон,
ацетокси-4-метил-8-изоэстрон,
ацетокси-2-метил-8-изоэстрон, 8-изоэстрон,
метил-8-изоэстрона,
изоэстрона,
6-окса-1)-гомо-8-изоэстрона,
метил-В-гомо-8-изоэстрона,
D-roMo-88-
изоместранол, 2-метил-8-изоместранол, 4-метил-8-изоместранол, 2,18-диметил8-изоместранол.
Производные трифенилэтиленов, синтезированные
в
лаборатории
Д.Х.Н., профессора Г.С.Гриненко Ц Х Л С В Н И Х Ф И - 1-бензилокси-4-(1,2дифенил-2-хлорэтенил) бензол (КЛИ-418 - смесь цис- и транс-изомеров), 1,2бис(4-бензилоксифенил)-1,2-дифенилэтилен (КЛИ-423).
В качестве
препарата сравнения использован тамоксифена цитрат. В ЭНЦ Р А М Н
синтезирован и предоставлен для испытаний 11Ь-нитроокси-9а-гидрооксиэтиниюстрадиол-диацетат (нистранол) (к.х.н., Ржезников В.М.).
В работе были использована ткань маток белых беспородных крыс (576
животных). Овариэктомия вьшолнялась по Киршенблат Г.Б. (1969).
Клинический
материал
(кровь
и
биопсин)
был
предоставлен
кафедрами: акушерства и гинекологии педиатрического факультета РГМУ
(зав.- академик РАМН, профессор Г.М.Савельева); акушерства и гинекологии
лечебного факультета РГМУ (зав. - профессор, д.м.н. О.В.Макаров);
акушерства и гинекологии вечернего факультета РГМУ (зав. - профессор,
Д.М.Н. Н.В.Стрижова); акушерства и гинекологии МОНИИАГ (дир. - членкорр. РАМН, профессор Краснопольский В.И.). В ходе работы использована
ткань эндометрия, полученного при гистероскопии и диагностическом
выскабливании
кистозная
(железисто-фиброзная
гиперплазия
(ЖКГ),
гиперплазия (ЖФП), железистоатипическая
гиперплазия
(АГ),
аденокарциномы высокой, умеренной и низкой степени дифференцировки
(АКн, в, у) (405) и миометрия человека, полученного в ходе родов per via
naturalis и операции кесарево сечение (308), миомэктомии и гистероэктомии
(гистологически неизмененная ткань (ГНТМ), миомный узел (МУ) (112)).
Методы исследования.
Изучаемые
соединения
экспериментальным
животным
вводили
внутрибрюшинно в виде масляных растворов. Эвтаназию проводили под
эфирным наркозом. Полученный биологический материал исследовали
сразу или после хранения в низкотемпературном шкафу (t= -25 С) не более
3-х суток. В клеточных фракциях (ПМ и цитозоле) определяли содержание
бежа (по Лоури), связывание ^-эстрадиола (РЕ) и ^Н-прогестерона (РП)
радио-лигандным методом.
Для анализа чистоты полученной фракции
П М определяли активность маркерных ферментов ПМ,
митохондрий,
лизосом и эндоплазматического ретикулума в гомогенате тканей и в
полученной фракции П М [Арчаков А.И., 1978]. Активность ферментов
исследовали спектрофотометрическими методами. Экстракцию липидов из
фракции П М
проводили по
методу
Кейтс
М.,
качественный
и
количественный анализ - проводили, используя ТСХ и денситометрию.
Уровень гормонов в плазме крови и циклических нуклеотидов в цитозоле с помощью коьшерческих наборов (радио-иммунный анализ). Регистрацию
сократительной способности миометрия in vitro осуществляли с помощью
лампы-механотрон
типа
6МХ1С(М),
активности полосок миометрия
для
записи
использовали
сократительной
двухкоординатный
самописец N£-230. Способ определения содержания в плазме крови
метаболитов прогестерона, 5а- прегнан-3,20-диона и 5Р-прегнан-3,20-диона
(работа проведена совместно с сотрудниками отдела химии физиологически
активных веществ (зав. член-корр.РАН, профессор Мясоедов Н.Ф.) ИМГ
РАН (директор - академик РАН, Свердлов Е.Д.)): в анализируемую пробу
плазмы крови вводили меченые аналоги определяемых метаболитов,
обрабатывали пробу органическим растворителем, затем подвергали
селективной деструкции перешедшие в экстракт прогестерон и другие
ненасьпценные стероиды, которые сопутствуют определяемым, после чего
оставшиеся в обработанном экстракте определяемые метаболиты и их
меченые аналоги переводили в дансильные производные, содержание
которых в обработанном экстракте
использованием
радиоактивности,
детекторов
а
по
определяли методом В Э Ж Х
флюоресценции
полученным
данньпй
или
поглощения
производили
с
и
расчет
содержания определяемых метаболитов в плазме крови (рис.1).
Антиокислительная активность соединений оценивалась методом
регистрации ТБК-активных продуктов [Клебанов Г.И., и соавт.,1988] и
методом Ре^*- индуцированной хемилюминисценции (ХЛ) в модельной
системе многослойных липосом из липопротеидов желтка куриных яиц
методом Лопухина Ю.М.[1983]. Острую, подострую и хроническую
10
токсичность
препаратов
анализировали
стандартными
методами:
эстрогенов в ЭНЦ РАМН (д.м.н., профессор Федотов В.П.), антиэстрогенов
и пент^анов на кафедре цитологии и эмбриологии педиатрического ф-та
РГМУ (зав. - акадекшк РАМН, профессор Волкова О.В.). В работе
использованы
стандартные
методы
статистического
анализа,
с
использованием t-критерия Стьюдента или U-критерия для непарных
совокупностей Вилкоксона-Манна-Уитни [Гублер Е.В., 1978].
±JK.
i
i э 4 л it 7 i 9
,/у\.. ^
B J i s B i i i i s f f B 9 3 > i a > i i b b v s
ж к к я ж ш 1
Рис. 1. Хроматограмма эксп^акта плазмы крови, в которую
добавили по 1 мкКи За- [4,5-^Щ прегнан-3,20-диона и 5^[4,5-^Н] прегнан-3,20-диона, с последующей обработкой перекисью водорода в
щелочной среде и получением дансильных производных. Детекторы по
флюоресценции (Fluor) и по радиоактивности (Rod).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Работа проведена в рамках научно-исследовательского направления по
изучению молекулярных механизмов действия стероидных гормонов на
кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии М Б Ф (зав. - академик
РАМН, профессор П.В.Сергеев) и гранта Р Ф Ф И №00-04-49005 «Ближайшие
метаболиты половых стероидов как их антагонисты». Выделение очищенной
фракции П М
из тканей матки и радиолигандное исследование с
последующим анализом результатов по методу Скэтчарда, позволили нам
доказать, что П М клеток матки человека и крыс содержат специфические
и
места связьшания для эстрадиола (пРЕ) и прогестерона (пРП), обладающие
высоким сродством к лиганду (Касс = 0,26 - 0,52 нМ"') и ограниченным
количеством (Вищ = 0,01 - 2,5 пмоль/мг белка).
Кроме
того,
показано,
что
половые
стероиды
регулируют
собственную цитозольную и плазмомембранную рецепцию в клетке-мишени:
внутрибрюшинное введение эстрадиола овариэктомированным (о/э) крысам
(25 мкг/100 г веса) увеличивает концентрацию цитозольных Р П (цРП) (на
70%) и пРП (на 80%) в утеромиоцитах; в 3 раза увеличивает концентрацию
собственных цитозольных рецепторов (цРЕ), снижая аффинитет пРЕ (в 3
раза); прогестерон в дозе Юмг/ЮОг веса повышает аффинитет пРП (в 1,7 раз)
и не влияет на уровень цРП (таблицы 1,2).
Таблица 1. Цшпозольные и плазмомембранные рецепторы
эстрадиола в миометрии ов1^>иэктомг^ванных крыс через 24 часа после
в/бр. введения им эстрадиола (M±mt).
Наблюдение
ПЛАЗМОМЕМБРАННЫЕ РЕ
цРЕ
Вши
Кдсс
(фмоль/мг белка)
контроль
(фмоль/мг белка)
96,0 + 15,1
(нМ-')
0,31+0,067
10 мкг/100 г
79,1 +.6,5
0,21 +.0,019*
534 + 92*
25 мкг/100 г
93,2+.13,8
0,10+.0,036*
543 +.52*
167 ±23
--значение статистически достоверно отличается от контроля прир<,0,05.
Таблица 2. Цитозольные и плазмомембранные рецепторы прогестерона в
миомепд>ии овариэктомированных /д/ыс через 24 часа после в/бр.
введения прогестерона (10 мг/100 г веса) и эстрадиола (25 мкг на 100 г
веса) (M±mt).
Наблюдение
цРП
ПЛАЗМОМЕБРАННЫЕ РП
(фмоль/мг белка
КцСС
Влах
цитозоля)
(нМ-')
(фмоль/мг белка)
Контроль (масло)
96,3+9,5
0,26+0,037
121,4+14,5
Прогестерон
109.0±15.1
0,44±0,071*
85,8+16,2
Эстрадиол
176,7±18,4*
0,37+0,060
204,2+37,2*
*- значение статистически достоверно отличается от контрольного
показателя (p£J0,05).
12
Помимо влияния на собственную рецепцию, половые стероиды
изменяют липидный состав П М клеток-мишеней. Прогестерон (Р4) в дозах 515 мг/100 г веса повышает концентрацию холестерина (Хс) в 1,5 - 2,0 раза,
фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидилэтаноламина (ФЭА) на 50 % в П М
клеток матки оваргоктомированных крыс через 24 часа после введения. ПРэстрадиол (Ег) через 24 часа после внутрибрюшинного введения в дозе 25
мкг/ЮОг вызывает повышение уровня сфингомиелина (СФМ), Ф Х и Хс в
П М миоутероцитов крыс на 80, 60 и 30%, соответственно.
Корреляционный
анализ
между
силой связывания
стероидов
с
плазмомембранными рецепторами и характеристиками липидного бислоя
П М продемонстрировал тесную отрицательную корреляционную связь
между Касс пРЕ с показателем [ХС]/[1;ФЛ] (к = - 0,82) и Касс пРП с
соотношением [Хс+СФМ]/[ФХ+ФЭА] (к = -0,76). Следовательно, одним из
способов модуляции связьгоающих свойств плазмомембранных рецепторов
является изменение липидного матрикса плазматических мембран под
действием половых стероидов.
Изучение
молекулярных
механизмов
действия
антигормонов
позволило выявить следующее: антагонисты женских половых стероидов
(тамоксифен и мифепристон) конкурируют с эстрадиолом и прогестероном
уже на уровне плазмомембранных рецепторов клетки-мишени, что является
быстрым и ранее неизученным механизмом их действия (RBA«30-40%,
соответственно).
Исследование ранних (мембранных) эффектов стероидов показало,
что инкубация Ег со срезами миометрия крыс (10 нМ, 15 минут) вызывает
повышение уровня цАМФ в цитозоле миоутероцитов (рис.2) и увеличение
включения меченого арахидоната во фракцию С Ф М - одного из структурных
фосфолипидов П М (1нМ, 5 минут инкубации) (рис.3).
Такие быстрые эффекты эстрадиола не являются геномными и,
очевидно, опосредуются плазмомембранными рецепторами.
13
Таким образом, нами в опытах на экспериментальных животных
показано, что гетеро- и гомоспецифическая регуляция рецепции женских
половых стероидов осуществляются, по меньшей мере, двумя механизмами:
Рис.2. Влияние натуральных эстрогенов (10 иМ, 15 минут инкубации со
срезами) на уровень цЛМФ в цитозоле миометрия крыс(М±т1, р<р.05).
ЕгтШШШШШШВ
*
Е2 шШШВШШШШШВ
Е1 ^ЦЦЦЩЩЦр
Контроль B I B H ^ H H P
У
j T
0
50
100
150
■ цАМФ (пмоль/мг белка цитозоля)
Рис.3. Влияние Е2 (1 нМ, 5 минут) на включение С-арахидоновой
кислоты в липиды ткани маток о/э крыс (% от введенного в среду
меченого арахидоната, M+mt, р<0.01).
« / ■
вФЛ
СФМ(%)
ФХ(%)
ФЭА(%)
■ контроль аЭстрадиол (1нМ)
1) изменение конценпграции рецепторов; 2) модуляция аффинитета
мембранных
14
рецепторов
за
счет
изменения
липидного
состава
плазматических
мембран.
дополнительного
активащм
Еще
экспериментального
системы
вторичных
одним
механизмом,
требующим
подтверждения, может
посредников,
с
служить
последующим
фосфорилированием рецепторных молекул.
Оценка параметров специфического связывания половых стероидов с
плазматическими мембранами и цитозольными рецепторами клеток матки
человека
при
их
патологическом
преобразовании
показала,
что
гиперпластические процессы эндометрия и миометрия сопровождаются
изменением функционирования как плазмомембранных, так и цитозольных
РЕ и РП (рис.4, 5).
Рте. 4. Парамттра рвпвоцю! 9страдколл м
атдонтржж
прш ттптраяшашя у
тщштиток
постчтяопауаальяохю
шозршетш(рйО,05)
жкг
ЖФП
Высокодиф.АКН-, умереннодиф.АК
■ B K a c c E R (100хнМ-1)
C^BmaxER (фМ/мг белка)
-•-сКЕ(фМ/мг белка)
Как
видно
увеличивается
из
в
диаграммы (рис.4), константа
ряду:
высокодифференцированных
ПМ
ассоциации
пРЕ
железисто-фиброзных-полипов<ПМ
аденокарцином<ПМ
железисто-кистозных
полш10в<ПМ низко- и умеренно-дифференцированных
аденокарцином
эндометрия. Количество мест связывания эстрадиола в П М имеет тенденцию
15
к уменьшению со снижением степени дифференцировки ткани. Наибольший
уровень цитозольнои рецепции Ег отмечен в ткани железисто-кистозных
полипов эндометрия.
Рис.Б. Парамвтри рвцепцяя прогвстврояа
в
эндометрии при гиперплазии у пацивяток
постмеиопаузалшного
возраста (рйО, 05)
ЖКГ
ЖФП
В ы с о к о д и ф . А К Н-,умереннодиф.АК
I^KaccPR(lOOxHM-l)
^DBmaxPR (рМ/мг белка)
-»-сРК(фМ/мг белка)
Значения
Втах
связывания
Р4
плазматическими
мембранами
прогрессивно уменьшаются по мере снижения степени дифференцировки
ткани; Касс, наименьшая при Ж Ф П (0,26 + 0,061 нМ"'), при всех остальных
патологиях она увеличивается примерно в 2 раза. Уровень цРП имеет
тенденцию к уменьшению со снижением степени дифференцировки ткани.
Для
оценки
рецепции
женских
половых
стероидов
принято
использовать показатель РП/РЕ, отражающий баланс разнонаправленных
гормональных влияний. На рис. 6 приведены коэффициенты РП/РЕ в
цитозоле и П М эндометрия при гиперплазии. Значение коэффициента в
цитозольнои фракции ткани Ж Ф П равно 2,4 и резко снижается (в 5-6 раз) в
16
тканях
других
нозологических
форм
гиперплазии
эндометрия.
В
плазмомембранной фракции отмечено снижение показателя РП/РЕ в тканях
ЖКГиАКн.у.
РиаМб. Коэффициенты РП/РЕ в эндометрии при гиперплазии у
пациенток постменопаузального возраста (р<0.05)
3
2,5
2
1,5
1
0,5
О
РП/РЕ цитозоль
РП/РЕ ПМ
■ЖФП ИЗИСГ В В ы с о к о д и ф . А К И Н - . у м е р е н н о - д и ф . А К
Проведенный анализ рецепции половых стероидов, липндного спектра
плазматических
продемонстрировал
мембран,
близость
гормонального
показателей
у
статуса
больных
пациенток
с
железисто-
кистозными полипами и больных с низко-, умеренно-дифференцированными
аденокарциномами, что
позволило отнести пациенток
с железисто-
кистозными полипами эндометрия в постменопаузальном возрасте к группе
высокого риска развития рака эндометрия, что предопределяет тактику
лечения этих больных.
В миометрии мы также наблюдали изменение рецепции половых
стероидов (рис. 7). Тенденции изменения п{Ц)аметров плазмомембранной
рецепции стероидов повторяют ситуацию в эндометрии: при снижении
степени дифференцировки - в миомном узле - отмечено снижение
количества мест связывания (прогестерон) и увеличение аффинитета
стероидных рецепторов.
17
Р х с . 7 . Параметри
ртцвпцяя
зстраджола
прогестерона
в мионе^ркя
челояека
90
80
70
60
50
40
30
20
10
О
*
гИГ
Т
т
г^^МД
1
'Ф-п.щя
* *
200
180
160
140
-- 120
'"'fh
100
aii^h
80
*
•5- Ш
60
40
п/А
20
m—
Е ' '-'
О
гнтм
и
г
IKacc R E { 1 0 0 X H M 1)
|в>—iBmaxER (фМ/мг
белка)
КШШКасс RPdOOxHM1)
■ ■ ■ B m a x P R (рМ/мг
Селка)
— * — C R E (фМ/ мг
белка)
—О—cRP
Ж
cER/cPR
МУ
* ** - Значение достоверно отличается от аналогичного параметра в
гистологически не измененном миометрии при р<0,01, 0,05,
соответственно.
Концентрации цитозольных рецепторов эстрадиола и прогестерона
достоверно увеличиваются в ткани миомного узла (МУ) по сравнению с
гистологически не измененньпл миометрием (ГНТМ).
Результаты исследования активности фосфолипаз Аг и С в миометрии
при миоме представлены на рис.8.
Рис8.Акти9ность фосфолипаз AjuCs миометрии
при миоме (M+mt, р<0,05)
У
35]
30
1
1
25
20
^шЗВК ^Ж'
15-
1
10
5
0
[В^Я-
•Д-А2
ВВв ^1
вму 1
агнм|
«л-с
Из приведенных данных видно, что ткань МУ характеризуется достоверным
повышением активности фосфолипазы С и, как результат, увеличением
18
уровня диацилглицерола
в
ПМ.
Полученные
данные
совпадают
с
литературными данными об активации фосфолипазы С в опухолевых тканях
(Савицкий Г.А., 2000). Следовательно, отдельные сдвиги липидного спектра
П М клеток миометрия при опухолевом росте определяются изменением
активности фосфолипазы С.
Активность маркерных ферментов П М клеток миометрия приведена на
диграмме (рис.9)
Рис9. Активность маркерных ферментов плазматических мембран
миометрия человека (мкг Р1/15минут/мг белка, р<р,001).
300
т
*
■
2 50 2 00
-
15 0 10 0 5 0
Л
-
в ы п а д
е н и е
I1
■
Ш-.
{ ■ 1 5 * 1 1 у х л « о Ф и д « 8 «
ГНТ
мио м а
O N a - K - A T P a a *
1
Активность Na*-K*-ATPase в П М ГНТМ, миометрия при выпадении
матки и М У достоверно не различалась. В то же время, активность 5'нуклеотидазы была наибольшей в П М ГНТМ и наименьшей в П М миомного
узла. Низкий уровень активности 5'-нуклеотидазы, по-видимому, отражает
энергетическую задолженность ткани.
В исследованных образцах ткани миометрия определяли содержание
цАМФ и цГМФ (табл.3). Достоверной разницы в уровне цАМФ выявить не
удалось. В то же время количество цГМФ в ткани М У значительно выше,
чем в окружающем миометрии и миометрии при выпадении матки.
19
Таблица № 3. Уровень циклических нуклеотидов в ткани миометрия
человека (M±mt).
(пмоль/мг белка)
цГМФ
(пмоль/мг
белка)
цАМФ/цГМФ
5,4±1,1
1,02+0,14
5,2
6,4±0,9
1,44+0,17
4,4
8,2+3,4
2,47±0,09*
3,3
цАМФ
Миометрнй при
выпадении
матки
Гистологически
неизмененный
миометрнй
Миомный узел
(М/М)
'•-значение статистически достоверно отличается от показателя
гистологически неизмененной ткани миометрия прирй0,05.
Соотношение уровней циклических нуклеотидов в ткани отражает ее
пролиферативную активность - наименьшее значение этого параметра
отмечается в ткани МУ.
Таким образом, нами установлено, что при опухолевом преобразовании
изменяется липидный матрикс П М клеток миометрия, активность 5'нуклеотидазы, фосфолипазы С, уровень цГМФ и нарушается процесс
"узнавания" тройных гормонов на уровне ПМ. Рецепция стероидов П М в
клетках миомы характеризуется снижением количества связывающих мест
для прогестерона при неизмененном связывании эстрадиола (ВпихЕ2/ВпихР4 - в
2,5 раза выше во фракции П М миомы по сравнению с ПТГМ). При этом
наиболее
информативным
показателем
развития
гиперпластических
процессов в миометрии является изменение плазмомембранной рецепции
прогестерона.
У пациенток детородного возраста указанные тенденции в изменении
рецепции стероидов в тканях матки при гиперплазиях сохранялись. Именно в
этой возрастной группе нами было изучено влияние гормонотерапии на
рецепторный статус эндометрия при атипической гипергшазии. Длительное
применение гестагенов зачастую приводит к смене первоначального
20
положительного эффекта лечения на толерантность к вводимым препаратам.
Одна из причин развития толерантности - резкое снижение цитозольной и
плазмомембранной рецепции прогестерона в ткани эндометрия после 3-6
месяцев гестагенотерапии (рис.10).
РисЮ. Влияние гестагенотерапии на рецепцию эстрадиола и
прогестерона в цитозоле и плазматических мембранах эндометрия при
атипической гиперплазии ф<0,01)
cRE
cRP
ВАтипическая гиперплазия до гестагенотерапии
ОАфипическая гиперплазия после
гестагенотерапии
Очевидно,
что
для
преодоления
толерантности
ткани
к
гестагенотерапии необходимо чередование/сочетание курсов указанного
лечения с назначением препаратов, стимулирующих синтез и экспрессию
рецепторов прогестерона (тамоксифен).
Особый интерес рецепторный анализ вызывает в ситуации, когда
гистологически ткань не изменена, а ее функция резко снижена. Пример слабость родовой деятельности (СРД). Анализ литературных источников
показал, что отсутствуют не только данные о плазмомембранной рецепции
стероидов, но и очень мало сведений о цитозольной рецепции Ег и Р4 в
миометрии беременных, в динамике же родов - рецепторы не изучались
совсем.
21
Рис.11. Уровень цитозольных рецепторов эстрадиола и прогестерона
(фмоль/мг белка) в миометрии при физиологических родах и при
слабости родовой деятельности.
Рецепторы эстрадиола
Рецепторы прореотерона
(р<0,001).
(piO,001) .
СРД
Виахаиуиа родов ВлаФМстмАя фа«« Люкттилж фа8«
На рис.11 представлено изменение уровня цитозольных Р Е и РП в
миометрии в динамике физиологических родов и при СРД.
Прогрессивное снижение уровня цРЕ и 2-х кратное увеличение
концентрации цРП в активную фазу - таков диналшческий профиль рецепции
стероидов при физиологических родах. Очевидно, что чувствительность
миометрия к половым стероидам вовлечена в инициацию и развитие родов.
При слабости родовой деятельности динамика рецепторов иная: уровень
Р Е возрастает, концентрация же РП увеличивается не столь значительно как
в контроле. Более информативным показателем чувствительности ткани к
половым
стероидам
является
коэффициент
РП/РЕ
-
отражающий
опозиционные отношения эстрадиола и прогестерона (рис.Я). Видно, что
динамика коэффициента РП/РЕ при СРД значительно отличается от
физиологических родов. Более того, полученные данные позволили нам
ввести
дополнительный
критерий
миометрия: оптимальное соотношение
функциональной
полноценности
РП/РЕ перед родами находится в
пределах от 1,0 до 2,0. Выход параметра за указанные границы грозит
развитием
аномалии
родов.
При слабости
коэффициент РП/РЕ накануне родов составил 2,6.
22
родовой
деятельности
Puc.9ci. Соотношение концентраций рецепторов прогестерона и
эстрадиола в цитозоле миометрия в динамике родов (р< 0,05)
Слабость родовой
деяфедьвосфи
Физиояох<ическив
роды
РП/РЕ
■какаяуие родов Влатвятяая фааа
■активная фаза
Для коррекции нарушенного баланса чувствительности миометрия к
женским половым стероидам накануне родов при СРД необходимо либо
увеличить влияние эстрогенов (что является проблематичным), либо
подавить действие прогестерона. Единственный антигестагенный препарат,
используемый в нашей стране в акушерско-гинекологической практике мифепристон (Мифегин).
Нами показано, что мифепристон после суточной инкубации в дозе 10"^М
стимулирует сократительную деятельность миометрия беременных крыс и
миометрия пациенток при физиологических родах и при слабости родовой
деятельности, достоверно повышая амплитуду и частоту сокращений
(рисЛО^.
К
тому
же,
нами
показано,
что
мифепристон
повьппает
чувствительность миометрия беременных крыс и рожениц к окситоцину. До
настоящего времени мифепристон использовался в качестве абортивного и
антиглюкокортикоидного препарата.
23
PUCIOQ. Влияние AT (Iff M)
на спонтанную сократительную
деятельность миометрия рожениц после суточной инкубации (M±mt),
*
5i
^
4
В
^^Н *
3
2
■И
IHIi
Няа
Кстроль
Мяфеприсгон
.
•
ш
\i■
rita
16альфа,17альфа- 1б!шьфа,17аль4»ииикгасаноципмгенсано5аль4»Збпа-препонЗ^ОЩ)егяан3.20-дня
диен
■Амплшула ВЧасюта
- Амплитуда ~ гр; Частота - сокращение/мин.
*- значение статистически достоверно отличается от контрольного
показателя (р_< 0,05).
Исходя из механизма действия мифегина, нами совместно с
сотрудниками кафедры акушерства и гинекологии МОНИИАГ
была
предложена и апробирована схема подготовки к родам антигестагенами
(мифегином) при доношенном сроке гестации у беременных, относящихся к
группе
высокого
риска
по
развитию
нарушений
сократительной
деятельности матки: 1.Мифегин (мифепристон) по 200 мг в день перорально с
интервалом 24 часа в течение двух дней; 2.Через 48-72 часа проводилась
повторная оценка состояния шейки матки; 3. Для дальнейшей подготовки и
индукции родов назначался сайтотек (простагландин Ei )в дозе 200мкг
однократно перорально.
Положительный эффект от подготовки - созревание шейки матки - был
получен в 100% наблюдений. У 84% беременных роды закончились через
естественные родовые пути, тогда как без подготовки все пациентки были
кандидатами на абдоминальное родоразрешение. Мифегин нормализует
24
соотношение RP/RE в миометрии и не оказывает отрицательного влияния на
состояние женщин и новорожденных. Расчет экономического эффекта
показал, что роды через естественные родовые пути с применением
мифегина на 40% дешевле, чем родоразрешение путем операции кесарево
сечение. Т.о. полученные нами результаты исследования цитозольной
рецепции женских половых стероидов в миометрии и механизмов действия
мифепристона помогли нам обосновать патогенетическую коррекцию СРД.
Анализ П М рецепции в этом случае был нам недоступен в связи с
недостаточным объемом биопсийного материала.
Таким образом, мы еще раз убедились, что практически все процессы в
тканях женского репродуктивного тракта сопровождаются изменения*ш
рецепции половых стероидов. При этом именно чувствительность ткани к
стероиду, а не уровень гормонов в циркулирующей крови,
является
решающей. Более того, нами показано, что патологическому преобразованию
ткани (гиперплазия и опхолегенез) сопутствуют изменения параметров
рецепции - не только количества рецепторов, но и силы связывания натуральных стероидов. Логично предположить, что такое изменение
связывающих
свойств
рецеттторных молекул распространяется
и на
синтетические аналоги и антагонисты женских половых стероидов.
С помощью химической модификации молекулы стероида можно
направленно изменить селективность связывания вещества с цитозольными
и плазмомембранными рецепторами.
Эстрогены.
Анализ результатов длительной заместительной терапии эстрогенами
пациенток в постменопаузе показал, что изолированное введение эстрогенов
увеличивает
вероятность
неопластического
преобразования
тканей
репродуктивного тракта. Риск возникновения рака эндометрия у женщин,
когда-либо применявших эстрогены, возрастает в 2,3 раза и прямо зависит от
дозы и длительности их применения [Harlap S., 1992]. Наряду с этим.
25
эстрогены обладают гипохолестеринемической активностью,
вызывают
уменьшение уровня липопротеидов низкой плотности, повышение уровня
липопротеидов высокой плотности [Koeijk С , 1994], а также снижают
проницаемость сосудистой стенки для атерогенных липопротеидов [Miller V.
et al., 1991]. С влиянием эстрогенов на липидный обмен связано снижение
риска развития атеросклероза и его осложнений при заместительной
ropMOHOTepamiH[Collins Р., 1994; Makela S , 1999; Dubey RK, 2002].
Очевидна
актуальность
поиска
препаратов
с
заданным
фармакодинамическим спектром - минимальной эстрогенной и выраженной
гиполипидемической
активностями. Предполагается, что
такого рода
соединения, окажутся препаратами выбора у женщин в постменопаузе для
целенаправленной коррекции симптомов климактерия без выраженных
побочных (гиперплазия эндометрия) эффектов.
Изученные нами соединения и их свойства представлены в табл.4, рис.11*.
Относительная связывающая активность (ОСА) препаратов с цРЕ была
использована нами для первичного отбора аналогов 8-изоэстрогенов. В
соответствии с поставленной задачей, нами были отобраны вещества,
обладающие наименьшей способностью конкурировать с Ег за связывание с РЕ.
Полученные результаты позволили выделить по этому критерию две группы
соединений - аналоги 8-изоместранола и метилового эфира 8-изоэстрона для
дальнейшего фармакологического анализа. Эстрогенная активность эстрона
(эталонного вещества) превосходит таковую в группе аналогов метилового
эфира 8-изоэстрона в 3.7,4.4, 5.2, 7.4 раза и в группе аналогов 8-изоместранола
в 3.0, 3.7, 11.7, 18.5 раз (соответственно расположению в таблице 4). После
отбора соединений с минимальной эстрогенной активностью, нами была
проведена оценка гиполипидемического действия указанных двух групп
препаратов.
2«
Оказалось, что производные местранола практически не влияют на
уровень холестерина (Хс) и триащшглицеридов (ТГ)
в плазме крови
овариэктомированных крыс после 3-х дневного введения.
Рис11».Спдгукщура аналогов 8-тоэсп^огенов.
(СН2)п
Из всех изученных аналогов метилового эфира 8-изоэстрона метиловый
эфир
6-окса-В-гомо-8-изоэстрона
проявил
наиболее
выраженную
гиполипидемическую активность (снижает содержание Хс и ТГ в плазме крови
у овариэктомированных животных во всех изученных дозах (0,01-1,0 мг/кг)).
Следующим шагом в процессе отбора явился рецептротропный анализ влияние препаратов на уровень цРЕ в клетке-мишени. В данном случае
преимущество получат соединения снижающие уровень цРЕ в миометрии, так
как это означает снижение чувствительности органа-мишени к действию
эстрогена и, как следствие, снижение вероятности проявления такого грозного
побочного
явления
заместительной гормонотерапии, как
гиперплазии
эндометрия. Из приведенных в таблице № 4 данных видно, что
лишь
метиловый эфир 6-окса-0-гомо-8-изоэстрона достоверно снижает уровень цРЕ
в обеих изученных дозах. 3-х дневное введение этого соединения не вызывает
достоверного изменения параметров связывания пРЕ и липидного спектра П М
миометрия крыс.
Анализ структурно-функциональной связи в ряду производных 8изоаналогов эстрогенов позволяет нам утверждать, что снижение эстрогенной
27
Таблица 4. Отдельные свойстваВ-изоаналогов эстрогенов.
N Аналоги
I
Ri
R2
8-изоэстрадиола:
н
8-изоэстрадиол
он
п А:
ОСА,
н
1 СН2
8,98
4,37
Rs
R4
и
2
D-roMO-8-изоэстрадиол
н
он
н
н
3
6-OKca-D-roMO-8-
н
он
н
н
2
н
он
н
н
1
0
0159
4
5
6
7
8
изоэстрадиол
6-окса-8-изоэстрадиол
метш1-0-гомо-8-
8-изоэсщюна:
изоэстрон
ацетоксв
2-метил-8-
изоэстрон
ацетокси-4-метил-8взоэстрон
6-окса-8-изоэстрон
0
он
н
н
2
сш
0.190
н
сюсо
сю
н
'
СН2
0.152
н
юсоо
н
сю
1
cm
0.175
н
он
и
н
1 0
0.201
метилового эфира 8-изоэс
mpotta:
270,0*
239,1»
0,318
сю
0
**РЕ
%
2
сю
*Е
н
СИЗО
н
н
1 СН2
0.103
0,100
10 мешл-8-изоэс1рон
сю
СИЗО
н
н
1 СН2
0.072
0,120
И
н
СИЗО
н
и
2
сю
0,023
0,140
сю
снзо
н
н
2
сш
0.017
0,150
н
СИЗО
н
и
2
0
0.005
0,200
9
8-изоэстрон
D-roMo-8-изоэстрон
12 метил-15-гомо-8изоэстроя
13 6-OKca-D-roMO-8изоэстрон
14 8-из(шестранол
8-изоместранола:
15 2-метш1-8изоместранол
16 4-метил-8-
изоместранол
17 2,18
-димегил-8-
изоместрааол
н
снзо
н
н
1
cm
0,010
0,080
н
сюо
сю
н
1
сю
0.003
0,100
н
снзо
н
сю
1
сю
0.002
0,300
н
сюо
н
н
1
сш
0.001
0,500
195Л*
206,7»
62,9»
206,7»
293,9»
306,9»
48,7»
60,6»
*Е - эстрогенная активность - ДОЗЫ, увеличивающие вес матки
неполовозрелых мышей в 2 раза (мг/кг/день). Препарат сравнения эстрон =
0.027.
**РЕ - цРЕ миометрия овариэктомированных крыс через 24 ч. после
однократного введения аналогов 8-изоэстрона в дозах 0,1 и 1,0 мг/кг (в %
относительно значений в контрольной группе)
ОСА =[концентрация Е;, обеспечивающая вытеснение связанного с
рецепторами ^Н-Ег на 50%] /[концентрация аналога, обеспечивающая
вытеснение связанного с рецепторами ^H-Ez на 50%]*100%.
28
активности вещества определяется введением кислорода в шестое положение
стероидной молекулы, а повышениегаполипидемическихсвойств зависит от
наличия эфирной группировки.
Таким образом, фармакологический анализ 17 структурных изоаналогов
эстрогенов
позволил нам выделить метиловый эфир 6-окса-В-гомо-8-
изоэстрона,
проявляющий мягкое эстрогенное
действие (утеротропный
эффект), снижающий уровень цЕР в миометрии и обладающий высокой
гиполипидемической активностью. Указанные свойства отвечают требованиям
к препаратам гормонозаместительной терапии пациенток с посткастрационным
синдромом и женщин постменопаузального периода, относящихся к группе
высокого риска развития атеросклеротических процессов.
С другой стороны, продолжается поиск высокоэффективных эстрогенов
для создания новых оральных контрацептивных средств. Гормональная
контрацепция является наиболее эффективным современньш методом
предохранения от беременности. Практически все доступные коммерческие
оральные
контрацептивы
имеют
нежелательные
побочные эффекты,
возникновение которых вызвано нарушением эстроген-прогестеронового
баланса у пациенток [Collins Р and Webb С, 1999], что определяется
эстрогенным компонентом препаратов. В тоже время полное отсутствие или
значительное снижение доли эстрогенного компонента в препарате приводит
к резкому снижению его контрацептивной активности. Поиск новых
синтетических эстрогенов, воздействующих в основном на периферическое
звено регуляции фертильности (рецепторный аппарат клетки-мишени)
позволит снизить вводимую дозу препарата и, следовательно, степень
выраженности побочных эффектов, при сохранении контрацептивной
активности.
11Ь-нитроокси-9а-гидроокси-этинилэстрадиол -диацетат (нистранола)
(рис. 12) создан в ЭНЦ РАМН и предложен нам для исследования.
29
Для выяснения возможностей клинического использования нового
вещества
нами
было
изучено
эстрогенное,
антифертильное
и
рецепторотропное действие этого соединения.
Рис.12. И^нитроокси-Эа-гидрокси-зтинилэстрадиол-диацетат
(нистранол)
ОСОСН,
—сен
НзСОСС
Сравнительный анализ антифертильной и эстрогенной активности
нистранола и этинилэстрадиола - эстрогеняого компонента большинства
комбинированных оральных контрацептивов - показал, что доза нистранола,
необходимая для предупреждения беременности, в 24.5 раза ниже по
сравнению с этинилэстрадиолом. По показателю эстрогенной активности
нистранол превосходит этшгалэстрадиол в 4.5 раза.
Данные изучения влияния нистранола на клеточное звено регуляции
фертильности приведены в табл.№5.
Табл. J6S. Уровень ЕР и ПР в цитозольной фракции миометрия крыс nqtes
24 ч. после однократного введения нистранола (в фмоль/мг белка)
Доза,
мкг/кг
0
0.1
1.0
матка
43.8±15.3
18.4±8.3*
19.1+6.7*
ЕР
яичники
20.б±14.2
19.7+12.6
21.1+13.1
матка
132.6±16.1
235.8+57.6*
155.5±54.6
ПР
яичники
36.8+14.8
45.7+14.2
27.3+13.5
* - статистически достоверное отличие от значений в контрольной
группе, прир^.05.
Однократное введение нистранола в обеих дозах резко снижает (в 2
раза) уровень РЕ в миометрии белых крыс. В дозе 0.1 мг/кг нистранол
30
вызывает значительное увеличение количества рецепторов прогестерона в
ткани матки; при повышении дозы до 1.0 мг/кг отмеченный эффект исчезает.
Исследование относительной связывающей активности нистранола
показало, что этот новый эстроген практически не связывается с РЕ.
Отсутствие у нистранола способности конкурировать с эстрадиолом за
связывание в цитозольной фракции ткани матки in vitro и наличие
значительного рецепторотропного действия in vivo, наряду с выраженньпи
эстрогенным эффектом, позволяет предположить, что нистранол проявляет
свое эстрогенное действие либо превращаясь в активный(е) мегаболит(ы),
который(ые)
взаимодействует(ют)
с
цитозольньпю!
РЕ,
либо
воздействует(ют) на другие структуры клетки. Приведенные данные
позволяют
утверждать,
что
при отборе
препаратов
с эстрогенной
активностью необходимо использовать сочетание методов исследования in
vivo и in vitro для избежания ложно отрицательных результатов.
Нистранол по показателям эстрогенной и антифертильной активности и
вьфажеиному влиянию на связывание половых стероидов в ткани матки
является предпочтительнее этинилэстрадиола. Новый контрацептивный
препарат, содержащий в качестве эстрогенного компонента нистранол, и
гестагенного - ацетомепрегенол (ЦХЛС-ВНИХФИ), получил название
яитрогест.
Сравнительный
анализ
влияния
(этинилэстрадиол+ацетомепрегенол)
и
миометрии
крыс
оварюктомированных
нитрогеста,
тризистона
эгестренола
на уровень РЕ
- показал, что
в
препараты,
содержащие нистранол и ацетомепрегенол, проявляют более высокую
активность, по сравнению с тризистоном, выражающуюся в подавлении
цитозольного связывания эстрадиола в миометрии (табл.№6).
Следовательно,
яитрогест
по
изученному
параметру
имеет
преимущество перед тризистоном.
31
Таблица Мб. Уровень цРЕ в миометрии овариэктомированных iq}bic
через 24 ч. после одно/дуатного введения тризистона, эгестренолй и
ншпрогеста (М±т, п<^10).
Соединение
цРБ ( фмоль/мг белка)
Эстрогевный/Гестагенный компонент мкг/кг
Растворитель
33,9±6,0
Тризястов
4/20 мкг/кг
8/40 мкг/кг
114,6+5Д
67,9±13.5»
Эгестренол
4/80 мкг/кг
8/160 мкг/кг
53,1±11,1*
13,^,9*
Нитрогест
4/20 мкг/кг
8/40 мкг/кг
33.3±0,7**
31,0±9,1**
*- статистически достоверное отличие от контроля прир<0.05,
**- статистически достоверное отличие от тризистона прир<0.05.
На
основании
антифертильной
рецепторного
активности
анализа
показана
in
vivo,
эстрогенной
перспективность
и
клинического
использования соединения - 11р-нитроокси-9а-гидрокси-этинилэстрадиолдиацетата
(ннстравола),
обладающего
сильным
эстрогенным
и
антиффгильным действием, в качестве компонента комбинированного
контрацептивного средства (нитрогест).
Антиэсп^гены.
Еще
одним
аспектом
нашей
работы
явилось
использование
рецепторного анализа в сочетании с изучением фармакологических свойств
препаратов дня отбора эффективных антиэстрогеняых веществ. В настоящее
время из всех антиэстрогенных препаратов наибольшее значение в
клинической практике находят производные трифенилэтиленов, в частности
тамоксифен [McDonnell DP., 2002]. Тамоксифен используют в лечении рака
молочной железы, дисфункциональных
метроррагиях
и
андрогенной
недостаточности у мужчин. Наличие неблагоприятных побочных эффектов у
большинства автиэстрогенов (в том числе развитие гиперпластических
процессов в эндометрии) свидетельствует о необходимости продолжения
поиска новых селективных соединений с минимальными побочными эффек-
32
тами. Нами изучены новые производные трифенилэтиленов - 1-бензилокси-4(1,2-дифенил-2-хлорэтенил)бензол (КЛИ-418 - смесь цис- и транс-изомеров),
1,2-бис(4-бензилоксифенил)-1,2-дифенилэтилен
(КЛИ-423)
(рис.13).
В
качестве препарата сравнения использован тамоксифена цитрат.
Рис.13. Структура производных трифенилэтиленов.
СбШШСО
Все изученные производные трифенилэтиленов увеличивают уровень
цРЕ и цРП в миометрии овариэктомированных крыс. КЛИ-423 в дозе 10
мг/кг в большей степени, по сравнению с другими представителями данного
ряда,
увеличивает
связывание
эстрадиола
и
в
меньшей
степени
прогестерона. Наименее выраженное влияние на уровень цРЕ в миометрии
крыс обнаружено у тамоксифена.
В связи с тем, что антиэстрогены используются в клинической практике
преимущественно для коррекции эстрадиол-зависимых патологических
процессов, нами изучена относительная связывающая активность веществ с
цРЕ тканей матки при гиперплазии. Производные трифенилэтиленов более
активно вытесняют 'Н-эстрадиол из связи его с цЕР опухолевой ткани
миометрия по сравнению с цЕР ГНТМ (табл.№7).
Из
всех
изученных
антиэстрогенов
наибольшей
способностью
конкурировать с эстрадиолом за связывание с РЕ независимо от вида ткани
обладает транс-изомер КЛИ-418 (КБ-транс).
33
Та6л.№7. Способность производных трифенилэтилена
конкурировать с
эстрадиолом за связывание с ццитозольными
рецепторами
эстрадиола
ткани
миоматозных
узлов и
гистологически
неизмененного миометрия человека (М+т)
ТКАНЬ
Относительная конкурентная способность
ТАМ
гнтм
МУ
КЛИ-418
КБ-цис
КБ-транс
КЛИ-423
0.07+0.01
0.17+0.04
0.10+0.03
0.27+0.08
0.06±0.01
0.36±0.09*
0.68+0.12*
0.24+0.07
0.95+0.14*
0.21+0.02*
*- статистически
достоверное отличие от контроля, прир<0.05, п=15.
Как видно из представленных в табл. XsS данных, транс изомер КЛИ-418
вытесняет эстрадиол более активно, чем цис-, или смесь изомеров, тогда как
цис- изомер превосходит транс- по этому показателю в аналогичной фракции
железисто-фиброзных полипов.
ТаблМ8.
Относительная
связывающая
активность
некоторых
производных
трифенилэтиленов
с
цитозольными
рецепторами
эстрадиола патологически тмененного эндометрия (М±т ).
Вид
патологии N
эндометрия
ЖФП
14
Относительная связывающая активность (%)
КБ-цис
КБ-транс
КЛИ-418
ТАМ
16.7+1.8
28.2+2.1
10.8+0.8*
20.0+3.9
жкг
14
30.3+3.6
21.5+2.3*
48.4+3.7*
38.3+4.6
14
9.8+0.4*
7.5+0.7
10.6+1.8*
5.2+0.5
Низков
умеренно
днфференц.
аденокарцивома
*- статистически
достоверное отличие от тстоксифена, прир<0.05.
Приведенные данные демонстрируют, что как мы и предполагали, при
гиперпластических
процессах
эндометрия
изменяется
способность стероидных рецепторов по отношению
к
связывающая
синтетическим
антагонистам.
Таким образом, нами показано, что 1СБ-транс по антиэстрогенной,
рецепторотропной и относительной связывающей с Р Е активностям является
перспективным соединением для терапии железисто-кистозных полипов и
аденокарцином эндометрия.
34
Гестагены.
Терапия гиперпластических процессов эндометрия включает, как
обязательный компонент, гестагены. К сожалению, наиболее активные
гестагены обладают рядом неблагоприятных побочных эффектов (нарушения
липидного
и
углеводного
обменов,
свертывающей
системы крови,
андрогенное действие и т.д.). Поэтому создание новых гестагенных
препаратов остается на повестке дня. Нами изучены препараты нового класса
модифицированных гестагенов - прегна-В'-пентаранов (Рис.14).
Рис.14. Структура прегна-О'-пентаранов.
О
Все изученные пентараны в дозе 1 мг/100 г массы обладают высоким
утеротропным действием в опытах на неполовозрелых мышах-самках (10-12
г), сравнимым с эффектом Р4 в дозе 10 мг/100 г массы (табл. №9).
Однократное введение изучаемых веществ в дозе 1 мг/100 г
овариэктомированным крысам, практически не оказывая влияния на коли­
чество мест связывания для ^-прогестерона в П М клеток, значительно
увеличивает их сродство к прогестерону.
Анализ
относительной
связывающей
активности
пентаранов с
рецепторами прогестерона позволил утверждать, что самым эффективным из
исследованных
веществ
оказался
-
6а-метил-16а,17а-циклогекса-
нопрогестерон (II). Его способность конкурировать за связывание с РП
максимальна среди изученных пентаранов как в цитозоле (17,8%), так и в
ПМ (12,5 % ) миометрия крыс.
35
Таблица М9. Структурные
особенности пентаранов
№
Соединеввс
Двойн
ая
свазь
I
16а,17ашшлогексавопрогестеров
-
П
ба-метш1-1ба,17аци]Шогексаяо1фОгестеров
Ш
R
и их свойства.
yxqxrrропная
ахтивВ0СТ1(%)
цОСА
пОСА
К«хпРП
(н\Г')
Н
108,4
3,8
11,9
0,8+0,1*
-
СНз
109,6
12,5
17,8
0,8+0,1*
6а-метил-16а,17аштюгексано-бдегцдропрогестерон
6
СНз
109,5
8,1
5,4
0,5+0,1*
ГУ
16а, 1 Та-пшшогексано-бдещдропрогестсров
6
Н
108,5
0,5
1,3
0,5+0,1*
Y
16а,17ациклогехсенопрогестерон
3'-
Н
106,7
0
10,6
0,4+0,07
4'
- утеротропная активность
в дозе 1 мг/ЮОг массы в % (за 100%
принят эффект прогестерона в дозе 10 мг/100г массы);
- Касс пРП - константа
ассоциации плазмомембранных рецепторов
прогестерона миометрия крыс; * - отличия от контроля (0,2±0,03)
прир<0,05.
- цОСА, пОСА - относительная связывающая активность препарата с
цитозольными
и плазмомембранными РП
миометрия
крыс,
соответственно.
Пентаран с наибольпгами дополнительными модификациями - 6а-метил-16а,17а-циклогексано-6-дегидропрогестерон
(Ш)
характеризуется
средними значениями цОСА клеток маток крыс и человека. Следует
отметить, что данное соединение активнее вытесняет Р4 из ц Р П клеток с
более выраженными гиперпластическими изменениями (ОСАму > ОСАпш',
О С А А Ю И > ОСАжкп ХЭСАжФп); однако, данный показатель резко снижается
в
случае
низко-
и
умеренно-дифференцированных
аденокарцином.
Интересно, что соединение с дополнительной двойной связью в карбоцикле
D' - 16а,17а-циклогексенопрогестерон ( V ) - обладает высоким сродством к
ц Р П клеток маток крыс и активно вытесняет прогестерон из связи его с
рецепторами только в тканях низко- и умеренно-дифференцированных
аденокарцином.
36
Следовательно,
гиперпластическое
преобразование
эндометрия и
миометрия сопровождается изменением связывающей
способности рецепторов прогестерона к синтетическим гестагенам.
В
результате
исследований
циклогексанопрогестерон,
нами
обладающий
выделен
помимо
6а-метил-16а,17а
высокой
гестагенной
активности, выраженными рецепторотропными свойствами и способностью
эффективно конкурировать за связывание с цРП и пРП эндометрия и
миометрия человека в норме и при патологии. Указанный препарат является
перспективньпа в плане использования в онко-гинекологической практике.
Антигестагены.
В литературе в последнее время стали появляться данные об успешной
терапии гиперпластических гормонозависимых процессов тканей матки с
помощью антигестагенов (АГ). Показана эффективность мифепристона при
лечении миомы матки [Murphy А.А., Bardin C.W.,1995] и эндометриоза
[Kettel-LM, 1996], однако, механизм противоопухолевого действия препарата
остается до сих пор невыясненным.
Восстановление двойной связи в кольце А гестагенов приводит к
появлению у препаратов антагонистической активности (Левина И.С. и
соавт., 1995). С целью поиска соединений с антигестагенньпли свойствами
нами проведен отбор ряда восстановленных производных прегна-D'пентаранов. В качестве препаратов сравнения использованы мифепристон
(RU-486)
и
структурные
дигидропрогестерон
аналоги
испытуемых
(5а-(Н)-прегнан-3,20-дион)
соединений:
5а-
(V)
5Р-
и
дигидропрогестерон (5Р-(Н)-прегнан-3,20-дион) (VI) ("SIGMA").
Антигестагенная активность соединений была оценена по тесту на "не
сохранение беременности": наиболее активным оказался мифепристон, далее
в ряду следуют соединения I, V, V I , П, Ш, IV (табл. №10).
Анализ
относительной
связывающей
активности
препаратов
с
родственными рецепторами показал, что наибольшей тропностью к РП
37
обладают мифепристон и 5а-дигадропрогестерон, далее следуют 16а, 17ациклогексано-5а-прегнан-3,20-дион и 5Р-дигидропрогестерон.
Табл.М10. Свойства производных прегна-О'-пентаранов.
АГ
цОСА
РП(%)
иОСА
РГ(%)
цСХА
РА%
Препарат
Ru-486 (мифепристон)
100
31.7 15,1 34,0
11.8 3,1
12,8
I - 16а,17а-циклогексано-5а-прегаан-3,20- 66
дион
33
5.0
4,3
6,7
П - 16аД7а-циклогексано-5р-прегнан-3,20дион
Ш - 16а,17а-циклопропанопрегн-4-ен-3,20- 23
8.0
5,0
11,2
дион
17
2.0
7,3
14,1
IY - 16а, 17а-циклогекс-2'-енопрегн- 4-ен3,20-дион
60
28.2 6,5
8,3
Y - 5а-дигидропрогестерон
45
11.2 6,0
20,8
Y I - 5Р-дигидропрогестерон
АГ- антигестагенная активность (% лизированных зародышей);
цОСА РП %, цОСА РГ%, цОСА РА% - -относительная связывающая
активность препаратов с цитозольными рецепторами прогестерона,
глюкокортикоидов и андрогенов, соответственно.
С рецепторами глюкокортикоидов и андрогенов наиболее эффективно
связывается мифепристон. Сравнение степени селективности действия
препаратов по ОСА
(цРП/ цРГ/ цРА) доказывает преимущество 5а-
дигидропрогестерона (1/0,23/0,29) и 16а,17а-циклогексано-5а-прегаан-3,20диона (1/3,8/10,8) перед мифепристоном (1/0,47/1,07). Следовательно,
вероятность проявления побочных эффектов у изученных соединений
минимальная. Изученные препараты, дозозависимо снижают уровень цРЕ и
цРП (на 40- 100 % ) в миометрии беременных крыс (срок гестации 7-10 дней)
через сутки после однократного введения в дозах 0,1; 1,0; 4,0; 10,0 мг/кг.
Биоптат миометрия человека обладает спонтанной сократительной
активностью, которая регистрируется на протяжении 2-3 суток после
операции. Стероидные препараты при введении в инкубационную среду не
вызывают значимых немедленньк эффектов на сократительную активность
38
биоптата. В условиях in vivo для развития эффекта стероидов требуется от 6
до 24 часов. Для оценки отдаленных эффектов стероидов нами предложен
метод инкубации биоптата миометрия человека в течение суток с новыми
препаратами. После контрольной инкубации с растворителем ( 1 % этиловый
спирт) показатели амплитуды и частоты спонтанных сокращений миометрия
равны: 1.1 Зг, 0.54 сокр/мин, соответственно. Антигестагены стимулируют
сократительную активность миометрия человека (рис.10). Предложенный
метод целесообразно использовать как для скрининга новых стероидных
утеротропных препаратов, так и для выявления дополнительных звеньев
патогенеза при развитии аномалий родовой деятельности.
Антигестагены повьппают чувствительность миометрия беременных
крыс к окситоцину. По выраженности указанного эффекта препараты
распределились в следующем порядке: 16а,17а-циклогексано-5а-прегнан3,20-дион > мифепристон > 16а,17а-циклогексано-5р-прегнан-3,20-дион.
Химическая
модификация
молекулы
прогестерона
приводит
к
изменению его тропности к РП тканей матки человека при различных
гиперпластических состояниях (рис.15). Относительная
связывающая
активность изученных препаратов варьируется в зависимости от вида
патологии эндометрия. Это служит подтверждением гипотезы о нарушении
параметров
связывания
РП
при гиперпластических
преобразованиях
эндометрия. Более того, наблюдается изменение связывающих свойств РП в
процессе прогестинотерапии.
Высокая связывающая активность пентаранов с РП при атипической
гиперплазии эндометрия наводит на мысль о возможном
успешном
использовании этих препаратов для терапии данного типа патологии.
Следовательно, аффинитет стероидных рецепторов к синтетическим
аналогам и антагонистам половых гормонов зависит не только от химической
структуры вещества и от типа ткани - источника рецепторов, но и от
возможной предварительной гормональной терапии.
39
PuclS. Относительная связывающая активность (%) препаратов с
цитозольньши рецепторами прогестерона эндометрия человека (Mdjnt).
120
100
80
60
40
20
5 альфа
пентдран
Мфепристон
■ЖФП
ПАГ,
*- статистически
ЖФП (р<0.05).
В
результате
до
лечения
5бета
ПЖКГ
1АГ,после
достоверное отличие от
работы
выявлен
наиболее
пентаран
лечения
ОСА
в
ткани
перспективный
для
применения в клинике препарат из фуппы метаболитов прегна-D'пентаранов - 16а,17а-циклогексано-5а-прегнан-3,20-дион. Он обладает
выраженной
антигестагенной
активностью,
способностью
повышать
чувствительность беременного миометрия к окситоцину, минимальным
сродством к глюкокортикоидным рецепторам и высоким аффинитетом к
рецепторам прогестерона гиперпластически измененной ткани эндометрия.
Для
изучения
дигидропентаранов
структурно-функциональной
нами
в
качестве
связи
структурного
в
ряду
аналога
были
использованы 5 альфа- и 5 бета- дигидропрогестероны. Эти вещества были
проведены через все исследования в качестве препаратов сравнения.
Неожиданным оказался тот факт, что 5альфа-дигидропрогестерон во всех
тестах проявлял активность аналогичную действию мифепристона. Если
учесть,
что
5альфа-дигидропрогестерон
является
первым
и
преимущественным метаболитом прогестерона, то мы выдвинули гипотезу о
40
дополнительном уровне эндокринной регуляции эффектов прогестерона,
когда ближайший метаболит гормона блокирует действие родительской
формы. Для проверки нашей гипотезы требовалось определить уровень
указанных метаболитов в плазме крови рожениц в динамике родов. В связи с
отсутствием стандартной методики определения 5-дигидропрогестеронов в
нанограммовых количествах в биологических жидкостях, нами совместно с
сотрудниками отдела химии физиологически активных веществ ИМГ РАН
разработан новый метод - способ определения содержания в плазме крови
метаболитов прогестерона, 5а- прегнан-3,20-диона и 5Р-прегнан-3,20-диона.
С помощью предложенного метода нами определено содержание
метаболитов прогестерона в плазме крови беременных и рожениц накануне и
в латентную фазу родов (рис. 16). Родовая деятельность у человека и ;фугих,
так называемых прогестерон независимых видов, начинается и развивается
на фоне неизменно высокого уровня прогестерона - гормона сберегающего
беременность. При этом уровень метаболитов Р4 в плазме крови, как нами
было показано, прогрессивно возрастает. Очевидно, что в инициации и
поддержании родовой деятельности участвует
изменение активности
ферментов метаболизма прогестерона (5 альфаредуктазы в первую очередь).
Рис. №16.Концентрация метаболитов
прогестерона в плазме крови
беременных и рожениц (нг/мл, M±mt,
J"
80
60
^
ч-
■накануне родов
Нлатентная фаза
* т
...
5 40
к.
X
20
О
ШЯШ
5альфаН-Р
5бетаН-Р
41
выводы
1. Плазматические мембраны клеток матки человека и крыс содержат
специфические места связывания для эстрадиола-17р и прогестерона
(Вми=0,01-2,5 пмоль/мг белка), обладающие высоким сродством к этим
лигандам (Касс=0,26-О,52 нМ'') и взаимодействующие с антагонистами
стероидов (относительная связывающая активность ~ 30-40%). Сила
связывания гормона с рецептором тесно и положительно коррелирует с его
биологической активностью (к=0,87+0,09).
2.
Женские
половые
стероиды
регулируют
собственную
плазмомембранную рецепцию и изменяют липидный состав плазматических
мембран клетки-мишени. Эстрадиол (25 мкг/ЮОг веса, в/бр.) через сутки
после введения
снижает аффинитет
плазмомембранных
рецепторов
эстрадиола (на 30%), при этом повышает уровень сфингомиелина,
фосфатидилхолина
и
холестерина
в
плазматических
мембранах
миоутероцитов овариэктомированных крыс на 80, 65 и 30%, соответственно;
прогестерон (10мг/100г веса, в/бр.) повышает аффинитет собственных
плазмомембранных рецепторов (на 70%) и увеличивает концентрацию
холестерина, фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина на 80, 70 и 50%,
соответственно. Корреляционный анализ Касс мембранных рецепторов
эстрадиола и прогестерона и соотношений структурных мембранных
липидов (к=-0,82 и -0,76, соответственно) доказывает, что одним из способов
модуляции связывающих свойств плазмомембранных рецепторов является
модификация липидного матрикса плазматических мембран под действием
половых стероидов.
3. При гиперплазии эндометрия и миометрия человека изменяются
параметры
рецепции эстрадиола и прогестерона. В
клетках миомы
увеличивается аффинность плазмомембранных рецепторов прогестерона в 2
раза (Касс = 0,76 + 0,06 нМ"'), - эстрадиола в 3 раза (Касс = 0,69 + 0,10 нМ"') по
сравнению с неизмененной тканью. Касс
42
плазмомембранных рецепторов
эстрадиола
увеличивается
в
высокодифференцированные
полипы
< низко-
и
ряду:
железисто-фиброзные
аденокарциномы
<
полипы <
железисто-кистозные
умеренно-дифференцированные
аденокарциномы
эндометрия (0,36 + 0,03; 0,52 ± 0,08; 0,48 + 0,04 и 1,15 ± 0,27 н М ' ,
соответственно).
4.
Метиловый
эфир
6-окса-0-гомо-8-изоэстрона
обладает
гипоэстрогенной (в 7,4 раза ниже, чем у эстрона) и высокой гиполипидемической активностью (снижает уровень холестерина и триацилглицеридов в
плазме крови овариэктомированных крыс в 2,7 и 1,5 раза, соответственно (0.2
мг/кг/день в/бр. 3 дня)).
5. 11Ь-нитроокси-9а-гидрокси-этинилэстрадиол-диацетат
(нистранол)
превосходит этинилэстрадиол по эстрогенному и антифертильному действию
(в 4,5 и 24 раза, соответственно) и в 2 раза активнее подавляет клеточное
звено регуляции фертильности - связывание эстрадиола в цитозоле
миометрия овариэктомированных крыс.
6. Транс-изомер 1-бензилокси-4-(1,2-дифенил-2-хлорэтинил) бензола антиэстроген,
токсичность
проявляет
по
сравнению
с
тамоксифеном
и большую относительную связывающую
меньшую
активность с
рецепторами эстрадиола железисто-кистозных полипов эндометрия (на 26%).
7. 6а-метил-16а,17а циклогексанопрогестерон превосходит прогестерон
по гестагенной активности (в 9 раз) и эффективно связывается с рецепторами
прогестерона миометрия (RBA%=27).
8.
16а,17а-циклогексано-5а-прегнан-3,20-дион
предпочтительнее
мифепристона
по
-
способности
чувствительность беременного миометрия к окситоцину,
антигестаген,
повышать
соотношению
прямой и побочной активности ( R B A % с рецепторами прогестерона / R B A %
с глюкокортикоидными рецепторами = 3,6 и 2,0, соответственно) и обладает
высоким аффинитетом к рецепторам прогестерона ткани железистокистозной и атипической гиперплазии эндометрия.
43
9. 5а-дигидропрогестерон - ближайший метаболит прогестерона проявляет антигестагенные свойства (тест на «не сохранение беременности»
- 60%, стимуляция сократительной активности миометрия беременных и
рожениц - увеличение амплитуды и частоты на 70 и 100%, соответственно
(инкубация 10"'М, 24 часа)). Аналогично мифепристону активно связывается
с рецепторами прогестерона тканей матки (RBA~30%).
10. Изучение параметров рецепции женских половых стероидов в
миометрии при слабости родовой деятельности (повышение индекса РП/РЕ
накануне родов до 2,6) и механизмов действия мифепростона (повьппение
чувствительности миометрия к окситоцину, увеличение амплитуды и
частоты сокращений миометрия рожениц в 3,8 и в 2,5 раза, соответственно
(инкубация Ю'^М, 24 часа)), позволило расширить показания к применению
мифепристона в качестве препарата для подготовки к родам беременных,
относящихся к группе риска по развитию слабости родовых сил.
П . Рекомендуется углубленное изучение метилового эфира б-окса-DrOMO-8-изоэстрОна
в
качестве
препарата
заместительной
моногормонотерапии у пациенток постменопаузального возраста; 16а,17ациклогексано-5а-прегнан-3,20-диона для терапии атипической гиперплазии
эндометрия с целью последующего внедрения в клиническую практику.
П Р А К Т И Ч Е С К И Е РЕКОМЕНДАЦИИ
Для преодоления толерантности к гестагенотерапии, одной из причин
которой является снижение уровня рецепторов прогестерона в тканимишени, необходимо чередование/сочетание курсов указанной терапии с
назначением препаратов, стимулирующих синтез и экспрессию рецепторов
прогестерона (антиэстрогены).
Результаты комплексного обследования пациенток (в том числе анализ
рецепторного аппарата эстрадиола и прогестерона) продемонстрировали
необходимость причисления женщин в постменопаузальном возрасте с
44
железисто-кистозными полипами эндометрия к группе риска по развитию
рака эндометрия.
Разработаны дополнительные критерии состоятельности миометрия в
процессе
родов,
основанные
на
рецепторном
анализе
(авторское
свидетельство №2171472, 1999). Оптимальное соотношение
определяющее
РП/РЕ,
функциональное состояние миометрия, перед родами
находится в пределах от 1,0 до 2,0. Написаны практические рекомендации
для врачей - «Профилактика аномалий сократительной деятельности маткго>.
Для увеличения эффективности гормонального лечения рекомендуется
при
отборе
новых
рецептороселективных
соединений
использовать
биопсийный материал тех нозологических форм гиперплазии эндометрия, в
лечении которых предполагается использовать данное вещество.
Для
выяснения
механизмов
патогенеза
прогестерон-зависимых
процессов целесообразно параллельно с уровнем самого прогестерона в
плазме
крови
пациенток
дигидропрогестерона
изучать
также
концентрацию
Sa-
(эндогенного антагониста), для чего использовать
предложенный в работе новый метод (авторское свидетельство № 2183123,
2002).
СПИСОК РАБОТ,
О П У Б Л И К О В А Н Н Ы Х ПО Т Е М Е ДИССЕРТАЦИИ
1. Минеева (Карева) Е.Н. Влияние эстрогенов на липидный состав
плазматических мембран клеток матки овариэтомированных крыс //
Фармакология и токсикология.-1988,- N 6.- С.51-52.
2. Савельева Г.М., Сергеев П.В., Бреусенко В.Г., Минеева (Карева) Е.Н.,
Каппушева Л.М. Рецепторы эстрогенов плазматических мембран
эндометрия при пролиферативных процессах
в постменопаузе
//Акушерство и гинекология. -1989.- N 12. - С.60-63.
3. Минеева (Карева) Е.Н. Взаимодействие тамоксифена с рецепторами
эстрадиола клеток миометрия //Фармакология и токсикология. -1990.N6.-C.26-27.
4. Сергеев П.В., Карева Е.Н. Антиэстрогены: молекулярные механизмы
действия // Химико-фармацевтичесюй журнал. - 1990.-N 15.- С.4-8.
45
5. Сергеев П.В., Карева Е.Н. Молекулярные механизмы действия
эстрадиола (концепции последних лет) // Вестник А М Н СССР.- 1990.N6.-C.57-62.
6. Сергеев П.В., Минеева (Карева) Е.Н., Ухина Т.В. Связывание
эстрадиола и метаболизм липидов в плазматических мембранах
клеток миометрия при опухолевом росте // Вопросы онкологии.1990.-N4.-C.433-438.
7. Saveljeva G.M., Sergeev P.V., Breusenco V.G., Kareva E.N., Kappusheva
L.M. Steroid receptors of endometrial tissue and ovaries in postmenopausal
patients with endometrial desorders.- Ann.N.Y.Acad.Sci.- 1991.- v.626.P.331-340.
8. Сергеев П.В., Карева E.H. Гипотетическая модель действия стероидных
гормонов // Проблемы эндокринологии.-1993.- N 4.- С. 48-50.
9. Сергеев П.В., Карева Е.Н., Костылева О.И. Взаимодействие
тамоксифена с рецепторами эстрадиола миомы и гистологически
неизмененного миометрия человека // Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины. - 1993.- N 3.- С. 264-265.
Ю.Сергеев П.В., Камерницкий А.В., Левина И.С, Карева Е.Н., Ткачева
Н.Ю. Анализ относительной связывающей способности веществ
группы пентаранов с рецепторами плазматических мембран клеток
маток овариэктомированных крыс // Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины.-1994.- т.СХУП.- N 7.- С.34-35.
П.Сергеев
П.В.,
Карева
Е.Н.
Молекулярные
механизмы
эстрадиолзависимого опухолевого роста // Вопросы онкологии.-1994.N4.-C.145-149.
12.Сергеев П.В., Карева E.R, Ткачева Н.Ю. Сравнительный анализ
рецепторов прогестерона и эстрадиола при миоме у человека //
Бюллетень экспериментальной биологии
и медицины,- 1994.T.CXVn.-N7.-C.33-34.
В.Сергеев П.В., Карева Е.Н., Ткачева Н.Ю., Высоцкий М.М.
Антипрогестины // Проблемы эндокринологии.-1994.- N 3.- С. 53-54.
И.Сергеев П.В., Карева Е.Н., Ткачева Н.Ю., Высоцкий М.М.
Прогестерон: рецепторный механизм действия в норме и при
опухолевом росте (обзор) // Акушерство и гинекология. - 1994.- N 5.С.6-9.
15.Сергеев П.В., Савельева Г.М., Карева Е.Н., Соловьева Е.В., Гриненко
Г.С., Каппушева Л.М. Поиск активных противоопухолевых средств в
ряду производных трифенилэтиленов // Вопросы онкологии. - 1995. T.41.-N2.-C.49.
16.Сергеев П.В., Шавва А.Г., Карева Е.Н., Соловьева Е.В. Влияние 8изоаналогов эстрогенов на связывание эстрадиола в ткани матки
овариэктомированных крыс // Бюллетень экспериментальной биологии
и медицины.-1995.-N 2.- С.165-167.
46
П.Сергеев П.В., Стрижова Н.В., Карева Е.Н., Лысенко О.Н., Соловьева
Е.В., Баянова Л.Р. Кирпичникова Н.В. Патогенетическое обоснование
выбора методов лечения больных с миомой матки в сочетании с
гиперпластическими процессами эндометрия // Акушерство и
гинекология. - 1997.- №5.- С. 21-24
18.Сергеев П.В., Краснопольский В.И., Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н.,
Соловьева Е.В., Логутова Л.С, Ларичева И.П., Туманов А.В., Цурикова
Т.е. Содержание рецепторов половых стероидов в миометрии при
плановых кесаревых сечениях // Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины.- М. -1998.- №5.- С. 573-575.
19.Стрижова Н.В., Сергеев П.В., Лысенко О.Н., Нестерова О.А., Карева
Е.Н. Роль половых гормонов и их рецепторного аппарата при выборе
методов лечения у пациенток с гиперпластическими процессами
эндометрия в сочетании с миомой матки // Акушерство и гинекология.1998.-№3.- С.30-33.
20.Карева Е.Н., Камерницкий А.В., Левина Л.С., Кирпичникова Н.В.,
Соловьева Е.В., Исаева С.А. Влияние прегна-В'-пентаранов на
сократительную активность
миометрия беременных крыс //
Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1999.- т. 62.- №5.С. 25-27.
21.Карева Б.Н., Соловьева Е.В., Туманов А.В. Молекулярные механизмы
действия антипрогестинов (обзор литературы) // Экспериментальная и
клиническая фармакология. -1999.- №4.- С.72-76.
22.Гаспарян Н.Д., Краснопольский В.И., Сергеев П.В., Карева Е.Н.,
Ларичева И.П., Троицкая М.В., Туманов А.В.Новые аспекты патогенеза
слабости родовой деятельности // Вестник Российской ассоциации
акушеров-гинекологов.- 2000.- N 3.- С.15-18.
23.Карева Е.Н., Соловьева Е.В., Туманов А.В., Рыбалко Н.Ю. Анализ
связывания ^-тамоксифена с плазматическими мембранами клеток
матки крыс // Экспериментальная и клиническая фармакология. -2000.T.63.-N2.-C.51-53.
24.Краснопольский В.И., Сергеев П.В., Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н.,
Ларичева И.П., Туманов А.В., Магилевская Е.В. Содержание
рецепторов половых стероидов в миометрии при физиологическом
течении родов // Акушерство и гинекология.-2000.- N 4.- С.20-22.
25.Макаров О.В., Сергеев П.В., Свиридов R K . , Карева Е.Н., Исаева Е.Г.,
Мгдесян К.К., Кирпичникова Н.В. Влияние гетагенотерапии на
клинические и биохимические параметры у больных с атипической
гиперплазией эндометрия // Вопросы онкологии. - 2000.- т.46.- N 5.С.570-573.
26.Гасшфян Н.Д., Кгфева Е.Н., Кирпичникова Н.В., Логутова Л.С.,
Подвальнюк В.В. Влияние мифегина на сократительную деятельность
миометрия in vitro при доношенной беременности // Российский
вестник акушера-гинеколога.- 2001.- т.1.- № 3(5).- С. 12-14.
47
27.Гаспарян Н.Д., Краснопольский В.И., Карева Е.Н., Логутова Л.С,
Титченко Л.И., Витушко С.А., Туманов А.В. Особенности рецепции
половых стероидов у рожениц с рубцом на матке // Российский вестник
акушера-гинеколога.- 2001.- N 1.- С. 5-7.
28.Сергеев П.В., Камерницкий А.В., Левина И.С., Кирпичникова Н.В.,
Карева Е.Н., Подвальнюк В.В. Антипрогестагенная активность 5Нметаболитов прогестерона и циклогексано-5Н-прегн-4-ен-3-онов //
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2001.- N4.С.403-405.
29.Карева Е.Н., Гаспарян Н.Д., Кирпичникова Н.В., Туманов А.В.,
Подвальнюк В.В.
Сократительная деятельность матки при
беременности. Биохимические механизмы (обзор) // Вестник РАМН.М., «Медицина» - 2002.- №4.- С. 31-37.
ЗО.Краснопольский В.И., Логутова Л.С., Буянова С.Н., Попов А.А.,
Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Сенчакова Т.Н., Горбунова Т.Н.
Хирургическая и акушерская тактика при сочетании беременности с
опухолями половых органов // Акушерство и гинекология.- 2002.- № 2.С.41-45.
31.Краснопольский В.И., Логутова Л.С., Гаспарян Н.Д., Петрухин В.А.,
Титченко Л.И., Карева Е.Н., Новикова С.Н., Капустина М.В., Чечнева
М.А., Реброва Т.В., Коваленко Т.С. Профилактика аномалий
сократительной деятельности матки // Пособие для врачей. - М.- 2002.22с.
32.Краснопольский В.И., Сергеев П.В., Карева Е.Н., Логутова Л.С,
Витушко С.А., Подвальнюк В.В Новые пути фармакологической
коррекции слабости родовой деятельности // Акушерство и
гинекология.- М.- 2002.- №4.- С. 19-24.
ЗЗ.Сергеев П.В., Карева Е.Н., Гаспарян Н.Д., Подвальнюк В.В. Влияние
мифегина на уровень циклических нуклеотидов в миометрии шейки
матки при доношенной беременности // Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины.- 2002.-Т. 134.- №10.- С.405-407.
34.Гаспарян Н.Д., Карева Б.Н. Современные представления о механизме
регуляции сократительной деятельности матки // Российский Вестник
' акушера-гинеколога. -2003.- т.З.- № 2 - С. 21-27.
35.Карева Е.Н. Новые аспекты действия эстрогенов // Ж.
Экспериментальной и клинической фармакологии. - 2003.- N 4.- т.66.С.71-78.
Зб.Карева Е.Н. Механизмы действия прогестерона // Ж. Вопросы
биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2003.- №
2.- С.3-10.
37.Краснопольский В.И., КВ.Сергеев, Гасп^ян Н.Д., Карева Е.Н.,
Логутова Л.С., Буянова С.Н., Титченко Л.И., Горбунова Т.Н.,
Бабунашвили Е.Л. Беременность и прогестеронзависимая миома матки
48
//Ж-Российский вестаик акушера-гинеколога. -2003.- т.З.- №3 - С.5557.
Статьи в сборниках и тезисы
38.Сергеев П.В., Минеева (Карева) Е.Н. Взаимосвязь специфического
связывания 17-Э- эстрадиола плазматическими мембранами миометрия
человека с их липидным составом//Труды Всесоюзного симпозиума
по биохимии липидов. - Алма-Ата. - 1987.- С.57-58.
39.Сергеев П.В., Бреусенко В.Г., Карева Е.Н. Исследование содержания
цАМФ в эндометрии человека при гиперплазии и опухолевом росте //
Труды б Всесоюзного симпозиума 'Толь циклических нуклеотидов
и вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций" Петрозаводск, 1988. - С.146.
40.Saveljeva G.M., Sergeev P.V., Breusenco V.G., Mineeva (Kareva) E.N.,
Kappusheva L.M. Steroidhormonrezcptoren des ovars und uterus in der pround postmenopause bei patientinnen mit endometriumsverangerugen // 3X1
Gynakologenkongress der DDR/- Leipzig 6.bis 9 Dezember.-1989.- P.34.
41.Сергеев П.В., Минеева (Карева) E.H., Ухина Т.В., Бреусенко В.Г.,
Каппушева Л.М. Исследование рецепции эстрадиола и липидного
состава плазматических мембран эндометрия при гяперпластических
процессах // Тез. докл. IV Всесоюзного съезда патофизиологов. Кишинев. - 1989.- т.1.- С.204.
42.Sergeev P.V., Breusenco V.G., Kareva E.N., Kappusheva L.M. Plasma
membranes and cytosols estradiol receptors in neoplastic endometrial and
myometrialtissues //Abstr. Constituent Congress International Society
Pathophysiologists.- Moscow.-1991.- P.206.
43.Карева E.H., Ухина T.B., Королева Ю.В. Липидный состав
плазматических мембран и активность фосфолипаз миометрия
человека // Респ. сборник научных
трудов, 2М0ЛГМИ,
'Теоретические, экспериментальные
и прикладные исследования
биологических систем". - М.-1991.- С.128-132.
44.Kareva Е., Solovyeva Е., Panov V., Akhadov Т., Sergeev P., Kappusheva
L. Interaction of Tamoxifen with plasma membranes of human neoplastic
endometrium // In die abstract book of First European Congress of
Pharmacology - Milan, Italy.-1995.- P. 82.
45.Sergeev P.V., BCareva E., Solovyeva E., Panov V., Chukaev S., Shawa A.
Properties of new sintetic estrogen 8-isoanaIogues // Abstr. book of First
European Congress of Pharmacology. - Milan.- Italy-1995.- P. 163.
46.Карева E.H., Бреусенко В.Г., Каппушева Л.М. Основание
гормонотерапии при пролиферативных цроцессах в постменопаузе //
Тез. докл. П Российского национального конгресса "Человек и
лекарство".- М. - 1995.- С. 153.
47.Карева Е.Н., Соловьева Е.В., Шавва А.Г. Рецепторные механизмы
действия эстрогенов и их синтетических аналогов // Тез. докл. П
49
Российского нахщонального Конгресса "Человек и лекарство".- М.1995.-С. 233.
48.Карева Е.Н., Соловьева Е.В., Гриненко Г.С, Федотов В.П., Ржезников
В.М. Влияние новых комбинированных эстроген-гестагенных
препаратов на связывание
эстрадиола в ткани матки крыс //
Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных
средств - Тез. докл. 1 Съезда Российского Научного общества
фармакологов - Волгоград.-1995.- С. 184
49.Сергеев П.В., Савельева Г.М., Бреусенко В.Г., Карева Е.Н. Клиникоэкспериментальное исследование
тамоксифена // Тез. докл.
II
Российского национального конгресса "Человек и лекарство".- М.1995.-С. 155.
50.Карева Е.Н. Биохимическая фармакология половых гормонов // Глава в
«Очерки биохимической фармакологии» (под. ред. П.В.Сергеев,
11.А.Галенко-Ярошевский,
Н.Л.111имановский)
М.
- РЦ
«ФАРМЕДИНФО».- 1996.-С.280-306.
51.Сергеев П.В., Бреусенко В.Г., Гриненко Г.В., Карева Е.Н., Каппушева
Л.М., Соловьева Е.В. Анализ связывания антиэстрогенов производных трифенилэтиленов - с рецепторами
эстрадиола в
эндометрии при гиперплазиях // Тез. докл. 3-го Российского
национального конгресса «Человек и лекарство».- М.- 1996.-C.25.
52.Сергеев II.B., Камерницкий А.В., Бреусенко В.Г.,Карева Е.Н.,
Каппушева Л.М., Ткачева Н.Ю. Исследование относительной
связывающей
способности
прегна-Д-пентаранов
с
гестагенсвязывающей системой гиперплазированного эндометрия
человека // Тез. докл. 3-го Всероссийского съезда эндокринологов.- М.1996.-С.22-23.
53.Сергеев П В . , Савельева Г.М.,
Бреусенко В.Г., Карева Е.Н.,
Каппушева Л.М., Ткачева Н.Ю. Связывание прогестерона с
плазматическими мембранами клеток эндометрия человека при
различных гиперплазиях эндометрия в постменопаузальном периоде //
Тез. докл. 1 Российского конгресса по патофизиологии.- М.- 1996.С.175.
54.Карева Е.Н., Камерницкий А.В., Левина И.С., Соловьева Е.В.,
Кирпичникова Н.В. Относительная связывающая активность новьос
антагонистов прогестерона // Тез. докл. IV Конгресс «Человек и
лекарство». -1997. - С.265.
55.Краснопольский В.И., Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Туманов А.В.,
Левашова И.И., Ларичева И.П., 1^икова Т.С. Содержание рецепторов
половых стероидов в миометрии при плановых кесаревых сечениях //
Тез. докл. IV Росс. Нац. конгресса «Человек и лекарство».- М.- 1997.С. 269.
56.Логутова Л., Гаспарян Н.Д., Левашова И.И., Карева Е.Н., Магилевская
Е.В. Nataral labor pathway as alternative second cesarean section // X Y
50
FIGO World congress of gynecology and obstetrics. - Copengagen.-1997. Acta obstetricia et Gynecologica Scandinavica.- v.76.- N 167.- P.30.
57.Ржезников B.M., Минайлова O.H., Карева E.H., Смирнова З.С.
Создание лекарственных препаратов на основе изучения стероидрецепторного взаимодействия // Тез.докл. 3-го Российского
на1цюнального конгресса «Человек и лекарство».-М.-1997.- С.287-288.
58.Сергеев П.В., Левина И.С., Карева Е.Н., Исаева С.А., Соловьева Е.В.,
Кирпичникова Н.В. Влияние 16альфа-17альфа-циклогексан-5альфапрегнан-3,20-диона на сократительную активность миометрия крыс //
Сб. мат. региональной научной конференции: "Проблемы
фармакологии и фармации на Дальнем Востоке" - Хабаровск.-1997.С.95-96.
59.Сергеев П.В., Стрижова Н.В., Карева Е.Н. Рецепторы половых
стероидных гормонов при гиперпластических процессах эндометрия в
сочетании с миомой матки у пациенток репродуктивного возраста //
Сб. материалов П съезда Российской ассоциации врачей акушеров и
гинекологов.- М. -1997.- С. 108-110.
60.Logutova L.S., Levachova I.I., Sergeev P.V., Kaieva E.N., Magylevskaya
E.V., Tmnanov A.V. New possibilities of evaluation of tiie scar at uterus //
13* Congress of the Eiu-opean association of gynaecologists and
obstetricians (EAGO). In book of abstracts. - Yeurusalem, Israel. - 1998. P.90.
61.Карева E.H., Гаспарян ИД., Соловьева Е.В., Магилевская Е.В.,
Туманов А.В. Рецепторы половых стероидов миометрия при
абдоминальном родоразрешении и миоме // Тез. докл. V Росс. Конгресс
«Человек и лекарство».- М-1998.- С. 573.
62.Карева Е.Н., К1фпичникова Н.В., Камерницкий А.В., Левина И.С,
Исаева С.А., Соловьева Е.В. Новые антагонисты прогестерона и
сократительная активность миометрия крысы // Тез. докл. V Конгресса
«Человек и лекфство».- М.-1998.- С. 573.
бЗ.Сергеев П.В., Савельева Г.М., Карева E.R, Юфпичникова Н.В.,
Соловьева Е.В. Свойства рецепторов половых стероидов при
гиперпластических процессах в матке и выбор оптимальной
лекарственной терапии // Тез. докл. V Конгресс «Человек и
лекарство».-М.- 1998.-C.618.
64.Гаспарян Н.Д., Kqjeea Е.Н., Кирпичникова Н.В., Соловьева Е.В.,
Туманов А.В., Магилевская Е.В. Биохггат миометрия человека как тестсистема для отбора новых утеротропных препаратов // Тез.докл. V I
Нац. Росс. Конгресса «Человек и лекарство».- М.-1999.- С.416.
65.Камерницкий А.В., Гриненко Г.С, Карева E.R, Гукасов В.М., Левина
И.С., Туманов А.В., Петровская С И . , Иванова Е.Ю. Антигестагены и
перекйсное окисление липидов // Тез. докл. Всероссийская
конферешщя с международным участием «Актуальные проблемы
51
экспериментальной и клинической фармакологаю>.- Санкт-Петербург.1999.- С.32
бб.Карева Е.Н., Камерницкий А.В., Левина Л.С., Соловьева Е.В.
Стереохимия пентаранов и сократительная активность миометрия
беременных крыс // Тез. докл. V I Конгресс « Человек и лекарство».1999.- С.419.
67.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Левашова И.И., Витушко С.А., Логутова
Л.С., Туманов А.В. Роль половых стероидов в патогенезе слабости
родовой деятельности // Сб.тезисов Всероссийского пленума
ассоциации акушеров и гинекологов «Современные технологии в
профилактике перинатальной и материнской смертности».- М.МЕДпресс.- 2000.- С.56-57.
68.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Левашова И.И., Витушко С.А., Туманов
А.В. Рецепторы половых стероидов миометрия в конце беременности и
в родах // Тез. докл. пленума Российской ассоциации врачей акушеров
и гинекологов (под ред.В.Н.Серова) «Медико-социальные аспекты
репродуктивного здоровья женщин».- М., Academia.- 2000.- С.бО-62.
б9.Гаспарян Н.Д., Карева E.R, Логутова Л.С. Особенности рецепции
половых стероидов при слабости родовой деятельности // Материалы II
Российского форума «Мать и дитя».- М.- 2000.- С.34.
70.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Логутова Л.С., Витушко С.А., Троицкая
М.В., Туманов А.В. Функциональное состояние миометрия у рожениц
со слабостью родовой деятельности // Матер, республ. Науч.-практич.
конференции «Здоровый новорожденный: перинатальные проблемы и
прогнозирование».- МЗ РФ.- Екатеринбург.- 2000.- С. 31-32.
71.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Логутова Л.С., Подвальнюк В.В., Бойко
М.А. Значение рецепторов эстрадиола утеромиоцитов в регуляции
родовой деятельности // Сб. научных трудов «Индукция
сократительной
деятельности
матки».Изд.
Саратовского
мед.университета.- 2000.- С.44-46.
72.Гаспарян Н.Д., Левашова И.И., Логутова Л.С., Карева Е.Н. Role of
estradiol and progesterone receptors in myometriran during labom' //
Abstracts of X V I FIGO World Congress of Gynecology and Obstetrics.Washington.- September 3-8.- 2000.- P.30.
73.Карева E.H., Гаспарян Н.Д., Камерницкий A.B., Левина И.С.,
Кирпичиикова Н.В., Подвальнюк В.В. Стимуляция 5Н-производными
прегна-В'-пентаранов сократительной деятельности миометрия in vitro
при доношенной беременности // Сб. научных трудов «Индукция
сократительной
деятельности
матки»
Изд.
Сч)атовского
мед.университета.- 2000.-, С. 56-58.
74.Карева Е.Н., Гаспарян Н.Д., Логутова Л.С., Новикова С В . , Витушко
С.А., Кирпичиикова Н.В. Содержание рецепторов половых стероидов в
миометрии у рожениц с аномалиями родовой деятельности. Медикосоциальные аспекты репродуктивного здоровья женщин // Матер.
52
пленума Росс. Ассоциации врачей акуш. и гинекол.- М., Academia.2000.-С. 62-64.
75.Карева Е.Н., Кирпичникова Н.В., Гаспарян Н.Д., Туманов А.В. Влияние
пенкрофтона на спонтанную сократительную деятельность миометрия
человека // Тез.докл. V n Росс. Шц. Конгресс «Человек и лекарство».М.-2000.-С.398-399.
76.Карева Е.Н., Кирпичникова Н.В., Мгдесян К.К. Возможная причина
развивающейся
резистентности
атипической
гиперплазии
к
гестагенотерапии // Тез. докл. УП Конгресс
«Человек и лекарство».2000.- С.407.
77.Gasparian N.D., Kareva E.N., Logutova L.S., Titchenko L.S., Novikova
S.V. Functional condition of a myometrium at the parturient women with
uterus scar // In The 16th Eur. Congress of Obstetrics and Gynaecology
(EAGO/EBCOG).- Malmo, Sweden.- 2001.- P.23.
78.Krasnopolsky V.I., Sergeev P.V., Gasparian N.D., Kareva E.N., Podvabyuk
V.V., Vitushko S.A. Dystocia and changes of myometrium sensitivity for
sex steroids // In The 16th Eur.Congress of Obstetrics and Gynaecology
(EAGO/EBCOG).- Malmo, Sweden. - 2001.- P.23.
79.Гаспарян Н.Д., Карева E.H., Логутова Л.С., Подвальнюк В.В.
Клинические исследования применения мифегина для подготовки к
родам при доношенной беременности // Сб. тезисов 1 Международной
конф. «Клинические исследования лекарственных средств».- М.- 2001.С.80-83.
80.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Логутова Л.С., Подвальнюк В.В.
Подготовка к родам антигесгагенами // Матер. Всеросс.научно-практ.
конференции «Роль новых перинатальных технологий в снижении
репродуктивных потерь» МЗ РФ.- Екатеринбург.- 2001.- С. 185-186.
81.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Подвальнюк В.В., Новикова С В . Поиск
новых путей фармакологической коррекции слабости родовой
деятельности // Сб. тез. У Ш Конгресса «Человек и лекгфство».- М.2001.-C.367.
82.К£фева Е.Н., FacnqjgH ИД., , Камерницкий А.В., Левина И.С.,
Подвальнюк В.В., Бойко М. Ближайшие метаболиты прогестерона как
его антагонисты // Сб. тезисов IV Всеросс. конгресса эндокринологов
«Актуальные проблемы современной эндокринологии».- СанктПетербург.- 2001.- С.538.
83.Карева Е.Н., Гаспарян Н.Д., Логутова Л.С, Титченко Л.И., Новикова
СВ., Могилевская Е.В. Некоторые аспекты изучения сократительной
способности миометрия у рожениц с оперированной и интактной
маткой в родах // Сб.матер. Всеросс. Науч.-практ. Конфер. с
международ, участием «Роль новых перинатальных технологий в
снижении репродуктивных потерь» МЗ РФ.- Екатеринбург.- 2001.- С.
99-101.
53
84.Карева Е.Н., Гаспарян Н.Д., Подвальнюк В.В., Камерницкий А.В.,
Левина И.С. 5-Н производные прегна-В'-пентаранов и сократительная
активность миометрия in vitro конце беременности // Тез. докл.VIII
Росс. Нац. Конгресс «Человек и лекарство».- М.- 2001.- С.461.
85.Макаров О.В., Сергеев П.В., Карева Е.Н., Исаева Е.Г., Мгдесян К.К.
Рецепторы половых стероидов у пациенток с гиперпластическими
процессами эндометрия (ГПЭ) в динамике гормонального лечения //
Тез. докл. Ш Российского форума «Мать и дитя».- М.-, 2001.- С.402.
86.Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Новикова С В . , Подвальнюк В.В. Действие
мифегина на уровень циклических нуклеотидов в миометрии шейки
матки при доношенной беременности // Сб. тезисов I X Росс. Нац.
Конгресса «Человек и лекарство».- М.- 2002.- С.99.
87.Гаспарян Н.Д., Логугова Л.С, Буянова С.Н., Горбунова Т.Н.,
Бабунашвили
Е.Л
Прогестерон-зависимая
миома
матки
и
беременность// Сб. матер, научно-практической конференции
«Медицина будущего».- М.- 2002.- С. 80-81.
88.Гаспарян Н.Д., Логугова Л.С., Карева Е.Н., Туманов А.В Клиникобиохимические критерии прогноза слабости родовой деятельности //
Сб. матер, научно-практической конференции «Медицина будущего».М.- 2002.- С. 80.
89.Карева E.R, Гаспарян Н.Д., Мгдесян К.К., Овчинникова Е.В.,
Горенкова О.С. Прогностическое значение определения рецепторов
стероидных гормонов в ткани эндометрия при гиперплазиях // Сб.
матер, научно-практической конференции «Медицина будущего».- М.2002.- С. 79-80.
90.Краснопольский В.И., Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Логугова Л.С.,
Подвальнюк В.В. Эффективность подготовки к родам мифегином при
доношенной беременности // Сб.тезисов IX Росс. Нац. Конгресса
«Человек и лекарство»- М.- 2002.- С.234.
91.Краснопольский В.И., Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н., Овчинникова Е.В.,
Горенкова О.С, Мгдесян К.К. Влияние гестагенотерапии на
плазмомембранную
рецепцию
эстрадиола
при
атипической
гиперплазии // Сб. тезисов X Росс. Нац. Конгресса «Человек и
лекарство».- М.- 2003.- С. 147.
Патенты РФ
1. Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Нагаев И.Ю., Карева Е.Н.,
Подвальнюк В.В., Овчинникова Б.В. Высокомеченные тритием 5а- и
5р-[4,5-'Н]прегнан-3,20-дионы и способ их определения в плазме
крови. Патент Р Ф № 2183123, приоритет от 24.03.2001 г.
2. Гаспарян Н.Д., Краснопольский В.И., Карева Е.Н.,Федорова М.В.,
Логугова Л.С., Ларичева И.П., Магилевская Е.В. Способ определения
функционального состояния миометрия в процессе родов. Патент Р Ф
№2171472, приоритет от 29.06.1999 г.
54
Список использумых сокращений
Е Ф Л - суммарные фосфолипиды;
АГ - антигестагены;
АК н., у., в. - аденокарцинома эндометрия низко-, умеренно- и высоко
дифференцированная;
ГНТМ - гистологически неизмененная ткань миометрия;
Ж К Г - железисто-кистозная гиперплазия эндометрия;
Ж Ф П - железисто-фиброзный полип эндометрия;
МУ - миомный узел;
ПМ - плазматическая мембрана;
РЕ, пРЕ, цРЕ - рецепторы эстрадиола плазмомембранные и цитозольные;
РП, пРП, цРП - рецепторы прогестерона плазмомембранные и цитозольные;
С Ф М - сфингомиелин;
ТГ - триацилглицериды;
Ф Х - фосфатидилхолин;
ФЭА - фосфатидилэтаноламин;
Хс - холестерин;
55
Заказ № 605. Объем 2пл. Тираж 100 экз.
Огаечатано в 0 0 0 «Петроруш»
Москва. Ул. Палиха 2А тел. 250-92-06
РНБ Русский фонд
2006-4
24406
08 I'-'ff 13
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
2 351 Кб
Теги
bd000103178
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа