close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000103395

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
ЖЕВАГО
Наталья Аркадьевна
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ Э Ф Ф Е К Т Ы ПОЛИХРОМАТИЧЕСКОГО
ВИДИМОГО И ИНФРАКРАСНОГО СВЕТА,
Б Л И З К О Г О ПО С П Е К Т Р А Л Ь Н О М У СОСТАВУ
К ЕСТЕСТВЕННОМУ
14.00.36 - аллергология и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертация на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург
2005
Работа выполнена в Институте цитологии Российской Академии Наук
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор Самойлова Кира Александровна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Назаров Петр Григорьевич
доктор медицинских наук, профессор Ярилии Александр Александрович
Ведущая организация:
Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины М Ч С России
Защита состоится <sfSy>
года в «13» часов на заседании
Диссертационного Совета Д.001.022.01 при Государственном Учреждении
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН
(197 376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12)
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ Н И И
экспериментальной медицины РАМН
Автореферат разослан «.'^r/r^yfrf'.^. 2005 года
Ученый секретарь
Диссертационного Совета
доктор медицинских наук
"^1 '7ИА
Л.А. Бурова
200G-H
ипчГ
^аъ^^сЯ^
1
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность
технологий
проблемы. Широков
позволило
обосновать
использование
высокую
в
эффективность
медицине лазерных
монохроматического
видимого и инфракрасного (ИК) света низкоинтенсивных лазеров при лечении
заболеваний
различного
противовоспалительным,
этиопатогенеза,
что
иммуномодулирующим
и
принято
связывать
ранозаживляющим
с
его
действием
(Baxter, 1994; Tuner, Hode, 1999; Москвин, Буйлин, 2000). Однако механизмы, с
помощью которых облучение небольшого з^астка поверхности тела пациента приводит
к развитию этих системных эффектов, до сих пор не вьиснены. Представления о
характере влияния монохроматического лазерного излучения на иммуннзто систему
также носят противоречивый характер. Не изучены и лечебные потенции естественного
полихроматического видимого и И К света (>400 им) - доминирующей радиации Солнца,
составляющей около 97% его энергии на поверхности Земли.
Необходимость
проведения
клинико-экспериментальных
исследований
полихроматического видимого и ИК света Солнца как важнейшего фактора среды стала
очевидной в 80-х годах в связи с обоснованием иммуносзогрессивного и
проканцерогенного действия минорной компоненты солнечного спектра - У Ф радиации
(Агапео et al., 1989; Kripke, 1990). Это способствовало разработке в ряде стран
генерирующих такое излучение фототерапевтических аппаратов, что позволило
установить широкий спектр лечебных эффектов полихроматического видимого и И К
света, как поляризованного, так и неполяризованного (Fenyo, 1984; Aronis et. al., 1992;
Kubasova et al., 1995; Kymplova, Navratil, 1999; Monstrey et al. 2000). Методики
светолечения с использованием полихроматического излучения были востребованы
клинической практикой в нашей стране, значительные территории которой расположены
в зоне солнечного дефицита. Учитывая относительно глубокое проникновение видимой
и РОС радиации в кожные покровы человека, К.А. Самойлова и сотр. (Samoilova et al.
1999) предположили, что основные механизмы эффектов такого излучения связаны с
транскутанной фотомодификацией небольших количеств крови в густой сети
поверхностных микрососудов, где скорость кровотока низка, и компоненты крови могут
получить эффективную дозу света. Среди выявленных в нашей лаборатории
иммунологических эффектов были активация фагоцитоза моноцитов и нейтрофилов,
стимуляция цитотоксической активности NK-клеток, повышение ростостимулирующих
свойств плазмы крови для поврежденных рентгеновским излучением аутологичных
лимфоцитов - Лф (Samoilova et al., 1998; Obolenskaya, Samoilova, 2002). Тем не менее,
иммуномодулирующее действие полихроматического видимого и ИК света, близкого по
спектральному диапазону к естественному, в настоящее время изучено явно
недостаточно, что обуславливает актуальность и необходимость проведения
дополнительных исследований.
РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ
БИБЛИОТЕКА
С.
«|Э
Э Щ) metJ<f-\
Цель
работы: Изучить
влияние
облучений
поверхности
тела
человека
полихроматическим (видимым и инфракрасным) светом на функциональное состояние
лимфоцитов и содержание ключевых цитокинов периферической крови и оценить роль
транскутанной фотомодификации крови в изменении изученных показателей.
Задачи исследования: при параллельном однократном облучении добровольцев и
образцов их крови in vitro, а также в курсе ежедневных облучений
1. Исследовать влияние полихроматического света на экспрессию мембранных
маркеров иммунокомпетентных клеток периферической крови.
2. Изучить влияние полихроматического света на уровень спонтанного и ФГАиндуцированного включения 'Н-тимидина в культурах
мононуклеаров
периферической крови.
3. Выяснить характер фотоиндуцированных изменений концентраций 10 цитокинов
(TNF-a, IL-ip, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, INF-a, INF-y, TGF-pl) в плазме
периферической крови.
4. Оценить влияние фототерапевтического курса на количество лейкоцитов и
относительное содержание мононуклеаров и нейтрофильных гранулоцитов, а
также концентрации IgM, IgA, IgG и ЦИК в периферической крови.
Научная новизна:
- Впервые показано, что локальное облучение поверхности тела человека светом
видимого и ИК диапазона в терапевтических дозах индуцирует быстрые
функциональные изменения Лф всего объема циркулирующей крови (ОЦК), резкое
снижение в ней повышенного содержания провоспалительных цитокинов и возрастание
концентрации противовоспалительных факторов, при одновременном увеличении у лиц
с нормальными/низкими показателями количества IL-10 (в 2 раза) и IFN-y (в 4 раза).
- Впервые на основе изучения количественного состава и функциональной активности
мононуклеаров, состояния цитокиновой сети установлено иммуномодулирующее
действие полихроматического видимого и ИК света экологического диапазона длин
волн.
- Впервые получены доказательства того, что влияние видимого и И К света на
иммунную систему человека осуществляется через механизм транскутанной
фотомодификации небольших объемов крови и «трансляции» (передачи) ею вызванных
светом изменений всему ОЦК.
Теоретическое и практическое значение работы: Выявленные в работе феномены высокая скорость развития индуцируемых светом изменений состояния Лф и
цитокиновой сети человека в условиях in vivo и in vitro, быстрота их генерализации
через механизм «трансляции» локальных эффектов всему ОЦК представляют
определенный вклад в теоретическую иммунологию и обосновывают необходимость
изучения их молекулярной и биохимической природы. Практическое значение работы
состоит в следующем. Во-первых, она обосновывает роль транскутанной
фотомодицикации крови в иммуномодулирующем и противовоспалительном действии
видимого и И К света от различных фототерапевтических аппаратов, широко
используемых современной медициной. Во-вторых, в ней впервые доказывается
стимулирующий/регулирующий характер влияния на иммунную систему человека
важнейшего фактора среды - полихроматического видимого и И К света, что
представляется чрезвычайно важным в связи с существующим в последние годы
представлением об иммуносупрессивном действии минорной компоненты солнечной
радиации - У Ф лучей. В-третьих, характер выявленных изменений объясняет
терапевтическую
эффективность
полихроматического
света
при
вторичных
иммунодефицитах различной этиологии, вирусных
инфекциях, заболеваниях
воспалительной природы, а также позволяет рекомендовать его использование в
профилактических целях. В-четвертых, изменения иммунологических показателей,
зарегистрированные при эксфузиях небольших объемов крови у лиц контрольной
группы, привлекают внимание к необходимости дальнейшего изучения этого феномена.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Облучение небольшого участка поверхности тела человека полихроматическим
видимым + И К поляризованным (ВИЛ) светом (480-3400 нм) в дозах и интенсивностях,
используемых в лечебной практике, приводит к быстрой, регистрируемой через 0,5 ч 24 ч, модуляции экспрессии маркерных молекул Лф периферической крови, стимуляции
спонтанного и ФГА-индуцированного включения 'Н-тимидина в культурах
мононуклеаров,
снижению
в
плазме
исходно
повышенных
количеств
провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-12, IFN-y) и возрастанию содержания
противовоспалительных цитокинов (IL-10 и TGF-pl). У лиц с низким/нормальным
уровнем IFN-y свет индуцирует его повышение и способствует одновременному
возрастанию содержания физиологического антагониста-IL-10.
- Выявленные изменения сохраняются не менее 24 ч и поддерживаются в ходе
фототерапевтического курса (в течение 5-10 сут), к концу которого развиваются и другие
эффекты: растет относительное содержание моноцитов и Лф, повышается уровень IgM и
IgA, снижается повышенное количество ЦИК.
- Характер и величина эффектов света носят обратную зависимость от исходных
показателей, свидетельствуя о его регулирующем действии на иммунную систему
человека.
- Большое сходство изменений, регистрируемых при параллельном облучении
добровольцев, образцов их крови in vitro и при смешивании облученной и необлученной
аутологичной крови в объемном соотношении 1:10 (что моделирует ситуацию в
сосудистом русле после локального облучения поверхности тела) указывает на то, что
основной механизм быстро развивающихся и многих курсовых эффектов связан с
транскутанной фотомодификацией небольших количеств крови и «трансляцией»
(передачей) ею вызванных светом изменений всему ОЦК.
Реализация результатов работы. Результаты исследования учитываются в лечебной
работе СПб Клинической больницы и поликлиники Р А Н и Центра реабилитации СПб
государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, а также
используются в лекциях и при проведении практических занятий со слушателями курсов
повышения квалификации врачей в Центре лазерной медицины (СПб государственный
медицинский университет им. акад. И.П. Павлова).
Личный вклад автора в проведенное исследование. Экспериментальные данные,
включенные в диссертацию, получены лично автором; проведена статистическая
обработка, обобщение и интерпретация полученных результатов. Участие соавторов в
большинстве опубликованных работ обусловлено научным руководством, теоретической
и практической помощью в проведении эксперимента.
Апробация материалов диссертации
Материалы работы обсуждались на 25 Конгрессах, Конференциях и Симпозиумах, в том
числе: I I I и V Всемирных Конгрессах по лазерной медицине (Афины, Греция, 2000; СанПаоло, Бразилия, 2004); 13-м Международном фотобиологическом Конгрессе (Сан
Франциско, США, 2000); 7-м, 8-м и 10-м Международных Конгрессах Европейской
медицинской лазерной ассоциации (Дубровник, Хорватия, 2000; Москва, 2001; Прага,
Чехия, 2005); 15-м, 16-м, 19-м и 20-м Конгрессах Международной Академии по лазерной
медицине (Флоренция, Италия, 2000, 2001, 2004, 2005); I I I Съезде фотобиологов России
(Воронеж, 2001); Международном Симпозиуме «Биология клетки в культуре» (СПб,
2001); Международной научно-практической Школе-Конференции «Цитокины.
Воспаление. Иммунитет.» (СПб, 2002); V I - V I I I Всероссийских научных Конференциях
с международным участием «Дни иммунологии в СПб» (2002 - 2004); X Европейском
фотобнологическом
Конгрессе
(Вена,
Австрия, 2003);
Научно-практической
конференции «Актуальные вопросы светотерапии» (СПб, 2005), Немецко-российской
Школе по сравнительной иммунологии (СПб, 2005), Конференции иммунологов Урала
(Уфа, 2005) и др.
Диссертационная работа апробирована на совместном научном семинаре
лаборатории радиационной цитологии, группы фотобиологии животной клетки и
лаборатории защитных механизмов клетки Института цитологии Р А Н (07 июля 2005 г.)
и научной конференции отдела иммунологии Н И И экспериментальной медицины Р А М Н
(13 октября 2005 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 40 работ (включая 8 статей), из них 22 - в
зарубежных изданиях.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на^.'^.л страницах машинописного текста и состоит из введения,
3 глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение),
заключения, выводов и списка литературы, включающего 348 публикаций, в том числе
131 - в отечественных и 217 - в зарубежных изданиях. Работа иллюстрирована 15
таблицами и 31 рисунками.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Добровольцы и образцы крови. В исследовании участвовали 250 человек - условно
здоровые добровольцы 18-65 лет, которые рандомизированно были разделены на 2
группы: основную (облучаемую) и контрольную (placebo) группы. Соотношение полов и
возрастной состав в каждой группе были сходными.
Добровольцев первой (основной) группы (150 человек, средний возраст - 42,2 ±
1,8 года) ежедневно в течение 5-10 сут облучали З И П светом (участок крестцовой
области диаметром 15 см) и проводили взятие крови для исследований: 35 мл до начала
эксперимента, по 15 мл через 0,5 и 24 ч после 1-й процедуры и через 24 ч после четырех
и девяти ежедневных процедур (суммарно - 80 мл за 5 сут и 95 мл за 10 сут).
Параллельно с 1-м облучением добровольцев проводили облучение образцов их крови в
чашках Петри при их легком покачивании.
Добровольцев второй (контрольной, placebo) группы составили необлученные
лица (100 человек, средний возраст - 41,3 ± 4,3 года), которым имитировали процедуру
облучения крестцового отдела, закрывая источник света непрозрачным фильтром, и
проводили взятие крови для исследований в те же сроки и в тех же объемах, что и в
основной группе. Участники эксперимента не были информированы о том, к какой
группе они принадлежат.
Принимая во внимание выраженную сезонную зависимость иммунологических
параметров и снижение фотореактивности клеток и компонентов плазмы в летний
период (Ганелина, Самойлова, 1986), облучение добровольцев проводилось с ноября по
март, включительно.
Источник света и процедура облучения. В качестве источника видимого и ИК
поляризованного (ВИП) света использовали фототерапевтический аппарат "Bioptron"-2
(Швейцария, 480-3400 им, 95% поляризации, плотность энергии - 40 мВт/см^,
12 Дж/см^). При облучении крови в условиях in vitro использовали дозу 2,4 Дж/см^,
поскольку только 20% падающей на поверхность тела энергии света достигает
сосудистой сети (Samoilova et. al., 1998).
Методы исследования: Выделение мононуклеаров из гепаринизированной крови
производили стандартным методом (Вйуит, 1974), в градиенте плотности "Histopaque1.077", (Sigma, США).
Лейкоцитарную
формулу пеуифеуической крови определяли
с
помощью
автоматического анализатора «Cell-Dyn» фирмы «Abbott» (США) и выражали в
абсолютных (количество лейкоцитов *10'/л) и относительных единицах (процентное
содержание мононуклеаров и нейтрофильных гранулоцитов).
Фенотип ЛФ изучали в лимфоцитотоксическом тесте (Исхаков, 1988) с использованием
моноклональных антител к дифференцировочным антигенам CD3, CD4, CD8, CD20,
CD16, CD25, HLA-DR, CD95 («Медбиоспектр», Москва).
Спонтанный и митоген-индуиированный синтез ДНК
в Лф
исследовали
радиометрическим методом. Фитогемагглютинин-Р (ФГА; "Sigma", США) добавляли в
культуральную среду в финальных концентрациях 20 и 40 мкг/мл. Суспензию
мононуклеаров культивировали в течение 72 ч при 37°С и 5% СО2 во влажной среде; за
4 ч до окончания инкубации вносили 37 кВк меченого 'Н-тимидина («Изотоп», СПб).
Уровень бластгрансформации Лф оценивали по интенсивности включения изотопа,
которую регистрировали с помощью сцинтилляционого счетчика "Rackbeta".
Содержание IsG. IsA и 1гМ в сыворотке крови изучали турбидиметрическим методом с
использованием автоматического анализатора "Kone-specific" и тест-систем "Kone-Lab"
(Финляндия).
Содержание ЦИК в сыворотке крови определяли стандартным методом преципитации
5%-ным раствором П Э Г (м. м. 6000) с последующей спектрофотометрией при X = 450
им. Количество ЦИК определяли по разнице величин оптической плотности в опыте и
контроле, выражая в условных единицах (Hashkova, 1978).
Исследование уровня цитокинов в плазме/сыворотке периферической крови проводили
методом твердофазного И Ф А с использованием тест-систем «R&D Systems» (США).
Восемь цитокинов (TNF-a, IL-lp, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-7) изучали в плазме
крови, используя в качестве антикоагулянта гепарин, а при тестировании IFN-y - ЭДТАкалиевую соль. Содержание IFN-a и TGF-pi определяли в сыворотке крови.
Статистическую обработку полученных результатов проводили параметрическими и
непараметрическими методами для попарно связанных результатов (t-критерий
Стьюдента и ранговый U-критерий Вилкоксона). Корреляции эффектов с исходным
уровнем и между собой рассчитывались по методу Пирсона и Спирмена. Все расчеты
производились на PC Pentium-2 с помощью программы "Microsoft Excel 7.0" для
Windows 98 и "Statistica - 6" (Зайцев и др., 1999).
7
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Показатели иммунного статуса у 250 добровольцев обнаруживали высокую
индивидуальную вариабельность: количество мононуклеаров, экспрессирующих тот или
иной мембранный маркер, варьировало в 3-5 раз, спонтанное включение 'Н-тимидина в
культурах MOHOHjTcieafWB - в 6,3 раза, ФГА-индуцированное включение - в 27-66 раз,
содержание ЦИК - в 20 раз, а уровень цитокинов - в сотни раз. Характер вызванных
светом изменений зависел от исходного уровня показателей, что подтверждалось
отрицательными значениями коэффициента корреляции. При суммировании данных
разнонаправленные эффекты в ряде случаев нивелировались, поэтому при анализе
результатов участников тестирования обычно делили на 3 подгруппы - с исходными
показателями, соответствующими норме, ниже и вьппе нормы, а если уровень нормы не
был окончательно установлен, деление проводили по медиане (меньще и больше
медианы).
Влияние света на содержание мононуклеаров в периферической крови. Ежедневные
в течение 10 сут облучения В Р Ш светом небольшого участка поверхности тела 23
добровольцев не влияют на общее количество лейкоцитов и долю нейтрофильных
гранулоцитов, но индуцируют увеличение относительного содержания Лф и моноцитов
(в среднем, на 3% и 0,5%, соответственно). Достоверная обратная зависимость этих
эффектов от исходного уровня клеток (коэффициент корреляции г составляет,
соответственно, -0,68, р<0.01 и -0,50, р<0.05), свидетельствует о том, что свет
способствует приросту количества клеток в тех случаях, когда их исходное содержание
снижено.
Влияние света на экспрессию мембранных маркеров и субпопуляционный состав
Лф. Уровень нормы устанавливали в соответствии с имеющимися данными ведущих
лабораторий Санкт-Петербурга (Рекомендации рабочей группы СПб Р А А К И , 1999), в
том числе лаборатории иммзтгогематологии РосНИИ гематологии и трансфузиологии, на
базе которой выполнялся данный раздел работы. Уже через 0,5 ч после 1-го облучения
добровольцев в периферической крови возрастает количество клеток, экспрессирующих
CD3 антиген (на 8%) и CD8 антиген (на 9%), у лиц с их исходно сниженным уровнем
(рис. 1А, Б), а также число CD20^ CD16* и НЬА-ВК*мононуклеаров (на 5%, 6% и 8%,
соответственно) у добровольцев с их исходно нормальным количеством. Доля
СП25*клеток возрастает лишь через 24 ч, а уровень С095*клеток не меняется (табл. 1). В
то же время повышенный уровень CD20*, CD 16*, HLA-DR*, CD25* и СВ95'*'клеток столь
же быстро снижается, достигая верхней гр^шицы нормы (табл. 1). Наиболее
светочувствительной оказьгеается CD4 молекула: это единственный маркер, экспрессия
которого (и как следствие - количество СП4*Лф) немедленно снижается при
нормальных исходных показателях (на 8%) и остается на этом уровне до конца 10дневного курса. Тем не менее, в случае низкого количества СВ4*Лф оно постепенно
40
It-
35
30
Ф
25
!
20
*
опыта
in Время
vtvo после 1-го облучения
Т placeboВарианты
in vitro
* *
* * T -г
1 i
A * *
ИХХ
■
1
if
II
Время после 1-го облучения
Варианты опыта
—
* ^
ПЧ
11
^°^\^V.."^
tБ
в
Время после 1-no облучения
i$> sO
^"oif^
Варианты опыта
Рис. 1. Изменения содержания CD3+(A), CD8-i-(B) и CD4+(B, Г) лимфоцитов в периферической крови добровольцев с их исходно
нормальным (В) и пониженным (А, Б, Г) уровнем после транскутанного (in vivo) ВИП-облучения крови, после параллельного
ВИП-облучения образцов крови тех же добровольцев in vitro и смешивання облученной и необлученной аутологичной крови (1:10),
после гемоэксфузнй у лиц контрольной (placebo) группы
По горизонтали - сроки тестирования крови: до - исходный уровень; через 0.5 и 24 ч после 1-го облучения;
5 и 70 сут - через 24 ч после четырех и девяти ежедневных облучений. По вертикали - количество клеток, % ( т + SE).
Прерывистая линия - нижняя граница нормы. Отличие от исходного уровня достоверно: * -р<0.05; ** -р<0.01; *** -/КО.01
возрастает - к 10 сут (рис. 1Г). К этому времени на 6% увеличивается и доля
проапоптотических С095^клеток. В наибольшей степени после курсового воздействия
света возрастает количество CD8* (на 9%) и НЬА-ПК*мононуклеаров (на 13%). Что
касается иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4/CD8), нами не выявлено его
изменений при исходно нормальные значениях, однако в случае сниженных показателей
регистрировалось его возрастание, а при повышенных - снижение.
Таблица 1.
Степень достоверных изменений количества мононуклеаров, экспрессирующих
различные мембранные маркеры (Л, % ) , в крови добровольцев в курсе
В И П облучений и в образцах крови, облученных in vitro
Исходный
уровень
Норма
Выше
нормы
Маркеры
CD20
CD16
CD25
HLA-DR
CD95
CD20
CD16
CD25
HLA-DR
CD95
Одно1фатное облучение
Свет
in vivo*
Свет
in vitro*
+6
+5
+5
+7
+6
+4
+5
+4
+3
-6
-5
-3
-5
-5
-4
-7
-5
-4
-6
placebo**
-
+4
-
+5
-8
-10
-15
-6
-5
Курсовое облучение
Свет
in vivo
+3
+7
+6
+13
+6
-
-7
-7
-9
-5
placebo
+4
+4
-
+7
-11
-
-11
_
-
* Суммированы результаты для двух сроков после однократного облучения крови
in vivo (через 0,5 и 24 ч) и двух вариантов опытов in vitro
** Суммированы результаты двух гемоэксфузий: до начала эксперимента и через 0,5 ч
Чтобы выяснить, в какой степени изменения экспрессии маркеров Лф
периферической крови развиваются вследствие прямого действия света, параллельно с
1-м облучением добровольцев образцы крови каждого их них облучали in vitro (в чашках
Петри). Изменения количества клеток, экспрюссирующих тот или иной маркер,
развивались в условиях in vitro столь же быстро, как и in vivo, и оказывались при этом
очень сходными с таковыми при облучении добровольцев (рис. 1, табл. 1), что
подтверждается высокими положительными коэффициентами корреляции эффектов в
этих двух вариантах исследования: г варьирует от 0,44 (р<0.05) до 0,75 (р<0.01).
Моделируя события в сосудистом русле облученных добровольцев, мы смешивали
образцы облученной и необлученной аугологичной крови в обьемном соотношении 1:10.
Несмотря на 10-кратное разведение облученной крови необлученной, вызванные светом
10
изменения не только не исчезали, но сохранялись и даже в отдельных случаях
усиливались. Высокая степень корреляции изменений с таковыми при прямом (in vitro) и
транскутанном (in vivo) облучении крови (г варьирует от 0,50, р<0.05, до 0,81, р<0.01)
дает основание заключить, что модифицированная светом кровь способна
«транслировать» вызванные светом эффекты. Этот феномен позволяет понять, каким
образом облучение небольшого участка поверхности тела приводит к изменению Лф
всего ОЦК.
Влияние однократных воздействий света на спонтанное и ФГА-индуцированное
включение ^Н-тимвдина в культурах мононуклеаров.
В мононуклеарах, выделенных из крови 20 добровольцев через 0,5 ч после их облучения
и затем культивирования в течение 72 ч, спонтанное включение 'Н-тимидина оставалось
на уровне исходных величин (т.е. показателей до светового воздействия), однако в
клетках, выделенных через 24 ч, оно возрастало в 2.5 раза. Эффект был статистически
достоверен только у лиц с исходно (до облучения) сниженным уровнем включения
изотопа (рис. 2А), а у добровольцев с исходно высокими показателями он
регистрировался лишь в 60% случаев. Прямое (in vitro) облучение образцов крови тех же
добровольцев и добавление облученной крови к 10-кратному объему необлученной
также стимулировало включение ^Н-тимидина - в 2 и 3 раза, соответственно (рис. 2А).
Сходство эффектов в обоих вариантах опытов in vitro подтверждается высоким
коэффициентом корреляции -0,92 (р<0.01).
В параллельных опытах у тех же добрювольцев исследовали митогениндуцированный (20 и 40 мкг/мл Ф Г А ) синтез ДНК. Не влияя на исходно высокий
уровень ФГА-индуцированного включения 'Н-тимидина, облучение повышало ответ Лф
на митоген (в среднем в 3 раза) у лиц с его исходно низкими значениями. Наиболее
значительно усиливался митоген-индуцированный синтез ДНК в Лф при использовании
оптимальной дозы Ф Г А (40 мкг/мл), что проявлялось в его достоверном возрастании в
клетках, выделенных из крови не только через 24 ч, но и через 0,5 ч (рис. 2Б).
Облучение крови тех же добровольцев in vitro и смешивание облученной и
необлученной крови не приводило, однако к достоверному возрастанию ФГАиндуцированного включения ■'Н-тимидина (рис. 2Б), хотя эффект стимуляции
регистрировался в обоих вариантах опыта в 70-80% случаев. Это можно объяснить
меньшей зависимостью эффекта света от исходного ответа Лф на митоген в условиях in
vitro, чем in vivo, вследствие чего у двух-трех человек из 11 лиц с исходно сниженным
уровнем митоген-индуцированного синтеза ДНК облучение крови in vitro
сопровождалось не возрастанием, а снижением включения метки. Тем не менее, при
анализе результатов выявлялась высокая степень положительной корреляции изменений
ФГА-индуцированного включения ''Н-тимидина после облучения крови одних и тех же
лиц в условиях in vivo и in vitro (табл. 2Б). Столь же большое сходство обнаруживалось и
при сопоставлении изменений синтеза ДНК при прямом облучении крови in vitro и
смеигавании
облученной
и
необлученной
крови
(табл.
2 А ) . Совокупность
этих
результатов позволяет заключить, что повышение ответа на митоген Л ф периферической
крови облученных добровольцев в значительной степени обусловлено транскутанной
фотомодификацией небольшого количества крови и «трансляцией» вызванных светом
изменений всему О Ц К . В условиях in vitro выявлено большое сходство в действии на
синтез
ДНК
света
и
оптимальной
концентрации
ФГА
(40
мкг/мл),
фотомодифицированной крови (1:10) и Ф Г А , что, однако не регистрируется in vivo (табл.
З А ) , по всей вероятности, из-за сочетанного влияния света и гемоэксфузий.
Таблица 2.
Сходство изменений ДНК-синтетической активности Лф:
А - в двух вариантах опытов in vitro; Б - in vivo и in vitro (через 0.5 ч-24 ч
после облучения добровольцев и в двух вариантах опытов in vitro)
Варианты
Д Н К синтеза
Позиции
сравнения
А
Б
^^s^
^\_^
свет- 1:10
0.5 ч-свет
0.5 4-1:10
24 ч - свет
24ч-1:10
Значения коэффициента корреляции (г)
в различных вариантах эксперимента
Спонтанный
ФГАФГАД Н К синтез
индуцированный
индуцированный
Д Н К синтез
Д Н К синтез
(20 мкг/мл)
(40 мкг/мл Ф Г А )
0.92**
0.92**
0.85**
0.11
-0.23
0.64*
0.77**
0.65*
0.75**
0.48
0.84**
0.77**
0.85**
0.58*
0.81**
* и ** -значения коэффициента корреляции достоверны,;7<0.05 и/КО.01, соответственно
Таблица 3.
Сходство изменений синтеза Д Н К в Лф при действии на них света и Ф Г А (А)
и зависимость вызванных светом изменений ФГА-индуцированного синтеза
Д Н К в клетках от их исходного ответа на Ф Г А (Б)
Варианты
корреляц
ий
Концентрация
ФГА
А
20 мкг/мл
40 мкг/мл
Б
20 мкг/мл
40 мкг/мл
Значение коэффициента корреляции г
In vivo
In vitro
24 ч
Свет
0,5 ч
0.04
0.12
-0.66**
-0.64**
1:10
0.13
0.30
0.16
0.64**
0.33
0.58**
-Ю.63**
-0.83**
-0.31
-0.30
-0.30
-0.35
Значение коэффициента корреляции г статистически достоверно: * -р<0.05; ** -/КО.01
**
Т ^—г*^
II . ; y i p
Время после 1-го облучения
**
60
' Т
^^
*
ч
.^
*
^w
11-.1
0,5 ч
24 ч
5сут
Юсуг 17еуг
Время после 1-го облучения
Placebo!
-ВИП свет ■
Варианты опытов
placnhn
J _
!Г 50
i 40
X
J 30
**
т
2Б
до
i
Г
120
10
0
Т т
^ш ^н
0,S ч 24 ч
до
^яН1
0,5 ч 24 ч
Время после 1-го облучения
0.5 ч
до
ВИП
1 10
Варианты опытов
13Б
24 ч
бсут
Юсут 17сут
Время после 1-го облучения
•
ВИП свет - « - Placebo
Рис 2. Изменения спонтанного (А) и ФГА-индуцироваиного (Б) включения ^Н-тимидина в культурах мононуклеяров
периферической крови после транскутанного (in vivo) ВИП-облучения крови, после параллельного ВИП-облучения образцов
крови тех же добровольцев in vitro и смешивания облученной и необлученной аутологичной крови (1:10), после гемоэксфузий
у лиц контрольной группы
РиеЗ Изменения содержания Ig М (А) и IgA (Б) в сыворотке крови добровольцев с их исходно нормальным уровнем после
транскутанного (in vivo) ВИП-облучения крови и после гемоэксфузий у лиц контрольной группы
Обозначения как на рис. 1.
13
Вместе с тем, именно при облучении крови в условиях in vivo, которое стимулирует
ФГА-индуцированный синтез наиболее значительно, выявляется достоверная
аддитивность эффектов света и обеих концентраций митогена: чем ниже реакция клеток
на митогенный стимул, тем значительнее она усиливается светом, и наоборот (табл. ЗБ).
Проводя в параллельных опытах исследование синтеза ДНК в Лф тех же добровольцев, у
которых изучались изменения экспрессии мембранных маркеров, мы установили, что
изменения и спонтанного, и ФГА-индуцированного включения ''Н-тимидина
коррелировали в условиях in vivo и in vitro только с изменениями количества CD8*
клеток.
Влияние света на показатели гуморального иммунитета. В курсе ежедневных ВИПоблучений 26 добровольцев содержание в сыворотке крови IgG не менялось, но
содержание IgA достоверно возрастало: к 10 сут оно увеличивалось у разньк лиц на
3-94%, в среднем - на 17% (рис. ЗА), и оставалось на этом уровне как минимум 1 нед
после окончания курса. Постепенно увеличивалось и содержание IgM, которое к 10 сут
превышало исходные значения у отдельных лиц на 6-200%, в среднем, на 26% (рис. ЗБ).
Спустя 1 нед содержание IgM возвращалось к исходному уровню. В контрольной группе
изменения количества IgA и IgM не обнаруживались, за исключением кратковременного
снижения уровня IgM через 0,5 ч после 1-й гемоэксфузии.
Содержание ЦИК у добровольцев с их нормальным уровнем не менялось, однако
в группе из 5 добровольцев, отличавшихся превышающим норму уровнем ЦИК, оно
достоверно снижалось на 19% до верхней границы нормы (р<0.05). У лиц контрольной
группы изменения не выявлялись.
Влияние света на уровень цитокинов в крови добровольцев. Объем выборок
варьировал от 26-30 чел (IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TGF-pi) до 53-56 чел (IFN-r, IL-10).
Тестируя цитокины у жителей Санкт-Петербурга с помощью реагентов американской
фирмы R & D Systems, мы не могли ориентироваться ни на нормы, разработанные для них
с использованием отечественных реагентов, ни и на нормы, рекомендуемые фирмойпроизводителем, поскольку они определялись у жителей США - другой популяции
людей. Поэтому вначале мы установили диапазон концентрации каждого цитокина,
который при использовании американских тест-систем характеризует уровень нормы у
жителей нашего региона. В силу более высокой чувствительности импортных реагентов,
верхняя граница нормы для ряда цитокинов оказалась ниже той, что приводится
отечественными исследователями (50 пг/мл), хотя для TNF-a, IFN-y и IL-10 она была
выше. Это расхождение мы объясняем тем, что возрастной диапазон наших
добровольцев (18-65 лет) был значительно шире, и в среднем старше того донорского
контингента, который обычно привлекается для определения уровня нормы различных
показателей гомеостаза (до 30 лет).
Как видно из табл. 4, IL-ip и IL-2 не выявляются в плазме крови добровольцев ни
до, ни после ее облучения in vivo и in vitro; не изменяется и уровень IFN-a..
Таблица 4.
Уровень провоспалительных цитокинов (ш ± SE, пг/мл) в плазме крови добровольцев
после их однократного и 4-кратного ежедневного ВИП-облучевия, после облучения образцов
крови тех же добровольцев in vitro и смешивания облучеиио|} и необлучениой аутологичной крови (1:10)
Однократное облучение
доброволы1ев
Через 0,5 ч
Через 24 ч
Облучение крови
in vitro
1:10
Свет
Цитокивы
Исходный
уровень
п
До
облучения
IL-IP
норма
выше
нормы
норма
выше
нормы
норма
выше
нормы
норма
выше
нормы
33
0
0
0
0
0
0
17
0
0
0
0
0
0
25
3.2 ± 1.5
396.7±167.9
2.6 ± 0.7
11.7 ±6.4
0.9 ± 0.7
0
0
0
0.9 ± 0.8
0
1.3 ±1.2
3
14
4
2.2 ± 0.7
17.6 ±1.9
1.1 ±0.5*
1.5 ± 1 . 1 *
1.4 ±0.5
1.4 ±0.8***
0.7 ±0.3*
1.7 ±0.9**
1.0 ±0.3*
3.6 ±1.8*
0.8 ± 0.2*
2.0 ±1.0*
норма
выше
нормы
14
1.6 ± 0.7
14.5 ±1.3
0.4 ±0.4
8.6 ±5.1
1.4 ±1.0
3
6.5 ±6.5
0.4 ± 0.4
0**
1.4 ±1.0
3.2 ±3.2
2.0 ±1.2
3.0 ±3.0
IL-2
TNF-a
IL-6
IL-12
4-кратное
облучение
IFN-a
норма
выше
нормы
23
3
7.7 ±4.5
209.3 ±21.3
9.2 ± 4.8
216.7 ±13.2
7.1 ± 4.0
198.0 ±7.1
8.2 ± 4.2
237.0 ±31.5
-
-
IFN-Y
норма
выше
нормы
34
9
13.4 ±3.0
150.4 ±52.3
44.3 ± 14.3*
97.7 ±28.9*
45.5 ±13.9*
46.1 ± 16.6*
53.6 ±11.4*
30.0 ±16.4*
54.4 ±18.8*
123.9 ±45.4
70.4 ± 24.3*
69.3 ± 24.0*
Отличие от исходного уровня достоверно: * р<0.05; *♦ р<0.01; *** р<0.001
Таблица 5.
Уровень противовоспалительных (ш ± SE, пг/мл) цитокинов в плазме крови добровольцев
после однократного и 4-кратного ежедневного ВИП-облучения, после облучения образцов
крови тех же добровольцев in vitro и смешивания облученной и необлученной аутологичной крови (1:10)
Однократное облучение
добровольцев
Через 0,5 ч Через 24 ч
Цитокины
Исходный
уровень
п
До
облучения
IL-4
норма
выше
нормы
17
0
IL-10
норма
выше
нормы
31
3
6.1 ±1.3
69.7 ±18.4
TGF-pi
норма
выше
нормы
ниже
нормы
7
7
39.5 ±1.0
49.5 ±3.1
39.4 ± 3.4
44.1 ±3.3
5
27.1 ±2.9
39.5 ± 7.2*
0
0
4-кратное
облучение
Облучение крови
in vitro
Свет
1:10
0
0
0
19.3 ±2.2*
14.2 ±3.2**
24.4 ± 24.3
19.0 ±6.7*
29.4 ± 23.6
45.8 ± 5.9
54.0 ±8.6
35.1 ±2.1
46.9 ± 3.3
-
-
37.2 ± 5.0*
37.3 ± 7.2
-
-
16.4 ±4.1** 21.5 ±4.8**
48.1 ±48.0 55.3 ±44.3
Отличие от исходного уровня достоверно: * р<0.05; ** р<0.01; *** рО.001
16
Однократное облучение добровольцев индуцирует через 0,5 ч возрастание в
плазме крови исходно низких/нормальных концентраций IFN-y - в 4 раза. В контрольной
группе отмечается противоположный эффект - снижение до нуля. В то же время у лиц с
превышающими норму концентрациями IL-6 и IFN-y зарегистрировано их снижение до
уровня нормы через 0,5 ч (в 12 и 1,5 раза, соответственно), а IL-12 - к 5 сут (в 15 раз).
Эффекты сохраняются не менее 24 ч и поддерживаются в ходе курсовых облучений. В
контрольной группе достоверные изменения IL-6 и EL-12 не выявлены.
С такой же быстротой снижается содержание цитокинов и после прямого
облучения крови in vitro и смешивания облученной и необлученной крови (табл. 4).
При этом регистрируется и феномен «трансляции» - сходство изменений уровня
цитокинов при прямом действии света и при добавлении облз^ченной крови к 10кратному объему необлученной, и высокая степень сходства изменений,
индуцированных в условиях in vivo и in vitro: во всех вариантах тестирования г
варьирует от 0,56 (р<0.05) до 1,00 (р<0.01).
Не влияя на содержание 1L-4, ВИП свет способствует быстрому, почти
3-кратному, возрастанию в плазме облученных добровольцев количества 1L-10 (у лиц с
его исходно низким/нормальным уровнем) и TGF-pl - у добровольцев с пониженным
содержанием (в
1,5 раза). При этом повышенные концентрации обоих
противовоспалительных цитокинов не снижаются (табл. 5). В случае IL-10 не
обнаруживается ни регулирующий характер действия света, проявляющийся в обратной
зависимости его эффектов от исходных показателей (г = -0.23, р>0.10), ни высокая
степень корреляции с эффектом В И П света in vitro (через 24 ч после 1-го и 4-го
облучения). Это связано с влиянием сопутствующих воздействию света эксфузий крови
для исследований: через 24 ч после двух взятий крови объемом 50 мл у лиц контрольной
группы в 1,8 и 2 раза возрастает как исходно нормальный, так и исходно повышенный
уровень IL-10. Отсюда следует, что регистрируемое в крови облученных добровольцев
увеличение количества IL-10 отчасти обусловлено процедурой гемоэксфузий, хотя
сходство с эффектом in vitro достаточно велико через 0,5 ч после 1-го облучения (г =
-О.78,р<0.01).
Таким образом, В И П свет индуцирует глубокие изменения в цитокиновой сети,
снижая повышенный уровень провоспалительных факторов (прежде всего,
моноцитарно-гранулоцитарного происхождения) и повышая содержание IL-10 (рис. 4).
Параллелизм одновременного возрастания уровня двух физиологических антагонистов IFN-y и IL-10 - у одних и тех же добровольцев, значительно больший прирост
количества IFN-y иллюстрирует рис. 5.
17
s
о
5сут
Время после 1-го облучения
Рис. 4. Характер одновременных изменений про- и противовоспалительных
цнтокинов в плазме крови добровольцев (п=17) после транскутанного (in vivo)
ВИП-облучения крови
По горизонтали - сроки тестирования крови
до - исходный уровень; через 0.5 и 24 ч после 1-го облучения;
5 сут - через 24 ч после четырех ежедневных облучений.
По вертикали - содержание цитокина, пг/мл ( т + SE)
Отличие от исходного уровня достоверно: + р=0.06; * - р<0.05, ** - р<0.01
Время после 1-го облучения
Варианты опыта
Рис. 5. Одновременное возрастание содержания I F N ^ и IL-10 в плазме крови
добровольцев с исходно нормальным уровнем I F N ^ (п===21) после транскутанного
(in vivo) ВИП-облучения крови, после параллельного ВИП-облучения образцов
крови тех же добровольцев in vitro и смешивания облученной и необлученной
аутологичной крови (1:10).
Обозначения как на рис. 1-4.
Отличие от исходного уровня достоверно: * - р<0.05, ** - р<0.01, ♦♦* - р<0.001
18
Итак, полученные результаты свидетельствуют о выраженном модулирующем
действии полихроматического света экологического диапазона (без У Ф компоненты) на
функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и цитокиновую сеть
периферической крови. Однако практически в каждой из четырех глав
экспериментальной работы поднимаются вопросы, которые нуждаются в проведении
дальнейших исследований.
Прежде всего, большой неожиданностью явились зарегистрированные нами
изменения некоторых изученных параметров в контрольной группе, это явление мы
связываем с процедурами взятия венозной крови, т.е. с кровопотерей, болевым и
эмоциональным
стрессом.
Следует
значительно
расширить
исследования
иммунологических эффектов, индуцируемых небольшими по объему гемоэксфузиями и,
возможно, при определенных ситуациях использовать их с целью иммунокоррекции.
Информативность результатов тестирования экспрессии мембранных маркеров
мононуклеаров существенно возросла бы при использовании метода проточной
цитофлуориметрии с двойными и тройными метками. Это позволило бы уточнить, с
какими показателями коррелирует увеличение количества клеток, экспрессирующих тот
или иной маркер, выявить реальные изменения субпопуляционного состава Лф, оценить
возможность и сроки апоптотической гибели клеток и т. п.
В связи с тем, что эффекты света экологического диапазона длин волн
(длинноволнового У Ф А , видимого и ИК излучений) связываются в настоящее время с
образованием клетками активных форм кислорода и азота, представляется
исключительно важным как изучение механизмов высокой скорости развития
иммунологических эффектов света, так и интереснейшего и пока мало известного
феномена «трансляции» - передачи вызванных светом изменений от небольшого
количества непосредственно облученной крови к значительно большему объему
необлученной. В частности, представляется актуальным выяснить, какова максимальная
степень разведения облученной крови необлученной, при которой все еще сохранится
«трансляция» тех или иных вызванных светом изменений. Поскольку наша гтютеза о
роли в этом явлении активных форм кислорода и азота базируется пока на косвенных
фактах, литературных данных, имеет смысл продолжить исследование.
Исследования цитокиновой сети, проводившиеся методом ИФА, могут быть
дополнены изучением внутриклеточного синтеза ряда цитокинов и, прежде всего - IL-2,
поскольку необходимо уточнить, какие механизмы определяют возможность
стимуляции ДНК-синтетической активности Лф при действии света. Кроме того, это
позволило бы сопоставить чувствительность к свету Т-хелперов 1 и 2 типов.
Интригующим остается и механизм исключительно быстрых изменений содержания в
плазме крови цитокинов. По нашему мнению, здесь заслуживает внимания, прежде
всего, иммуномодулирующая роль о2-макроглобулина, способного при действии
оксидантов (а видимый и ближний ИК свет обладают такой активностью) связывать
19
провоспалительные цитокины и освобождать противовоспалительные белки и ростовые
факторы. Однако необходимо проверить вклад и других возможных механизмов, в
частности, освобождения преформированных форм цитокинов, повышения в плазме
уровня растворимых рецепторов, роли эритроцитов, тромбоцитов и альбумина как
переносчиков цитокинов и т.п.
Как показывают работы последних лет (Tuner, Hode, 2002; Obolenskaya, Samoilova,
2002; Vologdina, Samoilova, 2003), поляризованность света не является обязательным
условием его эффективности. Это обстоятельство позволяет предполагать, что действие
на иммунную систему человека естественного (неполяризованного) полихроматического
видимого и И К света будет сходным с таковым в случае ВИП света. Задача будущих
исследований состоит в выяснении того, каким образом при действии на организм
человека солнечной радиации суммируются иммунологические эффекты ее отдельных
компонент - У Ф , видимого и ИК излучений с учетом сезонных и суточных изменений
соотношения их энергии.
ВЫВОДЫ:
1. Однократное облучение добровольцев полихроматическим видимым и инфракрасным
светом через 0,5 - 24 ч приводит к увеличению в периферической крови количества
клеток, экспрессирующих маркеры CD3, CD8, CD 16, CD25 и HLA-DR (на 5 - 11%), и
снижению уровня СП4*клеток (на 8%).
2. Характер влияния света зависит от исходных показателей, эффекты усиливаются при
курсовых воздействиях. Это особенно выражено при сниженном уровне €04"^ и CDS"^
лимфоцитов (прирост в обоих случаях - на 9%) и низких/нормальных показателях
НЬА-ОК'^клеток (+13%).
3. Однократное облучение добровольцев через 0,5 - 24 ч приводит к повышению ФГАиндуцированного и спонтанного включения ''Н-тимидина в культурах мононуклеаров
(в 2.6 раза). Выявлена достоверная положительная корреляция между включением
■'Н-тимидина и уровнем CDS* клеток в периферической крови.
4. Однократное облучение добровольцев индуцирует через 0,5 ч возрастание в плазме
крови исходно низких/нормальных концентраций IFN-y (в 4 раза), IL-10 (в 2 раза) и
TGF-pi (в 1,5 раза). Повышенные концентрации IL-6 и IFN-y снижаются до уровня
нормы через 0,5 ч, а IL-12 - к 5 сут. Эффекты сохраняются не менее 24 ч и
поддерживаются в ходе курсовых облучений. Содержание IL-ip, IL-2, IL-4 и IFN-a не
меняется.
5. Регистрируемые у облученных лиц быстрые изменения уровня экспрессии маркеров
лимфоцитов (и как следствие - количества клеток, несущих тот или иной маркер),
включения ^Н-тимидина в культурах мононуклеаров и содержания цитокинов
20
отмечаются и после облучения образцов крови тех же добровольцев in vitro, а также
после смешивания
облученных
и
необлученных
образцов
аутологичной
крови
в
объемном соотношении 1:10 (феномен "трансляции" вызванных светом изменений).
6. К концу курсового облучения добровольцев в периферической крови возрастает
относительное содержание циркулирующих моноцитов и лимфоцитов ( + 0 , 5 % и + 3 % ,
соответственно), концентрации I g M
(+26%)
и IgA
(+17%), а также
уменьшается
содержание Ц И К (на 19%).
СПИСОК РАБОТ, О П У Б Л И К О В А Н Н Ы Х ПО Т Е М Е ДИССЕРТАЦИИ
Статьи:
1. Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Оболенская К.Д. Изменения некоторых параметров
гуморального
иммунитета
при
воздействии
на
поверхность
тела
человека
полихроматического видимого и инфракрасного света // Мед. иммунология. - 2002. - Т. 4, №
4-5.-С. 573-582.
2. Zhevago N,A., Samoilova К.А., Glazanova T.V., Pavlova I.E., Bubnova L.N., Rosanova O.E.,
Obolenskaya K.D. Exposures of human body surface to polychromatic (visible + infrared) polarized
light modulate a membrane phenotype of the peripheral blood mononuclear cells // Laser Technol. 2002.-Vol. 12(1).-P. 7-24.
3. Жеваго H.A., Самойлова K.A., Глазанова T.B., Оболенская К.Д., Баллюзек М.Ф., Романенко
Н.Ю. Изменения экспрессии мембранных маркеров и количества мононуклеаров крови
человека после ее облучения in vivo и in vitro видимым и инфракрасным светом в
терапевтических дозах // Цитология. - 2003. - Т.45, № 2. - С. 179-195.
4. Zhevago N.A., Samoilova К.Л., Obolenskaya K.D. The regulatory effect of polychromatic (visible
and infrared) light on human humoral immunity // Photochem. Photobiol. Sci. - 2004. - Vol. 3,
№.1.-C.102-108.
5. Жеваго H.A., Самойлова K.A. Модуляция пролиферации лимфоцитов периферической крови
после облучения добровольцев полихроматическим видимым и инфракрасным светом //
Цитология. - 2004. - Т.46, № 6 - С.567-577.
6. Самойлова К.А., Богачева О.Н., Жеваго Н.А., Оболенская К.Д., Блинова М.И., Калмыкова
Н.В., Кузьминых Е.В. Повышение ростостимулирующей активности крови человека для
фибробластов после ее облучения in vivo (транскутанно) и in vitro видимым и инфракрасным
поляризованным светом // Цитология. - 2004. - Т.46, № 12. - С. 159-171.
7. Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Оболенская К.Д., Соколов Д.И. Изменение содержания
цитокинов в периферической крови добровольцев после облучения полихроматическим
видимым и инфракрасным светом // Цитология. - 2005. - Т.47, № 5 - С. 446-459.
8. Жеваго Н.А., Самойлова К.А. Быстро развивающиеся структурно-функциональные
изменения лимфоцитов периферической крови как механизм иммуномодулирующего
действия полихроматического (видимого и инфракрасного) света // Медлайн-экспресс - 2005.
-Т.4,№180.-С.31-32.
Тезисы докладов на Конгрессах и Конференциях:
9. Zhevago N.A., Samoilova К.А., Glazanova T.V., Obolenskaya K.D., Bubnova L.N., Rozanova
O.E. Spontaneous and PHA-induced DNA-synthesis in volunteers' blood lymphocytes after their in
vivo and in vitro exposure to visible polarized light at therapeutic doses // Abstr. Book 3"* Congr.
World Assn. Laser Ther. Athens, 2000. - p. 84.
10. Glazanova T.V., Pavlova I.E., Bubnova, L.N., Samoilova K.A., Zhevago N.A., Obolenskaya K.D.
Single and course therapeutic exposures of volunteers to visible polarized light modulate the
21
membrane phenotype in circulating blood lymphocytes // Abstr. Book 3"* Congr.World Assn. Laser
Ther. Athens, 2000-p. 60.
11. Samoilova K.A., Sokolov D.I, Obolenskaya K.D., Zhevago N.A. Modulation of the cytokine level
in circulating blood of volunteers exposed to visible polarized light at a therapeutic dose // Abstr.
Book З"* Congr. World Assn. Laser Ther. Athens, 2000. - p. 84.
12. Samoilova K.A., Zhevago N.A., Glazanova T.V., Obolenskaya K.D., Bubnova L.N., Rozanova O.E.
Regulatory effect of visible polychromatic polarized light at therapeutic dose on the DNA synthesis
// Abstr. Book 13* Int. Congr. Photobiol. San Francisco, 2000. - p. 109.
13. Glazanova T.V., Pavlova I.E., Bubnova L.N., Samoilova K.A., Zhevago N.A. Obolenskaya K.D.
Modulation of the membrane phenotype in circulating blood lymphocytes after single and course
exposures of volunteers to visible polychromatic polarized light // Abstr. Book 13* Int. Congr.
Photobiol. San Francisco, 2000. - p. 112.
14. Samoilova K.A., Sokolov D.I, Obolenskaya K.D., Zhevago N.A. Changes of the content of some
cytokines and growth factors in circulating blood of volunteers exposed to visible polarized light
at a therapeutic dose // Abstr. Book 7* Int. Congr. Eur. Med. Laser Assn. Dubrovnik, 2000. - p. 45.
15. Zhevago N.A., Samoilova K.A., Glazanova T.V., Bubnova L.N., O.E.Rozanova O.E. Effect of
visible polarized light at a therapeutic doses on parameters of humoral immunity // Abstr. Book 15th
Int. Congr. Laser Med. Florence 2000. - p. 113.
16. Samoilova K.A., Sokolov D.I, Obolenskaya K.D., Zhevago N.A. Changes of cytokine level in
circulating blood after exposure of small area of the human body to visible polarized light // Abstr.
Book 15* Int. Congr. Laser Med. Florence 2000. - p. 111.
17. Жеваго H.A., Самойлова К.A., Соколов Д.И., Оболенская К.Д. Видимый поляризованный
полихроматический свет в терапевтических дозах инду1(ирует изменения уровня цитокинов в
крови добровольцев // Тез. докл. III Съезда фотобиологов РФ. - Воронеж, 2001. - С. 65-66.
18 Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Оболенская К.Д. Влияние видимого полихроматического
поляризованногосвета в терапевтической дозе на некоторые показатели гуморального
иммунитета // Тез. докл. III Съезда фотобиологов Р Ф . - Воронеж, 2001. - С. 64-65.
19. Zhevago N.A., Sokolov D.I, Samoilova K.A., Obolenskaya K.D. Changes of some cytokine ratio in
human circulating blood as a mechanism of anti-inflammatory effect of visible polarized light //
Abstr. Book 8* Int. Congr. Eur. Med. Laser Assn., Moscow, 2001. - p . 157.
20. Жеваго H.A., Самойлова K.A., Оболенская К.Д., Соколов Д.И. Транскутанное и прямое (in
vitro)
воздействие на кровь человека видимым поляризованным светом
индуцирует
изменение соотношения про- и противовоспалительных цитокинов // Цитология. - 2001. - Т.
4 3 , № 9 . - С . 859-860.
21. Zhevago N.A., Samoilova К.А., Obolenskaya К D. Percutaneous application of the polychromatic
visible and infrared light affects the pro- and anti-inflammatory cytokine content in human blood //
Abstr. Book 16"" Int. Congr. Laser Med. Florence 2001. - p . l 18.
22. Жеваго H.A., Самойлова K.A., Оболенская К.Д. Модуляция гуморального иммунитета при
транскутанным облучении крови полихроматическим видимым и инфракрасным светом //
Мед. иммунология. - 2002. - Т. 4, Хг 2. - С. 358-359.
23. Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Соколов Д.И., Оболенская К.Д. Немедленное изменение
соотношения про- и противовоспалительных цитокинов в крови человека после ее облучения
in vivo и in vitro полихроматическим светом в терапевтических дозах // Цитокины и
воспаление. - 2002. - Т. 1, № 2. - С. 87-88.
24. Богачева О.Н., Жеваго Н.А., Самойлова К.А. Повышение ростостимулирующих свойств
крови человека для фибробластов после ее облучения in vivo (транскутанно) видимым и
инфракрасным поляризованным светом // Мед. иммунология. - 2003. - Т. 5, № 3-4, С.192-193.
25. Самойлова К.А., Оболенская К.Д., Пустыгина А.В., Жеваго Н.А., Богачева О.Н. Ключевая
роль транскутанной фотомодификации крови в развитии терапевтических эффектов
22
видимого и инфракрасного света // Тез. докл. Ш Межд. Конгресса "Слабые и сверхслабые
поля и излучения в биологии и медицине" - СПб, 2003. - С. 124.
26. Zhevago N.A., Samoilova К.А., Obolenskaya K.D. Changes of humoral immunity after exposures
of volunteers to polychromatic (480-3400 nm) light at a therapeutic dose // Abstr. Book 10* Eur.
Congr. Photobiol. Vienna, 2003. - p. 103.
27. Zhevago N.A., Samoilova K.A., Obolenskaya K.D. Percutaneous application of visible and infrared
light at a therapeutic dose induces changes of pro- and anti-inflammatory cytokine content in human
blood // Abstr. Book 10* Eur. Congr. Photobiol. Vienna, 2003. - p. 63.
28. Samoilova K.A., Bogacheva O.N., Obolenskaya K.D., Zhevago N.A. Systemic mechanisms of
wound healing and prevention of scar formation by exposures of human body to polychromatic
(480-3400 nm) light // Abstr. Book 10* Eur. Congr. Photobiol. Vienna, 2003. - p. 87.
29. Жеваго H.A. Влияние видимого и инфракрасного света на структурно-функциональное
состояние мононуклеаров крови человека in vivo и in vitro // Анн. работ по фант. СПб
конкурса для аспирантов и молодых специалистов. - Изд-во СПб Г У , 2003, С. 42.
30. Zhevago N.A. Effect of V I P light on human immune system: humoral immunity and cytokine
network // Abstr. Book 1 * Simposium on the use of visible incoherent polarized light application in
medicine. Zagreb, 2004. - p.3.
31. Жеваго H.A., Самойлова K.A., Григорьева Н.Б. Изменение пролиферации лимфоцитов
периферической крови человека после облучения полихроматическим видимым и
инфракрасным светом // Мед. иммунология. - 2004. - Т. 6, № 3-5 - С. 230.
32. Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Григорьева Н.Б. Влияние видимого и инфракрасного света на
иммунную систему человека: гуморальный иммунитет и цитокиновая сеть // Лазерная
медицина - Т. 8, Хд 3. - С. 160.
33. Zhevago N.A., Samoilova K.A. Humoral immunity and cytokine network of volunteers after their
exposure to visible and infrared light // Abstr. Book 5"* Congr. World Assn. Laser Ther. San-Paolo,
2004.-p.l4.
34. Жеваго H.A. Экспериментальное обоснование совместного применения видимого и
инфракрасного света для коррекции содержания цитокинов в крови человека // Анн. работ по
грант. СПб конкурса для аспирантов и молодых специалистов. - Изд-во СПбГУ, 2004. - С.31.
33. Жеваго Н.А., Самойлова К.А. Иммунологические аспекты действия полихроматического
поляризованного света: изменения уровня иммуноглобулинов, про- и противо­
воспалительных цитокинов в периферической крови человека // Тез. докл. научно-практ.
конф. "Актуальные вопросы светотерапии". - СПб, 2005. - С. 16.
36. Zhevago N.A. Polychromatic light similar to the terrestrial solar spectrum without its U V
component stimulates DNA synthesis in human peripheral blood lymphocytes in vivo and in vitro II
Abstr. Book D A A D School on «Current trends in Comparative Immunology», St. Petersburg, 2005,
2005. - p . 31.
37. Zhevago N.A. Effect of V I P light on human immune system: humoral immunity and cytokine
network. Abstract book of D A A D School on «Current trends in Comparative Immunology», St.
Petersburg, 2005. - p. 30.
38. Samoilova K.A. Zhevago N.A. Systemic mechanisms of anti-inflammatory and tissue repair effects
of visible and infrared light // Abstr. book X Congr. Eur. Med. Laser Assn, Prague, 2005. - p. 7.
39. Жеваго
H.A.,
Самойлова
K.A.
2005.
Иммунологические
аспекты
действия
полихроматического (видимого и И К ) поляризованного света. Иммунология Урала - 2005. Т . 1 , № 4 - С . 128-129.
40. Samoilova K.A. Zhevago N.A. Systemic mechanisms of anti-inflammatory and tissue repair effects
of visible and infrared light // Lasers in Med. Sciences. Abstr. 20* Int. Congr. Laser Med. Florence,
2005.-VoL20.-S15.
Лицензия Л Р №020593 от 07.08.97
Подписано в печать 17.11.2005. Формат 60x84/16. Печать цифровая.
Усл. печ. л . 1,25. Тираж 100. Заказ 175Ь.
Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором,
в Цифровом 1ипографском центре Издательства Политехнического университета.
195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул., 29.
Тел.: 550-40-14
Тел./факс: 247-57-76
m23l5t
РНБ Русский фонд
2006-4
24743
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
1 147 Кб
Теги
bd000103395
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа