close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

14170

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 14170
(13) C1
(19)
A 61K 38/43
A 61K 38/55
A 61K 31/185
C 12N 9/36
C 07C 229/00
СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ ЖЕЛАТИНОЛИТИЧЕСКОЙ
АКТИВНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ ПАТОГЕННОГО
ШТАММА PSEUDOMONAS AERUGINOSA
(21) Номер заявки: a 20090571
(22) 2009.04.20
(43) 2010.12.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Никандров Виталий Николаевич; Пыжова Нелли Семеновна
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) ПЫЖОВА Н.С. и др. Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки. Тезисы
докладов. - Минск, 2007. - С. 63-65.
RU 96117351 A, 1998.
RU 2005120013 A, 2006.
BY 14170 C1 2011.04.30
(57)
Способ ингибирования желатинолитической активности внеклеточных протеиназ патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa путем добавления ингибитора, отличающийся
тем, что в качестве ингибитора используют смесь, содержащую лизоцим в концентрации
50-70 мкг/мл и этилендиаминтетраацетата динатриевую соль в концентрации 10-3-10-2 М.
Изобретение относится к биологии и экспериментальной медицине, в частности к ингибированию активности внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных
штаммов Pseudomonas aeruginosa как одного из факторов патогенности данного микроорганизма.
Известен способ ингибирования активности внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных штаммов данного микроорганизма. Он заключается в том, что при добавлении к бесклеточным супернатантам бульонных культур патогенных штаммов
псевдомонад р-хлормеркурибензоата или диизопропилфторфосфата в концентрации
10-2 M наблюдается полное ингибирование активности указанных протеиназ [1].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому.
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является ингибирование желатинолитической активности внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных
штаммов псевдомонад при добавлении к реакционной системе вещества с ингибиторными
свойствами.
Однако применяемый для ингибирования активности внеклеточных желатинолитических протеиназ бесклеточных супернатантов бульонных культур патогенных штаммов
псевдомонад р-хлормеркурибензоат является высокотоксичным ртутьорганическим со-
BY 14170 C1 2011.04.30
единением, а диизопропилфторфосфат - высокотоксичным фосфорорганическим соединением. Оба эти соединения являются сильнодействующими ферментными ядами и могут
быть использованы только для экспериментальных целей высококвалифицированным
специально обученным персоналом.
Т.е. использование р-хлормеркурибензоата или диизопропилфторфосфата в качестве
ингибитора внеклеточных желатинолитических протеиназ этого микроорганизма не безопасно для медицинского персонала и пациента.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего ингибировать активность внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных штаммов
Pseudomonas aeruginosa малотоксичным соединением, являющимся фармакопейным препаратом и не представляющим угрозы здоровью медицинского персонала.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования желатинолитической активности внеклеточных протеиназ патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa путем добавления ингибитора, при этом в качестве ингибитора используют смесь,
содержащую лизоцим в концентрации 50-70 мкг/мл и этилендиаминтетраацетата динатриевую соль в концентрации 10-3-10-2 M.
Использование смеси раствора лизоцима с этилендиаминтетраацетатом натрия позволяет достичь резкого ингибирования внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных штаммов Pseudomonas aeruginosa, исключив использование высокотоксичных
ферментных ядов - р-хлормеркурибензоата или диизопропилфторфосфата.
Лизоцим представляет собой фермент мол. массой 15 кДа, выделяемый из белка куриных яиц и обладающий бактериолитическим действием, главным образом, в отношении
грамположительных микроорганизмов. Способен стимулировать неспецифическую реактивность организма, оказывать противовоспалительное и муколитическое действие. Применяют местно и внутримышечно при лечении гнойных и хронических септических
процессов, при ожогах, обморожениях, конъюнктивитах, эрозиях роговицы и др. [2].
Этилендиаминтетраацетат - динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты
(Трилон Б) - используют в лечебных целях внутривенно при избыточном отложении солей
кальция в организме, артритах с отложением солей, отложении кальция в мышцах, почках, стенках вен, склеродермии, иногда при эктопических аритмиях и др. [3]. Этилендиаминтетраацетат известен и как ингибитор металлопротеиназ, однако согласно имеющимся
у заявителя и авторов данным в использованных концентрациях сам он вызывает подавление активности внеклеточных желатинолитических протеиназ бесклеточных супернатантов бульонных культур патогенных штаммов псевдомонад лишь на 40-45 %.
Пример 1.
Используют образцы бесклеточных супернатантов бульонных культур патогенного
штамма № 74/5гоб4 Pseudomonas aeruginosa, выращенного на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях.
Готовят две желатин-агаровые пластины (концентрация желатина составляла 5 г/л,
агар-агара - 10 г/л), приготовленные, как описано нами ранее [4]. Для одной пластины желатин-агаровую смесь готовят на 0,01 M трис-буфере рН 7,5, содержащем лизоцим в концентрации 50 мкг/мл и этилендиаминтетраацетат в концентрации 10-3 M (опыт). Для
второй пластины желатин-агаровую смесь готовят на 0,01 M трис-HCl буфере рН 7,5 (контроль).
Аликвоты образцов наносят на обе желатин-агаровые пластины. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зоны лизиса визуализируют обработкой желатин-агаровых пластин 2 н трихлоруксусной кислотой. Протеолитическую
активность учитывают по площади зон лизиса желатина [4].
Площадь зон (в мм2) расщепления желатина (n = 3): на опытной желатин-агаровой
пластине - 71 ± 5; на контрольной желатин-агаровой пластине - 237 ± 14.
2
BY 14170 C1 2011.04.30
Следовательно, желатинолитическая активность внеклеточных протеиназ патогенных
штаммов Pseudomonas aeruginosa подавлялась на 70 %.
Пример 2
Используют образцы бесклеточных супернатантов бульонных культур патогенного
штамма № 23/2гоб2 Pseudomonas aeruginosa, выращенного на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях.
Готовят две желатин-агаровые пластины (концентрация желатина составляла 5 г/л,
агар-агара - 10 г/л), приготовленные, как описано нами ранее [4]. Для одной пластины желатин-агаровую смесь готовят на 0,01 M трис-буфере рН 7,5, содержащем лизоцим в концентрации 70 мкг/мл и этилендиаминтетраацетат в концентрации 10 M (опыт). Для второй
пластины желатин-агаровую смесь готовят на 0,02 M трис-HCl буфере рН 7,5 (контроль).
Аликвоты образцов наносят на обе желатин-агаровые пластины. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зоны лизиса визуализируют обработкой желатин-агаровых пластин 2 н трихлоруксусной кислотой. Протеолитическую
активность учитывают по площади зон лизиса желатина [4].
Площадь зон (в мм) расщепления желатина (n = 3): на опытной желатин-агаровой пластине - 36 ± 4; на контрольной желатин-агаровой пластине - 248 ± 15.
Следовательно, желатинолитическая активность внеклеточных протеиназ патогенных
штаммов Pseudomonas aeruginosa подавлялась на 84 %.
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет подавлять активность внеклеточных желатинолитических протеиназ патогенных штаммов Pseudomonas aeruginosa, использовать доступный и безопасный для медицинского персонала и пациентов ингибитор, являющийся фармацевтическим препаратом.
Данный способ может найти широкое применение при разработке рациональных путей
борьбы с системной псевдомонадной инфекцией.
Источники информации:
1. Пыжова Н.С., Никандров В.Н. Протеолитическая активность госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa: действие группоспецифических ингибиторов протеиназ и
фармацевтических препаратов // Международная конференция. Протеолиз, механизмы его
регуляции и роль в физиологии и патологии клетки. Тезисы докл. - Минск, 2007. - С. 63-65
(прототип).
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 15-е, перераб., испр., доп. - M.:
Новая Волна, 2005. - С. 961.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 15-е, перераб., испр., доп. - M.:
Новая Волна, 2005. - С. 753.
4. Никандров В.H., Пыжова Н.С., Шапчиц H.С. Расщепление белков внутриклеточными протеиназами Corynebacteium diphtheriae: влияние группоспецифических ингибиторов
и перехватчиков активных форм кислорода // Доклады HAH Беларуси. - 2007. - Т. 51. № 3. - С. 92-97.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
79 Кб
Теги
14170
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа