close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000103400

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
Соломатина Марина Александровна
АКТИВАТОРЫ ПЛАЗМИНОГЕНА
В РЕМОДЕЛИРОВАНИИ СОСУДОВ П Р И
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ БАЛЛОННОЙ
АНГИОПЛАСТИКЕ И С Н И Ж Е Н И И КРОВОТОКА
14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология
14.00.06 - кардиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Москва, 2005
Работа вьшопнена в Российском Кардиологическом Научно-Производственном
Комплексе Министерства Здравоохранения Российской Федерации
Научный руководитель:
доктор медицинских наук,
Парфенова Е.В.
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук,
Кобалава Ж.Д.
доктор медицинских наук,
профессор Самко А.Н.
Ведущее учреждение:
Факультет
фундаментальной
медицины
Московского
Государственного Университета им. М.В.Ломоносова.
Защита состоится "24"Qe^^xfi.005
г. в •/Э^асов на заседании диссертационного
совета Д 212.203.18 в Российском университете дружбы народов по адресу:
г. Москва, 117 292, ул. Вавилова д.61.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета
дружбы народов по адресу: г. Москва, 117 198, ул. Миклухо-Маклая, д.6.
Автореферат разослан "cf-/
" МР/?^а
2005 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук
П П. Огурцов
^W^-H
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Ишемическая болезнь сердца (ИБС), вызванная
развитием стенозирующего атеросклероза коронарных сосудов, уже на
протяжении нескольких десятилетий входит в ряд наиболее значимых причин
смертности и инвалидизации населения развитых стран (Hillegan W. et. al, 1993;
Levine G. et al, 1995; Gottsauner-Wolf M. et. al, 1996). Современные подходы к
лечению ишемической болезни сердца направлены на реваскуляризащпо
миокарда либо с помощью хирургических, либо с помощью эндоваскулярных
методов. Эндоваскулярные методы, такие как ангиопластика, стентирование или
атероектомия не уступая по эффективности аортокоронарному шунтированию
вьцодно отличаются от него малой инвазивностью, меньшей стоимостью,
отсутствием необходимости длительной реабилитации. Хотя совершенствование
техники вмешательства позволило повысить эффективность процедур и снизить
число осложнений, остается определенная часть больных, у которых через
несколько месяцев после проведения ангиопластики развивается рестеноз. В
основе развития рестеноза лежат два механизма - образование неоинтимы и
отрицательное геометрическое ремоделирование в участке повреждения
артерии. Рост неоинтимы, активируемый повреждением сосуда, приводит к
увеличению объема ткани, ограниченного внутренней эластической мембраной,
в результате чего просвет сосуда суживается. При ремоделировании сосуда
сужение просвета происходит не за счет увеличения объема ткани внутри
эластической мембраны, а за счет структурной перестройки наружных слоев
артерии, приводящих к ее сужению или не позволяющей ей компенсаторно
расшириться в ответ на рост неоинтимы (Gruetitzig et al. 1987; Hillegas et al.,
1993). Характер ремоделирования сосуда при ангиопластике и атерогенезе важнейшая детерминанта развития стеноза его просвета. При одинаковом
обьеме неоинтимы или бляшки положительное ремоделирование (увеличение
диаметра артерии ) может компенсировать потерю просвета, вызванную ростом
бляшки или неоинтимы, а отрицительное (констриктивное) ремоделирование
(уменьшение диаметра артерии), напротив, будет усугублять потерю просвета.
Патоморфологические
и экспериментальные исследования показали, что
именно геометрическое ремоделирование, а не рост неогаггимы, определяет
развитие рестеноза после баллонной ангиопластики (Glagov,1994; Kakuta
etal.1994). Основным фактором, запускающим ремоделирование, считается
локальное изменение напряжения сдвига в результате изменения линейной
скорости кровотока. Во время ангиопластики просвет сосуда резко
увеличивается, а скорость кровотока и, соответственно, напряжение сдвига в
этом участке сосуда уменьшаются, что запускает ремоделирование, приводящее
к уменьшению диаметра сосуда, которое вместе с ростом неоинтимы
восстанавливает скорость кровотока и напряжение сдвига (Glagov, 1994). Есть
данные, позволяющие считать, что типы ремоделирования сосудов могут быть
генетически детерминированы и могут влиять на прогноз заболевания (Allan
PLet.al.1997; Lange L A et al.2002;Cheng K S et.al.2002).
С помощью
внутрисосудистых ультразвуковых исследований было установлено, что при
исходном положительном ремоделировании в области атеросклеротической
РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ i
БИБЛИОТЕКА
С.Г
99
бляшки реже развивался рестеноз после ангиопластики, чем при исходном
отрицательном
ремоделировании
(Dangas,
etal.1999).
Результаты
Роттердамского исследования (Bots M L etal.1997) показали, что такой индекс
сосудистого ремоделирования как утолщение интимы/медии сонных артерий
является фактором риска развития инсультов и инфарктов.
Ключевьши процессами структурной перестройки сосудистой стенки
являются пролиферация, миграция клеток сосудов, перестройка внеклеточного
матрикса, активирующиеся при различных воздействиях (Clowes et a l , 1983;
Austin et al., 1985; Garratt et al., 1990; Ciezki et al,, 1999; Ruef et a l , 2000). Эти
процессы управляются факторами роста и цитокинами, а также системами
протеолитических ферментов, среди которых ведущие роли играют
фибринолитическая система (система активаторы плазминогена - плазмин) и
система матриксных металлопротеиназ. Эти системы обеспечивают локальный
внеклеточный протеолиз, необходимый для направленного движения клеток в
тканях, активации факторов роста, перестройки внеклеточного матрикса (Dumier
et al.l998, Не S.C, 1989; Matrisian L M . , 1992; Carmeliet, CoUen 1995; Clowes et al.
1990).
Значение этих систем для образования неоинтимы и ремоделирования
сосудов показано в нескольких работах, включая исследования, вьшолненные в
Лаборатории молекулярной эндокринологии Российского Кардиологического
Научно-производственного Комплекса Росздрава. Так установлено, что
активатор плазминогена урокиназного типа (урокиназа, uPA) является
обязательным участником реакции сосуда на повреждение (Парфенова Е.В. с
соав. 2001; More et al. 1995). Синтез урокиназы клетками сосудистой стенки
локально увеличен в атеросклеротической бляшке (Соломатина М. с соав.2004)
и возрастает при повреждении сосуда во время ангиопластики, урокиназа
способствует развитию рестенозов, стимулируя рост неоинтимы (Парфенова с
соав. 2001; Plekhanova О et.al.2001; Parfyonova Ye. et. al. 2004), a у трансгенньгх
мьппей, лишенных гена урокиназы образование неоинтимы подавлено (Carmeliet
Р. et al., 1997). Трансгенная гиперэкспрессия урокиназы в интиме сосуда у
кроликов с
экспериментальной моделью
атеросклероза
стимулирует
констриктивное ремоделирование артерии (Falkenberg M.et.al.2002). Увеличение
синтеза урокиназы обнаружено в интиме сосудов, подвергающихся
ремоделированию в ходе адаптивного артериогенеза, вызванного ишемией
задней конечности (Deindel Е., et.al.2003). И, наконец, повьш1етюе содержание
урокиназы в периферической крови больных, подвергающихся ангиопластике и
стентированию коронарных артерий, соотносится с высоким риском развития
рестенозов (Strauss et al., 1999; Алексеева И.А.2001). Однако молекулярные
механизмы участия активаторов плазминогена и матриксных металлопротеиназ,
роль отдельных компонентов этих систем и взаимодействие этих систем в
процессах ремоделироваггая сосудов остаются неясными. Между тем
активаторы плазминогена, и тканевой ( tPA) и урокиназный (uPA), широко
применяются в медицинской практике в виде рекомбинантных белков для
тромболизиса. Создано несколько ингибиторов матриксных металлопротеиназ,
которые уже начинают применять в клинике (Margolin L, et.al.2002; Herget J ,
et.al.2003; Pfefferkom T, Rosenberg GA,2003; van Beusekom H M , et.al.2003;
Hanessian S, Moitessier N,2004; Maquoi E,et al.2004; Araujo CM, et.al.2005) Bee
это диктует необходимость углубления имеющихся представлений о механизмах
участия активаторов плазминогена и матриксных металлопротеиназ
в
ремоделировании сосудов и развитии рестенозов.
Цель работы:
Исследовать участие активаторов плазминогена и их взаимоотношение с
матриксными металлопротеазами в ремоделировании сосудов при уменьшении
кровотока и экспериме?ггальной баллонной ангиопластике.
В работе были поставлены следующие задачи:
1 Исследовать динамику структурных изменений сонной артерии при
уменьшении кровотока у инбредных мьш^ей двух линий, характеризующихся
генетически детерминированными различными типами ремоделирования
артерий.
2. Исследовать динамику содержания активаторов гшазминогена и
матриксных металлопротеаз в сонных артериях двух линий инбредных мьппей
методом иммуногистохимии и сопоставить с динамикой структзфных изменений
артерий
3. Изучить эффекты периадвентшдаального нанесения рекомбинантных
активаторов плазминогена на баллонированную сонную артерию крысы
изменение структуры сосуда, экспрессию матриксных металлопротеиназ,
аккумуляцию
моноцитов-макрофагов
в
ранний
период
после
экспериментальной баллонной ангиопластики.
4. Оценить динамику изменения структуры сосуда в течении месяца
после
периадвентициального
нанесения
рекомбинантных
активаторов
плазминогена на баллонированную сонную артерию крысы .
Научная новизна.
Впервые установлено, что экспрессия активаторов плазминогена
увеличивается в ответ на падение кровотока в артерии, а динамика этой
эксгфессии совпадает с генетически детерминированными типами структурных
изменений артерии. Показано противоположное влияние активаторов
плазминогена урокиназного и тканевого типов на ремоделирование сосудов,
индуцированное различными воздействиями (уменьшением кровотока,
экспериментальной баллонной ангиопластикой)' урокиназа стимулирует
констриктивное ремоделирование артерии и усугубляет уменьшение её
просвета, а тканевой активатор, напротив, способствует положительному
ремоделированию и расширению просвета Эти различия могут быть отчасти
обусловлены различным влиянием активаторов плазминогена на экспрессию и
активацию матриксных металлопротеиназ и развитие воспалительной реакции в
стенке сосуда после повреждения.
Практическая значимость
Результаты работы способствуют углублению представлений о
молекулярных механизмах, лежащих в основе ремоделирования артерий при
различных патологических состояниях, указывают на активаторы плазминогена,
как на новые терапевтические мишени для предотвращения неблагоприятного
ремоделирования сосудов. Данные о различном влиянии активаторов
плазминогена на изменение структуры сосуда после ангиопластики, могли бы
послужить основой для разработки метода предотвращения развития рестенозов
путем локального введения в сосуд после ангиопластики либо
тканевого
активатора плазминогена, либо ингибиторов урокиназы. Известно, что развитие
рестенозов после стенгирования обусловлено пролиферацией неоинтимы, в
связи с этим полученные в работе данные об ингибирующем развитии
неоинтимы влиянии тканевого активатора плазминогена могли бы послужить
основой для разработки внутрисосудистых стентов, в покрытие которых
включен тканевой активатор плазминогена.
Апробация работы.
Результаты диссертационной работы неоднократно докладывались на
межд5Т1ародных конференциях: X I I Internal Symposiimi on Atherosclerosis
(Стокгольм, Швеция 2000), 18* Scientific Meeting of the International Society of
Hypertension (Чикаго, С Ш А 2000), XIIl"" International Symposium on
Atherosclerosis (Киото, Япония 2003), Eleventh European Meeting on Hypertension,
(Милан, Италия 2001), I X * International Workshop on Molecular & Cellular Biology
of Plasminogen Activation (o. Капри, Италия 2003), 72* European Atherosclerosis
Society Congress (Глазго, Англия 2001) и были представлены на
межинститутском семинаре Института клинической кардиологии им. А Л.
Мясникова и Института экспериментальной кардиологии Р К Н П К МЗСР Р Ф
(г.Москва, июнь, 2005).
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 6 статей и 6 тезисов докладов
Структура работы.
Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, построена
традиционным образом и состоит из введения, обзора литературы, описания
материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов
и списка цитируемой литературы, включающего 274 источника
Работа
иллюстрирована 6 таблицами и 22 рисунками
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальные животные
В качества объекта исследования использовали- крыс-самцов линии Wistar
весом 300-400 г, предоставленных биоклиникой Р К Н П К МЗ Р Ф и мышейсамцов двух линий С57 и F V B , предоставленные лабораторией Джексона, США.
Экспериментальные модели ремоделирования сосудов
1. Модель снижения кровотока в сонной артерии мыши
Снижение кровотока достигалось путем наложения лигатур на наружную
и внутреннюю сонную артерию мыши. Небольшой кровоток оставался по
затылочной артерии. Все измерения проводились в течение месяца каждую
неделю. Контрольную группу составили ложнооперированные животные,
которым проводилась аналогичная хирургическая операция, но лигатуры не
накладьшались. Определяли линейную скорость кровотока, рассчитывали
напряжение сдвига, оценивали структуру сосуда и пространственную динамику
экспрессии урокиназы (uPA), тканевого активатора плазминогена (tPA), ММГТ-2,
ММП-9, ТИМП-1 методом иммуногистохимии, пролиферацию клеток и
инфильтрацию стенки сосуда лейкоцитами, отражающую воспалительную
реакщоо.
2. Модель экспериментальной баллонной ангиопластики
крысы:
сонной артерии
Баллонное повреждение левой общей сонной артерии крысы проводилось
под общей анестезией с помощью катетера Фогарти 2F доступом через
наружную сонную артерию по стандартной методике (Clowes A W et
al.,1983,Wang J . et al., 1997; Ward M. et al., 1997; Парфенова E.B. с соав.2000).
Для изучения роли урокиназы и тканевого активатора плазминогена в процессах
формирования неоинтимы осуществляли периадвентициальное нанесение в 40%
плюроническом геле рекомбинантной урокиназы, полученной в Р К Н П К
Росздрава и рекомбинантного тканевого активатора плазминогена (Актилизе,
Берингер Ингельхайм).
Временную и пространственную динамику экспрессрга, ММП-2, ММП-9 в
сонной артерии крыс изучали через 2 и 4 дня после баллонной ангиопластики и
нанесения белков. Экспрессию, содержание и активность этих белков
исследовали с помощью полимеразной цепной реакции, иммуногистохимической окраски срезов сосудов специфическими антителами и зимографии
и сравнивали с соответствующими показателями в сонных артериях, на которые
был нанесен только гель (контрольная группа).
Измерение кровотока в сонной артерии мыши
Измерение кровотока в сонной артерии мыши было проведено с помощью
ультразвукового флуометра (Transonic Systems) по протоколу фирмыпроизводителя. Напряжение сдвига бьшо подсчитано с помощью формулы
Volume=Z (Area, +200) ц т ' '"■* (Korshunov V., Berk В. 2003).
Морфометрия
Для морфометрии срезы толщиной 10 мкм депарафинировали в ксилене и
этаноле в убывающих концентрациях и окрашивали 0 , 1 % толуидиновым синим,
дегидратировали иммерсией по стандартной методике и заключали в канадский
бальзам (Sigma) (Wang et al., 1997). Морфометрический анализ гистологических
срезов сонных артерий мышей проводили с помощью программы KS-100 версия
2,0, ic/Windows Release 2 О, Copyright 1995 (Kontron Elektronik GmbH). В этой
программе рассчитывали объёмы слоев артерии. Морфометрический анализ
гистологических срезов сонных артерий крыс проводили с помоиц>ю программы
Optimas 6.1. (Optimas Corporation), в которой рассчитывали площади неоинтимы,
медии, адвентиции и просвета сосуда, а также площадь, описьшаемую наружной
эластической мембраной, как один из основных показателей геометрического
ремоделирования сосудов.
Иммуногистохимическая детекция белков в стенке сосуда
Для оценки экспрессии урокиназы, тканевого активатора плазминогена и
матриксных металлопротеиназ использовали полуколичественный метод
анализа срезов после их иммуногистохимической детекции, описанный ранее в
работах (Giddings et al., 1997, Galis et al., 1994; Plekhanova О ,2001). Экспрессию
антигенов оценивали полуколичественным методом в условных единицах
О - отсутствие антигена, 1 - слабое или непостоянное окрашивание,
2-4 - постоянное окрашивание разной степени интенсивности от слабого (2) до
очень интенсивного (4). Результаты иммуногистохимической детекции белков
оценивались тремя независимыми гистологами Затем данные усреднялись.
Оценка пролиферации клеток
Для
исследования
пролиферации
клеток
в
поврежденных
и
неповрежденных сосудах использовали иммуногистохимическое окрашивание
срезов сосудов на общепринятые маркеры пролиферирующих клеток PCNA
белок, ассоциированный с 5-полимеразой, который синтезируется в раннюю G1
и S фазы клеточного цикла и Ki-67. Подсчет числа PCNA- и Ki-67- позитивных
клеток и общего числа клеток проводили под световым микроскопом
(увеличение 20х). Для экспериментов с мышами считали количество Ki-67позитивных клеток на область интимы+меди (N х 10'* мкм^) Для экспериментов
с крысами, использовали PCNA и индекс пролиферации рассчитывали по
формуле: I = Число антиген-позитивных клеток х 100 / Общее число клеток.
Индексы пролиферации интимы и медии поврежденных (у крыс) или
лигированных (у мьппей) левых сонных артерий сравнивали с таковыми
интактных правых сонных артерий.
Оценка лейкоцитарной инфильтрации стенки сосуда
Для оценки инфильтрации моноцитами и макрофагами использовали
иммуногистохимическое окрашивание срезов сосудов на маркер ED-1, а для
оценки инфильтрации лейкоцитами - маркер CD-45. Подсчет количества
позитивных клеток и общего числа клеток проводили под световым
микроскопом (увеличение 20х).
Оценка активности MMII-2 и ММП-9 в стенке сосуда
Активность белков оценивали на 2-е и 4-е сутки после баллонной
ангиопластики с помощью стандартной зимографии, как описано ранее
(МепзЫкоу M Y u , etal 2001), которая проводилась на белковых экстрактах
сонных артерий крыс.
Оценка экспрессии м Р Н К белков в стенке сосуда
Экспрессию мРНК ММП-2 и ММП-9, TNF-alpha, ТАСЕ анализировали
на 2-е и 4-е сут после баллонирования с помощью полимеразной цепной
реакции с обратной транскрипцией, как описано ранее (Chomczynski Р, Sacchi
N,, 1987, Парфенова Е.В. с соав. 2000) Для контроля количества Р Н К в каждой
реакции оценивали экспрессию белка бета-актина.
Статистическая обработка данных
Полученные данные представляли как среднее арифметическое с
ошибкой репрезентативности выборочной средней Для оценки достоверности
различий обобщающих коэффициентов с минимальным уровнем значимости
р = 0,05 проводили тест Стьюдента-Ньюмана-Коула для множественных
сравнений (One Way ANOVA) с использованием программы для статистической
обработки данных Jandel SigmaStat.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Ремоделирование
сосудистой
стенки
и
экспрессия
активаторов
плазминогена и матриксных металлопротеиназ при экспериментальном
снижении кровотока в сонной артерии
Поскольку снижение скорости кровотока и связанное с ним уменьшение
напряжения сдвига считается одним из основных механизмов, запускающих
ремоделирование сосудов, на первом этапе работы мы исследовали динамику
структурных изменений
и содержания активаторов плазминигена и
матриксных металлопротеиназ в сонных артериях двух линий мьппей,
характиризугощихся различным ремоделированием сосудов.
После перевязки наружной и внутренней сонных артерий наблюдалось
падение кровотока в общей сонной артерии у мьппей обеих линий в одинаковой
степени (- 90%) на всех сроках. В правой контрлатеральной артерии кровоток
увеличивался в среднем на 70%. Уменьшение кровотока сопровождалось и
уменьшением напряжения сдвига (НС), также вьфаженного в одинаковой
степени у обеих групп мышей ( у ложнооперированных мышей НС = 25
дин/см ; в лигированных левых сонных артериях НС =3-4 дин/см'). В правых
артериях увеличение НС было недостоверно выше у мышей линии С57(32
дин/см') в сравнении с мышами FVB/NJ (27 дин/см').
40
30
20
Z
10
%
8
и
О
0^-
.^
,^
.#
Объем адвентиции
_40
п
I 30
i 20
|io
о
Объем меди и
Объем интимы
80
jiii
**
60
40
20
О
ПС57
J>'
Диаметр просвета
inllfi Jllrirtrifi
У
J)"
J^
Jf
j/
J^
J''
Jy
Рис. 1. Динамика структурных изменений общей левой сонной артерии мышей
линий F V B и С57 после снижения кровотока, вызванного лигированием наружной
и внутренней ветвей сонной артерии.
* р<0,05 в сравнении с ложнооперированными мышами,
# р<0,05 в сравнении с С57
В каждой группе по 6 животных
Хотя снижение кровотока и напряжения сдвига бьши одинаковыми у
мьппей двух линий, структурные изменения артерий были разными. Объем
неоинтимы значительно увеличивался только у мьппей линии F V B и достигал
максимума ко 2-ой неделе и сохранялся увеличенным вплоть до 4-ой недели У
мьппей линии C57B1/6J
несмотря на такое же падении кровотока объем
неоинтимы не возрастал, а увеличение объема медии было значительно менее
вьфаженными, чем у мышей FVB/NJ. Отношение интимы/медии левой сонной
артерии бьшо в семь раз больше у FVB/NJ мышей (0,36±0,04) по сравнению с
FVB
его значением у мышей C57B1/6J (0,05±0,03; р<0,001). Объем адвентиции у
мьшхей обеих линий увеличивался в одинаковой степени к концу первой и
второй недели и затем снижался к концу 4-й недели (рис. 1).
ответ
Несмотря на значительное утолщение всех слоев левой сонной артерии в
на уменьшение кровотока у
мышей F V B / N J
ее просвет
достоверно
расширялся к концу 1 и 2 недели и возвращался к исходному уровню (уровню у
ложнооперированных мьпыей)
к концу 4 недели. У мьппей C57B1/6J просвет
левой сонной артерии через две недели практически не изменялся , а через 4
недели б ы л достоверно с у ж е н несмотря на отсутствие утолщения интимы.
Отношение объема просвета
правой артерии к просвету
левой артерии было
больше у мьппей C57B1/6J (1,51+0,1) чем у м ы ш е й F V B / N J (0,97+0,14). Объем
области
левой
мембраной
(НЭМ)
сонной
артерии,
(суммарный
описываемой
объем
наружной
эластической
просвет+интима+медия),
который
считается одним из основных показателей геометрического ремоделирования
сосуда (Mulvany М J . 1996), значительно возрастал у м ы ш е й F V B / N J , достигая
максимума
к
концу
2-й
недели
(180x10-6
мкм''),
что
указьгоает
на
положительное ремоделрфование (outward remodeling) - расширение диаметра
артерии. У
мьппей C57B1/6J этот показатель возрастал очень незначительно
(90x10-6 мкм^) в сравнении с ложнооперированными м ы ш а м и (80x10-6 мкм^).
Э т и данные подтверждают, что для мышей выбранных нами линий характерно
генетически детерминированное различное ремоделирование артерий в ответ на
одинаковое снижение кровотока.
Log (объем НЭМ)
&4
8.2 Н
С57, п=32
у = 0.55х + 3.79
R' = 0.69
F V B , П=31
'у = QMx + 1,89
R* = 0.80
8.0
7.8 Н
7.6
7.2
7Л
7,6
7Л
ЯЛ
L o g ( о б ъ е м ИНТИМЫ+ м е д и и )
»л
Рис. 2. Корреляционный анализ между объемом левой сонной артерии внутри
наружной эластической мембраны ( Н Э М ) и объемом интимы-медии.
Пустые квадраты и прерывистая линия отражают линейную регрессию для мышей
линии С57 Черные квадраты и сплошная линия отражают линейную регрессию для
мышей линии F V B
10
Для того, чтобы ответить на вопрос, зависит ли геометрическое
ремоделирование от характера изменения толщины слоев артерии, мы провели
корреляционный анализ, и получили следующие результаты (рис 2) В обеих
группах мьппей существует тесная корреляционная связь между ростом
интимы/медии и развитием ремоделирования, которое оценивали по изменению
объема артерии внутри наружной эластической мембраны. Эта связь сильнее у
F V B мышей. Таким образом геометрическое ремоделирование при падении
кровотока в артерии зависит от выраженности роста интимы/медии.
Пролиферация клеток и воспалительная реакция в стенке сонной артерии
мыши после уменьшения кровотока.
Для того чтобы исследовать возможные детерминанты структурной
перестройки сосудов в ответ на падение кровотока мы оценили вклад клеточной
пролиферации и воспаления, которое оценивалось по инфильтрации стенки
сосуда лейкоцитами. Оказалось, что количество пролиферирующих клеток в
конце первой недели после перевязки артерии было в два раза выше в сосудах
F V B мышей. Разница сохранялась и на 2-ой неделе и нивелировалась только к
концу 4-ой недели. Инфильтрация лейкоцитами также была значительно выше
на 1-ой неделе у F V B мышей (рис. 3).
Ki-67-позитивные клетки
*#
100 1
■4 Л.
2 нед.
I
S.
»
100
е_ 150]
* #
1 нед.
С045-позитивные клетки
4 нед.
si
50
О
*#
Iriri
Ложно- 1 нед. 2 нед.
опер.
□ С57
■ FVB
4 нед.
Рис. 3. Количество пролиферирующих Ю-б7-позитивных клеток и инфильтрация
лейкоцитами (С045-позитивными клетками) стенки сонной артерии после
снижения кровотока.
Данные представлены как количество соответствующих клеток (Ki-67+ или CD45+) на
область интимы+меди на срезах артерии
* - достоверное различие по сравнению с ложнооперированными животными,
# - достоверное различие по сравнению с мышами линии С57
Таким образом падение кровотока в левой сонной артерии
сопровождается активацией пролиферации клеток в сосудистой стенке и
инфильтрацией ее лейкоцитами в течение первой недели после лигирования ее
ветвей. Эти процессы вьфажены значительно больше у FVB/NJ мышей, чем у
мьпией линии C57B1/6J, что указывает на важную роль лейкоцитарной
инфильтрации в развитии утолщения интимы/медии при падении кровотока.
11
Динамика
содержания активаторов
плазминогена
и
матриксных
металлопротеиназ в стенке сосуда при уменьшении кровотока
Оценка содержания активаторов плазминогена в сосуде с помощью
иммуногистохимического окрашивания показала, что в неповрежденных
сосудах они практически не экспрессируются, тогда как снижение кровотока
стимулирует их экспрессию Урокиназа значительно повышается в сосудах F V B
мьш1ей уже на первой неделе и остается повьппенной вплоть до 4-ой недели
(рис. 4). У мьппей С57 наблюдалось только кратковременное увеличение
урокиназы в сосуде на 1-ой неделе, сопровождавшееся ее падением на 2-ой и
4-ой неделе. Наибольшие различия между линиями наблюдались для тканевого
активатора плазминогена (tPA). У мышей С57 его содержание в сосудистой
стенке при уменьшении кровотока увеличивалось очень незначительно и не
изменялось на всех сроках наблюдения. У F V B мьш1ей увеличение tPA в
интиме/медии на первой неделе бьшо весьма умеренным, но к концу второй
недели достигло максимума и затем лишь немного уменьшилось на 4-й неделе
Иными словами мьш1и с генетически детерминированными разными типами
ремоделирования артерий в ответ на снижение кровотока характеризовались и
различной динамикой экспрессии активаторов плазминогена в сосудистой
стенке, возможно, тоже генетически детерминированной. При сопоставлении
динамшш содержания активаторов плазминогена с динамикой структурных
изменений сосудистой стенки мы обнаружили, что динамика содержания uPA
совпадала с динамикой увеличения объема интимы, который также начинал
возрастать уже на первой неделе и оставался увеличенным и к концу 4-й недели
(R = 0,72; р<0,01 ). В тоже время динамика содержания tPA совпадала с
изменением просвета артерии ( R = 0,76;р < 0,01) и показателя геометрического
ремоделирования - объема артерии в пределах H 3 M ( R = 0,8; р < 0,001)
Максимальное увеличение просвета и объема Н Э М наблюдалось именно к
концу второй недели после лигирования артерии, как и максимальное
увеличение tPA, и уменьшалось к концу 4-й недели (рис. 4).
Урокиназа(uPA)
tPA *
FVB
FVB
C57
ложнооп. 1 нед.
2 нед
4 нед.
ложнооп. 1 нед.
2 нед.
4 нед.
Рис. 4. Динамика содержания активаторов плазминогена в стенке сосуда при
снижении кровотока.
Данные приведены в относительных единицах интенсивности окрашивания срезов
артерий на урокиназу и тканевой активатор плазминогена специфическими
антителами
* - достоверное различие по сравнению с мышами линии С57
12
Иными словами мьппи с генетически детерминированными разными
типами ремоделирования артерий в ответ на снижение кровотока
характеризовались
и
различной
динамикой
экспрессии
активаторов
плазминогена
в
сосудистой
стенке,
вероятно,
тоже
генетически
детерминированной.
Исследование динамики содержания в стенке сосуда ММП-2, ММП-9 и
ТИМП-1 показало повышение интенсивности окрашивания на эти белки при
уменьшении кровотока, но различий между группами выявлено не было.
Влияние активаторов плазминогена на изменение структуры сосуда и
экспрессии матриксных металлопротеиназ
после экспериментальной
баллонной ангиопластики.
Предыдущие исследования, вьтолненные в Лаборатории молекулярной
эндокринологии Р К Н П К Росздрава, показали ключевую роль урокиназы и ее
протеолитической активности в развитии неоинтимы после баллонной
ангиопластики (Парфенова Е.В. с соав. 2000, Plekhanova О. et.al. 2000, 2001;
Алексеева И А ,2000) Для дальнейшего углубления представлений о роли и
механизмах влияния активаторов плазминогена на ремоделирование артерий
мы изучили, как локальное
повышение их концентрации
в стенке
баллонированной артерии будет влиять на рост неоинтимы и геометрическое
ремоделирование, пролиферацию клеток, развитие воспалительной реакции
(аккумуляцию в ней моноцитов/макрофагов) и экспрессию матриксных
металлопротеиназ Для этого на предварительно баллонированную сонную
артерию крысы наносили рекомбинантные
активаторы плазминогена,
растворенные в плюроническом геле' либо рекомбинантную урокиназу, либо
рекомбинантный tPA (актилизу) в дозе 20 нмоль/кг веса. В контрольной группе
наносили чистый гель.
Активаторы
плазминогена и изменение структуры
артерии.
При исследовании изменений структуры баллонированного сосуда через
4 дня после нанесения рекомбинантных активаторов плазминогена мы
обнаружили, что они по разному влияют не только на образование неоинтимы,
но и на ремоделирование артерии.
Периадвентициальное нанесение урокиназы стимулировало утолщение
неоинтимы и медии (рис. 5). Отношение площади интимы к площади медии,
позволяющее дополнительно оценить выраженность роста неоинтимы, также
было больше при нанесении урокиназы. Увеличение толщины интимы/медии
сопровождалось уменьшением площади, описываемой наружной эластической
мембраны (НЭМ) и сужением просвета артерии. Отношение площади медии к
площади просвета сосуда, также отражающее его ремоделирование, возрастало
Все это свидетельствовало о развитии констриктивного ремоделирования
артерии (inward remodeling).
13
4-е сутки
Неоинтима
*
Гель
I Контроль
luPA
itPA
UPA
Наружная эластическая
мембрана (НЭМ)
0,02
tPA
■0,08-'
Рис. 5. Противоположное влияние активаторов плазминогена на изменение
структуры сосуда после баллонной ангиопластики сонной артерии крысы.
* - достоверное различие по сравнению с контролем
Нанесение на артерию тканевого активатора плазминогена оказывало
противоположный эффект: на 4-е сутки
рост неоинтимы
был менее
выраженным, чем в контрольных сосудах, площадь медии и адвентиции
достоверно не изменялась, а отношение площади интимы к площади медии
уменьшалось в сравнении с контролем, что отражало менее выраженный рост
неоинтимы. Отношение площади медии к площади просвета сосуда
уменьшалось,
а область внутри наружной эластической мембраны
увеличивалась,
что
свидетельствовало
о
развитии
положительного
ремоделирования артерии при нанесении на нее рекомбинантного tPA (рис. 5)
Это совпадало с данньпли, полученными на модели уменьшения кровотока, где
повышение тканевого активатора в стенке сосуда коррелировало с развитием
положительного ремоделирования.
Известно, что при использовании плюронического геля растворенные в
нем белки детектируются в стенке сосуда не более, чем в теченгш 4-х дней
(Парфёнова Е.В. с соав. 2000; Plekhanova et al.2001). Поэтому эфферы
урокиназы и тканевого активатора в ранние сроки после баллонирования и
нанесения белков могут быть
обусловлены в значительной мере
непосредственно действием этих белков на клетки сосудистой стенки Для того,
чтобы понять, сохраняются 1ш эти эффекты в отдаленные сроки, когда сами
белки уже не присутствуют в сосудистой стенке, иными словами, запускают ли
14
урокиназа и тканевой активатор плазминогена какие-то процессы, влияющие на
структуру артерии в отдаленные сроки после их нанесения, мы
проанализировали структурные изменения сосуда через 14 и 28 дней после
ангиопластики.
28-е сутки
Гель
4 сутки
14 сутки
28 сутки
Просвет
Q Контроль
■ uPA
uPA
atPA
14 сутки
28 сутки
Наружная эластическая мембрана
o.os
" l -0,05
-
^
Е -O.IS
'[шт'
tPA
n
^-0,25
■0,35
4 сутки
14 сутки
28 сутки
Рис. о. динамика структурных изменении сонной артерии крысы ^толщины
интимы+медии, площади просвета артерии и площади артерии, описываемой
наружной эластической мембраной, т.е. суммарной площади просвета, интимы и
медии) в отдаленные сроки после баллонирования
Оказалось, что в контрольной группе толщина интимы/медии
продолжала возрастать к 14-му и 28-му дню, когда заканчивалось формирование
неоинтимы Такая же динамика наблюдалась и в группе животных, где наносили
урокиназу, но тотщша интимы/медии на всех сроках оставалась большей, чем в
контроле В группе животных, где наносили тканевой активатор плазминогена,
толщина интимы/медии также увеличивалась к 14 и 28 дню, но оставалась и на
поздних сроках меньше, чем в контрольной группе. На поздних сроках
положительное ремоделирование (увеличение площади внутри Н Э М и просвета
артерии) в группе tPA исчезало, а более выраженное негативное
ремоделирование при нанесении урокиназы сохранялось (рис 6).
15
Таким образом стимуляция роста неоинтимы и констриктивного
ремоделирования при нанесениии на сосуд урокиназы сохраняется длительное
время, что, вероятно, обусловлено запуском механизмов, поддерживающих эти
процессы Положительное ремоделирование, вызванное нанесением тканевого
активатора плазминогена, исчезает в более поздние сроки, но подавление роста
неоинтимы сохраняется.
Влияние активаторов
плазминогена на пролиферацию клеток
и
воспалительную реакцию в стенке сонной артерии крысы в ранние сроки
после баллонной ангиопластики.
Для того, чтобы понять, запуск каких процессов, влияющих на перестройку
сосудистой стенки, может происходить под влиянием экзогенных активаторов
плазминогена, мы проанализировали пролиферацию клеток и инфильтрацию
сосудистой стенки моноцитами/макрофагами, отражающую неспецифическую
воспалительную реакцию, вызванную повреждением. Достоверное з^еличение
пролиферации клеток неоинтимы по сравнению с их значениями в контрольной
группе (нанесение чистого геля) было обнаружено только в группе животных, на
сонные артерии которых наносили урокиназу (%PCNA + клеток: урокиназа
36,9+2,3%;
гель
26,7+1,4%;
р<0,05),
а
ее
инфильтрация
моноцитами/макрофагами была недостоверно
выше в группе урокиназы.
Нанесение тканевого активатора плазминогена не вызывало изменений,
отличающихся от эффектов в контрольной группе.
Гель
Урокиназа
Рис. 7. Влияние активаторов плазминогена на воспалительную инфильтрацию
адвентиции
сосуда
моноцитами/макрофагами
после экспериментальной
баллонной ангиопластики.
Верхние рисунки - срезы артерии, окрашенные на антиген моноцитов/макрофагов
ED-1 (коричневое окрашивание) Нижний рисунок - процентное содержание ED-1
позитивньпс клеток от общего количества клеток адвентиции
* Р< 0,01 по сравнению с контрольной группой (гель)
16
в адвентиции, изменения которой считают ответственными за развитие
констриктивного ремоделирования, пролиферация клеток возрастал в
одинаковой степени во всех группах, а монощстарная инфильтращи была более
выраженной в группе, где наносили урокиназу (рис, 7).
Привлечение в сосуд моноцитов может быть одним из механизмов
влияния урокиназы на ремоделирование, так как моноциты являются
источником цитокинов и ростовых факторов. Это подтверждается полученными
нами данными о том, что урокиназы на ремоделирование, так как моноциты
являются источником цитокинов и ростовых факторов. Это подтверждается
полученными нами данными о том, что урокиназа увеличивает содержание в
стенке сосуда мРНК одного
из основных провоспалительных факторов,
секретирующихся моноцитами/макрофагами - фактора некроза опухолей альфа
(TNF-alpha) и фермента, осуществляющего его превращение в активную форму
(ТАСЕ
TNF-alpha converting enzyme).
Экспрессия этих белков в
неповрежденном сосуде не детектировалась, но
возрастала при его
повреждении.
Нанесение урокиназы
вызывало значительное увеличение
экспрессии
как TNF-alpha, так и ТАСЕ по сравнению с ее уровнем в
контрольной группе, в то время как
нанесение тканевого активатора
плазминогена подобного эффекта не оказывало.
Активаторы плазминогена и экспрессия матриксных
металлопротеиназ
(ММП-2 и ММП-9) в стенке сонной артерии
в ранние сроки после
экспериментальной баллонной ангиопластики
Во многих работах показана связь между ремоделированием сосудов и
экспрессией матриксных металлопротеиназ, прежде всего ММП-2 и ММП-9,
осуществляющих деградацию внеклеточного матрикса (Bassiouny et al 1998,
Brilla, Rupp, 1994, Femandez-Patron et al 1999, Forough R et al 1996, Lijnen H R ,
CoUen D et al 1999, Lijnen HR, Silence J , 1998, Mason D.P., Kenagy R.D., 1999)
Известно также, что между фибринолитической системой (системой активаторы
плазминогена-плазмин) и системой матриксных металлопротеиназ существует
тесное функциональное взаимодействие (Carmeliet Р., Moons L., Dewerchin М,,
Rosenberg S , Herbert J.M., Lupu F., 1998, Hahn-Dantona et al. 1999, Lijnen H.R.,
Lupu F, 1999, Marchina E , Barlati S. 1996). Для того, чтобы понять механизмы
различного влияния активаторов плазминогена на сосудистое ремоделирование
мы исследовали их влияние на экспрессию и активацию ММП-2 и ММП-9 в
баллонированных сонных артериях крысы. Матриксные металлопротеиназы
детектировались в сосуде с помощью иммуногистохимического окрашивания,
зимографии и ПЦР.
В неповрежденном сосуде слабое иммуногистохимическое окрашивание на
ММП-2 отмечалось в медии, а ММП-9 не детектировалась На 2-е суткя после
повреждения интенсивность окрашивания на ММП-2 возрастала и еще больше
увеличивалась на 4-е сутки В это же время в клетках формирующейся
неоинтимы также огфеделялось окрашивание на ММП-2 Специфическое
окрашивание на ММП-9 появлялось в контрольных сосудах (нанесение чистого
геля) на 2-сутки, но его
интенсивность
бьша менее выражена, чем
17
интенсивность окрашивания на ММГТ-2.
В сосудах, на которые после ангиопластики наносили урокиназу,
интенсивность окрашивания на ММП-2
и на 2-е и на 4-е сутки бьша
значительно
выше по сравнению с контрольными сосудами, что
свидетельствовало
об
увеличении
содержания
этой
матриксной
металлопротеазы под влиянием урокиназы. После нанесения
тканевого
активатора плазминогена, напротив, интенсивность окрашивания на ММП-9
была даже ниже, чем в контроле Содержание ММП-9 также бьшо больше в
сосудах, на которые был нанесен урокиназный активатор плазминогена.
Обобщая данные, полученные с помош;ью иммуногистохимической
детекции ММП-2 и ММП-9, можно заключить, что нанесение на поврежденный
сосуд рекомбинантной урокиназы в плюроническом геле
увеличивало
содержание этих матриксных металлопротеаз в медии и адвентишга на ранних
сроках после баллонироваяня (на 2-й и 4-й день). Нанесение другого активатора
плазминогена - tPA - не оказывало такого эффекта, напротив, отмечалась
тенденция к уменьшению содержания ММП-2 в медии по сравнению с ее
содержанием в контрольных сосудах.
Для подтверждения этих результатов мы исследовали активность
матриксных металлопротеиназ в белковых экстрактах сосудов с помошью
зимографии.
'Шкм
ММП-2
- ММП-2 (72 uRa)
■ ММП-2 (69 кДа)
'
"
контроль
uPA
[кЁ^
uPA
Контроль
tPA
ММП-9
контроль
ММП-2
72кДа
59 Kfla
I- ММП-в (92 кДа)
I- ММП-в (85 Kfla)
uPA
ММП-9
92 кДа
85 кДа
Контроль
uPA
tPA
Рис. 8. Влияние активаторов плазминогена на содержание ММП-2 и ММП-9 в
сонных артериях крысы на 4-е сутки после баллонировяния.
Синие столбики - неактивные формы ММП-2 и ММП-9 Красные столбики - активные
формы ММП-2 и ММП-9 Справа даны примеры зимограмм
* р < 0,05 по сравнению с контрольной группой
IS
На 2-е сутки после баллонирования в экстрактах сонных артерий
детектировалась неактивная ММП-2 и не детектировалась активная форма,
которая появлялась в контрольных сосудах только на 4-й день. Количество
неактивной ММП-2 на 2-й день было выше в 2 раза (+100%) в лизатах артерий,
на которые наносили урокиназу. На 4-е сутки это различие было выражено
меньше (+30% по сравнению с контролем), однако активной формы ММП-2
было больше при нанесении урокиназы. Тканевой активатор плазминогена
существенного влияния на количество активной и неактивной ММП-2 не
оказывал, за исключением небольшого уменьшения количества неактивной
ММП-2 на 2-й день после ангиопластики (рис. 8).
Активность ММП-9 не определялась в экстрактах неповрежденных
сосудов и на 2-е сутки после повреждения и появлялась только на 4-е сутки.
Содержание неактивной формы ММП-9 было одинаковым во всех группах. В то
время, как содержание активной формы бьшо достоверно вьппе в сосудах, на
которые была нанесена урокиназа, по сравнению с сосудами на которые был
нанесен tPA или гель. Данные зимографии показьшают, что увеличение
содержания активной урокиназы в сосуде после баллонирования приводит к
увеличению количества активных форм ММП-2 и ММП-9, а также увеличивает
количество неактивной ММП-2. В тоже время тканевой активатор плазминогена
подобного эффекта не оказывает.
Увеличение количества неактивной ММП-2 в сосуде под влиянием
урокиназы и, напротив, ее уменьшение под влиянием tPA позволяет
предполагать, что оба активатора плазминогена могут действовать на
экспрессию этой металлопротеиназы Влияние урокиназы на экспрессию м Р Н К
ММП-9 в клетках моноцитарных линий было показано в нашей лаборатории
ранее (Menshikov MYu etal 2001). Для проверки этого предположения мы
исследовали содержание в лизатах баллонированных сосудов мРНК ММП-2 и
ММП-9 с помощью ПЦР с обратной транскрипцией и «нестед» ПЦР (рис. 9).
Было обнаружено, что и на вторые и на четвертые сутки количество мРНК
ММП-2 в сосудах, на которые наносили урокиназу, увеличено, а в сосудах, на
которые наносили tPA, отмечалась тенденция к уменьшению мРНК ММП-2 по
сравнению с контрольными сосудами. Небольшое увеличение мРНК ММП-9
также обнаружено в лизатах сосудов при нанесении урокиназы Эти данные
позволяют предполагать, что урокиназа и tPA либо гфямо, либо опосредовано
влияют на экспрессию мРНК ММП-2 Причем это влияние разнонаправленное
Обобщая полученные данные можно заключить, что активаторы
плазминогена по разному влияют на экспрессию и активацию ММП-2 и ММП-9
в баллонированной сонной артерии крысы. Так возрастание в поврежденном
сосуде урокиназы стимулирует увеличение экспрессии ММП-2 и образование
активных форм ММП-2 и ММП-9 в ранние сроки после баллонирования.
Увеличение в сосуде тканевого активатора плазминогена, напротив, уменьшает
экспрессию ММП-2 и не влияет на образование активных форм этих ферментов.
19
ММП-2
ММП-2, 587 п.о.
Контроль
uPA
tPA
ММП-9, 529 п.о.
ММП-9
р-актин
Контроль uPA
Контроль uPA
tPA
tPA
Рис. 9. Влияние активаторов плазминогеня на экспрессию мРНК ММП-2 и
ММП-9 в сонной артерии крысы после ангиопластики.
* р<0 05 - по сравнению с контрольной группой
Результаты, полученные на модели экспериментальной баллонной
ангиопластики, дополняют
и хорошо согласуются с результатами,
полученными нами ранее на модели сосудистого ремоделирования в ответ на
уменьшение кровотока в сонной артерии у двух линий мьппей. Наша гипотеза о
том, что урокиназа и tPA влияют на различные процессы, определяющие
ремоделирование артерий при уменьшении кровотока (урокиназа стимулирует
рост интимы-медии, а tPA индуцирует положительное ремоделирование)
отчасти подтверждается эффектами экзогенных активаторов плазминогена в
баллонированном сосуде крысы.
Эффекты урокиназы
обусловлены
вероятно
ее влиянием на
пролиферащпо клеток, аккумуляцию моноцитов/макрофагов в стенке сосуда и
экспрессию и активацию матриксных металлопротеиназ. Механизмы,
ответственные за эффекты tPA - подавление роста неоинтимы и раннее
положительное ремоделирование - остаются непонятньми.
Один из
полученных нами результатов может приблизшъ нас к пониманию этих
механизмов. Исследуя
влияние активаторов плазминогена на экспрессию
матриксных металлопротеаз мы обнаружили подавление экспрессии ММП-2 при
нанесении на сосуд tPA, в то время как нанесение урокиназы стимулировало
экспрессию этой протеазы Этот факт позволил нам предположить, что
урокиназа и tPA могут по разному влиять на экспрессию генов, кодирующих
белки, участвующие в ремоделировании.
Различия в характере структурной перестройки стенки сосуда гфи
снижении кровотока у инбредных мышей двух линий указывают на то, что
типы ремоделирования артерий могут быть генетически детерминированы, как,
20
вероятно, и характер экспрессии активаторов плазминогена в ответ на стимулы к
ремоделированию.
Полученные в работе результаты позволяют наметрггь новые мишени для
поиска путей лекарственной коррекции неблагоприятной структурной
перестройки артерий при патологиях Данные о противоположном влиянии
активаторов плазминогена на рост неоинтимы могут служить основой для
разработки подходов к предотвращению развития рестенозов на основании
использования рекомбинантного тканевого активатора плазминогена
или
ингибиторов урокиназы, например, для включения их в биополимерное
покрытие внутрисосудистых стентов, при использовании которых развитие
рестенозов сопряжено именно с пролиферацией неоинтимы.
ВЫВОДЫ
Увеличение объема
интимьЛмедии
в ответ на экспериментальное
уменьшение кровотока в артерии является важной детерминантой,
определяющей развитие геометрического ремоделирования сосуда.
2. Падение кровотока в артерии сопровождается активацией пролиферации
клеток в сосудистой стенке и инфильтрацией ее лейкоцитами в течение
первой недели после уменьшения кровотока, выраженными
значительно
больше у мышей линии F V B , характеризующихся развитием утолщения
интимы/медии.
3 Содержание активаторов плазминогена в стенке сосуда увеличивается в
ответ на уменьшение кровотока в артерии и это увеличение более вьфажено
у
мышей, характеризующихся развитием
вьфаженного утолщения
ргатимы/медии. Динамика
содержания
урокиназы
положительно
коррелирует с динамикой роста неоинтимы, в то время, как динамика
содержания тканевого активатора плазминогена коррелирует с развитием
положительного геометрического ремоделирования артерии.
4. Снижение кровотока в артерии сопровождается увеличением содержания
матриксных металлопротеиназ (ММП-2 и ММП-9 ) и их ингибитора
(ТИМП-2), но это увеличение не коррелирует со структурными
изменениями артерии.
5 Рекомбинантные активаторы плазминогена при нанесении на сосуд после
экспериментальной баллонной ангиопластики оказывают противоположное
влияние на его структуру: урокиназа стимулирует развитие неоинтимы и
констриктивное ремоделирование артерии, в то время как тканевой
активатор плазминогена - подавляет рост неоинтимы и вызывает
положительное ремоделирование.
6. Урокиназа стимулирует экспрессию и активацию 2-й и 9-й матриксных
металлопротергааз в баллонированной сонной артерии крысы. Подобного
эффекта не вызывает тканевой активатор плазминогена.
7. Активаторы
плазминогена
могут
представлять
собой
новые
функциональные
мишени
для
воздействий,
направленных
на
предотвращение
развития
рестенозов
после
ангиопластики
и
неблагоприятного ремоделирования сосудов при сердечно-сосудистых
заболеваниях.
1.
21
СТАТЬИ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Плеханова О С , Соломатина М.А., Бобик А., Ткачук В А., Наумов В.Г,
Парфенова Е.В.. Противоположное влияние урокиназного и тканевого
активаторов
плазминогена
на развитие
стеноза
артерии
после
баллонирования.//Тезисы докл. 3-го Всероссийского съезда кардиологов
Р К Н П К МЗ РФ. - Москва (Россия), 2001. - С. 297.
2. Соломатина М А., Плеханова О.С, Ильинская О.П., Калинина Н.И.,
Михайлова Е.В., Цоколаева 3 И , Тарарак Э.М., Наумов В Г , Парфенова
Е.В.. Экспрессия урокиназы, ее рецептора и ингибитора активаторов
плазминогена 1-го типа в стенке аорты человека при разных типах
атеросклеротического поражения.//Цитология. - 2004. - №4. - 46(4).
- С. 352-360.
3. Плеханова О С , Соломатина М.А., Домогатский С П . , Наумов В.Г.,
Ткачук В.А , Парфенова Е.В. Урокиназа стимулирует, а тканевой активатор
плазминогена подавляет развитие стеноза кровеносныхсосудов.//Российский
физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2001. - Май. - 87(5). - С. 584593.
4. Parfyonova Ye.V., Plekhanova O.S., Solomatina M.A., Bobik A., Tkachuk V.A .
Plasminogen activators and adventitia remodelling.//Abstracts of the Eleventh
European Meeting on Hypertension. - Milan (Italy), 15th-19th June, - 2001
- S . 203.-P. 3.61.
5. Plekhanova O.S., Solomatina M.A., Viborov O., Bashtrikov P., Brooks A.,
Naumov V.G., Tkachuk V.A., Berk B.C., Parfyonova Ye.V.. Oligonucleotide
microarrays reveal regulated genes causing opposite vessel remodeling induced by
plasminogen activators .//Abstracts of the Xlll-th International Symposium on
Atherosclerosis. - Kyoto (Japan), 2003.
6. Plekhanova O.S, Solomatina M.A., Bobik A., Naumov V.G., Tkachuk V.A.,
Parfyonova Ye V.. Urokinase promotes while tissue-type plasmmogen activator
attenuates constrictive vessel remodelling.//Abstracts of the Eleventh European
Meeting on Hypertension. - Milan (Italy), 15th-19th June, - 2001. - S 203.
- P. 3.62.
7. Parfyonova Ye.V., Plekhanova O.S., Solomatina M.A., Viborov O., Bashtrikov P ,
Brooks A., Berk В., Tkachuk V.A.. Oligonucleotide microarray analysis revealed
regulated genes related to unfavorable vessel remodeling induced by urokinase
plasminogen activator//Abstracts of the IX-th International Workshop on
Molecular & Cellular Biology of Plasminogen Activation. - Isle of Capri (Italy),
- 2003.
22
8 Parfyonova Ye.V., Plekhanova O.S., Solomatina M.A., Bobik A., Tkachuk V.A .
Urokinase plasminogen activator in injured adventitia increases the number of
myofibroblasts and augments early proliferation.//! 8-th Scientific Meeting of the
International Society of Hypertension. - Чикаго. - США. - J . Hypertension
(Abstr.Suppl.). - 2000. - V.18 (supp 4). - P. S30. - N 15A.03.
9. Plekhanova O.S., Solomatina M A . , Bobik A., Naumov V.G., Tkachuk V.A.,
Parfyonova Ye.V.. Urokinase augments while tissue-type plasminogen activator
prevents the development of restenosis.//Atherosclerosis (Abstr Suppl). 2001 2(2) - 122. ~ P. 297. (abstracts of the 72-th European Atherosclerosis Society
Congress in Glasgow. - U K , 2001.
10 Plekhanova O.S., Menshikov M.Y., Ratner E.I., Tkachuk V.A., Parfenova Ye.V..
Urokinase increases the content and activity of matrix metalloproteinases 2 and 9
during in vivo constrictive arterial remodeling. - Bull Exp Biol Med. - 2005
-Mar.-139(3).-P. 283-286.
11. Plekhanova O.S., Solomatina M.A., Naumov V.G., Bobik A., Berk В.,
Tkachuk V.A., Parfyonova Ye V.. Contrasting Effects of Urokinase and TissueType Plasminogen Activators on Neointima Formation and Vessel Remodeling
after Arterial Injury.//Joumal Vascular Research. - 2004. - May-Jim. - 41(3). - P.
268-276.
12 Korshunov V , Solomatina M A , Plekhanova O S , Parfyonova Y e V ,
Tkachuk V.A., Berk B. Strain-dependent expression of proteolytic molecules
during vascular remodeling in the mice. Journal of Vascular Research. - 2004. Nov-Dec - 41(6). - P. 481-490.
Список используемых сокращений:
uPA - урокиназный активатор плазминогена (урокиназа); tPA - тканевой
активатор плазминогена; Г М К - гладкомышечные клетки; ММП-2-матриксная
металлопротеиназа 2, ММП-9-матриксная металлопротеиназа 9, Т И М П тканевой ингибитор матриксных металлопротеиназ, TNF-alpha - фактор некроза
опухоли -альфа (гфовоспалителъный
цитокин),
ТАСЕTNF-alpha
превращающий фермент, ГГЦР - полимеразная цегшая реакхщя, НС-напряжение
сдвига, ED1-маркер моноцитов-макрофагов, CD45- маркер лейкоцитов,
C57B1/6J- мьшга линии С57, FVB/NJ-мьппи линии F V B , НЭМ-наружная
эластическая мембрана, Ki-67, PCNA-маркеры клеточной пролиферации, мРНКматриксная РНК.
Для заметок
Для заметок
Заказ № 2167 Подписано в печать 1711 2005 Тираж 150 экз. Усл. п.л. 1
г'-;^''^ ООО "Цифровичок", тел. (095) 797-75-76; (095) 778-22-20
vv., Л
www cfr.ru ; e-mail:info@cfr.ru
Р2315в
РНБ Русский фонд
2006-4
24748
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
1 164 Кб
Теги
bd000103400
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа